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    Liquide de Ponction

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    Ce document décrit la procédure pour l'examen cytobactériologique des liquides de ponction. Il explique les étapes de recueil, de transport, d'examen macroscopique, microscopique, bactériologique et chimique du liquide, ainsi que les conditions de culture et d'interprétation des résultats.

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    liquide de ponction

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    LABORATOIRE Procédure de l’examen cytobactériologique des liquides de

    MOHAMMED ponction
    ZEFZAF DATE D’APPLICATION
    REDACTRICE APPROBATRICE

    Dr : KHAFALLAL SOUKAINA Dr : BERRA MOUNA 12/10/2020


    FONCTION : BIOLOGISTE FONCTION : DIRECTRICE
    ASSISTANTE

    1. But

     Le but de ce mode opératoire est de décrire les différentes étapes pour la


    réalisation d’un examen cytobactériologique d’un liquides de ponction.
    2. Etendue

     Ce mode opératoire s’applique à toute demande du liquide de ponction


    enregistrée au laboratoire.
    3. Responsabilité
     Le technicien responsable de l’unité de microbiologie est tenu de veiller à
    la mise en application des dispositions prises dans ce mode opératoire.

    4. Documents de références
     Cours de bactériologie du professeur Fafa Cissé : professeur de
    microbiologie à l’université Cheikh Anta Diop de Dakar,Sénégal.
     Cours de bactériologie de la quatrième année du diplôme d’étude
    spécialisé en biologie clinique, l’université Cheikh Anta Diop de
    Dakar,Sénégal.
    5. contenu
    5.1-précautions
     Les échantillons utilisés dans ce mode opératoire doivent être considérés
    comme potentiellement infectieux et donc traités avec toutes les
    précautions liées à cet effet.
    5.2- Différents types des liquides de ponction
     liquide de ponction=liquide d’épanchement :il s’agit de la présence
    anormale d’un liquide (sérosité,pus,sang).
     selon la localisation on distingue :
    • Liquide pleural :plèvre
    • Liquide d’ascite :péritoine

    1
    • Liquide péricardique :péricarde
    • Liquide articulaire ou synoviale :articulation
    • Liquide de kyste

    5.3- Pthogénèse

     peuvent avoir différentes étiologies :se sont


    • Soit des transsudats purement mécaniques :cirrhose ,IC,Syndrome
    néphrotique,etc.
    - Le liquide plasmatique passe entre les deux feuillets de la séreuse
    • Soit des exsudats :consécutifs à une infection ou à un cancer
    - Le liquide est produit par la membrane elle-même
    - C’est eux qui intéressent la bactériologie

    6. Recueil du liquide de ponction


    6.1-Conditions du recueil

     Avant tout traitement antibiotique


     Asepsie rigoureuse
     Avant la fistulisation spontanée du foyer infectieux
     A tout moment de la journée
     Eviter le contact avec l’air :pour la survie des anaérobies.
     Seringue sans bulle d’air bouchée stérilement et hermétiquement.

    6-2-Techniques du recueil

     recueil du liquide de ponction est réservé au clinicien


     associer un prélèvement sur tube avec anticoagulant (comme le citrate de
    sodium)pour la cytologie
     le bactériologiste doit demander systématiquement une hémoculture :2
    flacons d’hémoculture doivent être ensemencés au lit du malade.

     N.B :
    - Les liquides articulaires,pleuraux et péricardiques sont des liquides à traiter
    sans délai mais pas de notion d’urgence vitale pour la prise en charge du patient.
    - Les liquides d’épanchement sont précieux et parfois difficiles à prélever et
    le volume recueilli peut être faible (ponction du liquide articulaire).

    2
    6-3-Transport-conservation des liquides de ponction

     Transport des échantillons


    o Immédiat : délai inférieur à 2 heures, à 20°C
    o L’idéal est de prélever le liquide au bloc opératoire
    o En sac hermétique
    o Eviter l’air si on doit rechercher des bactéries anaérobies
     Conservation du liquide de ponction :
    o ne pas conserver (traitement immédiat)

    7. Technologie au Laboratoire : Premier jour de l’analyse


    7.1-Examen macroscopique du liquide de ponction

     Consistance du liquide de ponction


    o Citrin, transparent, fluide
    o Trouble, purulent, hémorragique
    o Coagulation spontanée ou non
     Aspect :
    o Clair
    o Trouble
    o Purulent
    o sérofibrineux
     Couleur du liquide de ponction
    o Jaune
    o Orange
    o rose ,etc
     Viscosité
     Odeur liquide de ponction : fétide (bactéries anaérobies)
     N.B :
    - Normalement les liquides d’épanchement sont jaune,citrin et limpide
    - La couleur,la limpidité et la viscosité donnent une orientation
    diagnostic.
    - Le liquide synovial normal :il est pâle ,translucide et très visqueux
    • L’opacité du liquide est fonction de sa densité cellulaire
    • Un liquide lactescent est en général purulent
    • Un liquide floconeux et huileux dénote la présence de cristaux de
    cholestérol
    - Un liquide sérofibrineux :limpide ou jaune claire et facilement
    coagulant :exsudats(tuberculose)ou transsudats.
    - Un liquide purulent,trouble :exsudats
    - Un liquide hémorragique :la tuberculose est presque toujours impliquée
    (ou virale)

    3
    7-2-Examen microscopique du liquide de ponction
    7-2-1-Examen cytologique

     Remplir une cellule de Malassez :


    o Compter les hématies et les leucocytes
    o Numération impossible si le liquide est coagulé
     Centrifuger le liquide (3000 tours /min pendant 10 min) et sur le culot de
    centrifugation réaliser :
    o Une coloration de MGG :qui permet d’établir la formule leucocytaire
    − % des PNN :altérées ou non altérées
    − % des lymphocytes
     N.B :
    - Si prédominance des PNN :
    • Epanchements inflammatoires,qu’ils soient d’origine infectieuse ou pas
    • La présence de PNN altérées :oriente vers une infection bactérienne.
    - Prédominance des lymphocytes :
    • Plus fréquente dans un liquide clair que dans un liquide purulent
    • Une telle formule doit faire penser à une infection tuberculeuse
    - PNE supérieures à 10% :
    • Liquide articulaire :arthrite parasitaire (filariose)
    • Liquide pleural :hémothorax ou pneumothorax.

    7.2-2- Examen bactériologique


     Centrifuger le liquide
     Réaliser un frottis à partir du culot de centrifugation
     Pratiquer une coloration de Gram
    o Flore normalement monomicrobienne
    o Flore polymicrobienne : bactéries anaérobies + aérobies
    o Permet d’orienter le choix des milieux de cultures
     Pratiquer une coloration de Ziehl Neelsen :
    o La recherche du BK selon la demande du clinicien.

    7.2-3-cas particulier des liquides articulaires.

     La recherche de microcristaux dans le liquide articulaire dans l’examen


    microscopique ,il s’agit :
    o Des cristaux d’acide urique :goutte
    o Des cristaux de pyrophosphate de calcium :chondrocalcinose
    o Les cristaux de cholestérol
     La recheche de microcristaux permet un diagnostic rapide d’arthropathie
    microcristalline(liquide inflammatoire)

    4
     Si le liquide articulaire est trouble avec plus de 2000 GB :peut être
    consécutif à une arthrite septique ou microcristalline d’où l’importance de
    la recherche des cristaux.

    7.3- Examen chimique du liquide de ponction.

     Réaction de Rivalta :permet de différencier les exsudats des transsudats


     Principe :
    o Mettre en évidence la présence de protéines dans un liquide par
    précipitation en milieu liquide
    o Différencier un liquide riche en protéines(supérieurs à 20 g/l) d’un
    liquide pauvre (<20 g/l)
     Technique :
    o Dans un bécher :100 ml d’eau distillée ,3 gouttes d’acide acétique,1
    goutte de liquide de ponction
    o Réaction négative :la goutte se dissout complètement dans la
    solution :transsudat
    o Réaction positive :la goutte forme un précipité qui ressemble à la
    fumée de cigarette :exsudat
     Interprétation :
    o Transsudat : taux de protéine < 20g / litre ; cellules < 500 / mm3
    o Exsudat : taux de protéine > 20g / litre ; cellules > 500 / mm3

    7-4-ensemencement du liquide de ponction


     Milieux à ensemencer systématiquement
    o MHSC ou mieux MHSC + FC :pour les bactéries de culture difficiles
    o GSN
    o EMB
    o Bouillon thioglycolate
    o MH
    o Gélose au sang
    ♦ Nota bene : incuber les géloses au sang en atmosphère enrichie en 5-10%
    de CO2
     Milieux d’appoint :
    o gélose de Sabouraud
     Milieux selon les renseignements cliniques :
    o LJ :si suspicion de BK(pus amicrobien)
    o Bouillon Rosenow ,Schaelder :si recherche d’anaérobies
    o BCC :en cas d’hémoculture
    o MHSC+FC+VCN :si recherche de gonocoques

    5
     N.B :
    - il est impératif de prélever chez le patient 2 séries d’hémoculture qui
    peuvent permettre d’établir l’étiologie bactérienne plus rapidement que la culture
    du liquide d’épanchement.
     Conditions de culture
    o Milieux solides sont examinés à 24 h et à 48 h
    o Les bouillons sont rendus négatifs qu’au-delà du 10 éme jour

    8. Technologie au Laboratoire : Deuxième jour de l’analyse


    8.1-Lecture de la primoculture – Examens complémentaires

     Observer l’aspect des colonies


     Réaliser une coloration de Gram sur le germe isolé
     Rechercher : oxydase, catalase, filamentation en sérum humain
     Réaliser un antibiogramme

    8.2- Interprétation de la primoculture

     Bactérie pathogène spécifique


    o Types : Pneumocoque, Haemophilus influenzae, Moraxella, S. aureus,
    entérobactéries
    o Conduite à tenir : continuer l’analyse
     Autres bactéries – Flore mixte
    o Tenir compte des données cliniques
    o Tenir compte des données de la bactériologie, de la cytologie et de la
    chimie
    o Pour le liquide articulaire :un résultat négatif n’exclut pas une
    infection :bactéries en faible quantité ,quiexentes ou non cultivables.
    o Pour les autres liquides de ponction :la flore est généralement
    monomicrobienne
     Dans le cas contraire ,il faut discuter l’identification de toutes les espèces
    isolées à une confrontation clinique.

    9. Technologie au Laboratoire : Troisième jour de l’analyse


     Lecture – Interprétation des galeries
     Validation des résultats
     Saisie - Délivrance des résultats
    10. Bactéries souvent isolées
     Staphylococcus aureus
     Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp.
     Neisseria meningitidis

    6
     Haemophilus influenzae
     Pseudomonas aeruginosa
     Actinomycètes
     Bactéries anaérobies

    Tableau 1 : caractéristiques des liquides pleuraux

    Composition Aspect macroscopique du liquide


    Clair Clair Louche Purulent Hématique

    Cellules/mm3 <500 >500 >500 >2000 -

    Lymphocytes + +++ ± rares +

    Neutrophiles + Rares +++ +++++ +

    Germes 0 0 0 +++ + ou 0

    Culture - BK + + ± ; BK

    Protéine g/l <20 >20 >20 >50 >20

    Interprétation Transsudat Exsudat Exsudat Exsudat Exsudat

    (Tuberculose) (Pleurésie) (Abcès)

    Tableau 2 : caractéristiques des liquides articulaires

    7
    Tableau 3 : caractéristiques des liquides de ponction

    Liquide Normal Septique Tuberculose Cirrhose -


    Cardiopathie
    Aspect Clair Trouble, purulent Séro-fibrineux Jaune, fluide

    Coagulation spontanée Non Non Oui Non

    Nature liquide Exsudat Exsudat Transsudat

    Eléments/mm3 <200 Variable à 500-1000 50-100


    incomptable

    Neutrophiles % <25% >250% Lymphocytes ++ Rares lympho - çlles

    Culture Négative Positive BK Négative

    Tableau 4 : principaux germes dans les différents liquides d’épanchements

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