BACCALAURÉAT TECHNOLOGIQUE

Série : Sciences et Technologies de Laboratoire

Spécialité : Biotechnologies

SESSION 2015

Sous-épreuve écrite de Biotechnologies

Coefficient de la sous-épreuve : 4

Ce sujet est prévu pour être traité en deux heures.

Les sujets de CBSV et de biotechnologies seront traités

sur des copies séparées.

L’usage de la calculatrice est autorisé.

Ce sujet comporte 8 pages.

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 REUTILISATION DES EAUX USEES EPUREES
(Extrait d’un rapport de l’observatoire régional de la santé Ile-de-France 2004)
La raréfaction des ressources en eau et la dégradation de leur qualité est un défi majeur pour le
XXIème siècle.
Afin de préserver la qualité des masses d’eau et de diminuer les prélèvements dans le milieu
naturel, il convient de chercher des approvisionnements alternatifs. La réutilisation des eaux
usées épurées peut constituer l’un de ces moyens d’approvisionnement. Cependant, ces eaux
usées épurées restent chargées en contaminants divers, ce qui pose le problème des risques
sanitaires.
Des traitements supplémentaires permettent de réduire les risques liés aux microorganismes
pathogènes.

Afin de déterminer la méthode optimale de traitement, une équipe d’ingénieurs se propose

d’étudier trois méthodes permettant d’éliminer ou d’inactiver ces microorganismes :
- un traitement par filtration sur membrane ;
- un traitement thermique ;
- un traitement biologique.
Le traitement choisi doit être économiquement rentable et ne pas compromettre l’utilisation
ultérieure des eaux usées.

1. TRAITEMENT PAR FILTRATION SUR MEMBRANE

La filtration sur membrane a pour objectif d’éliminer toutes les bactéries présentes dans les eaux
usées épurées. Le document 1 présente le schéma d’une filtration sur membrane.

Q1. Expliquer le principe de la filtration sur membrane en donnant le critère sur lequel repose la
séparation des constituants d’un mélange.

Q2. A l’aide du document 2, identifier, en argumentant la réponse, la technique membranaire

adaptée à l’élimination des bactéries des eaux usées épurées.

Donnée : taille minimale d’une bactérie = 0,5 µm.

Après un essai au laboratoire, les techniciens constatent un colmatage important du filtre,

phénomène illustré dans le document 3.

Q3. Indiquer la conséquence du colmatage sur la filtration des eaux usées épurées.

Le colmatage peut être limité en éliminant préalablement les particules de très grosse taille.

Q4. Choisir dans le document 2 la technique conventionnelle, préalable à la filtration, qui permet
de limiter le colmatage. Argumenter la réponse.

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 2. TRAITEMENT THERMIQUE

Le traitement thermique, caractérisé par une durée et une température de traitement déterminées
(appelé couple temps / température), réduit considérablement le niveau de contamination des
eaux usées épurées. Le barème temps / température choisi dépend de la concentration initiale en
bactéries pathogènes. Staphylococcus aureus est utilisé comme microorganismes de référence.

Un dénombrement de Staphylococcus aureus dans les eaux usées épurées est réalisé sur milieu
solide. Les résultats sont présentés dans le document 4.

Q5. Etablir l’équation aux valeurs numériques et montrer que les eaux usées épurées contiennent
1,0.104 UFC de Staphylococcus aureus par millilitre.

Le document 5 montre une courbe de destruction thermique de Staphylococcus aureus à 70 °C.

Q6. En utilisant la charge initiale déterminée à la question Q5, évaluer graphiquement la durée
minimale de traitement nécessaire pour éliminer la contamination due à Staphylococcus aureus
et expliquer la démarche.

Un traitement thermique de 5 minutes à 70 °C est proposé pour traiter les eaux usées épurées.
Au-delà d’une de ces valeurs, le traitement thermique n’est pas suffisamment rentable.

Q7. Expliquer si la durée du traitement thermique calculée à la question Q6 est compatible avec
les contraintes économiques.

3. TRAITEMENT BIOLOGIQUE

Les eaux usées épurées sont ensemencées avec des microorganismes épurateurs qui :
- acidifient le milieu en produisant de l’acide lactique ;
- libèrent des bactériocines qui peuvent inhiber la microflore pathogène.
L’obtention d’une acidité titrable supérieure à 1,2 % et les bactériocines permettent une action
efficace sur l’ensemble des micro-organismes à éliminer.

3.1. Contrôle de l’identité des microorganismes épurateurs

L’identité de deux microorganismes épurateurs est contrôlée par des examens microscopiques et
par un isolement sur des milieux sélectifs. Le document 6 présente les micrographies A et B de
ces deux microorganismes épurateurs ainsi que la composition des deux milieux P et M sur
lesquels chaque microorganisme sera isolé.

Q8. A l’aide du document 6, identifier et argumenter les types de microscopes utilisés pour
obtenir chacune des micrographies A et B.

Q9. Indiquer sur quel milieu de culture P ou M sera isolé chacun des microorganismes
épurateurs. Argumenter la réponse.

Q10. Dégager le caractère cultural commun aux deux microorganismes épurateurs.

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 3.2. Comparaison de l’activité antimicrobienne des Lactobacillus

L’activité antimicrobienne de trois souches de Lactobacillus est testée vis-à-vis de

Staphylococcus aureus par la méthode de diffusion en milieu gélosé. Les résultats obtenus
figurent dans le document 7.

Q11. Après analyse du document 7, choisir la souche de Lactobacillus à utiliser

préférentiellement pour traiter les eaux usées épurées par voie biologique.
Argumenter ce choix.

3.3. Contrôle de l’efficacité de traitement des eaux usées par les deux
microorganismes épurateurs

Les deux microorganismes épurateurs sont incubés ensemble pendant environ 48 h dans un
fermenteur contenant un volume connu d’eaux usées épurées. L’efficacité du traitement est alors
contrôlée par des analyses dont les résultats figurent dans le document 8.

Q12. Décrire l’évolution des paramètres physico-chimiques au cours du traitement biologique.

Q13. Décrire l’évolution des paramètres microbiologiques au cours du traitement biologique.

Q14. Proposer une explication à l’évolution des paramètres microbiologiques et physico-

chimiques au cours du traitement biologique.

Q15. Conclure quant à la réussite ou à l’échec du traitement biologique des eaux usées épurées.

SYNTHESE

Q16. Récapituler dans un tableau les avantages et inconvénients des trois méthodes proposées
pour le traitement des eaux usées épurées. En déduire le choix retenu dans l’objectif d’une
réutilisation des eaux usées épurées.

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 DOCUMENT 1 - Filtration sur membrane

DOCUMENT 2 - Techniques membranaires et conventionnelles de séparation

DOCUMENT 3 - Colmatage des filtres

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DOCUMENT 4 - Dénombrement de Staphylococcus aureus dans les eaux usées
épurées

• Milieu utilisé : gélose Baird-Parker

• Technique de dénombrement : en surface (volume d’inoculum : 0,1 mL)
• Incubation : 48 h à 37 °C

Dilution 100 10-1 10-2

Nombre de colonies Non comptable 99 11

D’après la norme NF EN ISO 7218 :

Σc
Equation aux grandeurs : N =
. 1,1 . d

• N : nombre d'UFC (Unités Formant Colonies) par mL de produit initial

• Σc : somme des colonies comptées sur les deux boîtes retenues de deux dilutions
successives et dont au moins une contient au minimum dix colonies.
• V : volume de l’inoculum déposé dans chaque boîte (en mL)
• d : dilution correspondant à la première boîte retenue (dilution la plus faible).

Expression du résultat de mesure :

Le résultat est arrondi à deux chiffres significatifs et exprimé par un nombre compris entre
1,0 et 9,9 multiplié par la puissance de 10 appropriée.

DOCUMENT 5 - Courbe de destruction thermique de Staphylococcus aureus

à 70 °C

Le calcul du logarithme décimal de N permet de tracer une droite d’équation : log N = f(t)

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DOCUMENT 6 - Choix des microorganismes épurateurs pour le traitement
biologique

 Liste de microscopes fréquemment utilisés pour l’observation de

microorganismes :
• Microscope électronique à transmission
• Microscope photonique à fond clair
• Microscope électronique à balayage
• Microscope photonique à fluorescence

 Observation microscopique des microorganismes isolés

A B

Grossissement x 15 000 Grossissement x 15 000

 Milieux de culture utilisés pour l’isolement des microorganismes

Milieu P M

Nom Potato dextrose agar Man Rogosa Sharpe

Culture des mycètes (levures Culture et dénombrement des bactéries du

Utilisation
et moisissures) genre Lactobacillus

Le pH final de 3,5 est obtenu Le citrate d’ammonium et l’acétate de

par l’ajout de 10 % d’acide sodium inhibent la plupart des
tartrique. contaminants comme les streptocoques et
Caractéristiques les moisissures.

Cette acidité inhibe la totalité Le pH final du milieu de 5,7 favorise la

des bactéries. croissance de Lactobacillus.

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 DOCUMENT 7 - Détermination de l’activité antimicrobienne de trois souches de
Lactobacillus

Mode opératoire Schéma de la boîte après incubation

• Ensemencer une gélose nutritive avec une

suspension de S.aureus par écouvillonnage. Disque 1
• Imbiber trois disques de papier stériles avec
différentes suspensions de Lactobacillus (LB) :
- disque 1 : souche LB5 Tapis bactérien
- disque 2 : souche LB10
de S.aureus
- disque 3 : souche LB17
• Déposer à la pince chaque disque sur la gélose
nutritive. Appuyer légèrement sur le disque pour le
faire adhérer.
• Retourner la boîte et incuber 24 h à 37 °C.
• Mesurer les diamètres d’inhibition obtenus autour
de chaque disque. Disque 2
Disque 3
Halo d’inhibition

DOCUMENT 8 - Analyses des eaux usées épurées avant et après le traitement

biologique

Analyses physico-chimiques Analyses microbiologiques

Eaux usées Eaux usées Eaux usées Eaux usées

épurées avant épurées après épurées avant épurées après
Paramètre Paramètre
traitement traitement traitement traitement
(UFC.mL-1) (UFC.mL-1)

Lactobacillus 3,0.106 2,0.107

pH 6,72 3,87
Levures 5,0.103 7,0.104

Staphylococcus 1,0.104 0
Acidité
0,3 % 1,3 %
titrable Salmonella 1,2.101 0

Donnée : 1 % d’acidité correspond à 1 g d’acide lactique pour 100 mL d’eaux usées épurées.

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