Université Mohamed Khider de Biskra

Faculté des sciences exactes et sciences de la nature et de

la vie
Département des sciences de la nature et de la vie

MÉMOIRE DE MASTER
Domaine : Sciences de la nature et de la vie
Filière : Sciences biologiques
Spécialité : Microbiologie appliquée

Réf. : ………………………………………………

Présenté et soutenu par :

ZEHRI Wafa
KHOUBZI Siham
Le :

Thème
Contribution à l’évaluation de quelques
caractères probiotiques de Lactobacillus
isolées de lait de chamelle

Jury :

Mm. Wassila DENDOUGA MCB Université de Biskra Présidente

Mr. Bachir BENKEDOUR MAA Université de Biskra Encadreur

Mr. Abdenacer AGLI Pr Université de Biskra Examinateur

Année universitaire : 2019-2020

 Remerciements

Remerciement

Avant tout nous remercions "Allah" tout puissant qui nous a donné

Le courage, la volonté et la force pour accomplir ce modeste travail.

Merci de nous

Avoir éclairé le chemin de la réussite.

Nous particulièrement reconnaissante à Mr Benkaddour Bachir

, d’avoir accepté de juger nous travail

Mes très spéciaux remerciements reviennent à nous familles et nous amies pour leurs

Encouragements et leur compréhension.

Mes remerciements vont également à nous enseignants qui nous accompagné pendant notre
cursus universitaire.

Nous remerciement aussi l’ensemble du personnel travaillant au laboratoire de microbiologie.

Finalement, nous remercient tous ceux ou celles qui ont contribué de près ou de loin à

L’accomplissement de ce mémoire.

A vous tous, un grand Merci.

 Dédicace

Dédicace

Avant tous, Mes profonds remerciements vont à ALLAH

Qui m’a aidé et donné le courage et
La patience pour effectuer ce travail.
Je dédie ce modeste travail à :
Mes très chers parents qui ont été toujours à mes côtés pour leur générosité et
leurs sacrifices
Et me donner le courage pour terminer mes études.
Merci beaucoup et je vous aime beaucoup

A mes frères chamseeddine et Tarek et Bachir et ma très chère petite sœur Rania
et mes sœur wahiba et Hanna et Amel.
A toute la famille « khoubzi » et « kadri »
A tous mes amis(es) sans exception surtout : Wafa,
Djehayna, hanan, roukaia, zaineb, kawthar
Et mes amis de l’hôpital.
A mes cousin : Yasmine, sabrine, Malek, khadidja
A toutes les personnes qui de près ou de loin m’ont apporté leur aide
A tous, du fond de mon cœur je vous dédie ce travail.
A tous mes collègues d’études surtout la promotion de microbiologie.
 Table des matières

Sommaire

Remerciement
Dédicace
Table des matières
Introduction générale ......................................................................................................................................................... 1
Synthèse Bibliographique
1.1.Historique ................................................................................................................................................................ 5
1.2.Présentation des Lactobacilles................................................................................................................................. 5
1.3.Position taxonomique .............................................................................................................................................. 5
1.4.Les caractères biochimiques .................................................................................................................................... 5
1.5.Caractères morphologiques ..................................................................................................................................... 6
1.6.Caractères culturaux ................................................................................................................................................ 6
1.7.Habitat ..................................................................................................................................................................... 7
1.8.Lait de chamelle ...................................................................................................................................................... 7
1.8.1.Définition.............................................................................................................................................................. 7
1.8.2Caractéristiques organoleptiques et physico-chimiques du lait de chamelle ......................................................... 7
1.8.2.1.Caractéristiques organoleptiques ....................................................................................................................... 7
1.8.2.2.Caractéristiques physico-chimiques .................................................................................................................. 8
1.8.3.Composition du lait de chamelle .......................................................................................................................... 8
1.8.4.Microbiologie du lait camelin .............................................................................................................................. 9
1.8.5.Propriétés thérapeutiques et médicinales.............................................................................................................. 9
Chapitre 2 Les probiotique
2 .1.Historique ............................................................................................................................................................. 11
2.2.Définition............................................................................................................................................................... 11
2.3.Les principales souches microbiennes à potentiel probiotique.............................................................................. 11
2.4.Les probiotiques et leurs effets bénéfiques sur la santé......................................................................................... 11
2.5.Critères de sélection des souches à potentiel probiotique ..................................................................................... 12
2.6.Mécanismes d’action et d’adaptation des probiotiques ......................................................................................... 13
Chapitre 3 Partie Expérimentale
3.1.Echantillonnage ..................................................................................................................................................... 17
3.2.Isolement des bactéries lactiques........................................................................................................................... 17
3.3.Purification et conservation ................................................................................................................................... 17
 3.4.Évaluation des caractéristiques probiotiques......................................................................................................... 17
3.4.1. Tolérances à l'acidité ......................................................................................................................................... 17
3.4.2.La tolérance aux sels biliaire .............................................................................................................................. 18
3.4.3.Auto-aggrégation ................................................................................................................................................ 18
3.4.4.Hydrophobicité de la surface cellulaire .............................................................................................................. 19
3.4.5.Co-agrégation ..................................................................................................................................................... 19
3.4.6.Activité antibactérienne ...................................................................................................................................... 19
3.4.7.Sensibilité aux antibiotiques ............................................................................................................................... 19
3.4.8.Test d’hémolyse ................................................................................................................................................. 20
3.4.9.La production des Exopolysaccharrides ............................................................................................................. 20
3.4.10.Profil de fermentation ....................................................................................................................................... 20
3.4.10.1.Dénombrement bactérienne et pH ................................................................................................................. 21
3.4.10.2.L’activité protéolytique (OPA)...................................................................................................................... 21
3.4.11.Hydrolyse des sels biliaires(BSH) .................................................................................................................... 21
3.4.12.Élimination du cholestérol................................................................................................................................ 22
3.4.13.La résistance aux lysozymes ............................................................................................................................ 23
3.4.14.La résistance à la chaleur .................................................................................................................................. 23
4. Identification des isolats sélectionnés par séquençage de l'ADNr 16S ............................................................... 23
Chapitre 4 Résultats et Discussion
4.1.Caractérisation générale des isolats ....................................................................................................................... 25
4.2.Tolérances à l'acidité et aux les sels biliaires ........................................................................................................ 25
4.3.1. L‘ Autoagrégation et hydrophobicité ................................................................................................................ 28
4.4.Co-agrégation ........................................................................................................................................................ 29
4.5.L’activité antimicrobienne et la résistance aux antibiotiques ................................................................................ 33
4.6.Hydrolyse des sels biliaires (BSH) et élimination du cholestérol ......................................................................... 34
4.7.Tolérances à la chaleur et au lysozyme ................................................................................................................. 36
4.8.Activité hémolytique et production d’Exopolysaccharides (EPS) ........................................................................ 37
4.9. Identification des isolats sélectionnés par séquençage de l'ADNr 16S ................................................................ 38
4.10.Profil de fermentation .......................................................................................................................................... 39
Conclusion
Conclusion ....................................................................................................................................................................... 42
Bibliographie
Bibliographie ................................................................................................................................................................... 44
Annexes ........................................................................................................................................................................... 47
 Liste des Tableaux
Tableau 1. Les différents habitats des lactobacilles (BELKEZI, 2020) .................................... 7
Tableau 2. Caractéristiques physicochimique de lait camelin (MENAD, 2017) ...................... 8
Tableau 3. Composition chimique(%) du lait camelin (selon différents auteurs) ..................... 8
Tableau 4 . Les principaux effets bénéfiques attribuées aux probiotiques.............................. 12
Tableau 5. La tolérence à l'cidité et à la bile de 23 isolts de lait de chamelle . (Abushelaibi,
Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017) ..................... Erreur ! Signet non défini.
Tableau 6. les pourcentage de l'autoagragatio et l'hydrophobicité .......................................... 28
Tableau 7. les pourcentages de co-agrégation des BL en présence de 4 bactéries pathogènes
pendant 4 h à deux température d 'incubation différents (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-
Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)......................................................................................... 32
Tableau 8. L 'activité antagoniste contre 4 bactéries pathogènes et la résistance aux 6
antibiotiques différents . (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017) 34
Tableau 9. l'activité d'hydrolyser les sels biliaires ( activité spécifique U/mg ) (Abushelaibi,
Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017) .............................................................. 35
Tableau 10. La résistance à la chaleur (60°C/ 5min) et au lysozymes (Log 10 UFC/ml).
(Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017) ....................................... 36
Tableau 11. L'activité hémolytique et production de EPS (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-
Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)......................................................................................... 38
Tableau 12. Profil de fermentation ( nombre des bactéries ,OPA (340 nm),pH ) des BL
pendant 21 jours à 4°C. (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)
......................................................................................................... Erreur ! Signet non défini.

I
 Liste des Figures

Figure 1 . Aspect microscopique d'une souche de lactobacilles observé par microscope

électronique à balayage . (BELKEZI, 2020) ............................................................................. 6
Figure 2. Ménismes d 'actiondes probiotiques (AbdelMalek, 2017) ....................................... 14
Figure 3. Elimination de cholesterol en % de BL aprés 24h d 'incubation à 37 °C
(Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017) ....................................... 36

II
 Liste des abréviations

% : pour cent

°C : Degrés Celsius

ADN : Acide désoxyribonucléique

ARNr 16S : Acide Ribonucléique 16 Svedberg

BL : Bactéries lactiques

CaCl2 : Chlorure de Calcium

DO : Densité Optique

E:Escherichia

EPS: Exopolysaccharride

FAO : Organisation des Nations Unies pour l’Alimentation et l’Agriculture

h : heure

HCl : Chlorure d’hydrogène

iso : isolat

KCl : Chlorure de potassium

L: Listeria

Lb: Lactobacillus

MRS: Man, Rogosa et Sharpe.

NaCl : Chlorure de sodium

NaHCO3 : Le bicarbonate de sodium

NaOH : Hydroxyde de sodium

nm: nanomètre

OMS : Organisation Mondiale de la Santé

p / v : poids/volume

III
PCR : Polymérase Chain réaction

PH : Potentiel d’Hydrogène

PM : poids moléculaire

qsp : Quantité suffisante pour

spp : Sous- espèce

T : Température

t : temps

TCA : Acide Trichloracétique

tr : Tour

UFC : Unité Formatrice des Colonies

IV
 Introduction générale

Introduction générale

Le lait de chamelle est un aliment de notre vie quotidienne, ça place est irremplaçable ;
grâce à leur richesse en nutriments tel que les glucides, les protéines, les lipides, les
minéraux et les vitamines.

Le lait camelin contient aussi des composés anti-infectieux, anticancéreux, et

antidiabétiques. Des métabolites antimicrobiens, tels que le peroxyde d’hydrogène, les acides
organiques, les bactériocines, élaborés par les bactéries lactiques qui se trouvent en abondance
dans les laits fermentés. Ces bactéries sont utilisées depuis longtemps dans l’industrie
alimentaire. Qui permettent par leur métabolisme, d'augmenter la qualité nutritionnelle, par
organoleptique et la durée de conservation des aliments. (Bouguerra, 2012)

Les bactéries lactiques sont des microorganismes largement répandus dans la nature,
sont trouvées dans le sol ,sur les végétaux ,elle constituant une fraction important de notre
flore intestinale ,aussi pour la muqueuses buccale ,nasale et vaginale ;elle jouent un rôle
primordiale de notre santé car elle contribuant à nous de protégés contre les germes
pathogènes . (Bilarbi, 2011)

Les BL est un groupe de bactéries à Gram positif, produisent de l’acide lactique comme
résultat de la fermentation des carbohydrates. Elles possèdent en effet un statut GRAS
(Generally Recognized As Safe) qui autorise leur usage dans les applications alimentaires de
façon officielle. (Kassas, 2017)

Actuellement, les bactéries lactiques présentent une grande importance pour leurs
valeurs nutritionnelles et thérapeutiques dans les industries agroalimentaires et
pharmaceutiques. La connaissance de ces BL pourrait nous permettre de les utiliser dans la
bioconservation, l’amélioration de la valeur nutritive des aliments et les préparations
probiotiques. Elles sont considérées comme des microorganismes à propriétés probiotique.
Selon la F.A.O./OMS, (2002) ; les probiotiques sont des microorganismes vivants qui,
lorsqu’ils sont consommés en quantité suffisante exercent un fait positif sur la santé au-delà
des effets nutritionnels. Pour garantir cette propriétés, les BL doivent répondre à un certain
nombre de critères tel que la tolérance à l’acidité et aux sels biliaires
(Fuller, 1989; Saito, 2004)

1
 Introduction générale

Dans notre travail pratique nous avons essayé de étudiées quelques caractères
probiotiques des Lactobacillus isolé à partir du lait de chamelle collecté de Biskra, cependant,
le travail pratique n’était pas possible de l’achevé suite aux circonstances de l’épidémie de
COVID-19.

Suite à cette cause nous avons changé notre objectif et une bibliographique sur les
lactobacilles et leurs effets probitiques et une analyse d’article des lactobacilles isolé de lait
chamelle.

2
Synthèse Bibliographique
 Chapitre 1
Les lactobacilles
Chapitre 1 Les lactobacilles

1.1.Historique
Au plan de la morphologie, métabolisme et phylogénie. Les lactobacilles forment un
groupe très disparate, malgré cette diversité, l’identification de certaines espèces de
lactobacilles par les méthodes classiques reste délicate voire impossible. Dans ces cas, seule
approches moléculaires ou une combinaison d’approches moléculaires et phénotypiques
permettent une identification précise, cette dernière est importante car elle permet une
description juste des espèces présentes dans les niches écologiques et l’étude de leur
dynamique, ce genre est l'un des genres les plus importants impliqués dans la microbiologie
alimentaire et la nutrition humaine, en raison de leur rôle dans la préservation des aliments,
ainsi que leurs propriétés probiotique. Les espèces du genre Lactobacillus sont très répandues
dans la matière fermentescible. Les lactobacilles contribuent à la saveur des aliments
fermentés par la production de diacétyle, le sulfure d’hydrogène et les amines, ils jouent un
rôle dans la production aussi bien dans la détérioration des aliments. (Choucroute, ensilage,
produits laitiers, produits carnées, produits de la pêche et boissons). (Kassas, 2017)

1.2.Présentation des Lactobacilles

Le genre Lactobacillus appartenant de la famille des Lactobacillaceae. (HAMDI, 2009).
Il contient de nombreuses espèces qui sont des agents de fermentation lactique intervenant
dans de nombreuses industries ou qui sont rencontrées comme contaminants, ce genre exige
pour leur développement des milieux riches en acides aminés, en vitamines et en acides gras :
ils sont acidophiles. Ils sont généralement peu protéolytiques et peu lipolytique.

1.3.Position taxonomique
Depuis le développement des techniques moléculaires, le genre Lactobacillus a été
revisité une nouvelle fois à travers l’analyse et la comparaison des séquences d’ARN
ribosomiaux 16S (ARNr). Cette étude a montré que les lactobacilles ne forment pas un groupe
monophylétique .Trois grands groupes ont été constitués sur la base de la comparaison de ces
séquences : le groupe Lactobacillus delbrueckii, le groupe Lactobacillus casei, Pediococcus
tel que le groupe Leuconostoc paramesenteroides.

1.4.Les caractères biochimiques

Les Lactobacillus sont catalase, gélatinase et nitrate réductase négative. Ils sont dépourvus de
cytochrome , leur type respiratoires est anaérobies ou micro-aérophile (MENAD, 2017).

5
Chapitre 1 Les lactobacilles

Les Lactobacillus sont subdivisé par leur type fermentaire par Orla-Jensen en trois
groupes et cette classification est encore utilisée en milieu industriel (BELHAMRA, 2017)

-Groupe I « Thermobacterium »: comprend les lactobacilles homofermentaires

thermophiles qui se développent à 45°C mais pas à 15°C, ce groupe constitué les espèces les
plus fréquentes dans l’alimentation (lait, yaourt, fromage) tels que Lb.helveticus, Lb.
delbrueckii et Lb.acidophilus.

-Groupe II « Streptobacterium »: regroupe les lactobacilles homofermentaires

mésophiles et peuvent être occasionnellement hétérofermentaires en fonction du substrat. Les
espèces les plus fréquentes sont Lb. Casei, Lb.curvatus, Lb.sake et Lb. plantarum.

-Groupe III « Betabacterium »: ce sont des lactobacilles hétérofermentaires. Il

comporte les espèces Lb.fermentum, Lb.brevis et Lb.sanfransisco.

1.5.Caractères morphologiques
Les Lactobacillus sont des bacilles à Gram positif (+), ils sont non sporulées et
généralement immobiles, ils peuvent se présenter sous forme en bâtonnets longs, fins ou
courts, incurvés ou ovoïdes. (BELKEZI, 2020) .La figure 1 montre l’aspect
microscopique d’une souche de lactobacilles observée par microscopie électronique .

Figure 1 . Aspect microscopique d'une souche de lactobacilles observé par microscope

électronique à balayage. (BELKEZI, 2020)

1.6.Caractères culturaux

6
 Chapitre 1 Les lactobacilles

La plupart des lactobacilles se multiplient dans des températures comprise entre 15°C et
42°C. Certaines espèces de lactobacilles dites « thermophiles » restent viables à 55°C,
certaines souches peuvent croitre à des températures allant de 2 à 55°C. (MENAD, 2017)

Le milieu le plus adapté à leur culture est celui de MRS (Man Rogosa et Sharpe) et en
milieu gélosé, les colonies sont dans la plupart des cas de petites tailles, lisses, brillantes et
dans des rares cas, elles sont de couleur jaunâtre ou rougeâtre (BELKEZI, 2020) . Ils se
développent dans la condition acide quand le pH allant de 5.4 à 6.4 (quelques espèces peuvent
pousser à un pH de 2.8 tel que Lactobacillus suebicus). La croissance optimal est obtenu dans
des conditions micro-aérophiles bien que la plus part des souches soient anaérobies
facultatives.

1.7.Habitat
Les lactobacilles sont présents dans de nombreux biotope. (tab.1) (BELKEZI, 2020)

Tableau 1. Les différents habitats des lactobacilles . (BELKEZI, 2020)

Habitat Espèces rencontrées Activité ou produit

Matériel végétal en Lb. plantarum, Lb. casei Lb. acidophilus Cornichons, ensilage et
Décomposition Choucroute
Laiterie Lb. delbrukii , Lb. lactis Fromage, yoghourts,
Tractus gastro-Intestinal Lb. Salivarus, Lb. gasseri, Lb. rhamnosus /

La cavité buccale Lb. casei, Lb plantarum, Formation de carie dentaire

Intestin Lb. gasseri Flore normale
Vagin Lb. Vaginalis /
Lactobacillus spp.

1.8.Lait de chamelle
1.8.1.Définition
Le lait est définit en produit de secrétions des glandes mammaires, des mammifères
comme la vache et la brebis, destinés à l’alimentation de jeune animal naissant.

1.8.2Caractéristiques organoleptiques et physico-chimiques du lait de chamelle

1.8.2.1.Caractéristiques organoleptiques
Le lait de chamelle est un liquide d’une couleur blanche mate, en raison de la structure
et de la composition de sa matière grasse, pauvre en β-carotène .Il a un goût sucré ou salé,
selon le type de fourrage ingéré et la disponibilité en eau, l’ingestion de fourrages comme la

7
 Chapitre 1 Les lactobacilles

luzerne, lui donne un goût sucré, alors que l’ingestion de certaines plantes halophytes comme
Atriplix, Salosa et Acaciale rend salé . (Naceur, 2017)

1.8.2.2.Caractéristiques physico-chimiques
Le lait camelin est légèrement plus acide, son pH varie entre 6,2 à 6, 5. (tab.2).
(MENAD, 2017).

Tableau 2. Caractéristiques physicochimique de lait camelin (MENAD, 2017)

pH à 20°C Acidité (D°C) Densité

Lait de chamelle 6.51 ± 0,12 18,6 ± 2,93 1,0230 ± 0,004

Les fluctuations qui existent dans les valeurs des constantes physico-chimiques rapportées par
différents auteurs sont liées aux teneurs variables des différents composants de ce lait.
(MENAD, 2017)

1.8.3.Composition du lait de chamelle

La composition chimique globale du lait de chamelle (tab 3), même si elle fluctue selon
les auteurs montre néanmoins des teneurs importantes et équilibrées en nutriments de base
(protéines, matière grasse et lactose).Toutefois, elle présente une grande originalité dans la
composition fine et qualitative des matières protéiques, des matières grasses et des vitamines.
(Bouguerra, 2012).

Tableau 3. Composition chimique (%) du lait camelin (selon différents auteurs)

(Mme HANOU, Annaba)

Matières Protéines Cendres

Extrait sec (%) Lactose (%) Références
grasses (%) (%) (%)
9,60 1,20 3,07 5,40 0,99 Attia et al., 2001
11,31 2,8 3,56 4,38 0,72 Siboukeur, 2007
12,18 5,74 2,90 - 0,69 Eshraga et al., 2011
10,92 3 3,39 3,52 0,93 Boudjenah, 2012
10,13 4,4 2,8 4,3 0,82 Mortada et al., 2013

8
Chapitre 1 Les lactobacilles

1.8.4.Microbiologie du lait camelin

Les microorganismes existant dans notre environnement vont donc trouver dans ce
bioproduit un substrat idéal pour leur développement. La présence de nombreux facteurs de
croissance permet de satisfaire de nombreuses espèces microbiennes exigeantes et difficiles à
cultiver dans un milieu moins complet .Le lait contient peu de microorganismes (3000
germes/ml) lorsqu’il est prélevé dans de bonnes conditions et à partir d’un animal sain. (DRA
Ghislaine, 2018).

Le lait peut aussi être contaminé par des germes, issus des fèces et des téguments de
l’animal, du sol de la litière et des aliments, de l’air et l’eau, des équipements de traite et de
stockage, des manipulateurs et de vecteurs divers. (DRA Ghislaine, 2018).

1.8.5.Propriétés thérapeutiques et médicinales

Le lait de chamelle est apprécié traditionnellement pour sa propriété anti-infectieuse,
anti-cancéreuses (La Lactoferrine), antidiabétique (l’insuline) et comme reconstituant chez les
malades convalescents, ces propriétés relèvent cependant le plus souvent d’observations
empiriques, dont les fondements scientifiques mériteraient d’être précisés, ces observation
peuvent être reliées à la composition du lait de chamelle, certains des composants tant sur le
plan quantitatif que qualitatif pourraient être associés à ces propriétés.

Particulièrement les facteurs antibactériens, l’insuline et la vitamine C, à cela s’ajoutent

les propriétés probiotiques des bactéries lactiques présentes dans les produits fermentés
camelins.

9
 Chapitre 2
Les probiotique
 Chapitre 2 Les probiotiques
2 .1.Historique
Le concept des probiotique provient d’un chercheur et Prix Nobel Russe, Elie
Metchnikoff (1907) qui avait pour théorie que la longévité des paysans bulgares était
directement liée à leur consommation de laits fermentés. (RAHLI, 2015)

Ainsi, Metchnikoff en (1907) avait proposé l’ingestion de bactéries vivantes,

particulièrement des bactéries lactiques, pour réduire les désordres intestinaux et améliorer
l’hygiène digestive, et donc augmenter l’espérance de vie (RAHLI, 2015). Ce terme a été
introduit pour la première fois par Lilly et Stilwell en (1965) pour décrire des substances
produites par des microorganismes et qui stimulent la croissance d’autres microorganismes.

Ensuite, Parker (1974) élargit cette définition à des « organismes et substances qui
contribuent à l’équilibre de la microflore intestinale». Cette définition englobant les
microorganismes et les métabolites microbiens produits (les antibiotiques), a été modifiée par
(Fuller, 1989) qui redéfinit les probiotique comme étant: « des préparations microbiennes
vivantes utilisées comme additifs alimentaires et qui ont une action bénéfique sur l’animal
hôte en améliorant la digestion et l’hygiène intestinale ».

2.2.Définition
Le terme probiotique dérive des deux mots grecs « pros » et « bio »qui signifient
littéralement "pour la vie". Il a été introduit pour la première fois par Lilly et Stilwell en 1965.
Selon la définition actuellement adoptée par la FAO / OMS (2002) ; « les probiotique sont des
microorganismes vivants administrés en quantités adéquates et qui sont bénéfiques pour la
santé de l'hôte » (Bouguerra, 2012).

2.3.Les principales souches microbiennes à potentiel probiotique

Les principaux microorganismes probiotiques sont des bactéries (Lactobacilles,
Bifidobactéries, Propionibactéries, Escherichia coli et Entérocoques) et des levures
(Saccharomyces boulardii). (Bouguerra, 2012).

2.4.Les probiotiques et leurs effets bénéfiques sur la santé

On a Plusieurs effets bénéfiques des probiotique sur la santé. (tab .03) illustre la
diversité de ces effets documentés et rapportés dans la littérature.

11
 Chapitre 2 Les probiotiques

Tableau 4 . Les principaux effets bénéfiques attribuées aux probiotiques

(HADEF, 2012)

Effets sur le système

Effets intestinaux
immunitaires Autre

Contrôle des troubles -Modulation immunitaire Réduction du risque de :

suivants : -répression des réactions -Certains cancers
-Mauvaise digestion du allergiques par réduction de (colorectal,
lactose l’inflammation vessie, col
-Diarrhée due aux rota virus et diarrhée -réduction des risques d’infection utérin, sein)
-associée aux antibiotiques par des agents pathogènes -Coronaropathie
-Syndrome du côlon irritable courants (salmonella, shigella) -Maladie des voies
-Constipation urinaires
-Infection par Helicobacter pilori -Infection des voies
-Prolifération bactérienne dans l’intestin respiratoires supérieures et
grêle Infections connexes
-Maladies inflammatoires chroniques de Réduction du cholestérol
l’intestin sérique et de la pression
-Prévention de l’entérocolite nécrosante artérielle
du nouveau-né

2.5.Critères de sélection des souches à potentiel probiotique

Le choix des souches probiotique dépend de ses propriétés qui sont variables selon
l'espèce ou la souche microbienne.

Un micro-organisme doit être soumis aux étapes de caractérisations suivantes avant

d'avoir le statut probiotique:

➢ Non pathogène.

➢ Résistance au pH acide de l'estomac et aux concentrations biliaires présentes dans

l'intestin grêle.

12
 Chapitre 2 Les probiotiques

➢ Adhérer aux différents tissus épithéliaux du tractus gastro-intestinal.

➢ Avoir une bonne colonisation du tube digestif.

➢ Produire des substances antimicrobiennes capables d'inactiver des pathogènes.

➢ Moduler les réponses immunitaires.

2.6.Mécanismes d’action et d’adaptation des probiotiques

Les mécanismes d’action des probiotiques sont encore très incomplètement connus et
sont présenté au figure 2. Il est par ailleurs vraisemblable qu’ils varient en fonction du
probiotique utilisé, et peut être de la dose administrée. Les effets des probiotiques résultent
essentiellement de leurs interactions avec le contenu digestif d’une part, à la fois avec les
nutriments présents dans la lumière intestinale et avec les composants de la flore endogène, et
avec le contenant d’autre part, principalement les cellules épithéliales intestinales et les
cellules immunocompétentes. Le processus de résistance des bactéries aux stress rencontrés
dans le tractus digestif, l’adaptation de leur métabolisme à l’environnement nutritionnel de
l’hôte, que sur les déterminants de leur adhésion à la muqueuse intestinale ; les investigations
concernent un des trois mécanismes d’action communément attribués à ces bactéries que
sont :

-L’inhibition des pathogènes et la restauration de l’homéostasie microbienne.

-La protection de l’épithélium intestinal.

-La modulation . (AbdelMalek, 2017)

13
Chapitre 2 Les probiotiques

Figure 2. Mécanismes d 'actiondes probiotiques (AbdelMalek, 2017)

14
 Partie
Expérimentale
 Chapitre 3
Matériels et Méthodes
 Chapitre 3 Matériels et méthodes
3.1.Echantillonnage
Les échantillons ont été ramassés de différentes fermes de chameaux à Abu Dhabi,
Émirats arabes unis, cinquante échantillonnes fraîche ont été collectés de lait de chamelle en
bonne santé dans des bouteilles stérilisées, puis conservés dans la glace ; et doit transportés au
laboratoire de microbiologie alimentaire de l'Université des Émirats arabes unis pour
isolement et l’étude de caractérisation.

3.2.Isolement des bactéries lactiques

Les LB ont été isolées en utilisant la méthode de l’étalement sur le milieu de la culture
MRS (Mann Rogosa Sharpe), qui est un milieu sélectif pour les lactobacilles. Les boites de
Pétri ont été incubées à 30 ° C pendant 48 h en anaérobiose. 100 (Cent) colonies ont été
prélevés avec différentes morphologie, ensuite une coloration de Gram et un test de catalase
ont été réalisés afin de différencier les souches de lactobacilles .Vingt-trois colonies qui
étaient Gram positifs et catalase négatifs ont été soumis à d’autres tests.

3.3.Purification et conservation
Pour maintenir la pureté des colonies, des repiquages ont été faites dans du bouillon
MRS est stockée dans du glycérol (50%) à - 80 °C.

3.4.Évaluation des caractéristiques probiotiques

3.4.1. Tolérances à l'acidité
Les tolérances à l'acidité et à la bile des isolats purs ont été effectuées selon (Liong & Shah,
2005). La tolérance à l'acidité a été étudiée en incubant les isolats dans un bouillon MRS
supplémenté avec 0,30% d'oxgall et ajusté à pH 2, les cultures ont été incubées à 37 ° C
pendant 2 h.

Chaque souche a été repiquées 3 fois avant chaque test, suivie d'une centrifugation après le
dernier repiquage, ensuite les cellules sont remis en suspension et inoculé (1% v/v) dans le
bouillon MRS traité.

Un échantillon de 1 ml a été prélevé chaque 30 minute pendant 2 h et des dilutions décimales

sont effectuées dans l’eau en peptone.
Les échantillons ont été ensemencés en surface de boîtes de gélose MRS, et incubées à 37 ° C
pendant 24 h en anaérobiose avec un kit de génération de gaz.

17
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

la tolérance aux acides a été déterminée en comparant le nombre des colonies après 2 h
avec le comptage initial 0 h.

3.4.2.La tolérance aux sels biliaire

Trois types de bile ont été utilisés, à savoir l'oxgall, l'acide cholique et l'acide taurocholique,
pour étudier la tolérance à la bile des de souches isollées.

Un bouillon MRS contenant 0,30% (poids / vol) d’oxgall, d’acide cholique, ou l'acide
taurocholique a été inoculé avec chaque souche, et incubé à 37 ° C. MRS exempte de sels est
utilisé comme témoin.

Les valeurs d'absorbance obtenues ont été tracées en fonction du temps d'incubation, et la
tolérance à la bile de chaque souche a été basée sur le temps nécessaire pour que la valeur
d'absorbance augmente de 0,3 unité.

Pour évaluer la tolérance à la bile de chaque souche. Le pH de la fermentation du

bouillons au temps = 0 ont été mesurés, et d’autre mesure après l'augmentation de
l'absorbance de 0,3 unité.

Les valeurs de pH de tous les bouillons de fermentation au temps = 0 ont été mesurées, et une
autre mesure a été prise après l'augmentation de l'absorbance de 0,3 unité.
Toutes les expériences ont été répliquées deux fois.

3.4.3.Auto-aggrégation
L’autoaggrégation est déterminée selon la méthode de (Angmo, Kumari, Savitri, &
Bhalla, 2016) , une culture fraîche des cellules bactérienne sont récupérées par centrifugation
à 4000 tr/10 min, le culot bactérien obtenu est lavé deux fois avec du tampon PBS et remis en
suspension dans la même solution. La densité optique de la suspension est ajustée à (A0h) =
0,5 ± 0,02 à 600 nm. (3 ml) de la suspension bactérienne est agitée par vortex pendant 10 s.
Après incubation à 37°C pendant 2 h, la densité optique du surnageant est mesurée à 600 nm
(A2 h) et le pourcentage d'Auto-aggrégation est exprimé en ; % Auto agrégation = 1-(A2
h/A0 h) x 100 , où A2 représente l'absorbance au temps t et A 0 représente l'absorbance à t =
0.

18
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

3.4.4.Hydrophobicité de la surface cellulaire

Cette propriété est étudiées par la méthode décrite par (Mishra & Prasad, 2005). Une
culture fraîche de 16-18h en MRS bouillon est centrifugée puis culot des cellules est lavées
deux fois avec un tampon phosphate urée et sulfate de magnésium, en suite ont été remis en
suspension dans le même tampon, et ajustés à une absorbance 0,7-0.9 à 610 nm. (0.3ml) de
suspension cellulaires a été mélangée avec 1ml d’hydrocarbure (xylène) et incubée à 37°c
pendant 1 h afin que la phase aqueuse se sépare de la phase organique ; la phase aqueuse
(1ml) a été ensuite aspirée doucement et l’absorbance a été mesuré à 610 nm.
L’hydrophobicité est calculé selon l’équation suivante. Le pourcentage d’hydrophobicité % =
(1-A1/A0) x 100.

Où A1 représente l'absorbance au temps t et A0 représente l'absorbance à t = 0.

3.4.5.Co-agrégation
La co-agrégation des isolats contre quatre pathogènes à 20  C et 37  C pendant 4
heures d’ incubation est déterminée selon (Zuo, et al., 2016). Le pourcentage de co-
agrégation a été exprimé comme suit : [(A0-At)/A0]x100

La préparation des suspensions cellulaires était la même que pour l’auto– aggrégation,
un volume de 1 ml de suspensions cellulaires de souches isolées et 1 ml la suspension de la
souche pathogène Listeria monocytogenes ont été mélangées dans un cuvette, et la DO600 a
été immédiatement mesurée, après incubation du mélange à 37 ° C pendant 2 h, La DO600 a
de nouveau été mesurée.

la Co agrégation a été calculée à l'aide de l'équation suivants : co-agrégation

% = (A0 - At) / A0 × 100.

3.4.6.Activité antibactérienne
Afin d’évaluer l'activité antimicrobienne, MRS gélose solide en boîtes de Pétri est recouvert
par 7 ml de gélose nutritive molle inoculée avec 20 µl d’une culture jeune de souches
pathogènes. Après solidification, différents puits sont creusés et puis remplit par 50 µl du
surnageant obtenu en centrifugeant de cultures bactériennes de 24 heures. Le surnagent
neutralisé à pH 6,5 a été également inoculé dans les puits. Le diamètre de la zone d'inhibition
entourant les puits a été mesuré et une zone claire de 1 mm ou plus a été considérée comme
une inhibition positive.
3.4.7.Sensibilité aux antibiotiques

19
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

La résistance des isolats aux antibiotiques a été réalisée selon Das, Khowala, and Biswas
(2016). Les antibiotiques utilisés sont comme suit : PEN: penicillin (10 µg); TRI:
trimethoprim (25 µ g); AMP: ampicillin (10 µ g); CLI: clindamycin (2 µg); VAN:
vancomycin (30 µ g); ERY: erythromycin (15µg).

Les tests ont été réalisés en triple et les diamètres de zone d'inhibition de croissance (mm), s'il
y en a, ont été notés.

3.4.8.Test d’hémolyse
Selon (Angmo, Kumari, Savitri, & Bhalla, 2016),

L’activité hémolytique des isolats a est teté selon Angmo et al , (2016). les isolats ont été
ensemencés en milieu Columbia gélose complétées supplémenté par 5% sang de mouton, puis
incubées les échantillonnes à 37 ° C pendant 24 h.

Les résultats de l’hémolyse soit une zone d'hémolyse claire (beta- hémolytique ou
hémolytique complète), ou bien ayant un halo verdâtre (alpha -hémolytique ou hémolytique
partiel), ou pas d’halo qui signifiée l’absence d’hémolyse (gamma- hémolytique).

3.4.9.La production des Exopolysaccharrides

Le test de production d'exopolysaccharride pour les souches LB a été réalisé selon la
méthode de (Angmo, Kumari, Savitri, & Bhalla, 2016). Qui a été évaluée selon la procédure
de (Mora, Fortina, Parini, Ricci, & Gatti, 2002) , La production d'exopolysaccharride a été
évaluée dans des boites de Pétri de lait rouge de ruthénium (RRM) qui contient de 0 à 5%
d'extrait de levure, 10% de poudre de lait écrémé, 1% de saccharose, 1 à 5% d'agar et 0 à 08 g
de rouge de ruthénium par litre. La paroi des cellules bactériennes été colorés par le rouge
ruthénium, produisant des colonies rouges pour les souches non- visqueux et de colonies
blanches pour les souches visqueux.

3.4.10.Profil de fermentation
Les capacités de fermentation des isolats de LB sélectionnés ont été évaluées selon
(Angmo, Kumari, Savitri, & Bhalla, 2016), Le lait écrémé bovin reconstitué (5% p / v) a été
stérilisé à 105  C pendant 5 min puis remettre à 37  C et inoculé par 1,5% d'isolats LB
activement sélectionnés, suivi d'une incubation à 37  C pendant 24 h. Les échantillons de lait
fermenté ont été conservés à 4  C pendant 21 jours. Des échantillons ont été prélevés chaque

20
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

7 jours pendant la période de stockage pour le dénombrement des cellules bactériennes, puis
mesurée le pH et l’activité protéolytique à l'aide de l'OPA.

3.4.10.1.Dénombrement bactérienne et pH
Ont été préparées des dilutions en série appropriées dans une solution de peptone et
d'eau à 0,1%, et les populations des LB ont été comptées à l'aide de la gélose MRS. Les boites
de Pétri inoculées en double ont été incubées à 37 ° C pendant 48 h en anaérobie en utilisant
des jarres anaérobies, le pH ont été mesurées de chaque échantillon en utilisant un pH-mètre
numérique.

3.4.10.2.L’activité protéolytique (OPA)

Les activités protéolytiques d'échantillons fermentés ont été dosées selon. (Elfahri,
Vasiljevic, Yeager, & Donkor, 2016) , les résultats de protéolyse sont présentés sous forme
d'absorbance à 340 nm ,l'activité protéolytique dans le lait à 0, 4, 8, 12 et 24 h de fermentation
a été mesurée et évalué par la libération de groupes amine libres à l'aide de la méthode ( OPA)
O-Phtal-dialdéhyde . 10 ml de Acide Trichloracétique (TCA) à 1% (p / v) ont été ajoutés à
10 ml de chaque échantillon pour précipiter de grosses protéines. Le mélange a été centrifugé
à 4000 tr/ pendant 30 min à 4 ° C et le surnageant a été filtré par filtration de type sous vide
en utilisant un filtre de 0,45 μm. 150 μl de La suspension collectée a été mélangée avec 3 ml
de réactif OPA et laissée à température ambiante (~ 20 ° C) pendant 2 minutes. L'absorbance
de chaque mélange a été mesurée à 340 nm avec un spectrophotomètre, et l’activité
protéolytique a été exprimée comme l'absorbance des dérivés OPA à 340 nm. Le degré relatif
d’activité protéolytique de tous les échantillons a été comparé à celui du lait témoin au début.

3.4.11.Hydrolyse des sels biliaires(BSH)

Les activités BSH d'isolats purs ont été mesurées en déterminant la quantité d'acides
aminés libérés des sels biliaires conjugués par les souches selon Liong et Shah (2005).
Brièvement, les cellules cultivées dans un bouillon MRS pendant 20 h ont été
centrifugées à 10 000 g à 4° C pendant 10 min. Le culot cellulaire a été lavé deux fois avant
suspension dans 10 ml de tampon phosphate 0,1 M (pH 7,0). La concentration cellulaire a été
ajustée à une valeur de DO de 1 unité à 600 nm.
Cinq millilitres de la suspension cellulaire ont été mis en sonification pendant 3 min
avec un refroidissement constant dans de la glace, suivi par une centrifugation à 10 000 g à 4°
C pendant 10 min. A 0,1 ml de surnageant correctement dilué obtenu, 1,8 ml de tampon

21
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

phosphate de sodium 0,1 M (pH 6) et 0,1 ml de sel biliaire conjugué ont été ajoutés. La bile
conjuguée utilisée était le glycocholate de sodium 6 mM, le taurocholate de sodium 6 mM ou
le mélange de sels biliaires conjugués 6 mM (acide glycocholique, acide
glycochénodésoxycholique, acide taurocholique, acide taurochènodésoxycholique, et l’acide
taurodésoxycholique .
Le mélange a été incubé à 37 ° C pendant 30 minutes. La réaction enzymatique a été
interrompue en ajoutant 0,5 ml d'acide trichloroacétique (15% poids vol 1) à 0,5 ml
d'échantillon. Le mélange a été centrifugé et 0,2 ml de surnageant obtenu a été ajouté à 1 ml
d'eau distillée et 1 ml de réactif ninhydrine (0,5 ml de ninhydrine à 1% dans un tampon citrate
0,5 M pH 5,5, 1,2 ml de glycérol à 30%, 0,2 ml de tampon citrate 0,5 M pH 5,5).
La préparation a été vortexée et bouillie pendant 14 min. Après refroidissement
ultérieur, l'absorbance à 570 nm a été déterminée en utilisant de la glycine ou de la taurine
comme standards. Une unité d'activité BSH a été définie comme la quantité d'enzyme qui a
libéré 1 mmol d'acide aminé du substrat par minute.

3.4.12.Élimination du cholestérol
MRS bouillon fraîchement préparé contenant 0,3% d'oxgall a été inoculé avec chaque
souche isolée et incubé pendant 24 h à 37 ° C. Les cellules sont récoltées par centrifugation à
4000 x g à 4 ° C pendant 20 min et lavées deux fois avec de l'eau stérile.

Pour préparer les cellules tuées par la chaleur, les culots cellulaires ont été mis en
suspension dans 10 ml d'eau et autoclavés à 121 ° C pendant 15 min. Les cellules tuées par la
chaleur ont été en outre mises en suspension dans un bouillon MRS supplémenté avec 0,3%
(p / v) d'acide oxgall et 100 g / ml de cholestérol soluble dans l'eau et incubées pendant 24 h à
37 ° C. Pour préparer les cellules au repos, les culots cellulaires ont été mis en suspension
dans 10 mL de tampon phosphate stérile (0,05 M, pH 6,8) contenant 0,3% (p / v) d'acide
oxgall et 100 mg / mL de solution aqueuse de cholestérol et incubés pendant 24 h à 37 ° C.
Après incubation, les mélanges est centrifugés à 4000 xg à 4 ° C pendant 20 min et
les concentrations de cholestérol dans les surnageant ont été mesurées en utilisant la méthode
spectrophotométrique selon Liong et Shah (2005).

22
 Chapitre 3 Matériels et méthodes

3.4.13.La résistance aux lysozymes

Les cellules cultivées pendant une nuit d'isolats de Lactobacilles ont été centrifugées

(7 000 tr / min, 10 min, 4 ° C). Les cellules ont été lavées deux fois avec du PBS et les culots
ont été remis en suspension dans une solution de Ringer ,(10 µl) de suspension été inoculée
dans une solution d'électrolyte stérile (CaCl2 0,22 g / l; NaCl 6,2 g / l; KCl 2,2 g / l; NaHC03
1,2 g / l) avec 100 mg / l de lysozyme, puis incubés à 37 ° C et après 2 h d'incubation, le
nombre de cellules viables a été dénombré en utilisant la méthode de comptage sur boites .

3.4.14.La résistance à la chaleur

La résistance à la chaleur a été évaluée selon Pa é z et al. (2012), les cultures de nuit ont
été récoltées dans du bouillon MRS (5000 g, 15 min, 5 ° C), puis elles lavées deux fois avec
(PBS) à pH =7,5 et remises en suspension dans du lait écrémé à 10% (Nestlé, Brésil). Les
suspensions cellulaires ont été placées dans un bain-marie à 60 ° C pendant 5 min puis
immédiatement refroidies dans un bain de glace. Les cellules viables ont été comptées a dans
une gélose MRS pendant 48 h à incubation 37 ° C, immédiatement avant et juste après
l'exposition à la chaleur.

4. Identification des isolats sélectionnés par séquençage de l'ADNr 16S

L'ADNr 16S de souches sélectionnées a été ampli fi é par la procédure de PCR décrite dans
Angmo et al. (2016).

Les primers 27F (5’- AGAGTTT-GATCCTGGCTCAG-3′) et 1492R (5-

TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′) ont été employé pour l’amplification d’ADN.

Le séquençage a été fait par la firme Macrogen, Korea. Les résultats de la séquence ont été
alignés sur la base de données NCBI en utilisant l'algorithme BLAST. Les numéros
d'accession ont été reçus pour certains isolats LAB par GenBank. La méthode de voisinage a
été appliquée pour déterminer l'espèce bactérienne la plus proche (Saitou et Nei, 1987) à l'aide
du logiciel MEGA 7.0.

23
 Chapitre 4
Résultats et Discussion
 Chapitre 4 Résultats et discussion

4.1.Caractérisation générale des isolats

Vingt-trois isolats sur 100 colonies isolées ont représentés une forme bâtonnet, Gram
positifs et catalase négatif. Les 23 isolats ont montré de meilleures capacités de croissance à
une température d'incubation de 37  C par rapport à 30  C. Ces 23 souches ont été soumises
au test de tolérance à l'acidité et à la bile,

4.2.Tolérances à l'acidité et aux les sels biliaires

Le (tab.5) présente les résultats de la tolérance de 23 isolats à l'acide à pH 2,0 et la

tolérance à l’égard de différentes concentrations d’oxgall, l’acide colique et l’acide
taurocholique. La croissance des isolats a diminué (p <0,05) pendant les 2 heures
d'incubation à 37° C sous les conditions d’acidité à pH 2,0. La réduction de la
croissance a fluctuée entre 0,29 et 6,78 log10 ufc/ml. Les isolats ont montré une
résistance remarquable à l’acide choliques et àl’acides taurocholiques par rapport à
l’Oxgall.

Dans l'ensemble, les isolats 15, 70, 34, 66, 76, 22, 51, 73 et 47(tableau 5), entre autres, ont
exprimé une résistance plus élevée contre les sels biliaires. Sur la base des tolérances à l'acide
et à la bile, les isolats 15, 70, 34, 66, 76, 22, 51, 73 et 47 ont été sélectionnés pour une
caractérisation ultérieure.
Des résultats similaires ont été obtenus par Mahmoudi et al 2016 où 19 isolats de
lactobacillus ont exprimé une résistance supérieure à 90% à pH 2, ce qui est considéré comme
une bonne résistance aux acides.

La résistance aux sels biliaires a été étudiée également par (MAHMOUDI, et al., 2016) , où 6
souches de Lb.plantarum ont exprimé une viabilité de 92,38% jusqu’au 99.4%.

Des résultats similaires à notre étude ont été rapportés par Angmo et al. (2016) et Das et al.
(2016) pour des lactobacillus isolé de boissons du Ladakh et d'échantillons marins.

De la même façon, la résistance aux acides des isolats sélectionnés dans cette étude étaient
plus élevées que celles rapportées par Angmo et al. (2016) à pH 2,0.
Les tolérances aux stress acides et biliaires sont des propriétés importantes pour toute bactérie
possédant un potentiel probiotique. La capacité du probiotique à survivre, en nombre
suffisant, après avoir été soumis à une acidité gastrique (pH bas) et aux conditions de l'intestin
(sels biliaires) est important pour être utilisé dans l'industrie alimentaire (Chalas et al., 2016).

25
 Chapitre 4 Résultats et discussion

La tolérance aux acides et à la bile de tous les isolats est variée considérablement en raison de
la spécificité de la souche ou de l'espèce.

26
Chapitre 4 Résultats et discussion

Tableau 5. La tolérence à l'cidité et à la bile de 23 isolts de lait de chamelle (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash,
2017)

27
Chapitre 4 Résultats et discussion

4.3.1. L‘ Autoagrégation et hydrophobicité

Les pourcentages d'auto-agrégation pendant 24h d'incubation à 37° C et
l’hydrophobicité contre trois hydrocarbures, à savoir l'hexadécane, le xylène et l'octane, sont
présentés dans (tab.6).

Les neuf isolats (15, 70, 34, 66, 76, 22, 51, 73 et 47 ont présentés un bon pourcentage
d'autoagrégation allant de 0,1 - 10% et de 0,6 - 38% pendant 3 h et 24 h d'incubation . L'étude
statique utilisant ANOVA a montré que l'autoaggrégation augmentait (p <0,05) pendant la
période d'incubation.

Après 24 h, les isolats 51, 70, 22, 47 et 66 présentaient une autoaggrégation la plus
élevée que les autres isolats. Les résultats du tableau 6 ont révélé que les propriétés
hydrophobes des 9 isolats vis-à-vis du xylène et de l'octane étaient plus élevées (p <0,05) que
celles de l'hexadécane.

Les pourcentages d'hydrophobicité a varié de 0,6 à 16,2%, de 1,6 à 57,9% et de 2,7 à

67,0% à l’egard de l’hexadécane, le xylène et l'octane, respectivement (tableau 6).

En général, les isolats 51, 76, 47, 22 et 66 ont montré une hydrophobicité plus élevée
que les autres isolats étudiés.

Les propriétés de surface cellulaire testées par hydrophobicité et autoagrégation sont des
paramètres indicatifs de l'adhésion des cellules probiotiques aux cellules épithéliales dans
l'intestin humain.
Plusieurs chercheurs ont rapporté que les tests d'agrégation et d'hydrophobicité possèdent une
corrélation avec les propriétés d'adhésion des bactéries probiotiques (Botes et al, (2008) et
Duary et al, (2011).
Dans la présente étude, les isolats LAB ont montré des pourcentages remarquables
d'autoagrégation et d'hydrophobicité vis-à-vis des hydrocarbures. Cependant, des différences
significatives existaient entre les souches étudiées, qui peuvent être attribuées à la variation
des extensions hydrophiles / hydrophobes dans la paroi cellulaire des isolats de bactéries
lactiques.
Angmo et coll. (2016) ont rapporté une hydrophobicité contre l'hexadécane et les résultats ont
variés de <5% à 47% pour les souches LAB. L'inconvénient de l'étude précédente (Angmo et
al., 2016) était que l'hydrophobicité du LAB était testée contre un seul hydrocarbure
(hexadécane).

28
Chapitre 4 Résultats et discussion

Dans notre étude, les isolats ont montré une hydrophobicité comparativement plus élevée par
rapport à l'étude précédente, en particulier contre le xylène et l'octane.
Das et et, (2016) ont également signalé une hydrophobicité et autoagrégation de 3 isolats de
bactéries lactiques provenant de sources différentes de la mer indienne.

Ces auteurs ont rapporté la fourche d’hydrophobicité de 22,2% à 25,0%, ce qui est inférieur
par rapport à nos résultats, alors que les pourcentages d'auto-agrégation sont conformes à nos
résultats.

Tareb et al, (2013) ont étudié les pourcentages d'autoagrégation de souches de

Bifidobacterium. Ces auteurs ont rapporté des résultats d'auto-agrégation similaires à notre
étude.

Tableau 6. les pourcentage de l'autoagragatio et l'hydrophobicité

(Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017).

4.4.Co-agrégation

Les résultats de la coagrégation de 9 isolats de LAB en présence de

E. coli O157:H7, S.typhimurium, L. monocytogenes et S. aureus à 2 h et 4 h d'incubation à
20° C et 37° C sont indiqués dans le tableau 7. L’étude statistique par ANOVA a révélé que la
co-agrégation a augmentation (p <0,05) avec l'incubation à chaque température d'incubation.
D’une façon général, les pourcentages de la co-aggrégation des souches isolées avec tous les

29
Chapitre 4 Résultats et discussion

pathogènes à la température d'incubation 37° C ont eté les plus élevés (P> 0,05) par rapport à
20 C, en particulier en présence de L. monocytogenes et S. aureus.
Dans l'ensemble, les isolats 34 et 70 ont démontré une capacité de co-agrégation la plus
élevée que les autres isolats étudiés.
le tableau 7 montre que les souches isolées ont présentées une co-aggrégation plus élevée (p>
0,05) envers les pathogènes Gram-négatifs (E. coli O157: H7 et S. typhimurium) au cours des
2 premières heures par rapport aux Gram-positifs (L. monocytogenes, et S. aureus).

Cette tendance a changé lorsque le temps d'incubation s'est prolongé à 4 h. Dans l'ensemble,
les souches 22, 47, 34 et 70 ont démontré une capacité de co-aggrégation élevée que les autres
isolats étudiés.

Plusieurs chercheurs ont signalé que la capacité de co-aggrégation du BL en présence d'agents

pathogènes intestinaux augmentera les propriétés probiotiques du BL.

Plusieurs auteurs ont révélé que l'aggrégation cellulaire est positive pour favoriser la
colonisation cellulaire des bactéries probiotiques.

Les résultats de la coaggrégation de notre étude concordent avec ceux rapportés par d'autres
(Angmo et al., 2016; Ben Taheur et al., 2016; Collado et al, 2008).

La capacité des BL isolés à coaggréger avec les agents pathogènes peut être attribuée aux
composants de la surface cellulaire, mais les mécanismes doivent encore être étudiés.

Des interactions entre les glucides-lectine et les composants protéiniques présents à la surface
cellulaire peuvent être impliquées (Tareb et al., 2013). Néanmoins, les pourcentages de
coagrégation dépendent de la souche (probiotique et pathogène) et du temps d'incubation
(Collado et al., 2008).

La pouvoir de BL à coaggréger en présence de bactéries pathogènes va former une barrière

défensive qui ne permettra pas aux agents pathogènes de coloniser dans l'intestin humain
(Vidhyasagar et Jeevaratnam, 2013).

Notre étude a montré que la température d'incubation n'influençait pas de manière significative la co-
agrégation. Notre résultat contredit celui de Collado et al. (2008) qui ont rapporté que la
température d'incubation affecte la coaggrégation des probiotiques étudiés, mais les données
n'ont pas été présentées. Par conséquent, ces auteurs ont choisi la température de 20° c pour
effectuer le test de co-aggregation (Collado et al., 2008).

30
Chapitre 4 Résultats et discussion

Nous pensons que la co-aggrégation influencée par les conditions environnementales à besoin
doit être etudiée davantage afin de standardiser le test de coagrégation. La tendance imprévue
de la coagrégation des isolats de LAB dans cette étude envers les pathogènes Gram-positifs
pendant les 2 premières heures d'incubation nécessite des études supplémentaires .

31
 Chapitre 4 Résultats et discussion

Tableau 7. les pourcentages de co-agrégation des BL avec 4 bactéries pathogènes pendant 2 heure et 4 heures à deux température d
'incubation différents (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

32
Chapitre 4 Résultats et discussion

4.5.L’activité antimicrobienne et la résistance aux antibiotiques

Le tableau 8 présente les activités antimicrobiennes de 9 isolats de BL contre 4

pathogènes causant des intoxications alimentaires et l’antibiogramme contre 6 antibiotiques.

Les activités antimicrobiennes des isolats de BL ont fluctuées entre la petite activité
(zone de 0,1 mm) à la plus élevée (zone de> 2,0 mm).

Les isolats 15, 34, 47, 66, 70 et 76 ont présenté de fortes activités antimicrobiennes
contre les 4 agents pathogènes et particulièrement un effet très important contre S. aureus par
rapport à d'autres agents pathogènes (tableau 8). les deux isolats 34 et 70 ont parmi ces
souches à forte activité antimicrobienne ,on cite que l’isolat 34 à un faible effet sur E. coli
O157 : H7 et S. typhimurium avec une zones d’inhibition de 0,1 à 1,0 mm , et un effet
modéré sur L.monocytogenes et S. aureus avec une diamètre d’inhibition de 1,1 à 2,0 mm .

les résultats de cette étude sont en accord avec ceux trouvés Mahmoudi et al., (201) en
étudiant l’activité antibacterien de 16 isolat de Lb.plantrum contre les souches pathogenes
précédentes. De même, Hamed et Elattar,2013 ont rapporté des résultats similaires où la seul
Lb.plantarum isolées a eu une activité maximale contre E. coli O157 : H7, et une action
modérée contre S. typhimurium.

En général, toutes les souches BL ont pu résister à l'impact des antibiotiques. Cependant, les
isolats 22, 51 et 73 étaient sensibles aux antibiotiques.

L'activité antimicrobienne des souches de BL peut être attribuée à certains composés produits
pendant la croissance des BL, notamment les métabolites, les acides organiques et les
bactériocines (Zuo et al., 2016).

Les activités antimicrobiennes de la présente étude sont en accord avec les résultats rapportés
par d'autres auteurs (Angmo et al., 2016; Das et al., 2016; Zuo et al., 2016). Ces études ont
également révélé que l'activité antimicrobienne dépendait de l'espèce et de la souche.

En général, tous les isolats étaient modérément sensibles et sensibles à la pénicilline,

à l'ampicilline, à la clindamycine et à l'érythromycine.

Cependant, les isolats étaient résistants au triméthoprime et à la vancomycine. La résistance à

33
Chapitre 4 Résultats et discussion

un antibiotique particulier peut être due à l'absence de site cible de cet antibiotique
particulier dans la cellule BL (DeLisle et Perl, 2003).

Ces résultats sont presque en accord avec ceux d'Angmo et al. (2016) et Teles Santos et
al. (2016) qui ont isolé des BL à partie des produits fermentés indiens et du cacao
fermenté , respectivement.

Cependant, des différences mineures par rapport à notre étude peuvent être attribuées à
des différences entre les souches et les espèces.

Tableau 8. L’activité antagoniste contre 4 bactéries pathogènes et la résistance aux

6 antibiotiques différents. (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash,

2017)
(-) aucun inhibition ,(+) zone d’ inhibition de 0,1et 1,0 mm ;(++) zone d’ inhibition de 1,1et 2,0 mm ; (+++)
zone d’ inhibition de > 2,1mm .PEN: pénicilline (10 mg); TRI: triméthoprime (25 mg); AMP: ampicilline (10
mg); CLI: clindamycine (2 mg); VAN: vancomycine (30 mg); ERY: érythromycine (15 mg), R: résistante, MS:
moyennement sensible , S: sensitive

4.6.Hydrolyse des sels biliaires (BSH) et élimination du cholestérol

Les activités BSH et l'élimination du cholestérol de 9 isolats de BL sont présentées dans

le tableau 5 et la figure 1, respectivement.

Toutes les souches de BL ont montré la capacité d'hydrolyser les trois sels biliaires étudiés
en produisant de l'acide cholique.
Les isolats 70, 22, 34, 76 et 15 présentaient des activités BSH élevées par rapport aux
autres isolats (tableau 9).

34
Chapitre 4 Résultats et discussion

En général, les différences de BSH entre 3 sels biliaires à chaque isolat étaient non
significatives (p <0,05). Comme le montre la figure 1, les isolats BL étaient capables
d'éliminer le cholestérol du milieu MRS. Les isolats 15, 34, 76 et 70 ont démontré une
capacité d'élimination du cholestérol plus élevée (p <0,05) que les autres BL.

L'élimination du cholestérol est l'une des caractéristiques souhaitables des probiotiques.

Plusieurs mécanismes sont proposés pour l'élimination du cholestérol, notamment:
l'incorporation du cholestérol dans la paroi cellulaire, adhésion à la paroi cellulaire et
réduction enzymatique via la cholestérol réductase (Ishimwe, Daliri, Lee, Fang, & Du, 2015).

De plus, la capacité du LAB à hydrolyser les sels biliaires dans l'intestin humain réduirait
l'absorption du cholestérol dans l'intestin (Jones,
Tomaro- Duchesneau, Martoni et Prakash, 2013).

Dans notre étude, les isolats étudiés présentaient une baisse du cholestérol et des activités
BSH. Les résultats de notre étude sur la capacité d'abaissement du cholestérol sont en accord
avec les résultats rapportés par Das et al. (2016), alors que les activités de BSH sont
conformes à celles rapportées par Miremadi et al. (2014).

Tableau 9. L’activité d'hydrolyser les sels biliaires (activité spécifique

U/mg) (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

35
Chapitre 4 Résultats et discussion

Figure 3. Elimination de cholesterol en % de BL aprés 24h d 'incubation à 37 °C

(Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

4.7.Tolérances à la chaleur et au lysozyme

La résistance à la chaleur et à l'impact du lysozyme de 9 isolats LAB est présentée dans
le tableau 10. La croissance de tous les isolats a diminué (p <0,05) après avoir été soumis à
un traitement thermique à 60 C pendant 5 min. La réduction des croissances de BL variait de
0,9 à 2,5 log10 CFU mL 1. Les isolats 34, 76, 51, 66 et 73 présentaient une résistance à la
chaleur plus élevée que les autres souches.

Par contre, la réduction de la croissance du LAB survenue pendant une incubation de

90 min en présence de 100 mg de lysozyme L 1 était insignifiante (tableau 6). Les réductions
des croissances étaient <1,0 log10 CFU mL
1.
Les isolats LAB ont montré une bonne résistance à la chaleur, ce qui serait une propriété
positive pour que ces probiotiques soient appliqués dans les aliments pour l'industrie
alimentaire.

La plage de réduction des croissances de BL due au traitement thermique dans notre

étude était inférieure à la plage de réduction rapportée par Teles Santos et al. (2016) qui
ont isolé des BL de la fermentation du cacao.
Cela suggère que les BL isolées du lait de chamelle étaient plus résistants que ceux isolés
de la fermentation du cacao.

36
Chapitre 4 Résultats et discussion

Turchi et al. (2013) ont rapporté que les taux de survie de 37 souches de BL étudiées
provenant de produits alimentaires italiens étaient> 80%. Ces résultats sont en accord avec
nos résultats (tableau). Les résultats de la résistance au lysozyme dans notre étude sont
également conformes aux résultats rapportés par Angmo et al. (2016).

Tableau 10. La résistance à la chaleur (60°C/ 5min) et au lysozyme (Log 10 UFC/ml).

(Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

4.8.Activité hémolytique et production d’Exopolysaccharides (EPS)

Le tableau 11 présente l'activité hémolytique et la capacité à produire des EPS de 9

isolats LAB. Sur la base du test EPS, tous les isolats LAB ont montré la capacité de produire
des EPS, à l'exception des isolats 51 et 73.

En ce qui concerne l'activité hémolytique, les isolats ne présentaient aucune activité

hémolytique, à l'exception des isolats 22, 51 et 73. Les isolats 22 et 51 présentaient une β-
hémolyse, tandis que l'isolat 73 présentait une α-hémolyse.

des résultats identique par (Amara, Zadi-Karam, & Karam, 2019) et (MAHMOUDI, et al.,
2016), pour tooutes tous les souches de Lactobacillus plantarum isolées .

La présence de mucus de couleur blanc filé sur des plaques de lait écrémé rouge ruthénium
produisant des lactobacilles sont les producteurs d'EPS. Plusieurs travailleurs ont rapporté des
résultats EPS similaires en utilisant les mêmes tests de cette étude (Angmo et al., 2016;
Kumari, Angmo, Monika et Bhalla, 2016).

Les 3 isolats qui ont démontré des activités hémolytiques de type α ou βl'hémolyse n'ont pas
été prises en compte pour l'identification.

37
Chapitre 4 Résultats et discussion

Tableau 11. L'activité hémolytique et production de EPS (Abushelaibi, Al-Mahadin,

El- Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

(-) aucun hémolyse ; (Α) hémolyse alfa ; (β) hémolyse beta ; (-) EPS négative ; (+) EPS
positive.

4.9. Identification des isolats sélectionnés par séquençage de l'ADNr 16S

les Six probiotiques potentiels ont été identifiés par la séquence du gène de l'ARNr 16S.
Les amplicons PCR étaient compris entre 1 200 et 1 400 pb. Les alignements ont été
effectués à l'aide de BLAST. Les isolats identifiés ont été désignés sous le nom de bactéries
lactiques probiotiques.
L'analyse de la phylogénie moléculaire et l'arbre phylogénique ont été effectués pour
identifier les Bl au niveau de l'espèce sur la base des séquences d'ADNr 16S à partir de
distances évolutives par la méthode de neighbor-
joining. L'arbre phylogénique des 6 isolats sont montré sur la figure . L'analyse de séquence a
montré que 50% de l'ADNr 16S étaient regroupés avec la séquence de lactobacilles et les
50% restants regroupés avec la séquence de lactocoques. Les numéros d'accession de Ge

38
 Chapitre 4 Résultats et discussion

Tableau 11. Isolats LAB identifiés par séquençage du gène de l'ADNr 16S et leurs
numéros d'accès Genbank

4.10.Profil de fermentation
Le dénombrement bactérien, évaluation de la protéolyse et valeurs du pH du lait
fermenté pendant 21 jours de stockage sont mentionné dans ( tab.12 ) .Les 6 isolats ont
conservé un nombre élevé de bactéries pendant 21 jours de stockage à 4 C avec une
abaissement légère des numérations bactériennes , sauf L. lactis KX881782 qui a chuté de
manière significative. En revanche, les deux souches de Lb. plantarum ont augmenté pendant
le stockage.

L'indice de protéolyse (OPA) a augmenté pendant 21 jours de stockage, pour

L.plantarum (iso 70) a présenté la protéolyse la plus élevée par rapport aux autres isolats
étudiés, et que l’iso 34 présent un léger abaissement de la protéolyse.

Le pH du lait fermenté a été abaissé après 24 h de fermentation. En général, les

valeurs de pH du lait fermenté avec tous les isolats reste stable pendant le stockage, sauf le
lait fermenté par les deux souches de Lb. plantarum qui est augmenté de l’ordre de 0,1 et
0,6 pour la valeur pH .

39
Chapitre 4 Résultats et discussion

Tableau 12. Profil de fermentation (nombre des bactéries, OPA (340 nm), pH ) des BL pendant ours à

4°C. (Abushelaibi, Al-Mahadin, El-Tarabily, P. Shah, & Ayyash, 2017)

40
Conclusion
 Conclusion

Conclusion

Les bactéries lactiques présentant un grand intérêt dans le domaine nutritionnelle et

pharmaceutique, pour cela, plusieurs travaux et recherches sont faisant jusqu’au maintenant
afin d’isoler des nouvelles souches avec plus des propriétés probiotiques et physiologiques.

Ce travail présent quelques caractéristiques probiotiques pour certaines souches des

bactéries lactiques isolée de lait de chamelle, notamment l’espèce Lb. plantarum, qui avaient
un important potentiel probiotique que les autres isolats, afin d’être utilisé dans les produites
alimentaire et thérapeutique .

42
Bibliographie
 Bibliographie

Bibliographie

AbdelMalek, A. (2017). Caractérisation phénotipiques et génotypiques de Bifidobacteruim et

lactobacillus isolée en Algérie .Etude biotechnologiques et leur potentiel .Thèse de doctorat
probiotiques. Oran: Faculté des sciences de la vie et la nature.

Abushelaibi, A., Al-Mahadin, S., El-Tarabily, K., P. Shah, N., & Ayyash, M. (2017).
Characterization of potential probiotic lactic acid bacteria isolated from camel milk. LWT -
Food Science and Technology , 79:316-325.

Amara, S., Zadi-Karam, H., & Karam, N.-E. (2019). Selection of Lactobacillus strains newly
isolated from Algerian camel and mare fermented milk for their in vitro probiotic and
lipolytic potentials. African Journal of Biotechnology , 13:882 -894.

Angmo, K., Kumari, A., Savitri, & Bhalla, T. C. (2016). Probiotic characterization of lactic
acid bacteria isolated from fermented foods and beverage of Ladakh. LW. Food Science and
Technology , 66: 428-435.

BELHAMRA, Z. (2017). Croissence et survie des probiotiques en présence des édulcorants

et des addetifs alimentires .Thèse de doctorat. Setif: Faculte des sciences de la nature et la vie.

BELKEZI, L. (2020). Les lactobacilles :role physuilogique et intaret en santé humain.Thèse

de doctorat . Maroc: Université mohammed Khamess.

Bilarbi, F. (2011). Isolement et sélection des souches bactéries lactiques productrices des
métabolites antimicrobiènnes,thése de magistère. Oran, département des biologie: Facultes
des sciences ,.

Bouguerra, a. (2012). Caractérisation des bactéries lactiques de lait de chamelle .Thèse de

magistère. SETIF: UNIVERSITE FERHAT Abbas -SETIFFaculté des sciences de la nature et
de la vie.

DRA Ghislaine, A. é. (2018). Caractérisation physicochimique , microbiologique et

immunologiques des laits camelin et bovin d'Algérie .Activités antioxydante et antitoxique de
la fermentation.Thèse de doctorat. Sdi BelAbbes: Faculte des sciences de la nature et la vie.

Elfahri, K. R., Vasiljevic, T., Yeager, T., & Donkor, O. N. (2016). Anti-colon cancer and
antioxidant activities of bovine skim milk fermented by selected Lactobacillus helveticus
strains. , . Journal of Dairy Science , 99(1): 31-40.

FGUIRI, I., ZIADI, M., ATIGUI, M., AYEB, N., ARROUM, S., ASSADI, M., et al. (2016).
Isolation and characterisation of lactic acid bacteria strains from raw camel milk for potential
use in the production of fermented Tunisian dairy products. International Journal of Dairy
Technology , 11:103-113.

44
 Bibliographie

Fuller, R. (1989). Probiotics in man and animals. J.Appl.Bacteriol. , 66, 365-378.

Gilliland, S. E., & Walker, D. K. (1990). Factors to consider when selecting a culture of L.
acidophilus as a dietary adjunct to produce a hypercholesterolemic effect in humans. J. Dairy
Sci. , 73:905–909.

HADEF, S. (2012). Evaluation des aptitudes technologiques et probiotiques des bactéries

lactiques locales .Thèse de magistère. Ouargla: Faculté des sciences de la vie et la nature.

HAMDI, A. R. (2009). Etude de potentiel probiotique et technologique des lactobacilles de

lait cru de chamelle .Thèse de magistère. Oran: faculté des sciences.

Hamed, E., & Elattar, A. ( 2013). Identification and Some Probiotic Potential of Lactic Acid
Bacteria Isolated From Egyptian Camels Milk. Life Science Journal , 10:1952-1961.

Kassas, Z. (2017). Croissance de souches de bactéries lactiques d’intérêts technologiques

et/ou probiotiques sur MRS végétal modifié. Thèse de doctorat. Annaba: faculte des sciences
departement de biochimie.

Liong, M. T., & Shah, N. P. (2005). Acid and bile tolerance and cholesterol removal ability of
lactobacilli strains. Journal of Dairy Science , 88(1), 55e66.

lionge, & shah. (2005). Bile salt deconjugation ability, bile salt hydrolase activity.

MAHMOUDI, I., BEN MOUSSA, O., KHALDI, T. E., KEBOUCHI, M., SOLIGOT-
HOGNON, C., LEROUX, Y., et al. (2016). Functional in vitro screening of Lactobacillus
strains isolated from Tunisian camel raw milk toward their selection as probioti. Small
Ruminant Research .

MENAD, N. (2017). Effet antlagoniste des bactéries lactiques isolées à partir du lait de
vache -à-vis de Salmonella sp.Thèse de doctorat . Mostaganem: Facuté des sciences de la
nature et la vie .

Mishra, V., & Prasad, D. N. (2005). Application of in vitro methods for selection of
Lactobacillus casei strains as potential probiotics. International Journal of Food
Microbiology , 103(1): 109-115.

Mme HANOU, S. (Annaba). Aptitude du lait de chamelle au developpement des bactéries

lactiques et mise au pont de lait fermenté .Thèse de doctorat. 2018: Faculté des sciences.

Mora, D., Fortina, M., Parini, C., Ricci, & Gatti, M. .. (2002). Genetic diversity and
technological properties of Streptococcus thermophilus strains isolated from dairy products.
Journal of Applied Microbiology , 93: 278-87.

Naceur, B. (2017). caracterisation technologique et sanitaire des enterocoques isoles a partir

de lait de chamelle du algerien . these de doctorat . telemcen: laboratoire de Microbiologie
Appliquée à l’Agroalimentaire, au Biomédical et à l’Environnement.

45
 Bibliographie

RAHLI, F. (2015). Valorisation du lait de chamelle par l'exploitation des potentialités

technologiques des bactéries lactiques isolées localement .Thèse de doctorat. Oran: faculté
des sciences de la Nature et de la Vie .

Saito, T. (2004). Selection of the useful probiotic lactic acid bacteria from the Lactobacillus
acidophilus group and their application to functional foods. Anim.Sci.J , 75: 1-13.

Zuo, F., Yu, R., Feng, X., Chen, L., Zeng, Z., Khaskheli, G. B., et al. (2016). Caracterization
and in vitro properties of potential probiotic Bifidobacterium strains isolated from breast-fed
infant feces. . Annals of Microbiology. , 66(3) :1027-1037.

46
 Annexe

Annexes
Composition des milieux de culture d’isolement Gélose MRS (Bouguerra, 2012)
(Quantité en g)

Peptone 10

Extrait de viande 8.0

Extrait de levure 4.0

D(+)-Glucose 20
Di potassium hydrogène phosphate 2.0

Acétate de sodium tri hydrate 5.0

Citrate triammonique 2.0
Sulfate de magnésium heptahydraté 0.2

Sulfate de manganèse tetrahydraté 0.05

Agar 15

Tween 80 1 ml

Eau distillée qsp 1L

pH 6.5 +/- 0.2 à 37°C. Autoclavage à 121°C pendant 15min /

-Abushelaibi, Aisha, Suheir Al-Mahadin, Khaled El-Tarabily, Nagendra P. Shah, et

Mutamed Ayyash. «Characterization of potential probiotic lactic acid bacteria isolated from
camel milk.» LWT - Food Science and Technology , 2017: 79:316-325.

-Amara, Sabrina, Halima Zadi-Karam, et Nour-Eddine Karam. «Selection of

Lactobacillus strains newly isolated from Algerian camel and mare fermented milk for their in
vitro probiotic and lipolytic potentials.» African Journal of Biotechnology, 2019: 13:882 -
894.

-Fguiri, Imen, et al. «Isolation and characterisation of lactic acid bacteria strains from
raw camel milk for potential use in the production of fermented Tunisian dairy products.»
International Journal of Dairy Technology, 2016: 11:103-113.

-Hamed, Eman, et Aisha Elattar. «Identification and Some Probiotic Potential of Lactic
 Annexe

Acid Bacteria Isolated From Egyptian Camels Milk.» Life Science Journal, 2013: 10:1952-
1961.

-MAHMOUDI, Imen, et al. «Functional in vitro screening of Lactobacillus strains isolated

from Tunisian camel raw milk toward their selection as probioti.» Small Ruminant Research,
2016.
 Résumées

‫الملخص‬
‫ وتحديدها‬،‫ كانت العزالت على شكل عصوي‬.‫) ساللة من بكتريا حمض الالكتيك من لبن اإلبل‬23( ‫أدت هذه الدراسة إلى عزل وتعريف ثالثة وعشرين‬

‫ الهدف من هذه الدراسة هو تقييم بعض صفات البروبيوتيكية‬. ‫ ونحن نركز على أنواع الكتوباسيلوس بالتينيوم‬، ‫ الكتوباسيلوس‬:‫يتعلق بالجنس‬

‫ والقدرة على تحليل‬، ‫ وتحمل الحموضة والصفراء‬، ‫ اتضح أن العزالت تظهر فعالية جيدة على التحلل البروتيني والدهون‬.‫والخصائص الفسيولوجية‬

، ‫ و غيلب النشاط االنحاللي و األنشطة القوية المضادة للميكروبات‬، )EPS( ‫ وإنتاج السكريات الخارجية‬، ‫ والتخلص من الكوليسترول‬، ‫ملح الصفراء‬

.)‫ والتجمع المشترك‬، ‫ والتجمع الذاتي‬، ‫ وبعض خصائص سطح الخلية (كره الماء‬، ‫ومقاومة الليزوزيم وستة مضادات حيوية‬

.‫ المقاومة‬، ‫ البروبيوتيكية‬، ‫ الالكتوباسيلوس‬، ‫ حليب اإلبل‬، ‫ البكتيريا حمض الكتيك‬: ‫الكلمات المفتاحية‬

Résumée

Cette étude a conduit à l’isolement et l’identification de vingt-huit (23) souches de bactéries lactiques à
partir du lait de chamelle. Les isolats était de forme bâtonnets, leur identification est aboutis qui sont à le
genres: Lactobacillus ,on concentre sur l’espèces de Lb. plantarum . Le but de cette étude est l’évaluation de
quelques caractères probiotiques et propriétés physiologiques ; indiquent que les isolats présentent un bon
pouvoir protéolytique, et lipolytique, tolérance aux l’acidité et à la bile, capacité de hydrolyser les sel biliaire,
élimination du cholestérol, production d'exopolysaccharides (EPS), absence d’activité hémolytique et une fortes
activités antimicrobien , résistance au lysozyme et six antibiotiques, et quelques propriétés de surface cellulaire
(hydrophobicité, autoagrégation, co-agrégation).

Mots clés : bactéries lactiques, lait de chamelle, Lactobacillus, probiotiques, résistance.

Abstract

This study led to the isolation and identification of twenty-eight (23) strains of lactic acid bacteria from
camel milk. The isolates were rod shaped, their identification is about the genera: Lactobacillus, we focus on the
species of Lb. plantarum. The aim of this study is the evaluation of some probiotics characters and physiological
properties; that the indicating solates exhibit good proteolysis’ and lipolytic power, tolerance to acidity and bile,
ability to hydrolyze bile salt, elimination of cholesterol, production of exopolysaccharides (EPS), absence of
hemolytic activity and strong antimicrobial activities, resistance to lysozyme and six antibiotics, and some cell
surface properties (hydrophobicity, auto-aggregation, co-aggregation).

Key words: lactic acid bacteria, camel milk, Lactobacillus, probiotics, resistance.