KRomatografi Cair

KROMATOGRAFI CAIR
Disusun Oleh :
Jimmy Chan Wei Kit
260110132003
Vikneswaran Mutayah 260110132004
Pavin Subramaniam
260110132009
DEFINISI
Kromatografadalah suatu teknik
pemisahan molekul berdasarkan
perbedaan pola pergerakan antara fase
gerak dan fase diam untuk memisahkan
komponen (berupa molekul) yang berada
pada larutan. Molekul yang terlarut dalam
fase gerak, akan melewati kolom yang
merupakan fase diam.
Mekanisme pemisahan secara adsorpsi

Kompetisi terjadinya ikatan hidrogen
H
H
H
H
C O
H
C O
H
O
H
O
OH OH
O
O
O
O
O
O
O
Si
Si
Si
Si
Si
Si
O
O
O O
OH
OH
Mekanisme secara partisi
[ HB ] f ase atas
KD = ---------[ HB ] f ase bawah
Misalkan :
KD = 1
LIQUID
MOBILE PHASE
FORMAT
Liquid-Liquid
Chromatography
(Partition)
STATIONARY
PHASE
Normal Phase
Mobile Phase Nonpolar
Stationary phase Polar
Liquid
Reverse Phase
Mobile Phase Polar
Stationary phase Nonpolar
Liquid-Solid
Chromatography
(Adsorption)
Solid
Normal Phase
Reverse Phase
Pelarut organik yang sering digunakan sebagai fase gerak

(deret eluotropik)
non polar
Parafin cair
Petroleum eter
Sikloheksana
Karbon tetraklorida
Benzena
Toluena
Kloroform
Dietileter
Etilasetat
Aseton
n-propanol
etanol
asetonitril
methanol
polar
air
Fase diam
Silika
Silika gel tanpa pengikat (silika gel H dan N)
Silika gel dengan pengikat (silika gel G)
Silica gel dengan pengikat dan zat berfluoresensi (GF)
Slika gel untuk kolom kromatografi (preparatif)
OH
Si
Alumina
Si
OH
Si
OH OH
O
O
O
O
Al
Al
Al
CH2OH
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
CH2OH
CH2OH
OH
OH
OH
OH
OH
Si
O
OH
CH2OH
selulosa
OH
JENIS KROMATOGRAFI CAIR
HPLC (High Performance Liquid

Chromatography)
LLC (Liquid Liquid Chromatography)
LSC (Liquid Solid Chromatography)
LIQUID LIQUID CHROMATOGRAPHY (LLC)
LLC adalah kromatografi pembagian

dimana partisi terjadi antara fase gerak
dan fase diam yang kedua-duanya zat
cair.
Fase diam tidak boleh larut dalam fase
gerak.
Umumnya: - fase diam = air
- fase gerak = pelarut organik
LIQUID SOLID CHROMATOGRAPHY (LSC)
LSC adalah kromatografi penyerapan.

Sebagai adsorben digunakan silika gel,
alumina, penyaring molekul atau gelas
berpori dipak dalam sebuah kolom
dimana komponen-komponen campuran
dipisahkan dengan adanya fase gerak.
Kromatografi kolom dan kromatografi
lapis tipis (TLC) merupakan teknik
pemisahan yang masuk golongan ini.
HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

(HPLC)
HPLC adalah singkatan dari High Performance Liquid

Chromatography,
yaitu
alat
yang
berfungsi
mendorong analit melalui sebuah kolom dari fase
diam ( yaitu sebuah tube dengan partikel bulat kecil
dengan
permukaan
kimia
tertentu)
dengan
memompa cairan (fase bergerak) pada tekanan tinggi
melalui kolom.
Prinsip : ketika suatu sampel yang akan diuji
diinjeksikan ke dalam kolom maka sampel tersebut
kemudian akan terurai dan terpisah menjadi senyawasenyawa kimia ( analit ) sesuai dengan perbedaan
afinitasnya.
Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi

lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi
untuk mendorong fasa gerak.
Campuran
analit
akan
terpisah
berdasarkan
kepolarannya dan kecepatannya untuk sampai
kedektetor (waktu retensinya) akan berbeda, hal ini
akan teramati pada spectrum yang puncak-puncaknya
terpisah.
Ukuran skala polaritas : golongan fluorocarbon <
golongan hidrokarbon < senyawa terhalogenasi <
golongan eter < golongan ester < golongan keton <
golongan alcohol < golongan asam.
INSTRUMEN HPLC
Fase gerak (eluen)berupa zat cair. Fase gerak selain sebagai pembawa senyawa
campuran menuju detektor, fase gerak juga dapat berinteraksi dengan solut-solut.
Pompadianalogikan sebagai jantung, berfungsi mengalirkan fase gerak cair
melalui kolom.
Injektormerupakan tempat masuknya sampel. Sampel yang dimasukkan ke dalam
HPLC hanya beberapa puluh mikroliter. adakalanya injektor merupakan suatu
sistem autosampler.
KolomHPLC berisi fase diam, tempat terjadinya pemisahan campuran menjadi
komponen-komponennya. Biasanya berukuran antara 5-30 cm dan diameter dalam
berkisar antara 4-10 mm. Jenis kolom bervariasi bergantung keperluan, misalnya
dikenal kolom C-18, C-8, cyanopropyl, penukar ion. Yang paling banyak dipakai
adalah kolom C-8 dan C-18. Saat ini yang baru diperkenalkan adalah kolom HILIC
(Hidrophilic Interactive Liquid Chromatography)
Detektordenganpersyaratan untuk detektor antara lain harus cukup sensitif,
stabilitas dan keterulangannya tinggi, respon terhadap sampel linier, waktu respon
pendek sehingga tidak tergantung pada kecepatan alir, reliabilitas tinggi, mudah
digunakan serta tidak merusak sampel.
PURPOSE OF CHROMATOGRAPHY
Analytical
Determine
sample.
chemical
composition
of
Preparative
Used to purify sufficient quantities of a

substance.
COMMONLY USED DETECTORS IN HPLC
Ultraviolet
This type of detector responds to substances that

absorbs light
Mainly to separate and identify the principle active
compound of mixture.
The most versatile, having the best sensitivity and
linearity.
Cannot be used for testing substances that are low in
chromophores (colorless or virtually colorless) as they
cannot absorb light at low range.
They are cost-effective and popular and are widely
used in industry.
REFRACTIVE INDEX (RI) DETECTION
The refractive index (RI) detector uses a

monochromator and is the least
sensitive LC detectors.
The detector is extremely used for
detecting those compound that are nonionic, do not absorb ultraviolet, and do
not fluorescence.
Example: sugar, alchohol, fatty acid and
polymers.
INSTRUMENTS

KRomatografi Cair

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

KRomatografi Cair

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

KRomatografi Cair

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

KROMATOGRAFI CAIR

Mekanisme pemisahan secara adsorpsi

Mekanisme secara partisi

Pelarut organik yang sering digunakan sebagai fase gerak

JENIS KROMATOGRAFI CAIR

HPLC (High Performance Liquid

LIQUID LIQUID CHROMATOGRAPHY (LLC)

LLC adalah kromatografi pembagian

LIQUID SOLID CHROMATOGRAPHY (LSC)

LSC adalah kromatografi penyerapan.

HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

HPLC adalah singkatan dari High Performance Liquid

Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi

Used to purify sufficient quantities of a

COMMONLY USED DETECTORS IN HPLC

This type of detector responds to substances that

REFRACTIVE INDEX (RI) DETECTION

The refractive index (RI) detector uses a

Anda mungkin juga menyukai