Location via proxy:   [ UP ]  
[Report a bug]   [Manage cookies]                
Scribd Logo
Unggah

Selamat datang di Scribd!

  • 39 tayangan

    Isolasi Dna Plasmid

    Diunggah oleh

    Destiana Candra W
    Dokumen ini membahas tentang isolasi DNA plasmid dari bakteri. Metode yang digunakan adalah lysis alkali yang melibatkan penggunaan larutan lisis dan netralisasi untuk memecah sel bakteri dan memperoleh DNA plasmid. Langkah-langkahnya meliputi pengendapan sel bakteri, lisis sel dengan larutan NaOH dan SDS, netralisasi dengan larutan Kalium Asetat, dan pemurnian DNA plasmid.

    Hak Cipta:

    © All Rights Reserved
    Unduh sebagai RTF, PDF, TXT atau baca online dari Scribd

    Isolasi Dna Plasmid

    Diunggah oleh

    Destiana Candra W
    39 tayangan4 halaman
    Dokumen ini membahas tentang isolasi DNA plasmid dari bakteri. Metode yang digunakan adalah lysis alkali yang melibatkan penggunaan larutan lisis dan netralisasi untuk memecah sel bakteri dan memperoleh DNA plasmid. Langkah-langkahnya meliputi pengendapan sel bakteri, lisis sel dengan larutan NaOH dan SDS, netralisasi dengan larutan Kalium Asetat, dan pemurnian DNA plasmid.

    Judul Asli

    35566008-Isolasi-Dna-Plasmid.rtf

    Hak Cipta

    © © All Rights Reserved

    Format Tersedia

    RTF, PDF, TXT atau baca online dari Scribd

    Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

    Apakah konten ini tidak pantas?

    Dokumen ini membahas tentang isolasi DNA plasmid dari bakteri. Metode yang digunakan adalah lysis alkali yang melibatkan penggunaan larutan lisis dan netralisasi untuk memecah sel bakteri dan memperoleh DNA plasmid. Langkah-langkahnya meliputi pengendapan sel bakteri, lisis sel dengan larutan NaOH dan SDS, netralisasi dengan larutan Kalium Asetat, dan pemurnian DNA plasmid.

    Hak Cipta:

    © All Rights Reserved
    Unduh sebagai RTF, PDF, TXT atau baca online dari Scribd
    Unduh sebagai rtf, pdf, atau txt
    39 tayangan4 halaman

    Isolasi Dna Plasmid

    Diunggah oleh

    Destiana Candra W
    Dokumen ini membahas tentang isolasi DNA plasmid dari bakteri. Metode yang digunakan adalah lysis alkali yang melibatkan penggunaan larutan lisis dan netralisasi untuk memecah sel bakteri dan memperoleh DNA plasmid. Langkah-langkahnya meliputi pengendapan sel bakteri, lisis sel dengan larutan NaOH dan SDS, netralisasi dengan larutan Kalium Asetat, dan pemurnian DNA plasmid.

    Hak Cipta:

    © All Rights Reserved
    Unduh sebagai RTF, PDF, TXT atau baca online dari Scribd
    Unduh sebagai rtf, pdf, atau txt
    dari 4

    ISOLASI DNA PLASMID

    A. Tujuan

    B. Dasar teori

    Plasmid merupakan DNA ekstrakromosom yang berbentuk sirkuler double helix


    dengan ukuran relatif kecil antara 1 kb sampai lebih dari 200 kb terdapat di dalam sel
    prokariot, khususnya bakteri. Pada bakteri jumlah plasmid yang dimiliki bervariasi bahkan
    sampai ribuan ataupun tidak memiliki plasmid. Plasmid mampu bereplikasi secara otonom,
    tidak tergantung pada replikasi kromosom, tetapi ada beberapa plasmid yang replikasinya
    mengikuti kromosom. Plasmid memberikan sifat istimewa yang dimiliki oleh bakteri tersebut
    misalnya resistensi terhadap antibiotik.

    Berdasarkan fungsinya plasmid dapat dikelompokkan menjadi:

    1. Fertility-F-plasmids, merupakan plasmid yang dapat ditransfer dari satu


    sel ke sel akteri lain untuk proses konjugasi
    2. Resistance-(R)plasmids, mengandung gen yang resisten terhadap
    antibiotik atau racun.
    3. Col-plasmid, mengandung gen yang mengkode protein (bakterosin) yang
    dapat membunuh bakteri lain
    4. Degradative plasmids, yang mampu mencerna subsansi yang tidak biasa,
    contoh toluen dan asam salisilat.
    5. Virulence plasmids, yang menjadikan bakteri tersebut patogen

    Plasmid memiliki fungsi yang dapat dimanfaatkan keuntungannya, misalnya plasmid


    dalam rekayasa genetika, plasmid digunakan sebagai vektor untuk kloning DNA. Selain itu
    plasmid juga banyak digunakan untuk perbanyakan jumlah DNA tertentu sehingga bisa
    mengekspresikan gen tertentu. Salah satu usaha untuk mendapatkan keuntungan dari plasmid
    tersebut adalah dengan cara mengisolasi DNA plasmid. Terdapat beberapa cara yang
    digunakan untuk mengisolasi plasmid tersebut. Plasmid yang diisolasi biasanya berasal dari
    bakteri. Proses ini dikenal sebagai proses mini preparation karena jumlahnya hanya sekitar 1-
    20g. Sedangkan untuk jumlah yang lebih besar (100-200g) digunakan midi preparation dan
    maxi preparation untuk jumlah yang lebih besar dari 200 g.

    Inti dari isolasi plasmid bakteri adalah menghancurkan membran sel sehingga semua
    organel sel dapat keluar. Sehingga didapatkan DNA kromosomal serta DNA
    ekstrakromosmal (plasmid). Untuk memperoleh plasmid saja harus dilakukan pemurnian dari
    debris membran sel, organel sel, dan pengotor lainnya. Metode yang digunakan untuk isolasi
    plasmid, yaitu boiling lysis, lysis with detergent, mechanical lysis, alkaline lysis, dan
    enzimatic digestion.

    C. Alat dan bahan

    1. Alat:

    a. Tabung eppendorf 15 ml dan 1,5

    b. Micropippette dan tip

    c. Microcentrifuge

    d. Vortex

    e. Oven

    2. Bahan:

    a. 10 ml Kultur bakteri.

    b. Larutan suspensi sel ( larutan A, 50 mM Tris-HCl, 10 EDTA)

    c. Larutan lisis ( Larutan B, 0,2 M NaOH, 1% SDS)

    d. Larutan netralisasi ( Larutan C, 1,32 M Kalium Asetat pH 4,8)

    e. Phenol : chloroform : isoamilakholhol = 25: 24 : 1

    f. Sodium asetat 3 M

    g. Ethanol absolute
    h. Etanol 70%

    i. Aquadest steril

    D. Cara kerja

    Mengambil 10 ml hasil kultur bakteri dalam tabung eppendorf

    Mengendapkan bakteri dengan microcentrifuge dengan kecepatan 3500


    rpm selama 5 menit

    Memisahkan supernatant dan pellet dengan cara membuang supernatan

    Menambahkan larutan A 2 ml dalam tabung yang berisi pelet

    Melarutkan pellet dengan larutan A 2 ml dengan cara di Vortex

    Menambahkan larutan B, dan dibolak-balik 3-4 kali

    Menambahkan larutan C, dan di bolak balik 3-4 kali

    Mengendapkan bakteri dengan microcentrifuge dengan kecepatan 3500


    rpm selama 15 menit

    Memisahkan supernatant dan pellet dengan cara membuang pelet


    Mengambil 3-4 ml supernatant dan menginkubasi selama semalam

    E. Hasil dan pembahasan

    F. Kesimpulan

    G. Pustaka

    Anda mungkin juga menyukai