LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

TUGAS 7

Fraksinasi dengan Kromatografi Kolom

(Ekstrak Psidium guajava)

Disusun Oleh :

Nama : Farinadya Insyafiatul M.

NIM : 201510410311195
Kelas : Farmasi E
Kelompok :3

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
1. Tujuan Umum
Mahasiswa mampu melakukan fraksinasi suatu ekstrak menggunakan kromatografi
kolom.
2. Tinjauan Tanaman
- Klasifikasi
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Myrtales
Famili :Myrtaceae
Genus :Psidium
Spesies :Psidium guajava Linn( Parimin, 2005).
Psidium guajava

- Morfologi dan Karakteristik Jambu Biji

Jambu biji berasal dari Amerika tropik, tumbuh pada tanah yang gembur maupun liat,
pada tempat terbuka, dan mengandung air yang cukup banyak.Tanaman jambu biji
(Psidium guajava L.) ditemukan pada ketinggian 1 m sampai 1.200 m dari permukaan
laut.Jambu biji berbunga sepanjang tahun.Perdu atau pohon kecil, tinggi 2 m sampai 10 m,
percabangan banyak.Batangnya berkayu, keras, kulit batang licin, berwarna coklat
kehijauan (Anggraini, 2010).
Jambu biji tersebar meluas sampai ke Asia Tenggara termasuk Indonesia, sampai Asia
Selatan, India dan Sri Lanka.Jumlah dan jenis tanaman ini cukup banyak, diperkirakan
kini ada sekitar 150 spesies di dunia.Tanaman ini mudah dijumpai di seluruh daerah tropis
dan subtropis.Seringkali ditanam di pekarangan rumah.Tanaman ini sangat adaptif dan
dapat tumbuh tanpa pemeliharaan. Di Jawa sering ditanam sebagai tanaman buah, sangat
sering hidup alamiah di tepi hutan dan padang rumput (Nurazizah, 2008).
- Morfologi Daun Jambu Biji
Daun jambu biji tergolong daun tidak lengkap karena hanya terdiri dari tangkai
(Petiolus) dan helaian (Lamina) saja yang disebut daun bertangkai. Dilihat dari letak
bagian terlebarnya pada daunnya bagian terlebar daun jambu biji berada ditengah-tengah
dan memiliki bagian jorong karena perbandingan panjang : lebarnya adalah 1,5 - 2 : 1 (13 -
15 : 5,6 - 6 Cm). Daun jambu biji memiliki tulang daun yang menyirip yang mana daun ini
memiliki 1 ibu tulang yang berjalan dari pangkal ke ujung dan merupakan terusan tangkai
daun dari ibu tulang ke samping,keluar tulang-tulang cabang, sehingga susunannya
mengingatkan kita pada susunan sirip ikan. Jambu biji memiliki ujung daun yang tumpul,
pada umumnya warna daun bagian atas tampak lebih hijau jika dibandingkan sisi bawah
daun.Tangkai daun berbentuk selindris dan tidak menebal pada bagian tangkainya (Ayuni,
2012).
- Kandungan Kimia Daun Jambu Biji
Daun jambu biji memiliki kandungan flavonoid yang sangat tinggi, terutama
quercetin. Senyawa tersebut bermanfaat sebagai antibakteri, kandungan pada daun Jambu
biji lainnya seperti saponin, minyak atsiri, tanin, anti mutagenic, flavonoid, dan alkaloid.6
Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari dari 15 atom karbon yang umumnya tersebar di
dunia tumbuhan. Quercetin adalah zat sejenis flavonoid yang ditemukan dalam buah-
buahan, sayuran, daun dan biji- bijian.Hal ini juga dapat digunakan sebagai bahan dalam
suplemen, minuman atau makanan (Anonim, 2013).
- Manfaat Daun Jambu Biji
Daun jambu biji ternyata memiliki khasiat tersendiri bagi tubuh kita, baik untuk
kesehatan ataupun untuk obat penyakit tertentu.Dalam penelitian yang telah dilakukan
ternyata daun jambu biji memiliki kandungan yang banyak bermanfaat bagi tubuh
kita.Diantaranya, anti inflamasi, anti mutagenik, anti mikroba dan analgesic (Dalimartha,
2000).
Pada umumnya daun jambu biji (P. Guajava L.) digunakan untuk pengobatan seperti
diare akut dan kronis, perut kembung pada bayi dan anak, kadar kolesterol darah meninggi,
sering buang air kecil, luka, sariawan, larutan kumur atau sakit gigi dan demam berdarah
(Arianingrum, 2013).
3. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan penyari simplisia
menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung. Ekstrak kering
harus mudah digerus menjadi serbuk (BPOM RI, 2010).
Cairan penyari:
Sebagai cairan penyari digunakan air, eter, etanol, atau campuran etanol dan air
(BPOM RI, 2010).
Pembuatan:
Penyarian:
Penyarian simplisia dengan cara maserasi, perkolasi atau penyeduhan dengan air
mendidih. Penyarian dengan campuran etanol dan air dilakukan dengan cara maserasi atau
perkolasi. Penyarian dengan eter dilakukan dengan cara perkolasi (BPOM RI, 2010).
Maserasi:
 Lakukan maserasi menurut cara yang tertera pada Tinctura. Suling atau uapkan
0maserat pada tekanan rendah pada suhu tidak lebih dari 50C hingga konsistensi yang
dikehendaki (BPOM RI, 2010).
Perkolasi:
Lakukan perkolasi menurut cara yang tertera pada Tinctura. Setelah perkolator ditutup
dan dibiarkan selama 24 jam, biarkan cairan menetes, tuangi massa dengan cairan penyari
hingga jika 500 mg perkolat yang keluar terakhir diuapkan tidak meninggalkan sisa.
0Perkolat disuling atau diuapkan dengan tekanan rendah pada suhu tidak lebih dari 50C
hingga konsistensi yang dikehendaki. Pada pembuatan ekstrak cair, 0,8 bagian perkolat
pertama dipisahkan, perkolat selanjutnya diuapkan hingga 0,2 bagian, campur dengan
perkolat pertama. Pembuatan ekstrak cair dengan penyari etanol, dapat juga dilakukan
dengan cara reperkolasi tanpa menggunakan panas (BPOM RI, 2010).
Ekstrak yang diperoleh dengan penyari air:
0Hangatkan segera pada suhu lebih kurang 90C, enapkan, serkai. Uapkan serkaian pada
0tekanan rendah pada suhu tidak lebih dari 50C hingga bobot sama dengan bobot simplisia
yang digunakan. Enapkan ditempat sejuk selama 24 jam, serkai uapkan pada tekanan
0rendah pada suhu tidak lebih dari 50C hingga konsistensi yang dikehendaki (BPOM RI,
2010).
Ekstrak (air dengan penyari etanol):
Hasil akhir harus dibiarkan ditempat sejuk selama 1 bulan, kemudian disaring
sambilmencegah penguapan (BPOM RI, 2010).
4. Golongan senyawa

A. Polifenol
Salah satu kelompok senyawa yang banyak memberikan manfaat bagi manusiaadalah
polifenol.Senyawa yang termasuk kedalampolifenol ini adalah semua senyawa yang memiliki
struktur dasar berupa fenol.Polifenol adalahkelompok zat kimia yang ditemukan pada
tumbuhan.Zat ini memiliki tanda khas yakni memilikibanyak gugus fenol dalam molekulnya.
Fenol sendiri merupkan struktur yangterbentuk dari benzenatersubtitusi dengan gugus –OH.
Gugus –OH yang terkandungmerupakan aktivator yang kuat dalamreaksi subtitusi aromatik
elektrofilik (Fessenden,1982).
FenolPolifenol dapat diklasifikasikan menjadi beberpa jenis berdasarkan unit
basanya(Wikipedia.com)antara lain Asam Galia, Asam Sinamat, dan Flavon. Selain itu
senyawa-senyawa polifenol jikaberdasarkan komponen penyusun fenolnya dapat dibagi
menjadiFenol, pyrocatechol, pirogallol,resorsinol, floroglucinol, dan hidroquinon.
- Klasifikasi PolifenolBerdasarkan Unit basa.
Polifenol jika diklasifikasikan berdasarkan unit basanya di bagimenjadi3 kelompok
besar yaitu asam galic, polivenol, Flavon, asam sinamat.
1. Asam Galic
Senyawa ini memiliki struktur benzen yang tersubtitusi dengan 3 gugus –OH dan satu
gugus Karboksilat. Contohnya seperti jenis hydrolyzabletannins yang merupakan jenis
tanin yangdapat larut di dalam airmembentuk asam gallic dan asam protocatechuic dan
gula. Contoh jenisini adalah gallotanin (Anonim, 2009).

Senyawa ini tidak terlalu berperan didalam tumbuhan tetapi cukupmemberikan

sumbanganmanfaat bagi manusia khususnya dalam bidangkesehatan. Senyawa jenis
ini telah diteliti dapatmenghambat tumor, anti-virus, anti oksidasi, anti deabetes
(Hayashi et.al. 2002) dan anti cacing(Moriet.al, 2000).

2. Flavon.
Jenis polifenol ini yang paling banyak terdapat dialam. Contoh senyawa ini
adalahepicatechin dan epigalocatechin, senyawaini terkandung di dalam teh yang
memiliki fungsisebagai antioksidan.epicatechin epigalocatechin
3. Asam sinamat
Senyawa jenis ini memliki struktur umumasam sinamat. Salah satu contoh jenis ini
adalah lignin. Lignin banyak terdapat pada tumbuhan sebagaipenyusun dinding sel.
Senyawa ini berupa polimer yang memiliki struktur kompleks dan beratmolekul lebih
dari 10.000 monomer pada lignin disebut monolignols.
B. Tanin
Tannin merupakan salah satu contoh senyawa polifenol.Tannin terdapat luas dalam
tumbuhan berpembuluh dan terdapat khsus dalam jaringan kayu pada angiospermae.Secara
kimia terdapat dua jenis tannin, yaitu tannin-terkondensasi atau flavolan dan tannin
terhidrolisiskan.
 Struktur Proanthocyanidin (golongan tannin)

Tannin-terkondensasi terdapat dalam paku-pakuan, gymnospermae, dan

angiospermae.Sedangkan tannin terhidrolisiskan penyebarannya terbatas pada
tumbuhan berkeping dua (Harborne, 1987).Tannin seringkali dilaporkan sebagai
mikromolekul yang mengganggu bioassay dan seringkali berikatan tidak spesifik pada
berbagai protein termasuk beragai jenis reseptor sehingga menjadi sukar larut
air.Namun, beberapa aktivitas cukup penting juga dilaporkan pada tannin, yaitu dapat
menghambat, menghentikan pedarahan.

Tannin mampu membuat lapisan pelindung luka dan ginjal. Kemampuan mengikat ion
besi dengan menghasilkan warna larutan biru kehitaman atau hijau kehitaman menjadi
dasar analisis kualitatif tannin terhidrolisis atau tannin galat (Saifudin dkk., 2011).
Tannin dapat pula dideteksi dengan sinar UV pendek berupa bercak lembayung yang
bereaksi positif dengan setiap pereaksi fenol baku (Harborne, 1987).
C. Alkaloid
Adalahsuatugolongansenyawa yangtersebarluas hamper
padasemuajenistumbuhan. Semua alkaloid mengandung paling sedikitsatu atom
nitrogen yang biasanyabersifatbasadanmembentukcincinheterosiklik (Harborne,
1984).
Alkaloid dapatditemukanpadabiji, daun, ranting dankulitkayudaritumbuh-
tumbuhan.Kadar alkaloid daritumbuhandapatmencapai 10-15%.Alkaloid
kebanyakanbersifatracun, tetapiada pula yang sangatbergunadalampengobatan.
Alkaloid merupakansenyawatanpawarna, sering kali bersifat optic aktif,
 kebanyakanberbentuk Kristal tetapihanyasedikit yang berupacairan (misalnyanikotin)
padasuhukamar (Sabirin, et al.,1994).
Suatucaramengklasifikasi alkaloid adalahdidasarkanpadajeniscincinheterosiklik
nitrogen yang terikat. Menurutklasifikasiini alkaloid dibedakanmenjadi ;pirolidin,
piperidin, isoquinolin, quinolin, danindol..
D. Flavonoid
Flavonoid adalah kelompok senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam
terutama pada jaringan tumbuhan tinggi. Senyawa ini merupakan produk metabolik
sekunder yang terjadi dari sel dan terakumulasi dari tubuh tumbuhan sebagai zat racun
(Robinson, 1991).
Senyawa flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon dalam inti dasarnya yang
tersusun dalam konfigurasi C6 - C3 – C6. Susunan tersebut dapat menghasilkan tiga
struktur yaitu: 1,3-diarilpropana (flavonoid), 1,2-diarilpropana (isoflavonoid), 2,2-
diarilpropana (neoflavonoid).
Menurut Markham (1982), flavonoid merupakan senyawa polar karena
mempunyai gugus hidroksil yang tak tersulih, atau suatu gula, sehingga flavonoid
cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol dan air.Flavonoid
umumnya terikat pada gula sebagai glukosida dan aglikon flavonoid. Uji warna yang
penting dalam larutan alkohol ialah direduksi dengan serbuk Mg dan HCl pekat.
Diantara flavonoid hanya flavalon yang menghasilkan warna merah ceri kuat
(Harborne,1984).
E. Terpenoid
Semua terpenoid berasal dari molekul isoprena, CH2=C(CH3)-CH=CH2 dan
kerangka karbonya dibangun oleh penyambungan dua atau lebih satuan C5 ini.
Walaupun demikian, secara biosintesis senyawa yang berperan adalah isopentil
pirofosfat, CH2=C(CH3)-(CH)2OPP, yang terbentuk dari asetat melalui asam
mevalonat, CH2OHCH2C(OH,CH3)-CH2CH2COOH. Isopentil piropospat terdapat
dalam sel hidup dan berkesinambungan dengan isomernya dimetilalil piropospat,
(CH3)2C=CHCH2OPP.
Berdasarkan kenyataan ini, terpenoid dikelompokan dalam 5 bagian:
 Monoterpen terdiri dari dua unit C5 atau 10 atam karbon.
 Siskuisterpen terdiri dari tiga unit C5 atau 15 atom karbon
 Diterpen terdiri dari empat unit C5 atau 20 atom karbon
 Triterpen terdiri dari enam unit C5 atau 30 atom karbon
 Tetraterpen terdiri dari delapan unit C5 atau 40 atom karbon
Secara kimia, terpenoid umumnya larut dalam lemak dan terdapat didalam
sitoplasma sel tumbuhan. Biasanya diekstraksi memakai petrolium eter, eter atau
 kloroform dan dapat dipisahkan secara kromatografi pada silika gel dengan pelarut
ini (Harborne,1987).
Steroid adalah terpenoid yang kerangka dasarnya terbentuk dari sistem cincin
siklopentana prehidrofenantrena. Steroid merupakan golongan senyawa metabolik
sekunder yang banyak dimanfaatkan sebagai obat. Hormon steroid pada umumnya
diperoleh dari senyawa-senyawa steroid alam terutama dalam tumbuhan (Djamal,
1988).
Menurut Harborne (1984), saponin adalah glikosida triterpen dan sterol. Saponin
merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi
berdasarkan kemampuannya membentuk busa yang stabil dalam air dan
menghomolisis sel darah merah. Dari segi pemanfaatan, saponin sangat ekonomis
sebagai bahan baku pembuatan hormon steroid, tetapi saponin kadang-kadang dapat
menyebabkan keracunan pada ternak (Robinson, 1991).
5. Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan Schraiber pada tahun
1938.KLT merupakan bentuk kromatografi planar, selain kromatografi kertas dan
elektroforesis. Berbeda debgan kromatografi kolom yang mana fase diamnya diisikan atau
dikemas di dalamnya, pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya berupa lapisan yang
seragam(uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, pelat
aluminium atau pelat plastik. Meskipun demikian, kromatografi planar inidapat dikatakan
sebagai bentuk terbuka dari kromatografi kolom (Gandjar,2007).
Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen dalam
campuran, identifikasi senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi, menentukan
efektivitas pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta
memantau kromatografi kolom, melakukan screeningsampel untuk obat (Gandjar,2007).
Analisa kualitatifdengan KLT dapat dilakukan untuk uji identifikasi senyawa baku.
Parameter pada KLT yang digunakan untuk identifikasi adalah nilai Rf. Analisis
kuantitatifdilakukan dengan 2 cara, yaitu mengukur bercak langsung pada lempeng
dengan menggunakan ukuran luas atau dengan teknik densitometry dan cara berikutnya
dalaha dengan mengerok bercak lalu menetapkan kadar senyawa yang terdapat dalam
bercak dengan metode analisis yang lain, misalnya dengan metode spektrofotometri. Dan
untuk analisis preparatif, sampel yang ditotolkan dalam lempeng dengan lapisan yang
besar lalu dikembangkan dan dideteksi dengan cara yang non-dekstruktif. Bercak yang
mengandung analit yang dituju selanjutnya dikerok dan dilakukan analisis lanjutan
(Gandjar,2007).
 Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan
diameter partikel antara 10-30 μm. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan
semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal
efisiensi dan resolusinya.Penjerap yang paling sering digunakan adalah silica dan serbuk
selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada KLT adalah adsorpsidan partisi
(Gandjar,2007).
Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-
coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah
campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah
diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal.
Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak :
 Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif.
 Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf
terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.
 Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silica gel,
polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solute yang
berarti juga menentukan nilai Rf.
 Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non
polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara signifikan.Solut-solut
ionik dan solute-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebagai fase
geraknya, seperti campuran air dan methanol dengan perbandingan tertentu.
Penambahan sedikit asam etanoat atau ammonia masing-masing akan meningkatkan
solute-solut yang bersifat basa dan asam (Gandjar,2007).
Dalam KLT tedapat factor resistensi (Rf) yang dirumuskan sebagai berikut :

Nilai Rf sangat karakteristik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut
dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel.
Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran yang rendah,
begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat polar. Senyawa yang
polar akan tertahan kuat pada fasa diam, sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah. Rf
KLT yang bagus berkisar antara 0,2-0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan
adalah mengurangi kepolaran eluen. Sebaliknya jika Rf terlalu rendah, maka kepolaran
eluen harus ditambah.
 Faktor yang mempengaruhi harga Rf adalah (Stahl,1985) :
a. Ukuran partikel pada adsorben
b. Derajat keaktifan dari lapisan penjerap
c. Ketetapan perbandingan dari eluen
d. Konsentrasi zat yang dipanaskan
e. Kejenuhan chamber
f. Diameter penotol
g. Tehnik percobaan
h. Suhu
i. Keseimbangan
j. Jumlah cuplikan yang digunakan
k. Tebal dan kerataan dari lapisan penjerap
l. Pelarut
m. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan
n. Dan lain-lain
Cara menggunakan KLT :
1. Potong plat sesuai ukuran. Biasanya, untuk satu spot menggunakan plat selebar 1 cm.
berarti jika menguji 3 sampel (3 spot) berarti menggunakan plat selebar 3 cm.
2. Buat garis dasar (base line) dibagian bawah, sekitar 0,5 cm dari ujung bawah plat,
dan garis akhir di bagian atas.
3. Menggunakan pipa kapiler, totolkan sampel cairan yang telah disiapkan sejajar, tepat
di atas base line. Jika sampel padat, larutkan pada pelarut tertentu. Keringkan totolan.
4. Dengan pipet yang berbeda, masukkan masing-masing eluen ke dalam chamber dan
campurkan.
5. Tempatkan plat pada chamber berisi eluen. Base line jangan sampai tercelup oleh
eluen. Tutuplah chamber.
6. Tunggu eluen mengelusi sampel sampai mencapai garis akhir, di sana pemisahan
akan terlihat
7. Setelah mencapai garis akhir, angkat plat dengan pinset keringkan dan ukur jarak
spot. Jika spot tidah kelihatan, amati pada lampu UV. Jika masih tak terlihat, semprot
dengan pewarna tertentu seperti kalium kromat, asam sulfat pekat dalam alcohol 96%
atau ninhidrin. Berikut ini adalah gambarnya :

6. Jenis-Jenis lempeng KLT

 Fasa diam dapat digunakan silika gel, alumina dan serbuk selulosa. Partikel
silika gel mengandung gugus hidroksil pada permukaannya yang akan membentuk
ikatan hidrogen dengan molekul polar air. Pada kromatografi lapis tipis, sebuah garis
digambarkan dibagian atas dan bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran
pewarna di tempatkan pada garis yang telah ditentukan.Diberikan penandaan pada
garis dilempengan untuk menunjukkan posisi awal dari tetesan. Jika dilakukan dengan
tinta, pewarna dari tinta akan bergerak selayaknya kromatogram di bentuk (Roy J.
1991).
Alumina (Al2O3) dan silika gel (SiO 2). Alumina lebih polar daripada
silika gel, dan senyawa ini sering dinyatakan lebih aktif daripada silika gel.
Alumina lebih cocok untuk analisis senyawa-senyawa yang nonpolar atau kurang
polar (seperti hidrokarbon, eter, aldehida, keton, dan alkil halida) karena senyawa-
senyawa polar sangat kuat teradsorbsi pada adsorbent ini. Analisis KLT
senyawa-senyawa polar pada alumina umumnya menghasilkan harga Rf yang
rendah dan pemisahan yang minimal. Sebaliknya silika gel dipilih sebagai adsorbent
untuk senyawa-senyawa polar (asam karbokislat, alkohol, amina) karena senyawa-
senyawa non polar teradsorbsi lemah pada silika gel. Analisis KLT senyawa-senyawa
nonpolar pada silika gel umumnya memberikan harga Rf yang tinggi dan pemisahan
yang maksimal (Firdaus. 2011).

7. Polaritas Eluen

 n-heksana = 2.0
Heksana adalah sebuah senyawahidro karbonalkana dengan rumus kimia C6H14
(isomer utama n-heksana memiliki rumus CH3(CH2)4CH3). Awalan heks- merujuk
pada enam karbon atom yang terdapat pada heksana dan akhiran -ana berasal
 dari alkana, yang merujuk pada ikatan tunggal yang menghubungkan atom-atom
karbon tersebut.Senyawa ini beruwujud cairan tak berwarna. Massa Molar 86.18 g
mol−1 . Densitas 0.6548 g/mL
 etil asetat = 6.0
Senyawa organik dengan rumus CH3CH2OC(O)CH3. Senyawa ini
merupakan ester dari etanol dan asam asetat.Senyawa ini berwujud cairan tak
berwarna, memiliki aroma khas. Senyawa ini sering disingkat EtOAc, dengan Et
mewakili gugus etil dan OAc mewakili asetat. Etil asetat diproduksi dalam skala besar
sebagai pelarut, memiliki Mass Molar 88,12 g/mol. Memiliki densitas 0,897 g/cm3
dan titil lebur -83,60C serta titik didih 77,10C (Anonim,2012).
 methanol = 30.0
Senyawa organic dengan rumus molekul CH3OH.Metanol berwujud cairan yang
ringan, mudah menguap, tidak berwarna, mudah terbakar, dan beracun dengan bau
yang khas (berbau lebih ringan daripada etanol).Dengan Massa Molar 32.04 g/mol.
Densitas 0.7918 g/cm³.Titik lebur –97 °C, -142.9 °F (176 K).Titik didih 64.7 °C,
148.4 °F (337.8 K).
semakin tinggi nilai konstanta dielektrik suatu pelarut, maka semakin polar senyawa
pelarut tersebut.
8. Kromatografi Kolom

Kromatografi kolom adalah salah satu metode yang digunakan untuk

pemurnian senyawa dari campuran dengan memakai kolom.Kromatografi kolom
termasuk kromatografi preparatif. Alat utama yang digunakan adalah sebuah tabung
dengan diameter 5-50 mm dan tinggi 5 cm - 1 m. Pada bagian dasar tabung diberi
semacam penyaring dari glass wool untuk menghindari hilangnya fasa diam.
Metode ini memungkinkan untuk melakukan pemisahan suatu sampel yang
berupa campuran dengan berat beberapa gram. Pada prinsipnya kromatografi kolom
adalah suatu teknik pemisahan yang didasarkan pada peristiwa adsorpsi. Sampel yang
biasanya berupa larutan pekat diletakkan pada ujung atas kolom.
Seperti pada umumnya, kromatografi kolom juga memiliki 2 fasa.Fasa gerak
atau eluen adalah campuran cairan murni. Eluen dipilih sedemikian rupa sehingga
faktor retensi senyawa berkisar antara 0,2-0,3 supaya meminimalisasi penggunaan
waktu dan jumlah eluen melewati kolom. Jenis eluen yang digunakan pada
kromatografi kolom dipilih supaya senyawa yang berbeda dapat dipisahkan secara
efektif.Eluen yang digunakan dapat dicoba terlebih dahulu menggunakan kromatografi
lapis tipis. Setelah dirasa cocok, eluen yang sama digunakan untuk mengelusi
komponen dalam kolom. Fasa diam yang digunakan dalam kromatografi kolom adalah
suatu adsorben padat.Biasanya berupa silika gel atau alumina.Dahulu juga sering
digunakan bubuk selulosa.Fasa diam berbentuk serbuk microporous untuk
meningkatkan luas permukaan.
Ada dua metode utama yang digunakan dalam kromatografi kolom, yaitu :
metode kering dan metode basah
 Metode Kering
Pada metode kering, kolom diisi dengan fasa diam kering, diikuti dengan
penambahan fasa gerak yang disiramkan pada kolom sampai benar-benar basah.
 Metode Basah
Pada metode basah, bubur (slurry) disiapkan dengan mencampurkan eluen
pada serbuk fasa diam dan dimasukkan secara hati-hati pada kolom.Dalam
langkah ini harus benar-benar hati-hati supaya tidak ada gelumbung udara.Larutan
senyawa organik dipipet di bagian atas fasa diam, kemudian eluen dituangkan
pelan-pelan melewati kolom.
Kromataografi kolom bekerja dengan menahan komponen tunggal pada fasa
diam berupa adorben karena telah terikat. Ketika eluen dialirkan, maka senyawa akan
melakukan migrasi, terbawa oleh eluen sesuai dengan kesesuaian kepolaran. Masing-
masing senyawa dalam komponen mempunyai kecepatan yang berbeda-beda dalam
melewati kolom. Selama proses berlangsung, akan didapatkan beberapa fraksi.
Masing-masing fraksi kemungkinan mengandung senyawa yang berbeda.Untuk
mengujinya, fraksi hasil kromatografi kolom dapat diamati menggunakan KLT. Fraksi
dengan Rf yang mirip, kemungkinan mengandung senyawa yang sama. Fraksi dapat
diamati lebih lanjut menggunakan spektroskopi.
Komponen tunggal yang ada pada sampel dijerap oleh fase diam yang telah
dibentuk atau biasa digunakan silica gel yang terdapat pada kolom, namun apabila
dialirkan pelarut secara kontinyu maka akan terjadi migrasi senyawa dan senyawa
tersebut terbawa oleh pelarut sesuai dengan polaritasnya. Kecepatan eluasi sebaiknya
dibuat konstan. Jika kecepatan eluasi terlalu kecil maka senyawa-senyawa akan
terdifusi ke dalam eluen dan akan menyebabkan pita makin melebar yang akibatnya
pemisahan tidak dapat berlangsung dengan baik. Apabila kecepatan eluasi terlalu besar
maka pemisahan kurang baik dan tidak berdasarkan tingkat polaritasnya sehingga
akan diperoleh fraksi yang sama dan menyebabkan fase diam cepat menjadi kering
dan dikhawatirkan terjadi cracking. Permukaan adsorben harus benar-benar horizontal,
hal ini dilakukan untuk menghindari terjadinya cacat yang dapat terjadi selama proses
eluasi berjalan.
9. Bahan Dan Alat
1) Ekstrak jambu biji 8) Vial
2) Etanol 9) Pipet
3) Silica gel G60 10) Spatula logam
4) n-Heksana 11) Beaker glass
5) Etil asetat 12) Pipa kapiler
6) Methanol 13) Chamber
7) Kiesel gel 254 14) Aluminium foil

10. Prosedur Kerja

Bagan Alir
 Skema Kerja

Lakukan optimasi eluen dengan uji Siapkan +/- 50 gram silica

KLT terhadap ekstrak dengan gel.
mengganti-ganti eluen sampai
diperoleh pemisahan yg baik.
Eluen tsb akan digunakan untuk
fraksinasi.
 Silika gel dimasukkan
1. Campuran butir 4 tsb
Siapkan eluen dari butir erlenmeyer, kemudian +
dituang dalam kolom ad
1 sebanyak 300ml. sedikit eluen, kocok selama
setinggi 10cm dari atas.
15 menit.

Eluen dialirkan sampai

permukaan 0,5cm
diatas permukaan silica Tuang eluen ke dalam
gel kolom sampai
Timbnag ekstrak 1% dari jumlah silica gel.
Ekstrak ditambah sedikit pelarut
penuh,tutup dg
(metanol/etanol) ad larut dicampur dg alumunium foil, biarkan
silica gel sama banyak diaduk semalam.
menggunakan gelas pengaduk ad kering &
homogen.
Ekstrak yg sudah dikeringkan dengan Penampungan eluen stiap
silica gel, dimasukkan dalam kolom Dilakukan uji KLT tiap kelipatan
vial sebanyak 5ml
( diatas permukaan silica gel),+ eluen 10vial. Fase yang digunakan
kira-kira setinggi 3cm. Eluen sama dengan fase gerak pada
dialirkan/diteteskan sambil dituangi kromatografi kolom.
eluen baru sampai kolom terisi penuh
dg eluen, sementara penetesan tetap
dilakukan. Kecepatan penetesan
diatur.
Penetesan dihentikan bila
Bila uji KLT memberi noda sama,
vial terakhir sudah tidak
maka fraksi dpt digabung. Bila uji
memberikan noda analisis
KLT memberi noda yang berbeda
dg KLT
maka uji KLT dilakukan pada vial
Hasil penggabungan diantaranya.
berdasarkan kemiripan profil
kromatogram,dianalisis dg
teknik KLT dan hitung Rf masing-
masing spot noda.

Dokumentasikan pada UV
254, 365 dan visual

Plat KLT ( no.15) di derivatisasi dg

pereaksi dragendorf,uap
amonia,anisaldehid asam
sulfat,FeCl3, KOH 10%
 Daftar Pustaka
Anonim, Manfaat dan Khasiat Dari Alam. (http://organ1k.blogspot.com/2012/11/kandungan-
daun-jambu-biji.html). (akses pada tanggal 17 Maret 2018).
Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia.Acuan Sediaan Herbal Volume
Pertama Edisi Kedua. 2010. Jakarta : BPOM RI.
Dalimartha, S. 2001. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 2.Nanas. h. 140- 145. Jakarta :
Trubus Agriwidya.

Gandjar, Ibnu Gholib. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar : Yogyakarta

Harborne,J. B., 1987, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern MenganalisisTumbuhan, Edisi
kedua, Hal 5, 69-76, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soedira, ITB
Press, Bandung.

Nety Nurazizah, Isolasi dan Identifikasi Jamur Endofit Dari Daun Jambu Biji (Psidium Guajava
L.) sebagai Anti bakteri Dari Bakteri E.Coli dan Staphylococus Aureus, UIN Malang,
Malang, 2008..

Renata Ayuni, Khasiat Selangit Daun-Daun Ajaib Tumpas Beragam Penyakit, Alaska,
Yogyakarta, 2012. hlm. 130.
Retno AriaNingrum, Pemanfaatan Tumbuhan Jambu biji Sebagai Obat Tradisional, Universitas
Negeri Yogyakarta, Jogjakarta, 2013.
Robinson,T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi VI, Hal 191-216,
Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung.
Stahl, E. 1985.Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, diterjemahkan oleh Kosasih
Padmawinata dan Iwang Soediro, 3-17, ITB: Bandung.
Septia Anggraini, Optimasi Formula Fast Disintegrating Tablet Ekstrak Daun Jambu Biji
(Psidium Guajava L.) Dengan Bahan Penghancur Sodium Starch Glycolate Dan Bahan
Pengisi Manitol, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta, 2010
http://id.wikipedia.org/wiki/Pelarut diakses 29 april 2018
http://www.ilmukimia.org/2013/05/kromatografi-kolom.html diakses 29 April 2018