Location via proxy:   [ UP ]  
[Report a bug]   [Manage cookies]                

Ringkasan Novi

Unduh sebagai docx, pdf, atau txt
Unduh sebagai docx, pdf, atau txt
Anda di halaman 1dari 31

Pengantar

Bab ini membahas dasar-dasar fiksasi, bersama-sisi kelebihan dan kekurangan


spesifik fiksatif. Ini juga menyediakan beberapa rumus untuk fiksatif ini saat ini
digunakan dalam patologi, histol- ogy dan anatomi. Adalah adil untuk mengatakan
bahwa fiksasi yang sesuai jaringan untuk pemeriksaan histologis penting bagi semua tes
histologi, tanpa proses ini semua jaringan akan terdegradasi dan analisis tidak akan
berguna. Itu abad terakhir telah melihat perkembangan berbagai fiksatif, dengan sedikit
modifikasi baru-baru ini. Mekanisme nisme dan prinsip yang dengannya fiksatif
tertentu bertindak jatuh ke dalam beberapa kelompok besar. Ini termasuk penambahan
kovalen dari kelompok reaktif dan tautan silang, dehidrasi, efek asam, pembentukan
garam, dan panas.

Fiksatif senyawa dapat berfungsi menggunakan sev-kesalahan mekanisme ini.


Saat memilih fiksatif ada keseimbangan antara kelebihan dan kekurangan yang mana
setiap fiksatif memiliki. Ini termasuk molekuler perubahan atau kerugian dari jaringan
'tetap', pembengkakan atau penyusutan jaringan, variasi kualitas pewarnaan histokimia
dan imunohistokimia, efek pada analisis biokimia dan kemampuan untuk menjaga
struktur organel seluler.

Tujuan utama fiksasi dalam patologi adalah untuk mempertahankan fitur


morfologi yang jelas dan konsisten tures ( Eltoum et al., 2001a, 2001b; Grizzle et al.,
2001). Perkembangan fiksatif khusus biasanya empiris, meskipun banyak pemahaman-
ing dari mekanisme fiksasi telah didasarkan atas informasi yang diperoleh dari
penyamakan kulit dan produksi vaksin. Untuk memvisualisasikan mikroanatomi bagian
jaringan yang diwarnai, asal hubungan mikroskopis akhir antara sel, sel- komponen
lular (misalnya sitoplasma dan inti) dan bahan ekstraseluler harus dipertahankan
dengan sedikit gangguan pada organisasi jaringan menuntut. Komposisi kimiawi lokal
jaringan juga harus dijaga. Banyak komponen jaringan larut dalam asam air atau
lingkungan cair lainnya ments dan untuk melihat mikroanatomi dan lingkungan mikro
dari jaringan ini bahan larut ponents tidak boleh hilang selama fiksasi dan jaringan
pengolahan. Meminimalkan hilangnya komponen seluler nents yang meliputi protein
besar, peptida kecil, mRNA, DNA dan lipid, mencegah kerusakan struktur makromolekul
seperti sitoplasma selaput, retikulum endoplasma halus, kasar retikulum endoplasma,
membran inti, lyso-somes dan mitokondria. Setiap fiksatif, digabungkan dengan
protokol pemrosesan jaringan, mempertahankan beberapa aspek molekuler dan
makromolekul dari jaringan lebih baik daripada kombinasi fiksatif / pemrosesan
lainnya.

Jika komponen terlarut hilang dari sitoplasma sel, warna sitoplasma pada hematoxylin
dan pewarnaan eosin (H&E) akan dikurangi atau dimodifikasi dan aspek penampilan
mikroanatomi jaringan, misalnya mitokondria, akan hilang atau rusak berumur. Begitu
pula dengan evaluasi imun ohistokimia struktur dan fungsi dapat berkurang atau hilang.
Hampir semua metode fiksasi menyebabkan penyusutan atau pembengkakan,
pengerasan jaringan dan variasi warna dalam berbagai noda histokimia (Sheehan &
Hrapchak , 1980; Horobin, 1982; Fox dkk., 1985; Carson, 1990 ; Kiernan, 1999; O'Leary
& Mason, 2004 ).

Jenis fiksasi
patologi diagnostik, penting bahwa arti- fakta konsisten, dapat diprediksi dan dipahami.
Tindakan fiksatif yang dipilih dengan meminimalkan kerugian atau kerusakan
enzimatik seluler dan ekstraseluler molekul, mempertahankan struktur makromolekul
dan melindungi jaringan dari kerusakan oleh mikroor-ganisme. Ini menghasilkan satu
tampilan yang dinamis berubah, jaringan yang layak ( Grizzle et al., 2001 ).

Fiksatif tidak hanya berinteraksi pada awalnya dengan jaringan di lingkungan


berairnya tetapi juga terus berlanjut reaktivitas dengan fiksatif yang tidak bereaksi dan
bahan kimia jaringan yang diubah secara berkala. Fiksasi berinteraksi dengan semua
fase pemrosesan dan pewarnaan dari dehidrasi untuk pewarnaan bagian jaringan
menggunakan histokimia, noda enzimatik atau imunohistokimia (Eltoum dkk., 2001b;
Rait et al., 2004 ). Ini berarti bahwa apapun bagian jaringan bernoda, diproduksi setelah
fiksasi spesifiktion dikombinasikan dengan pemrosesan jaringan, adalah kompromi-
mise dari perubahan jaringan tetap yang terbentuk dari alam jaringan hidup.

Sampai saat ini, fiksatif universal atau ideal belum ada teridentifikasi. Oleh
karena itu, fiksatif dipilih berdasarkan pada kemampuan mereka untuk menghasilkan
produk akhir yang dibutuhkan untuk mendemonstrasikan fitur spesifik dari jaringan
tertentu (Grizzle dkk., 2001). Dalam patologi diagnostik, fiksatif pilihan bagi sebagian
besar ahli patologi telah 10% formalin dengan buffer netral ( Grizzle et al., 2001).

Kendala penting dalam menggunakan formaldehyde telah hilangnya antigen


imunorekognisi karena untuk jenis fiksasi ini dikombinasikan dengan pemrosesan tisu
ke lilin parafin (Eltoum et al., 2001a, 2001b ). Namun, dari perspektif klinis munculnya
metode pengambilan epitop yang diinduksi panas, dihasut pada awal 1990-an, banyak
yang telah diatasi batasan (Shi et al., 1991).

Ciri terpenting dari fiksatif adalah untuk mendukung kualitas tinggi dan
pewarnaan yang konsisten H&E, baik pada awalnya maupun setelah penyimpanan
parafin blok selama setidaknya satu dekade, meskipun pedoman baru di Inggris Raya
merekomendasikan bahwa paraf- Balok yang diproses sirip sekarang disimpan selama
30 tahun. Itu fiksatif harus memiliki kemampuan mencegah pendek dan kehancuran
jangka panjang dari mikro-arsitektur jaringan dengan menghentikan aktivitas enzim
katabolik dan karenanya autolisis, meminimalkan difusi larutan molekul uble dari
lokasi aslinya.
Jenis fiksasi

Fiksasi jaringan dapat dilakukan secara fisik dan / atau metode kimiawi. Metode
fisik, misalnya pemanas, microwave dan pengeringan beku adalah proses independen
dan tidak biasa digunakan di praktik rutin patologi medis atau kedokteran hewan,
anatomi dan histologi. Pengecualiannya adalah penggunaan fiksasi panas kering
mikroorganisme sebelum Gram pewarnaan. Kebanyakan metode fiksasi digunakan
dalam pro-Penghentian jaringan bergantung pada diagnosis histopatologis pada fiksasi
kimiawi yang dilakukan oleh fiksatif cair.

Reproduksibilitas penampilan mikroskopis jaringan setelah pewarnaan H&E


adalah kebutuhan utama- fiksatif yang digunakan untuk patologi diagnostikogy. Metode
fiksasi digunakan dalam protokol penelitian termasuk penggunaan uap dan jarang, saat
fiksasi dari seluruh hewan dibutuhkan, perfusi hewan sistem vaskular mal dengan
fiksatif (Eltoum dkk. , 2001a, 2001b).

Beberapa bahan kimia, atau kombinasinya, dapat bekerja sebagai fiksatif yang
baik dan menyelesaikan banyak hal yang disebutkan tujuan fiksasi. Beberapa fiksatif
menambahkan reak kovalen Lima kelompok yang dapat menyebabkan hubungan silang
antara protein, bagian protein individu dalam nukleat asam dan antara asam nukleat
dan protein (Horobin, 1982; Eltoum et al., 2001a, 2001b; Rait dkk. , 2004, 2005). Contoh
terbaik dari 'penautan silang

fiksatif adalah formaldehida dan glutaraldehida. Pendekatan lain untuk fiksasi


adalah dengan menggunakan agen yang menghilangkan air bebas dari jaringan dan
mengendap dan menggumpalkan protein. Contoh dehy- Drants termasuk etanol,
metanol dan aseton. Ini agen mendenaturasi protein dengan memecah hidropho- ikatan
bic bertanggung jawab untuk memelihara tersier struktur protein. Fiksatif lainnya,
misalnya asetat asam, asam trikloroasetat, merkuri klorida dan seng asetat bertindak
dengan mendenaturasi protein dan asam nukleat melalui perubahan pH atau melalui
pembentukan garam.

Beberapa fiksatif adalah campuran reagen dan are disebut sebagai fiksatif
senyawa, misalnya alkoholik formalin memperbaiki jaringan dengan dua cara: pertama,
dengan menambahkan- membentuk gugus hidroksimetil kovalen dan menghubungkan
protein dan kedua, dengan koagulasi dan dehidrasi.

Metode fisik fiksasi

Fiksasi panas

Ini adalah bentuk fiksasi yang paling sederhana. Merebus atau merebus- telur
mengendapkan protein dan, pada pemotongan, kuning telur dan putih telur dapat
diidentifikasi secara terpisah. Setiap komponen kurang larut dalam air setelah panas
fiksasi dari komponen yang sama dari telur segar. Ambil bagian yang membeku di
mikroskop hangat slide, keduanya menempel bagian ke slide dan par- akhirnya
memperbaikinya dengan panas dan dehidrasi. Meskipun morfologi yang memadai dapat
diperoleh dengan merebus jaringan dalam garam normal, panas terutama digunakan
mempercepat bentuk fiksasi lain serta yang lainnya

langkah-langkah pengolahan jaringan.

Fiksasi microwave

Pemanasan microwave dapat mengurangi waktu fiksasi beberapa spesimen


kasar dan bagian histologis dari lebih dari 12 jam hingga kurang dari 20 menit (Kok &
Boon, 2003; Leong, 2005). Jaringan microwave masuk formalin menghasilkan produksi
dalam jumlah besar uap yang berbahaya dan berpotensi meledak. Dalam tidak adanya
tudung untuk ekstraksi atau microwave sistem pemrosesan yang dirancang untuk
menangani uap-uap ini, ini dapat menyebabkan masalah keamanan. Gly komersial-
fiksatif berbasis oksal yang tidak membentuk uap saat dipanaskan pada 55 ° C telah
diperkenalkan sebagai yang efisien metode fiksasi microwave.

Pengeringan beku dan substitusi beku

Pengeringan beku adalah teknik yang berguna untuk mempelajari solusi bahan uble dan
molekul kecil. Jaringan dipotong menjadi blok tipis, direndam dalam nitrogen cair dan
air dibuang dalam ruang vakum pada suhu −40 ° C. Itu jaringan dapat diperbaiki dengan
uap formaldehida.

Dalam substitusi beku, spesimen direndam fiksatif, misalnya aseton atau alkohol pada
-40 ° C, ini perlahan-lahan menghilangkan air melalui pelarutan kristal es dan protein
tidak didenaturasi. Membawa suhu secara bertahap hingga 4 ° C akan menyelesaikan
proses fiksasi (Pearse, 1980 ). Metode perbaikan ini asi digunakan terutama di
lingkungan penelitian dan jarang digunakan dalam pengaturan laboratorium klinis.

Fiksasi kimiawi

Ini menggunakan solusi organik atau non-organik untuk pertahankan pengawetan


morfologi yang memadai. Fiksatif kimiawi dapat dianggap sebagai anggota tiga kategori
utama: koagulan, ikatan silang, dan senyawa (Baker, 1958 ).

Metode fisik fiksasi

Fiksatif koagulan

Larutan organik dan non-organik dapat menggumpal protein ulate membuatnya tidak
larut. Seluler arsitektur in vivo dipertahankan terutama oleh lipoprotein dan protein
berserat seperti colla-gen. Koagulasi protein ini memelihara jaringan histomorfologi di
tingkat mikroskop cahaya. Sayangnya, karena fiksatif koagulan menghasilkan flokulasi
sitoplasma dan pengawetan yang buruk mitokondria dan butiran sekretori, fiksatif ini
tidak berguna dalam analisis ultrastruktural.

Fiksatif koagulan dehidran

Yang paling umum digunakan dalam kelompok ini adalah alkohol (misalnya
etanol, metanol) dan aseton. Metanol adalah lebih dekat dengan struktur air daripada
etanol. oleh karena itu bersaing lebih kuat daripada metanol interaksi dengan area
molekul hidrofobik dan fiksasi koagulan dimulai pada konsentrasi 50–60% untuk etanol
tetapi 80% atau lebih untuk metanol (Lillie & Fullmer, 1976 ). Penghapusan dan
penggantian air bebas dari jaringan oleh salah satu agen ini beberapa efek potensial
pada protein di dalam jaringan.

Molekul air mengelilingi area hidrofobik pro- teins dan, dengan tolakan,
memaksa kimia hidrofobik kelompok menjadi kontak yang lebih dekat satu sama lain
stabiliz-ing ikatan hidrofobik. Dengan menghilangkan air, file prinsip sebaliknya
melemahkan ikatan hidrofobik. Demikian pula, molekul air berpartisipasi dalam
hidrogen ikatan di area hidrofilik protein, dan karenanya penghilangan air
mendestabilkan ikatan hidrogen ini.

Gangguan struktur tersier protein (yaitu denaturasi) mengubah sifat fisiknya,


berpotensi menyebabkan ketidaklarutan dan hilangnya fungsition. Padahal sebagian
besar protein menjadi kurang larut di lingkungan organik, hingga 13% protein mungkin
hilang, misalnya dengan fiksasi aseton ( Horobin, 1982 ).

Faktor-faktor yang mempengaruhi kelarutan makromol-

ecules meliputi:

• Suhu, tekanan, dan pH.

• Kekuatan ion dari zat terlarut.

• Konstanta penggaraman, yang mengekspresikan kontribusi interaksi elektrostatis.

• Interaksi penggaraman dan penggaraman.

• Jenis reagen denaturasi ( Herskovits dkk., 1970; Horobin, 1982; Papanikolau & Kokki-

nidis, 1997; Bhakuni, 1998).

Alkohol mengubah sifat protein secara berbeda tergantung pada pilihan dan
konsentrasi alkohol, tekanan ence bahan organik dan non-organik dan pH dan suhu
fiksasi. Efek denaturasi protein dari etanol adalah> phe-nols> air dan alkohol
polihidrik> monocar-asam kotak> asam dikarboksilat (Bhakuni, 1998 ).

Jenis fiksatif koagulan lainnya Muatan pada rantai samping yang dapat diionkan,
misalnya –NH 2→ NH 3+ dan COO - → COOH, diubah menggunakan asamkoagulan
seperti asam pikrat dan trikloroasetat oleh gangguan ikatan elektrostatis dan hidrogen-
ing. Asam ini juga dapat memasukkan anion lipofilik menjadi daerah hidrofilik dan
mengganggu tersier struktur protein (Horobin, 1982 ). Asam asetat mengental asam
nukleat tetapi tidak memfiksasi atau mengendapkan protein tate. Oleh karena itu
ditambahkan ke fiksatif lain ke mencegah hilangnya asam nukleat. Asam trikloroasetat
(Cl 3 CCOOH) dapat menembus domain hidrofobik protein dan anion yang dihasilkan (–
C – COO - ) bereaksi dengan kelompok amina bermuatan. Interaksi ini memicu tates
protein dan ekstrak asam nukleat. Asam pikrat atau trinitrofenol sedikit larut dalam air
untuk membentuk larutan asam (pH 2.0). Dalam reaksi itu membentuk garam dengan
kelompok dasar protein penyebab protein untuk membeku. Jika solusinya dinetralkan,
pra- protein cipitated dapat larut kembali. Fiksasi asam pikrat menghasilkan
pewarnaan yang lebih cerah, tetapi larutan pH rendah dapat menyebabkan hidrolisis
dan hilangnya asam nukleat.

Fiksatif ikatan silang non-koagulan


Beberapa bahan kimia dipilih sebagai fiksatif kedua-ary untuk tindakan potensial
mereka membentuk tautan silang baik di dalam maupun di antara protein dan asam
nukleat.

Cross-linking mungkin bukan mekanisme utama waktu fiksasi yang singkat dan oleh
karena itu 'aditif kovalen fiksatif 'mungkin nama yang lebih baik untuk grup ini. Contoh
termasuk formaldehyde, glutaraldehyde dan alde- hydes, misalnya chloral hydrate dan
glyoxal, serta logam garam, misalnya merkuri dan seng klorida, dan logam lainnya
senyawa, misalnya osmium tetroksida. Kelompok Aldehida reaktif secara kimiawi dan
biologis dan bertanggung jawab sible untuk banyak reaksi histokimia, misalnya argen-
reaksi taffin (Papanikolau & Kokkinidis, 1997).

Fiksasi formaldehida
Formaldehyde, sebagai 10% formalin buffered netral (NBF) adalah fiksatif yang
paling umum digunakan dalam patologi nostik. Formaldehida murni adalah uap yang
bila terlarut sempurna dalam air membentuk yang mengandung 37–40% formaldehida
dan ini larutan air adalah 'formalin'. '10% biasa untuk- malin 'yang digunakan dalam
fiksasi jaringan adalah larutan 10%. tion formalin, yang mengandung sekitar 4% berat
terhadap volume formaldehida.

Reaksi formaldehida dengan makromol- ecules banyak dan kompleks. Prancis


dan Edsall (1945) danFraenkel-Conrat dan rekan-rekannya (1948a , 1948b, 1949 )
dengan cermat mengidentifikasi sebagian besar reak-ion formaldehida dengan asam
amino dan protein menggunakan kimia sederhana. Dalam larutan air, bentuk- aldehida
membentuk metilen hidrat, suatu metilen gly-col sebagai langkah pertama dalam fiksasi
( Singer, 1962).
H 2 C = O + H 2 O → HOCH 2 OH Metilen hidrat bereaksi dengan beberapa rantai
samping protein untuk membentuk gugus samping hidroksimetil reaktif (–CH 2 –OH).
Ketika arus fiksasi relatif pendek

Waktu tion digunakan dengan 10% formalin buffered netral (jam ke hari),
pembentukan sisi hidroksimetil rantai adalah reaksi primer dan karakteristik dan
pembentukan tautan silang sebenarnya mungkin jarang.

Jika formalin dicuci bersih, kelompok reaktif mungkin dengan cepat kembali ke
keadaan semula, tapi apapun bridging yang telah terjadi mungkin tetap ada. Mencuci
selama 24 jam menghilangkan sekitar setengah dari kelompok reaktif dan setelah 4
minggu hingga 90% dihapus (Helander, 1994 ). Ini menunjukkan bahwa sebenarnya
penautan silang adalah proses yang relatif lambat dan, sebagian besar 'fiksasi' dengan
formaldehida sebelum proses jaringan-ing dalam patologi diagnostik berhenti dengan
formasi dari gugus hidroksimetil reaktif.

Selama penyimpanan jangka panjang dalam formalin, reaktif kelompok dapat dioksidasi
menjadi kelompok yang lebih stabil (misalnya asam –NH – COOH) yang tidak mudah
dihilangkan dengan mencuci di air atau alkohol. Kembali spesimen ke air atau alkohol
setelah fiksasi oleh karena itu mengurangi fiksasi spesimen lebih lanjut karena gugus
reaktif diproduksi oleh inisial reaksi dengan formalin bisa berbalik dan dibuang.

Meski awalnya mengira itu saling terkait adalah proses terpenting dalam fiksasi
jaringan. menuntut untuk penggunaan biologis (berdasarkan jumlah terbatastautan
silang selama periode singkat fiksasi), kemungkinan besar Fiksasi formaldehida
Tabel 4.1 Tindakan fiksatif tunggal atau kombinasi utama
Tabel 4.1 Tindakan fiksatif tunggal atau kombinasi utama — lanjutan

Fiksasi glutaraldehyde bahwa pembentukan gugus hidroksimetil tersebut


sebenarnya mengubah sifat makromolekul dan menjadikannya tidak larut. Karena
percobaan pencucian ini belum pernah dilakukan direproduksi, mekanisme aktual dan
pentingnya tance dalam fiksasi dengan formaldehida masih belum pasti.

Fiksasi berlebihan pada jaringan mungkin juga sebagian dirusak dengan


merendam jaringan dalam amonia pekat ditambah 20% kloral hidrat ( Lhotka &
Ferreira, 1949). Fraenkel-Conrat dan rekan-rekannya mencatat bahwa tambahan reaksi
tion dan kondensasi formaldehida dengan asam amino dan protein tidak stabil dan bisa
jadi dibalik dengan mudah dengan pengenceran atau dialisis (Fraenkel-Conra t dkk.,
1945, 1947; Fraenkel-Conrat & Olcott, 1948a , 1948b; Fraenkel-Conrat & Mecham,
1949 ).
Jenis utama tautan silang dalam fiksasi jangka pendek dianggap berada di antara
gugus hidroksimetil rantai samping lisin dan arginin (melalui sekunder kelompok
amino), asparagin dan glutamin (melalui kelompok amida sekunder) atau tirosin
(melalui gugus hidroksil) ( Tome et al., 1990). Misalnya, a gugus hidroksimetil amina
lisin dapat bereaksi dengan gugus arginin untuk membentuk lisin – CH 2 –arginin
tautan silang. Demikian pula dengan tirosin hidroksimetil amina kelompok dapat
mengikat dengan kelompok sistein untuk membentuk tyro- hubungan silang sinus-CH
2- sistein. Masing-masing tautan silang tersebut antara makromolekul memiliki derajat
status yang berbeda.

Namun, persyaratan untuk pH yang lebih rendah untuk menghasilkan –N + H 3


kelompok mungkin tidak setara dengan yang diminta dalam pep- pasang surut.
Formalin asam juga mempertahankan imunorekogi- tion lebih baik dari NBF (Arnold et
al., 1996 ). Memang, itu keberhasilan metode imunositokimia awal untuk menunjukkan
imunoglobulin dalam proses parafin bagian jaringan mungkin bergantung pada fiksasi
jaringan dalam formalin asam (Taylor & Burns, 1974). Itu Kerugian penggunaan
formalin asam untuk fiksasi adalah pembentukan pigmen coklat / hitam dengan
degradasi hemoglobin. Pigmen yang berhubungan dengan heme inilah yang terbentuk
dalam jaringan, tidak menjadi masalah kecuali pasien memiliki a kelainan darah,
misalnya penyakit sel sabit atau malaria. Formaldehida terutama mengawetkan protein
peptida ikatan dan struktur umum organel seluler. Ia dapat berinteraksi dengan asam
nukleat tetapi memiliki pengaruh yang kecil pada karbohidrat dan mempertahankan
lipid jika solusinya mengandung kalsium (Tinggi & Danau Bayliss, 1996 ).

Fiksasi glutaraldehyde
Tidak seperti formaldehida, glutaraldehida memiliki alde- kelompok hyde di
kedua ujung molekul. Berikut setiap reaksi dari kelompok pertama, alde- kelompok
hyde dapat dimasukkan ke dalam protein dan kelompok-kelompok ini dapat bertindak
untuk menghubungkan lebih jauh protein.

Sebagai alternatif, gugus aldehida dapat bereaksi dengan berbagai target


histokimia lainnya yang termasuk antibodi, enzim atau protein. Reaksinya
glutaraldehida dengan protein terisolasi seperti albumin serum sapi, paling cepat pada
pH 6-7 dan hasilnya dalam lebih banyak ikatan silang daripada formaldehida ( Habeeb,
1966; Hopwood, 1969). Tautan silang tidak dapat diubahan tahan asam, urea,
semicarbazide dan panas (Hayat, 1981 ). Mirip dengan formaldehida, reaksi dengan
lisin adalah yang paling penting untuk membentuk ikatan silang.

Fiksasi Osmium tetroksida


Osmium tetroxide (OsO 4 ) adalah padatan beracun larut dalam air serta pelarut
non-polar. Bisa bereaksi dengan situs hidrofilik dan hidrofobik termasuk- mencari
rantai samping protein di tempat yang berpotensi dapat menyebabkan ikatan silang
( Hopwood et al., 1990). Itu situs reaktif termasuk sulfidril, disulfida, fenolik, gugus
hidroksil, karboksil, amida dan heterosiklik.

Osmium tetroksida diketahui berinteraksi dengan nukleat asam, khususnya


bagian 2,3-glikol di terminal kelompok ribosa dan 5,6 ikatan rangkap timin residu. Inti
difiksasi dalam OsO 4 dan didehidrasi dengan alkohol mungkin menunjukkan
penggumpalan DNA yang menonjol. Ini artefak yang tidak dapat diterima dapat dicegah
dengan pra-fiksasi reaksi dengan kalium permanganat (KMnO 4 ), pasca- fiksasi dengan
uranyl asetat atau dengan menambahkan kalsium ion dan triptofan selama fiksasi
(Hayat, 1981).

Fiksatif ikatan silang untuk elektron mikroskopi


Organel sel, misalnya anggota sitoplasma dan nuklir bran, mitokondria, sekretori
terikat membran butiran, retikula endoplasma halus dan kasar, perlu diawetkan dengan
hati-hati untuk mikro elektron- salinan. Lipid dalam struktur ini diekstraksi banyak
fiksatif dehidrasi, misalnya alkohol, dan untuk.

Oleh karena itu, pemeriksaan ultrastruktural penting dilakukan menggunakan


fiksatif yang tidak menghilangkan lipid. Kuat fiksatif hubung-silang lebih disukai,
misalnya glutaralde-hyde, kombinasi glutaraldehyde dan formal-dehyde atau modifikasi
Millonig dari Carson, diikuti dengan pasca fiksasi di agen seperti OsO 4 yang ada yang
menstabilkan dan menekankan membran.

Fiksatif merkuri klorida


Secara historis, merkuri klorida disukai karena kemampuannya ity untuk
meningkatkan sifat pewarnaan jaringan, sebagian terutama dengan noda trichrome.
Namun, sekarang jarang digunakan di laboratorium klinis karena alasan kesehatan dan
masalah keamanan fiksatif yang mengandung merkuri dan, berkurangnya
ketergantungan pada 'noda khusus'. Bulu- ada kerugian utama dari fiksasi klorida
merkuri adalah pembentukan endapan hitam pekat dari me pigmen kurik di jaringan
yang memberi mereka inferior nilai untuk studi imunohistokimia dan molekuler-ies.
Pada jaringan yang baru diperbaiki, endapan ini bisa dihilangkan dengan langkah
yodium Lugol dalam pewarnaan pro- cedure, diikuti dengan pemutihan bagian dalam
natrium larutan hipoklorit (Hypo). Namun, ini tidak benar efektif pada jaringan tetap
merkuri klorida yang memiliki telah disimpan selama beberapa tahun sebagai blok
parafin. Di jaringan ini, analisis retrospektif oleh immunohisto- kimia dan teknik
molekuler tidak dapat diandalkan karena untuk pembentukan agregat mercuric yang
jauh lebih besar pigmen yang tidak dapat dihilangkan oleh yodium Lugol.
Kimia fiksasi menggunakan merkuri klorida tidak dipahami dengan baik tetapi
diketahui bahwa mercuric klorida bereaksi dengan garam amonium, amina, amida,
asam amino dan gugus sulfidril untuk mengeras jaringan. Itu sangat reaktif dengan
sistein, membentuk dimer- captide (Hopwood, 2002) yang mengasamkan larutan:

Sulfidril - 2 (R - S - H) + HgCl 2 ⇌(R - S) 2 - Hg + 2H + + 2Cl –

Jika hanya ada satu sistein, kelompok reaktif R – S – Hg – Cl mungkin. Fiksatif


berbasis merkuri beracun dan semuanya harus ditangani dengan hati-hati. Mereka
seharusnya tidak diizinkan untuk bersentuhan dengan logam, dan harus dibuang
dipecahkan dalam air suling untuk mencegah pengendapan garam merkuri. Bahan
kimia yang mengandung merkuri juga menimbulkan masalah pembuangan lingkungan.

Fiksatif khusus

Fiksasi dikromat dan asam kromat


Kromium trioksida larut dalam air menghasilkan larutan asam asam kromat
dengan pH 0,85 dan ini adalah agen pengoksidasi yang kuat yang menghasilkan
aldehida dari 1, 2-diglikol residu poli-sakarida. Aldehida ini dapat bereaksi dengan
histo- noda kimiawi, misalnya PAS dan argentaffin / argyrophil dan harus
meningkatkan latar belakang imunohis- pewarnaan kimiawi ( Grizzle, 1996a ).

Garam kromik sebenarnya, yaitu ion kromium bervalensi +3 negara, dapat


menghancurkan jaringan hewan (Kiernan, 1999), tapi ion kromium dalam protein
koagulasi +6 dan asam nukleat. Reaksi fiksasi dan pengerasan tidak sepenuhnya
dipahami, tetapi mungkin melibatkan oksida- tion protein yang kekuatannya bervariasi
tergantung pada pH fiksatif, dan interaksi dari ion kromat tereduksi langsung dalam
program cross-linking teins (Pearse & Stoward, 1980 ). Ion kromium spe- berinteraksi
secara khusus dengan sisi karboksil dan hidroksil rantai protein dan asam kromat
berinteraksi dengan jembatan disulfida dan serangan residu lipofilik semacam itu
sebagai tirosin dan metionin ( Horobin, 1982).

Fiksatif untuk analisis DNA, RNA dan protein


Lykidis et al. (2007) melakukan komprehensif analisis 25 senyawa fiksatif,
banyak yang terkenal memberikan peningkatan pengawetan DNA, RNA dan protein
dalam jaringan untuk analisis imunositokimia, sementara pada saat yang sama
memastikan morfo-pelestarian logis. Senyawa ini termasuk buffer asam HEPES-
glutamat yang tersedia secara komersial

Efek Perlindungan Pelarut Organik (HOPE) yang dimediasi fiksatif, dithiobis


cross-linker reversibel [suksinim- dyl propionate] (DSP) untuk imunositokimia dan
profil ekspresi, dan fiksatif berbasis seng. Mereka menyimpulkan bahwa formasi seng
baru, Z7, mengandung seng trifluoroasetat, seng klorida dan kalsium asetat secara
signifikan lebih baik daripada yang berbasis seng standar fiksatif, Z2 dan NBF untuk
DNA, RNA dan tekanan antigen pelestarian. Fragmen DNA dan RNA hingga 2.4kb dan
361bp panjangnya masing-masing, dideteksi oleh poli- merase chain reaction (PCR),
reverse transcriptase PCR dan PCR real-time di jaringan tetap Z7, juga memungkinkan
analisis protein menggunakan elektroforesis 2D. Asam nukleat dan protein ditemukan
stabil selama periode 6–14 bulan. Fiksatif juga kurang beracun dibandingkan formal-
formulasi dehyde. Sementara fiksatif Z7 ini telah ditampilkan janji besar, harus diingat
fiksasi itu di NBF juga akan memungkinkan ekstraksi dengan ukuran yang sama
fragmen DNA dan RNA untuk dianalisis dengan berbasis PCR teknologi dalam kerangka
waktu yang sama.

Ion logam sebagai suplemen fiksatif


Beberapa ion logam telah digunakan sebagai bantuan dalam fiksasi, termasuk Hg
2+ , Pb 2+ , Co 2+ , Cu 2+ , Cd 2+ , [UO 2 ] 2+ , [PtCl 6 ] 2+ dan Zn 2+ . Merkuri, timbal dan
seng digunakan paling umum dalam fiksatif saat ini, misalnya formaldehida yang
mengandung seng disarankan menjadi afiksatif yang lebih baik untuk imunohistokimia
daripada bentuk- aldehyde sendiri. Namun ini tergantung pada pH formaldehida, serta
seng formal- dehyde ( Arnold et al., 1996; Eltoum et al., 2001a).

Senyawa Fiksatif
Ahli patologi menggunakan fiksatif berbasis formaldehida untuk memastikan
pola histomorfometri yang dapat direproduksi. Agen lain dapat ditambahkan ke
formaldehida menghasilkan efek spesifik yang tidak mungkin terjadi formaldehida saja.
Etanol dehidran, untuk Misalnya, dapat ditambahkan ke formaldehida untuk diproduksi
formalin beralkohol. Kombinasi ini mempertahankan mol-ecules seperti glikogen dan
menghasilkan penyusutan yang lebih sedikit dan mengeras dari dehidrasi murni.
Fiksatif senyawa berguna untuk jaringan tertentu, misalnya formalin beralkohol untuk
fiksasi beberapa jaringan lemak, seperti payudara, di mana pelestarian lipid berada
tidak penting. Selain itu, fiksasi spesimen kasar dalam formalin beralkohol dapat
membantu identifikasi kelenjar getah bening yang tertanam dalam lemak (lihat juga
halaman 55).

Beberapa fiksatif gabungan, termasuk forma alkoholiklin, pandai menjaga


antigen immunorecogni-pewarnaan, tetapi pewarnaan non-spesifik atau pewarnaan
latar belakang dalam prosedur imunohistokimia dapat ditingkatkan. Kelompok aldehida
yang tidak bereaksi di glutaraldehida-formal- fiksasi dehyde, misalnya, dapat
meningkatkan background pewarnaan dan formalin beralkohol dapat menyebabkan
non-spesifik pewarnaan saraf mielin (Grizzle dkk., 1995, 1997 , 1998a, 1998b; Arnold
dkk., 1996; Grizzle, 1996b).
Faktor yang mempengaruhi kualitas fiksasi

Buffer dan pH
Pengaruh pH pada fiksasi dengan formaldehida mungkin mendalam tergantung
pada aplikasinya dimana jaringan akan terbuka. Dengan kuat lingkungan asam, target
amina primer gugus (-NH 2 ) menarik ion hidrogen dan menjadi tidak reaktif (–NH + 3 )
ke formaldehida terhidrasi (metilen hidrat atau metilen glikol), dan mobil- gugus kotak
(–COO - ) kehilangan muatan (–COOH). Ini dapat mempengaruhi struktur protein.
Demikian pula, kelompok hidroksil alkohol (-OH) termasuk serin dan treonin mungkin
menjadi kurang reaktif di lingkungan yang sangat asam. Luasnya formasi gugus
hidroksimetil reaktif dan ikatan silang berkurang dalam formaldehida 4% tanpa buffer
(Cara & Feeney, 1995) yang sedikit asam ( Prancis & Edsall, 1945), karena metilen
utama hubungan antara lisin dan gugus amino bebas di rantai samping.

Penurunan efektivitas formaldehida fiksasi dan karenanya ikatan silang dalam


sedikit asam lingkungan telah membuat beberapa penulis menyarankan itu formalin
tanpa buffer adalah fiksatif yang lebih baik daripada NBF untuk imunorecognition dari
banyak antigen (Arnold dkk. , 1996; Eltoum et al., 2001b). Ini membantu pendeteksian
antigen sebelum munculnya epitop yang diinduksi panas metode pengambilan dalam
imunositokimia. Namun, penundaan minimal dalam memperbaiki antigen labil secara
efektif, seperti reseptor estrogen, sangat penting dalam sistem imun pengujian
histokimia untuk berbagai klinis penting biomarker prognostik dan prediktif.
Sementara formal- fiksasi dehyde tetap menjadi metode yang direkomendasikan untuk
pelestarian fitur morfologi yang optimal, protein dan asam nukleat dalam lingkungan
klinis, cara paling andal untuk mendapatkan formalin optimal fiksasi melalui buffering
pada pH 7,2–7,4, yaitu NBF.

Durasi fiksasi dan ukuran spesimen


Faktor-faktor yang mengatur difusi fiksatif menjadi jaringan diselidiki oleh
Medawar (1941) . Dia menemukan bahwa kedalaman dalam mm, d, dicapai oleh
fiksasitive berbanding lurus dengan akar kuadrat dari durasi fiksasi dalam jam, t, dan
menyatakan ini hubungan sebagai:

d = ks/ t

Konstanta, k, adalah koefisien difusabilitas yang spesifik untuk setiap fiksatif.


Contohnya adalah 0,79 untuk 10% formaldehyde, 1.0 untuk 100% ethanol dan 1.33
untuk 3% kalium dikromat ( Hopwood, 1969 ).Jadi, waktu fiksasi kira-kira sama dengan
kuadrat kedalaman tempat fiksatif harus menembus dan sebagian besar fiksatif, seperti
NBF akan pena-etrate jaringan hingga kedalaman sekitar 1 mm satu jam, misalnya
untuk bola 10 mm, keinginan fiksatif tidak menembus ke pusat sampai (5) 2 , 25 jam
fixa-tion. Penting untuk diperhatikan bahwa komponen fiksatif senyawa akan
menembus jaringan pada perbedaan- tingkat ent jadi lebih baik jika fiksatif ini
digunakan dengan spesimen tipis.

Spesimen kotor tidak boleh diletakkan di bawah dari wadah fiksatif, mereka
harus dipisahkan dari bawah dengan gumpalan kertas yang dibasahi fiksatif atau kain
yang memungkinkan penetrasi fiksatif di semua petunjuk arah. Selain itu, spesimen
kotor tidak tetap yang akan dipotong dan disimpan dalam fiksatif sebelumnya
pemrosesan, tidak boleh lebih tebal dari 5 mm. Kapan spesimen bedah akan diproses
menjadi parafin memblokir waktu penetrasi oleh fiksatif lebih banyak kritis. Masalah
khusus yang terkait dengan pemrosesan jaringan telah ditinjau oleh Grizzle et al. (2001)
dan Jones et al. (2001).

Fiksasi berlangsung lambat - periode antara pembentukan gugus hidroksimetil


reaktif dan pembentukan sejumlah besar tautan silang tidak diketahui. Sembilan puluh
persen dari kelompok reaktif bisa dilepas dengan 4 minggu pencucian ( Helander,
1994), mengkonfirmasikan bahwa penautan silang bukanlah proses yang cepat dan
mungkin membutuhkan berminggu-minggu untuk menyelesaikan potensi- ikatan tial.

Protein menonaktifkan fiksatif, terutama dalam darah atau cairan berdarah, jadi
spesimen kotor ini harus dicuci dengan larutan garam sebelum dimasukkan ke dalam
yang digambarkan. Volume fiksatif setidaknya harus 10 kali volume spesimen jaringan
untuk optimal, fiksasi cepat. Saat ini di beberapa laboratorium, spesimen tipis dapat
difiksasi dalam NBF hanya dengan 5-6 jam, termasuk waktu singkat fiksasi pada
jaringan prosesor. Luasnya pembentukan cross-link selama fiksasi NBF cepat seperti itu
tidak pasti.Akibatnya, terbentuklah hidroksimetil kelompok mungkin mendominasi
dibandingkan dengan kelompok lainnya tautan silang yang tangguh.

Suhu fiksasi
Difusi molekul meningkat seiring dengan kenaikan suhu karena gerakan mereka
lebih cepat dan getaran, yaitu laju penetrasi jaringan dengan bentuk- aldehida lebih
cepat pada suhu yang lebih tinggi. Gelombang mikro oleh karena itu telah digunakan
untuk mempercepat fiksasi formaldehida-tion dengan meningkatkan suhu dan molekul-
gerakan lar. Namun peningkatan kadar uap adalah masalah keamanan (Grizzle &
Fredenburgh, 2001, 2005). Kebanyakan reaksi kimia terjadi lebih cepat di tempat yang
lebih tinggi suhu dan karena itu formaldehida bereaksi lebih banyak cepat dengan
protein dalam kondisi ini (Hopwood, 1985). Prosesor jaringan tertutup memiliki
proses- melakukan retort langsung di atas stasiun induk parafin yang ditahan pada suhu
60–65 ° C, membuat retort sedikit lebih hangat dari suhu kamar.

Konsentrasi fiksatif
Efektivitas dan kelarutan terutama menentukan konsentrasi fiksatif yang tepat.
Konsentrasi formalin diatas 10% cenderung menyebabkan peningkatan hardening dan
penyusutan (Fox et al., 1985 ). Selain itu di konsentrasi yang lebih tinggi formalin hadir
di bentuk merik yang dapat diendapkan sebagai endapan putih, sebagai lawan dari
bentuk monomernya HO (H 2 CO) H, yang pada 4% lebih mudah larut (Baker, 1958).
konsentrasi Etanol di bawah 70% tidak menghilangkan air bebas dari jaringan secara
efisien.

Osmolalitas fiksatif dan ionik komposisi


Osmolalitas buffer dan fiksatif penting - larutan hipertonik dan hipotonik
menyebabkan penyusutan dan bengkak masing-masing. Morfologi terbaik hasil
diperoleh dengan larutan yang sedikit hipertonik (400–450 mOsm), meskipun
osmolality untuk 10% NBF adalah sekitar 1500 mOsm. Demikian pula, berbagai ion (Na
+ , K + , Ca 2+ dan Mg 2+ ) dapat mempengaruhi sel bentuk dan struktur terlepas dari
efek osmotiknya. Komposisi ionik fluida harus isotonik mungkin untuk jaringan yang
diperbaiki.

Aditif
Penambahan elektrolit dan non elektrolit untuk fiksatif dapat meningkatkan
morfologi file jaringan tetap. Aditif ini termasuk kalsium chlo- naik, kalium tiosianat,
amonium sulfat dan kalium dihidrogen fosfat. Elektrolytes dapat bereaksi secara
langsung dengan menyebabkan protein denaturasi, atau secara independen dengan
fiksatif dan konstituen seluler (Hayat, 1981 ).

Pilihan elektrolit yang akan ditambahkan ke fiksatif yang digunakan pada a


prosesor jaringan mungkin berbeda-beda. Fixatives disangga dengan elektrolit seperti
fosfat dapat menyebabkan masalah dengan beberapa prosesor karena pengendapan
garam. Penambahan zat non elektrolit seperti sukrosa, dekstran dan deterjen juga telah
dilaporkan meningkatkan fiksasi ( Hayat, 1981).

Memilh atau Menghindari Fiksatif Tertentu


Pilihan fiksatif adalah kompromi, keseimbangan efek menguntungkan dan
merugikan mereka. Kiernan (1999) awalnya menghasilkan tabel tindakan fiksatif yang
kemudian dimodifikasi dan diterbitkan oleh Eltoum dkk. (2001b), dan Tabel 4.1 adalah
modifikasi lebih lanjut. fikasi yang terakhir. Masalah utama dengan fiksatif yang
digunakan dalam sejarah pewarnaan logis adalah hilangnya solusi atau ekstraksi
molekul yang merupakan target untuk metode kimiawi. Biasanya, beberapa molekul
adalah larut dalam fiksatif encer, misalnya glikogen, sementara lainnya larut dalam
fiksatif berbasis organik, misalnya lemak. Beberapa fiksatif secara kimiawi dapat
mengubah target pewarnaan histokimia dan mempengaruhi kualitas dari noda khusus,
misalnya glutaraldehida dengan perak noda. Ini termasuk modifikasi pewarnaan
sekunder terhadap perubahan pH yang disebabkan oleh fiksasi. diskusi yang baik
tentang efek fiksasi pada sejarah-
Kimia oleh Sheehan dan Hrapchak (1980) . Tabel Sheehan dan Hrapchak (1980)
memodifikasi fied oleh Eltoum et al. (2001b) telah diubah jadi bahwa metode fiksasi
yang berbahaya dapat diidentifikasi dengan cepat. Tabel 4.2 adalah modifikasi lebih
lanjut dari ini.

Fiksasi untuk jaringan individu tertentu

Mata
Dunia harus benar-benar diperbaiki agar dapat memotong dengan baik bagian untuk
penyematan. Mata dapat diperbaiki di NBF, Fiksasi untuk jaringan individu tertentu

Tabel 4.2 Noda dan fiksatif


Fiksasi untuk jaringan individu tertentu biasanya selama kurang lebih 48 jam; untuk
mempercepat fiksasi satu atau dua jendela kecil bisa dipotong menjadi globe,
menghindari retina dan iris, setelah 24 jam. Setelah gambaran kasar, iris anterior dan
posterior saraf optik dihilangkan dengan pisau cukur tajam yang baru pisau dan
komponen dunia diperbaiki tambahan 48 jam, atau lebih, dalam bentuk buffer-aldehyde
sebelum diproses. Penyematan mungkin berada di celloidin atau lilin parafin. Fiksasi
perfusi mata dianjurkan untuk mempelajari kanal Schlemm dan / atau jalur aliran
keluar air. Mata hewan mungkin terpaku pada fiksasi Davidsontive. Fiksatif ini cepat
dan tidak memberikan artefak detasemen retina. Fiksasi tidak boleh melebihi 24 jam
untuk mata tikus dan 48 jam untuk mata besar jenis. Bola mata kemudian ditransfer ke
70% etil alkohol dan diproses menjadi parafin embedding.

Otak
Masalah memperbaiki seluruh otak adalah membuatnya cukup kuat untuk menyelidiki
neuroanatomi dan untuk dapat menghasilkan bagian untuk histopatologi dan
kemungkinan imunokimia. Secara konvensional ini fiksasi membutuhkan waktu 2-6
minggu. Adickes dkk. (1997) proberpose teknik perfusi yang memungkinkan semua di
atas untuk diselesaikan dan laporan diterbitkan pada 5–6 hari. Metode ini tergantung
pada perfusi otak melalui arteri serebral tengah, melewati tingkat lambat penetrasi
fiksatif dari luar sisi. Fiksasi juga dapat ditingkatkan dengan penggunaan teknologi
gelombang mikro (Anonim, 2001; Kok & Boon, 2003; Leong, 2005 ). Formalin
beralkohol harus tidak digunakan untuk fiksasi jika imunohistokimia digunakan akan
dilakukan dengan menggunakan biotin-avidin (streptavidin) metode (Grizzle et al., data
tidak dipublikasikan).

Payudara
Sampel klinis harus diperbaiki dalam 10% NBF untuk a minimal 6–8 jam, hingga
maksimal 72 jam dan harus diiris dengan interval 5 mm setelah disetujui. inspeksi kotor
priate dan penetapan margin. Itu waktu dari akuisisi jaringan hingga fiksasi harus
dibuat sesingkat mungkin untuk mencegah lisis biomarker penting secara klinis seperti
estrogen reseptor, reseptor progesteron dan manusia reseptor faktor pertumbuhan
epidermal-2 (HER2). Mereka harus ditempatkan dalam volume NBF yang cukup untuk
memungkinkan penetrasi jaringan yang memadai. Jika spesifikasi tumorimin berasal
dari lokasi geografis yang berbeda. ke laboratorium, harus dibelah dua tumor saat
diangkat dari pasien dan dikirim ke laboratorium direndam dalam volume yang cukup
NBF ( Hammond et al., 2010 )

Paru-paru
Biopsi paru biasanya diperbaiki di NBF. Paru-paru dari lobektomi, pneumonektomi, dan
otopsi dapat ditingkatkan oleh, dan diperbaiki dalam NBF yang ditanamkan di bawah
tekanan lembut melalui trakea atau bronkus mayor. Paru-paru tetap seperti itu dapat
dipotong dalam 2-6 jam, dan

bagian bruto diperbaiki dalam semalam, memungkinkan bagian untuk diproses dan
dipotong keesokan harinya.

Jaringan limfoid
Perawatan khusus harus diberikan pada semua jaringan limfoid sebanyak organisme,
misalnya Mycobacterium tuberculosis dan virus mungkin ada di limforetikular sistem.
Selalu ada kemungkinan risiko infeksi kasus seperti itu. Jaringan limfoid biasanya diiris
dan sampel representatif dari jaringan segar yang diambil studi khusus, misalnya
mikrobiologi, sitometri aliran atau analisis molekuler. Sisa dari kelenjar getah bening
tersebut diperbaiki di NBF, meskipun beberapa laboratorium memperbaiki sebagian
jaringan di B5 atau seng.

Testis
Biopsi testis diperbaiki secara rutin di NBF.

Biopsi otot
Ini diterima segar dan sebagian dipisahkan untuk histokimia enzim. Jaringan untuk
rutinitas penilaian histologis diperbaiki di NBF dan embedded sehingga serat spesimen
dilihat secara silang bagian dan membujur. Setelah diproses ini diwarnai dengan H&E,
noda trichrome dan merah Kongo jika dicurigai amiloid.

Biopsi ginjal
Biopsi inti ginjal harus dibagi lagi menjadi tiga dan setiap bagian harus berisi yang
memadai jumlah glomeruli, misalnya 6-10 untuk mikro ringan- copy, 1-2 untuk
mikroskop elektron dan 3-6 untuk imunofluoresensi. Setiap porsi kemudian disajikan
tergantung pada metode yang akan digunakan analisis selanjutnya:

• NBF untuk histologi rutin.

• Buffered glutaraldehyde pada pH 7,3 untuk ultrastruc-

analisis tural.

• Snap beku dalam isopentane dan nitrogen cair untuk pemeriksaan imunofluoresensi.

Rumus yang berguna untuk fiksatif


Gray (1954) mendaftar lebih dari 600 formulasi untuk fiksatif dan berikut ini adalah
rumus untuk kom hanya digunakan. Banyak dari rumus ini didasarkan pada yang
disajikan dalam buku teks standar histochemistry (Sheehan & Hrapchak, 1980; Carson,
1990; Kiernan, 1999) dan sedikit berbeda dari teks ke teks. Untuk histologi rutin, 10%
formalin dengan buffer netral (NBF) sering digunakan untuk fiksasi awal dan untuk
stasiun pertama pada prosesor jaringan. NBF terdiri dari larutan 10% dari
formaldehida dengan buffer fosfat. Terkadang istilah 'formal' digunakan untuk merujuk
pada 10% formalin atau 37% formaldehyde. Formaldehida adalah com- secara
komersial dipasok sebagai larutan 37-40%.
Fiksatif merkuri
Masalah dengan fiksasi dalam larutan merkuri adalah itu beberapa jenis pigmen dapat
bergabung dengan mercury. Pigmen ini dihilangkan dari bagian-bagian oleh yang
menggunakan pengobatan yodium diikuti dengan natrium thiosultakdir. Mereka jarang
digunakan sekarang karena kesehatan dan masalah keamanan yang terkait dengan
merkuri.
Fiksatif dikromat
Ada variasi di antara nama-nama yang dikaitkan dengan rumus fiksatif dikromat tetapi
tidak di formula itu sendiri. Waktu fiksasi (24 jam) adalah penting untuk fiksatif
dikromat. Jaringan seharusnya dicuci setelah fiksasi dan dipindahkan ke etanol 70%.
Kegagalan untuk mencuci jaringan setelah fiksasi dapat menyebabkan pigmen yang
akan diendapkan. Penyusutan yang luas mungkin terjadi ketika jaringan diproses
menjadi blok parafin.

Fiksatif asam pikrat


Banyak fiksatif asam pikrat membutuhkan aque larutan asam pikrat. Asam pikrat berair
2,1% akan menghasilkan larutan jenuh, dan asam pikrat 5% larutan jenuh dalam etanol
absolut. Bouin's solusi adalah fiksatif umum yang sangat baik untuk koneksi noda
jaringan tive. Warna kuning bisa dihilangkan dengan 70% etanol, litium karbonat atau
asam lainnya pewarna secara terpisah, atau selama urutan pewarnaan. Itu larutan
menghancurkan membran, oleh karena itu inti utuh tidak dapat dipulihkan dari
jaringan tetap dan mungkin ada menjadi penyusutan ekstensif dari spesimen yang lebih
besar.
Fiksatif dehidran
Fiksatif dehidran bertindak untuk melepaskan bebas dan terikat air, menyebabkan
perubahan pada struktur tersier protein sehingga mereka mengendap, meninggalkan
nukleat asam relatif tidak berubah. Ultrastruktur juga hancur karena ekstraksi lipid dan
kelebihan Penyusutan sive komponen jaringan dapat terjadi setelahnya lebih dari 3–4
jam fiksasi. Masing-masing dari berikut :

fiksatif dehidran dapat dimodifikasi dengan menambahkan bahan kimia lain untuk
menghasilkan efek spesifik.

• Etanol mutlak

• 95% etanol

• 70-95% etanol

• Metanol

• Aseton.
Metanol berguna untuk sediaan sentuh dan noda, terutama noda darah. Banyak
campuran alkohol tures mengalami reaksi lambat antar bahan pada penyimpanan
jangka panjang jadi kebanyakan berbasis alkohol fiksatif harus disiapkan 1-2 hari
sebelum digunakan. Fiksasi aseton harus pendek (1 jam) pada suhu 4 ° C spesimen
kecil. Aseton menghasilkan penyusutan yang luas usia dan pengerasan, dan
menghasilkan distorsi mikroskopis-tion. Ini digunakan untuk imunohistokimia, enzim
studi dan dalam mendeteksi rabies. Aseton dingin sangat berguna untuk 'membuka'
selaput yang utuh sel, yaitu yang tumbuh di atas kaca penutup atau mikroskop slide
untuk memfasilitasi masuknya molekul besar, misalnya antibodi untuk studi
imunohistokimia. 'Perdagangan bahan rahasia menstabilkan formulasi komersial.
Fiksatif penghubung silang dehidran
Fiksatif senyawa dengan dehydrant dan chubungan silang tindakan penautan termasuk
campuran alkohol-formalin. Fiksasi formalin alkohol atau pasca fiksasi menguntungkan
pada spesimen besar dengan luas lemak. Kelenjar getah bening dapat dideteksi dengan
lebih mudah spesimen dengan fiksasi alkohol-formalin karena ekstraksi lipid dan
perbedaan tekstur com- dikupas dengan jaringan yang difiksasi di NBF. Persiapan
larutan alkohol-formaldehida itu kompleks, terutama formulir yang disangga secara
resmi. Mungkin yang terbaik adalah membeli persiapan komersial alkohol-formal-
buffereddehyde. Untuk digunakan setelah fiksasi (mis. Setelah 10% NBF), Carson
(1990) merekomendasikan rumus berikut:
Alkoholik Bouin (solusi Gendre)
Fiksatif ini mirip dengan Bouin kecuali lebih sedikit encer dan ada retensi karbohidrat
yang lebih baik tion, terutama glikogen. Fiksasi seharusnya antara 4 jam dan semalam,
diikuti dengan pencucian - memasukkan 70% etanol dan kemudian beberapa kali dicuci
dalam 95% etanol. Ini adalah fiksatif alkoholik yang satu membaik dengan penuaan
( Lillie & Fullmer, 1976).
Fiksatif lainnya

Referensi :
Adickes, ED, Folkerth, RD, & Sims, KL (1997). Penggunaan fiksasi pro-fusi untuk

meningkatkan saraf fiksasi patologis. Arsip Patologi dan Kedokteran


Laboratorium , 121 , 1199–1206.

Arnold, MM, Srivastava, S., Fredenburgh, J., dkk. (1996). Pengaruh fiksasi dan

pemrosesan jaringan pada demonstrasi imunohistokimia spesifik antigen.


Biotechnic dan histokimia , 71 , 224-230.

Baker, JR (1958). Prinsip mikro biologis Teknik: studi tentang fiksasi dan pencelupan .

London: Methuen & Co Ltd. Bayliss Tinggi, OB, & Danau, B. (1996). Lemak. Di JD
Bancroft, & A. Stevens (Eds.), Teori dan praktekteknik histologis (hlm. 213–242).
Edinburgh: Churchill-Livingstone.

Beckstead, JH (1994). Sebuah teknik sederhana untuk preservasi antigen sensitif fiksasi

dalam parafin jaringan tertanam. Jurnal Histokimia dan Sitokimia , 42 , 1127–


1134.

Bhakuni, V. (1998). Lelehan yang diinduksi alkohol molekul antara protein: apakah

mereka nyata melipat produk antara atau off pathway? Arsip Biokimia dan
Biofisika , 357 , 274–284.

Carson, FL (1990). Histoteknologi: pembelajaran mandiri teks . Chicago, IL: American

Society of Clinical Ahli patologi. Dapson, RW (1993). Fiksasi untuk tahun 1990-
an: tinjauan kebutuhan dan pencapaian. Bioteknik dan Histokimia , 68 , 75–82.

Eltoum, I.-E., Fredenburgh, J., & Grizzle, KAMI (2001a). Konsep lanjutan dalam fiksasi:

efek fiksasi pada imunohistokimia dan histokimiaistry, reversibilitas fiksasi dan


pemulihan proteins, asam nukleat, dan molekul lain dari tetap dan jaringan yang
diproses, metode fiksasi khusus. Jurnal Histoteknologi , 24 , 201-210.

Eltoum, I., Fredenburgh, J., Myers, RB, & Grizzle, W. (2001b). Pengantar teori dan

praktek fiksasi jaringan. Jurnal Histoteknologi , 24 , 173–190.

Fraenkel-Conrat, H., & Mecham, DK (1949). Itu reaksi formaldehida dengan protein. VII.

Demonstrasi hubungan silang antarmolekul oleh cara pengukuran tekanan


osmotik. Jurnal Kimia Biologi , 177 , 477–486.

Rubah, CH, Johnson, FB, Whiting, J., & Roller, PP (1985). Fiksasi formaldehida. Jurnal

dari Histokimia dan Sitokimia , 33 , 845–853.

Anda mungkin juga menyukai