library.uns.ac.id digilib.uns.ac.

id

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Landasan Teori
1. Definisi Antraks
Antraks adalah infeksi zoonosis yang disebabkan oleh B. anthracis
yang terjadi hewan herbivora dan dapat ditularkan ke manusia, melalui
kontak langsung maupun tidak langsung (Tunkel et al., 2010).
2. Epidemiologi
Kejadian antraks dapat ditemukan hampir di seluruh dunia, tetapi
umumnya kasus antraks terjadi di wilayah dengan geografis yang terbatas.
Daerah endemis umumnya memiliki karakteristik tanah yang berkapur,
alkalin, dengan episodik banjir serta lingkungan yang hangat (Xie, Auth
dan Frucht, 2011). Indonesia merupakan salah satu wilayah yang memiliki
angka kejadian antraks cukup tinggi. Terdapat 14 provinsi yang
dinyatakan sebagai daerah endemis antraks yaitu Nusa Tenggara Barat,
Nusa Tenggara Timur, Jawa Barat, DKI Jakarta, Jawa Tengah, Sulawesi
Tenggara, Selatan dan Tengah, Sumatera Barat, Jambi, dan DI
Yogyakarta. Pada tahun 2010-2016 terdapat 172 kasus antraks dan 97% di
antaranya adalah kasus antraks kulit (Kemenkes RI., 2017).
3. Penyebab Antraks
Agen penyebab penyakit antraks adalah bakteri B. anthracis yang
termasuk dalam kingdom phylum firmicutes, genus bacillus dan species
B. anthracis (Martin et al., 2010). Bakteri ini ada di alam mempunyai dua
bentuk, yaitu sebagai sel tumbuh aktif yang disebut bentuk vegetatif dan
spora aktif (Tunkel et al., 2019). Spora sangat kuat dan tahan terhadap
suhu, kelembaban dan sinar ultraviolet yang ekstrem. Spora antraks dapat
hidup dalam waktu hingga 60 tahun di lingkungan tanpa nutrisi atau air.
Pada saat spora memasuki inang mamalia, lingkungan internal inang yang
kaya akan air, gula, dan asam amino akan menginduksi spora untuk
commit to user

1
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
2

berkembang menjadi sel vegetatif yang kemudian menghasilkan toksin

yang dapat menyebabkan manifestasi klinis (Savransky et al., 2020).
Bacillus anthracis membentuk koloni besar dengan pertumbuhan
keluar dengan tepi yang tidak teratur. Pada kondisi in vitro tumbuh sebagai
cincin panjang serta membentuk koloni mukoid. Hal ini disebabkan oleh
karena pembentukan kapsul yang bersifat prominen. Pembentukan kapsul
dapat diamati dengan menumbuhkan bakteri pada agar nutrisi berisi 0,7%
sodium bikarbonat dalam karbondioksida 5%-20%. Bakteri ini memiliki
kapsul yang menghasilkan 3 sub toksin (Martin et al., 2010). Bentuk
vegetatif bakteri memiliki daya yang kurang baik, jika berada di luar tubuh
binatang atau manusia, seperti saat dibiakkan di air, jumlah koloni akan
menurun secara cepat dalam 24 jam (Tunkel et al., 2019). Bakteri ini akan
mati pada pemanasan 60°C dalam waktu 30 menit (Moayeri et al., 2015)
a. Morfologi dan Identifikasi B. anthracis
Bakteri ini mempunyai ukuran 3-4 mili mikron, persegi,
berspora dan tersusun dalam rantai panjang, yang merupakan koloni
bulat seperti kaca yang diukir, bila disinari cahaya, dengan ciri non
haemolytic dan mempunyai culred edge (Tunkel et al., 2019).
b. Lingkungan hidup
Pertumbuhan B. anthracis memerlukan karbon sederhana dan
sumber nitrogen, dengan perubahan lingkungan spora bersifat resisten,
tahan terhadap panas kering dan desinfektan kimia tertentu dalam
waktu yang cukup lama (Moayeri et al., 2015).
Bakteri ini mempunyai dinding sel polisakarida somatik yang
terdiri dari N-asetilglukosamin dan D-galaktosa. pXO1 dan pXO2
merupakan Faktor virulensi utama B.anthracis (Prince, 2003). Plasmid
pXO1 mengandung gen yang memproduksi kompleks toksin antraks.
(Tunkel et al., 2019). Antigen protektif merupakan komponen yang
berguna saat berikatan dengan anthrax toxin receptor (ATR) di
permukaan sel. Setelah berikatan dengan reseptor maka oleh furin
protease permukaan commit to user protektif
sel, antigen (83-kDa) membelah
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
3

menjadi bentuk 63-kDa dan selanjutnya akan mengalami oligomerisasi

menjadi bentuk heptamer (Martin et al., 2010; Savransky et al., 2020)
c. Siklus Hidup
1) Fase Vegetatif
Basil mempunyai bentuk batang, berukuran besar dengan
panjang 1-8 m dan lebar 1-1,5 m. Basil ini bersifat non motil,
non hemolitik pada agar darah biri-biri dan tumbuh pada berbagai
kondisi media laboratorium dalam temperatur 37°C. Pada saat
hewan terinfeksi mati, bakteri yang berada didalam tubuh hewan
akan keluar melalui pendarahan di hidung, mulut, anus atau
pendarahan lainnya. Ketika inangnya mati dan oksigen tidak
tersedia lagi dalam darah, bentuk vegetatif akan memasuki fase
tidur (dormant). Apabila dalam fase itu ada kontak dengan oksigen
di udara bebas, bakteri antraks akan membentuk spora (Moayeri et
al., 2015).
2) Fase Spora
Spora berukuran 1-1,5 mikrometer, dengan bentuk seperti
bola golf. Selama fase ini bakteri tidak aktif, menunggu sampai
dapat berubah kembali menjadi bentuk vegetatif dan memasuki
inangnya (Liu et al., 2018). Ini dapat terjadi karena daya tahan
spora antraks yang tinggi untuk melewati kondisi lingkungan yang
kurang mendukung, diantaranya panas, radiasi ultraviolet dan
ionisasi, tekanan tinggi, serta sterilisasi dengan senyawa kimia.
Spora terbentuk pada saat binatang yang terinfeksi mati. Spora
antraks memiliki dinding tebal sehingga bersifat resisten terhadap
panas, radiasi ultraviolet dan ion, tekanan, serta bahan kimia, yang
dapat bertahan lebih dari 60 tahun dan masih mampu menginfeksi
manusia atau binatang (Moayeri et al., 2009). Basil ini tidak dapat
bertahan diluar tubuh binatang atau manusia tanpa kemampuannya
membentuk spora karena merupakan obligate pathogen, suatu
commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
4

bakteri yang tinggal di dalam tubuh binatang atau manusia untuk

mempertahankan hidupnya (Savransky et al., 2020).
Kondisi optimal bagi pertumbuhan spora dan multiplikasi
bakteri adalah tanah yang mengandung kalsium dan dataran rendah
yang basah dalam waktu lama kemudian terkena panas. Binatang
yang merumput pada area ini dapat menghirup spora, jika
penyakitnya berkembang dan binatang tersebut mati, jasadnya
menyatu dengan tanah dan menghasilkan spora pada kondisi
tertentu (Moayeri et al., 2009). Manusia paling sering terinfeksi
antraks dari spora yang terdapat di kulit atau daging binatang
terinfeksi, ketika spora menempel pada kulit inang yang terluka
atau juga dapat terhirup saat bernafas (Liu et al., 2018). Setelah
spora antraks memasuki tubuh inang, spora itu berubah ke bentuk
vegetatif. Antraks inhalasi jarang terjadi melalui kontak dengan
binatang terinfeksi yang hidup. Industri kulit binatang, paparan
pupuk dari serbuk tulang, penggunaan kulit dan bulu binatang
impor pada kerajinan rumah tangga, dapat menyebabkan inhalasi
spora serta menimbulkan penyakit pada individu yang sensitif.
Individu tidak tervaksinasi yang memasuki proses pengolahan kulit
dan bulu berada pada risiko terbesar terhadap inhalasi atau pajanan
kontak (Moayeri et al., 2009).
d. Sifat-sifat kuman Antraks
Pada bakteri antraks terdiri dari tiga antigen, yaitu :
1) Kapsul Antigen Polipeptida
Susunan antigen kapsul ini terdiri dari asam D-glutamat,
yang merupakan molekul besar dan diketahui hanya ada satu tipe
antigen kapsul. Antigen ini berperan penting dalam menghambat
proses opsonisasi dan fagosistosis kuman (Moayeri et al., 2009).

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
5

2) Antigen Somatik
Antigen ini terdiri dari D-galaktosa dan N-asetil
galaktosamin, yang dapat bereaksi silang pada golongan darah A
dan pneumokokus tipe 14 (Liu et al., 2018).
3) Toksin Antigen
Virulensi bakteri ini ditentukan oleh kapsul kuman dan
toksin, yang ditemukan pada tahun 1950-an oleh Smith dan Kepie.
Toksin ini terdiri dari Edema factor (EF), Protective antigen (PA)
dan Lethal factor (LF).
Adanya toksin ini dapat menyebabkan edema, nekrosis
jaringan dan perdarahan. Jika ketiga faktor ini berdiri sendiri, tidak
akan menyebabkan efek toksik. Edema toxin (ET) terbentuk dari
kompleks EF dan PA (Xie, Auth and Frucht, 2011). Adanya PA
menyebabkan masuknya EF dan LF ke dalam sel, dengan cara
membentuk ikatan dengan reseptor seluler (Liu et al., 2018). Ikatan
PA dengan reseptor selulernya memungkinkan EF dan LF masuk
ke dalam sel. Aktivasi EF akan mempercepat perubahan Adenosine
trifosfat (ATP) menjadi Cyclic Adenosine Monophosphate
(cAMP). Kemampuan EF mengubah ATP menjadi cAMP sangat
kuat dibanding dengan toksin pada kuman kolera, sedangkan LF
adalah metaloproteasa yang faktor virulensi utama B. anthracis.
Penyuntikan lethal toxin pada mencit akan menyebabkan kematian
dalam waktu 38 menit. Hal ini menjelaskan jika antibodi terhadap
PA ini bersifat protektif dan ikatan dengan PA yang menyebabkan
EF dan LF tidak dapat masuk ke dalam sel (Moayeri et al., 2015).
e. Pertahanan Hidup
Mekanisme dalam mempertahankan hidup B. anthracis terdiri
dari bentuk kapsul dan spora. Bentuk spora melindungi bakteri
terhadap kondisi ekstrim sehingga bakteri ini dapat bertahan hidup
hingga puluhan tahun. Kapsul merupakan lapisan tipis yang
menyelubungi dindingcommit to user
luar dari bakteri, yang terdiri dari polipeptida
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
6

dengan berat molekul tinggi dan mengandung D-glutamat acid dan

merupakan suatu hapten. Bacillus anthracis dapat membentuk kapsul
pada rantai yang berderet. Pada media biasa, kapsul tidak dapat
terbentuk kecuali pada galur yang ganas (Tunkel et al., 2019).
Bakteri akan berubah bentuk dengan membentuk kapsul pada
jaringan hewan yang mati atau pada media khusus natrium bikarbonat
dengan konsentrasi carbondioxide (CO2) 5%. Kapsul ini dapat
menghambat proses fagositosis oleh sistem imun tubuh serta
menentukan virulensi bakteri (Martin et al., 2011). Bacillus anthracis
membentuk spora sebagai bentuk resting cells. Perubahan ini terjadi
bila nutrisi esensial tidak memenuhi kebutuhan dalam pertumbuhan,
yang disebut sporulasi. Spora ini berbentuk elips atau oval, letaknya
sentral dengan diameter tidak lebih dari diameter bakteri itu sendiri.
Spora ini tumbuh baik di tanah maupun atau jaringan hewan yang mati
karena antraks (Inglesby et al., 2005 ; Moayeri et al., 2015).
Bakteri ini mempunyai keistimewaan, bila keadaan lingkungan
berubah kembali normal atau nutrisi esensial telah terpenuhi, spora
akan berubah menjadi bentuk bakteri kembali. Spora ini dapat terus
bertahan hidup, karena sulit dirusak atau mati oleh pemanasan atau
bahan kimia tertentu, sehingga bakteri tersebut bersifat dormant, hidup
tapi tak berkembang biak (Xie, Auth and Frucht, 2011).
Spora antraks tahan terhadap cuaca panas atau dingin, dan
menjadi aktif setelah masuk kedalam tubuh. Pada tanah yang kering,
spora akan bertahan selama 60 tahun. Spora akan mati dalam hidrogen
peroksida dalam waktu 1 jam, pada suhu 100C dalam waktu 10
menit, pada karbol 5% dalam waktu 40 hari, dan pada formalin 10%
dalam waktu 4 jam. Kuman antraks dapat tumbuh optimal di media
umum di laboratorium, misalnya media agar bernutrisi atau media agar
darah pada suhu 37C dan pH 7-7,4. Bakteri vegetatif mudah mati oleh
antibiotik, disinfektan atau antiseptik (Paccani et al., 2011).
commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
7

4. Cara Penularan
Penularan pada manusia terjadi setelah ada hewan yang terinfeksi
atau produk hewan yang terkontaminasi, antara lain: daging, kulit, tulang,
darah atau bisa juga melalui udara yang mengandung spora, misalnya,
pada pekerja di pabrik wool atau kulit binatang. Antraks tidak dapat
ditularkan dari manusia ke manusia (Inglesby et al., 2002). Penularan
disebabkan karena kontak langsung dengan spora yang ada di tanah
(Tunkel et al., 2010). Transmisi dari lalat juga dilaporkan dapat sebagai
media penularan, yaitu lalat yang membawa spora dari bangkai ke hewan
lain atau manusia (Moayeri et al., 2015).
Manusia akan terinfeksi apabila endospora masuk ke dalam tubuh
melalui kulit yang terbuka, misalnya lecet atau luka, melalui pernafasan
atau makanan yang telah terkontaminasi dengan B. anthracis yang tidak
dimasak sampai matang (Martin et al., 2010).
5. Patogenesis Infeksi Antraks
Infeksi antraks diawali dengan masuknya endospora yang dihasilkan
oleh B. anthracis ke dalam tubuh manusia, melalui abrasi kulit, tertelan
atau terhirup udara saat bernafas. Virulensi ditentukan oleh dua macam
plasmid yang terdapat pada sitoplasma bakteri. Dua macam plasmid
tersebut adalah pXO1 dan pXO2. (Xie, Auth and Frucht, 2011). Pengaruh
pXO1 sebagai pembawa gen penghasil toksin sedangkan pXO2 sebagai
pembawa gen penghasil kapsul. Plasmid pX02 menghasilkan kapsul yang
mana berfungsi melindungi sel dari fagositosis dan lisis (Porasuphatana,
2010).
Bakteri masuk ke dalam tubuh menjadi bentuk spora, lalu akan
bereaksi dengan sistem kekebalan tubuh. Spora yang aktif mulai
berkembang biak dan menghasilkan tiga molekul protein, yaitu protective
antigen (PA), lethal factor (LF), dan edema factor (EF) (Xie, Auth and
Frucht, 2011). Ketiga molekul ini tidak bersifat toksik, tetapi bila
bergabung membentuk dua macam toksin (Inglesby et al., 2002).
commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
8

From
terminally
infected
animal or
carcass
Biting after
fly
death
Germination & multiplication
in lymphatic & spleen.
Vegetative forms released in
massive numbers into blood
Pulmonary in final hours of life
(spore-
laden dust)
SPORE Ingested
Gastrointestinal S (grazing,
(infected browsing
meat,contaminate ,drinking
water) ). Inhaled
Sporulate sometime
Cutaneou s?
s on
(via exposure
lesion) to O2

VEGETATIVE FORMS
(shed at death in
haemoraghic exudate
from nose, mouth or
anus or in split blood)

Gambar 2.1 Siklus infeksi B. anthracis (Inglesby et al., 2002).

Keterangan : Spora antraks dapat masuk ke hewan melalui spora yang menempel di
rumput dan masuk saat dimakan hewan, spora dapat masuk melalui inhalasi dan
gastrointestinal.

Kombinasi LF dan PA membentuk lethal toxin (LT), EF dan PA

membentuk edema toxin (ET), jika ada ketiga toksin tersebut (PA, LF, dan
EF), akan mengakibatkan edema, nekrosis dan berakhir dengan
kematin.kematian. Ketiga toksin tersebut membantu bakteri menghindar
dari sistem imun host dan menyebabkan septikemia berakhir kematian
pada host (Glomski et al., 2007; Abboud et al., 2008; Paccani et al., 2011).
Adanya Edema Toxin menyebabkan makrofag tidak dapat
melakukan fagositosis pada bakteri dan lethal toxin merupakan toksin
yang memicu makrofag untuk mensekresikan TNF-α dan IL-1β (Xie, Auth
and Frucht, 2011). Pada jaringan subkutan dan mukosa usus, sebagian
commit to user
kecil spora berubah menjadi bentuk vegetatif. Bentuk vegetatif selanjutnya
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
9

akan membelah, mengeluarkan toksin yang menyebabkan edema dan

nekrosis lokal (Moayeri et al., 2015).
Early stage Systemic stage

Replication and
Spores Vegetative Innate immune dissemination
encapsulated response disabled
bacteria
Cardiomyocytes
Lethal
Germination Vascular
collapse
Smooth muscle

Edema
Liver

Edema

NLRP1-S
(LT-responsive) Proinflamatory
Myeloid cell cytokine
production
Neutrophil
recruitment

Gambar 2.2 Toksin antraks dari bentuk vegetatif (Martin et al., 2010).
Keterangan : Saat spora masuk kemudian berubah menjadi bentuk vegetatif dan
menghasilkan LT dan ET, yang dapat bermanifestasi ke jantung dan hati.

Endospora menjadi bentuk vegetatif setelah mengalami fagositosis

oleh makrofag, kemudian dibawa ke kelenjar getah bening regional.
Kemudian kuman akan membelah, serta memproduksi toksin dan
menimbulkan limfadenitis, yang menyebar secara hematogen dan limfogen
dan menyebabkan septikemia serta toksemia. Dalam darah, kuman dapat
mencapai sepuluh sampai seratus juta per milimeter darah. Reaksi
peradangan hebat terjadi terutama akibat lethal toxin, yang memicu
pelepasan reactive oxygen species (ROS), TNF-α dan interleukin-1 (IL-1)
(Martin et al., 2010).
commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
10

Lethal Factor adalah komponen sentral racun yang bekerja sebagai

protease, aktivitasnya bergantung pada logam zinc. Edema Factor adalah
enzim adenylate cyclase yang bekerja mensintesis molekul cAMP
sehingga

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
11

B. anthracis

Edema

Necrosis,
hypoxia

Gambar 2.3 Mekanisme Aksi Antigen Protektif (Prince, 2003).

Keterangan: PA akan berikatan dengan EF dan LF. EF akan menyebabkan
manifestasi berupa edema sedangkan LT akan bermanifestasi sebagai nekrosis
dan hipoksia.

adanya peningkatan yang tidak terkontrol, dapat menyebabkan hilangnya

cairan tubuh (Pohan, 2005 ; Liu et al., 2018).
Menurut Prince (2003), virulensi B. anthracis bergantung pada
kapsul antifagosit dan 3 toksin berbeda, yaitu PA, LF dan EF. Untuk dapat
berfungsi, LF dan EF dibantu PA, masuk ke dalam sel (Prince, 2003). Pada
tahap awal intoksikasi sel host, PA ini dibutuhkan untuk mengawali
masuknya LF dan EF sebagai enzim yang berpengaruh pada mediasi
kerusakan sel host (Moayeri et al., 2015). Protective antigen adalah
protein yang terdiri dari satu subunit yang bila berikatan dengan reseptor
khusus dalam sel, akan terbelah dua akibat aktivitas protease furin.
Kemudian PA membentuk heptamer (tujuh subunit) yang mengikat LF
dan EF, sehingga bisa masuk ke dalam sel (Paccani et al., 2011).
Komponen protein A yang kedua adalah lethal toxin yaitu zinc
metalloprotease yang menginaktifkan Mitogen-Activated Protein Kinase
commit to user
Kinase (MAPKK) sehingga menyebabkan penghambatan sinyal
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
12

intraseluler (Moayeri et al., 2015). Lethal toxin memicu pelepasan IL-1β

yang menyebabkan kondisi hiperinflamasi pada makrofag, mengaktifkan
jalur oksidatif yang merusak dan pelepasan reactive oxygen intermediates,
serta ekspresi pro-inflamasi, seperti TNF-α yang menyebabkan terjadinya
syok dan kematian (Dixon et al., 2000). Hal ini diakibatkan efek toksik
yang terjadi pada hewan dengan bakteremia kadar tinggi, yaitu 107-108
basil per mililiter darah dan tingginya kadar lethal toxin (Chamber, 2003)
Kapsul bakteri antraks terdiri dari poly D-glutamic acid yang
dihasilkan oleh plasmid pX02 dan berfungsi untuk melindungi sel dari
proses fagositosis dan lisis. (Xie, Auth and Frucht, 2011). Protective
antigen mengikat reseptor seluler dan memfasilitasi LF masuk dalam
sitosol (Heninger et al., 2006). Lethal toxin berisi protease yang
mengeluarkan hormon peptida dan mitogen-activated protein kinase
(MAPK) (Porasuphatana, 2010; Panchal, 2007).
Lethal factor mengeluarkan MAPK activating enzymes disebut
mitogen-activated protein kinase kinase (MAPKK). Pengeluaran enzim ini
mencegah fosforilasi berbagai komponen p38, June N-terminal kinase
(JNK), extracelluler signal-regulated kinase (ERK), yang dapat
menyebabkan penghambatan jalur MAPK (Panchal, 2007).
Perusakan jalur MAPK menyebabkan gangguan multisistem pada
individu terinfeksi. Aktivitas LT menimbulkan kerusakan yang tersebar
luas, bersifat multisistem termasuk sitotoksisitas. (Xie, Auth and Frucht,
2011). Data mengenai hubungan langsung antara inaktivasi jalur MAPK
dan sitotoksisitas belum diketahui. Keadaan ini akan memicu munculnya
damage-associated molecular pattern (DAMP), mengarah pada
penyebaran reaksi inflamasi dan respon imun adaptif yang dilepaskan oleh
sel-sel yang telah rusak saat terjadi jejas reperfusi iskemia Prototipe
DAMP protein non histon terkait kromatin yang dikenal sebagai high-
mobility group box 1

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
13

IMMUNE SYSTEM

macrophages Dendritic
Inhibition of cytikone secretion, cells Suppression of cytokine
Lysis and apotosis of macrophage, secretion,
Impaired innate immunity Downregulation of costimulatory

X
molecules
Defective T,B cell priming,
Impaired innate and adaptive
immunity

Bacillus anthracis

Secretes lethal toxin

Cleaves n-terminal
fragments of MKKs

Impaired MAPK(p38,ERK,JNK)
phosphorylation

X X
CIRCULATORY ENDOCRINE
SYSTEM SYSTEM
Endothelial cell Suppression of
Apoptosis Inflamation

Gambar 2.4 Perusakan jalur MAPK oleh antraks (Heninger et al., 2006).
Keterangan: Spora B. anthracis mengeluakan LT yang memicu efek sistem imun,
sirkulasi dan endokrin. MAPK : mitogen activated protein kinase; ERK : extracelluler
signal-regulated kinase; JNK : c-June N-terminal kinase

(HMGB-1) berfungsi sebagai faktor nuklear dan sitokin pro-inflamasi,

yang
merupakan reseptor multi-ligan yang mengikat HMGB-1, diekspresikan
oleh sel epitel tubular akibat stres oksidatif (Wu et al., 2011).
Edema factor merupakan suatu adenylate cyclase yang berpengaruh
meningkatkan produksi cAMP, yang mempengaruhi perpindahan air dan
ion. (Xie, Auth and Frucht, 2011). Konsentrasi cAMP tinggi menghambat
pertumbuhan tetapi tidak membunuh sel. Edema factor juga berpengaruh
mencegah aktivasi proses inflamasi dengan cara merusak fungsi neutrofil,
commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
14

menurunkan kemampuan fagosit, dan mengganggu jalur pengeluaran

sitokin (Heninger et al., 2006).
Toksin antraks mencegah terjadinya pembekuan darah sehingga
setelah individu terinfeksi mati darah mengalir ke tanah melalui lubang-
lubang tubuh. Setiap 1 mililiter darah mengandung 10 sampai 100 juta
bakteri (Moayeri et al., 2015). Lethal toxin mempengaruhi endotel
pembuluh darah, secara histologis dapat terlihat adanya nekrosis yang
menyebabkan kerusakan dan perdarahan. Toksin antraks bekerja langsung
pada membran sel endotel, menjadikannya bersifat permeabel terhadap
plasma dan mengakibatkan trombosis intravaskuler. Hal ini bermanifestasi
pada perdarahan di organ dalam dan perdarahan melalui lubang-lubang
tubuh (Decker, 2003).
Angka kematian antraks kulit adalah kurang dari 20% di sepanjang
perjalanan penyakitnya. Hal ini terjadi bila spora B. anthracis menembus
lapisan dermal, biasanya melalui luka atau abrasi (Moayeri et al., 2015).
Edema lokal terlihat jelas setelah 24-48 jam pasca infeksi akibat
perkembangan dari spora dan produksi toksin. Sekitar dua hari pasca
infeksi, pada pasien biasanya mulai muncul ulkus berbentuk bulat besar,
yang segera diikuti oleh pembentukan eschar (Laws et al., 2006).
6. Klasifikasi Antraks
Terdapat 4 bentuk dari antraks yang terjadi pada manusia, yaitu :
a. Cutaneous anthrax (antraks kulit) yang terjadi karena masuknya spora
melalui barrier kulit yang tidak intak. Ujud kelainan kulit yang tampak
adalah eschar berwarna hitam disertai ulserasi yang tidak nyeri.
Cutaneous anthrax menyumbang 95% kejadian antraks yang terjadi
pada manusia (Moayeri et al., 2015).
b. Gastrointestinal anthrax terjadi karena mengkonsumsi daging hewan
yang terkontaminasi dengan B. anthracis. Traktus intestinal, rongga
mulut atau kerongkongan dapat terinfeksi bakteri tersebut.

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
15

c. Inhalational anthrax (antraks inhalasi) dapat terjadi karena menghirup

udara yang telah terinfeksi spora B. anthracis dan pada akhirnya
menginfeksi paru.
d. Injection related anthrax terkait dengan tindakan pemberian obat-
obatan melalui jalur intravena. Kasus yang ditemukan di Eropa saat
injeksi heroin yang terkontaminasi dengan material yang mengandung
spora. (Ramsay, 2010).

Gambar 2.5 Jalur infeksi antraks di kulit, intestinal dan paru (Decker, 2003).
Keterangan: Spora B. anthracis dapat masuk melalui kulit, saluran cerna dan saluran
nafas kemudian ditangkap makrofag dan masuk kelenjar limfe regional yang dapat
bermanifestasi pada berbagai macam organ hingga terjadi kematian.

7. Patogenesis Pembentukan Luka Pada Infeksi Antraks Kulit

Angka kematian antraks kulit adalah 20% di sepanjang perjalanan
commit to
penyakitnya dan 1% diantaranya userterapi. Bentuk antraks ini terjadi
tanpa
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
16

pada saat spora B. anthracis menembus lapisan dermal, biasanya melalui

luka atau abrasi. Edema lokal terlihat jelas setelah 24-48 jam pasca infeksi
akibat perkembangan dari spora dan produksi toksin. Kurang lebih dua
hari pasca infeksi, pada umumnya mulai muncul ulkus berbentuk bulat
besar, yang segera diikuti oleh pembentukan eschar hitam yang tidak
nyeri. Pada beberapa kasus, infeksi dapat menembus lapisan epitel kulit
dan memasuki sistem limfatik, menjadi limfangitis dan limfadenopati
diikuti dengan munculnya komplikasi sistemik. Walaupun sangat jarang
terjadi, infeksi cutaneous anthrax juga dapat menyebabkan septikemia,
syok, anemia hemolitik, koagulopati, hiponatremia, gagal ginjal, dan
kematian. Infeksi antraks juga bisa didapat secara transkutan melalui
suntikan. Dalam kasus antraks injeksi ini, tidak harus disertai dengan
pembentukan eschar, sehingga diagnosis menjadi lebih sulit (Moayeri et
al., 2015).
Pada saat spora masuk ke tubuh manusia atau hewan, dan
menemukan lingkungan yang mendukung untuk berkembang biak, yaitu
lingkungan dengan kadar oksigen yang rendah, nutrisi berlimpah, dan
sirkulasi darah yang akan membawa spora menyebar dalam tubuh (Tunkel
et al., 2019). Apabila spora berada pada lingkungan yang mendukung akan
berkembang dengan cara melepaskan lapisan tebal pada kapsul luarnya,
lalu menjadi sel vegetatif. Fagosit adalah sel darah putih yang bertugas
untuk menelan dan membunuh kuman patogen. Makrofag, monosit dan
neutrofil di dalam darah adalah jenis sel fagosit. Makrofag merupakan
garis pertahanan pertama saat B. anthracis masuk melalui kulit dan
membran mukosa (Laws et al., 2006).
Makrofag adalah jenis sel yang sangat serbaguna dengan berbagai
fungsi bergantung pada lokasi dan status aktivasi. Kontribusi dari
makrofag sebagai mediator dari munculnya gejala dan kematian akibat
antraks sistemik masih belum jelas. Strategi utama perlawanan B. anthracis
terhadap respon imun dari pejamu melalui toksin dan kapsulnya. Lethal
commit
toxin dan ET disekresikan pada to user
saat awal terjadinya infeksi, tujuannya
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
17

adalah untuk merusak sistem kekebalan tubuh baik innate maupun

adaptive dan menghambat terbentuknya sitokin. Antibodi terhadap kedua
toksin tersebut sangat penting dalam perlindungan terhadap infeksi, seperti
ditemukannya vaksin antraks berbasis PA yang dikembangkan pada
manusia, serta antibodi anti PA yang saat ini mulai digunakan. Baru-baru
ini ditemukan bahwa infeksi cutaneous anthrax pada manusia
menginduksi respon imun humoral terhadap PA dan LF (Liu et al., 2018).
Patofisiologi cutaneous anthrax saat ini belum dipahami dengan baik,
terutama mekanisme dimana patogen menghindari respon imun (Tunkel et
al., 2019). Makrofag memainkan pengaruh penting dalam pengendalian
infeksi melalui fagositosis spora dan menghancurkannya. Neutrofil yang
direkrut pada awal terjadinya infeksi juga berpengaruh pada upaya kontrol
awal infeksi (Moayeri et al., 2009). Sebuah penelitian menemukan bahwa,
konsentrasi sublytic dari lethal toxin, dimana kadarnya lebih rendah dari
yang diperlukan untuk dapat menginduksi terjadinya lisis makrofag, justru
akan menginduksi sel makrofag untuk mengekspresikan IL-1β dan TNF-α,
jalur signaling yang melibatkan MAPKK1, MAPKK2, dan MAPKK3
sangat penting dalam aktivasi makrofag dan secara langsung terlibat dalam
produksi sitokin, yaitu TNF α, IL-1β dan IL-6 (Liu et al., 2018). Sebuah
penelitian melaporkan adanya perlindungan terhadap lethal toksin pada
mencit yang diberikan imunisasi pasif terhadap IL-1β dan TNF-α atau
diberikan injeksi antagonis reseptor IL-1β (Laws et al., 2006).
Baru-baru ini penemuan jalur necroptosis merupakan terobosan
mayor di bidang kematian sel dalam dekade terakhir. Necroptosis, suatu
bentuk kematian sel nekrotik yang dimediasi oleh receptor-interacting
protein kinase 1 ( RIPK1) activity kinase, RIPK3, dan MLKL (mixed-
lineage kinase domain-like pseudokinase), yang dapat teraktivasi pada
kondisi defisiensi apoptosis. Modulasi aktivasi RIPK1 dengan
ubiquitination dan fosforilasi sangat penting dalam mengendalikan
necroptosis dan apoptosis. Necroptosis dapat terjadi ketika terjadi
commit
defisiensi apoptosis terhadap to user
sel, yang distimulasi oleh TNF-α. Dalam sel
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
18

yang kompeten dengan apoptosis, stimulasi TNF-α dapat menginduksi

apoptosis baik melalui jalur RIPK1-independent atau RIPK1 dependent.
Dalam sel-sel yang distimulasi TNF-α, aktivitas aktivasi RIPK1 kinase
memainkan pengaruh penting dalam mengatur necroptosis atau apoptosis.
RIPK1 yang teraktivasi memicu Caspase-8 untuk membangun kompleks
imun yang memediasi interaksi dengan RIPK3 dan membentuk kompleks
IL-1β dalam necroptosis (Laws et al., 2006).
Berdasarkan hasil ini disimpulkan bahwa syok sistemik dan
kematian akibat antraks dapat terjadi akibat efek dari sitokin proinflamasi
yang meningkat tinggi, seperti IL-1β dan TNF-α, yang diinduksi oleh
makrofag akibat stimulasi dari lethal toxin (Liu et al., 2018). Studi terbaru
menyimpulkan mengenai modulasi produksi TNF-α dan IL-1β oleh lethal
toxin. Edema toksin tampaknya juga mempengaruhi produksi sitokin,
melalui peningkatan cAMP intraseluler pada monosit, dengan
menginduksi produksi IL-6 (Decker, 2003; Laws et al., 2006).
Berbeda dengan efek stimulasi terhadap produksi IL-6, edema toxin
hanya dapat menginduksi sedikit atau sama sekali tidak mempengaruhi
produksi dan justru menghambat stimulasi TNF-α yang diinduksi oleh
Lipopolysaccaride (LPS). Fenomena ini muncul pada tingkat mRNA.
Menariknya, monosit yang di stimulasi menggunakan dibutyryl cAMP,
yaitu suatu analog aktif cAMP, menghasilkan sitokin dengan pola yang
identik seperti sel yang distimulasi oleh edema toxin, yang juga dapat
menghambat aktivitas fagositik pada manusia secara in vitro. Sebaliknya,
edema toxin dapat menstimulasi chemotaxis neutrofil polimorfonuklear
(PMN) manusia, serta dapat meningkatkan kerentanan host terhadap
infeksi dengan cara menekan fungsi PMN, yang dapat merusak sistem
pertahan tubuh dari host (Liu et al., 2018). Sel fagosit mengenali mikroba
melalui molekul yang terdapat pada permukaan sel mikroba yang
kemudian melekat pada reseptor di luar membran sel fagosit. Reseptor
adalah protein pada sel membran yang mengikat mikroba, hormon seperti
commit
insulin, faktor pertumbuhan, atau to usermakanan seperti karbohidrat atau
bahan
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
19

asam amino. Pengikatan reseptor memberi sinyal pada sel untuk

memberikan respon yaitu menelan mikroba yang telah terikat, mulai
membelah diri, memberikan sinyal kimia yang akan mengikat reseptor
pada sel lain, atau mengalami apoptosis. Setiap jenis sel memiliki reseptor
yang berbeda beda, tergantung pada sinyal apa yang dapat diterima.
Fagosit memiliki reseptor terhadap molekul yang biasa ditemukan pada
bakteri, dan sebagai respon terhadap terikatnya B. anthracis pada reseptor
sel fagosit, maka sel fagosit mengeluarkan pseudopodia panjang yang
disebut “Fingers” dari permukaan sel, untuk membasmi patogen. Pada saat
kuman patogen telah ditelan, maka bakteri tersebut akan masuk dan
dilapisi oleh semacam membran vesikel yang berada di dalam sel fagosit
yang kemudian mengisi vesikel tersebut dengan molekul-molekul yang
akan membunuh dan mencerna bakteri patogen. Beberapa molekul ini,
salah satunya adalah enzim yang merusak lapisan protein bakteri, selain itu
juga superoksida yang akan menonaktifkan enzim yang diperlukan bakteri
untuk tumbuh. Bacillus anthracis melakukan beberapa pertahanan diri
untuk menghindari kematian akibat fagositosis. Spora secara alami resisten
terhadap molekul-molekul di dalam sel fagosit seperti halnya mekanisme
pertahanan diri saat berada pada lingkungan yang tidak mendukung
terhadap pertumbuhan bakteri. Bahkan spora bisa berkembang menjadi sel
vegetatif di dalam vesikel fagosit dan mulai membelah diri. Dari dalam
sel, bakteri antraks akan membunuh sel fagosit, kemudian setelah sel
fagosit dihancurkan, bakteri akan terlepas ke dalam jaringan. Enzim
destruktif dan superoksida juga akan dilepaskan dari sel fagosit, sehingga
dapat membunuh sel terdekat. Bacillus anthracis dapat bereplikasi di
tempat terjadinya infeksi atau terbawa ke jaringan ke limfonodi terdekat.
Lokasi limfonodi tersebar di seluruh tubuh, tugasnya adalah menyaring
patogen dari cairan yang beredar pada seluruh jaringan tubuh (Liu et al.,
2018). Bacillus anthracis yang tumbuh di dalam kulit atau kelenjar getah
bening disekitar infeksi akan membuat suatu lapisan kapsul di sekitar sel,
sehingga sel fagosit tidak commit to user pada kapsul bakteri, kemudian
dapat menempel
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
20

B. anthracis dapat tumbuh dan berkembang tanpa ditelan oleh sel fagosit.
Sel fagosit kemudian mengeluarkan sinyal kimia yang disebut cytokines
untuk menarik sel fagosit lain ke lokasi infeksi, kumpulan dari sitokin
tersebut akan menginduksi kebocoran pada pembuluh darah di dekatnya,
sehingga sel fagosit yang melewati pembuluh darah dapat meninggalkan
sirkulasi dan bergerak ke arah situs infeksi untuk membantu menghadapi
bakteri, komplemen juga ikut ke tempat terjadinya infeksi, yang bertugas
menempel pada bakteri dan membuat sel fagosit lebih mudah untuk
menelan bakteri (Moayeri et al., 2015).
Pada cutaneous anthrax, sel-sel fagosit dan cairan yang bocor ke
dalam kulit menghasilkan benjolan dan pembengkakan kulit pada lokasi
situs infeksi. Limfonodi di sekitar tempat terjadinya infeksi, seperti di
ketiak atau leher, dapat ikut mengalami pembengkakan akibat dari
pertumbuhan B. anthracis dan akibat meningkatnya jumlah sel darah putih
yang mencoba melenyapkan bakteri tersebut (Liu et al., 2018). Pada
antraks kulit, sebagian besar bakteri masih berada pada tempat masuknya
infeksi, sel fagosit mungkin masih bisa menelan dan membunuh semua
bakteri dan Infeksi dapat dihilangkan tanpa pengobatan. Area hitam pada
kulit, disebabkan oleh kumpulan dari sel-sel fagosit yang mati dan sel-sel
kulit di sekitarnya, lesi tersebut akan menghilang karena sel-sel kulit baru
menggantikan sel yang telah mati (Moayeri et al., 2015).
a. Peran TNF-α pada Infeksi Antraks
Tumor necrosis factor-α (TNF-α) dikloning lebih dari 2 dekade
yang lalu dan identifikasi menjadi awal penemuan super family of
tumor necrosis factors (TNFs) dan reseptornya. Sinyal TNF-α melalui
dua reseptor transmembran, TNFR1 dan TNFR2, dan mengatur
sejumlah fungsi sel yang penting termasuk proliferasi sel,
kelangsungan hidup, diferensiasi, dan apoptosis. Makrofag adalah
produsen utama TNF-α dan juga sangat responsif terhadap TNF-α.
Produksi TNF-α yang terganggu dan pensinyalan reseptor TNF telah
commit beberapa
dikaitkan dengan patogenesis to user penyakit, termasuk rheumatoid
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
21

arthritis, penyakit Crohn, aterosklerosis, psoriasis, sepsis, diabetes, dan

obesitas. Hal ini membuktikan bahwa TNF-α memainkan peran
penting dalam mengatur kaskade sitokin pada banyak penyakit
inflamasi dan karena peran ini disebut sebagai “pengatur utama”
produksi sitokin inflamasi, telah diusulkan sebagai target terapeutik
untuk sejumlah penyakit, yang saat ini anti TNF-α dilisensikan untuk
mengobati penyakit inflamasi tertentu termasuk rheumatoid arthritis
(Parameswaran et al., 2010).
TNF-α merupakan agen pro-inflamasi yang kuat. Produksinya
dipicu oleh adanya trauma, infeksi, atau paparan LPS yang diturunkan
dari bakteri, dan telah terbukti menjadi salah satu mediator awal yang
paling banyak ditemukan pada jaringan yang mengalami inflamasi.
Peran TNF-α yang paling penting dalam mengatur produksi kaskade
sitokin pro inflamasi, oleh karena itu, TNF-α dianggap sebagai
"pengatur utama" produksi sitokin pro inflamasi. Makrofag
berpengaruh penting pada awal patogenesis antraks. Pada antraks
inhalasi, spora difagositosis oleh makrofag alveolar, dan bergerak ke
kelenjar getah bening regional. Spora berkembang biak di dalam
makrofag, yang akhirnya menyebabkan lisis makrofag (Liu et al.,
2018). Spora kemudian berubah menjadi bentuk vegetatif yang
berkembang biak di dalam kelenjar getah bening mediastinum dan
masuk ke aliran darah. Pada saat makrofag terinfeksi dengan spora,
TNF-α dilepaskan kurang lebih 5 jam setelah infeksi dan jumlah terus
meningkat hingga 7,5 jam pasca infeksi. Tidak ada sitokin lain yang
diinduksi pada infeksi makrofag oleh spora B. anthracis dengan
pengecualian IL-12, yang meningkat secara signifikan antara 5 dan 7,5
jam pasca infeksi dengan spora dari strain 7702 (Pickering et al.,
2004).
Lethal toxin dianggap menyebabkan lisis makrofag, yang disertai
dengan pelepasan sitokin, khususnya TNF-α dan IL 1β. Sitokin ini
commit
merupakan pemain utama to user
yang bertanggung jawab atas syok septik
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
22

dan kematian mendadak pada infeksi antraks sistemik (Wu et

al.,2013). Fungsi dari TNF-α adalah sebagai sitokin dalam proses
proliferasi sel, differensiasi, apoptosis, metabolisme lipid
dan koagulasi, yang dapat dilihat dengan menggunakan pengecatan
imunohistokimia, metode streptavidin dan biotin (Burnett dan Hunt,
2000).

b. Peran Caspase-1 pada Infeksi Antraks

Keluarga caspases (cysteinyl aspartic proteases) terdiri dari
keluarga protease sistein (caspase-1 hingga caspase-10, caspase-12
dan caspase-14 pada manusia), yaitu dikenal terutama karena peran
esensial mereka dalam apoptosis (Li & Yuan, 2008). Caspase-1
memainkan peran fundamental pada imunitas bawaan dan beberapa
penyakit inflamasi penting, dimana protease mengaktifkan sitokin pro-
inflamasi proIL-1β dan proIL-18. Caspase-1 sendiri diaktifkan di
kompleks inflammasome yang berbeda, yang berkumpul sebagai
respon terhadap berbagai stresor eksogen dan endogen. Terdapat bukti
bahwa caspase-1 mendukung kelangsungan hidup sel dengan aktivasi
NF-κB, induksi perbaikan membran dan regulasi sekresi protein
tertentu yang tidak konvensional (Sollberger et al., 2014).
Sebuah studi genetik pada tikus menunjukkan keberadaan
empat inflamasi berbeda yang merespon keragaman Pathogen
Asosiated Molecular Pattern (PAMP) dan DAMP. Kemudian
Inflamasome berkumpul dan mengaktifkan caspase-1 ketika DNA
terdeteksi di kompartemen sitosol makrofag yang terinfeksi virus DNA
cytomegalovirus dan virus vaksinia, atau patogen bakteri intraseluler
fakultatif Francisella tularensis. Inflammasome NLRP3 diperlukan
untuk aktivasi caspase-1 dan sekresi IL-1β/ IL-18 sebagai respon
terhadap berbagai patogen bakteri, virus dan jamur, serta zat kristal
yang relevan secara medis, dan pola molekuler terkait bahaya endogen
yang memiliki telah commit to user
dikaitkan dengan etiologi autoimun. Adanya
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
23

bakteri menyebabkan respon Inflammasome NLRC4, sehingga

inflammasome ini terbukti bertanggung jawab untuk aktivasi caspase-1
pada deteksi sitosol flagellin bakteri yang dikonservasi dari sistem
sekresi bakteri tipe III yang diekspresikan oleh patogen intraseluler
fakultatif seperti, S. Flexneri dan P. Aeruginosa. Adanya
inflammasome NLRP1b penting untuk aktivasi caspase-1 oleh LT,
faktor virulensi kunci dari B. anthracis (Van Opdenbosch et al., 2014).
Anthrax lethal factor merupakan komponen protease dari LT,
yang menginduksi pyroptosis pada strain mencit. Pada mencit,
sensitivitas terhadap kematian sel diinduksi oleh letal toksin yang
ditentukan oleh adanya sekuens pembelahan LF, yang mengaktifkan
caspase-1 dan menyebabkan kematian sel (Hellmich et al, 2012).
Aktivasi caspase-1 menginduksi pelepasan IL-1β dan IL-18. Sitokin
seperti IL-1β meningkatkan permeabilitas endotel di Blood Brain
Barrier (Xie, Auth and Frucht, 2011). Mikroorganisme patogen
mengaktifkan inflammasome NLRP3 melalui beberapa agonis dan
jalur. Adanya infeksi dari bakteri dan toksin menyebabkan aktivasi
inflammasome, yaitu sensor intraseluler yang mendeteksi mikroba,
faktor endogen dan gangguan dari lingkungan (Kim dan Jo, 2013).
Aktivitas NLRP3 diawali dengan sinyal pertama adanya PAMP,
yang mengarah ke peningkatan regulasi transkripsi dari kanonikal dan
non-kanonik NLRP3, sinyal kedua adanya PAMP atau (DAMPs),
seperti partikulat, kristal dan ATP, eflux K+, fluks Ca+, lisosom,
produksi spesies oksigen reaktif mitokondria (mtROS). Pembentukan
inflammasome akan mengaktifkan caspase-1, yang selanjutnya
memotong pro-IL-1β dan IL-18 (Swanson et al., 2019).
Pada infeksi antraks diawali dengan adanya kapsul poly-γ-d-
glutamic acid (PGA), yaitu salah satu faktor virulensi utama
B. anthracis yang menyebabkan infeksi yang sangat mematikan. Baru-
baru ini, upaya telah dilakukan untuk memasukkan PGA sebagai
commitDalam
komponen vaksin antraks. to usersuatu studi, adanya respon imun
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
24

bawaan yang ditimbulkan oleh PGA dibedakan menjadi makrofag

dengan phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) dan sel dendritik yang
diturunkan dari monosit manusia. Kapsul PGA diisolasi dari
supernatan kultur dari strain B. anthracis. Pemberian PGA
menyebabkan pelepasan ekstraseluler spesifik dari IL-1β. Peningkatan
IL-1β secara langsung berkorelasi dengan peningkatan aktivasi
caspase-1, yang juga dikenal sebagai IL-1β-converting enzyme (ICE).
Pelepasan ekstraseluler IL-1β sebagai respon terhadap PGA
bergantung pada ICE karena pemberian ICE inhibitor sebelum
pemberian PGA dapat memblokir induksi IL-1β. Hasil ini
menunjukkan bahwa B. anthracis PGA dapat meningkatkan produksi
IL-1β melalui aktivasi ICE, selain penting secara klinis dalam infeksi
dan autoimunitas, tidak adanya adaptor inflammasome pada mencit
BALB/c dan C57BL/6 yang mengekspresikan NLRP1b fungsional
dapat mencegah LT yang diinduksi oleh caspase-1 yang memiliki
pengaruh penting untuk autoproteolisis dan sekresi IL-1β (Van
Opdenbosch et al., 2014).

c. Peran IL-8 pada Infeksi Antraks

Interleukin-8 adalah salah satu sitokin yang dilepaskan oleh
fagosit dan sel jaringan saat ada paparan. Struktur IL-8 dibentuk dari
99 asam amino yang disekresi setelah adanya sinyal dari 20 residu,
dengan berat molekulnya 8.383 D, yang mengandung empat sistein
yang dibentuk dari dua jembatan sulfida. Sitokin ini tahan terhadap
panas, pH ekstrim, peptida plasma, dan terapi denaturasi lain, namun
cepat diinaktivasi saat berkurangnya ikatan disulfida. Strukturnya
dapat dilihat dengan rontgen kristalografi dan spektroskopi magnetik
resonansi nuklir. Jenis monormernya pendek, yang mengandung
domain N-terminal dengan dua jembatan disulfida, dengan tiga ikatan
α helix terminal dan antiparalel β (Li J & Yuan J, 2008). Sitokin ini
merupakan kemotaktikcommit to user
regulator pada neutrofil, yang diproduksi oleh
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
25

sel monosit, tipe sel leukosit lain: neutrofil, eosinofil, sel Natural
Killer, sel mast, fibroblast dan sel endotelial, yang diinduksi oleh
berbagai stimulus, IL-1β, TNF-α, agen infeksi, iskemia, sel
neoplasma, trauma atau gangguan homeostasis jaringan (Li et
al.,2013).
Interleukin-8 telah lama dikenal memiliki aktivitas anti-
inflamasi, yang telah terbukti pada berbagai model infeksi,
peradangan, dan kanker. Beberapa jenis sel mengekspresikan reseptor
untuk IL-8 dan berperan dalam menghasilkan molekul yang aktif baik
secara lokal maupun sistemik. Peningkatan ekspresi IL-8 dan / atau
reseptornya telah ditandai pada banyak kondisi inflamasi kronis,
termasuk psoriasis, ARDS, COPD, dan RA serta banyak kanker, dan
peningkatan regulasi sering berkorelasi dengan aktivitas penyakit.
Interleukin-8 merupakan kelas kemokin CXC yang ampuh dan
aktivator neutrofil dan sel imun lainnya (Qazi et al., 2011).

Gambar 2.6 Interleukin 8 pada respon inflamasi (McChuaig dan Martin, 2013).
commit
Keterangan : Adanya infeksi bakteritomenyebabkan
user TLR4 mengaktifkan IL-8, dan
peningkatan kadar TNF-α menyebabkan aktivasi pada IL-8.
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
26

Adanya infeksi B. anthracis memicu ekspresi IL-8 melalui jalur

PAMP, merupakan bagian sistem kekebalan tubuh bawaan, yang
terikat dengan Toll like receptor (TLR). Contoh PAMP adalah
Lipopolysaccaride (LPS), suatu endotoksin membran pada bakteri
gram negatif. Lipopolysaccaride secara khusus terikat TLR4,
sedangkan flagellin akan terikat TLR5, sedangkan PAMP lain seperti
bakteri gram positif, peptidoglikan dan double-stranded RNA (dsRNA)
virus, akan terikat oleh TLR2 dan 3, sedangkan CpG unmethylated
terikat oleh TLR9. Perbedaan tersebut akan mengakibatkan reaksi
inflamasi yang ditimbulkan oleh bakteri, virus dan jamur (Min dan
Dhong, 2013). Toll Like Receptor (TLR) 1, TLR2, TLR4, TLR5, dan
TLR6 akan diekspresikan ke sel membran. Toll Like Receptor 3,
TLR7, TLR 8, dan TLR9 diekspresikan dalam endosome. Semua TLR,
dapat menginduksi NFκB dan aktivasi p38/JNK, kecuali TLR3 (Yang
dan Seki, 2012). Produksi IL-8 diatur melalui aktivasi dua faktor
transkripsi, yaitu NF-κB dan AP-1. Faktor NF-κB memiliki peran
di Th1 tergantung respon tipe delayed hypersensitivity. Aktivasi NF-
κB akan meningkatkan VCAM-1, E-selectin dan ICAM-1, sedangkan
penghambatan NF-κB mengurangi adhesi dan transmigrasi leukosit.
Aktivasi NF-κB terlibat juga dalam apoptosis. Misalnya, aktivasi
NF-κB dapat menyebabkan induksi apoptosis. Hal ini menunjukkan
bahwa NF-κB merupakan regulator penting pada ekspresi sitokin pro-
inflamasi. Sintesis TNF-α, IL-1 β, IL-8, IL-6 dan cyclooksigenase 2
(Cox-2) dimediasi oleh NF-κB (Liu et al., 2013; McChaig dan Martin,
2013).

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
27

Gambar 2.7. Jalur Toll like receptor (Yang dan Seki., 2012).
Keterangan: IL-6: interleukin -6; TNF: Tumor Necrosis Factor Alpha; IRAK;
interleukin-1 receptor-associated kinase; TLR4: Toll like receptor 4; Th2: T helper 2

d. Peran E-selectin pada Infeksi Antraks

Selectin adalah molekul yang diekspresikan pada sel endotel
yang telah diaktifkan oleh sitokin. E-selectin berperan dalam proses
rekrutmen leukosit yang bersirkulasi. Rekrutmen leukosit diawali
dengan aktivasi endothelium vascular, dan ekspresi molekul adhesi
termasuk selectins. Anggota dari lektin glikoprotein pada permukaan
sel ini diekspresikan oleh sel endothelial (E-selectin), endotelium dan
megakariosit/ trombosit (P-selectin), dan leukosit (L-selectin).
Ekspresi basal dari E-selectin biasanya rendah dan beberapa mediator
inflamasi, termasuk TNF-a, IL-1, CD40 ligand dan LPS, yang
merangsang ekspresi dengan mengaktifkan transkripsinya. Aktivasi ini
dimediasi melalui promotor yang bergantung pada NF-kB.
Menariknya, stimulasi ekspresi E-selectin oleh TNF-a, IL-1, atau
Ligan CD40 membuat sel endotel untuk sementara tidak responif
commit to user
terhadap rangsangan ulang dengan cara yang sama (Milstone et al.,
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
28

2000).
Pengukuran E-selectin menggunakan metode pemeriksaan
imunohistokimia dengan antibodi monoklonal terhadap E-selectin.
Cara penilaiannya secara kuantitatif visual dengan mikroskop cahaya
pembesaran 400x pada sel yang mengekspresikan E-selectin, yang
dihitung dari jumlah sel-sel tersebut yang imunoreaktif berwana coklat
perak pada membran sel, dan jumlah semua sel imunoreaktif yang
ditemukan kemudian dilakukan skoring.
Selectin ini adalah lektin tipe C yang diekspresikan pada
permukaan leukosit, trombosit dan sel endotel yang teraktivasi, dengan
memicu penarikan leukosit dan trombosit pada endotel vaskular dan
hal ini penting bagi limfosit yang menuju ke organ limfoid sekunder
dan untuk perekrutan leukosit ke lokasi peradangan (McEver, 2002;
Cummings dan McEver, 2009). Selectin ini terbagi menjadi tiga, yaitu:
L-selectin, yang diekspresikan pada semua leukosit kecuali sel-T yang
diaktifkan, E-selectin yang diekspresikan oleh endotel yang diaktivasi
oleh sitokin dan P-selectin, yang diekspresikan oleh trombosit dan
endotel yang teraktivasi. E-selectin diekspresikan dalam sel endotel
yang distimulasi sitokin dengan mengenali sejumlah glikoprotein pada
leukosit (Ivetic dan Ridley, 2004; Cummings dan McEver, 2009).
Aktivasi endotel terhadap respon inflamasi sistemik pada infeksi
bakteri, yang di awali dengan pelepasan penanda endotel yang larut ke
dalam sirkulasi, ditandai dengan peningkatan kadar CAMs dalam
plasma (Golias et al., 2007). Infeksi antraks akan menghasilkan toksin,
yaitu lethal toxin, yang merupakan faktor virulensi utama dari
B anthracis, dimana akan meningkatkan ekspresi vascular cell
adhesion molecule 1 (VCAM-1) pada sel endotel manusia sebagai
respon imun dan menyebabkan timbulnya vaskulitis (Warfel dan
D’Agnillo, 2008).

commit
e. Peran Malondialdehyde padatoinfeksi
user antraks
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
29

Stress oksidatif adalah keadaan dimana terjadi adanya perbedaan

antara jumlah oksidan dan antioksidan, dengan jumlah oksidan yang
lebih tinggi. Oksidan merupakan senyawa reaktif yang dapat
memindahkan elektron dari molekul lain (Ayala et al., 2014). Hal ini
menyebabkan kerusakan seluler dan molekuler yang selanjutnya
menyebabkan kerusakan jaringan (Chaple dan Matthews, 2007).
Adanya ROS menyebabkan kerusakan jaringan dengan berbagai
mekanisme, yang meliputi kerusakan DNA, peroksidasi lipid,
kerusakan protein termasuk asam hialuronat gingiva dan proteoglikan,
dan oksidasi enzim penting (misalnya, antiprotease, α-antitripsin,
stimulasi pelepasan sitokin proinflamasi oleh monosit dan makrofag
dengan menipiskan senyawa tiol intraseluler dan mengaktifkan faktor
inti). Stress oksidatif umumnya muncul setelah terpapar ROS dengan
konsentrasi yang relatif tinggi dan/atau penurunan sistem pertahanan
antioksidan terhadap ROS.
Malondialdehyde merupakan produk akhir dari peroksidasi lipid
dalam tubuh. Kadar MDA tinggi menunjukkan adanya stress oksidatif
di awal proses terjadinya penyakit (Durackova and Zdenka, 2009).
Pada saat terjadi stress oksidatif, ROS dan Reactive halogen species
(RNS), dapat menyerang asam lemak tak jenuh ganda dari membran
lipid yang menyebabkan peroksidasi lipid dan disorganisasi struktur
dan fungsi sel. Peroksidasi lipid adalah mekanisme cedera sel yang
digunakan sebagai indikator stres oksidatif dalam sel dan jaringan.
Peroksida lipid yang berasal dari asam lemak tak jenuh ganda tidak
stabil dapat terurai membentuk serangkaian kompleks produk
degradasi. Diantaranya, senyawa karbonil reaktif merupakan MDA
yang paling melimpah (El-Badry, 2006). Beberapa penelitian telah
menunjukkan bahwa MDA merupakan komponen pengukuran
peroksidasi lipid yang bersifat akurat, stabil dan dapat menjelaskan
pengaruh stres oksidatif pada suatu penyakit (Mulianto, 2020).
Manusia memilikicommit to user
sistem keseimbangan antara oksida dan
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
30

antioksidan secara terorganisir dan sinergis, baik antioksidan enzimatik

maupun non-enzimatik. Antioksidan melindungi sel tubuh terhadap
kerusakan oksidatif dan dapat mencegah pengeluaran produk oksidatif.
Pada sistem pertahanan enzimatik, catalase (CAT), glutathione
peroxidase (GPx), dan superoxide dismutase (SOD) memainkan
pengaruhan utama. Sel dan plasma memiliki free radical scavengers
non-enzimatik seperti vitamin C dan E dan kelompok sulfhidril
(Durackova and Zdenka, 2009). Antioksidan adalah molekul yang
memiliki kemampuan untuk mengimbangi efeknya oksidan sebelum
ini menyerang sel. Ada sistem antioksidan yang sangat kompleks
dalam sel manusia, bekerja sama untuk melindungi tubuh akibat
radikal bebas (Mulianto, 2020).
Antioksidan dapat bersifat endogen atau eksogen, sebagai bagian
dari diet atau melalui suplemen makanan. Mereka bisa juga
dikonsumsi sebagai senyawa yang tidak menetralkan radikal bebas,
melainkan meningkatkan aktivitas endogen (Durackova dan Zdenka,
2009). Menghitung kadar MDA merupakan cara menilai radikal bebas
secara tidak langsung dan cukup mudah. Analisis radikal bebas secara
langsung sangat sulit karena senyawa radikal ini sangat tidak stabil dan
cenderung merebut elektron senyawa lain agar lebih stabil. Reaksi ini
berlangsung sangat cepat, sehingga pengukurannya sangat sulit
(Durackova dan Zdenka, 2009).
Malondialdehyde ini ditemukan pada seluruh cairan di dalam
tubuh, antara lain urin, plasma, cairan sendi, cairan empedu, cairan
getah bening, cairan amnion, cairan perikardial, dan cairan seminal.
Plasma dan urin merupakan sampel yang paling umum digunakan
karena paling mudah didapat dan paling tidak invasif.
Malondialdehyde merupakan marker yang sering digunakan dalam
penelitian, karena dianggap sebagai marker peroksidasi lipid in vivo
yang baik, pada manusia maupun pada binatang, yang signifikan
commit to user
akurat dan stabil dibandingkan senyawa lainnya. Malondialdehyde
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
31

digunakan sebagai biomarker untuk stress oksidatif dengan alasan,

yaitu : (1) kadar MDA akan meningkat sejalan dengan proses stres
oksidatif, (2) jumlahnya dapat diukur secara akurat, (3) mempunyai
sifat stabil dalam sampel cairan tubuh yang diisolasi, (4) merupakan
produk spesifik dari peroksidasi lemak, (5) tidak dipengaruhi oleh
adanya variasi diurnal dan tidak dipengaruhi oleh kandungan lemak
dan (6) ada dalam jumlah yang dapat terdeteksi pada semua jaringan
tubuh, sehingga memungkinkan untuk menentukan referensi interval.
Pada infeksi antraks, kadar MDA meningkat secara signifikan
(Karadas et al., 2016).

f. Manifestasi Infeksi Antraks di Kulit

Cutaneous anthrax merupakan 95% kasus yang terjadi di dunia,
diawali dengan infeksi oleh spora bakteri batang gram positif
B. anthracis yang masuk melalui lesi kulit berupa abrasi, luka, atau
gigitan serangga (Dun dan Rosen, 2019). Spora akan berubah menjadi
bentuk vegetatif di jaringan subkutan, yang kemudian membelah,
menghasilkan eksotoksin, yang dapat menyebabkan terjadinya edema
dan nekrosis. Spora yang di fagositosis makrofag akan berubah
menjadi bentuk vegetatif kemudian dibawa ke kelenjar getah bening
regional dan menimbulkan limfadenitis hemoragik, selanjutnya
menyebar secara hematogen dan limfogen sehingga dapat
menyebabkan septikemia dan toksemia (Tanzil, 2013).

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
32

Gambar 2.8 Faktor-faktor Penyebab Stress Oksidatif (Durackova and Zdenka,

2009)
Keterangan: Faktor merokok, radiasi, ROS, inflamasi dapat menyebabkan terjadinya
stress oksidatif. ROS = reactive oxygen species

Antraks kulit ini sering disebut sebagai black eschar. Penderita

biasanya mempunyai riwayat kontak dengan hewan atau produk hewan
tersebut. Lesi pertama terjadi dalam waktu tiga sampai lima hari pasca
inokulasi spora, yang sering terjadi pada daerah terbuka, yaitu pada
ekstremitas atas dan bawah, terutama tangan, jari, betis, tungkai, wajah
dan leher (Tekin et al., 2015). Secara klinis, antraks muncul sebagai
papula eritema atau pruritus tanpa rasa sakit yang mirip dengan gigitan
serangga dan berkembang menjadi lesi ulserasi dengan eschar sentral
(Tekin et al., 2015; Dun dan Rosen., 2019). Dalam waktu 12-36 jam
setelah infeksi akan timbul papula, selanjutnya dalam kurun waktu 24-
36 jam, papula berubah menjadi vesikel yang berisi cairan berwarna
biru gelap dan membentuk cincin vesikel diikuti oleh ulserasi papula
sentral yang mengering dan meninggalkan bekas berupa eschar
kehitaman pada bagian pusat lesi yang khas disekitar ulkus disertai
adanya eritema dan edema (Tanzil, 2013; Timofeev et al., 2019).
Lesi kulit antraks tidak gatal dan tidak nyeri. Biasanya, pada hari
kelima atau keenam eschar kehitaman akan menebal dan melekat erat
pada jaringan dasarnya. Terdapat limfadenopati regional dan juga
commit to user
terjadi pembengkakan di wajah atau leher yang bisa berkembang
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
33

menjadi meningitis. Demam, nanah dan nyeri terjadi jika terdapat

infeksi sekunder. Ditemukannya lesi eritema dan nyeri pada daerah
radang biasanya menunjukkan infeksi sekunder oleh kuman lain
seperti Staphylococcus aureus dan Streptococcus sp. (Timofeev et al.,
2019).

Gambar 2.9 Proses infeksi antraks di kulit (Gupta, 2020).

Keterangan: proses masuknya infeksi anthrax pada kulit, dimulai dari abrasi pada
dermal, kemudian proses imunologi yang terjadi yang pada akhirnya terjadi eschar
berwarna hitam.

Lesi antraks kulit umumnya sembuh sendiri tanpa meninggalkan

parut. Komplikasi antraks kulit adalah terjadinya bula multipel disertai
edema hebat dan renjatan. Edema maligna ini jika mengenai leher dan
di dalam dada akan menyebabkan gangguan pernafasan. Pada
pemeriksaan histologik, antraks kulit memperlihatkan nekrosis, edema
hebat dan infiltrasi limfosit (Tanzil, 2013). Proses infeksi kulit dimulai
sebagai akibat dari spora antraks yang berkoloni di kulit. Lesi
berkembang menjadi eschar hitam tanpa rasa sakit. Eschar ini
biasanya berkembang dalam 2-5 hari setelah terpapar. Selama tahap
commit to user
infeksi ini, germinasi spora tingkat rendah dapat terjadi di tempat
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
34

utama infeksi yang menyebabkan edema dan nekrosis lokal. Meskipun

infeksi ini seringkali tetap terlokalisasi, beberapa pasien mengalami
gejala sistemik.
Penyakit sistemik akibat antraks kemungkinan disebabkan oleh
fagositosis oleh makrofag di dermis yang keluar dari saluran limfatik
dan kapiler darah. Pada infeksi antraks kulit, germinasi umumnya
terjadi langsung di dalam inang. Makrofag inang yang membawa B.
anthracis bermigrasi kembali ke pembuluh darah dan duktus limfatik
menuju ke kelenjar getah bening lokal dan regional (Misgie et al.,
2015). Tahapan terjadi luka pada antraks kulit adalah (Suggu dan
Konakanchi, 2020) :
a. Setelah masa inkubasi sekitar 7 hari (kisaran waktu 1-12 hari),
antraks kulit dimulai sebagai papula, biasanya di area yang terbuka,
seperti kepala, leher atau ekstremitas atas. Papula dapat menyerupai
gigitan serangga atau laba-laba dan gatal.
b. Papula membesar dan berkembang menjadi vesikula sentral atau
bula, non pitting edema.
c. Vesikel sentral menjadi hemoragik, nekrotik dan dapat dikelilingi
oleh vesikula satelit.
d. Bentuk eschar hitam sentral dan eritema serta edema di sekitarnya
meningkat. Ulkus nekrotik biasanya tidak menimbulkan rasa sakit
yang merupakan ciri pembeda penting dari gigitan laba-laba
lainnya yang menyerupai infeksi antraks kulit.
e. Pustula jarang ditemukan pada lesi antraks. Lesi primer yang
muncul berupa papula atau vesikel.
f. Lesi berkembang dari papula ke vesikula menjadi ulkus ke eschar
dengan atau tanpa terapi antibiotik karena perkembangannya
dipengaruhi oleh produksi toksin B. anthracis.

g. Lesi kulit dapat soliter atau multipel. Jika lesi multipel biasanya
commit
ditemukan di bagian tubuhto usersama.
yang
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
35

h. Gejala klinis limfadenopati regional, fatigue, demam, dan/atau

menggigil dapat menyertai infeksi antraks kulit.

8. Propolis Gunung Lawu

Lebah madu dapat menghasilkan berbagai manfaat, antara lain
madu, propolis, bee pollen dan royal jelly. Madu adalah cairan manis yang
diproses oleh lebah madu, dengan kandungan nutrisi yang tinggi, dengan
banyak manfaat, antara lain sebagai dalam hal menyembuhkan luka dan
penyakit usus, sedangkan royal jelly adalah zat seperti jelly putih dengan
konsistensi kental, yang merupakan produk sekresi kelenjar hipofaring dan
mandibula dari lebah pekerja yang hanya dikonsumsi oleh lebah ratu.
Royal jelly ini juga diberikan ke larva lebah madu setelah menetas, yang
merupakan makanan khusus bagi larva muda pada 2-3 hari pertama,
dengan kandungan utamanya adalah royalactin, yaitu senyawa utama yang
berpengaruh penting dalam perubahan morfologis larva menjadi lebah
ratu. Makanan super ini yang berpengaruh pada umur panjang ratu lebah
dibandingkan dengan lebah lainnya (Kocot et al., 2018).
Propolis merupakan resin yang dikumpulkan dari berbagai sumber
tanaman untuk kemudian dicampur dengan air liur lebah madu dan
menghasilkan produk lebah yang bermanfaat (Marcucci et al., 2001;
Salatino et al., 2005). Bentuk, aroma dan komposisi kandungan propolis
sangat bervariasi, tergantung dari banyak faktor. Warna propolis dapat
putih kekuningan, coklat, kuning atau hijau. Beberapa sampel memiliki
tekstur, rapuh keras, elastis dan kenyal. Kata propolis berasal dari bahasa
Yunani, pro yang berarti pertahanan dan polis berarti kota, sehingga
propolis dapat diartikan produk yang terlibat dalam pertahanan dari lebah
(Salatino et al., 2005), yang juga merupakan bahan dalam pembuatan,
pemeliharaan dan perlindungan sarangnya (Marcucci et al., 2001).
Kualitas propolis tergantung dari letak geografi dan lingkungan (Pereira et
al., 2009). Komposisinya juga dipengaruhi oleh banyak faktor, antara lain
jenis tanaman, musim dancommit
faktortolingkungan
user (jenis tanah, cuaca, faktor
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
36

genetik serta metode pengolahan). Hal ini menyebabkan propolis sangat

bergantung pada lokasi dan lingkungan (Baltrusaityte et al., 2007).
Unsur utama propolis adalah lilin lebah dan resin yang berasal dari
tanaman. Aktivitas biologisnya ditentukan oleh zat tanaman ini berasal,
sehingga meskipun propolis jelas merupakan produk binatang, proporsi
yang cukup besar dari komponen yang berpengaruh dalam menentukan
aktivitas biologisnya. Resin merupakan kandungan terbanyak yang dapat
ditemukan dalam ekstrak alkohol, yang dihasilkan dari berbagai negara
sebagai makanan pelengkap atau alternatif (Salatino et al., 2005). Senyawa
yang ada dalam propolis, yaitu resin (50%), lilin (30%), minyak esensial
(10%), serbuk sari (5%) dan senyawa organik lainnya (5%)
(Sivasubramaniam dan Seshadri, 2005; G´omez-Caravaca et al., 2006).
Produk dari lebah mempunyai efek sebagai antioksidan, antara lain
flavonoid, cinnamic acid dan terpenoid (Kocot et al., 2018). Senyawa-
tersebut berpengaruh dalam aktivitas biologis, antara lain sebagai
antioksidan, anti-inflamasi, antiparasit, antiproliferatif antifungal dan
antiprotozoa (Lotfy, 2006 ; El-Bassuony dan Abouzid., 2010). Propolis
merupakan sumber potensial antioksidan alami seperti asam fenolat dan
flavonoid. Efek biologisnya yang luas telah dikenal dan digunakan sejak
jaman dahulu, antara lain efek dalam stres antioksidan, yang mendasari
penyakit, seperti kanker, diabetes, dan aterosklerosis (Kurek et al., 2013).
Pengaruh faktor biologi, zona geografi, lingkungan, musim serta jenis
larutan ekstraksi dapat memengaruhi jumlah dan kualitas produksi
propolis (Pereira et al., 2009 ; Kocot et al., 2018)
Propolis terdiri dari bagian paling dalam, di mana terdapat sisir,
dilapisi dengan lapisan tipis propolis (resin tanaman yang dicampur
dengan lilin) menciptakan “selubung propolis” di sekitar koloni (Simone-
Finstrom dan Spivak, 2010). Propolis yang dikenal juga sebagai “bee
glue”. Propolis berfungsi sebagai penutup lubang dan retakan dalam
rekonstruksi sarang lebah, menghaluskan permukaan bagian dalam sarang
lebah, mempertahankan commit
suhu to
di user
dalam sarang (35°C), mencegah
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
37

pelapukan dan invasi oleh predator, yang menjadi lunak dan lengket saat
dipanaskan, serta memiliki bau yang khas (Pasupuleti et al., 2017).
Caffeic Acid Phenethyl Ester merupakan antioksidan fenolik, yang
memperlihatkan aktivitas anti-inflamasi (Armutcu et al., 2015), antiviral
dan anti-tumor (Ulasli et al., 2013) dan , merupakan penghambat yang
poten dan spesifik terhadap aktivasi NF-κB (Fitzpatrick et al., 2001).
Adanya peningkatan ROS atau NF-κB dapat diminimalkan dengan
pemberian CAPE (Murtaza et al., 2014), yang juga dapat menghalangi
produksi ROS pada neutrofil manusia dan dalam sistem xanthine oxidase
pada konsentrasi 10 mol/L (Irmak et al., 2003). Zat aktif lainnya adalah
quersetin, yang dapat mengurangi produksi nitric oxide (NO) yang di
induksi lipopolisakarida, ekspresi inducible nitric oxide synthase (iNOS),
dan pelepasan TNF-α serta IL-6, sehingga dapat mengurangi aktivasi
MAPK dan NF-κB, yang merupakan kompleks faktor transkripsi yang
sangat berpengaruh dalam ekspresi gen-gen pro-inflamasi (Lee et al.,
2010).
Total kandungan yang terdapat pada EEP Gunung Lawu adalah
CAPE sebanyak 30,24 ± 3,53 x 10-6 g dan quersetin sebanyak 4,42 ± 0,50
x 10-6 g (Sarsono et al., 2012). Efek anti-inflamasi ditunjukkan pada hasil
penelitian yang menyatakan pemberian propolis Gunung Lawu dapat
menurunkan HMGB-1 pada mencit model infertilitas jantan. Efek EEP
sebagai antioksidan telah terbukti pada dosis 200 mg/kgBB/hari yang
diberikan selama 30 hari, dapat menurunkan kadar MDA serum, serta
memperbaiki luka pada mencit Balb/C model kaki diabetik (Diding et al.,
2013).
Propolis ini tidak dapat langsung digunakan, namun harus dilakukan
pemurnian melalui ekstraksi menggunakan pelarut (Pietta et al. 2002).
Penelitian Cunha dalam Sforcin dan Bankova (2011) menyatakan bahwa
pelarut berbeda akan menghasilkan komponen yang berbeda serta
berpengaruh terhadap aktivitasnya. Saat ini propolis dapat diekstrak
dengan menggunakan aircommit to user
dan etanol pada berbagai konsentrasi sebagai
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
38

pelarut. Isosaquranetin, quersetin dan kaempferol pada umumnya

diekstrak dari campuran propolis dengan etanol 60%. Etanol 70%
umumnya digunakan untuk mengekstrak pinocembrin dan sakuranetin.
Etanol 80% digunakan untuk mengekstrak kaempferide, acacetin, dan
isorhamnetin dari propolis. Propolis yang diekstrak dengan etanol 60-80%
sangat menghambat pertumbuhan mikroba dan yang diekstrak dengan
etanol 70-80% mempunyai aktivitas antioksidan terbesar. Adapun 80%
ekstrak etanol propolis sangat menghambat aktivitas enzim hyaluronidase.
Konsentrasi tertinggi senyawa fenolik diperoleh dengan menggunakan
pelarut etanol pada konsentrasi yang lebih rendah dan konsentrasi propolis
mentah yang lebih tinggi. Etanol merupakan pelarut yang sering, namun
memiliki beberapa kelemahan, seperti memiliki bau yang kuat, rasa yang
tidak enak, dan konsentrasi etanol yang tinggi (Cottica et al., 2011).
Konsentrasi rata-rata CAPE pada EEP adalah 12,268 μg/mL dan
konsentrasi rata-rata CAPE pada propolis ekstrak air sebesar 5,564 μg/mL.
Hal tersebut terlihat bahwa konsentrasi CAPE pada EEP lebih tinggi
daripada ekstrak air (Hastuti et al., 2013). Kandungan CAPE di wilayah
Karanganyar adalah 30,24 ± 3,53 x 10-6 g, lebih tinggi dibandingkan
wilayah lain, misalnya Sragen, dengan kandungan 12,40 ± 0,77 x 10-6 g
atau Wonogiri, dengan kandungan 17.00 ± 1.84 x 10-6 g. Kandungan
CAPE ini lebih dipengaruhi oleh jenis tanamannya dan bukan dari
ketinggian wilayahnya (Hadinoto et al., 2013).
Dosis propolis dibedakan berdasarkan penggunaannya, yaitu untuk
jangka pendek dan jangka lama. Perhitungan dosis didasarkan pada ssupan
polifenol total rata-rata pada manusia, yang diperkirakan antara 600
hingga 1800 mg/hari, kemudian perkiraan rata-rata asupan harian propolis,
yang berkisar 0,5-1,0 g. Konsentrasi polifenol yang terjadi dalam sampel
propolis yang diuji (7,21 mg/g). Polifenol harian manusia dari propolis
berkisar 3,61 hingga 7,21 mg, setara 0,2% -1,2% dari total asupan
polifenol yang berasal dari semua makanan dan minuman diet lainnya
(Zamora-Ros et al., 2016).commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
39

Dosis propolis untuk penggunaan pada hewan dihitung

menggunakan dosis setara manusia polifenol human equivalent dose
(HED), yaitu sekitar 17 mg/kg untuk 70 kg orang. Dosis propolis pada
hewan diperoleh dengan rumus berikut :
DOSIS HEWAN = (HED × Km Human) / Km mouse.
Human Equivalent Dose adalah dosis setara manusia, Km adalah
faktor koreksi, dengan Km human adalah 37 dan Km mouse adalah 3.
Berdasarkan hasil diatas, dosis harian tikus sebagai hewan coba adalah
210 mg/kg polifenol, sehingga asupan polifenol harian tertinggi yang
berasal dari propolis sebesar 1,2%, dosis polifenol untuk hewan percobaan
sekitar 2,5 mg/kg sesuai dengan sekitar 350 mg/kg propolis. Untuk
penggunaan jangka pendek, dosis propolis adalah 200 hingga 500 mg/kg
(sesuai dengan 140% polifenol) yang biasa dikonsumsi dengan propolis.
Untuk penggunaan jangka panjang dapat digunakan dosis 100 mg/kg
(sesuai dengan 30% polifenol yang biasanya dikonsumsi dengan propolis),
250 mg/kg (setara dengan 70% polifenol yang biasa dikonsumsi dengan
propolis) atau 500 mg/kg (setara dengan 140% polifenol yang biasa
dikonsumsi dengan propolis). Selama 30 hari. Analisis dilakukan pada
sampel plasma yang diambil satu jam setelah asupan propolis terakhir
setelah pemberian, menunjukkan tidak adanya komponen propolis (Curti
et al., 2019).
Propolis yang digunakan pada penelitian berasal dari lereng Gunung
Lawu, dari peternak lebah di Kecamatan Kerjo, Kabupaten Karanganyar,
Surakarta. Pembuatan ekstrak dilakukan di Laboratorium PAU UGM
Yogyakarta, yaitu dengan metode maserasi. Cara metode maserasi adalah
propolis kering dibersihkan dan diblender hingga halus, kemudian
ditimbang sebanyak 500 g, dan dimasukkan ke dalam gelas beaker.
Selanjutnya ditambahkan 3,75 liter etanol 70% sebagai pelarut. Campuran
yang dihasilkan, kemudian disimpan dalam tujuh hari, pada ruangan tanpa
sinar matahari, kemudiancommit
dikocokto atau
user diaduk dengan spatula sebanyak
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
40

dua kali tiap hari (Trusheva et al., 2007). Tahap selanjutnya dilakukan
penyaringan dengan corong buchner dan kertas saring untuk memisahkan
filtrat dari ampas ke dalam tabung erlemeyer sehingga diperoleh filtrat.
Hasil filtrasi (penyaringan) yang didapat dievaporasi dengan rotary
evaporator pada suhu 45oC dengan tekanan vakum (<1 atm) selama
kurang lebih 4 jam sehingga diperoleh ekstrak propolis yang
konsentrasinya kental (± 100 g). Selanjutnya ekstrak propolis diuapkan
selama 24 jam di dalam gelas beaker sehingga kandungan etanolnya
menguap (Fu et al., 2005).
Pemberian propolis pada infeksi antraks belum pernah dilakukan,
analisis pada respon inflamasi dan stress oksidatif merupakan fokus utama
penelitian ini. Propolis telah digunakan sejak dahulu kala antara lain untuk
pengobatan, produk makanan dan kosmetik. Faktanya, berbagai sifat
biologis propolis telah dibuktikan sebagai antibakteri, antijamur,
antiprotozoa, antioksidan, antitumor, anti-inflamasi, anestesi,
penyembuhan luka, imunomodulator, antiproliferative dan antikariogenik
(Toreti et al., 2013; Vijay, 2013; Mohamad et al., 2015; Jose, 2016).
Komposisi kimia propolis sangat dipengaruhi oleh jenis vegetasi yang
dikunjungi lebah dan musim. Propolis umumnya terdiri 50-60% resin dan
balsam, 30-40% lilin, 5-10% minyak esensial dan aromatik, 5% serbuk
sari, dan 5% senyawa lain (Jose, 2016). Studi menunjukkan bahwa
propolis berfungsi sebagai anti-inflamasi yang ampuh untuk peradangan
akut dan kronis (Vincenzo et al., 2017). Zat terkandung dalam propolis
yang dapat menghambat siklooksigenase karena prostaglandin (Vijay,
2013; Washio et al., 2015). Pengujian berbasis antibodi ini biasanya
divalidasi terhadap pengukuran MDA dengan high-performance liquid
chromatography (HPLC) dan menunjukkan kinerja yang baik dengan
peningkatan spesifisitas (Kandar and Stramova, 2015, Washio et al.,
2015).
Propolis mentah mengandung zat pengotor seperti kayu, lilin, serbuk
sari bahkan lebah yang commit
mati, to user perlu dilakukan pengamatan
sehingga
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
41

makroskopis terhadap sampel untuk menghilangkan komponen tersebut

dan memurnikannya sebelum preparasi ekstrak. Pelarut yang sering
digunakan untuk ekstraksi adalah alkohol, yaitu metanol dan etanol.
Pelarut yang paling sering digunakan adalah etanol 70% (Sforcin dan
Bankova, 2011). Air juga telah digunakan sebagai pelarut, namun air
melarutkan sebagian kecil unsur propolis, sekitar 10% dari beratnya,
sedangkan 70% etanol dapat melarutkan 50–70%. Ekstrak propolis dibuat
dengan cara maserasi (Trusheva et al., 2007).
Ekstraksi adalah proses memindahkan satu atau lebih senyawa yang
dari lokasi aslinya ke lokasi yang terpisah secara fisik. Pada dasarnya,
proses ini memisahankan suatu senyawa dari zat padat, cair atau gas
menjadi pelarut yang berbeda. Isolasi adalah teknik pemisahan di mana
kita dapat memperoleh senyawa yang dimurnikan. Karena itu kita dapat
menyebutnya “pemurnian” juga. Dalam teknik ini, kita dapat
menghilangkan semua zat asing atau yang terkontaminasi untuk
mendapatkan senyawa yang diinginkan (Trusheva et al., 2007).
Perbedaan lain antara ekstraksi dan isolasi adalah bahwa kemurnian
produk akhir dalam ekstraksi rendah sedangkan pada Teknik isolasi,
kemurnian produk akhir lebih tinggi. Beberapa teknik yang dapat kita
gunakan untuk ekstraksi termasuk ekstraksi cair-cair menggunakan corong
pemisah, ekstraksi cair-padat, sedangkan teknik untuk isolasi meliputi
distilasi, pemurnian afinitas, filtrasi, dan lain-lain (Altemimi et al., 2017).

9. Tikus Putih Rattus norvegicus

Tikus adalah spesies yang telah menjadi model genetik mamalia
pilihan sejak lama, dengan fokus awal pada sifat monogenik. Model tikus
dari sifat dan penyakit monogenik juga telah diisolasi tetapi tikus pada
dasarnya telah menjadi model penting studi sifat kompleks di bidang
seperti fisiologi, penelitian kardiovaskular dan diabetes, arthritis,
farmakologi, toksikologi dan onkologi (Szpirer, 2020).
Sifat tikus jenis commit
Rattus tonorvegicus
user antara dapat mencapai
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
42

kematangan seksual sekitar 11 minggu, bunting selama 21-24 hari, dan

melahirkan sekitar 7 atau 8 ekor anak. Tikus betina membangun sarang
sebelum melahirkan, dan tikus muda dilahirkan hampir telanjang, buta dan
sangat bergantung pada induknya. Tikus kecil mulai meninggalkan sarang
dan menelan makanan padat sekitar 14 hari setelah lahir. Tikus ini dapat
berkembang biak sepanjang tahun dan memiliki 3–5 anak per tahun.
Harapan hidupnya lebih dari 1 tahun (Modlinska dan Pisula, 2020).
Tikus Norwegia terutama aktif di malam hari. Tikus ini lebih
menyukai tempat kecil, gelap, terbatas, dan menghindari bergerak di ruang
terbuka dan cukup terang. Tikus Norwegia cenderung bergerak dengan
empat anggota tubuh dengan bulu dan kumis bersentuhan dengan dinding
dan benda-benda besar. Tikus tidak memiliki kelenjar keringat dan
mengatur suhu tubuhnya melalui tingkah laku, misalnya dengan
bersembunyi di liang. Ekor yang berambut jarang juga berpengaruh dalam
termoregulasi (Modlinska dan Pisula, 2020).
Pada tikus, sinyal sensorik utama adalah sentuhan dari kumis wajah
(atau vibrissae) dan indra penciuman yang berkembang dengan baik.
Tikus liar Norwegia memiliki penglihatan yang relatif buruk dan sensitif
terhadap cahaya tajam. Mereka memiliki penglihatan warna dichromatic
berkat dua kelas sel kerucut pada retina: satu sensitif terhadap sinar
ultraviolet dan yang lainnya paling sensitif terhadap panjang gelombang
tengah dari spektrum yang terlihat, seperti warna hijau. Mereka dapat
mendeteksi suara antara sekitar 0,25–80 KHz yang memungkinkan mereka
untuk berkomunikasi dengan ultrasound. Suara ini tidak dapat didengar
oleh manusia tanpa menggunakan peralatan khusus (Modlinska dan
Pisula, 2020). Tikus ini merupakan salah satu jenis tikus yang sensitif
terhadap anthrax toxin receptor 2 (Antxr2) (Scobie et al., 2006).

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
43

B. Kerangka

Teori

IL-1β
IL-18

Gambar 2.10. Kerangka Teori

commit to user

Gambar 2.12. Kerangka Teori

library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
44

Keterangan:
ET : Edema Toxin
Ig : Immunoglobulin
IKB : Inhibitor Nuclear Factor NF-κB
IL-8 : Interlukin 8
IL-1ß : Interlukin 1 beta
LT : Lethal Toxin
PMN : Neutrofil Polimorfonuklear
ROS : Reactive Oxygen Species
TLR4 : Toll Like Reseptor 4
TNF α : Tumor Necrosis Factor alpha
NFKß : Nuclear Factor NF-κB
MDA : Malondialdehyde
MMP : Matrix Metalloproteinase
: Variabel yang diteliti
: Variabel bebas
: Menghambat
: Memicu

Penjelasan Kerangka Teori

Pada tikus model cutaneous anthrax akan terjadi peningkatan sitokin
pro- inflamasi IL-8 dan TNF alfa di sel dendrit. Peningkatan IL-8 akan
memacu produksi CD4, sehingga merangsang Th1 untuk melepaskan IL-2.
Adanya peningkatan IL-2, yang memicu sel beta untuk menghasilkan
imunoglobulin dan komplemen. Komplemen ini memicu terjadinya nekrosis
pada kulit.
Peningkatan IL-8 ini juga memacu sel hepatosit untuk mengeluarkan
CRP yang selanjutnya akan menghasilkan ROS. Produksi ROS yang

commit to user
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
45

berlebihan menyebabkan terjadinya disfungsi endotel, kemudian dapat

menyebabkan nekrosis pada kulit.
Infeksi antraks dimulai dengan masuknya bakteri Bacillus anthracis ke
dalam tubuh dalam bentuk spora, yang kemudian berubah menjadi bentuk
vegetatif dan berkembang biak. Bentuk vegetatif ini selanjutnya mengeluarkan
toksin, yang memicu produksi ROS. Selanjutnya ikatan ini memicu aktivasi
sinyal transduksi melalui aktivasi NF-κB. Aktifasi ini akan mengaktifkan I-κK
untuk memfosforilasi IL-1β sehingga ikatan NF-κB dengan IL-1β terlepas dan
NF-κB menjadi aktif dan memicu ekspresi TNF α, yang mempunyai reseptor
di endotel. Ikatan ini akan memicu endotel mensekresikan E-selectin yang
akan mengikat PMN untuk melepaskan lisozim yang akan menyebabkan
terjadinya nekrosis di jaringan.
Aktivasi NF-κB ini juga akan memicu terbentuknya kompleks
inflamasom NRLP1 memicu perubahan pro caspase-1 menjadi caspase-1
yang akan mengaktifkan pro IL-1β dan IL-18 menjadi IL-1β dan IL-18 aktif.
Sekresi TNF-α akan memicu enzim NADPH, yang merangsang produksi
ROS. Bila produksi ini terus berlanjut dan berlebihan, menyebabkan stres
oksidatif yang berakibat terjadi disfungsi endothel. Adanya TNF-α akan
merangsang endotel mengekspresikan E-selectin, yang akan mengikat PMN
dan mengekspresikan lisozym, kemudian memicu disfungsi endotel dan
berlanjut menjadi nekrosis jaringan. Ekspresi TNF-α akan memacu produksi
IL-8 yang kemudian akan mengaktifkan PMN untuk mengeluarkan netrofil
sebagai bagian dari pertahanan tubuh.
Penghambatan NF-κB merupakan jalan untuk menghentikan proses
inflamasi yang terjadi. Propolis dengan kandungan flavonoidnya yaitu CAPE
dan quersetin, memiliki aktivitas anti peradangan dan antioksidan.
Proses terjadinya nekrosis juga dapat terjadi karena peningkatan TNF-α
yang memacu sel endotel mengeluarkan E-selectin, yang kemudian memacu
produksi sel PMN dan terbentuk lisozim. Pemberian flavanoid diharapkan
dapat menghambat progresifitas pada sel dendrit untuk memacu sekresi IL-6
commit
dan TNF α, sehingga tidak terjadi to user
proses nekrosis.
library.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

commit to user
46