Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan Volume 8, Nomor 2, Juni 2016 Hal.

112-120
p-ISSN:2085-1227 dan e-ISSN:2502-6119

PENGARUH PENAMBAHAN KOSUBSTRAT PADA BIODEGRADASI

CRUDE OIL

Any Juliani; Annisa Nur Lathifah dan Winda Aisyah Nurdin

Jurusan Teknik Lingkungan, Universitas Islam Indonesia, Jl. Kaliurang KM 14,5 Yogyakarta
E-mail : any.juliani@uii.ac.id

Abstrak
Kegiatan penambangan minyak bumi tidak hanya dilakukan oleh perusahaan-perusahaan besar, tetapi juga oleh
masyarakat secara tradisional. Potensi pencemaran lingkungan yang ditimbulkan oleh kegiatan penambangan rakyat ini
menjadi lebih tinggi karena pengelolaannya yang tradisional. Salah satu jenis pencemaran yang ditimbulkannya misalnya
adalah tanah atau perairan yang tercemar oleh minyak bumi (crude oil) pada saat berlangsungnya kegiatan penambangan.
Salah satu upaya untuk dapat mengatasinya adalah dengan bioremediasi. Bioremediasi merupakan teknologi pengolahan
pencemar dengan memanfaatkan aktivitas mikroba, terutama dari golongan bakteri. Bioremediasi tersebut harus
melibatkan bakteri yang memiliki kapasitas metabolic untuk melakukan biodegradasi terhadap crude oil tersebut. Crude oil
sendiri pada dasarnya merupakan senyawa hidrokarbon yang merupakan sumber karbon yang kaya bagi mikroba. Namun
demikian, biodegradasi crude oil relative lebih sulit dilakukan karena karakteristiknya yang merupakan senyawa dengan
berat molekul dan ukuran yang besar. Oleh karena itu penambahan kosubstrat yang lebih sederhana dapat dilakukan untuk
membantu biodegradasi terutama pada tahap awal proses. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh
penambahan kosubstrat dalam hal ini glukosa terhadap biodegradasi crude oil. Penelitian dilakukan dalam media cair
dengan bioaugmentasi melalui penambahan inoculum bakteri yang diisolasi dari tanah yang dikondisikan terhadap crude
oil dalam beberapa variasi reactor. Indikasi terjadinya biodegradasi diperiksa melalui pengukuran terhadap parameter
Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) dan Total Plate Count (TPC). Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan
kosubstrat glukosa memberikan pengaruh positif terhadap penurunan TPH. Penurunan TPH tertinggi setelah 28 hari
adalah sebesar 25,3 % yang diberikan oleh reactor dengan penambahan kosubstrat serta konsentrasi crude oil awal
sebesar 8.1 %. Sementara itu reactor tanpa penambahan penambahan glukosa, penurunan TPH-nya hanya mencapai 19,4
%.
Kata kunci: isolasi, biodegradasi, crude oil, bioremediasi, kompos, Total Petroleum Hydrocarbon
Abstract
Traditional oil mining is still practiced in some oil rich areas in Indonesia. The potential environmental pollution caused by
this traditional mining practice is higher than that of established oil company. One type of pollution caused by this activity
is oil-spill contaminated soil or water. Bioremediation is one alternative technology that can be applied to solve the
problem. Bioremediation is contaminant remediation technology by using microbe activities, especially bacteria. Bacteria
involved in bioremediation process should possess metabolic capacity to biodegrade the particular oil based contaminant.
Crude oil basicly composed of hydrocarbon which is actually rich carbon source for microbe. However, crude oil
biodegradation is relatively more difficult to occur due to some of its characteristic such as high molecular weight of its
polycyclic aromatic fraction or its limited availability to microbes. Therefore, the addition of simple cosubstrate can be
undertaken to stimulate or enhance biodegradation especially at the initial stage. The purpose of this study was to find out
the effect of addition of glucose as cosubstrate in crude oil biodegradation. Study was conducted in liquid medium in
various reactor compositions. Bioaugmentation was done through addition of bacterial inoculum isolated from soil
conditioned with crude oil. Total Petroleum Hydrocarbon/TPH and Total Plate Count/TPC were used to indicate and
measure biodegradation activity. The results showed that addition of glucose gave positive effect to reduce TPH. Highest
TPH reduction after 28 days was 25,3 % performed by reactor with initial TPH concentration of 8.1 %. Reactor without
glucose addition gave only 19.4 % of TPH reduction.
Key words: crude oil, bioremediation, total petroleum hydrocarbon

Dikirim/submitted: 3 April 2016

Diterima/accepted: 30 April 2016
Volume 8 Nomor 2 Juni 2016 Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan 113

1. PENDAHULUAN
Bioremediasi merupakan proses pemanfaatan kemampuan metabolic mikroorganisme untuk
penanganan pencemar. Proses ini semakin banyak digunakan karena kemudahan, lebih efisien serta
cost-effective (Capello, 2015). Salah satu aplikasi teknologi bioremediasi diantaranya adalah untuk
pemulihan lingkungan akibat pencemaran minyak bumi baik yang berasal dari aktivitas pertambangan
maupun pemurniannya. Aktivitas pertambangan maupun pemurnian minyak bumi tersebut tidak hanya
dilakukan oleh perusahaan-perusahaan besar tetapi juga oleh masyarakat melalui kilang-kilang rakyat.
Salah satunya dilakukan di Desa Talang Sungaiangit, Kecamatan Babat Toman, Kabupaten Musi
Banyuasin, Propinsi Sumatera Selatan. Pengelolaan secara tradisional menjadikan risiko timbulnya
pencemaran yang lebih tinggi dibandingkan kilang minyak modern yang dikelola perusahaan-
perusahaan minyak besar.

Bioremediasi untuk pemulihan pencemaran akibat kegiatan penambangan minyak bumi harus
melibatkan mikroba yang memiliki kapasitas metabolic untuk dapat melakukan biodegradasi terhadap
senyawa minyak bumi tersebut. Bakteri merupakan jenis mikroba yang paling penting dan banyak
terlibat dalam biodegradasi minyak bumi. Termasuk dalam bakteri ini adalah yang berasal dari genus
Pseudomonas, Alcanivorax, Acinetobacter, Microccocus, Corynebacteria, Nocardia dan Rhodococcus
(Mahjoubi, et.al, 2013). Golongan bakteri tersebut disebut hidrokarbonoklastik. Beberapa jenis bakteri
bahkan menjadikan senyawa hidrokarbon sebagai satu-satunya sumber karbon (Das, et.al., 2010).
Minyak bumi/crude oil sendiri pada dasarnya merupakan senyawa hidrokarbon yang merupakan
sumber karbon yang kaya bagi mikroba. Namun demikian, biodegradasi crude oil relative lebih sulit
dilakukan karena beberapa sebab (Juliani dan Rahman, 2011). Oleh karena itu, biodegradasi sering
terjadi melalui kometabolisme, dimana bakteri memerlukan sumber karbon lain yang lebih mudah
didegradasi. Berdasarkan mekanisme ini, penambahan kosubstrat pada reactor atau lahan yang
terkontaminasi dapat memberikan kontribusi pada proses degradasi (Vasconcelos, 2013).

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh penambahan kosubstrat dalam hal ini glukosa
terhadap biodegradasi crude oil. Penelitian dilakukan dalam media cair dengan bioaugmentasi melalui
penambahan inoculum bakteri yang diisolasi dari tanah yang dikondisikan terhadap crude oil dalam
beberapa variasi reactor. Hasil penelitian dapat menjadi salah satu acuan dalam merancang proses
bioremediasi yang tepat untuk mengatasi masalah pencemaran lingkungan akibat kegiatan
penambangan minyak bumi rakyat di Indonesia.
114 Any Juliani, Annisa NL, dan Winda AN Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan

2. METODE PENELITIAN
Penelitian dilakukan dengan mengikuti alur sebagai berikut:

Pengambilan sampel crude oil

dan tanah

Isolasi bakteri

Penyiapan inokulum bakteri

dan reaktor

Running reaktor dan pemeriksaan

parameter degradasi

Gambar 1. Alur penelitian

2.1. Pengambilan sampel crude oil

Sampel crude oil diambil dari lapangan pemboran minyak bumi rakyat milik warga Desa Talang
Sungaiangit, Kecamatan Babat Toman, Kabupaten Musi Banyuasin, Propinsi Sumatera Selatan.

2.2. Isolasi bakteri

Bakteri yang digunakan untuk penelitian berasal dari tanah yang dikondisikan terhadap crude oil.
Tanah yang digunakan adalah tanah yang berasal dari area perbengkelan sekitar Kampus Universitas
Islam Indonesia yang sudah tercemar oli. Tanah yang sudah disaring dicampur dengan crude oil
dengan perbandingan tanah dan crude oil 70 : 30. Campuran dibiarkan selama 10 hari dalam suhu
ruangan dan secara teratur dilakukan pengadukan. Selanjutnya dilakukan isolasi dilakukan dengan
metode pour plate. Media yang digunakan adalah media Nutrient Agar/NA dengan komposisi per liter
air suling adalah 1 g ekstrak sapi, 2 g ekstrak yeast, 5 g peptone, 5 g NaCL, dan 15 g bacto agar.
Inokulan diinkubasi selama 24-48 jam. Selanjutnya dilakukan pemurnian kultur untuk mendapatkan
isolat murni (pure culture).
Volume 8 Nomor 2 Juni 2016 Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan 115

2.3. Penyiapan inokulum bakteri dan reactor.

Inokulum bakteri untuk reactor berasal dari seluruh isolat (mixed culture) yang ditumbuhkan dalam
media Nutrient Broth/NB. Komposisi Media NB sama seperti NA tanpa penambahan bacto agar.
Inokulum dipindahkan ke reaktor penelitian pada awal fase stasioner yang diketahui melalui
pemeriksaan Optical Density OD) menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm.
Reaktor yang digunakan dalam penelitian ini berjumlah 6 buah yang terdiri dari reaktor uji dan reaktor
kontrol. Variasi perlakuan pada reaktor disajikan dalam tabel 1 berikut

Tabel 1. Variasi Reaktor

Reaktor Variasi
Kontrol 1 5% crude oil
Kontrol 2 5 % crude oil + glukosa
Reaktor 1a 5 % crude oil + inokulum
Reaktor 1b 10 % crude oil + inokulum
Reaktor 2a 5 % crude oil + glukosa + inokulum
Reaktor 2b 10 % crude oil + glukosa + inokulum

2.4. Running reactor dan pemeriksaan parameter degradasi

Parameter yang diukur selama penelitian adalah pH, Total Petroleum Hydrocarbon (TPH), dan Total
Plate Count (TPC). Pemeriksaan dilakukan setiap 7 hari sekali selama 28 hari. Pengujian parameter pH
dilakukan dengan menggunakan metode potensiometri yang mengacu pada SNI 06-6989.11-2004,
sedangkan pengujian Total Plate Count (TPC) dilakukan dengan menggunakan metode pour plate.
Parameter Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) diuji dengan prinsip gravimetric menggunakan metode
yang dikembangkan oleh Greenberg, 1992 dalam Juliani, 2011.

3. HASIL DAN PEMBAHASAN

Setelah inkubasi selama 3 hari, berhasil diisolasi 12 isolat dari sampel tanah yang telah dikondisikan
dengan crude oil. Sediaan inokulum untuk reactor berasal dari konsorsium ke-12 isolat bakteri tersebut.
Kurva pertumbuhan bakteri disajikan dalam Gambar 2 berikut.
116 Any Juliani, Annisa NL, dan Winda AN Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan

0.50

0.40

Absorbansi (Å)
0.30

0.20

0.10

0.00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Waktu (jam)

Gambar 2. Kurva Pertumbuhan Bakteri

Inokulum dipindahkan ke reactor penelitian setelah mencapai fase logaritmik atau di awal fase
stasioner. Berdasarkan grafik kurva pertumbuhan di atas, pemindahan tersebut dilakukan setelah 6 jam.

Hasil analisis sifat kimia crude oil menunjukkan nilai konsentrasi c-organik yang sangat tinggi yaitu
mencapai 50,60%. Hal ini terjadi karena pada dasarnya crude oil merupakan senyawa hidrokarbon
yang komposisi utamanya adalah karbon dan hidrogen.

Tabel 2. Hasil Analisis Sampel Crude Oil

No Parameter Analisis Satuan Konsentrasi
1 Carbon organik % 50,60
2 Kadar air % 0,0
3 pH H20 (29,7ºC) 6,79

Hasil pemeriksaan terhadap parameter indikator degradasi selama 28 hari disajikan dalam gambar 3-6
berikut. Kedua reaktor kontrol menunjukkan penurunan TPH yang dapat disebabkan oleh dua hal.
Pertama, penurunan TPH terkait dengan sifat fisik senyawa hidrokarbon minyak bumi. Fraksi rantai
pendek hidrokarbon dalam senyawa minyak bumi bersifat volatil. Volatilisasi selama proses ini
menyebabkan terjadinya penuruhan TPH. Penyebab kedua adalah kemungkinan biodegradasi dilakukan
oleh mikroba indigen dari crude oil itu sendiri. Li et.al (2013) mengungkapkan bahwa mikroba indigen
lebih banyak digunakan dalam proses pengolahan lahan tercemar karena lebih sesuai dengan
lingkungan tercemar tersebut serta kemungkinannya lebih kecil untuk menimbulkan inhibisi proses.
Indikasinya terlihat dari penurunan TPH yang lebih baik pada reaktor kontrol 2 yang diberi tambahan
kosubstrat glukosa. Namun demikian, perlakuan bioaugmentasi dengan penambahan inokulum bakteri
Volume 8 Nomor 2 Juni 2016 Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan 117

tanah terkondisikan crude oil, memberikan pengaruh positif pada proses degradasi. Hal ini terlihat dari
performa reaktor A dan B yang menunjukkan penurunan TPH yang lebih baik dari reaktor kontrol.
Namun demikian, reaktor B menunjukkan performa penurunan TPH sebanyak 24-25 %, lebih baik dari
reaktor A yang hanya 17-19 %. Hal ini menunjukkan pengaruh positif penambahan kosubstrat glukosa
pada proses biodegradasi.

40

35

30

25
TPH (%)

20

15

10

0
t0 t1 t2 t3 t4
Waktu
B2 B1 A2 A1 K2 K1

Gambar 3. Profil TPH selama 28 hari

30

25
% penurunan TPH

20

15

10

0
t0 t1 t2 t3 t4
Waktu
K1 K2 A1 A2 B1 B2

Gambar 4. Profil penurunan TPH selama 28 hari

118 Any Juliani, Annisa NL, dan Winda AN Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan

Nilai TPH sampai hari ke-21 menunjukkan laju penurunan antara 6 – 10 %, namun dari hari ke-21
sampai hari ke-28 penurunannya kurang dari 1 %. Hal ini sebanding dengan profil TPC-nya. Angka
TPC terus meningkat sampai hari ke-21 namun menurun dari hari ke-21 sampai hari ke-28. Hal ini
dapat terjadi akibat telah berkurangnya glukosa yang ada dalam reaktor atau juga akibat penurunan pH
yang ditunjukkan pada gambar 6. Penurunan pH sampai mencapai 4 tidak disukai oleh mikroba yang
hidup dalam reaktor sehingga beberapa mengalami kematian. Kematian mikroba ini menurunkan
performa biodegradasi yang ditunjukkan dengan penurunan TPH yang sangat kecil. Penurunan pH
disebabkan oleh pelepasan asam organic akibat degradasi hidrokarbon atau produksi polimer
ekstraselular (Verma, et.al 2006 dalam Cerqueira et.al., 2011).

3000

2500

2000
TPC (104)

1500

1000

500

0
t0 t1 t2 t3 t4
Waktu
K1 K2 A1
A2 B1 B2
Gambar 5. Profil TPC selama 28 hari

8
7
6 K1
5 K2
pH

4
A1
3
2 A2
1 B1
0
B2
t0 t1 t2 t3 t4
Waktu

Gambar 6. Profil pH selama 28 hari

Volume 8 Nomor 2 Juni 2016 Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan 119

Secara hipotetik, reaktor 1a dan 2a seharusnya menunjukkan penurunan TPH yang lebih baik karena
mengandung kandungan crude oil yang lebih kecil. Namun ternyata penurunan TPH yang lebih baik
secara konsisten ditunjukkan oleh reaktor 1b dan 2b yang memiliki proporsi crude oil lebih banyak. Hal
ini dapat dikaitkan dengan aspek bioavailability dari senyawa kontaminan. Kemungkinan kedua yaitu
adanya aktivitas dari bakteri crude oil yang membantu menurunkan TPH. Bakteri yang ada di dalam
crude oil diduga memiliki kesamaan sifat dengan bakteri inokulasi yang dimasukkan ke dalam reaktor.
Lasari (2010) menyatakan bahwa bakteri yang mampu mendegradasi senyawa hidrokarbon minyak
bumi disebut dengan bakteri hidrokarbonoklastik. Dalam penelitian ini, bakteri inokulasi yang
dimasukkan ke dalam reaktor merupakan bakteri yang dikultur dari tanah yang telah dikondisikan,
yaitu tanah yang berada di sekitar bengkel yang merupakan tanah yang telah terkontaminasi oleh
bahan-bahan yang berasal dari minyak bumi. Zhu, et al (2001) menyatakan bahwa pada lingkungan
yang telah terkontaminasi minyak bumi dimungkinkan terdapat bakteri pendegradasi petroleum
hydrocarbon yang secara alamiah bersaing dan berkonsorsia dengan mikroorganisme lainnya. Hal ini
serupa dengan crude oil yang diambil dari kilang minyak milik warga lokal. Dimungkinkan terdapat
bakteri hidrokarbonoklastik yang secara alami hidup di dalam crude oil dan mampu bertahan dalam
kondisi lingkungan yang ekstrim. Sehingga ketika crude oil dipindahkan ke dalam reaktor penelitian,
bakteri indigenous yang ada di dalam crude oil dapat tetap tumbuh bersama dengan bakteri yang
diaugmentasikan.

4. KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah sebagai berikut

a. Penambahan glukosa memberikan pengaruh yang positif terhadap biodegradasi crude oil.
b. Penurunan TPH tertinggi sebesar 25.3 % diberikan oleh reactor dengan proporsi crude oil lebih
banyak yaitu sebanyak 7.7 %

5. SARAN
a. Penelitian dilakukan dalam jangka waktu lebih panjang sehingga efisiensi maksimum proses dapat
diketahui.
b. Diperlukan variasi proporsi crude oil dan kosubstrat yang lebih banyak untuk dapat mengambil lebih
banyak kesimpulan
120 Any Juliani, Annisa NL, dan Winda AN Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan

c. Diperlukan analisis Gas Chromatography (GC) untuk mendeteksi senyawa hidrokarbon di awal dan
di akhir proses

DAFTAR PUSTAKA
Das, Nilanjana, Chandran, Preethy, (2010), Microbial Degradation of Petroleum Hydrocarbon
Contaminants: An Overview. Biotechnology Research International. Volume 2011, Article ID
941810

Vasconselos, Ulrich, Oliveira, Fernando J. S, Franca, Francisca P., (2013), Raw Glycerol as
Cosubstrate on The PAHs Biodegradation in Soil. SENRA Academic Publishers, British
Columbia. Vol. 7, No.1, pp. 2203-2209

Juliani, A., Rahman, F., (2011), Bioremediasi Lumpur Minyak (Oil Sludge) dengan Penambahan
Kompos sebagai Bulking Agent dan Sumber Nutrien Tambahan. Jurnal Sains dan Teknologi
Lingkungan Vol. 3 No. 1 Hal. 1-18.

Zhu, Xueqing, Albert D. V, Makram T. S, and Kenneth L., (2001) Guidelines for the Bioremediation of
Marine Shorelines and Freshwater Wetlands. Environmental Protection Agency : US.

Cappello, S., Rosario C, Santina S, Maria G, Renata D, Lucrezia G, Laura G, Giuseppe M, Michail M.
Y., (2015), Bioremediation of oil polluted marine sediments: A bio-engineering treatment.
International Microbiology. Vol.18. p 127-134.

Mahjoubi, M., Atef J, Amel G, Sonia B A, Ahlem J, Hanen C, Afef N, Abdellatif B, Nedra K and
Ameur C., (2013), Hydrocarbonoclastic bacteria isolated from petroleum contaminated sites in
Tunisia: isolation, identification and characterization of the biotechnological potential. New
Biotechnology. Volume 30, Number 6.

Cerqueira, V. S., Emanuel B. H,, Franciele M, Marilene H. V, Flávio A.O.C, Maria C. R. P, Fátima M.
B, (2011) Biodegradation potential of oily sludge by pure and mixed bacterial cultures.
Bioresource Technology 102 11003-11010

Li Q, Wang M, Feng J, Zhang W, Wang Y, Gu Y, Song C, Wang S., (2013), Treatment of high-salinity
chemical wastewater by indigenous bacteria – bioaugmented contact oxidation. Bioresource
Technology 144 (2013) 380-386.