UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No.

3 September 2013

PENGARUH KONSENTRASI ONGGOK INDUSTRI TAPIOKA DAN UREA PADA

PRODUKSI BIOHIDROGEN MELALUI FERMENTASI GELAP

INFLUENCE OF CONCENTRATION ONGGOK TAPIOCA INDUSTRY AND UREA IN

BIOHYDROGEN PRODUCTION THROUGH DARK FERMENTATION

Lailatul Maghfiroh* dan Rudiana Agustini

Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences
State University of Surabaya
Jl. Ketintang Surabaya (60231), Telp. 031-8298761
*Corresponding author, email: lailatulmaghfiroh592@yahoo.co.id

Abstrak. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi onggok industri tapioka
terhadap kadar glukosa hasil hidrolisis enzimatis dan pengaruh variasi konsentrasi urea terhadap kadar
biohidrogen hasil fermentasi gelap. Untuk uji kadar glukosa, variasi konsentrasi onggok industri tapioka
adalah 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, dan 40%. Onggok dengan variasi konsentrasi selanjutnya dihidrolisis
enzimatis, yaitu dengan menggunakan enzim campuran (-amilase dan fiberzym).Uji kadar glukosa dilakukan
dengan menggunakan metode Nelson-somogyi. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa ada pengaruh
konsentrasi onggok industri tapioka terhadap kadar glukosa hasil hidrolisis enzimatis. Kadar glukosa optimum
dihasilkan pada penggunaan onggok konsentrasi 35%, yakni sebesar 47,5%. Untuk uji kadar biohidrogen,
variasi konsentrasi urea adalah 1%, 2%, 3%, 4%, dan 5%. Urea dengan variasi konsentrasi selanjutnya
ditambahkan pada onggok yang menghasilkan kadar glukosa optimum, yaitu onggok konsentrasi 35%. Onggok
yang telah ditambahkan urea selanjutnya difermentasi oleh bakteri Enterobacter aerogenes (proses fermentasi
gelap). Uji kadar biohidrogen dilakukan menggunakan alat kromatografi gas. Hasil uji statistik menunjukkan
bahwa ada pengaruh konsentrasi urea terhadap kadar biohidrogen hasil proses fermentasi gelap dari hidrolisat
onggok industri tapioka. Kadar biohidrogen optimum dihasilkan pada penggunaan urea konsentrasi 3%, yakni
sebesar 2,8997%.

Kata kunci: onggok industri tapioka, glukosa, urea, biohidrogen.

Abstract. This study aimed to determine influence of concentration variations onggok tapioca industry on
enzymatic hydrolysis glucose levels and influence of concentration variation urea on biohydrogen levels
through dark fermentation. To test glucose levels, concentration variations of onggok tapioca industry is 15%,
20%, 25%, 30%, 35%, and 40%. Onggok with concentration variation hydrolyzed enzymatically using mixing
enzymes (-amylase and fiberzym). Glucose levels test is done by using Nelson-somogyi method. Statistical test
results showed that there was influence of concentration onggok tapioca industry in enzymatic hydrolysis
glucose levels. The optimum glucose levels resulted in using onggok tapioca industry concentration 35%, which
is equal to 47.5%. To test biohydrogen levels, concentration variations of urea is1%, 2%, 3%, 4%, and 5%.
Urea added to the onggok tapioca industry in concentration 35%. Onggok which was added by urea
subsequently fermented by Enterobacter aerogenes bacteria (dark fermentation). Biohydrogen level test
performed using a gas chromatography. Statistical test results showed that there was influence of concentration
urea in biohydrogen through dark fermentation process resultsfromonggok tapioca industry hydrolyzate. The
optimum biohydrogen levels resulted in using urea concentration 3%, which is equal to 2.8997%.

Keywords: onggok tapioca industry, glucose, urea, biohydrogen

112
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

PENDAHULUAN untuk menghasilkan biohidrogen. Kadar biohidrogen

Kebutuhan energi dunia hingga saat ini masih sangat yang dihasilkan dari proses degradasi anaerobik onggok
bergantung pada ketersediaan bahan bakar fosil (batubara sebesar 2,5%, sedangkan pada limbah tahu sebesar 0,74%
dan minyak bumi), padahal meningkatnya permintaan dan pada tetes tebu sebesar 0,29% [7]. Oleh karena itu,
bahan bakar fosil menyebabkan terjadinya eksplorasi dan onggok sangat potensial untuk dimanfaatkan sebagai
eksploitasi sumber energi tersebut serta dapat bahan baku pada produksi biohidrogen.
menyisakan sejumlah persoalan lingkungan, seperti Menurut Hawkes et al. (2002), produksi biohidrogen
perubahan iklim global dan kerusakan lingkungan [1]. umumnya melibatkan mikroorganisme atau enzim [1].
Ketergantungan terhadap bahan bakar fosil dapat Banyak kultur murni bakteri yang telah digunakan untuk
dibuktikan dari penyataan PT. Pertamina (Persero) yang menghasilkan biohidrogen dari berbagai substrat.
masih mengimpor minyak mentah untuk selanjutnya Clostridium dan Enterobacter paling banyak digunakan
diolah di kilang sebesar 98,21 juta barel selama tahun sebagai inokulum. Enterobacter aerogenes dapat
2012. Selain itu, Badan Pengatur Hilir Minyak dan Gas menghasilkan biohidrogen melalui fermentasi gelap.
Bumi memperkirakan konsumsi bahan bakar minyak Menurut Classen et al. (1999), E. aerogenes dapat
bersubsidi pada 2013 akan mencapai 49 juta kiloliter [2]. menghasilkan biohidrogen lebih cepat dibandingkan
Semakin meningkatnya kebutuhan energi dan dengan mikroorganisme fotosintetik, karena E. aerogenes
semakin menipisnya cadangan energi fosil membuat menggunakan senyawa organik sebagai sumber energi
manusia berusaha untuk mencari energi alternatif baru, untuk menghasilkan biohidrogen [3]. Pada penelitian
yaitu energi alternatif yang dapat diperbaharui dan ramah yang dilakukan oleh Widyastuti (2011) menunjukkan
lingkungan. Dari sekian banyak energi alternatif, energi bahwa E. aerogenes dengan substrat sorgum 4,2% pada
dari biomassa (bioenergi) terutama biohidrogen, menjadi reaktor packed bed menghasilkan 1,4 mol H2/mol
fokus perhatian pengembang energi terbarukan. Menurut glukosa [9].
Boyles (1984), secara gravimetrik hidrogen memiliki Banyak sedikitnya kadar biohidrogen yang dihasilkan
densitas energi tertinggi dari semua jenis bahan bakar dipengaruhi oleh beberapa faktor, seperti proses preparasi
yang pernah dikenal. Gas ini memiliki kandungan energi sampel, jenis dan konsentrasi substrat, jenis dan
tertinggi (143 Gjton-1) per unitnya, dapat disesuaikan konsentrasi enzim, jenis mikroorganisme yang digunakan
dengan proses elektrokimia, dan satu-satunya bahan saat fermentasi, dan konsentrasi nitrogen dalam substrat.
bakar yang secara kimia tidak terikat dengan karbon [1]. Kondisi substrat merupakan faktor penting yang
Produksi hidrogen dapat dilakukan melalui beberapa mempengaruhi efektivitas bahan (biomassa) pada proses
metode, seperti biofolisis langsung, biofotolisis tak hidrolisis pati menjadi glukosa, karena dari hasil
langsung, foto-fermentasi, dan fermentasi gelap [3]. pemecahan glukosa tersebut dihasilkan biohidrogen [8].
Menurut Beneman (1996), diantara metode tersebut yang Selain itu, kadar biohidrogen yang maksimal dapat
paling menjanjikan dan ramah lingkungan adalah dihasilkan dengan memperhatikan konsentrasi nitrogen
produksi hidrogen menggunakan metode fermentasi dalam substrat karena nitrogen merupakan salah satu
gelap dari limbah organik, karena metode ini nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba.
menggabungkan proses produksi hidrogen dengan Menurut Muhligan dan Gibbs (1993), nitrogen diperlukan
pengolahan limbah [4]. oleh mikroba selama fase pertumbuhan, produksi, dan
Bumi memiliki pasokan biomassa yang sangat banyak stationer [9]. Oleh karena itu pada penelitian ini produksi
meliputi daerah yang luas, termasuk hutan dan lautan. biohidrogen dilakukan dengan memanfaatkan glukosa
Total biomassa di dunia sekitar 1.800 miliar ton di darat hasil dari hidrolisis enzimatis onggok industri tapioka
dan 4 miliar ton di laut [5]. Indonesia menghasilkan sebagai substrat dan sumber energi, sedangkan urea
kurang lebih 1,2 juta ton limbah padat tapioka yang digunakan sebagai sumber nutrisi untuk bakteri
sering menimbulkan permasalahan lingkungan apabila Enterobacter aerogenes agar dapat menghasilkan
tidak dilakukan pengolahan lebih lanjut [6]. biohidrogen dengan kadar optimal.
Pada penelitian yang dilakukan oleh Agustini (2009)
menunjukkan bahwa biomassa limbah padat industri METODE PENELITIAN
tapioka (onggok) memiliki kadar karbohidrat 59,67%, Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia
protein 0,88%, serat kasar 30%, amilum 0,32% dan kadar Organik dan Laboratorium Instrumen Jurusan Kimia
air 20,33%. Kandungan karbohidrat onggok yang lebih FMIPA Unesa untuk pembuatan media pertumbuhan
tinggi daripada limbah tahu (46,33%) dapat dihidrolisis bakteri, uji kadar glukosa, dan persiapan uji kadar
secara enzimatis untuk menghasilkan glukosa. Glukosa biohidrogen. Selain itu, penelitian juga dilakukan di
yang dihasilkan tersebut selanjutnya dapat difermentasi Laboratorium Energi Institut Teknologi Surabaya untuk

113
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

uji kadar biohidrogen. Penelitian ini berlangsung pada Hasil hidrolisis enzimatis menghasilkan filtrat, dimana
bulan Maret-Juli 2013. filtrat dideproteinasi terlebih dahulu sebelum digunakan
Alat sebagai sampel untuk diuji kadar glukosanya.
Ayakan 100 mesh, erlenmeyer, beaker glass, gelas
ukur, labu ukur, spatula, kawat ose, kaca arloji, pipet Pembuatan Reagen Nelson-somogyi
tetes, mikropipet, tip, termometer, neraca Ohauss, a. Pembuatan reagen Nelson A
pembakar spiritus, kompor listrik, kasa, mikropipet, Menimbang 1,5 gram garam rochelle, 3 gram Na2CO3
anhidrat, 2 gram NaHCO3, 18 gram Na2SO4 anhidrat.
stirer, magnetic stirer, autoklaf, cawan petri, kawat ose,
Semua bahan tersebut kemudian dilarutkan dengan
spektrofotometer UV-Vis, kromatografi gas, inkubator,
aquades dengan sedikit air di beaker glass.
oven, aluminium foil, pH meter, tabung sentrifuge,
Selanjutnya larutan tersebut dimasukkan ke dalam
sentrifuge, botol kaca bertutup volume 500 mL, laminar
labu ukur 100 mL, ditera dengan aquades hingga
flow, water bath.
batas meniskus labu ukur.
Bahan
Onggok industri tapioka, enzim -amilase, b. Pembuatan reagen Nelson B
fiberzym, bakteri Enterobacter aerogenes, aquades, Menimbang 2 gram CuSO4.5H2O, lalu dilarutkan
alkohol, glukosa anhidrat, urea, gliserol 85%, garam dalam sedikit aquades di beaker glass. Ditambah 18
rochelle, Na2CO3 anhidrat, NaHCO3, Na2SO4 anhidrat, gram Na2SO4 dan 2 tetes H2SO4 pekat, lalu tera
dengan aquades pada labu ukur 100 mL.
CuSO4.5H2O, Na2SO4, H2SO4 pekat, kristal ammonium
c. Pembuatan reagen Cu alkalis
molibdat, kristal Na2HAsO4.7H2O, nutrient broth,
Larutan Cu alkalis merupakan campuran dari reagen
nutrient agar, yeast, agar, reagen biuret.
Nelson A dan B dengan perbandingan volume 4:1.
d. Pembuatan reagen arsenomolibdat
PROSEDUR PENELITIAN
Melarutkan 5 gram kristal ammonium molibdat dalam
Tahap Persiapan
90 mL aquades, kemudian ditambahkan 5 mL H2SO4
Persiapan Sampel
Pada tahap ini dilakukan persiapan biomassa limbah pekat (a). 0,6 gram kristal Na2HAsO4.7H2O dilarutkan
organik (onggok industri tapioka) hingga siap digunakan dalam 5 mL aquades (b). Larutan b dicampurkan
sebagai sampel. Persiapan dimulai dari proses dengan larutan a hingga terbentuk larutan berwarna
kuning bening. Simpan larutan dalam botol gelap dan
pengambilan onggok industri tapioka basah dari home
diinkubasi pada suhu 37C selama 1 hari.
industry tepung tapioka di Desa Tawangrejo, Kecamatan
Ngadiluwih, Kabupaten Kediri. Onggok basah kemudian
Pembiakan Bakteri Enterobacter aerogenes
dikeringkan di bawah cahaya matahari langsung selama
a. Pembuatan media pertumbuhan bakteri
2 hari. Onggok kering selanjutnya digiling, lalu diayak
Media padat dibuat dengan mencampurkan 2,3 gram
dengan ayakan 100 mesh. Onggok lolos ayakan 100 mesh
nutrient broth, 0,5 gram yeast, dan 1,5 gram agar ke
merupakan sampel yang digunakan untuk tahap
dalam 100 mL aquades.. Media cair dibuat dengan
selanjutnya.
mencampurkan 2,3 gram nutrient broth, 0,5 gram
yeast ke dalam 100 mL aquades. Media padat dan cair
Pembuatan Substrat Onggok Industri Tapioka
sebelum digunakan untuk membiakan bakteri
Substrat dibuat dengan menimbang 10, 15, 20, 25 dan 30
disterilisasi terlebih dahulu menggunakan autoklaf.
gram onggok, kemudian masing-masing dilarutkan
Sterilisasi dilakukan pada suhu 121C selama 15
dengan air suhu 65C sebanyak 100 mL. Larutan substrat
menit.
onggok tersebut selanjutnya dihidrolisis enzimatis
b. Peremajaan bakteri pada media padat
menggunakan enzim campuran.
Bakteri diremajakan pada media padat dengan cara
Pembuatan Enzim Campuran mengambil 1 ose biakan dari media miring kemudian
Enzim campuran dibuat dari campuran enzim - digoreskan pada media padat steril (peremajaan
amilase dan fiberzym dengan perbandingan volume 2:1 dilakukan pada laminar flow), selanjutnya biakan
(-amilase dan fiberzym). tersebut diinkubasi selama 24 jam di dalam inkubator
suhu 37 C. Bakteri yang diremajakan dalam media
Hidrolisis Enzimatis Onggok Industri Tapioka padat selanjutnya dibiakkan kembali dalam media
Onggok industri tapioka yang telah dibuat dengan cair.
variasi konsentrasi 15, 20, 25, 30, 35, dan 40% (b/v) c. Pemajaan bakteri pada media cair
selanjutnya ditambahkan enzim campuran sebanyak 6,25 1 ose koloni tunggal bakteri pada media padat diambil
mL. Lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C. untuk selanjutnya ditumbuhkan pada media cair steril

114
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

(peremajaan dilakukan pada laminar flow). Bakteri bata larut lalu diukur absorbansinya menggunakan
pada media cair kemudian diinkubasi selama 24 jam Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 744
di dalam inkubator suhu 37 C. Bakteri dalam media nm hingga diketahui hidrolisat dengan konsentrasi
cair ini selanjutnya diinokulasikan ke dalam larutan onggok berapa persen yang dapat menghasilkan kadar
substrat onggok yang telah dihidrolisis enzimatis. gula reduksi tertinggi.

Tahap Pelaksanaan Uji Kadar Biohidrogen

Deproteinasi Sampel a. Proses fermentasi gelap
Deproteinasi dilakukan dengan mengambil 2 mL Hidrolisat dengan kadar glukosa tertinggi selanjutnya
filtrat, lalu ditambahkan dengan larutan Ba(OH)2 dan difermentasi. Proses fermentasi diawali dengan
ZnSO4 masing-masing sebanyak 1,5 mL. Campuran menginokulasi mikroorganisme ke dalam hidrolisat,
tersebut kemudian disentrifus dengan kecepatan 3000 yaitu dengan menambahkan sebanyak 5 mL
rpm selama 15 menit hingga terbentuk endapan putih dan Enterocbater aerogenes yang telah ditumbuhkan pada
filtrat jernih tak berwarna. Filtrat diuji lagi dengan reagen media cair ke dalam masing-masing hidrolisat.
biuret, apabila tidak membentuk warna ungu maka filtrat Kemudian ditambahkan urea dengan variasi
dapat digunakan sebagai sampel untuk diuji kadar konsentrasi 1, 2, 3, 4, dan 5% (b/b). Selanjutnya
glukosanya. hidrolisat difermentasi selama 6 jam, yang
selanjutnya dapat diuji kadar biohidrogennya
Pembuatan Larutan Induk dan Standar Glukosa menggunakan alat kromatografi gas.
Larutan induk glukosa dibuat pada konsentrasi 2 b. Pengukuran kadar biohidrogen
mg/mL, yakni dengan menimbang 40 mg glukosa 1) Pengukuran kadar gas hidrogen murni
anhidrat dan dilarutkan dalam 20 ml aquades. Larutan Sebanyak 0,1 mL gas hidrogen murni diinjekkan ke
standar glukosa dibuat dari larutan induk glukosa. alat kromatografi gas. Peak dan waktu retensi yang
Larutan standar dibuat pada konsentrasi 0,1;0,2;0,3;0,4 keluar pada monitor nantinya digunakan sebagai
dan 0,5 mg/mL. Larutan standar tersebut selanjutnya acuan dalam menentukan kadar gas hidrogen pada
dibaca absorbansinya menggunakan spektrofotometer sampel.
UV-Vis pada panjang gelombang optimumnya (744 nm). 2) Pengukuran kadar gas biohidrogen sampel
Hidrolisat yang telah difermentasi kemudian diuji
masing-masing kadar biohidrogennya menggunakan
Non-aktivasi Enzim alat kromatografi gas. Sebanyak 0,1 mL gas hidrogen
Larutan substrat onggok yang telah diinkubasi diambil dari dalam botol sampel (hidrolisat onggok
(hidrolisat) kemudian dinon-aktifkan enzimnya dengan industri tapioka) menggunakan suntikan, lubang botol
cara memanaskan hidrolisat di atas waterbath pada suhu bekas jarum suntikan kemudian ditutup dengan
99,9C selama 15 menit lalu didinginkan. Selanjutnya isolasi. Gas yang telah diambil selanjutnya diinjekkan
masing-masing hidrolisat diambil filtratnya sebanyak 2 ke alat kromatografi gas, lalu ditunggu hingga muncul
mL untuk diuji kadar gula reduksinya mengunakan peak dan waktu retensi gas hidrogen sampel pada
metode Nelson-somogy. monitor. Peak dan waktu retensi sampel yang diambil
mengacu pada peak dan waktu retensi gas hidrogen
Pembuatan Kurva Absorbansi Larutan Standar murni, apabila peak dan waktu retensi sampel
Glukosa mendekati atau sama dengan peak dan waktu retensi
Larutan standar glukosa yang telah dibuat pada poin gas hidrogen murni maka peak dan waktu retensi
(a) selanjutnya diukur absorbansinya pada panjang itulah yang diambil. Lalu luas area peak dibandingkan
gelombang 744 nm. Kemudian dilihat regresi linier yang dengan luas area peak gas hidrogen murni dan
dihasilkan, apabila regresi linier yang dihasilkan lebih dikalikan 100%, hingga didapatkan kadar biohidrogen
dari 0,98 maka dapat dilakukan uji absorbansi sampelnya. pada masing-masing sampel (dengan perlakuan
variasi urea). Selanjutnya hasil perhitungan tersebut
Uji Kadar Glukosa dianalisis, pada penambahan konsentrasi urea berapa
Filtrat dari hidrolisat digunakan sebagai sampel. 1 persen yang dapat menghasilkan kadar biohidrogen
mL filtrat selanjutnya ditambahkan 1 mL reagen Cu tertinggi.
alkalis, dikocok lalu dipanaskan dalam penangas air
selama 20 menit (terbentuk endapan merah bata)
kemudian didinginkan. Selanjutnya ditambahkan 1 mL
reagen arsenomolibdat, dikocok hingga endapan merah

115
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

Teknik Analisis Data 0,994. Data kadar glukosa hasil hidrolisis enzimatis
Data yang diperoleh adalah data kadar glukosa hasil onggok industri tapioka pada variasi konsentrasi 15, 20,
hidrolisis enzimatis dan kadar biohidrogen hasil proses 25, 30, 35, dan 40% dari pembacaan alat
fermentasi gelap. Data tersebut selanjutnya dianalisis spektrofotometer Uv-Vis pada panjang gelombang 744
menggunakan SPSS 16 dengan uji Anova satu arah nm dapat dilihat pada Tabel 2.
dengan taraf kebenaran 95%. Analisis ini memberikan
indikasi tentang ada tidaknya pengaruh pada setiap Tabel 2. Kadar Glukosa Dalam Variasi
perlakuan dari dua variabel, yaitu variasi konsentrasi Konsentrasi Onggok
onggok industri tapioka dan urea yang diuji
menggunakan uji lanjut LSD (Least Significant Kadar glukosa (mg/mL)
Difference). Konsentrasi
onggok (%) Penga Penga Penga
matan matan matan Rata-rata
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN 1 2 3
Uji Kadar Glukosa 15 0.146 0.147 0.113 0.135
Uji kadar glukosa sampel dilakukan dengan 20 0.260 0.236 0.257 0.251
menggunakan metode Nelson-somogyi, dimana 25 0.387 0.372 0.343 0.367
dibutuhkan kurva larutan standar sebelum dilakukan uji
30 0.453 0.410 0.426 0.430
kadar glukosa sampel. Data absorbansi larutan standar
35 0.465 0.477 0.483 0.475
glukosa dapat dilihat pada Tabel 1.
40 0.468 0.480 0.487 0.478
Tabel 1. Data Absorbansi Larutan Standar Glukosa
Konsentrasi Data pada Tabel 2 tersebut selanjutnya dibuat dalam
Absorbansi
(mg/mL) bentuk diagram batang, dimana kadar glukosa yang
0.1 0.539 dihasilkan dikonversikan dalam satuan persen (%) (kadar
0.2 0.649 glukosa dalam mg/mL dikalikan 100%). Diagram batang
0.3 0.712 kadar glukosa dalam variasi konsentrasi limbah padat
tapioka dapat dilihat pada Gambar 2.
0.4 0.798
0.5 0.877 0,6
Konsentrasi glukosa (%)

0,5
Data pada Tabel 1 selanjutnya dibuat kurva standar
seperti pada Gambar 1. 0,4
0,3 Pengamatan I
1
Pengamatan II
0,2
0,8 Pengamatan III
0,1
absorbansi

rata-rata
0,6 0
15 20 25 30 35 40
0,4
Konsentrasi onggok industri tapioka (%)
0,2
Gambar 2. Diagram Batang Kadar Glukosa Dalam
0 Variasi Konsentrasi Onggok Industri
0 0,2 0,4 0,6 Tapioka
Konsentrasi (mg/mL)
Data pada Tabel 2 tersebut selanjutnya juga
Gambar 1. Kurva Larutan Standar Glukosa
dianalisis menggunakan uji statistik, yaitu Anova satu
arah yang meliputi uji normalitas, uji homogenitas, uji
Kurva larutan standar glukosa yang dihasilkan anova, dan uji lanjutan (LSD). Data dikatakan normal
pada penelitian ini menunjukkan bahwa semakin besar
dan homogen jika memiliki nilai signifikan (Sig.) 0,05.
konsentrasi larutan standar maka semakin besar pula nilai Hasil uji normalitas diperoleh nilai signifikan sebesar
absorbansinya, yang berarti semakin besar kadar 0.890 yaitu lebih dari 0.05, sehingga data yang diuji telah
glukosanya. Hal ini dapat dilihat dari persamaan garis berdistribusi normal. Hasil uji homogenitas diperoleh
yang diperoleh, yaitu y = 0.8245x + 0.4675 dengan r2 = nilai signifikan sebesar 0.384 yaitu lebih dari 0.05,

116
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

sehingga data yang diuji telah bersifat homogen. Data dihasilkan pada limbah padat tapioka konsentrasi 35%
yang telah berdistribusi normal dan homogen selanjutnya dengan kadar glukosa perolehan sebesar 47,5%.
dapat diuji dengan uji Anova satu arah. Hasil uji Anova
satu arah dapat dilihat pada Tabel 3. Uji Kadar Biohidrogen
Pada tahap ini onggok konsentrasi 35% yang
Tabel 3. Uji Anova Satu Arah Kadar Glukosa Dalam mempunyai kadar glukosa optimum digunakan sebagai
Variasi Konsentrasi Limbah Padat Tapioka sumber energi untuk menghasilkan biohidrogen. Glukosa
yang dihasilkan selanjutnya digunakan oleh Enterobacter
Jumlah Rata-rata aerogenes untuk diubah menjadi biohidrogen melalui
Df F Sig. proses fermentasi gelap. Urea ditambahkan pada proses
Kuadrat Kuadrat
Antar fermentasi sebagai nutrisi untuk Enterobacter aerogenes.
.283 5 .057 201.419 .000 Menurut Muhligan dan Gibbs (1999) bahwa nitrogen
Kelompok
Dalam diperlukan mikroba selama fase pertumbuhan, produksi,
.003 12 .000 dan stasioner [9]. Biohidrogen yang dihasilkan kemudian
Kelompok
Total .286 17 diuji kadarnya dengan menggunakan alat kromatografi
gas. Hasil dari pengukuran kadar biohidrogen dapat
Hasil uji Anova satu arah diperoleh harga signifikan dilihat pada Tabel 4.
(Sig.) kurang dari 0.05 yaitu 0.00, maka H0 ditolak dan
H1 diterima yang menyatakan ada pengaruh konsentrasi Tabel 4. Kadar Biohidrogen Dalam Variasi Konsentrasi
onggok industri tapioka terhadap kadar glukosa hasil Urea
hidrolisis enzimatis. Perbedaan yang signifikan dari
Kadar biohidrogen (%)
pengaruh variasi konsentrasi onggok industri tapioka Konsentrasi
terhadap kadar glukosa hasil hidrolisis enzimatis dapat urea (%) Penga Penga Penga
Rata-
diketahui melalui Post Hoc Test (uji LSD). matan matan matan
rata
Pada onggok konsentrasi 15%, 20%, 25%, 30% dan 1 2 3
35% terjadi peningkatan kadar glukosa yang cukup besar, 1 1.9456 2.0127 1.9666 1.9750
hal ini sesuai dengan hasil uji LSD yang menunjukkan 2 2.4804 2.6611 2.5903 2.5773
bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada tiap 3 2.8348 2.9446 2.9198 2.8997
perlakuan. Pada onggok konsentrasi 35% dan 40% 4 2.7568 2.9021 2.8206 2.8265
peningkatan kadar glukosa yang dihasilkan sangat kecil, 5 2.6718 2.8348 2.7816 2.7627
hal ini juga sesuai dengan uji LSD dan notasi perbedaan
yang menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang
Data pada Tabel 4 selanjutnya dibuat diagram batang
signifikan pada perlakuan tersebut.
yang menujukkan kadar biohidrogen dalam variasi
Kecepatan reaksi enzimatis bergantung pada
konsentrasi urea. Diagram batang kadar biohidrogen
perbandingan konsentrasi enzim dan substrat. Kecepatan
dalam variasi konsentrasi urea dapat dilihat pada Gambar
maksimum reaksi enzimatis ditunjukkan dengan garis
3.
mendatar yang menggambarkan peningkatan kecepatan
reaksi yang rendah seiring dengan penambahan 3,5
Kadar Biohidrogen (%)

konsentrasi substrat. Hal ini terjadi karena substrat pada 3

akhirnya menjadi inhibitor pada enzim, dimana begitu 2,5
banyaknya substrat menyebabkan terjadinya persaingan 2 Pengamatan 1
antar substrat untuk menempati sisi aktif enzim sehingga 1,5
Pengamatan 2
tidak ada substrat yang dapat menempatinya, dan reaksi 1
Pengamatan 3
tidak terjadi atau dapat terjadi namun membutuhkan 0,5
waktu yang lama. Menurut Olsen (1995), peningkatan 0 Rata-rata

kadar glukosa yang sangat kecil terjadi karena glukosa 1 2 3 4 5

akan mencapai titik batas dimana setelah titik itu Konsentrasi Urea (%)
terlewati maka tidak akan terjadi perubahan nilai glukosa
yang lebih tinggi lagi meskipun konsentrasi enzim
Gambar 3. Diagram Batang Kadar Biohidrogen Dalam
ditambahkan dan lama inkubasi diperpanjang [10]. Oleh
Variasi Konsentrasi Urea
karena itu pada onggok konsentrasi 35% dan 40% tidak
terjadi perbedaan kadar glukosa yang signifikan,
sehingga pada penelitian ini kadar glukosa optimum

117
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

Data pada Gambar 3 tersebut selanjutnya dianalisis Pada penambahan urea konsentrasi 1% dan 2% kadar
menggunakan uji statistik, yaitu Anova satu arah yang biohidrogen yang dihasilkan lebih rendah dari
meliputi uji normalitas, uji homogenitas, uji anova, dan uji penambahan urea konsentrasi 3%. Kadar biohidrogen
lanjutan (post hoc test). Data dikatakan normal dan yang rendah tersebut disebabkan belum terjadinya
homogen jika memiliki nilai signifikan (Sig.) 0,05. keseimbangan perbandingan antara kadar karbon dan
Hasil uji normalitas diperoleh nilai signifikan sebesar nitrogennya sehingga menyebabkan bakteri kekurangan
0.875 yaitu lebih dari 0.05, sehingga data yang diuji telah asupan nitrogen dan berdampak terhadap pertumbuhan
berdistribusi normal. Hasil uji homogenitas diperoleh nilai bakteri. Pada penambahan urea konsentrasi 3% kadar
signifikan sebesar 0.640 yaitu lebih dari 0.05, sehingga biohidrogen yang dihasilkan paling besar. Hal ini
data yang diuji telah bersifat homogen. Data yang telah menunjukkan bahwa pada konsentrasi urea 3% tersebut
berdistribusi normal dan homogen selanjutnya dapat diuji perbandingan karbon dan nitrogen sudah berada pada
dengan uji Anova satu arah. Hasil uji Anova satu arah komposisi yang tepat untuk pertumbuhan bakteri
dapat dilihat pada Tabel 5. Enterobacter aerogenes, sehingga penambahan urea
menyebabkan kadar nitrogen yang dapat diasup oleh
Tabel 5. Uji Anova Satu Arah Kadar Glukosa Dalam bakteri menjadi maksimal dan berakibat pada tingginya
Variasi Konsentrasi Urea kadar biohidrogen yang dihasilkan. Pada penambahan
Kuadrat Df Rata- F Sig urea konsentrasi 4% dan 5% kadar biohidrogen yang
Jumlah rata . dihasilkan mengalami penurunan. Rendahnya
Kuadrat perbandingan kadar karbon dan nitrogen tersebut karena
Antar 1.675 4 .419 83.777 .00 terjadi ketidakseimbangan perbandingan antara karbon
Kelompok 0
dan nitrogen, penambahan urea menyebabkan kadar
Dalam .050 10 .005
Kelompok nitrogen semakin besar sehingga perbandingan kadar
Total 1.725 14 karbon dan nitrogen semakin kecil. Perbandingan kadar
karbon dan nitrogen yang relatif kecil tidak baik untuk
Hasil uji Anova satu arah diperoleh harga signifikan proses pembentukan biogas karena akan meningkatkan
(Sig.) yang kurang dari 0.05 yaitu 0.00, maka H0 ditolak emisi nitrogen sebagai amonium yang dapat menghalangi
dan H1 diterima yang menyatakan ada pengaruh perkembangan bakteri [11]. Oleh karena itu, pada
konsentrasi urea terhadap kadar biohidrogen. Perbedaan penelitian ini konsentrasi urea 3% merupakan
yang signifikan dari pengaruh variasi konsentrasi urea penambahan nutrisi nitrogen terbaik untuk Enterobacter
terhadap kadar biohidrogen dapat diketahui melalui Post aerogenes dalam menghasilkan biohidrogen dengan kadar
Hoc Test (uji LSD). maksimal, yaitu sebesar 2,8997%.
Pada Gambar 3 menunjukkan bahwa terjadi
peningkatan kadar biohidrogen pada penggunaan urea SIMPULAN
konsentrasi 1%, 2%, dan 3%, hal ini sesuai dengan hasil Berdasarkan analisis data dan uji statistik diperoleh
uji LSD yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan nilai signifikansi untuk pengujian kadar glukosa dan
yang signifikan pada tiap perlakuan. Peningkatan kadar kadar biohidrogen dengan variasi konsentrasi onggok
biohidrogen tersebut terjadi karena kadar nitrogen pada industri tapioka dan urea adalah sebesar 0,000 (p < 0,05),
tiap perlakuan mengalami peningkatan sehingga bakteri sehingga dapat disimpulkan bahwa:
Enterobacter aerogenes tercukupi kebutuhan nitrogennya 1. Ada pengaruh konsentrasi onggok industri tapioka
akibatnya biohidrogen juga semakin banyak. Pada terhadap kadar glukosa hasil hidrolisis enzimatis.
Kadar glukosa optimum dihasilkan pada
penggunaan urea konsentrasi 4% dan 5% terjadi
penggunaan onggok industri tapioka konsentrasi
penurunan kadar biohidrogen, hal ini juga sesuai dengan 35%, yakni sebesar 47,5%.
uji LSD yang menunjukkan bahwa tidak terdapat 2. Ada pengaruh konsentrasi urea terhadap kadar
perbedaan yang signifikan pada perlakuan tersebut. biohidrogen hasil proses fermentasi gelap dari
Penurunan kadar biohidrogen tersebut terjadi karena hidrolisat onggok industri tapioka. Kadar
perbandingan nitrogen dan karbon pada tiap perlakuan biohidrogen optimum dihasilkan pada penggunaan
semakin tidak seimbang (lebih banyak kandungan urea konsentrasi 3%, yakni sebesar 2,8997%.
karbonnya) sehingga bakteri Enterobacter aerogenes
kekurangan sumber nitrogen akibatnya kadar biohidrogen SARAN
yang dihasilkan menurun. Anunputtikul (2004) 1. Perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang
menyatakan bahwa kurangnya elemen khusus yang penentuan kadar glukosa total dari onggok industri
diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme akan tapioka untuk meningkatkan efisiensi dalam
membatasi produksi biogas tersebut [11]. menghasilkan glukosa.

118
UNESA Journal of Chemistry Vol. 2 No. 3 September 2013

2. Perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang Surabaya: Jurusan Kimia, Universitas Negeri
penentuan fase pertumbuhan Enterobacter Surabaya.
aerogenes agar dapat diketahui fase yang tepat 11. Khaerunnisa, Gita dan Ika Rahmawati. 2013.
untuk menghasilkan kadar biohidrogen secara
Pengaruh pH dan Rasio COD:N Terhadap Produksi
maksimal.
3. Perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang Biogas Dengan Bahan Baku Limbah Industri Alkohol
penggunaan bakteri penghasil biohidrogen lain (Vinasse). Jurnal Teknologi Kimia dan Industri. 2/31-
untuk menghasilkan kadar biohidrogen yang 7. Semarang: Universitas Diponegoro.
maksimal.

DAFTAR PUSTAKA
1. Rahman, Mahyudin Abdul dan Koesnandar. 2006.
Biohydrogen Production: Prospect and Limitations to
Practical Application. Akta Kimindo Vol. 1 No. 2
April: 73-78.
2. _______. 2011. Hingga 2030, Permintaan Energi
Dunia Meningkat 45%.
http://www.esdm.go.id/berita/37-umum/2133-hingga-
2030-permintaan-energi-dunia-meningkat-45.html.
Diakses pada 28 Januari 2013.
3. Rahman, Mahyudin Abdul dan Eniya Dewi. 2009.
Inovasi Teknologi Biohidrogen Dari Limbah
Biomassa Ke Energi Listrik Dengan Teknologi Fuel-
Cell. Jurnal Teknik Lingkungan Vol. 10 No. 3 Hal.
319-327.
4. Trisakti, Bambang, dkk. 2012. Perancangan Awal
Pabrik Biohidrogen Dari Limbah Cair Pabrik Kelapa
Sawit Dengan Fermentasi Anaerobik Pada Kondisi
Termofilik. Jurnal Teknik Kimia Universitas
Sumatera Utara Vol. 1 No. 1.
5. Yokoyama, Shinta et al. 2008. The Asian Biomass
Handbook. Japan: The Japan Institute of Energy.
6. Winarno. 1984. Limbah Pertanian. Jakarta:
Departemen Perindustrian.
7. Agustini, Rudiana, dkk. 2009. Pengembangan Biofuel
Ramah Lingkungan Dengan Memanfaatkan Biomassa
Limbah Organik Beserta Aplikasinya Dalam Proses
Hydrocacking Dan Hydrotreating Petroleum.
Laporan penelitian tidak dipublikasikan. Surabaya:
Universitas Negeri Surabaya.
8. Laga, Amran. 2008. Pengaruh Konsentrasi Substrat
Hidrolisat Tapioka Dan Akseptor Minimal Pada
Pembentukan Siklodekstrin. Jurnal Teknologi dan
Industri Pangan Vol. XIX No. 2.
9. Widyastuti, Etty Tri. 2011. Produksi Biohidrogen
Menggunakan Sorgum Manis (Sorghum Bicolor (L.)
Moench) Oleh Enterobacter Aerogenes ADH-43 Pada
Reaktor Packed-Bed. Bogor: Sekolah Pascasarjana,
Institut Pertanian Bogor.
10. Prasetyowati, Wahyu. 2011. Pengaruh Konsentrasi
Enzim Dan Lama Inkubasi Terhadap Produksi Bio-H2
Pada Proses Degradasi Limbah Padat Industri
Tapioka (Onggok). Skripsi yang tidak dipublikasikan.

119