Recife, 2016

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS
POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Chlorella vulgaris:

APLICAÇÃO EM BIOCELULAS A COMBUSTÍVEL
FOTOSSINTÉTICA, PRODUÇÃO DE ENERGIA E
SEQUESTRO DE CO2
DAVI DE LIMA CAVALCANTI
Recife, 2016

SEQUESTRO DE CO2
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Ciências Biológicas da
Universidade Federal de Pernambuco, como
parte dos requisitos para a obtenção do título
de Mestre em Ciências Biológicas.
Área de Concentração: Microbiologia

aplicada
Linha de Pesquisa: Biotecnologia
Orientadora: Profª. Dra. Galba Maria de Campos Takaki

Co-orientador: Dr. Camilo Enrique. La Rotta Hernandez
Recife, 2016
Catalogação na fonte
Elaine Barroso
CRB 1728
Cavalcanti, Davi de Lima

Potencial biotecnológico de Chlorella vulgaris: aplicação em
biocélulas a combustível fotossintética, produção de energia e sequestro
de CO2/ Davi de Lima Cavalcanti– Recife: O Autor, 2016.
67 folhas : il., fig., tab.

Orientadora: Galba Maria de Campos Takaki
Coorientador: Camilo Henrique la Rotta Hernandez
Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de
Pernambuco. Centro de Ciências Biológicas. Biotecnologia,
2016.
Inclui bibliografia
1. Energia 2. Chlorella 3. Biotecnologia I. Takaki, Galba

Maria de Campos (orientadora) II. Rotta Hernandez, Camilo
Henrique la (coorientador) III. Título
333.79 CDD (22.ed.) UFPE/CCB-2016-204

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS

SEQUESTRO DE CO2
APROVADO EM:23/02/2016
Examinadores:
______________________________________________________________
Dra. Galba Maria de Campos Takaki (Orientadora)
Universidade Católica de Pernambuco- UNICAP
______________________________________________________________
Dra. Celuta Sales Alviano
Universidade Federal do Rio de Janeiro – UFRJ
______________________________________________________________
Dr. Marcos Antônio Barbosa de Lima
Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE
Suplentes:______________________________________________________________
Dra. Ana Lucia Figueiredo Porto
Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE
______________________________________________________________
Dra. Luciana Oliveira Franco

Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE
Dedico a minha família por todo amor e apoio...
A Débora por fazer parte de minha vida...
A todos os meus amigos...
A Deus por me dar capacidade...

“Nunca ande pelo caminho traçado, pois ele conduz somente até
onde os outros já foram”
Graham Bell, A.
AGRADECIMENTOS
A Deus por ter me dado forças e ter me permitido chegar até o presente momento.
A meus pais, Manoel Neves Cavalcanti e Gilclécia de Lima Cavalcanti, por terem me
apoiado e me ajudado por toda minha vida, incentivando-me nos momentos de
dificuldades e sempre me dando os melhores exemplos de honestidade e dignidade,
além de todo amor.
A minha namorada Débora Sousa Pereira Silva, por fazer parte de minha vida, por todo
o seu amor, carinho, companheirismo, incentivos, compreensão e ensinamentos
científicos, além de sempre acreditar em mim.
Aos meus grandes amigos Daylin Rubio, Marcos Luna, Hamilton Nobrega, Carlos Vilar
e Paulo Henrique da Silva, pelo companheirismo e todos os momentos de descontração
e alegria durante estes dois anos.
A todos os amigos do NPCIAMB, por toda a ajuda oferecida durante o

desenvolvimento deste trabalho, e em especial, aos técnicos e amigos André e
Humberto.
A professora Galba Maria de Campos Takaki e Camilo La Rotta por ter confiado este
trabalho e dado a oportunidade de crescer pessoalmente e profissionalmente na
Ciência. Ao professor Sérgio Perez, pela colaboração em todos os momentos.
A Universidade Católica de Pernambuco, na pessoa do Magnífico Reitor Prof. Dr. Pe.

Pedro Rubens Ferreira de Oliveira, por disponibilizar os laboratórios do Núcleo de
Pesquisa em Ciências Ambientais e Biotecnologia – NPCIAMB.
A professora Maria Fátima Vieira de Queiroz Sousa, por ter me dado à primeira
oportunidade de estágio em um laboratório de microbiologia e a quem tenho um carinho
enorme e que a considero minha “Mãe na Ciência”.
A professora Norma Buarque de Gusmão, por ter me dado à oportunidade de continuar

meu trabalho no laboratório, após o afastamento da área de pesquisa da professora
Fátima.
A todos os professores que fizeram parte de minha formação acadêmica tanto na UFPE,
quanto aos professores de meu ensino médio, em especial o professor Raniere Gilson,
que sempre acreditou em mim, incentivando a seguir em frente, mostrando-me a forma
de fazer, tendo em vista a minha dedicação.
Aos órgãos de fomento CAPES, FACEPE e CNPq, pela concessão da bolsa e suporte
financeiro essenciais para o desenvolvimento deste trabalho.
Obrigado e que Deus continue abençoando cada um!

SUMÁRI0
LISTA DE FIGURAS ................................................................................................................... 9

LISTA DE TABELAS ................................................................................................................ 10
RESUMO .................................................................................................................................... 11
ABSTRACT ................................................................................................................................ 12
CAPÍTULO 1 .............................................................................................................................. 13
1. INTRODUÇÃO .................................................................................................................. 14
2. OBJETIVOS ...................................................................................................................... 16
2.1. OBJETIVO GERAL ................................................................................................... 16
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ...................................................................................... 16
3. REVISÃO DA LITERATURA ........................................................................................ 17
3.1. CÉLULAS A COMBUSTÍVEL.................................................................................. 17
3.2. CÉLULA A COMBUSTIVEL MICROBIANAS ....................................................... 19
3.3. CÉLULAS A COMBUSTÍVEL FOTOSSINTÉTICA ............................................... 21
3.4. CÁTODO MICROBIANO ......................................................................................... 24
3.5. MICRO-OGANISMOS EXOELETROGÊNICOS ..................................................... 26
3.6. MICROALGAS .......................................................................................................... 27
3.7. Chlorella vulgaris ....................................................................................................... 29
3.8. SEQUESTRO DE CO2................................................................................................ 32
4. BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................... 33
CAPÍTULO 2 .............................................................................................................................. 39
ARTIGO I - Sequester of CO2 and Power Generation in Photosynthetic Fuel Cells of
Chlorella vulgaris ....................................................................................................................... 40
ABSTRACT ................................................................................................................................ 40
1. INTRODUCTION ............................................................................................................. 40
2. MATERIALS AND METHODS...................................................................................... 41
2.1 Configuration of the PFC ......................................................................................... 41
2.2 Photosynthetic Culture ............................................................................................. 41
2.3 Chronoamperometric Analysis ................................................................................ 42
2.4 Coulombic Efficiency Calculation (CE) .................................................................. 42
2.5 Measurement of CO2 Dissolved................................................................................ 42
2.6 Starch Content ........................................................................................................... 42
2.7 Extraction of Total Lipids ........................................................................................ 42
3. RESULTS AND DISCUSSION........................................................................................ 43
3.1 CO2 Consumption ..................................................................................................... 43
3.2 Biomass Analysis ....................................................................................................... 43
3.3 Electrochemical Analysis .......................................................................................... 44
4. CONCLUSION .................................................................................................................. 44
5. ACKNOWLEDGMENTS ................................................................................................ 44
6. REFERENCES .................................................................................................................. 45
CAPÍTULO 3 .............................................................................................................................. 47
ARTIGO II - Otimização das Condições de Cultivo de Chlorella vulgaris para a Geração de
Energia, Acumulação de Amido e Lipídios em Célula a Combustível Fotossintética ................ 47
RESUMO .................................................................................................................................... 48
1. Introdução .......................................................................................................................... 48
2. Materiais e Métodos .......................................................................................................... 49
2.1. Configuração da CCF ............................................................................................... 49
2.2. Cultura Fotossintética ............................................................................................... 50
2.3. Análise de Cronoamperometria ............................................................................... 50
2.4. Cálculo da eficiência coulômbica (CE) .................................................................... 50
2.5. Análise do teor de amido .......................................................................................... 51
2.6. Análise de lipídios totais ........................................................................................... 51
2.7. Planejamento fatorial ................................................................................................ 51
3. Resultados e discussão ...................................................................................................... 52
3.1. Análises eletroquímicas............................................................................................. 52
3.2. Análise da biomassa .................................................................................................. 52
4. Conclusões .......................................................................................................................... 53
5. Agradecimentos ................................................................................................................. 53
6. Bibliografia ........................................................................................................................ 54
CONCLUSÕES GERAIS ........................................................................................................... 58
LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Esquema de uma célula a combustível: a) Célula a combustível a hidrogênio.

b) Célula a combustível a metanol. ................................................................................ 17
Figura 2: Esquema de uma CCM simples com um ânodo anaeróbico e um cátodo
aeróbico separado por uma Membrana de Troca Protônica (PEM). .............................. 20
Figura 3: Esquema de funcionamento de uma Célula a Combustível Fotossintética
(CCF) com cátodo de microalgas. .................................................................................. 22
Figura 4: Diferentes configurações de uma célula a combustível fotossintética CCF. a)
CCF de câmara única. b) CCF de sedimentos. c) CCF híbrida. d) CCF acoplada. ........ 24
Figura 5: Formas de transferência de elétrons por micro-organismos: a) Transferência
direta. b) Transferência feita através de nanofios. .......................................................... 26
Figura 6: Classificação das algas de acordo com sua coloração e substâncias de reserva.
........................................................................................................................................ 28
Figura 7: Cultura pura da microalga Chlorella vulgaris. ............................................... 29
Figura 8: Esquema básico da organização célular das organelas da microalga Chlorella
vulgaris ........................................................................................................................... 31
Figura 9: Fases da reprodução da C. vulgaris: (a) Crescimento celular precoce; (b)
Crescimento celular com atraso; (c) Divisão do cloroplasto; (d) Inicio da divisão do
protoplasto; (e) Final da divisão do protoplasto, (f) Maturação das células filhas; (g)
Fase de incubação. .......................................................................................................... 31
Figura 10: Perfil cronoamperométrico de uma CCF com cátodo de microalga C.
vulgaris em diversas condições de cultivo. a) Ensaios 1 e 2: Sem iluminação b) Ponto
central: Fotoperíodo de 12 horas e [N]=5,42g/-1L. c) Ensaio 3: luminação 24 horas e
[N]=2,6g/L-1. d) Ensaio 3 com iluminação 24 horas e [N]=8,24g/L-1. .......................... 56
Figura 11: Porcentagem de amido e lipídios em C. vulgaris cultivadas em diversas
condições de cultivo seguindo o planejamento fatorial 2².............................................. 56
Figura 12: Diagrama de Pareto ilustrando os efeitos das interações entre as variáveis
independente intensidade luminosa e concentração de nitrogênio sobre a variável
resposta acúmulo de amido (a) e lipídios (b). ................................................................. 57
LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Diferentes tipos células a combustível ........................................................................ 19

Tabela 2: Composition of mineral medium used in the experiments with C. vulgaris. .............. 41
Tabela 3: Composição do meio mineral utilizado no cultivo da microalga Chlorella vulgaris 557
Tabela 4: Matriz do planejamento fatorial completo 2² ............................................................ 557
RESUMO
O crescimento da população mundial vem causando um aumento substancial na

demanda por energia o que poderá causar em curto prazo uma crise energética, pois
grande parte da energia consumida em todo mundo é proveniente de fontes não
renováveis como o petróleo, já que sua prospecção e utilização tem causado grandes
danos a natureza, impactando vários ecossistemas e colaborando com o aquecimento
global. Por estes motivos, novas tecnologias para geração de energia limpa vêm sendo
criadas. Um exemplo destas são as células a combustível, que são dispositivos que
convertem energia química em elétrica. Porém esta tecnologia apresenta algumas
limitações, como deficiências na transferência de elétrons, baixa geração de potência e
altos custos associados a utilização de catalizadores metálicos, os quais aumentam os
custos de implantação e dificultam sua utilização em larga escala. Visando superar estas
limitações uma variação desta tecnologia foi desenvolvida, a chamada célula a
combustível fotossintética. Neste tipo de célula a combustível, microalgas como a
Chlorella vulgaris são utilizadas no compartimento catódico substituindo catalizadores
químicos melhorando sua sustentabilidade e reduzindo os custos de implantação. As
utilizações de cátodos de microalgas também colaboram com o sequestro de carbono da
atmosfera, o convertendo em oxigênio e biomassa rica em metabolitos de grande valor
comercial como amido e lipídios. No presente estudo a microalga C. vulgaris foi
utilizada no compartimento catódico de uma célula a combustível fotossintética a fim de
se analisar sua eficiência na produção de energia, sua capacidade de sequestrar o
dióxido de carbono da atmosfera e seu acúmulo de materiais de reserva como amido e
lipídios totais. Na primeira parte deste estudo a microalga C. vulgaris foi utilizada como
aceptora de elétrons em um compartimento catódico, onde durante 10 dias de
experimento foram avaliados a quantidade de CO2 capturada pelas células de algas
(7mg/L de CO2), a composição da biomassa, Amido (3%) e Lipídios (70%) e
parâmetros eletroquímicos como a Eficiência Coulômbica (CE = 33,1%) e densidade de
corrente máxima (Idmax = 147 mA cm²). Em seguida esta condição foi submetida a um
planejamento fatorial completo 2², onde as variáveis independentes, tempo de
iluminação e a concentração de nitrogênio foram testadas sobre a produção de
eletricidade e acúmulo de amido e lipídios. Durante os experimentos foi constatado que
a iluminação é o fator que mais influi na geração de energia, onde foram obtidos valores
de densidade de corrente máxima Idmax = 178 mA/cm² com uma eficiência coulômbica
de 42,5%, além de uma acumulação máxima de amido de 38% e 77% de lipídios,
demonstrando que a utilização de um cátodo fotossintético para produção de energia é
viável e eficiente na produção de metabólitos com elevado valor comercial.
Palavras-chave: Chlorella vulgaris , célula a combustível, sequestro de carbono,

produção de energia, produção de metabólitos.
ABSTRACT
The global population growth has caused a substantial increase in demand for energy,
which in short-term may cause an energy crisis, since much of the energy consumed
throughout the world comes from non-renewable sources like oil. Besides its
exploration and use cause great damage to the environment, affecting diverse
ecosystems and contributing to global warming. For those reasons, are being created
new technologies for clean energy generation. An example of these technologies is Fuel
Cells, which are devices that convert chemical energy into electric. However, this
technology has some limitations, such as defects in electron transfer, low power output
and high costs associated with the use of metal catalysts, which increase deployment
costs and hamper its use on a large scale. Aiming to overcome these limitations, a
variation of this technology was developed, the so-called photosynthetic fuel cell. In
this type of fuel cell, microalgae such as Chlorella vulgaris are used in the cathode
compartment replacing chemical catalysts improving their sustainability and reducing
deployment costs. The uses of microalgae cathodes also collaborate with carbon capture
from the atmosphere, turning it into oxygen and biomass rich in metabolites of great
commercial value as starch and lipids. In the current study the microalgae C. vulgaris
was used in the cathode compartment of a photosynthetic fuel cell in order to analyze its
energy production efficiency, their ability to sequester atmospheric carbon dioxide and
its accumulation of reserve materials such as starch and total lipids. The first part of this
study microalga C. vulgaris was utilized as an electron acceptor in a cathode
compartment, which were analyzed during 10 days of experiment the amount of CO2
captured by the algae cells (7mg/L-1 of CO2), the composition of the biomass starch
(3%) and lipids (70%) and electrochemical parameter as coulombic efficiency (CE =
33.1%) and the maximum current density (mA Idmax = 147 cm²). Then this condition
was subjected to a complete factorial design 2² where the independent variables,
illumination time and the concentration of nitrogen were tested on the production of
electricity and accumulation of starch and lipids. During the experiments it was
evidenced that enlightenment is the factor that most affects the power generation, which
were obtained maximum current density values Idmax = 178 mA/cm² with a coulombic
efficiency of 42.5%, and a maximum accumulation of 38% of starch and 77% of lipid,
demonstrating that the use of a photosynthetic cathode for energy generation is feasible,
and also in the production of metabolites with a high commercial value.
Key words: Chlorella vulgaris , fuel cell, carbon sequestration, energy production.
CAPÍTULO 1
CAVALCANTI, D.L. Potencial Biotecnológico de Chlorella vulgaris ... 14
1. INTRODUÇÃO
O mundo moderno é totalmente dependente de energia e à medida que a população

mundial aumenta esta demanda também aumenta. Atualmente 80% de toda energia
utilizada é oriunda de combustíveis fósseis. Entretanto a utilização desta fonte de
energia apresenta vários problemas, pois não é uma fonte renovável e sua prospecção,
refino, armazenamento e transporte causam derramamentos, impactando o meio
ambiente, assim como sua queima libera uma grande quantidade de gases tóxicos que
podem causar diversas doenças respiratórias em seres humanos. Dentre estes gases o
dióxido de carbono é o principal responsável pelo fenômeno do aquecimento global
contribuindo assim com as mudanças climáticas no planeta (MEDEIROS et al, 2015).
Por todos estes problemas, nos últimos anos várias tecnologias renováveis e eficientes
vêm sendo desenvolvidas visando diminuir a dependência dos combustíveis fósseis.
Dentre estas as mais conhecidas são: energia solar, eólica, hidroelétrica e os
biocombustíveis. Porém todas elas apresentam algum tipo de problema, como por
exemplo, os biocombustíveis que são combustíveis derivados de matéria viva, como
plantas, animais e micro-organismos, onde para sua produção se faz necessário cultivar
grandes áreas, as quais poderiam ser cultivadas com o objetivo de produzir alimentos
deixam de ser utilizadas para este fim. Logo as principais culturas como o milho, cana-
de-açúcar e soja são desviadas para produção destes combustíveis ao invés de serem
destinadas a alimentação, gerando assim um grande problema social e econômico (ZAH
et al, 2009).
Assim, um dos principais objetivos das pesquisas no campo da energia é o

desenvolvimento de tecnologias de conversão. Dentre estas tecnologias destacam-se as
Células a Combustível (CC). Esta tecnologia converte a energia química em energia
elétrica sem a necessidade de combustão, permitindo alcançar uma maior eficiência e
um menor impacto ambiental (DUIC et al 2013). Porém esta tecnologia ainda é
inacessível, pois seus custos são bastante elevados, por utilizarem componentes caros
como catalisadores metálicos, tais como platina (Pt), ósmio (Os), ródio (Rh), baixa
eficiência de conversão e problemas na transferência de elétrons.
Visando diminuir os custos operacionais desta tecnologia e torna-la mais acessível outra
configuração desta tecnologia foi desenvolvida, as chamadas células a combustível
microbianas (CCM). Este tipo de célula a combustível convertem a energia armazenada
nas ligações químicas de compostos orgânicos em energia elétrica através de reações
eletrocatalíticas realizadas por micro-organismos (ANTONOPOULO, et al., 2010).
Ainda dentro desta categoria de CC existe uma variação que consegue diminuir ainda
mais seus custos e torna esta tecnologia viável e acessível por meio do uso de vários
componentes alternativos e de baixo custo vem sendo testados, entre eles estão às
microalgas, que são utilizadas como aceptoras de elétrons nos cátodos em uma variação
das células a combustível, denominadas células a combustível fotossintéticas (CCF).

Este tipo de tecnologia apresenta várias vantagens em relação as demais, pois utilizam a
alta capacidade fotossintética destas microalgas para produzir eletricidade com baixo
custo, utilizando apenas o dióxido de carbono da atmosfera para crescerem, produzindo
uma biomassa extremamente rica e que pode ser utilizadas para extração de vários
produtos de valor comercial, reduzindo os custos de sua utilização.
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GERAL
Desenvolver sistemas eletroquímicos otimizados para a geração de energia elétrica em

uma célula a combustível fotossintética de baixa temperatura (25ºC) somada a geração
de produtos de interesse industrial como carboidratos e lipídios.
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Otimizar as condições de cultura: Tempo de Iluminação e concentração de

nitrogênio.
 Avaliar os subprodutos de interesse: amido e lipídios
 Induzir a acumulação de amido e lipídios através da otimização das condições de

cultivo.
 Gerar energia elétrica a partir de dispositivos eletroquímicos otimizados

acoplados a sistemas biológicos de sequestro de CO2.
3. REVISÃO DA LITERATURA
3.1. CÉLULAS A COMBUSTÍVEL
O desenvolvimento das primeiras células a combustível (CC) em inglês Fuel Cell (FC)
para geração de energia remonta a meados do século 19 e é atribuída a Sir William
Grove, porém os princípios teóricos desta tecnologia foram descobertos e propostos por
Christian Friedrich Schönbein professor da Universidade da Basileia. Num entanto,
nesta época as fontes primárias de energia eram baratas e abundantes, o que restringiu
seu uso. Porém no início do século 20 a conversão de energia química em energia
elétrica tornou-se mais importante devido ao aumento da utilização da eletricidade, pois
nas últimas décadas vem ocorrendo um aumento da população mundial somado a
crescente preocupação com as consequências ambientais causadas pela utilização das
matrizes energéticas atuais, o que torna indispensável o uso de outros sistemas eficazes
de geração de energia limpa.
Células a combustível são uma tecnologia emergente e muito promissora na geração de

energia limpa. Estes equipamentos convertem energia química em energia elétrica sem a
necessidade de combustão e com maior eficiência sem a emissão de poluentes, podendo
chegar a uma eficiência de conversão de 85 a 90% (TAN ZHONGFU et al, 2015).
Devido a sua alta reatividade o hidrogênio é o combustível mais utilizado em células a
combustível, mas, podem ser utilizados outros gases, como o gás natural ou mesmo o
metanol (HARTMUT, W et al 2000). Por ter uma alta eficiência e uma grande
versatilidade as CFs permitem a montagem de usinas em micro escala (< 1kW) e grande
escala (> 10 MW), (McPHAIL et al 2011).
Fonte: VILLULLAS et al 2002
Figure 1: Esquema de uma célula a combustível: a) Célula a combustível a hidrogênio.

b) Célula a combustível a metanol.
A estrutura básica de todas as células a combustível são semelhantes, sendo compostas

por dois compartimentos: um compartimento anódico e um catódico com eletrodos
separados por um eletrólito (Figura 1). Nos compartimentos anódico e catódico é
adicionado um fluxo de gás ou líquido para fornecer aos eletrodos combustível/oxidante
(Ânodo) e oxigênio (Cátodo). Os eletrodos, em sua maioria são porosos para que sejam
permeáveis ao combustível utilizado (gás ou líquido). Assim ao introduzir um
combustível como o hidrogênio no compartimento anódico, o mesmo passa por um
processo de oxidação direta utilizando catalizadores de platina para acelerar a reação
(Equação 1), liberando assim elétrons (Equação 2). Estes elétrons por uma diferença de
potêncial entre os dois compartimentos são conduzidos para o compartimento catódico
através de uma resistência externa gerando assim uma corrente elétrica. No
compartimento catódico estes elétrons iram reduzir o oxigênio gerando água ao final do
processo (Equação 3).
2Pt + H2 Pt-Hads + Pt-Hads (1)
Pt-Hads H+ + e- +Pt (2)
H2 + ½ O2 H2O com G = -237 KJ/mol (3)
A oxidação do hidrogénio envolve a adsorção do gás (Hads) sobre a superfície do

catalisador (Pt-Hads) seguido de uma dissociação da molécula e reação eletroquímica a
dois prótons de hidrogênio.
As células a combustível são geralmente classificadas pelo eletrólito que utilizam. Uma
exceção a esta classificação são as DMFCs (Direct Methanol Fuel Cell), que é uma CC
na qual o metanol alimenta diretamente o compartimento anódico. As CC também
podem ser divididas segundo sua temperatura de operação em: Células a combustível de
baixa temperatura e de alta temperatura, que podem chegar a temperaturas de 600 a
1000 °C. Uma visão mais geral sobre os tipos de CC é mostrada na tabela 1.
Tabela 1: Diferentes tipos de células a combustível
Fonte: CARRETTE, et al 2002.
As células a combustível possuem inúmeras vantagens em relação a outras tecnologias,

como, não emitem poluentes, rápida implantação/instalação, alta eficiência,
escalabilidade, pode operar em condições extremas, baixa manutenção, entre outras,
mas, atualmente o principal fator que dificulta a inclusão bem sucedida desta tecnologia
no mercado é seu alto custo em comparação com outras tecnologias existentes
(HARDMAN et al 2015). Visando diminuir os custos de operação das CC, variações
das mesmas vêm sendo desenvolvidas. Dentre elas destacam-se as células a combustível
microbiana (CCM), que substituem componentes de alto valor em CC convencionais
por micro-organismos que através de sua maquinaria metabólica convertem a energia
contida em substratos orgânicos em energia elétrica.
3.2. CÉLULA A COMBUSTIVEL MICROBIANA
O conceito de bioeletricidade em seres vivos foi proposto pela primeira vez em meados
de 1700 por Luigi Galvani (1737-1798), um médico e também físico italiano que
constatou eletricidade intrínseca em tecidos de rãs. Algum tempo depois em 1911
Michael C. Potter desenvolveu o primeiro protótipo de célula a combustível microbiana
(CCM), onde ele utilizou uma cultura bacteriana e constatou um fluxo de elétrons entre
dois eletrodos. O conceito de designe atual de CCM foi proposto em 1977 por Karube et
al (1977), porém não se sabe ao certo como foi desenvolvida naquela época. E em 1999,
Kim et al conseguiram gerar eletricidade com sucesso em uma CCM, sendo considerado
um marco para esta tecnologia (HAI-LIANG et al 2015).
A Célula a combustível microbiana é uma tecnologia promissora que tem chamado

muita atenção nos últimos anos, pois ela possibilita a produção de corrente elétrica a
partir da oxidação de matéria orgânica por micro-organismos ou enzimas
(RAHIMNEJAD et al., 2011). Estes biorreatores convertem a energia armazenada nas
ligações químicas de compostos orgânicos em energia elétrica através de reações
eletrocatalíticas realizadas por micro-organismos (ANTONOPOULO, et al., 2010).
Figure 2: Esquema de uma CCM simples com um ânodo anaeróbico e um cátodo

aeróbico separado por uma Membrana de Troca Protônica (PEM).
A principal vantagem em utilizar a CCM em relação à célula a combustível

convencional, é poder utilizar uma grande variedade de compostos que podem ser
utilizados como combustíveis, como efluentes domésticos e industriais, materiais
lignocelulósicos, dióxido de carbono, entre outros (LOGAN, 2008). Por esta razão as
CCMs podem ser aplicadas a diversos sistemas, como por exemplo, no tratamento de
águas residuais, onde ao se utilizar a matéria orgânica da água como combustível para a
geração de energia pode ajudar suprir uma parte da demanda por eletricidade,
diminuindo assim os custos operacionais da estação de tratamento (LU et al., 2009).
Seguindo este raciocínio, verificou-se que as CCMs podem ser utilizadas eficientemente
como um biossensor para o monitoramento da quantidade de matéria orgânica em águas
residuais, pois existe uma correlação entre a eficiência coulômbica, que é definida como
a razão entre o número de Coulombs efetivamente transferido para o ânodo e o total de
Coulombs produzido, considerando que todo o substrato oxidado produza elétrons e a
quantidade de matéria orgânica em águas residuais, fornecendo assim uma ideia da
quantidade de matéria orgânica (QUEK et al, 2015).
As CCMs também podem auxiliar no tratamento e descoloração de corantes que são

extremamente danosos ao meio ambiente, pois são compostos tóxicos resistentes à
degradação microbiana e que impedem a penetração da luz e do oxigênio na água,
causando um grande dano à vida aquática (UMBUZEIRO et al, 2005). Os corantes são
utilizados no compartimento anódico, onde através da oxidação em anaerobiose de

substratos orgânicos, ocorre a redução dos corantes, causando assim a descoloração. A
redução destes corantes também pode ocorrer por vários mecanismos, como a ação de
enzimas de descoloração, mediadores redox, redução química com redutores biogênicos
ou a combinação destes (PANDEY et al, 2007., SOLANKI, 2013).Elas também são
utilizadas na degradação de contaminantes como o fenol, que geralmente é encontrado
em efluentes industriais, petróleo e petroderivados e na remoção de pesticidas (LUOA
et al, 2009., XIAN CAO et al, 2015).
O desempenho de uma CCM depende das reações eletroquímicas entre a matéria

orgânica e o aceptor final de elétrons como, por exemplo, o oxigênio. No entanto, está
tecnologia ainda apresenta alguns problemas, como a geração de baixos níveis de
potência, onde estes níveis são afetados por ainda existir limitações nos processos e
reações que ocorrem nos compartimentos catódicos e anódico. Além de perdas por
quedas ôhmicas, onde estas podem ser minimizadas diminuindo a distância entre os
eletrodos, aumentando a condutividade iônica dos eletrólitos e utilizando membranas de
baixa resistência. Já em densidades de corrente muito altas, a maior perda ocorre devido
a incapacidade de manter a concentração inicial do substrato no fluido e a limitação de
transporte de massa (OLIVEIRA et al., 2013).
As CCM mais comuns são compostas por dois compartimentos: catódico e anódico
separados fisicamente por uma membrana de troca protônica (PEM) ou uma ponte
salina. No anodo as reações acontecem em anaerobiose, onde um biocatalizador ativo
oxida a matéria orgânica liberando prótons e elétrons. Os prótons migram para o
compartimento catódico através da PEM/Ponte Salina, entram no compartimento
catódico onde reagem com o oxigênio formando água. Os elétrons são absorvidos no
ânodo e transportados ao cátodo através de um circuito externo gerando corrente elétrica
(ANTONOPOULOU et al., 2010.; GHASEMI, et al., 2012, OLIVEIRA et al., 2013.;
RAHIMNEJAD, et al., 2015).
Além da configuração clássica, existem variações nas configurações dos

compartimentos anódico e catódico visando o aumento da geração de eletricidade e a
diminuição dos custos operacionais. Dentre essas variações destacam-se as Células a
Combustível Microbiana Hibrida (CCMH) e as Células a Combustível Fotossintéticas
(CCF).
3.3. CÉLULAS A COMBUSTÍVEL FOTOSSINTÉTICA
Tecnologias voltadas a utilização da energia solar estão cada vez mais ganhando
importância devido a preocupação crescente com a escassez dos recursos naturais não
renováveis e o meio ambiente. Nos últimos anos várias tecnologias vêm sendo
desenvolvidas, dentre eles as células a combustível fotossintética (CCF).
A célula a combustível fotossintética é um dispositivo onde organismos fotossintéticos

atuam como biocatalizadores transformando a energia da luz em bioeletricidade
utilizando CO2 ou outro tipo de substrato orgânico (CHANDRA et al, 2012). Os
organismos fotossintetizantes tem a capacidade de separar, capturar e liberar elétrons
durante o fluxo das reações em cadeia, por isto é possível utilizar o metabolismo
fotossintético para capturar a luz solar e transformar em bioeletricidade (EL
MEKAWYA, 2014).
Neste tipo de CCM, os micro-organismos fotossintetizantes são utilizados como

aceitador de elétrons biológico no compartimento catódico, onde simultaneamente reduz
o CO2 a biomassa e oxigênio (Equação 4). No ânodo, ocorre a oxidação do substrato
liberando elétrons (Equação 5), onde estes são transportados até o cátodo por um
circuito externo. No compartimento catódico os elétrons reduzem um mediador
eletroquímico oxidado. Este mediador penetra nas células dos organismos
fotossintetizantes onde libera sua carga de elétrons tornando-se mais uma vez oxidado.
Uma vez dentro de suas células, estes organismos utilizam estes elétrons em suas vias
metabólicas para transformar o CO2 em biomassa e O2.
C 6 H 12 O 6 (Biomassa) + 6 H 2 O → 6 CO2 + 24 H+ + 24 e- (4)
6 CO2 + 12 H+ + 12 e- → C 6 H 12 O 6 (Biomassa) + 3 O 2 (5)
(ZHOU et al, 2012).
Figure 3: Esquema de funcionamento de uma Célula a Combustível Fotossintética

(CCF) com cátodo de microalgas.
Existem várias configurações de CCF, onde as microalgas podem ser cultivadas em

ambos os compartimentos (catódico ou anódico). Em grande parte das CCF, as
microalgas são utilizadas como biocatalizadores anódicos, onde desenvolvem um
biofilme que possui a capacidade de assimilar um substrato gerando elétrons, que por
sua vez são transferidos para o eletrodo de forma direta ou com o auxilio de um
mediador. As microalgas são utilizadas como biocátodos a fim de substituir os sistemas
convencionais de aeração, sendo assim uma alternativa mais econômica. Além disso, os
cátodos de microalga contribuem com a diminuição da concentração do dióxido de
carbono na atmosfera (EL MEKAWY et al 2014). O dióxido de carbono capturado por
estas microalgas são convertidos em biomassa e oxigênio. Biomassa esta que possui
um alto valor agregado, pois são ricos em vários nutrientes essenciais como vitaminas,
carboidratos, ácidos graxos, proteínas, antioxidantes, sais minerais entre outros,
podendo ser utilizada para a alimentação humana e animal, além de poder ser utilizada
para a produção de biocombustíveis como o biodiesel, bioetanol e biogás, agregando
assim valor a biomassa e reduzindo os custos de operação. Por estes motivos este tipo
de CCM vem recebendo bastante atenção nas últimas décadas (PANDIT et al, 2012.;
GOUVEIA, et al, 2014).
Além da configuração mais comum utilizada neste sistema de CCF (Figura 3.), existem
algumas variações, como: CCF de câmara única, CCF de sedimentos, CCF hibrida,
CCF acoplada. Nas CCF de câmara única (Figura 4.a) os eletrodos do cátodo e do
ânodo ficam em uma única câmara sem separação por membranas. As microalgas ficam
aderidas ao eletrodo anódico enquanto o catódico fica livre. Durante o dia ocorre a
fotossíntese, onde ocorre a oxidação do dióxido de carbono liberando elétrons e
oxigênio. Durante a noite ocorre o processo de respiração celular. Estas reações de
fotossíntese e respiração geram corrente elétrica (El MEKAWY et al, 2014).
Nas CCF de sedimentos ou CCM bentônicas (Figura 4. b) a energia é gerada através da

diferença de potencial elétrico natural utilizando um ânodo enterrado em uma camada
de sedimentos e um cátodo submerso em água. A geração de energia se dá a partir da
diferença de potencial gerada a partir da oxidação de moléculas orgânicas por micro-
organismos no sedimento que irá liberar elétrons, que por sua vez irão migrar para o
compartimento catódico onde as microalgas irão realizar fotossíntese liberando oxigênio
que irá ser reduzido à água (De SCHAMPHELAIRE et al 2008).
As CCF híbridas (Figura 4. C) são compostas por dois compartimentos separados por
uma membrana de troca protônica. No compartimento anódico adiciona-se algum
substrato, onde geralmente se utiliza lama ativada de alguma estação de tratamento com
micro-organismos. No compartimento catódico, utilizam-se culturas de microalga,
geralmente iluminadas 12 horas por dia. Ambos os compartimentos são ligados por um
tubo coletor de gases localizado no topo de cada compartimento. Assim, o dióxido de
carbono gerado durante a fermentação no compartimento anódico é levado ao
compartimento catódico onde será utilizado pelas microalgas para a realização da
fotossíntese. A geração de corrente se dá através da diferença de potencial elétrico
gerado entre as câmaras anódicas e catódicas, onde no ânodo ocorre a liberação de
elétrons pela oxidação do substrato. Na câmara catódica, o processo fotossintético libera
oxigênio que será reduzido e formará água, gerando assim um fluxo de elétrons entre as
câmaras (LOBATO et al, 2013).
Nas CCF acopladas (Figura 4.d) são fotobiorreatores que são acoplados a tanques de
fermentação, onde o CO2 é produzido por fermentação. Neste tipo de CC, não se faz
necessária a utilização de membranas de troca protônica, o que possibilita sua utilização
em grande escala. Este tipo de CC já foi utilizado em indústria produtora de etanol,
onde este sistema foi acoplado em tanques de fermentação de levedura. Este sistema
integrado é benéfico, pois a energia produzida supre parte da demanda da fabrica, além
de diminuir as emissões de dióxido de carbono (POWELL e HILL 2009).
Figure 4: Diferentes configurações de uma célula a combustível fotossintética CCF. a)

CCF de câmara única. b) CCF de sedimentos. c) CCF híbrida. d) CCF acoplada.
Fonte: El MEKAWY et al, 2014
3.4. CÁTODO MICROBIANO
Um dos principais atrativos nas células a combustível microbianas é a possibilidade da

utilização de substratos de baixo custo para a geração de eletricidade. Durante a última
década vários avanços cruciais na compreensão das reações biológicas destes sistemas
vêm sendo desenvolvidos, além de melhorias na sua arquitetura, materiais e soluções
químicas utilizadas neste processo, obtendo assim bons desempenhos. Porém, mesmo
com todas estas inovações em seu desenvolvimento, sua utilização em larga escala é
comprometida, pois os custos com os materiais utilizados no compartimento catódico
como a platina é bastante elevado. Embora vários catalizadores químicos mais baratos
venham sendo testados, a densidade de potência gerada ainda é baixa e precisa ser
melhorada (DUTEANU et al 2010., HUANGA et al 2011).
Os cátodos microbianos utilizam micro-organismos (bactérias, fungos, microalgas)

como biocatalizadores e receptores de elétrons, oferecendo uma alternativa a utilização
de metais preciosos e catalizadores químicos para a redução do oxigênio nos
compartimentos catódicos aumentando a viabilidade econômica e ambiental das CCM.
Além disso, os biocátodos permitem a utilização de receptores de elétrons alternativos
que podem ampliar a utilidade das CCM utilizando a catálise microbiana para gerar
produtos com valor comercial agregado e simultaneamente gerar eletricidade (LOGAN
2010., SONG et al 2015).
Com o desenvolvimento dos cátodos microbianos, várias substâncias vêm sendo

utilizadas como aceptor final de elétrons como o oxigênio, sais inorgânicos, dióxido de
carbono e alguns metais de transição. Embora o mecanismo de transferência de elétrons
biológico não esteja totalmente elucidado, sabe-se que os micro-organismos
desempenham um papel importante neste processo (XIE et al 2010., CHEN et al 2010).
Os cátodos mais comuns utilizam o oxigênio como aceptor de final de elétrons, pois,
devido a seu elevado potencial redox (1,229 V) e baixo custo, o O2 é o mais utilizado
nas CCM. Neste tipo de cátodo, os micro-organismos podem transferir os elétrons
diretamente para o oxigênio ou ajudam a oxidação de metais de transição para a entrega
de elétrons para o oxigênio (XIE et al 2010., CHEN et al 2010).
Outros tipos de compostos também podem ser utilizados como receptores finais de
elétrons, como alguns sais inorgânicos. Este tipo de receptor final de elétrons só é eficaz
em condições anaeróbicas, fazendo com que o nitrato e sulfato ajam como receptores
finais de elétrons, pois com um baixo teor de oxigênio ocorre a diminuição da dispersão
dos elétrons no cátodo, reduzindo assim o transporte de elétrons e consequentemente a
redução da eficiência (XIE et al 2010., SONG et al 2015).
Os sistemas de biocátodos apresentam várias vantagens em relação aos sistemas

convencionais como um menor custo de implantação e uma maior sustentabilidade, pois
os tipos mais comuns de materiais utilizados nos cátodos são muito caros como a
platina e o ferrocianeto, além de danosos ao ambiente. Eles também podem ser
facilmente melhorados, com modificações na estrutura, tamanho, espaçamento, por
exemplo, consegue-se aumentar consideravelmente a geração de energia. Por apresentar
estas características, os sistemas de biocátodos podem ser utilizados no tratamento de
águas residuais, onde o processo de nitrificação é realizado simultaneamente com a
geração de energia, ajudando no processo de remoção das impurezas da água e assim
podendo suprir parte da demanda por energia do local (XIE et al 2011., SONG et al
2015).
3.5. MICRO-OGANISMOS EXOELETROGÊNICOS
O primeiro registro da produção de eletricidade por um micro-organismo foi em 1911

por Potter, onde verificou efeitos elétricos decorrente da decomposição de matéria
orgânica por bactérias. Logan em 2006 define micro-organismos exoeletrogênicos
como aquele com habilidade de estabelecer contato eletroquímico com eletrodos
insolúveis, sem necessitar do auxilio de compostos artificiais. Este contato é
estabelecido por diferentes mecanismos de transferência eletrônica extracelular, através
do contato direto, ou de forma indireta.
Para que ocorra a transferência de forma direta, o micro-organismo precisa estar em

contato com o eletrodo. Esta transferência é realizada por um conjunto de proteínas
associadas à membrana celular identificada como citocromos, principalmente a do tipo
C que possuem a capacidade de transportar os elétrons do interior dos micro-
organismos para o meio extracelular (SCHRODER, 2007).
Este contato pode ser feito por estruturas condutoras produzidas por micro-organismos
conhecidas como nano fios, que são estruturas parecidas com o pili, que conectam
eletricamente a célula bacteriana a superfície do eletrodo. Este segundo mecanismo de
transferência de elétrons foi observado em bactérias metal redutoras. Isto possibilita a
utilização de biofilmes mais espessos sobre a superfície do eletrodo, pois ao contrario
do que se pensava, os micro-organismos que estão mais afastado da superfície do
eletrodo também podem participar da transferência de elétrons, pois as bactérias não
eletroativas podem doar seus elétrons a uma outra célula eletroativa, ajudando assim na
geração de energia (DEBABOV, 2008., SCHRODER, 2007).
Figure 5: Formas de transferência de elétrons por micro-organismos: a) Transferência

direta. b) Transferência feita através de nanofios.
Fonte: Acervo Pessoal
O mecanismo de transferência indireta se dá com a utilização de mediadores

eletroquímicos, pois, alguns micro-organismos não possuem as estruturas necessárias
para a transferência de elétrons (citocromos e nano fios), sendo assim incapazes de
transferir elétrons até os eletrodos. Os mediadores eletroquímicos são compostos
capazes de realizar reações de oxidação e redução reversivelmente, sendo assim capazes
de transportar elétrons entre dois sítios de reações eletroquímicos diferentes. O
mediador oxidado se difunde para o interior do micro-organismo, onde é reduzido. Em
seguida o mediador já em sua forma reduzida, se difunde para fora da célula, onde
libera seus elétrons voltando ao seu estado oxidado. Este processo se repete até todo
substrato se exaurir (LOVLEY, 2006.; SCHRODER, 2007.; DANTAS et al 2013).
Existe uma grande variedade de compostos que tem a capacidade de serem utilizados
como mediadores eletroquímicos, como alguns corantes como o azul de metileno e o
vermelho de toluileno e também alguns compostos como o EDTA e a Tionina. Porém
alguns micro-organismos possuem a capacidade de utilizar alguns de seus metabólitos
como um mediador. Também há evidências de que alguns micro-organismos podem
utilizar mais de um mecanismo de transferência eletrônica extracelular, como foi
evidenciado em S. oneidensis que são capazes de produzir nano fios e mediadores. Por
estes motivos é de fundamental importância identificar o sistema de transporte de uma
FC, a fim de melhorar sua eficiência na geração de energia (MARSILI et al., 2008.,
TORRES et al., 2010).
3.6. MICROALGAS
As algas são classificadas de acordo com sua coloração e suas substâncias de reserva em
cinco grupos principais: Cyanophyceae (Algas azul esverdeadas), Chlorophyceae
(Algas verdes), Phaeophyceae (Algas marrons), Rhodophyceae (Algas vermelhas) e
Bacillariophyceae (Diatomáceas), figura 6. Também possuem uma grande diversidade
de formas e tamanhos, variando de espécies unicelulares (podendo formar colônias), a
formas pluricelulares com estruturas complexas.
Figure 6: Classificação das algas de acordo com sua coloração e substâncias de reserva.
Fonte: http://www.lookfordiagnosis.com
Dentre esta grande diversidade biológica destacam-se as microalgas. Estes micro-

organismos fotossintetizantes podem ser procariotas (como as Cyanophyceae) ou
eucariotas (como as Chlorophyceae), crescem rapidamente e podem viver em condições
adversas, pois possuem uma estrutura celular simples (LI et al., 2008.) Na ficologia
aplicada o termo “microalga” se refere estritamente a algas microscópicas e a bactérias
fotossintéticas aeróbias (Cianobactérias) (TOMASELLI, 2004).
As microalgas se destacam por ser um grupo de micro-organismos extremamente

diverso, presentes em todos os ecossistemas da terra, não só em ambientes aquáticos,
mas também, em ambientes terrestres por esta razão possuem uma grande diversidade.
Estima-se que exista mais de 50.000 espécies, mas, apenas 30.000 já foram estudadas
(RICHMOND, 2004).
Estes micro-organismos fotossintetizantes possuem uma grande capacidade de

sequestrar Dióxido de Carbono da atmosfera (sendo responsáveis por mais da metade da
fixação do CO2 no planeta) através da fotossíntese e acumular biomassa mais rápida e
eficientemente que as plantas terrestres, podendo alcançar uma produtividade por área
100 vezes maior que as plantas convencionais além de ter um crescimento rápido e a
capacidade de acumular ou secretar alguns metabólitos (PIENKOS e DARZINS, 2009;
MENDES et al.,2012).
Nos últimos anos devido à necessidade de explorar fontes alternativas de geração de

energia, a biomassa de microalgas tem recebido grande atenção, pois a partir dela pode
ser produzidos combustíveis, como o bioetanol e o biodiesel, além de vários outros
subprodutos de interesse industrial como pigmentos (Clorofilas e Carotenóides), além
de poderem ser utilizadas diretamente na alimentação devido ao seu alto valor
nutricional, podendo chegar até 60% de proteína, uma alta produtividade de óleo,
chegando a conter de 1-70% de lipídios em sua célula, além de mais de 20 tipos de
vitaminas, sais minerais e aminoácidos essenciais (MORAES, 2006.; CHISTI, 2007.;
WIJFFELS e BARBOSA, 2010; FAROOQ et al 2015). ).
Como qualquer matéria-prima, a utilização de microalgas possuem algumas vantagens,

como: Produção durante todo o ano, permitem a utilização de terrenos marginais, não
compete com a produção de alimentos, permite à utilização de águas improprias para o
uso (água salobra e águas residuais), o Scale-up é relativamente simples, permite a
utilização de resíduos e gases produzidos por sociedades industrializadas, mas também
possui algumas desvantagens como, baixa densidade celular, pequeno tamanho das
células, elevados custos de colheitas, baixo rendimento ao ar livre, contaminações por
outras espécies, problemas na utilização de biorreatores e perdas do meio por
evaporação e foto inibição quando são cultivadas ao ar livre (CHISTI, 2007.; RUSSO,
2011).
3.7. Chlorella vulgaris
As microalgas do gênero Chlorella, foram identificadas pela primeira vez pelo

pesquisador holandês Martinus Willem Beijerinck em 1890 como sendo a primeira
microalga com um núcleo definido em um lago nos arredores da cidade de Delft na
Holanda. Em seu artigo ele descreve que as águas do lago estavam tomadas por
microalgas de um verde intenso ao qual ele comparou com o verde da grama que crescia
nas margens. O nome Chlorella vem da palavra grega chloros (Χλωρός) que significa
verde, e o sufixo latino ella que se refere ao seu tamanho microscópico (SAFI et al
2014). Em 1965, Ikuko Shihira e Robert W. Krauss pesquisadores da Universidade de
Maryland estudaram a fisiologia e a taxonomia de 41 isolados deste gênero de
microalgas, dentre eles estava a Chlorella vulgaris.
Figure 7: Cultura pura da microalga Chlorella vulgaris.

Fonte: Acervo Pessoal
A espécie descrita por Beijerick, C. vulgaris (Figura 7) pertence à seguinte classificação

científica: Domínio: Eukaryota, Reino: Protista, Divisão: Chlorophyta, Classe:
Trebouxiophyceae, Ordem: Chlorellales, Família: Chlorellaceae, Género: Chlorella,
Espécie: Chlorella vulgaris. É uma alga verde, unicelular ou colonial, possui forma
cocóidal medindo de 2-10 µm de diâmetro. Não possuem motilidade sendo encontrada
em sua grande maioria em ambientes dulciaquícolas, mas também em águas salobras
em praticamente todo o mundo. Possui um único cloroplasto e podem acumular
pigmentos como Clorofilas a e b, β-carotenos e xantofilas. Seu carboidrato de reserva
intracelular é o amido, mas possuem a capacidade de acumular lipídios quando se
encontram em condições de estresse (BEIJERINCK, 1890, SHIHIRA e KRAUSS,
1965, NURACHMAN, et al. 2015).
Estudos evolutivos mostraram que as microalgas do gênero Chlorella já estavam na

terra desde o Pré-cambriano, mantendo sua integridade genética e estrutural a cerca de
2,5 bilhões de anos atrás. Em sua morfologia C. vulgaris possuem muitos elementos
estruturais semelhantes as plantas o que sugere que estes organismos possam ter dado
origem as plantas terrestres (SAFI et al 2014).
Sua célula possui uma parede celular rígida que preserva a integridade da célula,
protegendo-a contra invasores e ambientes ásperos. Sua espessura e composição variam
de acordo com a fase de vida, onde uma célula logo após sua divisão possui uma parede
celular mais fina e unilaminar eletron-densa de aproximadamente 2 nm e em uma célula
madura a espessura desta parede aumenta gradativamente até alcançar de 17-21 nm.
Porém, a espessura da parede celular de uma célula madura pode variar de acordo com
as condições ambientais e o crescimento. Sua rigidez é atribuída a uma camada
microfibrilar composta por quitosana-glucosamina e alguns trabalhos indicam a
esporopoleina como responsável por sua rigidez (YAMAMOTO et al, 2004., 2005).
Além disso, possui um citoplasma composto por proteínas e minerais solúveis em água
que abriga as organelas internas como mitocôndrias, núcleo, vacúolos, corpúsculo de
Golgi e cloroplasto. Suas mitocôndrias possuem parede dupla e abrigam uma parte de
seu material genético. A membrana externa da mitocôndria possui a mesma proporção
de proteínas e fosfolipídios, já a porção interna da membrana possui uma proporção três
vezes maior de proteínas do que fosfolipídios (BURCZYK et al, 2000., HAGEN et al,
2002).
Possui um único cloroplasto com membrana dupla composta por fosfolipídios, onde a
membrana externa é permeável a metabólitos e íons e a membrana interna possui uma
função mais específica no transporte de proteínas. Nesta organela se encontram os
pigmentos fotossintéticos como clorofilas e carotenoides como a luteína dentro de
estruturas denominadas de tilacóides e em condições favoráveis os grânulos de amido
são formados no cloroplasto. O pirenoide possui um alta concentração de ribulose-1,5-
bifosfato-carboxilase-oxigenase (RuBisCO) e é o centro de fixação do dióxido de
carbono nas células de C. vulgaris (YAMAMOTO et al, 2004., 2005., SAFI et al 2014).
Figure 8: Esquema básico da organização célular das organelas da microalga Chlorella

vulgaris.
Fonte: SAFI et al 2014
Sua reprodução é assexuada e rápida, assim, dentro de 24 horas uma única célula de C.
vulgaris cultivada em condições ótimas se multiplica por autoesporulação, que é o
modo mais comum de reprodução assexuada entre as algas, onde uma célula de C.
vulgaris da origem a quatro células filhas. Deste modo, a parede celular das células
filhas é formada dentro da parede celular da célula mãe. Após a maturação das células
filhas, a parede celular da célula mãe se rompe, liberando as células recém-formadas e
os detritos remanescentes da célula mãe são utilizados como nutrientes que vão ser
absorvidos pelas células recém-formados (YAMAMOTO et al, 2004., 2005., SAFI et al
2014).
Figure 9: Fases da reprodução da C. vulgaris: (a) Crescimento celular precoce; (b)

Crescimento celular com atraso; (c) Divisão do cloroplasto; (d) Inicio da divisão do
protoplasto; (e) Final da divisão do protoplasto, (f) Maturação das células filhas; (g)
Fase de incubação.
Fonte: SAFI et al 2014
3.8. SEQUESTRO DE CO2
O dióxido de carbono é um gás encontrado naturalmente na atmosfera, variando de 0,03

– 0,06% v/v da sua composição natural, mas devido a grande utilização de combustíveis
fósseis, sua concentração atmosférica tem aumentado drasticamente, variando de 6 –
15%, o que causa vários efeitos deletérios ao planeta, como o aquecimento global
(RAHAMAN et al 2011).
Um dos métodos naturais de retirada deste gás da atmosfera é o sequestro de carbono,

que é um processo realizado por organismos fotossintetizantes, como plantas, algas e
algumas bactérias. Estes organismos utilizam o CO2 atmosférico como sua principal
fonte de carbono, transformando este composto em carboidratos necessários a sua
nutrição através da fotossíntese. Este processo constitui a principal rota de entrada de
toda energia na biosfera. Estima-se que a cada ano estes organismos fotossintetizantes
produzam mais de 100 bilhões de toneladas métricas de açúcar em escala mundial.
A fotossíntese é basicamente dividida em dois estágios: dependente e independente da

luz. O estágio dependente da luz é o primeiro estágio, onde os organismos absorvem a
luz solar e a utilizam para converter ADP e NADP+ em ATP e NADPH. No segundo
estágio, o independente da luz, os organismos capturam o CO2 atmosférico e o
convertem em compostos orgânicos no ciclo de Calvin-Benson, utilizando as moléculas
geradas anteriormente (ZHAO e SU, 2014.; HO et al, 2014).
O sequestro de carbono por microalgas está sendo considerada uma alternativa

promissora na mitigação dos gases causadores do efeito estufa, pois estes organismos
possuem uma alta eficiência fotossintética, estima-se que para produzir 1 Kg de
biomassas, as microalgas fixam cerca de 1,83 Kg de CO2. Por esta alta eficiência a
biomassa de microalgas vem sendo reconhecida como uma fonte promissora na
produção de biocombustíveis (JIANG et al, 2013., CHEAH et al 2015).
As condições de cultura onde o processo de crescimento utiliza gases de combustão são

mais complexas do que o crescimento realizado sob as condições atmosféricas naturais
do ambiente, assim alguns fatores podem influenciam no desempenho das microalgas
no processo de fixação de CO2, como fatores biológicos (a espécie de microalga
utilizada, a concentração inicial de inóculo). Fatores físicos e químicos como a
concentração de substâncias tóxicas contidas nos gases de combustão utilizados no
cultivo, temperatura do cultivo, luz, pH e nutrientes. Assim como alguns parâmetros
hidrodinâmicos, como por exemplo, os parâmetros de fluxo, a mistura e transferência de
massa, etc. (SCHENK, 2008).
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CAPÍTULO 2
ARTIGO I
Sequester of CO2 and Power Generation in

Photosynthetic Fuel Cells of Chlorella vulgaris
_______________________________________
*
Manuscrito publicado no periódico International Journal of Innovative Research in Engineering & Management
(IJIREM) ISSN: 2350-0557, Volume-2, Issue-5, September- 2015
Sequester of CO2 and Power Generation in

Photosynthetic Fuel Cells of Chlorella vulgaris
the maximum current density (Id max =

ABSTRACT 147 mA cm²). The results confirmed the
The Photosynthetic Fuel Cell (PFC) is high potential of C. vulgaris in power
considered a promising new technology. generation PFC, and in the generation
This kind of Microbial Fuel Cell (MFC) of products of industrial interest.
uses microalgae as electron acceptors
Keywords: Photosynthetic cathode,
attached to the cathode compartment to
Biofuel cell, Microalgae.
decrease the operational costs with
conventional MFC generating energy.
Besides generate energy the microalgae
have the ability to sequester 1. INTRODUCTION
atmospheric carbon dioxide by
The modern world is totally dependent
photosynthesis, and turn it into value-
on fossil fuels; around 80% of all
added biomass where the most valuable
energy consumed in the world comes
by-products are currently starch and
from this non-renewable energy source.
lipids, which are the basis of the
Their use through the combustion
manufacture of biofuels such as
process releases million tons of carbon
bioethanol and biodiesel. In the present
dioxide into the atmosphere each day,
study the microalgae Chlorella vulgaris
aggravating the global warming process
was used as an electron acceptor in a
(Medeiros et al 2015).
cathode compartment, where during ten
days of experiments showed the amount Aiming to reduce the consumption of
of CO2 captured by the algae cells (7mg these fuels, several alternative
L of CO2). At the same time, the technologies have been developed,
composition of the biomass was among which we highlight the
produced starch (3%) and lipids (70%), microbial fuel cell (MFC), which utilize
and electrochemical parameters such as the oxidation process of organic matter
coulombic efficiency (CE = 33.1%) and
by micro-organisms to generate of 5 cm on agar with KCl 3 M

electricity (Rahimnejad et al., 2011). connecting the two compartments.
However, in recent years, a range of 2.2 Photosynthetic Culture

MFCs has been drawing considerable
attention from researchers, calls the The microalgae C. vulgaris was grown
Photosynthetic Fuel Cells (PFC), which according to the modified method of
are photo bioreactors that utilize Hernández 2014 in mineral medium
photosynthetic microorganisms as with a relation C:N = 0,104 : 4,12 g/L-1
microalgae for the production of (Table 1), in 500 ml Erlenmeyer flasks
electricity. In this type of MFC, with constant aeration, which were
microalgae are used as electron grown at room temperature (25° C) and
acceptors in the cathode compartment illumination with photoperiod of 12 h –
where simultaneously atmospheric CO2 12h (light / dark).
is converted into biomass and O2, Cells were counted in a Neubauer
helping to reduce the excessive amount chamber until they reached a density of
of this gas into the atmosphere (Zhou et 3 x 10-3 Cell/ml-1. The suspension was
al, 2012). centrifuged, resuspended in distilled
The aim of the present study with water, centrifuged again, and
microalgae Chlorella vulgaris was resuspended in mineral medium used in
utilized in the cathode compartment of a the cathode compartment of the PFC.
photosynthetic fuel cell using The cathode was maintained at room
atmospheric CO2, as a single source of temperature, continuous illumination
carbon for energy production and and constant aeration.
analysis of the biomass by-products Tabela 2: Composition of mineral
such as polysaccharide starch and total medium used in the experiments with C.
lipids. vulgaris.
Components g/L
K2HPO4 75.00 x 10-3
2. MATERIALS AND METHODS KH2PO4 1.75 x 10-3
MgSO4 75.00 x 10-3
2.1 Configuration of the PFC Urea 1.16 x 10-3
CaCl2 25.00 x 10-3
A bi-compartmentalized fuel cell was NaCl 25.00 x 10-3
used as: a cathode compartment of 1L, EDTA 0.50 x 10-3
an exploded carbon plate electrode with KOH 3.10 x 10-3
an area of 660 cm² immersed in the FeSO4 498.00 x 10-3
mineral culture medium, and the initial H2SO4 1x 10-3 (mL)
Boric Acid 0.70 x 10-3
cell density of 3x103 cell/mL-1 and
ZnSO4 706.00 x 10-3
exploded carbon electrode. Anode of1L, MnCl2 116.00 x 10-3
with a exploded carbon electrode CuSO4 126.00 x 10-3
immersed in a potassium ferricyanide Co(NO3)2 0.40 x 10-3
solution 20 mmol/L-1 and as a cation (NH4)2MoO4 0.96 x 10-3
exchange system was used a salt bridge
2.3 Chronoamperometric Analysis 2.5 Measurement of CO2 Dissolved
The potential (E) vs. time (hours) It was Carbon dioxide was quantified with
recorded using a Fluke 8080 multimeter Compact Kit® for CO2 quantification of
with data acquisition software Alfakit, using 10 mL of the cultured
FlukeView® (Fluke Corporation, USA). medium every day for 10 days,
The data of the chronovoltammetry as obtaining the results in mg L-1 CO2.
potential were converted to current
density (Id) using Ohm's Law equation
(Equation 1), since an external load 2.6 Starch Content
resistor of 1 kΩ was used.
The measurement of the amount of
Id= E x R (1) starch was carried out according to the
proposed method in the article
Appenroth 2010 which is based on a
2.4 Coulombic Efficiency colorimetric method, where 200 mg of
Calculation (CE) fresh biomass is homogenized in 4 mL
of HCl at 18%. The suspension was
The coulombic efficiency (%) was stirred for 1 hour at 5 ° C and
calculated according to Equation 2. centrifuged for 20 min at 5000 g.
where CT is the theoretical amount that Withdraw an aliquot which is mixed
is obtained from each substrate and CR with the same volume of Lugol's
correspond to the actual amount solution (0,5% w / v of KI and 0,25% w
obtained from each substrate and can be / v of I2 in water) and measure the
calculated by equation 3. absorbance at 605 and 530 nm. The
CE=CR/CT (2) amount of starch was calculated
according to Equation 5.
CT=NZF (3)
S = ([Cs x Vol (Ext)]x 100)/Fw
Where N is the number of moles of (5)
substrate, Z is the number of moles of
electrons from the substrate and F is the Where = A605/(0.07757 x P+4.463) ,
Faraday constant (96.485.4 C mol-1). P=(7.295 x A605/A530-4.463)/(7.757-
0.729 x A605/A530) x 100, the V(ext) =
For a microbial fuel cell, it uses an Seaweed extract volume after
integrated model Id vs. Time, homogenization (mL), FW = fresh
generating Equation 4. Where M is the weight (mg).
molar mass of the substrate, A =
electrode area, V = total volume of the
cathode compartment and ΔS the final
2.7 Extraction of Total Lipids
concentration of the substrate (Morant
et al 2014). To determine the percentage of lipids
contained in microalgae cells, we used
CE= (M∫0tf Id dt A)/(FzVAC/CCΔS) (4)
the method of Deven and Manocha Figura 1: CO2 consumption by C.

(1980). Lyophilized biomass (100mg) vulgaris during ten days of experiments
was used for extraction total lipids using in PFC.
as solvents chloroform and methanol CO² consumption
respectively in the following 15
14
proportions, 2:1; 1:1 and 1:2 v/v. The 13
CO² consumption (mg/L)

extracts were evaporated using liquid 12
nitrogen until total evaporation. The 11
10
total lipids were calculated using the
9
Equation 6, where T1 is the weight of 8
the flask, and T2 is the weight of the 7
flask after evaporation of the solvents, 6

0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240
and B is the deep freeze lyophilize Time (hours)
biomass until constant weight expressed

in g/L.
3.2 Biomass Analysis
Total Lipids (%) = (T2-T1 )/B x 100%
Cell growth was quite high throughout
(6)
the experiment, growing exponentially
until it reaches a maximum cell density
of 156 x 106 Cell/mL-1 (Figure 2),
3. RESULTS AND DISCUSSION which shows a good adaptation to
culture conditions and therefore a good
3.1 CO2 Consumption accumulation of reserve material.
The consumption of CO2 by the By analyzing, the composition of the
microalga C. vulgaris t was biomass there was a small amount of
accompanied by the end of the starch, only 3%. However, the total
experiment showing an average daily lipid analysis revealed that the
consumption of 0.7 mg/L, consuming in accumulation of this kind of storage
the end of ten days of the experiment a material reached 70% of the total
total of 7 mg / L of CO2 (Figure 1) cellular. It is estimated that to produce
which can be considered a good result 1kg of microalgae biomass, the fixing
taking into account of the volume and of about 1.83 kg of carbon dioxide is
time of the experiment. Because is required (Jiang et al, 2013, Cheah et al
already a scientific knowledge that 2015).
microalgae are responsible for the
attachment of more than 50% of these The accumulation of lipids may be
gas in nature, as it have a photosynthetic influenced by various factors such as
efficiency 100 times higher than the initial amount of inoculum, lighting,
terrestrial plants (Pienkos and Darzins, pH, temperature and especially the C:
2009; Mendes et al., 2012). N: P relations. For this ability to
produce and accumulate lipids, C.
vulgaris has been the target of several
studies, as its fatty acids are good for
the production of biodiesel as well as its have some advantages, such as not
biomass is rich in other components requiring an organic substrate, they are
such as proteins which leads to a food powered exclusively by light, not
highly nutritious (Schenk, 2008). emitting gases and consuming
atmospheric carbon dioxide.
Figura 2: C. vulgaris growth profile in

PFC bioanode. Figura 3: Chronoamperometric profile
obtained from at PFC experiment with
Growth
8
1,6x10
photosynthetic cathode of C. vulgaris.
8
1,4x10
Id
8
1,2x10 150
140
Growth (Cel/mL )
-1
8
1,0x10 130
120
7
8,0x10 110
100
90
Id (mA cm )
7
2
6,0x10
80
7 70
4,0x10
60
7
50
2,0x10
40
30
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 20

10
Time (hours)
0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240
Time (h)
4. CONCLUSION
3.3 Electrochemical Analysis
The date obtained in this experiment
The results of chronoamperometry further reinforce the great potential of
(Figure 3) show an increasing power the Photosynthetic fuel cells as an
generation during the 10-day alternative to generate clean, renewable
experiment, with two peaks (86 hours energy. Confirming that the use of a
with 120 mA/cm² and 144 hours with microalgae cathode as electron acceptor
130 mA/cm²) followed by a small loss is feasible. The analysis of biomass also
and resumption of growth reaching a demonstrated that the microalgae has a
maximum current density production, Id great potential to sequester CO2, which
max, of 147 mA/cm² and a CE = 33.1%, is a major cause of global warming,
suggesting that the microalgae got a transforming it into commercially
good efficiency in the use of CO2 as a valuable products such as lipids which
substrate for power generation. As a may be used in multiple areas and
superior performance to the results particularly in the generation of biofuels
reported by other authors, such as such as biodiesel.
Caprariis in 2014, who obtained values
of 0.20 mA/m², equivalent to 0.00002
mA/cm² using the same organism and 5. ACKNOWLEDGMENTS
similar experimental conditions and
lower than the results obtained in Our This work was financially
conventional microbial fuel cells. Even supported by Higher Education
with a yield slightly lower, the PFC Personnel Improvement Coordination
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[2] De Caprariis, B., De Filippis, P., Di 26(3): pp 691-696.
Battista, A., Di Palma, L., Scarsella, M.,
(2014) “Exoelectrogenic Activity of a [8] Morant, K. V., Silva, P. H., Takaki,
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a Bio-Photovoltaic Cells (BPVs)” Isolation and bioelectrochemical
Chemical Engineering Transactions, 38, characterization of novel fungal sources
pp 523-528. with oxidasic activity applied in situ for
the cathodic oxygen reduction in
[3] Cheah, W.Y., Show, P.L., Chang, J- microbial fuel cells. Enzyme and
S., Ling, T. C., Juan, J. C., (2015) Microbial Technology 66, pp.20–27.
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microalgae. Bioresource Technology The promisse and challengers of
184. pp 190–201. microalgal-derived biofuels. Biofuels,
Bioproducts & Biorefining 3: pp 431-
[4] La Rotta C. E. H., Leite, A. L., 440.
Dantas, P. V., Ramos, S. P., De los
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(2014) “Hybrid Microbial- Najafpour, G., Jafary, T. 2011. Power
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Simultaneous Bacterial Glycerol batch and continuous flow microbial
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fuel cell operations. Applied Energy 88, 2013. Utilization of simulated flue gas
pp 3999–4004. for cultivation of Scenedesmus
dimorphus. Bioresour.Technol.128, pp
[11] Schenk, P.M., Thomas-Hall, S.R., 359–364.
Stephens, E., Marx, U.,Mussgnug, J.H.
2008. Second generation biofuels: [13] Zhou, H., He, H., Jin, T., Wang, H.
highefficiency microalgae for biodiesel 2012. Power generation enhancement in
production. Bioenergy Res, 1, pp. 20– novel microbial carbon capture cells
43. with immobilized Chlorella vulgaris.
Journal of Power Sources 214. pp 216 e
[12] Jiang, Y. L., Zhang, W., Wang, J. 219.
F., Chen, Y., Shen, S. H., Liu, T. Z.
CAPÍTULO 3
ARTIGO II
Otimização das Condições de Cultivo de Chlorella vulgaris

para a Geração de Energia, Acumulação de Amido e Lipídios
em Célula a Combustível Fotossintética
_______________________________________
*
Manuscrito a ser submetido ao periódico Bioresource Technology
Otimização das Condições de Cultivo de Chlorella vulgaris Para Geração de Energia,

Acumulação de Amido e Lipídios em Célula a Combustível Fotossintética
Davi Cavalcanti a; Camilo La Rottab; Galba M. Campos-Takakic
a
Universidade Federal de Pernambuco, Brasil. b Laboratório de Bioeletroquímica - Universidade Católica de
Pernambuco, Brasil. Núcleo de Pesquisa em Ciências Ambientais e Biotecnologia - Universidade Católica de
Pernambuco, Brasil.
RESUMO
A demanda por energia vem crescendo a cada ano devido ao aumento da população
mundial. Grande parte desta energia é proveniente de fontes não renováveis como o
petróleo. Por esta razão nova fontes de energias limpas e renováveis vêm sendo
desenvolvidas. Entre elas destacam-se as células a combustível, que convertem energia
química em eletricidade. Porém, esta tecnologia possui um alto custo. Visando diminuir
os custos novas configurações destas células vêm sendo desenvolvida como a célula a
combustível fotossintética, que utiliza micro-organismos fotossintéticos no
compartimento catódico, substituindo catalizadores químicos e diminuindo assim seus
custos. No presente estudo a microalga Chlorella vulgaris foi utilizada como aceptora
de elétrons em um compartimento catódico de uma célula a combustível microbiana e
submetida a diferentes condições de cultivo, modificando seu tempo de iluminação e a
concentração de nitrogênio do meio de cultivo seguindo um planejamento fatorial
completo 2², durante 10 dias. Nossos resultados demonstram que a iluminação é o fator
que mais influi na geração de energia onde foram obtidos valores de densidade de
corrente máxima Id max = 178 mA/cm² e eficiência coulômbica de 42.5%, bem como
uma acumulação máxima de amido de 38% e 77% de lipídios, demonstrando que a
utilização de um cátodo fotossintético é viável para produção de energia e também para
produção de metabólitos com alto valor comercial.
Palavras-chave: Biocátodo, Microalgas, Energia Limpa, Lipídio, Amido.
1. Introdução
A demanda por energia tem crescido bastante nas últimas décadas devido ao aumento
da população e a melhora nos seus padrões de vida. Grande parte desta energia é
oriunda de fontes não renováveis como o petróleo. A contínua utilização destas fontes
causará em longo prazo um colapso da matriz energética mundial. Além da utilização
desta fonte causar um grande impacto ao meio ambiente, poluindo ecossistemas inteiros
e contribuindo com o aquecimento global (Campos et al 2015).
Contudo, novas tecnologias para geração de energia limpa vêm sendo desenvolvidas,
uma das mais promissoras são as células a combustível (CC). Esta tecnologia utiliza
equipamentos que convertem a energia química em energia elétrica sem a necessidade
de combustão e com maior eficiência do que as atuais tecnologias e sem a emissão de
poluentes. Porém, esta tecnologia tem algumas limitações, como por exemplo, os custos
operacionais do sistema que são altos, pois utilizam materiais de alto valor como a
platina, dificultando assim sua utilização em larga escala (Tan zhongfu et al, 2015).
Devido a todos estes problemas, tecnologias que utilizem fontes alternativas para
geração de energia vêm ganhando espaço no cenário energético mundial. Dentre estas
tecnologias promissoras destacam-se as células a combustível microbianas (CCM), que
são biorreatores que utilizam a energia armazenada em compostos orgânicos e a
convertem em energia elétrica através de reações eletrocatalizadas por micro-
organismos (Rahimnejad et al., 2011). Dentro desta tecnologia existem algumas
variações que conseguem diminuir os custos operacionais do sistema acoplando a
produção de insumos de alto valor comercial a produção de energia. Esta variação da
CCM é chamada de células a combustível fotossintéticas (CCF).
Estes equipamentos utilizam organismos fotossintetizantes que atuam como

biocatalizadores utilizando o processo natural da fotossíntese para melhorar a produção
de eletricidade. Esta tecnologia consegue acoplar a produção de energia a produção de
compostos com alto valor comercial como o amido e lipídios que podem ser utilizados
para produzir biocombustíveis como o etanol e o biodiesel. Estes organismos também
tem a capacidade de sequestrar o dióxido de carbono em excesso na atmosfera e
converte-lo em biomassa, diminuindo assim parte das emissões de CO2 (Chandra et al,
2012.; El mekawya, 2014).
No presente estudo a microalga Chlorella vulgaris foi utilizada no compartimento

catódico de uma célula a combustível fotossintética, utilizando o CO2 atmosférico como
única fonte de carbono, para a produção de energia subprodutos da biomassa, como
amido e lipídios totais.
2. Materiais e Métodos
2.1. Configuração da CCF
Foi utilizada uma célula a combustível bicompartimentada. Um compartimento catódico

de 1L, comtendo um eletrodo placa de grafite explodido com área de 660 cm² imerso no
meio de cultura mineral com uma densidade celular inicial de 3x10³ Cél/mL-1. Ânodo
de 1L, com eletrodo de placa de grafite explodido imerso em uma solução de
ferrocianeto de potássio a 20 mmol/L-1 e como sistema de troca catiônica foi utilizada
uma ponte salina de 5 cm em ágar com KCl a 3 M ligando os dois compartimentos.
2.2. Cultura Fotossintética
A microalga Chlorella vulgaris foi cultivada segundo a metodologia modificada de La

Rotta 2014 em meio mineral com uma relação C:N = 0,104 : 4,12 g/L-1 (Tabela 3), em
Erlenmeyers de 500 ml com aeração constante, onde foram cultivadas sob temperatura
ambiente (25° C) e iluminação com fotoperíodo de 12 h – 12h (claro / escuro).
As células foram contadas em Câmara de Neubauer até alcançarem uma densidade de 3

x 10-3 Cél/ml-1, a suspensão foi centrifugada, ressuspendida em água destilada,
centrifugada novamente e ressuspendida no meio mineral utilizado no compartimento
catódico da CCF. O cátodo foi mantido em temperatura ambiente, iluminação contínua
e aeração constante.
2.3. Análise de Cronoamperometria
A cronoamperometria foi gravado utilizando um multímetro Fluke 8080 com software

de aquisição de dados Flukeview® (Fluke Corporation, USA). Os dados da
cronovoltametria na forma de potencial, foram convertidos em densidade de corrente
(Id) usando a equação da lei de Ohm (Eq. 1), uma vez que uma resistência de carga
externa de 1 kΩ foi empregada.
Id= E x R (1)
2.4. Cálculo da Eficiência Coulômbica (CE)
A eficiência coulômbica (%) foi calculada de acordo com a Eq. 2. Onde CT é a

quantidade teórica que é obtida a partir de cada substrato e CR corresponde à
quantidade real obtida de cada substrato e pode ser calculado pela Eq. 3.
CE=CR/CT (2)
CT=NZF (3)
Onde N é o número de moles do substrato, Z é o número de moles de elétrons do

substrato e F é a constante de Faraday (96,485.4 C mol-1).
Para uma célula a combustível microbiana, utiliza-se um modelo integrado de Id vs.

Tempo, gerando a Eq. 4. Onde M é a massa molar do substrato, A= área do eletrodo,
V= volume total do compartimento catódico e ∆S a concentração final do substrato
(Morant et al 2014).
CE= (M∫0tf Id dt A)/(FzVAC/CCΔS) (4)

2.5. Análise do Teor de Amido
A aferição da quantidade de amido foi realizada de acordo com a metodologia proposta

no artigo de Appenroth 2010 que é baseado num método colorimétrico, onde 200 mg da
biomassa fresca é homogeneizada em 4 mL de HCl a 18%. A suspenção foi agitada
durante 1 hora a 5°C e centrifugada durante 20 min a 5000 g. Retira-se uma alíquota
que é misturada com o mesmo volume de solução de lugol (0,5% w / v de KI e 0,25% w
/ v de I2 em água) e mede-se a absorbância em 605 e 530 nm. A quantidade de amido
foi calculada de acordo com a Eq. 5.
S= ([Cs x Vol (Ext)]x 100)/Fw (5)
Onde Cs= A605/((0,07757 x P+4,463)) , P=((7,295 x A605/A530-4,463))/((7,757-0,729

x A605/A530)) x 100, o Vol (ext) = volume do extrato da alga após a homogeneização
(mL), FW = peso fresco (mg).
2.6. Análise de Lipídios Totais
Para determinar a porcentagem de lipídios contido nas células de microalgas, foi

utilizado o método de Manocha 1980. Utilizando 100 mg de biomassa liofilizada,
realizou-se uma extração com clorofórmio e metanol respectivamente nas seguintes
proporções, 2:1; 1:1 e 1:2 v/v. Ao termino deste procedimento os tubos são deixados em
uma capela química de exaustão para que ocorra a evaporação dos solventes. Para
calcular a porcentagem de lipídios totais utiliza-se a Eq. 6, onde T1 é o peso do tubo
antes do experimento, T2 é o peso do tubo após a evaporação do solvente e B é a
biomassa seca em gramas.
Lipídios Totais (%)= (T2-T1 )/B x 100% (6)
2.7. Planejamento Fatorial
Os experimentos obedeceram a um planejamento fatorial de 22 com 8 ensaios e 4

repetições no ponto central com o objetivo de avaliar a influência das variáveis
independentes concentração de nitrogênio (g/L-1) e fotoperíodo sobre a variável resposta
produção de amido, lipídio e intensidade de corrente. As variáveis e seus níveis estão
codificados da seguinte maneira: Tempo de Iluminação - Níveis Inferior (-) = Sem
iluminação, Superior (+) = Iluminação 24 horas, Ponto central (0) = iluminação com
fotoperíodo de 12 horas. Concentração de Nitrogênio [N2] - Níveis Inferior (-) = 2,6
g/L-1, Superior (+) = 8,24 g/L-1, Ponto central (0) = 5,42 g/L-1. Estes dados estão de
acordo com a tabela 4.
3. Resultados e discussão
3.1. Análises eletroquímicas
As análises de cronoamperometria realizadas durante dez dias de experimento nas

condições específicas do planejamento fatorial 2² apresentaram padrões específicos de
geração de energia (Figura 10). Constatou-se que a iluminação é um dos parâmetros
mais importantes na eficiência de uma CCF, pois o mesmo influi significativamente na
geração de energia. Esta influência positiva da luz também foi evidenciada por
GOUVEIA et al 2014, que obteveram um aumento na produção de energia utilizando
uma CCF de C. vulgaris.
Nos ensaios onde não houve iluminação apresentaram o mesmo perfil de

cronoamperometria (ensaios 1 e 2), pois ocorreu a morte de todas as microalgas e
consequentemente a não geração de corrente (Figura 1a.). Nos demais experimentos
com iluminação foram os que apresentaram boa eficiência e os picos de correntes mais
altos. Nos ensaios do ponto central (Figura 1b.) houve o maior pico, chegando a 180
mA/cm² e uma eficiência coulômbica de 42.2%. No ensaio 3 (Figura 1d.), os
experimentos foram conduzidos com a concentração mínima de nitrogênio e iluminação
24 horas por dia, a geração de energia cresceu abruptamente até atingir sua densidade
máxima de corrente 160 mA/cm², durante as primeiras 48 horas de experimento,
seguido de uma estabilidade da corrente produzida até o fim do experimento,
alcançando uma eficiência coulômbica CE= 42.5 %. O ensaio 4 (Figura 1c.) gerou um
pico de corrente de 178 mA/cm², porém sua eficiência foi um pouco abaixo das demais,
chegando a uma eficiência CE =34.6%. Porém, estes resultados são superiores aos
obtidos por Caprariis em 2014, que obteve valores de 0.20 mA/m², que equivalem a
0.00002 mA/cm² e Cavalcanti et al 2015 que obteve picos de correntes de Id max = 147
mA/cm² utilizando o mesmo organismo e condições experimentais semelhantes.
3.2. Análise da biomassa
A figura 11 mostra os resultados da produção de amido e lipídios obtidos após 10 dias

de experimentos nas diversas condições do planejamento fatorial. Após a análise da
biomassa constatou-se um aumento considerável no acúmulo de amido e lipídios na
biomassa da microalga C. vulgaris, em relação ao estudo base para este experimento
publicado por Cavalcanti et al 2015. Todos os ensaios eceto os ensaios 1 e 2
apresentaram boas porcentagens de acumulo de amido e lipídios onde o ensaio 4 e o
ponto central, apresentaram as maiores produções de lipídios (77%) e o ensaio 3 a maior
concentração de amido 32%. Porém nos ensaios sem iluminação não houve
crescimento. A importância da iluminação e da concentração de nitrogênio está
evidenciada nos diagramas de Pareto (Figura 12).
Os efeitos estimados do tempo de iluminação e a concentração de nitrogênio sobre o

acúmulo de amido e de lipídios totais na biomassa de C. vulgaris cultivadas em célula
combustível fotossintética, bem como a interação entre eles, são mostrados nos
diagramas de Pareto da Figura 12. Segundo Cuellar-Bermudez et al 2015, os principais
fatores que contribuem para o aumento da produção e acúmulo de materiais de reserva
energética pelas microalgas são o pH, temperatura, luz e nutrientes como o nitrogênio.
Assim ao testar dois destes fatores, luz e concentração de nitrogênio, o tempo de
iluminação foi o mais significativo na produção e acúmulo do amido (Figura 12a). E de
todas as condições aplicadas ao planejamento, a condição do ensaio 3 foi a que obteve a
maior concentração deste carboidrato de reserva, alcançando um acúmulo de 32% de
amido.
Porém, a análise da biomassa também revelou que a interação entre o tempo de

iluminação e a concentração de nitrogênio mostrou uma influência significativa na
produção de lipídios (Figura 3b). Ao mesmo tempo, ambos os fatores
independentemente foram estatisticamente significativos. Esta influência também é
relatada por Khoeyi et al., 2012 e Gouveia et al 2014, que em seus estudos afirmam que
dentre todos os fatores que influenciam na produção e acúmulo de substâncias de
reserva como amido e lipídios, a luz e os nutrientes são os parâmetros mais importantes.
4. Conclusões
Os resultados obtidos neste trabalho mostram a viabilidade de se utilizar uma CCF de C.

vulgaris para gerar energia, podendo ser utilizada como um substituto viável as formas
tradicionais de geração de energia. Também evidencia a grande capacidade da
microalga C. vulgaris em acumular metabolitos de grande valor comercial como amido
e lipídios que agregam valor a esta tecnologia, podendo ser utilizados na produção de
biocombustíveis como o etanol e o biodiesel e assim diminuir ainda mais os custos de
implementação das CCFs.
5. Agradecimentos
A Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação

de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE) – Projeto:
(CNPq e FACEPE DCR No. 0008-1.06/11), ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico (CNPq) – Projeto: (CNPq Universal No. 474997/2012-0.) pelo
suporte financeiro. Ao O Núcleo de Pesquisas em Ciências Ambientais e Biotecnologia
(NPCIAMB – UNICAP), Por ceder as instalações de pesquisa. Ao Laboratório de
Combustíveis e Energia (POLICOM –UPE) Por ceder as microalgas utilizadas neste
trabalho.
6. Bibliografia
Appenroth, K. J.; Krech, K.; Keresztes, Á.; Fischer, W.; Koloczek, H. Effects of nickel
on the chloroplasts of the duckweeds Spirodela polyrhiza and Lemna minor and their
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Chandra, R.; Subhash, G. V.; Mohan, V. Mixotrophic operation of photo-

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Cuellar-bermudez, S.P.; Romero-ogawa, M.A.; Yenjung, V.; Lai, S.; Rittmann, B.E.;
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produced by Synechocystis sp. PCC6803 during continuous flow. 2015. Algal
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Khoeyi, Z.A.; Seyfabadi, J.; Ramezanpour, Z. Effect of light intensity and photoperiod
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Takaki, G. M. C. Hybrid Microbial-Photosynthetic Biofuel Cells for Simultaneous
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Chem. Soc., v. 25, n. 3, p 560-571.
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7. Anexo (tabelas e figuras)
Tabela 3: Composição do meio mineral utilizado no cultivo da microalga Chlorella

vulgaris.
Componentes g/L
K2HPO4 75.00 x 10-3

KH2PO4 1.75 x 10-3
MgSO4 75.00 x 10-3
Uréia 1.16 x 10-3
CaCl2 25.00 x 10-3
NaCl 25.00 x 10-3
EDTA 0.50 x 10-3
KOH 3.10 x 10-3
FeSO4 498.00 x 10-3
H2SO4 1x 10-3 (mL)
Ác. Bórico 0.70 x 10-3
ZnSO4 706.00 x 10-3
MnCl2 116.00 x 10-3
CuSO4 126.00 x 10-3
Co(NO3)2 0.40 x 10-3
(NH4)2MoO4 0.9610-3
Tabela 4: Matriz do planejamento fatorial completo 2²
Ensaios Tempo de Iluminação [N]g/L-1

1 - -
2 - +
3 + -
4 + +
Ponto Central 0 0
Figure 10: Perfil cronoamperométrico de uma CCF com cátodo de microalga C.

vulgaris em diversas condições de cultivo. a) Ensaios 1 e 2: Sem iluminação b) Ponto
central: Fotoperíodo de 12 horas e [N]=5,42g/-1L. c) Ensaio 3: luminação 24 horas e
[N]=2,6g/L-1. d) Ensaio 3 com iluminação 24 horas e [N]=8,24g/L-1.
90
80 Amido %
Lipídios Totais %
70
60
50
40
30
20
10
0
Ensaio 1 Ensaio 2 Ensaio 3 Ensaio 4 Ponto
Central
Figure 11: Porcentagem de amido e lipídios em C. vulgaris cultivadas em diversas

condições de cultivo seguindo o planejamento fatorial 2²
Figure 12: Diagrama de Pareto ilustrando os efeitos das interações entre as variáveis
independente intensidade luminosa e concentração de nitrogênio sobre a variável
resposta acúmulo de amido (a) e lipídios (b).
CONCLUSÕES GERIAIS
A partir do desenvolvimento das atividades experimentais e resultados obtidos com

Chlorella vulgaris, conclui-se:
 Elevado potencial das células a combustível fotossintéticas como uma forma

viável na geração de energia limpa e renovável;
 Eficiência de um sistema de biocátodo de Chlorella vulgaris, em uma CCF;
 Comprovar a eficiência da fixação do dióxido de carbono pela microalga
convertendo-o em produtos comercialmente valorizados como amido e lipídios;
 Otimização da produção de energia em uma célula a combustível fotossintética;
 Ao alterar as condições de cultivo da microalga em um biocátodo, os percentuais
de acumulação celular de amido e lipídios sua produção e acúmulo aumentaram
consideravelmente;
 Produção otimizada da matéria-prima para a fabricação de biocombustíveis
como o etanol e o biodiesel.
 Os subprodutos gerados no processo de produção de energia, demonstra
valorização do bioprocesso, redução dos custos compensando assim parte dos
gastos operacionais, viabilizando a implantação do sistema de CCF em escala
semindustrial.
ANEXOS
1.1. Regras de formatação de artigos a serem submetidos ao periódico

Bioresource Technology
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would be rejected without review. Editors reserve the right to adjust the style to certain
standards of uniformity.
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Keywords, Introduction, Materials and Methods, Results and Discussion, Conclusions,
Acknowledgements, References, Figure Captions, Tables and Figures. The
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footnotes (except for table footnotes) should be avoided. Collate acknowledgements in a
separate section at the end of the article and do not include them on the title page, as a
footnote to the title or otherwise.
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i.e., do not use a constant right-hand margin.) Ensure that each new paragraph is clearly
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manuscript. If possible, consult a recent issue of the journal to become familiar with
layout and conventions. Number all pages consecutively, use 12 pt font size and
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In particular, do not use the word processor's options to justify text or to hyphenate
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tables, if you are using a table grid, use only one grid for each individual table and not a
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Article structure:
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cross-referencing: do not just refer to 'the text'. Any subsection may be given a brief
heading. Each heading should appear on its own separate line.
Introduction
State the objectives of the work and provide an adequate background, avoiding a
detailed literature survey or a summary of the results.
Material and methods
Provide sufficient detail to allow the work to be reproduced. Methods already published
should be indicated by a reference: only relevant modifications should be described.
Theory/calculation
A Theory section should extend, not repeat, the background to the article already dealt
with in the Introduction and lay the foundation for further work. In contrast, a
Calculation section represents a practical development from a theoretical basis.
Results and Discussion
Results should be clear and concise, and be part of a single section, discussing the
significance of the results of the work, not repeat them. Extensive citation and
discussion of the published literature should be avoided.
Conclusions
The main conclusions drawn from results should be presented in a short Conclusions
section (maximum 100 words).
Appendices
If there is more than one appendix, they should be identified as A, B, etc. Formulae and
equations in appendices should be given separate numbering: Eq. (A.1), Eq. (A.2), etc.;
in a subsequent appendix, Eq. (B.1) and so on. Similarly for tables and figures: Table
A.1; Fig. A.1, etc.
Essential title page information
• Title. Concise and informative. Titles are often used in information-retrieval systems.
Avoid abbreviations and formulae where possible.
• Author names and affiliations. Please clearly indicate the given name(s) and family
name(s) of each author and check that all names are accurately spelled. Present the
authors' affiliationaddresses (where the actual work was done) below the names.
Indicate all affiliations with a lowercase superscript letter immediately after the author's
name and in front of the appropriate address.
Provide the full postal address of each affiliation, including the country name and, if
available, the e-mail address of each author.
• Corresponding author. Clearly indicate who will handle correspondence at all stages of
refereeing and publication, also post-publication. Ensure that the e-mail address is given
and that contact details are kept up to date by the corresponding author.
• Present/permanent address
If an author has moved since the work described in the article was done, or was visiting
at the time, a 'Present address' (or 'Permanent address') may be indicated as a footnote to
that author's name. The address at which the author actually did the work must be
retained as the main, affiliation address. Superscript Arabic numerals are used for such
footnotes. There can be only one person as corresponding author and manuscript must
be submitted by the corresponding author in EES.
Abstract
A concise and factual abstract is required. Each paper should be provided with an
abstract of about 100-150 words. The abstract should state briefly the purpose of the
research, the principal results and major conclusions. An abstract is often presented
separately from the article, so it must be able to stand alone.
For this reason, References should be avoided, but if essential, then cite the author(s)
and year(s). Also, non-standard or uncommon abbreviations should be avoided, but if
essential they must be defined at their first mention in the abstract itself.
Graphical abstract
Although a graphical abstract is optional, its use is encouraged as it draws more

attention to the online article. The graphical abstract should summarize the contents of
the article in a concise, pictorial form designed to capture the attention of a wide
readership. Graphical abstracts should be submitted as a separate file in the online
submission system. Image size: Please provide an image with a minimum of 531 × 1328
pixels (h × w) or proportionally more. The image should be readable at a size of 5 ×13
cm using a regular screen resolution of 96 dpi. Preferred file types: TIFF, EPS, PDF or
MS Office files. See https://www.elsevier.com/graphicalabstracts for examples.
Authors can make use of Elsevier's Illustration and Enhancement service to ensure the
best presentation of their images and in accordance with all technical requirements:
Illustration Service.
Highlights
Highlights are mandatory for this journal. They consist of a short collection of bullet
points that convey the core findings of the article and should be submitted in a separate
editable file in the online submission system. Please use 'Highlights' in the file name
and include 3 to 5 bullet points (maximum 85 characters, including spaces, per bullet
point). See https://www.elsevier.com/highlights for examples.
Keywords
Immediately after the abstract, provide a maximum of 5 keywords to be included in an

article, using American spelling and avoiding general and plural terms and multiple
concepts (avoid, for example, "and", "of"). Be sparing with abbreviations: only
abbreviations firmly established in the field may be eligible. These keywords will be
used for indexing purposes.
Abbreviations
Define abbreviations that are not standard in this field in a footnote to be placed on the
first page of the article. Such abbreviations that are unavoidable in the abstract must be
defined at their first mention there, as well as in the footnote. Ensure consistency of
abbreviations throughout the article.
Acknowledgements
Collate acknowledgements in a separate section at the end of the article before the
references and do not, therefore, include them on the title page, as a footnote to the title
or otherwise. List here those individuals who provided help during the research (e.g.,
providing language help, writing assistance or proof reading the article, etc.).
Units
Follow internationally accepted rules and conventions: use the international system of
units (SI). If other units are mentioned, please give their equivalent in SI.
Math formulae
Please submit math equations as editable text and not as images. Present simple
formulae in line with normal text where possible and use the solidus (/) instead of a
horizontal line for small fractional terms, e.g., X/Y. In principle, variables are to be
presented in italics. Powers of e are often more conveniently denoted by exp. Number
consecutively any equations that have to be displayed separately from the text (if
referred to explicitly in the text).
Footnotes
Footnotes should be used sparingly. Number them consecutively throughout the article.
Many word processors can build footnotes into the text, and this feature may be used.
Otherwise, please indicate the position of footnotes in the text and list the footnotes
themselves separately at the end of the article. Do not include footnotes in the Reference
list.
Artwork
Electronic artwork
General points
• Make sure you use uniform lettering and sizing of your original artwork.
• Embed the used fonts if the application provides that option.
• Aim to use the following fonts in your illustrations: Arial, Courier, Times New
Roman, Symbol, or use fonts that look similar.
• Number the illustrations according to their sequence in the text.
• Use a logical naming convention for your artwork files.
• Provide captions to illustrations separately.
• Size the illustrations close to the desired dimensions of the published version.
• Submit each illustration as a separate file.
Formats
If your electronic artwork is created in a Microsoft Office application (Word,

PowerPoint, Excel) then please supply 'as is' in the native document format.
Regardless of the application used other than Microsoft Office, when your electronic
artwork is finalized, please 'Save as' or convert the images to one of the following
formats (note the resolution requirements for line drawings, halftones, and line/halftone
combinations given below): EPS (or PDF): Vector drawings, embed all used fonts.
TIFF (or JPEG): Color or grayscale photographs (halftones), keep to a minimum of 300
dpi. TIFF (or JPEG): Bitmapped (pure black & white pixels) line drawings, keep to a
minimum of 1000 dpi. TIFF (or JPEG): Combinations bitmapped line/half-tone (color
or grayscale), keep to a minimum of 500 dpi.
Please do not:
• Supply files that are optimized for screen use (e.g., GIF, BMP, PICT, WPG); these
typically have a low number of pixels and limited set of colors;
• Supply files that are too low in resolution;
• Submit graphics that are disproportionately large for the content.
Color artwork
Please make sure that artwork files are in an acceptable format (TIFF (or JPEG), EPS
(or PDF), or MS Office files) and with the correct resolution. If, together with your
accepted article, you submit usable color figures then Elsevier will ensure, at no
additional charge, that these figures will appear in color online (e.g., ScienceDirect and
other sites) regardless of whether or not these illustrations are reproduced in color in the
printed version. For color reproduction in print, you will receive information regarding
the costs from Elsevier after receipt of your accepted article. Please indicate your
preference for color: in print or online only. For further information on the preparation
of electronic artwork, please see https://www.elsevier.com/artworkinstructions.
Figure captions
Ensure that each illustration has a caption. Supply captions separately, not attached to
the figure. A caption should comprise a brief title (not on the figure itself) and a
description of the illustration. Keep text in the illustrations themselves to a minimum
but explain all symbols and abbreviations used. Note that the maximum number of
figures allowed for Original article, case study, and review papers is 6. Multiple figures
can be expressed as one figure (for e.g. 1a, 1b, 1c etc...), while retaining the maximum
limit of 6.The Journal discourages publication of simple one line graphs/figures, pattern
figures, conventional spectra (X-ray, FTIR, UV, NMR, etc) and SEM photographs of a
routine nature.
Tables
Number tables consecutively in accordance with their appearance in the text. Place
footnotes to tables below the table body and indicate them with superscript lowercase
letters. Avoid vertical rules. Be sparing in the use of tables and ensure that the data
presented in tables do not duplicate results described elsewhere in the article. Note that
the maximum number of figures allowed for Original article, case study, and review
papers is 6. The Journal discourages publication of simple one parameter tables; such
information should be preferably described in the text itself.
References
Maximum 20, 35 and 75 references for short communication, original research

paper/case study and review papers, respectively.
Citation in text
Please ensure that every reference cited in the text is also present in the reference list
(and vice versa). Any references cited in the abstract must be given in full. Unpublished
results and personal communications are not recommended in the reference list, but may
be mentioned in the text. If these references are included in the reference list they
should follow the standard reference style of the journal and should include a
substitution of the publication date with either 'Unpublished results' or 'Personal
communication'. Citation of a reference as 'in press' implies that the item has been
accepted for publication.
Web references
As a minimum, the full URL should be given and the date when the reference was last
accessed. Any further information, if known (DOI, author names, dates, reference to a
source publication, etc.), should also be given. Web references can be listed separately
(e.g., after the reference list) under a different heading if desired, or can be included in
the reference list.
References in a special issue
Please ensure that the words 'this issue' are added to any references in the list (and any
citations in the text) to other articles in the same Special Issue.
Reference management software
Most Elsevier journals have their reference template available in many of the most
popular reference management software products. These include all products that
support Citation Style Language styles (http://citationstyles.org), such as Mendeley
(http://www.mendeley.com/features/reference-manager) and Zotero

(https://www.zotero.org/), as
citations as shown in this Guide.
Users of Mendeley Desktop can easily install the reference style for this journal by
clicking the following link:
http://open.mendeley.com/use-citation-style/bioresource-technology
When preparing your manuscript, you will then be able to select this style using the
Mendeley plugins for Microsoft Word or LibreOffice.
Reference style
Text: All citations in the text should refer to:
1. Single author: the author's name (without initials, unless there is ambiguity) and the
year of publication;
2. Two authors: both authors' names and the year of publication;
3. Three or more authors: first author's name followed by 'et al.' and the year of
publication.
Citations may be made directly (or parenthetically).
Examples: 'as demonstrated (Allan, 2000a, 2000b, 1999; Allan and Jones, 1999).
Kramer et al. (2010) have recently shown ....'
List: References should be arranged first alphabetically, THEN NUMBERED

NUMERICALLY, and then further sorted chronologically if necessary. More than one
reference from the same author(s) in the same year must be identified by the letters 'a',
'b', 'c', etc., placed after the year of publication.
Examples:
Reference to a journal publication:
Van der Geer, J., Hanraads, J.A.J., Lupton, R.A., 2010. The art of writing a scientific
article. J. Sci.Commun. 163, 51–59.Reference to a book: Strunk Jr., W., White, E.B.,
2000. The Elements of Style, fourth ed. Longman, New York. Reference to a chapter in
an edited book:
Mettam, G.R., Adams, L.B., 2009. How to prepare an electronic version of your article,
in: Jones, B.S., Smith , R.Z. (Eds.), Introduction to the Electronic Age. E-Publishing
Inc., New York, pp. 281–304.
References in the list should be placed first alphabetically, then numbered

chronologically.
1. Mettam, G.R., Adams, L.B., 2009. How to prepare an electronic version of your
article, in: Jones, B.S., Smith , R.Z. (Eds.), Introduction to the Electronic Age. E-
Publishing Inc., New York, pp. 281-304.
2. Strunk Jr., W., White, E.B., 2000. The Elements of Style, fourth ed. Longman, New
York. 3. Van der Geer, J., Hanraads, J.A.J., Lupton, R.A., 2010. The art of writing a
scientific article. J. Sci. Commun. 163, 51-59. 4....

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Chlorella vulgaris:

DAVI DE LIMA CAVALCANTI

POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Chlorella vulgaris:

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Área de Concentração: Microbiologia

Linha de Pesquisa: Biotecnologia

Orientadora: Profª. Dra. Galba Maria de Campos Takaki

Cavalcanti, Davi de Lima

67 folhas : il., fig., tab.

1. Energia 2. Chlorella 3. Biotecnologia I. Takaki, Galba

333.79 CDD (22.ed.) UFPE/CCB-2016-204

DAVI DE LIMA CAVALCANTI

POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Chlorella vulgaris:

Dra. Luciana Oliveira Franco

A Débora por fazer parte de minha vida...

A todos os meus amigos...

A Deus por me dar capacidade...

A todos os amigos do NPCIAMB, por toda a ajuda oferecida durante o

A Universidade Católica de Pernambuco, na pessoa do Magnífico Reitor Prof. Dr. Pe.

A professora Norma Buarque de Gusmão, por ter me dado à oportunidade de continuar

Obrigado e que Deus continue abençoando cada um!

LISTA DE FIGURAS ................................................................................................................... 9

Figura 1: Esquema de uma célula a combustível: a) Célula a combustível a hidrogênio.

Tabela 1: Diferentes tipos células a combustível ........................................................................ 19

O crescimento da população mundial vem causando um aumento substancial na

Palavras-chave: Chlorella vulgaris , célula a combustível, sequestro de carbono,

O mundo moderno é totalmente dependente de energia e à medida que a população

Assim, um dos principais objetivos das pesquisas no campo da energia é o

das células a combustível, denominadas células a combustível fotossintéticas (CCF).

2.1. OBJETIVO GERAL

Desenvolver sistemas eletroquímicos otimizados para a geração de energia elétrica em

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Otimizar as condições de cultura: Tempo de Iluminação e concentração de

 Avaliar os subprodutos de interesse: amido e lipídios

 Induzir a acumulação de amido e lipídios através da otimização das condições de

 Gerar energia elétrica a partir de dispositivos eletroquímicos otimizados

3.1. CÉLULAS A COMBUSTÍVEL

Células a combustível são uma tecnologia emergente e muito promissora na geração de

Fonte: VILLULLAS et al 2002

Figure 1: Esquema de uma célula a combustível: a) Célula a combustível a hidrogênio.

A estrutura básica de todas as células a combustível são semelhantes, sendo compostas

2Pt + H2 Pt-Hads + Pt-Hads (1)

Pt-Hads H+ + e- +Pt (2)

H2 + ½ O2 H2O com G = -237 KJ/mol (3)

A oxidação do hidrogénio envolve a adsorção do gás (Hads) sobre a superfície do

Tabela 1: Diferentes tipos de células a combustível

Fonte: CARRETTE, et al 2002.

As células a combustível possuem inúmeras vantagens em relação a outras tecnologias,

3.2. CÉLULA A COMBUSTIVEL MICROBIANA

A Célula a combustível microbiana é uma tecnologia promissora que tem chamado

Figure 2: Esquema de uma CCM simples com um ânodo anaeróbico e um cátodo

A principal vantagem em utilizar a CCM em relação à célula a combustível

As CCMs também podem auxiliar no tratamento e descoloração de corantes que são

utilizados no compartimento anódico, onde através da oxidação em anaerobiose de

O desempenho de uma CCM depende das reações eletroquímicas entre a matéria