Controle de Qualidade de Formas Farmacêuticas Não-Estéreis

FBF0439 – Controle de Qualidade de Medicamentos, Correlatos e Cosméticos
Tema: Controle de Qualidade de Formas Farmacêuticas Não-Estéreis
Contaminação microbiana de produtos farmacêuticos
Os aspectos microbiológicos relacionados aos medicamentos, cosméticos e

correlatos constitui-se em preocupação para a indústria farmacêutica, considerando-se
expectativa regulatória quanto ao controle da contaminação de produtos sujeitos a
vigilância sanitária, com a finalidade de garantir sua qualidade, segurança e eficácia.
As exigências de qualidade microbiológica dos produtos farmacêuticos são
diferentes de acordo com suas vias de administração. Produtos parenterais e oftálmicos
têm exigência de esterilidade. Enquanto que os produtos orais e tópicos são referidos
como produtos não estéreis, ou seja, admite-se a existência de um nível de contaminação.
A qualidade microbiológica dos produtos não estéreis abrange dois aspectos: 1) a
avaliação da carga microbiana (contagem microbiana) e 2) a ausência de microrganismos
patogénicos. A ausência de microrganismos patogénicos depende da via de
administração. Os produtos de uso oral têm a exigência quanto a ausência de
microrganismos do género Salmonella e bactérias coliformes, tais como Escherichia coli.
Por outro lado, produtos tópicos devem estar livre de Staphylococcus aureus e
Pseudomonas aeruginosa.
Problemas decorrentes da contaminação microbiana
A contaminação microbiana em produtos farmacêuticos pode resultar em

problemas quanto ao risco de infecções em decorrência de seu uso, assim a deterioração
microbiana do produto, com possível perda de eficácia e segurança.
Mesmo produto que não apresentem alterações sensoriais evidentes, pode oferecer
risco de infeção, dependendo de fatores como o tipo e quantidade de microrganismo
presente, a via de administração e a resistência do paciente.
Microrganismos patogênicos constituem-se na maior preocupação quanto a
infecções decorrentes do uso de produtos contaminados. Entretanto, mesmo
microrganismos não-patogênicos oferecem risco de infecções oportunistas,
particularmente se estiveram acima da carga microbiana efetiva (quantidade mínima de
microrganismo capaz de causar infecção).
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O risco de infeção também está associado ao uso pretendido do produto.
Considerando-se a via de administração, quanto mais invasiva maior o risco de infecção.
Neste sentido, a contaminação de produtos injetáveis e oftálmicos constitui importante
aspecto de preocupação. Produtos de uso oral ou tópico (em pele intacta) apresentam
menor risco de infecção quando comparados àqueles aplicados em pele lesionada ou em
mucosas.
Outro aspecto que impacta no risco de infecções decorrentes do uso de produtos
com contaminação microbiana diz respeito a resistência do paciente. Geralmente,
crianças e idosos apresentam maior risco em relação aos adultos. Pacientes portadores de
doenças autoimunes, AIDS e leucemias também estão mais susceptíveis a infecções.
Adicionalmente, há de se considerar que a contaminação microbiana pode resultar
de deterioração do produto. A deterioração do produto depende da capacidade do
microrganismo contaminante em produzir enzimas degradativas (por exemplo, proteases
e peptidases). A degradação de componentes da formulação pode levar a alterações
sensoriais quanto a cor, odor e sabor, além de alterações de pH, separação de fases,
degradação do princípio ativo e redução da biodisponibilidade. Em outras palavras, a
deterioração microbiana compromete a qualidade, segurança e eficácia do produto.
Fontes de contaminação microbiana
As fontes de contaminação microbiana podem ser agrupadas em fontes diretas,

tais como matérias-primas, água, materiais de embalagem; e indiretas, como os
equipamentos, ambiente e operadores.
A qualidade microbiana do produto final pode depender amplamente da qualidade
das matérias-primas (fármacos e excipientes). Geralmente, as matérias-primas de origem
sintética (por exemplo, princípios ativos) oferecem menor risco de contaminação
microbiana quando comparadas as de origem natural (por exemplo, drogas vegetais).
A água é muitas vezes o componente mais representativo de formulações
farmacêuticas e cosméticas. Por isso, constitui-se numa importante fonte de
contaminação. Os sistemas de armazenamento e distribuição de água devem ser
periodicamente inspecionados e controlados quanto a contaminação microbiana,
particularmente devido à preocupação relacionada a formação de biofilmes. Ainda que a
água não faça parte da constituição final do produto, pode ser empregada na lavagem de
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equipamentos e materiais de embalagem, constituindo-se, neste caso, em fonte indireta
de contaminação microbiana.
A embalagem primária também deve ser considerada como possível fonte de
contaminação dos produtos farmacêuticos e cosméticos. Particularmente no caso de
produtos estéreis obtidos por processo de manipulação asséptica, os frascos devem ser
esterilizados antes do envase do produto. No caso de materiais de embalagem de produtos
não estéreis, deve-se tomar precauções quanto a contaminação acidental durante o
transporte e estocagem.
Os equipamentos utilizados no processo produtivo (por exemplo, tanques de
armazenamento, misturadores, linhas de transferência, dentre outros) podem contribuir
indiretamente com a carga microbiana final do produto. Portanto, devem ser sanitizados,
desinfectados ou esterilizados antes do uso.
A qualidade microbiológica do ambiente constitui aspecto de preocupação,
particularmente para produtos estéreis obtidos por processo de manipulação asséptica.
Neste sentido, a tecnologia de salas limpas assegura ao ambiente condições adequadas
para a produção de medicamentos e cosméticos.
O pessoal constitui-se na principal fonte de contaminação microbiana no ambiente
de fabricação de medicamentos e cosméticos. Desta forma, o treinamento do pessoal
envolvido constitui aspecto importante para minimizar o risco de contaminação acidental
do produto. O uso de barreiras físicas (por exemplo, luvas, gorros, mascaras, vestimentas
e calçados específicos) são recomendados.
Fatores que afetam contaminação microbiana do produto
Atualmente, grande importância tem sido dada a questão da conservação

microbiológico de medicamentos e cosméticos, não apenas pelo aspecto microbiológico,
mas principalmente devido ao potencial de irritação e toxicidade que alguns conservantes
apresentam.
É importante destacar que a principal função dos conservantes é inibir o
crescimento de microrganismos que, eventualmente, sejam introduzidos ao produto
durante seu uso pelo paciente. O conservante não tem por finalidade eliminar carga
microbiana introduzida durante o processo de fabricação em função da falta de boas
práticas de fabricação.
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O desenvolvimento de sistemas conservantes com baixas concentrações (para
garantir segurança do produto) e que apresentem eficácia antimicrobiana durante todo o
prazo de validade do produto não é tarefa fácil. Um sistema conservante efetivo apresenta
papel fundamental para garantir a estabilidade, segurança e eficácia de medicamentos e
cosméticos.
As preparações não-estéreis de uso oral (por exemplo, soluções e suspensões
orais) ou tópico (por exemplo, cremes e loções) apresentadas na forma de dose múltipla
oferecem risco de contaminação microbiana durante seu uso. Se considerarmos as
preparações estéreis, as formas líquidas e semissólidas compreendem a maioria das
preparações parenterais e oftálmicas, respectivamente, cujo conservante tem a finalidade
de manter a condição de esterilidade dos produtos. No que diz respeito as formulações
cosméticas, estas em sua maioria são preparações semissólidas com base aquosa,
necessitando de sistema conservante adequado.
O uso de conservantes não é recomendado em produtos de dose única. No caso
particular de produtos estéreis, sejam de dose única ou múltipla, a questão da integridade
do sistema de fechamento constitui aspecto importante para se garantir a manutenção das
condições de esterilidade ao longo do armazenamento e transporte dos produtos.
Características da formulação, tais como a atividade da água elevada, pH perto da
neutralidade e da presença dos excipientes que podem ser usados como fontes de carbono
e nitrogênio favorecem o crescimento microbiano em produtos farmacêuticos. Por outro
lado, os produtos com baixa atividade de água, com presença de substâncias com
atividade antimicrobiana ou submetidos a altas temperaturas durante o processo de
fabricação, são menos susceptíveis à contaminação microbiana.
No que diz respeito ao potencial de oxirredução da formulação, aquelas que
apresentam alto potencial de oxirredução são mais propícias ao crescimento de
microrganismos aeróbicos, enquanto as que apresentam baixo potencial de oxirredução
são mais susceptíveis ao crescimento de microrganismos anaeróbicos.
Métodos de análise
Amostragem
A amostragem deve ser representativa, considerando-se o número de unidades
amostras e o volume contido. A coleta e transporte constitui aspecto de preocupação no
que diz respeito a integridade da amostra a ser analisada. A coleta deve ser feita em local
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adequado, por operador treinado, utilizando recipientes e materiais auxiliares (por
exemplo, espátulas ou pipetas) estéreis, com a finalidade de não introduzir contaminação
à amostra. Tanto o transporte quanto o armazenamento da amostra até o momento da
análise devem ocorrer em condições adequadas de temperatura.
A quantidade de amostras a ser analisada é, geralmente, de 10 g ou mL. A
preparação da amostra deve, quanto pertinente (por exemplo, produto contem
conservantes ou antimicrobianos), possibilitar a inativação da atividade antimicrobiana
do produto. Os procedimentos empregados são a diluição, a neutralização química, ou a
filtração.
Contagem de microrganismos viáveis presente no produto

O método de semeadura em profundidade consiste na transferência de alíquotas
de 1 mL da amostra, de cada diluição a ser ensaiada, para placas de Petri estéreis
(usualmente 2 ou 3 réplicas por diluição). O meio de cultura estéril, fundido e resfriado a
temperatura de cerca de 45-50ºC, em quantidade de cerca de 20 mL, é vertido sobre cada
uma das placas, com subsequente homogeneização (usualmente com movimentos em
“8”). As placas são incubadas por 3-4 dias a30-35ºC para bactérias (TSA) e por 5-7 dias
a 20-25ºC para bolores e leveduras (SDA). Após a incubação, o número de UFC são
contadas em cada uma das placas e calcula-se a carga microbiana presente a amostras,
considerando-se os fatores de diluição adequados.
No caso no método de semeadura em superfície, alíquotas de amostras são
transferidas com auxílio de pipetas estéreis (0,1 a 0,5 mL) para a superfície de meio de
cultura (TSA para bactérias e SDA para fungos) previamente distribuído nas placas de
Petri. A amostra é espalhada na superfície da placa utilizando-se bastão de vidro ou alça
de Drigalski estéril. Após incubação, realiza-se a contagem no número de UFC por placa
e calcula-se a carga microbiana presente no produto, considerando-se o volume
empregado no ensaio.
Quanto o método de filtração em membrana é empregado, alíquotas do produto
na forma líquida, são filtradas através de membrana esterilizante (0,45 µm de tamanho de
poro). Se a amostra apresentar atividade antimicrobiana, recomenda-se lavar a membrana
com porções de cerca de 100 mL de solução fisiológica, para eliminação do resíduo de
produto. Em seguida, a membrana é transferida com o auxílio de pinça para a superfície
do meio de cultura (TSA para bactérias e SDA para fungos) previamente distribuído nas
placas de Petri. Após incubação, procede-se a contagem no número de UFC por placa e
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calcula-se a carga microbiana presente no produto, considerando-se o volume filtrado e a
diluição utilizada.
A determinação do número mais provável (NMP) baseia-se em estimativa do
número de microrganismos presentes no produto por meio de cálculos probabilísticos.
Neste método, alíquotas de 1 mL de cada diluição decimal são transferidas para séries de
3 ou 5 tubos de ensaio contendo meio caldo de caseína-soja (TSB). Os tubos são
incubados por não mais que 3 dias a 30-35ºC. Ao término do período de incubação, os
tubos são inspecionados quanto a presença ou ausência de crescimento. A carga
microbiana presente no produto é determinada em função do número de tubos com
presença de crescimento, utilizando-se uma tabela apropriada (para 3 ou 5 tubos).
Os quatro métodos apresentam vantagens e limitações como, por exemplo, a
quantidade de amostra ensaiada (filtração em membrana permite análise de grandes
volumes, enquanto semeadura em superfície emprega pequenas quantidades) e a
sensibilidade do método (filtração em membrana permite a quantificação de baixas cargas
microbianas, enquanto semeadura em profundida é apropriado para carga microbiana é
mais elevada).
Pesquisa de microrganismos indesejáveis

A etapa de enriquecimento envolve a análise de não menor que 1 g ou mL de
amostra, sendo utilizado os meios de enriquecimento não-seletivo TSB incubado por 18-
24 horas a 20-25ºC e SDB, incubado por 3-5 dias a 30-35ºC. Nos casos particulares da
pesquisa de Salmonella e Escherichia coli, procede-se o enriquecimento seletivo
empregando-se, respectivamente, os meios Salmonella Rappaport Vassiliadis incubado
por 18-48 horas a 30-35ºC e caldo MacConkey incubado por 24-48 horas a 42-44ºC.
Após a etapa de enriquecimento, alíquotas são transferidas com auxílio de alça de
esfregaço para os meios seletivos para isolamento e diferenciação.
A identificação de Staphylococcus aureus envolve a utilizado do meio Agar Sal
de Manitol. O crescimento de colônias amarelas, com halo amarelo, sugere a presença de
Staphylococcus aureus no produto.
A presença de Pseudomonas aeruginosa no produto pode ser realizada
empregando-se meio Agar cetrimida. O crescimento de colônias esverdeadas, com
fluorescência, sugere a presença de Pseudomonas aeruginosa.
A identificação de Escherichia coli envolve a utilização de meio Agar
MacConkey. O crescimento de colônias avermelhadas com precipitado de bile sugere a
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presença de Escherichia, enquanto o crescimento de colônias incolores indica presença
de bactérias lactose-negativas (Salmonella sp.)
Para a identificação de Salmonella sp. emprega-se o meio seletivo Agar Xilose-
Lisina-Desoxicolato (XLD). A presença de Salmonella sp. é constatada pelo crescimento
de colônias vermelhas, com núcleo preto.
Adequação dos métodos
Durante a verificação da adequabilidade do método de contagem de

microrganismos viáveis e de pesquisa de microrganismos indesejáveis, deve-se empregar
controle negativo, de forma a verificar as condições do teste. O controle negativo não e
deve apresentar crescimento.
A avaliação da capacidade promotora de crescimentos consiste na inoculação de
cerca de 100 UFC de microrganismos-teste em tubos ou placas de Petri com os meios
avaliados. Para meios sólidos, a quantidade recuperada deve estar entre 50 e 200% da
quantidade inoculada. Nos casos de meios de cultura líquidos, estes podem ser
considerados aprovados quanto apresentam crescimentos visível comparável a lotes
anteriores.
A determinação da recuperação de microrganismos na presença de produto
consiste em adicionar à amostra diluída e ao controle (diluente sem amostra) quantidade
de suspensão microbiana suficiente para se obter cerca de 100 UFC/mL. O número de
microrganismos na amostra deve ser comparável (entre 50 e 200%) ao número de
microrganismos no controle. Caso a recuperação seja baixa, devem ser realizadas
alterações no procedimento (diluição, neutralização ou filtração) para assegurar a
inativação da atividade antimicrobiana do produto.

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Contaminação microbiana de produtos farmacêuticos

Os aspectos microbiológicos relacionados aos medicamentos, cosméticos e

Problemas decorrentes da contaminação microbiana

A contaminação microbiana em produtos farmacêuticos pode resultar em

Fontes de contaminação microbiana

As fontes de contaminação microbiana podem ser agrupadas em fontes diretas,

Fatores que afetam contaminação microbiana do produto

Atualmente, grande importância tem sido dada a questão da conservação

Contagem de microrganismos viáveis presente no produto

Pesquisa de microrganismos indesejáveis

Adequação dos métodos

Durante a verificação da adequabilidade do método de contagem de

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