TESTES PRÉ TRANSFUSIONAIS

Fluxo de amostra até a liberação de

hemocomponentes para transfusão

Bióloga Patricia Seltenreich

Mestre em Ciências Médicas
Proficiente em Imunohematologia ABHH
TRANSFUSÃO SANGUÍNEA
TERAPIA NÃO ISENTA DE RISCOS

EFEITOS DESFAVORÁVEIS

NÃO-IMUNOLÓGICOS IMUNOLÓGICOS

Transmissão de doenças Reações alérgicas

Sobrecarga circulatória RFNH

Contaminação bacteriana TRALI

Reações metabólicas DEVH

Hemólise não imune Aloimunização

Hipotermia Reação Hemolítica Imune

Destruição das hemácias devido à

formação de complexo Ag-Ac
 TESTES PRÉ TRANSFUSIONAIS

 Definir o fenótipo, sobretudo ABO e RhD dos receptores de sangue.

 Descrever os métodos apropriados para a identificação adequada do paciente na coleta
da amostra.
 Pesquisar a presença de anticorpos no plasma do receptor contra antígeno presente nas
hemácias do doador.
 Explicar os procedimentos e protocolos dos testes de compatibilidade em circunstâncias
especiais.
 Evitar reação transfusional – que pode ser leve a grave, inclusive com morte do receptor.

HAERMENING, DENISE TÉCNICAS MODERNAS EM BANCO DE SANGUE, 6 ed, Rio de Janeiro,: Revinter 2015
PORTARIA DE CONSOLIDAÇÃO Nº 5, DE 28 DE SETEMBRO DE 2017
PORTARIA DE CONSOLIDAÇÃO Nº 5, DE 28 DE SETEMBRO DE 2017
 AMOSTRA DO PACIENTE

 Os tubos devem ser identificados e rotulados na beira do leito com

dupla checagem.
 Deve ser cuidadosamente coletada para evitar hemólise.
 O recebimento da amostra deverá constar horário de coleta.
 É feita a conferência de dados de amostra e solicitação.
 Encaminhada amostra para execução dos testes pré transfusionais.
 Soro ou plasma podem ser usados para os testes.
 Centrifugação e inspeção visual da amostra
 Para testes pré-transfusionais amostra tem validade de72 horas,
deverá ser coletada até 48hs antes da transfusão.
 Deve ser armazenada por 7 dias após transfusão
 DO REGULAMENTO TÉCNICO DE PROCEDIMENTOS
HEMOTERÁPICOS

Art. 173. Em relação às amostras de sangue para testes pré-

transfusionais, todos os tubos devem ser rotulados no momento da
Art. 174. As amostras usadas para os testes pré-transfusionais serão
coleta, com o nome completo do receptor sem abreviaturas, seu
coletadas para este fim específico, tendo uma validade de até 72
número de identificação, identificação do coletador e data da coleta,
(setenta e duas) horas.
sendo recomendável a identificação por código de barras ou etiqueta
impressa.

PORTARIA DE CONSOLIDAÇÃO Nº 5, DE 28 DE SETEMBRO DE 2017

REQUISIÇÃO DE TRANSFUSÃO

Deve conter maior quantidade de dados clínicos

 Avaliação da indicação
 Identificação clara e segura do receptor
Deve ser assinada por médico
 Nome completo
 Número de CRM
Deve conter:
 nome e registro hospitalar
 Hemocomponente solicitado e quantidade
 Quadro clínico e/ou diagnóstico
 Tipo de liberação
 Rotina
 Urgência
 Cirurgia
 ETAPAS DOS PROCEDIMENTOS
PRÉ TRANSFUSIONAIS
 Requisição de transfusão  Identificação do receptor  Coleta de amostra

 Recebimento e  Centrifugação da  Determinação

identificação amostra ABO/Rh

 Pesquisa de anticorpos  Análise do Histórico do  Seleção do

irregulares paciente hemocomponente

 Re determinação ABO/Rh  Prova de compatibilidade  Registro e rotulagem

Dupla checagem Envio do hemocomponente para transfusão

 INESTIGAÇÕES E REGISTROS DO TESTES PRÉ TRANSFUSIONAIS

 Compatibilizar a amostra de sangue do doador com o sangue do

receptor a ser transfundido ( analítica).
 Determinar corretamente o grupo sanguineo ABO e Rh.
 Registros de testes executados preferencialmente com dupla
checagem, consultar sempre registros anteriores.
 Os registros anteriores devem ser mantidos por 20 anos.
 Detectar anticorpos clinicamente significantes.
 Otimizar o aproveitamento do sangue transfundido.
 Evitar reação transfusional.
 ROTINA IMUNOHEMATOLÓGICA

 Centrifugação e inspeção visual da amostra.

 Realizar tipagem ABO , Rh, PAI para solicitações de concentrado de hemácias (em
todas transfusões), plaquetas , plasma e crioprecipitado (em primeira transfusão).
 Caso amostra já esteja aberta com validade de 72 horas, realizar tipagem em tubo
para confirmação ABO, Rh.
 Anotar resultados na ficha de trabalho e sistema informatizado.
 Realizar todos testes pré transfusionais caso paciente seja aloimunizado com nova
amostra e com teste de TAD.
 Analisar resultados e na existência de resultados anteriores fazer sempre o
comparativo com os atuais.
 HISTÓRIA CLÍNICA

Transfusões anteriores (especialmente as recentes).

 Transplante de medula óssea.
 Gestação.
 Medicações em uso.
 Evidência clínica ou laboratorial de hemólise.
 História de infecções (ex: infecções virais recentes).
 Idade e gênero.
 Raça e etnia.
 Resultados de testes prévios.
RESPEITAR SEMPRE !
 Diagnóstico
 Qualquer outro dado laboratorial ou clinico de relevância.
 DOS TESTES REALIZADOS:

Grupo sanguíneo:

 São estruturas (proteínas e açucares) que estão presentes

na parte externa da membrana das hemácias.
 São antígenos definidos sorologicamente por anticorpos
imunes.
 Tem que ser herdado dos pais.
 Os grupos sanguineos ABO e Rh são os mais importantes
na prática transfusional, no entanto existem mais de 360
antígenos que são reconhecidos internacionalmente.
 SISTEMA ABO E SISTEMA Rh

TIPAGEM ABO

Colunas de aglutinação
• Microtubos com meio específico que permite a separação das diferentes populações de células
Microtécnicas /Automação
 TIPAGEM Rh

Presença ou ausência do Ag D define se o indivíduo é Rh+ ou Rh- .

Indivíduo Rh- só produzirá anti-D por meio de imunização com hemácias Rh+
 Gravidez
 Transfusão
A tipagem Rh é realizada com soro anti-D e Controle do Rh de mesmo fabricante.
 ANTICORPO

 É uma proteína produzida em reposta a um estímulo “não próprio”.

Os anticorpos contra grupo sanguíneo são específicos.
 São moléculas de imunoglobulinas (Ig) produzidas por linfócitos B e
secretadas para o plasma.

Funções:
 Ligar-se ao antígeno
 Funções Efetoras:
> fixar complemento
> ligar-se a vários tipos celulares
 PESQUISA DE ANTICORPOS
IRREGULARES:
 É realizada testando-se o soro do receptor
contra hemácias tipo O, com fenotipagem
conhecida para os + importantes sistemas
sanguíneos;

 PAI tem como finalidade detectar possíveis

Ac’s clinicamente significativos;

 Frequência de PAI+ na população varia de

0,3-38%
 **Depende do grupo de pacientes/doadores Importante conhecer diagnóstico
clínico do paciente
 **Sensibilidade do teste *História de transfusões
*Gestação
 PESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES

 Anticorpos irregulares são todos os anticorpos outros que não os anti-A e anti-B, naturais, encontrados
no plasma. Podem ter significado clinico .Podem causar reação transfusional imediata ou tardia. Diminuem a
sobrevida da hemácia transfundida .O teste deve incluir uma fase de AGH.

Fase salina ou Tamb

Detecta incompatibilidade ABO
Fase de incubação 37˚C e AGH
Detectam maioria dos Ac’s clinicamente significativos
Fase de incubação leva de 30-60min
Existem meios que ↑hemaglutinação ↓tempo
Albumina bovina Liss
Polietilenoglicol Enzimas
Polibrene
 ANTICORPOS Ig

IgM IgG

ANTICORPOS AGLUTINANTES ANTICORPOS SENSIBILIZANTES

As IgM encontram-se
principalmente sob a forma de A IgG é o único anticorpo humano que
PENTÂMEROS, apresentando 10 atravessa a barreira placentária. Essa
sítios de ligação com o antígeno e propriedade está relacionada com a
são chamados anticorpos composição química dos fragmentos
aglutinantes. Fc.
Atuam melhor em baixas Atuam melhor a 37oC
temperaturas
 SISTEMA COMPLEMENTO

 O Sistema Complemento, é um sistema complexo constituído por muitas proteínas com

atividade enzimática que complementam o efeito dos anticorpos.

 Efeitos Biológicos:

 Imunoaderência, lise da célula alvo e facilitação da fagocitose do antígeno.

A presença de duas moléculas de IgG ou uma de lgM ligadas às hemácias (complexo Ag -
Ac) são capazes de ativar a cascata do complemento. A aderência de fragmentos C3b
pode levar à facilitação da fagocitose (opsonização) levando a:
 HEMÓLISE EXTRA-VASCULAR
 Quadros de mal aproveitamento transfusional.
 ADIÇÃO DA ANTIGLOBULINA HUMANA (AGH)

 A AGH é um hétero-anticorpo que reconhece proteínas humanas.

 Este é um artifício imunológico para se visualizar o fenômeno da hemaglutinação
 A fração Fab da AGH se liga na fração Fc das imunoglobulinas e também ao
complemento.
 Os pontos de ligação levam a neutralização das cargas elétricas e assim temos
diminuição do Potencial Zeta.

 Monoclonais: a partir de um único clone de linfócito B - Produzidos por processo industrial, com células
humanas e de animais fusionadas. - Mais potentes, mais específicos, altos títulos.

 Policlonais: a partir de vários clones de linfócitos B - Produzidos a partir de sensibilização de humanos. - Precisa
de “voluntários” para produzir o anticorpo. - Deve ser coletado, processado e purificado industrialmente.
 PROVA DE COMPATIBILIDADE

 Selecionar sangue ou CHAD que possibilite alcançar a sobrevida

mais próxima do normal das hemácias transfundidas.
 Assegurar compatibilidade ABO.
 Evitar sensibilização ao Ag RhD e assegurar compatibilidade em
pacientes já sensibilizados.
 Detectar: O maior número de Ac’s com importância clínica (mesmo
quando em baixos níveis).
 O menor número possível de Ac’s sem importância clínica.
 Hemácias do doador x soro ou plasma do receptor em prova indireta.
 Interpretação dos resultados.
CAUSAS DE RESULTADOS POSITIVOS NA PROVA CRUZADA

Tipagem ABO incorreta do paciente ou doador.

 Presença de Aloanticorpo no soro do paciente que reage com
antígeno correspondente na hemácia do doador.
Presença de Autoanticorpo.
Adesão de hemácias do doador com proteínas ( Doadorescom TAD
positivo).
Anormalidades no soro do paciente.
Contaminação bacteriana.
 Rotina IH de receptor de sangue

Técnicas utilizadas na UNIDADE DE TERAPIA TRANSFUSIONAL:

 Tubo: mais difundida. Muito utilizada para resolver problemas nos

resultados. Realizada em pipetagem manual e de rotinas pequenas.
 Colunas de aglutinação: gel centrifugação, para pipetagem manual ou
sistema automatizado.
 IH-500 Automação
Rotinas de receptor no IH500

 Pacientes primeira tipagem ( Tipagem ABO-Rh-

PAI)
 Fenotipagem de pacientes (Sitema Rh,
Jk,Fy,MNS, Le)
 Escala cirúrgica
Testes laboratoriais
Testes de doadores

Inspeção da amostra
 Volume
 Presença de coágulos
 Presença de hemólise

(Lapierre, 1990; Reis et al., 1993) Microtécnicas /Automação

 INTERFACEAMENTO

 Resultados dos testes imuno-hematológicos interfaciados ao sistema informatizado do serviço Na ausência do

interfaciamento, ou outra forma eletrônica devidamente validada, ao liberar os resultados estes são conferidos por
mais de uma pessoa.
 Situações de extrema urgência:

Liberação de sangue total ou de CH sem provas cruzadas pode ser feita desde que:
 Quadro clínico justificável
 Exista POP estipulando liberação
 Fazer check list de atendimento
 Médico responsável pelo paciente assine termo de responsabilidade
 Provas cruzadas sejam realizadas até o final
 Liberação de hemocomponente com provas abreviadas (menor tempo de incubação).
 Utilize-se sangue O- preferencialmente
 Sangue O-: pacientes mulheres em idade fértil
 Sangue O+: segunda escolha para homens ou mulheres com mais de 45 anos de idade
 RECAPTULANDO...TESTES PRÉ
TRANSFUSIONAIS

 Classificação ABO e Rh do receptor.

 Pesquisa de anticorpo irregular no receptor (PAI) – no caso de
positivo deve ser seguido de identificação do anticorpo.
 Checar os registros anteriores (manual ou computador).
 Seleção da bolsa.
 Reclassificação ABO/RhD da bolsa.
 Prova cruzada.
TÉCNICAS ACESSÓRIAS
TÉCNICAS ACESSÓRIAS EM IMUNOHEMATOLOGIA
FERRAMENTAS PARA RESOLUÇÃO DE CASOS COMPLEXOS

 Utilização de outros painéis, que apresentem outras

configurações antigênicas,
 Painéis de hemácias
 Cartão de classe de anticorpo
 Eluição
 enzimas proteolíticas,
 Adsorções (alo, auto),
 Uso de hemácias de fenótipos selecionados,
 Reagentes Thiol
PAINEL DE HEMÁCIAS
 INVESTIGAÇÃO IMUNOLÓGICA ERITROCITÁRIA

Testes realizados

 Tipagem ABO/RhD (Resolução de discrepâncias ABO e

identificação de variantes RhD).
 Fenotipagens Rh, K, FY, JK, MNS (Identificação de variantes).
 Pesquisa e Identificação de anticorpos (potencializadores, enzimas
e reagentes thiol; painéis complementares).
 Identificação de fenótipos raros.
 Testes de adsorção e eluição.
 TÉCNICAS ACESSÓRIAS EM IMUNOHEMATOLOGIA

•Disfosfato de Cloroquina
Fenotipagem eritrocitária e adsorção;
•ZZAP
Formado por derivados de Tiliol + protease, indicada para remover
imunoglobulinas (de classe IGM e ou fração do complemento ligado às
hemácias);
•Neutralização
A técnica de inibição é utilizada para pacientes que apresentam potentes
anticorpos frios que “carreiam” reações positivas até a fase de AGH;
DTT
Diferenciar anticorpo da classe IgM do anticorpo da classe IgG pela
desnaturação do anticorpo da classe IgM ao romper as pontes de dissulfeto.
 TÉCNICA COM BIOPEG

PRINCÍPIO DO TESTE:
TÉCNICA EM TUBO COM POLIETILENOGLICOL - potencializador, meio de baixa força iônica com aumento de
sensibilidade na deteccção de anticorpos irregulares IgG, com tempo diminuído pois a interação antígeno-
anticorpo é facilitada pela ação do PEG que retira moléculas de água que circundam as hemácias

ATENÇÃO
Resultado deve ser
Materiais: interpretado logo após o
Tubo de ensaio término do teste
Pipeta pasteur Materiais contaminados ,
Banho maria tempo de incubação
Timer impróprio, temperatura
Soro IgG inadequada,
Controcel centrifugação ineficaz ou
excessiva podem levar a
falsos resultados

LIMITAÇÃO:
NÃO É INDICADO PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS IgM,

VALIDAÇÃO DO TESTE
É realizada validação com CONTROCEL como controle da técnica de lavagem e da atividade do soro de coombs
BSA.
 FENOTIPAGEM

§ 18. Recomenda-se a realização da fenotipagem para os antígenos eritrocitários no sangue do

receptor, dos sistemas Rh (E, e, C, c), Kell (K), Duffy (Fya, Fyb), Kidd (Jka, Jkb) e MNS (S, s), para
pacientes aloimunizados contra antígenos eritrocitários ou que estão ou poderão entrar em esquema
de transfusão crônica, com o objetivo de auxiliar a identificação de possíveis anticorpos antieritrocitários
irregulares.

§ 19. Nos casos abrangidos pelo § 18, recomenda-se a realização de transfusões fenótipo compatível,
quando possível.
)
(Origem: PRT MS/GM 158/2016, Art. 178, § 19
 IDENTIFICAÇÃO DO HEMOCOMPONENTE
Devem ser observados
 Tipo sanguíneo
 Resultados de sorologia
 Data de validade
Obrigatoriamente deve estar etiquetado e conter:
 Dados do paciente (nome e registro hospitalar)
 Resultado da PAI
Dados do hemocomponente enviado
 Tipo de componente
 Nº de identificação da unidade
 Data e hora da liberação
 Assinatura do técnico (dupla checagem)
Aconselhável que a etiqueta contenha
As instruções técnicas
Orientações sobre a conduta frente a reações transfusionais
 POP ATUALIZADO E DISPONÍVEL

 Procedimentos realizados
 Deve ter um sistema de atualização periódica.
 Deve estar disponível (cópia física ou eletrônica) a todos os
colaboradores que utilizam a técnica, que devem ser treinados
para cada POP.
 Deve ter nome de quem escreveu e de quem aprovou o POP
 PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO – POP

 São “manuais” escritos para cada procedimento utilizado e a técnica realizada no

laboratório.
 Deve conter os detalhes de cada técnica e a maneira de fazer, incluindo os princípios e
objetivos, o material, equipamentos e reagentes necessários, a identificação e preparo
da amostra, a dispensação dos reagentes, a interpretação dos resultados, a liberação e
as formas de registros.
 No caso de problemas encontrados deve também dar orientações de como resolver ou
como encaminhar.
CHECK LIST PÓS EXECUÇÃO DO PROCESSO

Devem ser observados:

 Tipo sanguíneo.
 Conferência de fornecimento no sistema.
 Data de validade de amostra e hemocomponente.
 ETIQUETAS com dados do paciente (nome e registro hospitalar).
 Resultado da PAI.
 Dados do hemocomponente enviado.
 Tipo de componente.
 Nº de identificação da unidade.
 Data e hora da liberação.
 Assinatura do técnico (2 assinaturas).
 Conferência dos testes pré transfusionais na folha de trabalho.
 Hora de recebimento da amostra e hora de entrega do hemocomponente.
ERROS X TESTES DE COMPATIBILIDADE

ERROS

ABO RhD D fraco PAI

Erros notacionais 58,6% erros 1% erros 7% erros notacionais
notacionais notacionais 9,3% erros
29,3% erros 3,2% erros indeterminados
indeterminados indeterminados 83,7% erros técnicos
12,1% erros 95,8% erros
técnicos técnicos

1 em cada 2.220 pacientes com Anticorpos anti-eritrocitários

poderiam ter uma reação hemolítica transfusional evitável
EVITAR ERROS NA IDENTIFiCAÇÃO , EXECUÇÃO DOS TESTES, REGISTROS DE
HEMOCOMPONENTES E CONFERÊENCIA DA DUPLA CHECAGEM

Não é responsabilidade de uma pessoa ou

UNIDADE.
Responsabilidade de todos!!!
Minimizar riscos e potenciais erros

Teste compatível não garante sobrevida normal das

hemácias transfundidas, nem previne reações
indesejáveis
 Obrigada!

pseltenreich@hcpa.edu.br