Ensaios Farmacológicos em Órgãos Isolados - Protocolo 1

FFUP - FARMACOLOGIA I
ENSAIOS FARMACOLÓGICOS EM ÓRGÃOS ISOLADOS – PROTOCOLO 1
OBJETIVOS
 Realizar curvas concentração-resposta a diferentes agonistas

 Analisar quantitativamente a resposta obtida aos agonistas: ordem de
potências e eficácia
 Caracterizar os agonistas no tecido testado
PROTOCOLO EXPERIMENTAL
O íleo de ratazana foi dissecado e montado verticalmente, sob a tensão inicial de 1 g,
num banho de órgãos de 10 / 20 mL termostatado a 37ºC, em solução de Krebs-
Henseleit arejada com carbogénio (95% O2 e 5% CO2). O tecido estabilizou durante
60 minutos, com renovação da solução de Krebs-Henseleit de 15 em 15 minutos e foi
pré-contraído com uma solução de acetilcolina 2x10-3 M até obtenção de 2 respostas
reprodutíveis.
1. Iniciar o registo e verificar se a tensão basal permanece estável (origina uma linha
horizontal);
2. Adicionar 50 µL / 100 µL da concentração stock 1 (concentração mais baixa) do
agonista. Aguardar que a resposta do tecido estabilize e adicionar 50 µL / 100 µL
da concentração stock 2 do agonista de imediato;
3. Repetir o procedimento para as concentrações sucessivamente crescentes
3,4…12;
4. A curva cumulativa termina quanto a contração do tecido atinge o seu máximo (a
adição de duas concentrações consecutivas de fármaco não origina um incremento
da resposta);
5. Lavar o tecido 3 vezes por renovação da solução nutritiva de Krebs e aguardar 2
min. Repetir a lavagem mais 2 vezes;
6. Aguardar que o tecido estabilize, até que a tensão basal atinja o nível do início da
experiência;
7. Repetir o procedimento para o(s) outro(s) agonista(s).
AULAS LABORATORIAIS 2023/2024 1 claraquintas@ff.up.pt

FFUP - FARMACOLOGIA I
ANÁLISE QUANTITATIVA
1. Traçar as curvas concentração – resposta e calcular o EC50 e pEC50
Calcular as concentrações do agonista

Calcular a concentração de agonista atingida no banho, considerando que foram
efetuadas curvas cumulativas (o tecido não é lavado entre cada adição de agonista).
Para obter as sucessivas concentrações do agonista no banho, será necessário somar
as concentrações anteriores para obter os respetivos valores de x.
Ex:
x1 = concentração 1 (M)
x2 = concentração 2 + 1 (M)
x3 = concentração 3 + 2 + 1 (M)
…
Calcular a % de resposta máxima em função do agonista total (acetilcolina)
Resposta máxima obtida com o agonista total (mN) -------------------100%

Resposta obtida (mN) ---------------------------------------------------------- y
Traçar as curvas concentração – resposta

Traçar no mesmo gráfico, f(x) = % resposta máxima para as curvas efetuadas
x = log10[agonista] (M)
Calcular o EC50 e o pEC50 dos agonistas
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ENSAIOS FARMACOLÓGICOS EM ÓRGÃOS ISOLADOS – PROTOCOLO 1

 Realizar curvas concentração-resposta a diferentes agonistas

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1. Traçar as curvas concentração – resposta e calcular o EC50 e pEC50

Calcular as concentrações do agonista

Calcular a % de resposta máxima em função do agonista total (acetilcolina)

Resposta máxima obtida com o agonista total (mN) -------------------100%

Traçar as curvas concentração – resposta

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