An Toxic 2

Curso de Farmácia
Toxicologia Analítica e
Forense
Prof. JOSÉ CLÁUDIO DIAS AGUIAR

Farmacêutico – Bioquímico / UFC
Especialista em Bioquímica / UVA
Mestre em Química / UFC
1
Conceitos
1 – TOXICOLOGIA ANALÍTICA
Aplica fundamentos de QUÍMICA na determinação de agentes tóxicos
TOXICANTE: substância química (agente tóxico)
TOXICOLOGIA FORENSE: aplicação da TOXICOLOGIA com finalidade legal
O TOXICANTE pode estar presente na forma livre na matriz biológica ou estar

ligado a proteínas e a outros constituintes celulares
Antes da realização de reações químicas, é necessário que a substância seja

isolada da matriz
2
Análises Toxicológicas
A causa da morte é atribuição do médico legista, com resultados emitidos

pelo TOXICOLOGISTA FORENSE
Determinação da concentração de etanol em casos de acidente de trânsito

Determinação da concentração de CO em casos de incêndio
2 – INVESTIGAÇÃO DE MORTES POR INTOXICAÇÃO
Etapa 1) Obtenção da história do caso e de TODAS informações possíveis

(importante para escolha da amostra biológica a ser coletada)
Etapa 2) Realização das análises toxicológicas nas amostras coletadas
Importância da TOXICOCINÉTICA, principalmente BIOTRANSFORMAÇÃO

(às vezes há pesquisa por metabólitos)
Etapa 3) Interpretação dos resultados obtidos
3
Análises Toxicológicas
3 – INTOXICAÇÕES CRIMINOSAS NÃO FATAIS

1) Incapacitar a vítima (para roubo ou sequestro)
2) Para abuso ou agressão: etanol, benzodiazepínicos, opiáceos
sedação / amnésia
4 – TESTEMUNHO EM TRIBUNAIS
TOXICOLOGISTA FORENSE: é testemunha técnica (fornece assistência ao júri)
TESTEMUNHO OBJETIVO: descrição da metodologia analítica e resultados
TESTEMUNHO DE OPINIÃO: interpretação dos resultados analíticos
4
5 – ANÁLISES TOXICOLÓGICAS NA TOXICOLOGIA CLÍNICA
Remoção do material que ainda NÃO foi absorvido, limitando a absorção
Monitoramento da concentração do agente tóxico AINDA disponível

(presente na circulação sanguínea)
1) Marque o grupo de toxicante mais usado em casos de crimes sexuais:
a) Narcóticos
b) Anfetamínicos
c) Benzodiazepínicos
d) Antidepressivos
5
2) Amostras de sangue NÃO são indicadas para análise toxicológica de:
a) Etanol
b) Cocaína
c) Benzodiazepínicos
d) Ibuprofeno
6 – ETAPAS DAS ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:
6.1 – Amostragem:
ANÁLISE EMERGENCIAL: sangue, urina, vômito

CONTROLE TERAPÊUTICO: sangue, saliva
DOPAGEM: urina
MONITORIZAÇÃO DO TRABALHADOR: urina, sangue, cabelo
ORIENTAÇÕES: recipiente, horário, forma de coleta, conservação...
6
Etapas da Análise
6.2 – Seleção do método:
a) Clássicos: volumetria E gravimetria

b) Ópticos: espectroscopia de emissão (e de absorção), nefelometria
c) Métodos cinéticos: ex.: determinação da atividade da colinesterase
d) Métodos físicos de análise orgânica: determinação estrutural
VALIDAÇÃO:
Exatidão – comparação entre o valor obtido (análise) e o valor real (amostra)
Especificidade – capacidade de detecção de um analito de interesse
Robustez – resistência a variações técnicas, operacionais e ambientais
Sensibilidade – capacidade de distinção de concentrações próximas
7
Etapas da Análise
Precisão – proximidade entre medidas efetuadas em uma mesma amostra
Abrangência – capacidade de determinação de um analito em várias matrizes
Linearidade – obtenção de resultados proporcionais à concentração do analito
Lei de Lambert – Beer
Aplicação na ESPECTROFOTOMETRIA
Método óptico de análise que envolve a medição da radiação

absorvida por substâncias em solução, chamadas de cromóforos
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Etapas da Análise
ESPECTROFOTOMETRIA
RADIAÇÃO ABSORVIDA – absorbância

RADIAÇÃO TRANSMITIDA – transmitância
Absorbância é proporcional à concentração molar do cromóforo
A solução contendo o cromóforo é colocada em uma CUBETA
Qual é a relação entre AMOSTRA, ANALITO e CROMÓFORO ?
VIOLETA
9
Etapas da Análise
Substâncias que absorvem radiação na região do visível são coloridas
540 nm 410 nm
VIOLETA AMARELO
620 nm AZUL
Absorbância é proporcional à concentração molar do cromóforo
Absorbância = extinção molar (CTE) X concentração em mol/L X 1cm de cubeta
10
Etapas da Análise
Qual é a concentração molar de uma solução que apresentou absorbância 0,539?
(DADOS: a solução padrão de 0,03M apresentou absorbância 0,162)
CONCENTRAÇÃO ABSORBÂNCIA
0,03 0,162
x 0,539
A relação entre concentração e absorbância pode ser EQUACIONADA e

representada num gráfico de dispersão XY com linha
Y
Y = constante . X
ABS = constante . [cromóforo ]
X
11
Etapas da Análise
Linearidade / Lei de Lambert – Beer / reta de calibração
Absorvância = extinção molar (CTE) X concentração em mol/L X 1cm de cubeta
reta de calibração curva de calibração
Algumas vezes, a linearidade é mantida até certa concentração
R2 – de 0,95 a 1,00: reta é confiável

12
Etapas da Análise
6.3 – Tratamento da amostra:
Conversão das amostras para a forma de soluções
- Obtenção de HOMOGENEIDADE adequada

- Muitas análises envolvem soluções aquosas
- As soluções permitem uma melhor separação de constituintes
- A dissolução ou abertura de amostras ocorre em elevadas temperaturas
ou com reações químicas
ABERTURA POR VIA SECA
- Envolve aquecimento e queima (500 ºC) de amostras: obtenção de CINZA

- Aplicada na determinação de metais em amostras biológicas
- Apresenta simplicidade e pouco risco de contaminação da amostra
- O material orgânico é queimado e um resíduo inorgânico é obtido
13
Etapas da Análise
- Envolve aquecimento e queima (500 ºC) de amostras para obtenção de um

resíduo (CINZA)
- Equipamentos: forno mulfa forno micro-ondas
forno mulfa forno micro-ondas
- Retirar umidade da amostra, previamente, em chapa elétrica

- Ex.: determinação de arsênio em carnes
ABERTURA POR VIA ÚMIDA
- dissolução direta em água ou em ácidos fortes

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Etapas da Análise
6.4 – Remoção de INTERFERENTES:
PRECIPITAÇÃO SELETIVA
- Conversão dos interferentes em precipitados que podem ser separados

por FILTRAÇÃO
- Ex.: Na determinação de inseticidas em alimentos, usa-se acetato de
chumbo II para precipitar proteínas
EXTRAÇÃO POR SOLVENTE
- ACETONA retira “gorduras” de amostras biológicas
FORMAÇÃO DE COMPLEXOS
- Conversão dos interferentes em COMPLEXOS estáveis que não interagem

- Ex.: Na determinação de nitritos em salsicha, usa-se ferrocianeto de
potássio para complexar cátions
15
Etapas da Análise
6.5 – EXECUÇÃO DA ANÁLISE: “triplicata”
6.6 – OBTENÇÃO E OBSERVAÇÃO DOS RESULTADOS
6.7 – DIVULGAÇÃO DOS RESULTADOS
16
Cromatografia
CROMATOGRAFIA
Método de separação dos componentes de uma mistura, realizada através da

distribuição destes componentes entre DUAS fases, que estão em contato
DUAS fases: fase estacionária (sólida ou líquida) e fase móvel (líquida ou gás)
Classificação em relação à disposição da fase estacionária:
Cromatografia em coluna - fase estacionária disposta em um tubo cilíndrico
17
Cromatografia
Cromatografia plana - fase estacionária disposta em uma superfície plana
18
Cromatografia
Classificação em relação ao estado da fase móvel:
Cromatografia líquida – fase móvel é líquida
Cromatografia líquida clássica – fase móvel é líquida e sob ação da gravidade
Cromatografia líquida de alta eficiência – fase móvel é líquida e sob ação de

altas pressões
Cromatografia gasosa – fase móvel é gasosa (gás de arraste: N2 He H2 )

utilizada na separação de substâncias volatilizáveis
ocorre VAPORIZAÇÃO de substâncias
fase estacionária pode ser sólida ou líquida
substâncias separadas chegam ao detector presente
na saída da coluna.
Tipos de detector: EM ou D.I.C 19
Cromatografia
Mecanismos de separação: ADSORÇÃO E ABSORÇÃO
ADSORÇÃO: fase estacionária é SÓLIDA
ABSORÇÃO: fase estacionária é LÍQUIDA

Também chamada de Cromatografia por PARTIÇÃO
Cromatografia em camada delgada (CCD)
Cromatografia plana - fase estacionária disposta em uma superfície plana
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CCD
Cromatografia líquida – fase móvel é líquida (formada por ELUENTES)
fase estacionária é sólida
Ocorre ADSORÇÃO: fase estacionária é SÓLIDA
ELUENTES: substâncias de baixo ponto de ebulição
CUBA: recipiente de vidro aberto na parte superior

paredes revestidas com papel de filtro para
manter o ambiente saturado de vapores
ORDEM CRESCENTE DE POLARIDADE DOS ELUENTES

Hexano, éter de petróleo, tolueno, clorofórmio, éter, acetona, etanol, metanol, ác.acético
21
Considerações
Finais
22

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Aplica fundamentos de QUÍMICA na determinação de agentes tóxicos

TOXICANTE: substância química (agente tóxico)

TOXICOLOGIA FORENSE: aplicação da TOXICOLOGIA com finalidade legal

O TOXICANTE pode estar presente na forma livre na matriz biológica ou estar

Antes da realização de reações químicas, é necessário que a substância seja

A causa da morte é atribuição do médico legista, com resultados emitidos

Determinação da concentração de etanol em casos de acidente de trânsito

2 – INVESTIGAÇÃO DE MORTES POR INTOXICAÇÃO

Etapa 1) Obtenção da história do caso e de TODAS informações possíveis

Etapa 2) Realização das análises toxicológicas nas amostras coletadas

Importância da TOXICOCINÉTICA, principalmente BIOTRANSFORMAÇÃO

3 – INTOXICAÇÕES CRIMINOSAS NÃO FATAIS

TOXICOLOGISTA FORENSE: é testemunha técnica (fornece assistência ao júri)

TESTEMUNHO OBJETIVO: descrição da metodologia analítica e resultados

TESTEMUNHO DE OPINIÃO: interpretação dos resultados analíticos

Remoção do material que ainda NÃO foi absorvido, limitando a absorção

Monitoramento da concentração do agente tóxico AINDA disponível

1) Marque o grupo de toxicante mais usado em casos de crimes sexuais:

6 – ETAPAS DAS ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:

ANÁLISE EMERGENCIAL: sangue, urina, vômito

ORIENTAÇÕES: recipiente, horário, forma de coleta, conservação...

6.2 – Seleção do método:

a) Clássicos: volumetria E gravimetria

Exatidão – comparação entre o valor obtido (análise) e o valor real (amostra)

Especificidade – capacidade de detecção de um analito de interesse

Robustez – resistência a variações técnicas, operacionais e ambientais

Sensibilidade – capacidade de distinção de concentrações próximas

Precisão – proximidade entre medidas efetuadas em uma mesma amostra

Abrangência – capacidade de determinação de um analito em várias matrizes

Linearidade – obtenção de resultados proporcionais à concentração do analito

Lei de Lambert – Beer

Método óptico de análise que envolve a medição da radiação

RADIAÇÃO ABSORVIDA – absorbância

Absorbância é proporcional à concentração molar do cromóforo

A solução contendo o cromóforo é colocada em uma CUBETA

Qual é a relação entre AMOSTRA, ANALITO e CROMÓFORO ?

Substâncias que absorvem radiação na região do visível são coloridas

Absorbância é proporcional à concentração molar do cromóforo

Absorbância = extinção molar (CTE) X concentração em mol/L X 1cm de cubeta

Qual é a concentração molar de uma solução que apresentou absorbância 0,539?

(DADOS: a solução padrão de 0,03M apresentou absorbância 0,162)

A relação entre concentração e absorbância pode ser EQUACIONADA e

ABS = constante . [cromóforo ]

Linearidade / Lei de Lambert – Beer / reta de calibração

Absorvância = extinção molar (CTE) X concentração em mol/L X 1cm de cubeta

reta de calibração curva de calibração

Algumas vezes, a linearidade é mantida até certa concentração

R2 – de 0,95 a 1,00: reta é confiável

6.3 – Tratamento da amostra:

Conversão das amostras para a forma de soluções

- Obtenção de HOMOGENEIDADE adequada

ABERTURA POR VIA SECA

- Envolve aquecimento e queima (500 ºC) de amostras: obtenção de CINZA

- Envolve aquecimento e queima (500 ºC) de amostras para obtenção de um

forno mulfa forno micro-ondas

- Retirar umidade da amostra, previamente, em chapa elétrica

ABERTURA POR VIA ÚMIDA