Linfocitos Un linfocito es una célula linfática (se fabrican por células linfoides presentes en la médula ósea y que posteriormente migran a órganos linfoides como el timo, ganglios linfáticos y bazo, constituyen el 99 % de las células linfáticas), que es un tipo de leucocito (glóbulo blanco) comprendido dentro de los agranulocitos. Son los leucocitos de menor tamaño (entre 7 y 15 μm), y representan aproximadamente del 20 a 40 % del total en la sangre periférica. Presentan un gran núcleo esférico que se tiñe de violeta-azul y de escaso citoplasma (en el que frecuentemente se observa como un anillo periférico de color azul). Poseen un borde delgado de citoplasma que contienen algunas mitocondrias, ribosomas libres y un pequeño aparato de Golgi. Los linfocitos son células circulantes del sistema inmunitario que reaccionan frente a materiales extraños y son de alta jerarquía en el sistema inmunitario, principalmente encargadas de la inmunidad específica o adquirida. Estas células se localizan fundamentalmente en la linfa y los órganos linfoides y en la sangre. Tienen receptores paraantígenos específicos y, por tanto, pueden encargarse de la producción de anticuerpos y de la destrucción de células anormales. Estas respuestas ocurren en el interior de los órganos linfoides, los cuales, para tal propósito, deben suministrar un entorno que permita la interacción eficiente entre linfocitos, macrófagos y antígeno extraño. La principal causa de su aumento es el estrés. Características de los linfocitos Los linfocitos son pequeñas células blancas de la sangre, que por lo general miden de 7 a 8 micrómetros de longitud. Un micrómetro es una pequeña unidad de longitud que mide la millonésima parte de un metro. Los linfocitos más grandes pueden medir aproximadamente de 10 a 20 micrómetros de longitud. El núcleo (estructura central) de un linfocito está compuesto de grandes agrupaciones de finos hilos conocidos como cromatina. El núcleo de un linfocito presenta unas manchas de color púrpura o azul oscuro cuando se expone a una prueba conocida como la tinción de Wright. El núcleo suele ser redondo, pero puede presentar en los bordes un poco sangría. Además, el núcleo está rodeado por una pequeña cantidad de citoplasma azul claro (una sustancia gelatinosa que rellena una célula). A diferencia de otros tipos de glóbulos blancos sanguíneos, como por ejemplo, los basófilos y los eosinófilos, por lo general, el citoplasma de los linfocitos no contiene partículas grandes, de aspecto rudo, similares a los granos. Sin embargo, los linfocitos más grandes pueden contener una gran cantidad de citoplasma que contenga varias partículas brillantes rojizas o violáceas, de aspecto rudo y similar a los granos. A diferencia de otros tipos de células, los gránulos de los linfocitos no se vuelven de un color azul cuando se exponen a ciertos tipos de productos químicos utilizados en las pruebas de laboratorio. Los linfocitos B son los leucocitos de los cuales depende la inmunidad mediada por anticuerpos con actividad específica de fijación de antígenos. Las células B, que constituyen un 5 a 20% del total de linfocitos, dan origen a las células plasmáticas que producen anticuerpos. Los linfocitos son de dos tipos principales, atendiendo a su origen y función: células T, que se diferencian inicialmente en eltimo, y las células B, que se diferencian en el hígado y bazo fetal, y en la médula ósea del adulto (la 'B' proviene del latín Bursa fabricii, el órgano en el cual se desarrollan los linfocitos B en las aves). Durante su desarrollo, los linfocitos T y B adquieren receptores específicos para antígenos, el de las células B se le conoce como receptor de linfocito B (BCR). ONTOGENIA DE LAS CÉLULAS B. La ontogenia de las células B es el proceso de desarrollo que conduce desde los primeros precursores reconocibles de linaje de B hasta las células plasmáticas secretoras de anticuerpos. LOCALIZACIÓN. En los mamíferos, primero se forman en el hígado fetal, a partir de la octava y novena semana de gestación (en los espacios Disse); posteriormente se desvanece esta función y pasa a la médula ósea (situación adyacente al endostio). Los linfocitos B son generados por el organismo a lo largo de la vida, aunque cada vez en cantidades menores. Esto también ocurre para otros linajes hematopoyéticos. Los progenitores de los LB, en el estadio de reordenamiento de genes, pueden producir hasta 64 descendientes. Estas células migran al centro de la cavidad del hueso esponjoso, alcanzan la luz de la sinusoide, y maduran en asociación con las células reticulares del estroma. Sólo llegan al final del proceso de maduración el 25% de los LB, y el resto muere por apoptosis, y son fagocitadas por los macrófagos. FASES DEL PROCESO. La ontogenia de las células B se puede dividir en dos grandes fases: – Fase independiente de antígeno: ocurre en la médula ósea (órgano linfoide central o primario) y concluye con la salida de la médula del linfocito B maduro virgen e inmunocompetente. – Fase dependiente de antígeno: ocurre en los órganos linfoides secundarios o periféricos, y que conduce a la diferenciación del linfocito B en dos subclones hermanos: uno de células plasmáticas secretoras de Ac y otro de linfocitos B cebados de memoria. FASE INDEPENDIENTE DE ANTÍGENO En cavidades del hueso esponjoso ocurre la linfopoyesis de células B. La maduración tiene lugar en sentido radial, desde el endostio hacia el seno venoso central. Los progenitores linfoides adyacentes al endostio van produciendo reordenaciones génicas y dividiéndose, de modo que cada progenitor genera unos 64 descendientes. Estos descendientes, que ya son del estadio de células pre-B, emigran hacia el centro de la cavidad; la mayoría mueren por apoptosis (siendo fagocitados sus restos por macrófagos especializados llamados macrófagos de cuerpos tingibles). Finalmente, las células B maduras salen al seno venoso central. Durante todo este proceso se dan interacciones estrechas entre células estromales y las distintas fases madurativas del linaje de células B. Cerca del endostio predominan las células estromales reticulares, mientras que cerca de los senos venosos se reconocen las células estromales adventicias, que son importantes en el mecanismo de tránsito de la célula B madura a dicho seno. Las células pro-B se multiplican e interaccionan con las células estromales reticulares; esta interacción hace que la célula pro-B se diferencie a célula pre-B. Las células stem de la médula ósea no tienen Ig en superficie, no han reordenados sus genes aún, y para diferenciarse requieren de la participación de células del estroma de la médula ósea (adiposctos, fibroblastos, reticulocitos, endoteliocitos, etc…) que participan en el proceso a 2 niveles: mediante contactos directos y mediante factores solubles. El proceso de diferenciación se inicia por la interacción del CD44 de la célula stem con ácido hialurónico de células del estroma. Esta interacción parece favorecer contactos entre el c-kit de la célula precursora con SCF (stem cell factor) de la célula del estroma o soluble. Así, la célula pro-B temprana se diferencia en célula pro-B tardía. La interacción c-kit-SCF favorece la proliferación de estos precursores. Posteriormente, en las células pro-B tardías y células pre-B es necesaria la participación de factores solubles de activación y en concreto de la IL-7. Esta citosina, producida por las células del estroma, induce proliferación de los precursores. En las últimas etapas de diferenciación, los contactos entre los precursores B (células pre-B y B inmaduras) con las células estromales parecen estar mediados por moléculas de adhesión. – Durante las fases de progenitor linfoide, pro-B y parte de pre-B se expresan los genes de activación de recombinación (RAG-1 y RAG-2), así como el gen de la desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT). – Durante las fases de progenitor y pro-B se reordena DH/JH en ambos cromosomas. – En fase pre-B se intentan reordenaciones productivas VH/DHJH (Si no son productivas, la célula entra en apoptosis; si alguna de las dos es productiva, la célula escapa de la apoptosis, probablemente por la acción “de rescate” de la célula estromal). Simultáneamente está ocurriendo la adición de N-nucleótidos. En esta fase pre-B tiene lugar la síntesis del receptor de células pre-B: – Se ensambla VHDHJH con el gen C-mu, con lo que se producen cadenas pesadas de tipo mu. – Se unen por splicing dos segmentos nuevos: VpreB y delta-5, que conduce a la síntesis de lo que se llama cadena L sustititutiva (“pseudo-L”). – El ensamblaje de dos cadenas mu y dos cadenas pseudo-L produce la pseudo-IgM de membrana (que va acompañada de Ig-alfa/Ig-beta), que es el receptor característico de células pre-B. Este receptor de pre-B está implicado en algunos de los fenómenos que vienen a continuación: – la cadena pesada mu H logra la exclusión alélica. – El receptor en su conjunto induce la expansión proliferativa de las células pre-B que han logrado la reordenación productiva de la cadena H (se trata pues, de una selección positiva por el receptor de las propias células pre-B). – En las células pre-B seleccionadas tiene lugar la reordenación aleatoria de genes de cadenas lambda. Si tiene éxito (productiva), se provoca la exclusión alélica del otro alelo de lambda y de los dos alelos de kappa. Si el primer alelo de lambda no es productivo, se intenta con el segundo, y si tampoco es productivo, se intenta con los kappa. Si finalmente ninguno de los alelos son productivos, se entra en apoptosis. Si la célula ha logrado reordenaciones productivas y ha escapado a la apoptosis, ha alcanzado la fase de célula B inmadura, que expresa en su superficie auténtica mIgM, con una determinada especificidad. Estas B inmaduras son de vida corta (3-4 días), y durante este período se produce el proceso deselección negativa: una parte de los linfocitos poseen mIg con especificidades autorreactivas, es decir, que reconocen moléculas del propio organismo (auto-antígenos). En respuesta al auto-antígeno la célula B inmadura hace un intento de “corregirse”, induciendo una reordenación secundaria de genes de cadena L: – La unión auto-antígeno vs. mIgM desencadena la detención de la diferenciación y al mismo tiempo mantiene o eleva los niveles de expresión de los genes RAG-1 y RAG-2, para “probar suerte” con otra reordenación de segmentos génicos de cadenas ligeras. – Las células B inmaduras que hayan logrado reordenaciones que generen mIgM no auto-reactivas (bien sea en el primer intento o en esta fase de “corrección” de última hora) siguen adelante en su maduración. – En cambio, las células B inmaduras que en esta segunda oportunidad que supone la corrección de cadenas L sigan siendo auto-reactivas, entran en apoptosis y mueren, o bien quedan anérgicas. Estamos, pues, ante un mecanismo para la evitación de clones de células B autoinmunes. – Al madurar, los linfocitos B coexpresan mIgM + mIgD en sus superficies. Salen de la médula ósea a través del seno venoso (ayudados por las células adventicias del estroma) y emigran a los órganos linfoides secundarios (periféricos), donde aumentan el nivel de mIgD, de modo que éste llega a superar en 10 veces la cantidad de mIgM. Estos linfocitos B maduros vírgenes se pueden alojar temporalmente en dichos órganos, debido a que expresan receptores de alojamiento (homing) apropiados. 1.1.2.2. FASE DEPENDIENTE DE ANTÍGENO En la periferia, el linfocito B virgen puede encontrarse o no con el antígeno para el que son específicas sus inmunoglobulinas de membrana. 1. Si no encuentra su antígeno específico, muere por apoptosis al cabo de unos pocos días o semanas (menos de un mes). 2. Si entra en contacto con su antígeno específico, se convierte en linfocito B activado que se expande clonalmente y se diferencia en dos subclones: – Células plasmáticas secretoras de anticuerpos: El linfocito B pierde su mIgD y experimenta un cambio de clase por un mecanismo de splicingdiferencial. Además, aumenta mucho la tasa de transcripción de los genes reordenados, por lo que se producen y secretan grandes cantidades de Ac con la misma especificidad que las mIg del linfocito B progenitor. Las células plasmáticas son células a término que ya no se diferencian más, y mueren por apoptosis al cabo de unos días. – Células B cebadas de memoria: Las células B de memoria que quedan en los centros germinales de los órganos linfoides secundarios sufren hipermutación somática, por lo que va madurando la afinidad de sus mIg. Tienen vida larga (de meses a muchos años) que está en función de su mIgD: las cadenas pesadas delta parecen regular la persistencia de células B maduras de memoria en la periferia. INMUNIDAD HUMORAL En la respuesta específica humoral las células no atacan directamente a los antígenos. Son las proteínas llamadas anticuerpos, liberadas por las células plasmáticas, las que actúan contra los antígenos. Este tipo de respuesta se produce cuando aparecen patógenos extracelulares o toxinas bacterianas. Los linfocitos B son activados por células TH2. Al activarse, los linfocitos B proliferan, apareciendo células de memoria y células plasmáticas. Las células plasmáticas liberarán el anticuerpo específico, que provocará la opsonización del antígeno y la fijación del sistema del complemento.