Agronomía Costarricense 36(1): 69-78. ISSN:0377-9424 / 2012
www.mag.go.cr/rev agr/index.html
www.cia.ucr.ac.cr
MODIFICACIÓN DE OLFATÓMETROS DE CUATRO BRAZOS PARA
EXPERIMENTACIÓN EN BROCA DEL CAFÉ, Hypothenemus hampei FERRARI
(COLEOPTERA: CURCULIONIDAE)
Arturo Pacheco1/*, Helga Blanco-Metzler**, Rebeca Mora*
Palabras clave: Broca del café, Hypothenemus hampei, olfatometría, olfatómetro de cuatro brazos, atrayente,
compuestos volátiles.
Keywords: Coffee berry borer, Hypothenemus hampei, olfactometry, four-arm olfactometer, attractant, volatile
compounds.
Recibido: 24/11/11
Aceptado: 21/03/12
RESUMEN
ABSTRACT
La broca del café Hypothenemus hampei (Ferrari) es considerada la plaga de mayor
importancia en el cultivo del café a nivel mundial. Al igual que muchos otros insectos, el
comportamiento de la broca se ve modificado por
distintas señales olfativas, lo cual ha impulsado
la investigación en el campo de la olfatometría,
por medio de una gran variedad de estrategias y
alternativas. En este experimento se evaluaron 2
diseños innovadores de olfatómetros de flujo de
aire de 4 vías para experimentación en H. hampei. Estos fueron fabricados totalmente en cristal
y difieren entre ellos por la distribución angular
de los brazos distribuidores de flujos de aire y
la zona de ingreso y adaptación de los insectos
al olfatómetro. Para evaluar la funcionalidad de
estos diseños se utilizó, como atrayente de acción
conocida, una mezcla de metanol-etanol 3:1 y se
evaluó la cantidad de hembras adultas atraídas al
tratamiento en cada olfatómetro. En el olfatómetro de 90° los insectos se vieron claramente atraídos al brazo que contenía el atrayente, con un
porcentaje del 45%, mientras que el olfatómetro
Modification of four-arm olfactometers
to be used with the coffee borer Hypothenemus
hampei Ferrari (Coleoptera: Curculionidae).
The coffee berry borer, Hypothenemus hampei is
considered to be a major pest in coffee producing
countries worldwide. As in many insects, the
behavior of the coffee borer is modified through
aromatic signals. This has triggered important
research within the different approaches of
olfactometry. Two new innovative designs of
olfactometers were evaluated to be used on H.
hampei for this research. The olfactometers were
built of glass and differ in the angular distribution
of their arms and in the insect’s inlet and
adaptation zone. A mixture of methanol-ethanol
3:1, with proven attraction properties, was used to
evaluate the functionality of these olfactometers.
The bioassays were performed using only adult
females of H. hampei. On the 90º olfactometer,
45% of the insects were strongly attracted to
the arm comprised of the alcohol mixture. In
the case of the 30º olfactometer the positive
behavior response was only of 1.5%. During the
1
**
*
Autor para correspondencia. Correo electrónico:
arturo.pachecosolana@gmail.com
Centro de Investigación en Biología Celular y
Molecular, CIBCM, Universidad de Costa Rica. San
José, Costa Rica.
Centro de Investigación en Protección de Cultivos,
CIPROC, Universidad de Costa Rica. San José,
Costa Rica.
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AGRONOMÍA COSTARRICENSE
de 30° tan solo alcanzó un 1,5% de atracción. Las
observaciones realizadas durante estas pruebas
dejaron en evidencia que las estrategias de ingreso de los insectos a los olfatómetros y el área de
ambientación influyeron de manera importante en
estos resultados. En una segunda etapa se evaluó
el olfatómetro de 90º, al comparar los promedios
de atracción de cada uno de sus 4 brazos, y se verificó que las diferencias de atracción en cada brazo
no fueron significativas (p<=0,05). Se concluye
que el diseño del olfatómetro de 90º es apropiado
para realizar pruebas de atracción a compuestos
volátiles en hembras adultas de H. hampei.
assays it was observed that the different insect
insertion strategies into the olfactometers and
the adaptation area had a major influence on
results. During the second stage of this research,
the 90º olfactometer was evaluated through a
comparison of the average attraction of each of
its 4 arms; there were no significant differences
(p<=0.05) in attraction response of H. hampei
between arms of the device. It is concluded that
the 90º olfactometer design is suitable to develop
volatile-compound attraction assays on adult
females of H. hampei.
INTRODUCCIÓN
La investigación en olfatometría para la
broca del café ha sido poca y enfocada hacia
trampeo en campo (Borbón y Mora 2000). Los
estudios de laboratorio se han realizado con
varios tipos de olfatómetros, adaptándolos a las
necesidades de cada investigación pero sin comprobar su eficiencia con respecto a las características y comportamiento del insecto (Mendesil et
al. 2009).
Existen 2 tipos generales de diseño para
los olfatómetros: los de aire estático y los de flujo
de aire. Los olfatómetros de aire estático se usan
para medir respuestas quimiotáctiles u olfativas
a corta distancia o en situaciones en donde las
señales químicas se difunden en el espacio sin
ser transportadas por una corriente de aire. Los
de flujo de aire se usan en estudios encaminados a la detección y medición de respuestas de
atracción de insectos a señales olfativas emitidas
en distancias largas y medianas, ya que permite
evaluar conductas de anemotaxis desencadenadas
por aromas contenidos en una corriente de aire
(López-Ávila y Rincón 2006).
Los olfatómetros de flujo de aire deben
utilizar un sistema que permita mantener un flujo
continuo del aire dentro del dispositivo. Existen 3
modelos básicos en este tipo de olfatómetro: túnel
de viento, tubo en ‘Y’ y de 4 vías. El olfatómetro
El café es uno de los cultivos de mayor
importancia económica en una gran cantidad de
países tropicales. Hoy en día es cultivado en más
de 60 países (Waller et al. 2007) con un estimado anual de ventas al detalle de más de $70 mil
millones (Vega et al. 2006). Alrededor de 25
millones de productores dependen del cultivo de
café como medio de sustento (Waller et al. 2007).
En muchos países la producción de café
está seriamente amenazada por diferentes plagas y enfermedades; entre estas se encuentra la
broca del café, Hypothenemus hampei (Ferrari)
(Coleoptera: Curculionidae) la cual es una seria
plaga en prácticamente todas las regiones productoras de café con la excepción del archipiélago
Hawaiano (Vega et al. 2006).
La broca del café al igual que la gran
mayoría de insectos se ve atraída por diversas señales olfativas. Las investigaciones sobre
atracción olfativa de los insectos plaga, por compuestos volátiles liberados desde sus plantas hospederas, son cada vez mas frecuentes (Dickens
1999). Todos estos estímulos olfativos tienen un
potencial importante en el desarrollo de técnicas
biológicas para el control de plagas (Sengonca y
Kranz 2001 ).
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PACHECO et al.: Olfatómetros para experimentación en broca del café
de túnel de viento tiene la virtud de contar con
una cámara de decisión amplia especialmente
útil para insectos con capacidad de vuelo. Su
deficiencia se encuentra en que sólo permite
evaluar un compuesto a la vez. Los olfatómetros
en Y permiten empezar a discernir elecciones
por parte del insecto al existir 2 opciones de
ruta, pero han presentado algunos problemas en
el manejo de los flujos de aire. El primer diseño
de un olfatómetro de flujo de aire de 4 vías fue
desarrollado por Pettersson (1970) para estudiar
respuestas de áfidos a feromonas sexuales; estos
permiten observar relaciones más complejas de
atracción y repelencia a varios compuestos en
un solo experimento. Otra ventaja es la posición
en que puede ser ingresado el insecto justo en
el centro de los flujos de aire, pero en general
tienen la deficiencia de tener campos de decisión
muy pequeños y normalmente son más utilizados
para pruebas en las que sólo se usa un insecto y
se registra el tiempo en que el insecto se mueve
sobre cada zona del olfatómetro.
Fig. 1.
71
En este trabajo se presentan 2 diseños
innovadores de olfatómetros de flujo de aire de 4
vías, fabricados totalmente en cristal para evitar
cualquier persistencia de compuestos aromáticos
en sus paredes. Se incluye además, 2 distribuciones diferentes de los brazos por donde ingresan
los aromas, al igual que 2 estrategias diferentes
de ingreso de los insectos al olfatómetro.
La combinación de estas diferentes características en ambos diseños, son las que se
evaluaron mediante el uso de un compuesto de
atracción comprobada sobre la broca, para así
poder determinar cual olfatómetro tiene el mejor
desempeño y utilizarlo posteriormente en nuevas
pruebas olfatométricas en H. hampei.
MATERIALES Y MÉTODOS
Con el fin de validar el desempeño de 2
dispositivos olfatométricos para broca del café
se evaluaron modificaciones de 2 olfatómetros
de 4 vías (Figura 1) descritos por Morales (1989)
Dos diseños innovadores de olfatómetros puestos a prueba con un atrayente de acción comprobada sobre H. hampei.
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AGRONOMÍA COSTARRICENSE
y López-Ávila y Rincón (2006). Se realizaron
pruebas olfatométricas con compuestos volátiles
de acción conocida y comprobada, en este caso
se utilizó la mezcla de metanol y etanol en proporción 3:1 utilizada en investigaciones sobre
trampeo (Borbón y Mora 2000) y específicamente se usó la mezcla comercial que actualmente
distribuye el CICAFE (Centro de Investigaciones
en Café) entre los productores de café en Costa
Rica, para usar en trampas de campo. Se evaluó la
cantidad de insectos atraídos al tratamiento y se
determinó cual olfatómetro presentaba un mejor
desempeño.
Los insectos utilizados en los bioensayos
se obtuvieron de la colonia que actualmente se
mantiene en dieta artificial en el insectario del
Centro de Investigaciones en Biología Celular y
Molecular (CIBCM) de la Universidad de Costa
Rica. Esta colonia de broca de café se desarrolló
con los parámetros de cría descritos por Obando
(2002) al igual que las modificaciones de la dieta
artificial tipo Cenibroca II recomendados por
Portilla y Streett (2008). Para la reproducción
de los insectos se utilizan placas multipozo de
24 pozos marca Evergreen, donde se dispensa
Fig. 2.
la dieta artificial y se colocan 4 hembras de H.
hampei por pozo. Las placas se colocan en cajas
plásticas que representan un lote y una generación. Todos los lotes se mantienen en una incubadora a 80% de humedad relativa y 27°C. La
población de insectos se renueva y mantiene la
suficiente variabilidad genética con ingresos de
nuevos individuos cada 3 meses. Estos provienen
de la colonia en grano de campo del CICAFE en
Barva de Heredia, la cual se mantiene en constante regeneración con material infestado de diversas
fincas del país.
Para realizar los bioensayos se utilizaron
exclusivamente hembras adultas colonizadoras.
Estas hembras son aquellas que salen por si mismas del pozo con dieta en busca de un nuevo sitio
apto para ovopositar. Estas hembras se recolectan
fácilmente pues en cada lote se coloca un pliego
de papel toalla en el fondo, al cual estas hembras
se adhieren.
El área mecánica y el sistema de distribución de aromas de los olfatómetros se basó
en la utilizada por Sengonca y Kranz (2001) y
Mendesil et al. (2009) y se presenta de forma
esquematizada en la Figura 2. El atrayente se hizo
Representación esquematizada de todos los componentes de ambos
olfatómetros de 4 brazos modificados.
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PACHECO et al.: Olfatómetros para experimentación en broca del café
llegar al olfatómetro con ayuda de una bomba de
aire marca Barnant Co. Modelo 400-3901 (115
vac, 60 Hz) que impulsó una corriente de aire
hasta ser forzada a pasar a través de un filtro de
carbón activado, para posteriormente pasar a través de una trampa de agua destilada para filtrar
cualquier impureza restante y agregar humedad a
la corriente de aire. Por último, se colocó un rotámetro para medir el flujo de aire y 3 piezas T para
separar en 4 flujos iguales la corriente de aire,
hacia cada uno de los tratamientos en erlenmeyers de 125 ml y posteriormente al olfatómetro.
Se modificaron los diseños originales de la
zona central del olfatómetro, donde se colocaron
a los insectos para adecuarse al tamaño de H.
hampei y facilitar la observación de los individuos durante los bioensayos. La cámara central
se amplió principalmente en altura (5 cm.) para
permitir que el insecto vuele con mayor libertad
en busca de la preferencia aromática. También los
brazos fueron diseñados con 10 cm. de longitud
para asegurar la decisión del insecto una vez dentro del brazo. La pieza central de los olfatómetros
se fabricó como una sola pieza de vidrio para
evitar la adherencia de compuestos aromáticos en
su estructura. Ambos dispositivos fueron diferenciados en su nombre por el ángulo de inserción
de sus brazos.
Prueba olfatométrica
Con base en un sistema similar al utilizado por Mendesil et al. (2009), cada experimento
tuvo una duración de 16 min, con alternancia en
la posición del atrayente cada vez que se iniciaba
una nueva sesión experimental. El flujo de aire se
calibró en 200 ml.s-1 según las recomendaciones
de Sengonca y Kranz (2001) sobre flujos de aire
máximos, mínimos e ideales para insectos de
tamaño pequeño.
El área de trabajo se cubrió por todos sus
costados con malla aluminizada de tipo Aluminet® 50%, para evitar estímulos visuales no
deseados, gracias al efecto de difusión y homogenización de la luz que produce el tejido torneado
de este material. La iluminación se realizó de
abajo hacia arriba con 6 lámparas fluorescentes
73
de luz blanca cubiertas por una lámina de papel
pergamino blanco translúcido para conseguir un
efecto de luz difusa.
Los insectos se mantuvieron primero por
5 min en el área de ambientación para luego
dejarlos libres en el dispositivo. En ese momento se abrían los flujos de aire con el respectivo
atrayente. En el olfatómetro de 90° el área de
ambientación consistía en un tubo de cristal, de
diámetro apenas menor que la columna central
del olfatómetro, el cual se introducía por esta última para así colocar a los insectos directamente
en el fondo de la cámara central del olfatómetro.
Al pasar el tiempo de ambientación simplemente
se retiraba el tubo y las brocas quedaban libres
dentro del dispositivo. En el caso del olfatómetro
de 30° el área de ambientación consistía en una
pieza plástica con forma de codo cuyo extremo
inferior se acoplaba al brazo de ingreso de los
insectos. En la unión de ambas piezas se colocó
una malla de tergal que era retirada fácilmente
pasados los 5 min de ambientación para que los
insectos quedaran libres frente a la corriente de
aire del olfatómetro.
Debido al alto costo de la pieza central de
cristal del olfatómetro sólo se contó con una y por
lo tanto se procedió a aleatorizar las secuencias
de tratamientos y repeticiones. De igual manera
esta pieza de cristal se lavó con alcohol de 95%
y acetona (grado técnico para HPLC) entre repeticiones para eliminar cualquier rastro aromático
que pudiera quedar entre experimentos. Adicionalmente dicha pieza se autoclavó durante 25
min, entre las distintas pruebas, junto con el resto
de piezas de cristal y manguerillas que conformaron todo el sistema del olfatómetro.
Diseño experimental y análisis estadístico
Para los experimentos en cada uno de los
olfatómetros se usó un diseño irrestricto al azar.
Se realizaron 3 repeticiones en cada uno de los
brazos de ambos olfatómetros, considerándolos
como 2 tratamientos diferentes a causa de los
ángulos de inserción de sus brazos y se utilizaron
50 individuos por repetición. La variable de respuesta fue el ingreso permanente del insecto a la
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zona exclusiva del tratamiento, los insectos que
transcurridos los 16 min del tiempo estipulado se
mantenían en la cámara central se les asignaba el
estado de SR (sin respuesta).
Para el análisis estadístico se utilizaron
los conteos de brocas observadas en los brazos
de la cámara principal del olfatómetro. Se obtuvo
el total de brocas en cada uno de los brazos, se
promediaron y se efectuó un ANDEVA (análisis
de variancia) para cada experimento. También se
realizó una prueba LSD Fisher para encontrar
diferencias significativas entre los promedios
de los tratamientos. El análisis se realizó con el
software Infostat®.
RESULTADOS
Las hembras adultas de la broca del
fruto del café presentaron comportamientos
claramente contrastantes entre ambos diseños
de olfatómetros. La Figura 3 muestra como en
el olfatómetro de 90° los insectos se vieron
fuertemente atraídos al brazo que contenía el
atrayente de etanol-metanol, con un promedio
cercano a los 24 individuos, mientras que en
el olfatómetro de 30° este promedio apenas
alcanzó los 3 individuos. También se pudo
observar que en ambos dispositivos hubo un
promedio alto de insectos que no presentaron
respuesta al tratamiento, esto quiere decir que
al terminar el tiempo de tratamiento los insectos se encontraban dentro de la cámara central
de los olfatómetros o en el área de ingreso.
La mayoría de los individuos “sin respuesta”
no presentaron comportamiento de vuelo y en
general caminaban hacia arriba por la columna
superior que permite la salida de las corrientes
de aire en ambos dispositivos. En el caso particular del olfatómetro de 30º, muchos insectos
se quedaron inmóviles en la unión del dispositivo de ambientación y el brazo de ingreso
del olfatómetro. Por su parte en la Figura 3
también se puede observar que los resultados
obtenidos por el olfatómetro de 90° indican
que el número promedio de individuos atraídos
por el tratamiento (una media de 24) fue mayor
que aquellos que no presentaron ninguna respuesta (alrededor de 17 individuos).
Fig. 3. Comparación de la respuesta olfativa de hembras adultas de
Hypothenemus hampei en 2 diseños de olfatómetros con una mezcla de
etanol-metanol como atrayente.
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PACHECO et al.: Olfatómetros para experimentación en broca del café
En el Cuadro 1 se muestra en detalle el
comportamiento de las hembras adultas de H.
hampei en cada uno de los brazos de ambos
dispositivos olfatométricos. En el olfatómetro
de 90° la respuesta de la broca en los brazos
a los que sólo se aplicó una corriente de aire
sin atrayente fue mínima (≈3) y sin diferencias
significativas entre estos (F=2,57; p=0,184).
Por su parte el brazo de este olfatómetro en
que fue aplicado el atrayente sí mostró un
promedio alto de atracción del insecto (≈24)
y significativamente diferente al promedio de
brocas que no presentaron respuesta, tal como
lo muestra el análisis de varianza con valores
75
de 27,68 y 0,0063 para F y p respectivamente.
En el caso del olfatómetro de 30° ninguno
de los 4 brazos presentaron una respuesta
considerable por parte de la broca (<3) y ninguno fue significativamente diferente entre sí
(F=1,88; p=0,241).
La Figura 4 toma en cuenta nada más los 4
brazos del olfatómetro de 90° tratados individualmente con la mezcla atrayente de etanol-metanol.
Los resultados mostraron que cada brazo logró
atraer entre 20 y 25 individuos en promedio cuando se hizo pasar el atrayente por cada uno de ellos
y no se detectaron diferencias significativas entre
ninguno de los brazos(F=0,35; p=0,788).
Cuadro 1. Promedio de hembras adultas de Hypothenemus hampei atraídas por la mezcla de etanol-metanol en 2 olfatómetros
de 4 brazos.
Tratamientos
Olfatómetro
90º
30º
Etanol-metanol
23,6 a
2,3 b
Aire
3,5 b
2,4 b
Aire
2,6 b
2,5 b
Aire
3b
2,9 b
Sin respuesta
17,2 c
39,8 a
Letras distintas indican diferencias significativas (p<=0,05).
Columnas con la misma letra no presentan diferencias significativas (p<=0,05)
Fig. 4.
Comparación de la capacidad de atracción olfativa de cada brazo del
olfatómetro de 90º en hembras adultas de Hypothenemus hampei
expuestas a una mezcla de etanol-metanol.
DISCUSIÓN
Los 2 diseños de olfatómetro desarrollados
en el presente estudio son variantes modificadas
de los diseños descritos por Morales (1989) y
López-Ávila y Rincón (2006). Estas modificaciones, basadas en las características físicas y
biológicas del insecto a estudiar (H. hampei) y
observaciones en experimentos preliminares, son
importantes para optimizar futuros experimentos
en el campo de la olfatometría en broca del café.
Para diseñar estos modelos de olfatómetro
se tomaron en cuenta las fortalezas y debilidades
de los 3 diferentes tipos de olfatómetro.
Para los modelos de olfatómetro presentados en este estudio, se amplió la cámara central
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AGRONOMÍA COSTARRICENSE
a fin de permitir suficiente movimiento de exploración y decisión a los 50 individuos que se
usaron en cada repetición. Ese espacio ampliado
además evitó la formación de turbulencia en
el área de decisión y además la longitud de los
brazos permitió evaluar con mayor claridad la
respuesta olfativa de los insectos. El criterio más
utilizado en la determinación de un compuesto
volátil en olfatómetros de tipo Y, es la distancia
que el insecto camina dentro del brazo tratado
(Dean y Satasook 1983). No obstante, en esta
investigación la reacción ante un olor particular
fue medida por la cantidad de individuos atraídos
al brazo del olfatómetro bajo tratamiento y que se
mantuvieron dentro de ese sector.
Durante la fase preliminar de esta investigación, se observó que la luz y otras influencias exteriores, como lo son distintos colores,
resplandores o sombras, son capaces de afectar
el comportamiento de los individuos bajo experimentación. Para evitar estas fuentes de error,
el espacio donde se realizaron los experimentos
se cubrió en todos sus lados además de la parte
superior también la inferior con malla aluminizada y la fuente de luz se colocó en el plano
inferior cubierta por un pliego de papel pergamino para hacerla difusa. Otros investigadores han
utilizado técnicas similares; Venzon et al. (1999)
utilizó una cubierta de forma triangular sobre un
olfatómetro en Y. Por su parte Geier y Boeckh
(1999) utilizaron láminas de cartón blanco a cada
costado de un olfatómetro en Y para evitar los
estímulos visuales no deseados, pero este método
puede traer inconvenientes como la formación de
sombras o gradientes de luz que pueden afectar el
comportamiento de los insectos. La iluminación
constante y difusa utilizada en este estudio también es recomendada por otros autores (Colazza
et al. 1999).
Es importante destacar que todos los experimentos fueron realizados con hembras adultas
colonizadoras. Esto quiere decir que son individuos recolectados fuera de la dieta artificial,
las cuales según Mathieu et al. (2001) presentan
comportamiento similar a las hembras colonizadoras en campo y difieren del comportamiento
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de aquellas hembras que se mantiene dentro del
fruto en campo o dentro de la dieta artificial en
laboratorio, las cuales muestran poca respuesta
a estímulos olfativos. Estos individuos que se
adhieren al papel toalla que cubre el fondo de las
cajas con cada lote de la colonia de broca, son
ideales para experimentación pues son hembras
cargadas de huevos cuyos instintos de búsqueda
de frutos de café ideales para la ovoposición se
encuentran muy activos.
Para ambos diseños de olfatómetros descritos en este estudio se obtuvieron resultados
muy contrastantes. El olfatómetro de 90º produjo
resultados satisfactorios al atraer cantidades considerables (45%) de insectos al brazo en el cual se
colocaba el atrayente, mientras que el olfatómetro
de 30º tuvo un desempeño insuficiente al quedar
la mayoría de los individuos prueba (80%) en
el brazo de ingreso o la cámara central. Estos
resultados pueden deberse a una de las principales diferencias en estudio entre ambos diseños:
el método de ingreso de los individuos, el cual
se realizaba por un quinto brazo horizontal en
el olfatómetro de 30º al colocar a los individuos
directamente en el centro de la cámara de vidrio
en el diseño de 90º. En este último, el mecanismo
de ingreso de los insectos permite que estos sean
simultáneamente expuestos a los 4 flujos de aire
de cada brazo, lo cual, algunos autores indican
que es fundamental en experimentos de olfatometría (Rapusas et al. 1996). Gonzales et al. (1999)
describe un área central en un olfatómetro de 4
brazos para parasitoides pero no explica cómo se
realiza el ingreso de los individuos prueba. Por
su parte Ponsonby y Copland (1995) usaron una
pequeña cámara la cual permitió un “ingreso sin
estrés para los insectos”. En este estudio, el diámetro del conducto superior de salida de los flujos
de aire del olfatómetro de 90°, permitía introducir
un tubo de vidrio directamente en el centro de la
cámara central del olfatómetro donde los insectos
se alojaban en un área de ambientación durante 5
min, luego sencillamente se retiraba el tubo y los
individuos prueba quedaban libres y expuestos a
los 4 flujos de aire. Por su parte el olfatómetro
de 30º contaba con un quinto brazo, opuesto a
PACHECO et al.: Olfatómetros para experimentación en broca del café
los que conducen los tratamientos, por donde se
realizaba el ingreso de los insectos. A este brazo
se le tuvo que diseñar una pieza adicional, similar a un codo de 90º para facilitar el ingreso de
los insectos y a su vez desempeñar la función de
área de ambientación durante los 5 min previos
a la exposición al atrayente. Se observó que en el
momento de liberar los insectos en el flujo de aire
muchos se alojaban en la unión entre el brazo y el
dispositivo de ingreso. Esto responde a la naturaleza innata de H. hampei que busca la rugosidad
de cualquier superficie ya que en el fruto de café
sus sitios de penetración son principalmente la
corona o en menor medida el pedúnculo. Aún así,
los insectos que alcanzaban la cámara central del
olfatómetro y sus brazos no mostraron atracción
al tratamiento de etanol-metanol.
Una vez determinado cual modelo de olfatómetro presentaba resultados prometedores se
debió verificar que no hubiera diferencias significativas en la capacidad de atracción de cada brazo
cuando se le colocaba el atrayente. En el caso
de la broca del café, como ya se mencionó, era
indispensable que la superficie donde se moviera
el insecto fuere lo más uniforme posible y por
eso resulta una gran ventaja que el olfatómetro
consista de una sola pieza de vidrio. Al conducir
el flujo de aire con el atrayente, se compararon
los promedios de atracción de cada brazo del
olfatómetro de 90º y se pudo verificar que las
diferencias no son significativas y por lo tanto
una simple aleatorización de los tratamientos en
futuras investigaciones permitirá obtener datos
fiables. Es importante recalcar que la adaptación
de todo el espacio donde se realicen las pruebas
es necesaria para evitar las distracciones lumínicas y visuales que ya se comentaron. Algunos
autores para tratar este problema recomiendan
que durante la prueba olfatométrica el olfatómetro de 4 brazos sea girado un cuarto de vuelta
cada determinado tiempo (Mendesil et al. 2009,
Vet et al. 1983).
Esta investigación demostró que el olfatómetro modificado de 4 brazos a 90º descrito
en el presente estudio, es apropiado para realizar
77
pruebas de atracción a compuestos volátiles en
hembras adultas de H. hampei.
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