Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 IDENTIFIKASI BAKTERI POTENSIAL PENGHASIL ENZIM AMILASE, SELULASE, XILANASE DAN LIPASE PADA FASE TERMOFILIK KOMPOS MANUR SAPI 1,2,3 Fenti Fatmawati1,4*, Fida Madayanti Warganegara2 Dan Made Puspasari3 Kelompok Keahlian Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Bandung, email: fentisabian@gmail.com. 4 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Farmasi Bandung (STFB) Abstrak Kebutuhan akan enzim di Indonesia cukup besar namun pasokannya masih dipenuhi oleh impor. Keaneka ragaman hayati di Indonesia yang begitu melimpah dapat menjadi alternatif dalam mencari sumber- sumber enzim potensial yang banyak digunakan dalam industri. Amilase, selulase, xilanase dan lipase merupakan enzim yang memiliki nilai ekonomi tinggi. Kompos dari kotoran sapi adalah kompos yang menggunakan limbah kotoran sapi sebagai bahan campurannya. Proses pengomposan dapat terbagi menjadi beberapa tahap yaitu fase mesofilik awal, fase termofilik, mesofilik akhir dan fase pematangan. Perbedaan fase tersebut berdasarkan atas perbedaan suhu yang menyebabkan perubahan komunitas bakteri di dalamnya. Pada fase termofilik terjadi peningkatan suhu yang signifikan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi bakteri potensial yang dapat menghasilkan enzim amilase, selulase, xilanase dan lipase pada fase termofilik kompos manur sapi. Pada penelitian ini dilakukan isolasi mikroba pada fase termofilik lalu dilakukan skrining enzim. Kemudian dilakukan identifikasi secara genetik dengan metode penentuan urutan nukleotida gen 16S rRNA untuk mengetahui spesies bakteri tersebut. Dari hasil skrining dipilih koloni bakteri F3A pada fase termofilik dimana bakteri tersebut dapat menghasilkan enzim amilase, selulase, xilanase dan lipase. Koloni bakteri tersebut memiliki ukuran sebesar 20.000 pb. DNA kromosom hasil isolasi ini selanjutnya digunakan sebagai templat dalam proses PCR untuk mendapatkan gen secara utuh. Hasil PCR menunjukkan bahwa proses amplifikasi telah berhasil dilakukan yang ditunjukkan diperolehnya ukuran fragmen DNA yang berukuran 1500 pb. Setelah diamplifikasi lalu dilakukan sequensing. Berdasarkan urutan homologi dengan analisis BLAST dan analisis filogenetik dengan menggunakan program MEGA 5 diketahui bahwa bakteri F3A memiliki kemiripan 93% dengan Ureibacillus thermosphaericus. Kata kunci: Enzim, kompos, termofilik, Ureibacillus thermosphaericus. Salah satu metode pengolahan limbah 1. LATAR BELAKANG ternak Selama ini belum ada upaya yang maksimal dalam penanganan limbah dari usaha peternakan. Limbah peternakan dapat berupa sisa buangan dari kegiatan pemeliharaan ternak, rumah potong ternak dan pengolahan produk ternak. Hanya sedikit yang telah dimanfaatkan untuk pembuatan kompos dan biogas. Limbah ternak sapi perah dapat berupa limbah padat dan limbah cair. Limbah padat seperti manur kotoran ternak dan sisa pakan. Limbah cair misalnya air pencucian kandang dan air kencing sapi. ini adalah dengan pengomposan.Proses pengomposan yaitu proses penguraian yang merubah material organik menjadi material yang lebih stabil yang mengandung humus. Proses pengomposan memiliki 4 fase utama yaitu fase mesofilik awal, fase termofilik, fase mesofilik akhir dan fase pendinginan atau pematangan. Pada saat fase mesofilik awal, temperatur kompos relatif mirip dengan temperatur lingkungannya. kompos akan Selanjutnya meningkat dengan tajam hingga mencapai kondisi termofilik. Pada tahap termofilik, 69 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 aktif namun pasokannya masih dipenuhi oleh bahan-bahanorganik impor. Enzim amilase digunakan dalam sehingga menghasilkan panas. Akumulasi industri tekstil, industri kertas dan industri kalor ini dapatmenyebabkan kenaikan makanan. temperatur dari bahan kompos. diaplikasikan pada industri tekstil, pada Temperatur yang tinggimempercepat deterjen sebagai agen untuk meningkatkan degradasi protein, lemak dan karbohidrat kecerahan dan kelembutan kain, untuk kompleks selulosadan meningkatkan kualitas gizi dan kecernaan hemiselulosa. Aktivitas dan diversitas pakan ternak, pembuatan bioetanol. Enzim mikroba xilanase dapat dijadikan pengganti klorin mikroorganisme menjadi sangat mendegradasi seperti menurun temperaturmencapai pada saat 55-60oC. Patogen pada Enzim industri selulase kertas dan banyak untuk dihancurkan oleh panas metabolik yang meningkatkan mutu pakan ternak non dihasilkanoleh yang ruminansia. Lipase banyakdiaplikasikan fase termofilik sejumlah besar polutan pada industri makanan, kertas, tekstil, berbahaya(Singhdkk, 2012). kulit, pengolahan limbah, produksi bahan Setelah fase ini terlampaui, temperatur kimia dan , sintesis surfaktan, obat-obatan, menurun secara perlahan hingga akhirnya kosmetik. menurunkan organik kompos matang di fase pendinginan dan pematangan. selama Perubahan proses yang terjadi perubahan fase-fase Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi bakteri potensial yang dapat menghasilkan enzim amilase, tersebut adalah terjadinya pola perubahan selulase, xilanase dan lipase pada fase temperatur termofilik kompos manur sapi. yang mempengaruhi baik signifikan secara yang langsung maupun tidak langsung terhadap aktivitas 2. METODE PENELITIAN mikroorganisme. Mikroorganisme yang Penelitian ini dilakukan di Laboratorium terlibat dalam proses degradasi bahan Biokimia, Program Studi Kimia,Fakultas kompos umumnya menghasilkan enzim. Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Dengan adanya aktivitas enzim-enzim Institut Teknologi Bandung.Peralatan tersebut pada proses pengomposan manur yang digunakan meliputi gelas kimia, sapi kelebihan gelas ukur, labu Erlenmeyer,cawan petri, tersendiri. Kompos dari manur sapi ini tabung reaksi, tabung Eppendorf, pipet selain dapat digunakan dalam bercocok mikro, tip pipet mikroberbagai ukuran, tanam juga dapat dijadikan alternatif baru autoclave, waterbath incubator, hot plate dalam mencari sumber-sumber enzim stirrer, potensial yang banyak digunakan dalam microcentrifuge (BOECO M24A), alat industri seperti enzim amilase, selulase, PCR (c-100 Thermal CyclerBIORAD), akan memberikan neraca analitik,pH meter, xilanase dan lipase. Adapun kebutuhan akan enzim di Indonesia cukup besar 70 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 Spektrofotometer, alat elektroforesis, Koloni tunggal yang sama juga lampu UV. ditumbuhkan pada media selektif yang Cara kerja mengandung xilan. Xilan diekstraksi dari a. Isolasi Bakteri tongkol Pada penelitian ini digunakan sampel dari delignifikasimenggunakan pelarut natrium hasil hipoklorit pengomposan manur sapi jagung dengan (NaOCl) 1%. cara Setelah itu yangdicampur dengan jerami padi pada tongkol jagungdioven selama 48 jam perbandingan dengan 3:1. Sampel kompos suhu 50oC. Lalu dilakukan diambilmewakili termofilik yaitu suhu 55 perendaman denganlarutan NaOH 15% . o Xilan C. Pada fasa termofilik diambil dengan 3 kemudian diendapkan dengan atas, HCl.Skrining enzim xilanase dilakukan tengan dan bawah. Sampellalu dilarutkan dengan menggunakan metode Samanta dengan aquades dengan perbandingan (2011). 1:10. Sebanyak 0.1 mLlarutan stok dari f. Skrining Lipase larutan sampel diinokulasikan ke dalam 10 Skrining lipase dilakukan dengan dengan mLmedia LB cair. Isolat diinkubasi pada metode Leonov (2010). posisi pengambilanyaitu bagian o suhu yang sesuai dengan suhu55 C selama g. Isolasi DNA Kromosom 16 jam dengan menggunakan shaker Sebanyak 3 μl kulturbakteri disentrifugasi dengan kecepatan150 rpm. Dilakukan dengan kecepatan 8000 rpm selama 5 pengenceran menit. terhadap kultur dengan NaClfisiologis 0,9%. ditambahkan 300 μl buffer ekstraksi dan Setelah itu kultur ditumbuhkan dalam lisozim 5 mg. Kemudian diinkubasi pada media LB dengan caraspread. Kultur suhu 37oCselama 1 jam. Sel dilisis dengan selanjutnya diinkubasi pada suhu 55 oC buffer lisis (40 μl SDS 10%, 80 μl EDTA selama 16 jam. 0.5 M,398 μl proteinase K, 72 μl ddH2O). b. Skrining Amilase Lalu diinkubasi pada suhu 50oC selama Koloni tunggal yang telah didapatkan, 30menit. Setelah itu didiamkan di suhu ditumbuhkan pada media selektif dan ruang laludiinkubasi di es. Ditambahkan menggunakan o Pada pelletyang tersisa diinkubasi selama 16 jam pada suhu 55 C. 30ml CH3COOK 5M dan 5,75 ml Skrining asamasetat glasial lalu diinkubasi dalam es amilase dilakukan dengan metode Fooladi (2010). batu c. Skrining Selulase dengankecepatan 12.000xg pada suhu 4oC Koloni tunggal yang sama selama 5 menit. Sentrifugasi juga selama 20 menit. Supernatan diendapkan ditumbuhkan pada media CMC dan dengan isopropanol. Lalu diinkubasi pada selanjutnya diinkubasi pada suhu 55 oC suhu ruangselama 1 jam. Sentrifugasi selama 16 jam. kembali d. Skrining Xilanase laludicampur selama 15 menit. Pellet dengan Etanol 70%. Sentrifugasi kembali selama 5 menit. 71 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 Pellet kemudian dikering udarakan selama 3. HASIL DAN PEMBAHASAN semalam. Isolasi Bakteri h. Amplifikasi DNA Kromosom Proses amplifikasi dilakukan DNA mengunakan kromosom PCR dengan Hasil amplifikasi DNA dapat dilihat melalui elektroforesis gel agarosatersebut tunggal dengan pengenceran. Pengenceran dilakukan perhitungan. NaCl fisiologis digunakan sebagaipengencer agar suspensi adanya kontaminanpada sampel. Jumlah j. Sequencing 16S rRNA Penentuan urutan nukleotida dilakukan di Korea Selatan denganmetode dye-end terminator. Untuk satu kali penentuan dibutuhkan templat DNAsebanyak 100 μl dan primer BactF, UniB1, ComF, ComR yang masing- koloni yang tumbuh pada termofilik sebanyak 1,2 x 103 CFU/ml.Koloni yang tumbuh diamati morfologinya. Koloni dengan morfologi berbeda ditumbuhkan kembali di media LB padat yangbaru kemudian dibuat koleksinya. Adapun perbedaan masingsebanyak 10 pmol. morfologinya tersebut yaituterletak perbedaan bentuk koloni dan k. Analisis Homologi Urutan nukleotida gen 16S rRNA yang diperoleh selanjutnya dianalisis dengan program BLAST (www.blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.egi) mengidentifikasipengelompokan bakteri. Program BLAST membandingkan urutan nukleotidayang dihasilkan dan kecocokan koloni sampel tetap steril dan menghindari dibawah sinar UV (360 nm). mencari didapatkan sampel tidak terlalu padatsehingga dapat i. Elektroforesis Gel Agarosa untuk hasil isolasi dilakukan agar pertumbuhan bakteri pada metode Tessalonika (2012). MACROGEN Dari dengan nukleotida yang ada pada GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/). urutan juga ukuran. Koloni dengan morfologi yang berbeda diperoleh sebanyak 7 koloni. Skrining Enzim Koloni bakteri penghasil enzim yang terdapat pada fasa termofilik diperoleh denganmenumbuhkan terpilih dalam media koloni tunggal skrining yang spesifik. Kolonibakteri yang memiliki aktivitas amilase, selulase dan xilanase akan menghasilkanzona bening disekitar koloni. Sedangkan koloni bakteri yang memiliki aktivitas lipase akan menghasilkan pendar bila dilihat di bawah sinar UV seperti yangterlihat pada gambar di bawah ini. 72 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 Gambar 1.Skrining enzim dari koloni tunggal terpilih di fasa termofilik Catatan : dari kiri ke kanan. Kontrol positif, skrining amilase,skrining selulase, skrining xilanase, skrining lipase Pada fasa termofilik terdapat 7 koloni F3C, F3D, F3E, F3F, F3G. Dari hasil yang dilakukan skrining dengan metode skrining media selektif. Dari ke 7 koloni ini aktivitas enzim dari masing-masing koloni masing-masing dinamakan F3A, F3B, seperti terlihat pada tabel 2 dibawah ini. dapat dilihat secara visual Tabel 2. Aktivitas enzim dari koloni fasa termofilik Aktivitas Aktivitas Aktivitas Aktivitas amilase selulase xilanase lipase F3A +++ ++ ++ ++ F3B +++ ++ ++ F3C +++ ++ ++ F3D +++ + ++ F3E +++ ++ + ++ F3F +++ + ++ F3G +++ + ++ ++ Catatan: +++ : tingkat aktivitas enzim tinggi ; ++ : tingkat aktivitas enzimsedang ; + : tingkat aktivitas enzim rendah ; - : tidak adanya aktivitas enzim Koloni Dari tabel diatas jika setiap tanda (+) dilakukan identifikasi lebih lanjut. DNA dianggap mewakili aktivitas enzim maka hasil koloni F3A memiliki aktivitas enzim menggunakan amilase, dan elektroforesis menunjukkan bahwa DNA lipasedilihat dari hasil skrining. Koloni ini tersebut memiliki ukuran diatas 20.000 pb dianggap (Gambar 2). selulase, xilanase potensial karena dapat isolasi lalu gel dielektroforesis agarosa. Hasil menghasilkan keempat enzim potensial. Oleh karena itu, selanjutnya koloni F3A diidentifikasi mengetahui spesies ini untuk bakteri dilihat dariurutan gen 16Snya. Urutan nukleotida di kedua ujung gen bersifat lestari sehinggahampir seluruh gen dapat diamplifikasi. Isolasi DNA Kromosom Bakteri potensial diisolasi DNA tersebut kemudian kromosomnya untuk Gambar 2. Hasil elektroforesis DNA kromosom Catatan : M : marker ; F3A : bakteri pada fasa termofilik 73 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 Amplifikasi DNA Kromosom Sequencing 16S rRNA Amplifikasi DNA kromosom dilakukan Untuk mendapatkan urutan nukleotida menggunakan teknik PCR laluhasilnya hasil PCR perlu dilakukan sequensing dielektroforesis dengan gel agarosa. DNA dengan menggunakan beberapa primer. kromoson hasil isolasidigunakan sebagai Primer yang digunakan adalah sepasang template dalam proses PCR. PCR 16S primer luar dan sepasang primer dalam. rRNA tujuan Primer luar yang digunakan adalah Bact F mengamplifikasi gen 16S rRNA secara untuk forward dan Uni B untuk reverse. utuh. 16SrRNA Sedangkan primer dalam yang digunakan dilakukan dengan menggunakan primer adalah primer comF untuk forward dan universal (primer Bact F danprimer UniR). comR untuk reverse. Diharapkan dari Elektroforesis Gel Agarosa primer tersebut dapat terbaca secara baik Keberhasilan amplifikasi gen 16S rRNA urutan nukleotida dari bakteri target. dapat dilihat dari besarnya ukuran DNA Proses sequensing dilakukan di Macrogen yang didapatkan. Dari hasil penelitian ini Korea didapatkan metode dye end terminator. Berdasarkan dilakukandengan Amplifikasi ukuran gen DNA setelalah Selatan dengan amplifikasi adalah ±1500 pb (Gambar 3). hasil Ini proses didapatkan data urutan nukleotida dari amplifikasi telah berhasil dilakukan . Hal primer yang digunakan. Masing-masing ini dikarenakan gen yang diamplifikasi primer memberikan data urutan nukleotida merupakan gen 16S yang memiliki ukuran berupa elektroforegram puncak-puncak sekitar 1500 pb. basa. Puncak-puncak tersebut dipilih dari menunjukkan bahwa sequensing gen menggunakan 16S rRNA puncak yang tinggi dan tidak menumpuk. Dari beberapa sekuensing elektroforegram didapatkan hasil puncak-puncak pendek. Adanya puncak-puncak yang pendek kemungkinan disebabkan oleh hasil amplifikasi DNA yang tipis. Analisis Homologi Urutan nukleotida yang diperoleh kemudian dianalisis dengan menggunakan Gambar 3. Hasil elektroforesis amplifikasi PCR Catatan: M : marker ; F3A : bakteri pada fasa termofilik. program BLAST (www.blast.nbi.nlm.nih.gov/). Program BLAST membandingkan urutan nukleotida yang dihasilkan dengan urutan nukleotida yang ada di GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank). 74 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 gi|219878452|ref|NR_025591.1|:360-777_Bacillus_soli_strain_R-16300_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343201442|ref|NR_042168.1|:360-777_Bacillus_novalis_strain_IDA3307_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|265678697|ref|NR_029002.1|:296-713_Bacillus_drentensis_strain_IDA1967_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219878451|ref|NR_025590.1|:360-777_Bacillus_vireti_strain_R-15447_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|310974904|ref|NR_036766.1|:360-777_Bacillus_bataviensis_strain_IDA1115_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219878231|ref|NR_025370.1|:361-778_Bacillus_fumarioli_strain_LMG_17489_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566085583|ref|NR_109664.1|:348-765_Bacillus_thermocopriae_strain_SgZ-7_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566085239|ref|NR_109068.1|:343-760_Bacillus_ginsengisoli_strain_DCY53_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343200690|ref|NR_041377.1|:362-779_Bacillus_pocheonensis_strain_Gsoil_420_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219856876|ref|NR_024695.1|:373-790_Bacillus_niacini_strain_IFO15566_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566085591|ref|NR_109671.1|:331-748_Bacillus_abyssalis_strain_SCSIO_15042_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|559795162|ref|NR_104749.1|:377-794_Bacillus_subterraneus_strain_COOI3B_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219878418|ref|NR_025557.1|:353-744_Bacillus_aeolius_strain_4-1_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219846924|ref|NR_026516.1|:367-784_Anoxybacillus_flavithermus_subsp._flavithermus_strain_DSM_2641_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|444304242|ref|NR_074667.1|:367-784_Anoxybacillus_flavithermus_WK1_strain_WK1_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|343201499|ref|NR_042225.1|:379-796_Anoxybacillus_amylolyticus_strain_MR3C_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|265678701|ref|NR_029006.1|:384-801_Anoxybacillus_contaminans_strain_R-16222_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219857190|ref|NR_024818.1|:363-780_Anoxybacillus_voinovskiensis_strain_TH13_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343198685|ref|NR_043267.1|:323-740_Bacillus_infantis_strain_SMC_4352-1_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566085175|ref|NR_108906.1|:384-801_Bacillus_eiseniae_strain_A1-2_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343205633|ref|NR_043991.1|:339-756_Bacillus_firmus_strain_KSC_SF8b_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343200105|ref|NR_040792.1|:380-797_Bacillus_lentus_strain_NCIMB8773_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|566084911|ref|NR_108459.1|:357-774_Chryseomicrobium_amylolyticum_strain_JC16_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343201095|ref|NR_041782.1|:360-777_Sporosarcina_ureae_strain_DSM_2281_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|559795330|ref|NR_104923.1|:319-736_Sporosarcina_pasteurii_strain_NCCB_48021_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343201298|ref|NR_042024.1|:370-787_Filibacter_limicola_strain_DSM_13886_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|343203011|ref|NR_043527.1|:373-790_Sporosarcina_soli_strain_I80_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|265678925|ref|NR_029233.1|:368-785_Sporosarcina_globispora_strain_785_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343203923|ref|NR_043720.1|:370-787_Paenisporosarcina_quisquiliarum_strain_SK_55_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566084929|ref|NR_108473.1|:384-801_Paenisporosarcina_indica_strain_PN2_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343198953|ref|NR_044122.1|:334-751_Sporosarcina_antarctica_strain_N-05_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219878119|ref|NR_025258.1|:383-800_Lysinibacillus_odysseyi_strain_34hs1_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|566085589|ref|NR_109669.1|:369-786_Lysinibacillus_chungkukjangi_strain_2RL3-2_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343198625|ref|NR_043092.1|:360-777_Lysinibacillus_massiliensis_4400831___CIP_108448___CCUG_49529_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|265678752|ref|NR_029057.1|:384-776_Macrococcus_lamae_strain_R_16089_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|343206336|ref|NR_044928.1|:381-773_Macrococcus_bovicus_strain_C2F4_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|444439626|ref|NR_074941.1|:383-775_Macrococcus_caseolyticus_JCSC5402_strain_JCSC5402_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|343206334|ref|NR_044926.1|:383-775_Macrococcus_equipercicus_strain_H8h3_16S_ribosomal_RNA_complete_sequence gi|310975036|ref|NR_036900.1|:365-757_Macrococcus_caseolyticus_strain_235_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343204164|ref|NR_043747.1|:383-800_Ureibacillus_thermophilus_strain_HC148_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343202774|ref|NR_043232.1|:370-787_Ureibacillus_suwonensis_strain_6T19_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|219878255|ref|NR_025394.1|:354-746_Ureibacillus_terrenus_strain_DSM_12654_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343204155|ref|NR_043746.1|:381-798_Ureibacillus_composti_strain_HC145_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343200274|ref|NR_040961.1|:383-800_Ureibacillus_thermosphaericus_strain_DSM10633_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence f3 gi|310975123|ref|NR_036987.1|:373-791_Bacillus_smithii_strain_NRS-173_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343205778|ref|NR_044193.1|:380-796_Bacillus_ginsengi_strain_ge14_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|343202251|ref|NR_042537.1|:380-796_Bhargavaea_cecembensis_strain_DSE10_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence gi|224581445|ref|NR_027227.1|:374-790_Bacillus_infernus_strain_TH-23_16S_ribosomal_RNA_partial_sequence Gambar 4. Pohon Filogenetik Bakteri F3A Berdasarkan analisis homologi yang bakteri F3A memiliki homologi terdekat didapat dari BLAST dapat diketahui dengan persentase kemiripan bakteri target. Hasil dengan kemiripan 93%. BLAST memiliki menunjukkan homologi bahwa dengan Ureibacillus thermosphaericus bakteri beberapa 4. KESIMPULAN bakteri lain. Analisis filogenetikdilakukan Bakteri F3A adalah bakteri potensial dengan menggunakan program Mega 5. yang dapat menghasilkan enzim amilase, Berdasarkan pohon selulase, xilanase dan lipase pada fase filogenetik (Gambar 4) diketahui bahwa termofilik kompos manur sapi. Namun hasil analisis 75 Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 16 Nomor 1 Agustus 2016 Bakteri F3A hanya memiliki kemiripan Type Bacteria Isolates. Innovative dengan Romanian Food Biotechnology vol bakteri Ureibacillus thermosphaericussebesar 93%. Hal ini berarti bahwa urutan nukleotida keduanya tidak cukup mirip dan masih terdapat perbedaan sehingga memungkinkan bahwa bakteri F3A ini bukan merupakan bakteri Ureibacillus thermosphaericus. 6. Samantha, A., Kolte,A., Senani,S. dan Sridhar (2011) : A Simple and Efficient Diffusion Technique For Assay of Activity, Endo Brazilian Penulis mengucapkan terima kasih Singh, J., Kalamdhad,A.S. kepada pembimbing yang telah membantu Reduction dalam penyelesaian penelitian ini. duringCompostingInternational 6. DAFTAR PUSTAKA Screening the Thermophilic and Bacterial Population of Three Iranian Hot Springs to Detect the Thermostable Producing of of (2012) Heavy A Journal : Metal Review. of Environmental Protection. Fooladi, J. dan Sajjadian, A. (2010) : α-amylase Journal Microbiology 42: 1349-1353. 5. UCAPAN TERIMA KASIH Hyperthermophilic ß-1,4-Xylanase Strain. Iranian Journal of Microbiology 46- Tesalonika, A.C. (2012) : Isolasi dan uji aktivitas lipase dan xilanase pada fasa-fasa pembuatan kompos, Skripsi, Program Studi Sarjana Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Bandung. 50. Leonov, S. (2010) : Screening for Novel Cold Active Lipases from wild 76