Drogas con Compuestos fenlicos (Flavonsidos) en Citrus

aurantium, Ruta chalepensis, Allium cepa y Zea mays

Calixto Ontn R, Salazar Agero K, De La Cruz Guevara J, Valeriano Mamani A.
Resumen
Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que
protegen al organismo del dao producido por agentes oxidantes, como los rayos
ultravioletas, la polucin ambiental, sustancias qumicas presentes en los
alimentos, etc. El organismo humano no puede producir estas sustancias qumicas
protectoras, por lo que deben obtenerse mediante la alimentacin o en forma de
suplementos. Se procedi a la extraccin de las muestras por decoccin con agua
o con mezcla hidroalcohlica por un tiempo de 15 min, pero en la muestra de
hespersidos solo se necesita reposo por 48 horas. Las reacciones cualitativas de
determinacin de flavonsidos resultaron positivas para el mtodo de extraccin y
tambin comprobado por la cromatografa en capa fina con el patrn rutina.
Demostrandose asi la presencia de flavonsidos en las distintas plantas tales
como Citrus aurantium, Ruta chalepensis, Allium cepa y Zea mays L.
Palabras clave: Flavonsidos, extraccin, cromatografa

Abstract
Flavonoids are natural pigments found in plants that protect the body from damage
by oxidizing agents such as ultraviolet rays, environmental pollution, chemicals in
food, etc.. The human body can not produce these protective chemicals, so they
must be obtained through diet or as supplements. The procedure for extraction of
samples by decoction with water or alcohol mixture for a period of 15 min, but
hespersidos sample only needs rest for 48 hours. Qualitative determination
flavonsidos reactions were positive for the extraction method and also checked by
thin layer chromatography with the routine pattern. Thus demonstrating the
presence of flavonsidos in various plants such as Citrus aurantium, Road
chalepensis, Allium cepa L. and Zea mays
Keywords: Flavonsidos, extraction, chromatography



I.-INTRODUCCIN
Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que
protegen al organismo del dao producido por agentes oxidantes, como los rayos
ultravioletas, la polucin ambiental, sustancias qumicas presentes en los
alimentos, etc. El organismo humano no puede producir estas sustancias qumicas
protectoras, por lo que deben obtenerse mediante la alimentacin o en forma de
suplementos. Estn ampliamente distribuidos en plantas, frutas, verduras y en
diversas bebidas y representan componentes sustanciales de la parte no
energtica de la dieta humana..
Sus propiedades anti-radicales libres se dirigen fundamentalmente hacia los
radicales hidroxilo y superxido, especies altamente reactivas implicadas en el
inicio de la cadena de peroxidacin lipdica y se ha descrito su capacidad de
modificar la sntesis de eicosanoides (con respuestas anti-prostanoide y anti-
inflamatoria), de prevenir la agregacin plaquetaria (efectos antitrombticos) y de
proteger a las lipoprotenas de baja densidad de la oxidacin (prevencin de la
placa de ateroma).
Los flavonoides son compuestos de bajo peso molecular que comparten un
esqueleto comn de difenilpiranos (C
6
-C
3
-C
6
), compuesto por dos anillos de fenilos
(A y B) ligados a travs de un anillo C de pirano (heterocclico). Los tomos de
carbono en los anillos C y A se numeran del 2 al 8, y los del anillo B desde el 2' al
6'. La actividad de los flavonoides como antioxidantes depende de las propiedades
redox de sus grupos hidroxifenlicos y de la relacin estructural entre las
diferentes partes de la estructura qumica.
Esta estructura bsica permite una multitud de patrones de sustitucin y
variaciones en el anillo C.
En funcin de sus caractersticas estructurales se pueden clasificar en:
1. Flavanos, como la catequina, con un grupo
-OH en posicin 3 del anillo C.
2. Flavonoles, representados por la quercitina,
-Que posee un grupo carbonilo en posicin 4 y un grupo OH en posicin 3
del anillo C.
3. Flavonas, como la diosmetina, que poseen un
-Grupo carbonilo en posicin 4 del anillo C y carecen del grupo hidroxilo en
posicin C3.
4. Antocianidinas, que tienen unido el grupo
-OH en posicin 3 pero adems poseen un doble enlace entre los carbonos
3 y 4 del anillo C.
Tres caractersticas estructurales son importantes para su funcin: a) La presencia
en el anillo B de la estructura catecol u O-dihidroxi; b) La presencia de un doble
enlace en posicin 2,3; c) La presencia de grupos hidroxilo en posicin 3 y 5. La
quercitina presenta las tres caractersticas, mientras que la catequina solo
presentala segunda y la diosmetina la primera.
A los flavonoles y las flavonas se unen azcares, preferentemente a la posicin C3
y con menor frecuencia al C7 del anillo A, de forma que estos compuestos se
encuentran comnmente como O-glicsidos, siendo la D-glucosa el residuo azcar
ms frecuente. Otros residuos de azcares son la D-galactosa, la L-ramnosa, la L-
arabinosa, la D-xilosa, as como el cido D-glucurnico.
La parte sin azcares de la molcula flavonoide se llama aglicona. Los glicsidos
son ms solubles en agua y menos reactivos frente a radicales libres.
II.-MATERIALES Y MTODOS
-Determinacin de hespersidos:
Se obtuvieron 5g de albedo de naranja (Citrus aurantium) como material
vegetal, luego se le agreg consecutivamente 20mL de alcohol etlico y 5mL
de NaOH 10%, finalmente se dej en reposar con agitaciones constantes
cada 2 horas.
Luego de las 48 horas se le aade HCl 10% hasta que el pH se encuentre
entre 4.5 y 5. Se procede a filtrar y repetir el procedimiento, obteniendo asi
el extracto alcohlico de naranja.
Para la determinacin cualitativa de la presencia de hespersidos se le
agregaron a tres tubos de ensayo los siguientes reactivos: H
2
SO
4 cc
, HCl
cc
,
HNO
3 cc
e NaOH, con 1mL de extracto.
-Determinacin de rutinsidos:
Para la obtencin del extracto acuoso se procedi a deshojar la Ruta
chalepensis, luego se trituro y con ello se agreg cantidad de agua
suficiente para la extraccin, llevando esto a decoccin por alrededor de 15
min. Luego de ello se procede a decantar el sobrenadante que ser usado
en las reacciones de identificacin.
Para el extracto alcohlico se repite el procedimiento anterior, pero usando
como solvente una mezcla hidroalcohlica y el tiempo de decoccin
alrededor de 10 min.
Para las reacciones de identificacin se us 1mL de extracto y se utilizaron
los siguientes reactivos: Wilson (cido brico + citrato de sodio), Shinoda
(Mg + HCl
cc
) y FeCl
3
.
-Determinacin de quercetsidos:
Para la obtencin del extracto se utiliz el mesfilo de Allium cepa, luego
se trituro y con ello se agreg cantidad de agua suficiente para la
extraccin, llevando esto a decoccin por alrededor de 15 min. Luego de
ello se procede a decantar el sobrenadante que ser usado en las
reacciones de identificacin.
Para las reacciones cualitativas se us 1mL de extracto acuoso y se
utilizaron los siguientes reactivos: Pb (CH
3
COO)
2
y FeCl
3
.
-Determinacin de antociansidos:
Se utilizaron 10g de coronta de Zea mays (maz morado) para el extracto,
luego se procede a triturar y con ello, se agreg 50mL de agua p, llevando
esto a decoccin por alrededor de 15 min. Luego de ello se procede a filtrar,
este filtrado ser usado en las reacciones de identificacin.
Para las reacciones cualitativas se us 1mL de extracto acuoso y se
utilizaron las propiedades de los antociansidos por ello se utilizaron
diferentes pH para observar las coloraciones en medio alcalino, neutro y
cido.








III.-RESULTADOS
a) HESPERSIDO (Flavanonas):
Las reacciones de reconocimiento cualitativo de los hespersidos presentes
en Citrus aurantium tuvieron resultados positivos para cada uno de los
reactivos como se presenta en la Tabla a.1.




Tabla a.1 Reacciones de reconocimiento de Hespersidos en
Citrus aurantumm
b) RUTINSIDO (Flavonol):

En el caso de los rutinsidos se observaron que a partir de los extractos
(acuoso e hidroalcohlico) de Ruta chalepensis L. los resultados de las
reacciones afirmaban la presencia de estos flavonsidos, sin mucha
diferencias entre ambas. Como se presenta en la Tabla b.1.




Tabla b.1 Reacciones de reconocimiento de Rutinsidos en Ruta
chalepensis L.
En el resultado de la cromatografa tambin se trabajaron dos extractos: un
acuoso y un hidroalcohlico los resultados de recorrido y de Rf se
presentan en la Tabla b.2.
Tabla b.2 Cromatografa en capa fina de Rutinsidos en Ruta
chalepensis L
Reactivo Resultado
H
2
SO
4 cc
Coloracin anaranjada
HCl
cc
Precipitado blanco
HNO
3 cc
Coloracin rojiza
NaOH Coloracin amarillo-naranja
Reactivo Resultado (Acuoso e
hidroalcohlico)
Wilson (cido Brico +
citrato de sodio)
Ligera fluorescencia de color
verde a luz UV.
Shinoda (Mg + HCl
CC
) Coloracin rosada magenta
FeCl
3
Coloracin negra
Extracto Recorrido Rf
Acuoso 2.5 cm 0.532
Hidroalcohlico 3.2 cm 0.681
c) QUERCETSIDO (Flavonol):

Las reacciones de reconocimiento para estos flavonsidos se trabajaron
con mesfilo entero y con mesfilo molido de Allium cepa, los resultados
se muestran en la Tabla c.1 y en la Tabla c.2.

Muestra: Mesfilo entero

Reactivos Resultados
Pb(CH
3
COO)
2
No presenta reaccin
FeCl
3
Coloracin verde
Tabla c.1 Reacciones de reconocimiento de Quercetsidos en
mesfilo entero en Allium cepa

Muestra: Mesfilo picado y molido

Reactivos Resultados
Pb(CH
3
COO)
2
Precipitado amarillo
FeCl
3
Coloracin verde
Tabla c.2 Reacciones de reconocimiento de Quercetsidos en
mesfilo molido en Allium cepa

d) ANTOCIANSIDO:
Las reacciones de reconocimiento de los antociansidos se trabajaron con
coronta de maz morado (Zea mays), los resultados se muestran en la Tabla
d.1. Para observacin de la variacin del color de acuerdo al pH se describe en
la Tabla d.2.
Reactivos Resultados
H
2
SO
4
Coloracin roja
NaOH 30% Coloracin parda
Tabla d.1 Reacciones de reconocimiento de Antociansidos en
coronta de Zea mays.

pH Resultados
Alcalino Coloracin parda a marrn
Neutro Coloracin morada
cido Coloracin de rosa a rojo.
Tabla d.2 Reacciones de coloracin de Antociansidos a
diferentes pH en coronta de Zea mays.

IV.- DISCUSIN
En el caso de la extraccin de Hespersidos se comprob la presencia de los
mismos, en Citrus aurantium todas las reacciones cualitativas arrojaron resultados
positivos confirmando lo reportado por Bota et al 1996, que indican la presencia
de naringina, y neohesperidina glicosilados en los frutos maduros de la naranja
(Citrus aurantium).
En el caso de la extraccin de rutinsidos se utilizaron dos tipos de extractos,
uno acuoso y uno alcohlico que no presentaron diferencias significativo al nivel
cualitativo (coloracin), pero dando respuestas positivas a la presencia de
flavonoles (rutinsidos), que concuerda con lo reportado por Torres L, Tapia M,
Aguilar A, 2005, que reportaron la presencia de camferol y su rutinsido,
rutinsido de quercetina, isoramnetina y su rutinsido, rutina, en las hojas de Ruta
chalepensis. Que pudo ser observada la presencia de Rutina mediante la
cromatografa en capa fina realizada en ambos extractos.
Para de la determinacin de quercetsidos en Allium cepa se tuvo que proceder a
la trituracin para poder observar la presencia de quercetsidos, que dio
reacciones cualitativas positivas al extracto de mesfilo de cebolla triturado segn
lo indica Castillo B, 2007 y Lachman J, et al 2003 la presencia de flavonoides
como el quercetina en mayor porcentaje alrededor (347mg/Kg), mientras que en
menor cantidad presenta camferol.
Por ltimo se determin la presencia de antociansidos en la coronta del maz
morado (Zea mays) las reacciones de identificacin de los mismos arrojo valores
positivos de carcter cualitativo, tal y como lo indica lo reportado por Gorriti A, et
al 2009 que reporta que las corontas de Zea mays L variedad de maz morado
presenta derivados mono y diglicosilados de cianidina, pelargonidina, peonidina
entre otros.

V.- CONCLUSIONES
Se demostr la presencia de flavonsidos en las distintas plantas tales
como Citrus aurantium, Ruta chalepensis, Allium cepa y Zea mays L.


Se comprob la caracterstica principal que presentan estas molculas
(flavonsidos) en modificarse al alterarse el pH del medio ya sea en
coloracin (Antociansidos) o por precipitacin (Hespersido).


VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. - Bota JM et al. Flavonoides presentes en los ctricos. Aspectos de su
importancia industrial. Fruticultura Profesional. N80, 1996, p (50-55).
2. - Torres L, Tapia M, Aguilar A. Plantas medicinales de la medicina
tradicional mexicana para tratar afecciones gastrointestinales. Estudio
etnobotnico, fitoqumico y farmacolgico. Editorial Universidad de Barcelona,
2005, p (119).
3. - Castillo B. Validacin farmacolgica de la actividad Sedante e Hipntica
de las infusiones acuosas de las hojas de Mentha x piperita L (menta), hojas
de Ternstroemia tepezapote S (trompillo), y bulbo de Allium cepa L (cebolla)
en ratones machos albinos. (Tesis de pregrado) 2007, Guatemala, p (11).
4. - Lachman J, et al. Total polyphenol and main flavonoid antioxidants in
different onion (Allium cepa L.) varieties. HORT. SCI. (PRAGUE), 30, 2003 (4):
142147.
5.- Gorriti A, et al 2009. Extraccin de antocianinas de las corontas de Zea
mays L. MAZ MORADO. Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74.
6.- Martnez-Flrez S, Gonzlez-Gallego J, Culebras JM y Tun M. Los
flavonoides: propiedades y acciones antioxidantes. Nutr. Hosp. (2002) XVII (6)
271-278











CUESTIONARIO

1. Explique las funciones de los flavonoides en las plantas como
molculas de seal de fitoalexinas, agentes detoxificantes,
estimulantes para la germinacin de esporas, filtros UV, mecanismo
de resistencia a sequias y agentes aleloqumicos.
Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas que
cumplen muchas funciones.
Los flavonoides son pigmentos vegetales ms importantes para la coloracin de
flores que producen la pigmentacin amarilla o roja/azul en los ptalos diseados
para atraer a los animales polinizadores.

En las plantas superiores, los flavonoides estn involucrados en la filtracin de los
rayos UV, la fijacin simbitica del nitrgeno y la pigmentacin floral.
Pueden actuar como un mensajero qumico o regulador fisiolgico, que tambin
pueden actuar como inhibidores del ciclo celular.

Los flavonoides secretadas por la raz de la planta husped Rhizobia ayuda en la
etapa de la infeccin de su relacin simbitica con leguminosas como los
guisantes, las habas, trbol, y la soja. Rizobios que viven en el suelo son capaces
de detectar los flavonoides y esto desencadena la secrecin de factores de
inclinacin de cabeza, que a su vez son reconocidas por la planta husped y
puede conducir a la deformacin de la raz de pelo y de varias respuestas
celulares, tales como los flujos de iones y la formacin de un ndulo de raz.
Adems, algunos flavonoides tienen actividad inhibidora frente a organismos que
causan enfermedades de plantas ejemplo, Fusarium oxysporum.






2. Describa los principales mecanismos de accin que expliquen la
actividad anticancergena de los flavonoides.
Los flavonoides interfieren in vitro y por distintos mecanismos en el proceso
oncognico, lo que los hace posibles agentes de utilidad en las primeras fases del
cncer o en la inhibicin de las etapas posteriores de progresin o invasin.

Fig. 1. Posibles lugares de interaccin de los flavonoides con el proceso
carcinognico (indicados con asteriscos).



3. Describa los principales mecanismos que expliquen la actividad
antinflamatoria de flavonoides.
Tienen actividad antiinflamatoria debido a que ejercen accin inhibitoria en
enzimas que actan de manera importante sobre la va inflamatoria de las
prostaglandinas. Entre estas estn las eznimas inhibidas COX-1, COX-2
(ciclooxigenasas), entre otras.
Como derivados fenlicos que son, actan como agentes quelantes de metales y
captadores de radicales libres, pueden regular la actividad de las clulas
implicadas en la inflamacin como mastocitos, macrfagos, linfocitos y neutrfilos.
Por ejemplo, algunos flavonoides inhiben la liberacin de histamina de mastocitos
y otros inhiben la proliferacin de los linfocitos T.




4. Proponga una metodologa de trabajo para la extraccin y
cuantificacin de flavonoides tipo isoflavonas. Explique el mecanismo
del pH sobre las antocianinas del maz morado.
4. a Extraccin de isoflavona
Para el caso de la harina de soja, segn lo reporta Comba N:
Pesar 2 g de muestra (sin tratamiento trmico y con calentamiento a 130C) y
colocar en frascos con tapa rosca de 150 mL, como solvente de extraccin se
emplea una mezcla metanol-agua (8:2).
Se procede a la extraccin por agitacin constante a temperatura ambiente
durante 2 horas.
Posteriormente la muestra se filtra al vaco, el extracto se transfiere a un matraz
aforado de 25 mL.
La cuantificacin de IF se realiza por espectroscopia de absorcin UV-Visible, para
lo cual se realiz una dilucin (1:50) a partir del extracto concentrado, se registro
la absorbancia a 258 nm contra blanco de metanol-agua. Los resultados de IF
totales se expresaron como malonildadzina con
258nm
= 26830, por ser la IF
mayoritaria en harina de soja.
4. b Mecanismo del pH sobre las antocianinas.
Debido a la deficiencia electrnica del catin flavilio, ya que a pH cido adquiere
una estructura estable del catin flavilio, por lo general color rojo, cuando se
incrementa el pH, la estructura electrnica se modifica hasta llegar a la base
quinoidal que se percibe con la coloracin azul; la hidratacin del catin flavilio
produce la base carbinol que permanece incloro.