REVISTA DEL LABORATORIO TECNOLGICO DEL URUGUAY

No. 7 - 2012 - INNOTEC - 55

Biosntesis de dextranos de alto peso molecular

mediante la inoculacin con Leuconostoc
mesenteroides, var. mesenteroides (ATCC 10830)
de jugos residuales de la agroindustria de la pia:
sntesis y caracterizacin de hierro-dextranos
Biosynthesis of high molecular weight dextrans by inoculation
with Leuconostoc mesenteroides, var. mesenteroides (ATCC
10830) residual juice from pineapple agroindustry: synthesis and
characterization of iron-dextrans

Recibido: 13/6/2012 - Aprobado: 20/11/2012

Resumen

En este trabajo se muestran los estudios realizados para obtener dextranos a partir de desechos de la agroindustria de
pia. La fermentacin se llev a cabo en un biorreactor (10 L), se inocul con un cultivo de Leuconostoc mesenteroides,
var. mesenteroides (ATCC 10830). Se centrifug y se precipit y purific con etanol. Fue caracterizado por medio de
viscosidad, peso molecular y grupos funcionales por espectroscopa infrarroja. Este dextrano fue tratado con el fin de
obtener hierro-dextranos.
Palabras clave: Polmeros, dextrana, hierro-dextrana.

Abstract

In this work we report studies for dextrans from pineapple agroindustrial-wastes. Fermentation was carried out in a
bioreactor (10 L) where the juice was inoculated with a culture of Leuconostoc mesenteroides, var. mesenteroides (ATCC
10830). It was centrifuged, and precipitated and purified with ethanol. It was characterized by viscosity, molecular
weight and functional groups by infrared spectroscopy. This dextran was treated to obtain iron-dextran.
Keywords: Polymer, dextran, iron-dextran.

Introduccin
Dextrano es el nombre que colectivamente se le da a un gran
grupo de exopolisacridos bacterianos. Qumicamente son -Dglucanos con predominio de enlaces glucosdicos 1-6 (Figura 1). La
estructura, el peso molecular y otras propiedades de los dextranos
son muy especficas de acuerdo al microorganismo utilizado para su
obtencin (Monsan, 1981).
Los dextranos son producidos por accin de la enzima
dextransacarasa, que acta sobre la sacarosa generando glucosa, y que
se enlaza mediante radicales libres con la consiguiente liberacin de
la fructosa. Microbiolgicamente son producidos por bacterias de los
gneros Leuconostoc, Streptococcus y Lactobacillus y por algunos
hongos del gnero Penicillium (Barker y Ajongwen, 1990).
Este tipo de material es ampliamente usado en el tratamiento
clnico-teraputico de animales y humanos y en la industria alimenticia
y farmacutica. Los altos precios en los mercados internacionales
convierten a estos productos en una lnea importante de desarrollo,

sobre todo si la materia prima a utilizar es un desecho (La et al., 1996).

En los ltimos aos la industrializacin de la biomasa genera gran
cantidad de desechos (Tabla 1), los cuales son dispuestos en rellenos
sanitarios, zanjas o en las riveras de los ros, convirtindose de esta
manera en una fuente de contaminacin ambiental. Sin embargo, estos
desechos muestran un alto potencial para ser utilizados como materia
prima en otros procesos industriales (Vega, 1998).
Dentro de los desechos agroindustriales se encuentran los
originados por el procesamiento de la pia, cuyo cultivo y exportacin
como producto no tradicional ha venido en aumento en los ltimos
aos (Figura 2). Para 2010 y 2011, el crecimiento ha sido exponencial.
Las exportaciones de pia aumentaron un 4.9 % para abril de 2011 en
comparacin con el mismo perodo de 2010.
En Costa Rica la industrializacin de la pia genera un 50 % de
desechos; el corazn y la cscara representan el 30 %, equivalente
a una cantidad cercana a las 3.000 toneladas anuales (Vega, 1997,
1998; Bell, 1995). En la Tabla 2 se presentan algunas estadsticas
relacionadas con la produccin de desechos.

BIOTECNOLOGA

Vega Baudrit, Jos Roberto (1, 2), Sibaja Ballestero, Mara del Rosario (1), Lopretti, Mary (3)
(1)
Escuela de Qumica, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica - (2) Laboratorio Nacional de Nanotecnologa LANOTEC-CeNAT, Costa Rica - (2) Laboratorio de Bioqumica y Biotecnologa, Facultad de Ciencias, UdelaR, Uruguay
Contacto: jvegab@hotmail.com, maria.sibaja@gmail.com

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Figura 1. Molcula de dextrano.

Figura 2. Volmenes de exportacin de pia entre 2000 y 2004.

Fuente: CENPRO.
Porcentaje

Tipo de desecho

BIOTECNOLOGA

Exportacin

90%
35-50%

13,6

Corona

12%

0,4

Corazn

9%

86,0

Cscaras

32%

Porcentaje ( 0.5)

Ordinario
Agroindustriales

7.000 Ha
240.000 T.M.

Aprovechamiento del fruto

Tipo de desecho

Peligroso

rea sembrada
Produccin anual

Tabla 1. Produccin de desechos en Costa Rica (Vega, 1998).

Tabla 2. Estadsticas relacionadas con la industrializacin de la pia

(1994). Fuente: CENPRO.

En el caso de las cscaras de pia, se ha aprovechado su parte

fibrosa en la obtencin de derivados lignocelulsicos (Bell, 1995;
Lopretti, 2002) y el lquido resultante queda como un desecho que ha
sido poco evaluado. Dicho jugo presenta un contenido de sacarosa de
aproximadamente 5 %, lo que lo convierte en un sustrato adecuado para
la obtencin de dextranos utilizando una cepa del gnero Leuconostoc.
El objetivo de este trabajo es la produccin biotecnolgica de
dextranos de alto peso molecular, utilizando como sustrato la sacarosa
presente en el jugo de las cscaras de pia y como inculo la cepa
Leuconostoc mesenteroides, var. mesenteroides ATCC 10830 (NRRL
B-512F).

cenizas por ASTM D1102- 84 y pH por medio de un peachmetro

calibrado.

Anlisis microbiolgicos
La caracterizacin microbiolgica del jugo de las cscaras de pia
fresco y sin recibir tratamiento previo incluy la determinacin del
ndice de coliformes fecales y totales, con la tcnica de tubos mltiples
(Bell y Carrera, 1992), conteo total de aerobios y mesfilos, utilizando
las tcnicas por vaciado y rayado, y conteo de hongos y levaduras
(Bell, 1970).

Microorganismo empleado

Materiales y Mtodos
Sustrato
El jugo se obtuvo del prensado de los desechos del procesamiento
de la pia (Ananas comusus), en una de las plantas procesadoras de
la fruta. El jugo fue pretratado con hidrxido de sodio 1N, hasta un
pH de 5,5 y se pasteuriz calentndolo a 61,5 C por 3 minutos con
enfriamiento hasta la temperatura inicial. Este proceso se realiz tres
veces consecutivas.

Anlisis qumicos del sustrato

Se utiliz la bacteria
mesenteroides ATCC 10830.

Leuconostoc

mesenteroides,

var.

Inculo
El jugo de pia fue inoculado con un cultivo de Leuconostoc
mesenteroides incubado durante 18 horas a 29 C en un medio de
cultivo artificial, el cual contiene para 1 L de agua: 20 g de triptona,
4 g de cloruro de sodio, 1,5 g de acetato de sodio, 0,5 g de cido
ascrbico, elementos traza (Ca, Mn, Fe, Mg), 15 g de sacarosa y 8,76 g
de extracto de levadura y 20 g de agar. El pH del medio se ajust a
5,5 con cido clorhdrico (Vega, 1998) antes de autoclavarse (121 C,
20 minutos).

El porcentaje de sacarosa y otros azcares fue determinado

mediante HPLC (Shimadzu 10A, columna y precolumna de aminos,
Obtencin y purificacin de dextranos
fase mvil acetonitrilo/agua en una relacin 80/20, a 30 C, flujo 2
mL/min, detector de ndice de refraccin). La determinacin de cidos
El jugo del desecho de pia inoculado se incub por 18 horas a 29 C,
totales se realiz por titulacin con hidrxido de sodio 0.100 N, los sin agitacin. Al finalizar el perodo de incubacin se centrifug por
metales traza por absorcin atmica, protenas por el mtodo de Biuret, 30 minutos a 5000 rpm, para eliminar las clulas. Al sobrenadante se

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Caracterizacin de dextranos
Viscosidad y peso molecular viscosimtrico
Los anlisis se realizaron segn el ASTM D445 y D2515 (5) con
viscosmetros Cannon-Fenske, en un bao de agua a una temperatura
de 40 C.
Grupos funcionales
Se utiliz un equipo de Espectroscopa de infrarrojo (FTIR)
PARAGON 1000 PERKIN ELMER.
Hidrlisis del Dextrano
Lopretti (2002). Se prepar una disolucin del dextrano al 6 %
P/V en agua destilada. Se le aadi HCl concentrado hasta alcanzar
una concentracin de 0.1 N. Se calent entre 80-90 C con agitacin.
Al inicio de la hidrlisis se tom una alcuota de la disolucin. El
proceso se repite cada cierto tiempo, se coloca en un baln aforado y
se lleva a un pH de 7 con NaOH. Se le determina la viscosidad.

Resultados y Discusin
Con respecto a la caracterizacin del jugo de pia, se procedi a
hacer el anlisis por separado del jugo extrado de las cscaras de la
pia y del corazn del fruto. Como los resultados obtenidos no indican
diferencias apreciables en cuanto al pH y al contenido de sacarosa, en
posteriores usos se utilizan indistintamente, sin separar los residuos
(Tabla 3).
La seleccin del sustrato se realiz con base en los requerimientos
de la bacteria Leuconostoc mesenteroides, la cual necesita para su
reproduccin un pH de 5,5, 20-30 C y 2 % de sacarosa. El contenido
de sacarosa del jugo de pia posterior a la esterilizacin queda en 1,4
%. En la Tabla 4 se presentan los resultados obtenidos con respecto a
algunos elementos traza.
El anlisis de sacarosa al final de la obtencin de dextrano fue de
0,13 %, lo que demuestra que durante el proceso de fermentacin la
mayora de la sacarosa presente fue consumida por el microorganismo
y parte de ella transformada en dextranos y fructuosa.
El rendimiento de dextranos obtenido fue de 6,3 g/l de jugo de las
cscaras de pia. Este rendimiento es superior si se compara con el
obtenido utilizando otros sustratos (Lopretti, 2002).
En la Figura 3 se observan los resultados obtenidos en la
determinacin de la curva de precipitacin para la purificacin del
dextrano. Se comprob que la cantidad necesaria para precipitar la
mxima cantidad de un dextrano en medio acuoso utilizando alcohol
95 % corresponde a una relacin de 1:1 agua-etanol.

Sntesis y caracterizacin de Hierro-dextrano

(Bell, 1995). La metodologa abarca tres etapas. En la primera
ocurre la hidrlisis del dextrano tcnico en solucin al 10 % de cido
clorhdrico (32-37 %). La hidrlisis se regula por medio de anlisis de
viscosidad intrnseca hasta valor 0,05-0,1 y se detiene neutralizando y
enfriando la mezcla de reaccin. Finalmente se filtra utilizando ayuda
filtrante. Este proceso de hidrlisis permite obtener una solucin de
dextrano de bajo peso molecular, homogneo y adecuado para ser
acomplejado sin dar lugar a dextranos libres de alto peso molecular.
En la segunda etapa se realiza la sntesis del hierro-dextrano,
partiendo de la reaccin lenta entre el FeCl3 0,5-2 M y el Na2CO3 a 1020 %. Se ajusta pH en 8-12 con hidrxido sdico al 20 %. La solucin
se estabiliza con calor. Se enfra y se ajusta el pH con HCl 1:1 hasta
valores entre 4-7. La ejecucin de esta etapa, segn se seala, reduce
el contenido de hierro libre que afecta la estabilidad del complejo.
En la tercera etapa se filtra el producto empleando ayuda filtrante
y se aade propil y metil parabenos en relacin 1:4 como preservantes.
Se caracteriza su contenido de hierro y su pH.
Figura 3. Resultados obtenidos en la determinacin de la curva de
precipitacin para la purificacin del dextrano.

ph ( 0.05)

Acidez* ( 0.05)

Sacarosa ( 0.05%)

Cenizas ( 0.05%)

Protena ( 0.1 mg/mL)

Cscara de pia

3,70

70,56

4,16

0,43

10,4

Corazn de pina

3,90

47,62

5,89

0,26

4,4

Desecho

Tabla 3. Caracterizacin de los desechos de pia sin tratar. *mL de NaOH 0.1 N/100 g de jugo

Elemento
%

Ca

Mg

0,015 0,001

0,009 0,001

Tabla 4. Determinacin de elementos traza de los desechos de pia.

Fe
0,0004 0,0001

Mn
0,0011 0,0001

BIOTECNOLOGA

le adicion etanol al 95 % hasta una proporcin 1 a 1 en volumen. Se

centrifug a 5000 rpm por 30 minutos (Vega, 1998).
El sobrenadante se descart y al precipitado blanco se le agreg
agua hasta disolverlo, para iniciar el proceso de purificacin. Se
centrifuga de nuevo en las mismas condiciones y al sobrenadante se
le agrega etanol (1/1 volumen). Se realiz la curva de precipitacin
para comprobar esta relacin 1:1. El proceso se repite dos veces ms.
El dextrano obtenido se sec, se determin el rendimiento de
produccin, su viscosidad, el peso molecular por viscosidad y grupos
funcionales por espectroscopa de infrarrojo.

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BIOTECNOLOGA

Con respecto a los resultados de la viscosidad relativa (Tabla 5),

dextransucrase using nonaerated fermentation techniques. En:
la diferencia observada entre el resultado terico del peso molecular
Biotechnol. Bioeng. 1990, 37:703-707
y el obtenido experimentalmente corresponde al ancho de la curva BELL GARCA, Antonio. Produccin del complejo de dextrana de
de peso molecular, es decir, parte de la viscosidad depende de las
hierro de uso antianmico. Cuba. 22490. A61K. 1998-12-30.
fracciones de menor peso molecular, de un material monodisperso. BELL, A.; CARRERA, E. Optimizacin de la hidrlisis qumica de
El resultado corresponde, por lo tanto, al mximo pico observado. Se
la Dextrana tcnica cubana para la obtencin de dextrana con bajo
calcul que el peso molecular del dextranos de pia es cercano a 1
peso molecular. En: Revista ICIDCA. 1992, XXVI( 2):[s.p.]
milln de Daltons.
BELL, A.; MALEK, J. Boletn sobre los derivados de la caa de
azcar. 1970, 7(2):[s.p.]

CENPRO. Informacin consultada en el Centro para la Promocin
Resultado MW
Muestra
Viscosidad relativa
(Daltons)
de las Exportaciones y de las Inversiones, San Jos, Costa Rica.

GONZLEZ, E.; MONCTEZUMA, A. Biotechnology for the
960 000.00
6,4
Dextrano de pia
processing of pineapple waste. En: Industry and Environment. 1985,
35 000
1,6
Patrn de 40000
8(4):20.
60 000
1,7
Patrn de 70000
LA TORRES, L.; SIBAJA, M.; MOYA, M.; LUQUE, J.;
Tabla 5. Resultados obtenidos en la determinacin de la
LOPRETTI, M. Conversin del jugo de cscaras de pia a
viscosidad y de los pesos moleculares viscosimtricos de los
dextranos.
biopolmeros. [s.l.]: [s.n.], 1996.
LOPRETTI, M. Produccin simultnea de dextrano y fructosa a
partir de desechos agroindustriales en Iberoamrica, aspectos
El espectro de infrarrojo mostr los picos caractersticos de un
cientficos, tcnicos y econmicos. [s.l]: CYTED, 2002.
material celulsico a 3300 y 2900 cm-1, correspondientes a los grupos
OH. Con los resultados observados en los espectros de infrarrojo, se MONSAN, P. On the production of dextran by free and immobilized
sucrosa. En: Biotechnol. Bioeng. 1981, 23:2027-2037.
concluye que el material producido corresponde al dextrano.
Finalmente, el hierro dextrano sintetizado present un color rojo VEGA, J. Informe anual produccin de dextranos de desechos
agroindustriales. Heredia: POLIUNA, 1997.
oscuro, con un pH cercano a 5, un contenido de 10 % p/v de hierro,
VEGA, J. Informe del Curso Internacional Obtencin de Dextranos
muy similar al descrito en la literatura (Bell, 1995; Bell, 1992).
a partir de agua de Coco. [s.l.]: [s.n.], 1998.

Conclusiones
Se concluye que la metodologa usada para la obtencin de
dextranos y de hierro dextranos a partir de la sacarosa presente en los
desechos de cscara de pia da buenos resultados, incluso superiores
con respecto a los mencionados en la literatura.
Adems, eventualmente se aprovecharan materiales considerados
como subproductos de procesos industriales, econmicamente
subutilizados, y que producen alta contaminacin ambiental para la
obtencin de materiales de mayor valor agregado.
De esta manera se pretende que con el aporte de los centros
de investigacin, las compaas industrializadoras de esta fruta
disminuyan el porcentaje de sus desechos y, por ende, su impacto
negativo en el medio ambiente, y que a la vez se beneficien con
una entrada extra con la obtencin de productos de un mayor valor
agregado que el de los desechos. Se combina de esta manera un
mejoramiento en la calidad de vida del costarricense y un incremento
en las ganancias de los productores de la fruta.

Referencias
ASTM INTERNATIONAL (United States). D1102: Standard test
method for ash in wood. Conshohocken: ASTM, 2007.
ASTM INTERNATIONAL (United States). D445: Standard test
method for kinematic viscosity of transparent and opaque liquids
(and calculation of dynamic viscosity). Conshohocken: ASTM,
2012.
ASTM INTERNATIONAL (United States). D2515: Standard
specification for kinematic glass viscosity. Conshohocken: ASTM,
1996.
BARKER, P.E.; AJONGWEN, N.J. The productions of the enzyme