PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA,

CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO

DESHIDROGENASA EN TEJIDOS DE RATA

INTEGRANTES:

CASTRO BUITRN, DIEGO ARMANDO

DAZ MINCHAN, ROBERTO ANTONIO
FERNNDEZ REBAZA, GUSTAVO ADOLFO
FLORES CHOQUE, POOL HAROL
GARAMENDEZ CASTILLO, EDSON BRUNO

PROFESORA RESPONSABLE:
Mg. YADIRA FERNNDEZ JER
MESA: N 1 DA; LUNES

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DESHIDROGENASA EN TEJIDOS DE RATA
INTRODUCCIN

La enzima lactato deshidrogenasa es una enzima NAD dependiente que se encuentra

ampliamente distribuida en tejidos animales, vegetales y en microorganismos. Es una
enzima citoplasmtica que se encuentra en forma soluble o ligada a membrana.
Las diferentes isoenzimas se encuentran en distintas proporciones en cada tejido, lo cual
puede dar la idea de la funcionalidad de cada isoenzima, atendiendo a las funciones
metablicas que intervienen, por tanto juega un papel importante en el metabolismo de
glcidos, interviniendo en el ltimo paso de la glucolisis anaerbica y en primer paso hacia
la gluconeognesis a partir del lactato, por eso identificaremos la actividad de la enzima
lactato deshidrogenasa, en diferentes tejidos animales.
Por otra parte el citocromo oxidasa cataliza la oxidacin consecutiva de cuatro citocromos c
con la concomitante reduccin de un oxigeno molecular.
El complejo tiene un regin hidroflica que sobresale al espacio intermembrana que posee
el sitio de unin del citocromo c. las subunidades I y II de este complejo contienen cuatro
centros redox activos: dos hemos tipo a (a y a3) y dos tomos de Cobre (a y b) que alternan
entre los estados de oxidacin +1 y +2.
La variacin de potenciales de reduccin producida al paso de un par de electrones por los
complejos I, III y IV, en cada caso, es suficiente para sintetizar una molcula de ATP, en la
prctica b) identificaremos la presencia de citocromo y el efecto de inhibidores a su
actividad.
La succinato deshidrogenasa cataliza la reaccin donde el succinato se oxida a fumarato,
esta es una enzima compleja que se halla estrechamente unida a la membrana interna
mitocondrial. Esta enzima es un ejemplo tpico de flavoproteinas en la que los electrones y
protones se transfieren desde el sustrato, el succinato, a travs del FAD unido
covalentemente y los centros ferrosulfurados en los que el hierro no hemo experimenta
oxidacin y reduccin. Los electrones se transfieren finalmente al coenzima Q para, a
continuacin, ser transportados por la cadena de transferencia electrnica, por tanto, c)
identificaremos la actividad de la enzima succnico deshidrogenasa, mediante el uso de
aceptores electrnicos coloreados y d) identificaremos el efecto inhibitorio de algunos
sustancias sobre la cadena transportadora de electrones.

MARCO TERICO
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Lactato deshidrogenasa
La enzima lactato deshidrogenasa (LDH) es una oxidorreductasa que oxida el lactato a
piruvato. Con ello se transfiere dos electrones al cosustrato nicotinamida adenina
dinucleotido (NAD+), reducindolo a NADH. La reaccin transcurre primero en la
direccin contraria; el piruvato como producto final de la glucolisis se reduce a lactato en
condiciones anaerbicas, de modo que se obtenga el NAD+ necesario para degradar la
glucosa. La enzima cataliza de igual manera la reaccin directa y la inversa; simplemente
acelera la obtencin del equilibrio de la reaccin sin influir en la posicin de este equilibrio.
El lactato se une a la enzima solo en presencia del cosustrato NAD+. Existe, por lo tanto,
una secuencia ordenada de unin: primero une el NAD+ y despus el lactato en el centro
activo. Un desplazamiento en la cadena peptdica de la LDH de una longitud de
aproximadamente 13 aminocidos experimenta, tras la unin de los sustratos, un amplio
cambio de conformacin cerrando el centro activo; muchas enzimas cuentan con una
puerta trampilla como esta. Esto excluye el agua, con lo que potencia las interacciones
electrostticas en el centro activo y mantiene al agua lejos de los reactantes. Adems, el
hecho de excluir el centro activo permite a la enzima abrazar por completo el estado de
transicin de la reaccin que est catalizando.
El centro activo une lactato mediante un puente salino entre la cadena lateral de arginina171 (enzima) y el grupo carboxilo (sustrato), as como a travs de un puente de hidrogeno
entre histidina-195 y el grupo hidroxilo del lactato, y sita as el sustrato de manera ptima
con respecto al cosustrato NAD+. La histidina-195 acta de esta forma como catalizador
bsico: en el estado de transicin extrae el protn del grupo hidroxilo y facilita con ello la
oxidacin al grupo ceto. La carga negativa del resultante de la desprotonacin en el oxgeno
permite la formacin de un puente salino adicional enlazado a otro resto de arginina (Arg109). Aqu vemos por primera vez de forma concreta que la unin del estado de transicin
(tres enlaces) es ms potente en comparacin con el asico (dos enlaces).
Con la transferencia de protones a His-195 y la transferencia de hidruro (H-) del lactato al
NAD+ Se completa la transformacin a piruvato. Tras la apertura del centro activo y la
cesin del piruvato y del NADH, la enzima se encuentra de nuevo en la posicin inicial,
lista para la siguiente catlisis. El protn que ha surgido en el proceso de equilibrio de la
reaccin esta primero con la His-195 y despus se disocia con la unin de la siguiente
molcula de lactato.1
Citocromo oxidasa
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La cadena respiratoria o de transporte de electrones es un serie de cuatro complejos
proteicos principales, asociados a otros componentes, localizados en el interior de la
mitocondria. Una propiedad fundamental de los componentes de la cadena respiratoria es
que cada uno de ellos puede someterse a reduccin y oxidacin reversible. Estos
componentes funcionan en un orden determinado (es decir en cadena). Esta cadena toma
electrones del NADH2 y del FADH2, y lo entrega en forma secuencial a cada componente
en una serie de reducciones y oxidaciones sucesivas. Por ltimo, el componente final de la
cadena de transporte de electrones, conocido como Complejo IV o Citocromo oxidasa,
entrega los electrones (junto con los protones acompaantes [iones H+]) al oxgeno, con
lo que se produce agua. De esta manera, el O 2 acta como el aceptor final de los electrones.
El efecto neto del funcionamiento de la cadena respiratoria es la toma de electrones de las
molculas de NADH2 y FADH2 y su entrega al O2.
El papel que desempea el O2 es fundamental. Los componentes de la cadena de transporte
de electrones, igual que el NAD y el FAD, estn presentes en cantidades limitadas en una
clula y, por lo tanto, no pueden actuar como aceptores terminales de electrones. En
contraste, el O2 es aportado a la clula en forma continua y el producto de esta reduccin, el
agua, puede liberarse al ambiente y as transportar electrones fuera de la clula. Una
persona adulta produce ms de 1,5 litros de agua por da en el proceso de descarga de
electrones de la clula.
La cadena respiratoria no es solo un mecanismo de oxidacin del NADH2 y del FADH2.
Tambin tiene una participacin fundamental en la transferencia de energa desde los
enlaces de las molculas de los alimentos hacia el ATP. El oxgeno molecular posee mucha
mayor afinidad por los electrones que las coenzimas NAD y FAD, y hay gran disminucin
de la energa libre ya que los electrones tomados en un principio de las molculas de
alimentos son transportados a travs de la cadena respiratoria. Una parte considerable de
esta energa es capturada en los enlaces de ATP. El proceso de formacin de ATP a partir de
ADP con utilizacin de la energa liberada mediante el transporte de electrones a travs de
la cadena respiratoria se denomina fosforilacin oxidativa. En la cadena respiratoria
participan cuatro complejos proteicos, de los cuales tres (los complejos I, III Y IV)
participan en la sntesis de ATP. Cada complejo produce un ATP a partir de un ADP por
cada par de electrones transportado. Por lo tanto, en principio, por cada par de electrones
que atraviesa la cadena respiratoria en toda su longitud desde el NADH2 hasta el O 2 es
posible producir tres molculas de ATP.
Un mtodo frecuente de expresar la obtencin de ATP mediante la fosforilacion oxidativa
es como una relacin P/O (P=fosfato, O= oxigeno), que se define como el nmero de
molculas de ATP formadas por cada tomo de oxigeno reducido a agua. Por ejemplo, si se
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transfiere un par de electrones de una molcula de NADH2 a un tomo de O 2 y se forma
tres molculas de ATP, la relacin P/O es igual a tres.2
Succinato deshidrogenasa
La succinato deshidrogenasa cataliza la deshidrogenacin esteroespecfica de succinato a
fumarato. Esta enzima es inhibida fuertemente por malonato, un anlogo estructural del
succinato y un ejemplo clsico de un inhibidor competitivo. Cuando Krebs formulo su
teora del ciclo del cido ctrico, la inhibicin de la respiracin celular por malonato
proporciono una de las claves de que el succinato cumple un papel cataltico en la
oxidacin de sustratos y que no es solo otro sustrato.
La succinato deshidrogenasa contiene un grupo prosttico FAD que se une en forma
covalente a la enzima por medio de un residuo His. En general, el FAD funciona para
oxidar bioqumicamente alcanos (como succinato) a alquenos (como fumarato), mientras
que NAD+ participa en la oxidacin ms exergnica de alcoholes a aldehdos o cetonas. La
deshidrogenacin del succinato produce FADH2, que debe reoxidarse antes que la
succianato deshidrogenasa puede emprender otro ciclo cataltico. La reoxidacin de
FADH2 se produce cuando sus electrones se pasan a la cadena transportadora de electrones
mitocondrial. La succinato deshidrogenasa es la nica enzima del ciclo del cido ctrico
unida a la membrana (las otras son componentes de la matriz mitocondrial), as se ubica
para encauzar los electrones directamente dentro de la maquinaria de transporte electrnico
de la membrana mitocondrial.3

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

I.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
Tubos de ensayo
Beaker de 500 ml
Homogenizador
Pipeta de 5 ml
Pipeta de 2 ml
Pipeta de Pasteur
Propipeta
Micropipeta 0,1-500 l
Gradilla

CANTIDAD
15
1
1
4
5
4
1
1
1

REACTIVOS
KCl 0.154 M
Lactato de Sodio 0.1 M
Solucin de azul de metileno 0.01 %
Buffer fosfato 0.1 M, pH 7.4
Solucin de Malonato de sodio 1%
Solucin de cianuro de potasio 0.05 M
Solucin de p-fenilendiamina 1%
Solucin de succinato de sodio 1 %
Aceite mineral
Agua destilada
Tejido heptico fresco
Tejido cardiaco fresco
Bao de hielo

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II.

PROCEDIMIENTO
1. Extraccin y
preparacin de las
enzimas y coenzimas
Obtener

Coraz

Hga

Triturar y cortar en pedazos en un

mortero de porcelana

Homogenizar agregando 10
volmenes de KCl 0.154 M frio
Agitar 15
minutos
Tamizar utilizando una gasa fina
(eliminando el lquido)
Llevarlo a una
licuadora
Agregar 5 volmenes de buffer
fosfato 0.1 M, pH 7.4 frio
Licuar 5
minutos
Guardar la solucin en un bao

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2. Reaccin catalizada
por la lactato
deshidrogenasa

Preparar una batera de 4

tubos

Tubo

Tubo

Tubo

Tubo

Agregar 1 mL de Lactato de Sodio

Adicionar 1 mL de Azul de

2 mL

2 mL

2 mL

Agregar 0.5 mL de
Homogenizado de
hgado

Agregar 0.5 mL de
Homogenizado de
corazn

Mezclar y agregar 1 mL de aceite

Dejar en reposo por 30 minutos y

Finalmen
te
Agitar vigorosamente y
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2 mL

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3. Reaccin catalizada
por la citocromo oxidasa

Preparar una batera de 4

tubos

Tubo

Tubo

Tubo

Tubo

Agregar 1 mL de Homogenizado de

0 mL

1 mL

1 mL

Agregar 0.5
mL de
Cianuro de
sodio 0.1 M

1 mL

Agregar 0.5
mL de
Malonato de
sodio 0.1 M

Agregar 1 mL de solucin de P-

Agregar Buffer Fosfato 0.1 M

1.5

0.5

0 mL

0 mL

Finalmen
te
Agitar

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Dejar en reposo por 30 minutos y

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4. Reaccin catalizada por
la succnico
deshidrogenasa
Preparar una batera de 7

Reactivos

Azul de metileno
Buffer fosfato 0.1 M,
pH 7.4
Succinato de sodio
0.1 M
Agua bidestilada

0.5
mL
0.5
mL
0.2
mL
-

0.5
mL
0.5
mL
0.2
mL
-

0.5
mL
0.5
mL
-

0.5
mL
0.5
Dejar
mL
-

Malonato de sodio

0.5
0.5
mL
mL
0.5
0.5
en
mLreposo
mLpor 30 minutos y
0.2
Finalmen
mL
te
0.2
AgitarmL
vigorosamente y
-

Cianuro de sodio 0.1

M
Ferricianuro de
potasio 0.1 M
Homogenizado de
hgado

0.3
mL
-

0.2
mL
0.3
mL
-

0.5
mL
0.5
mL
0.2
mL
-

0.5
mL

0.5
mL

0.2
mL
-

0.3
mL
-

0.3
mL
-

0.5
mL

0.5
mL

0.5
mL

0.3
mL
0.5
mL

0.3
mL
0.5
mL

V. RESULTADOS
Mezclar y agregar 1 mL de aceite

1. Seguimiento de la reaccin catalizada por la lactato deshidrogenasa.

Se obtuvo los siguientes resultados:
-

Tubos N 1 y 2: Se observa un mismo color (verdoso) con diferentes intensidades

(el tubo N 2 es ms intenso que el N 1). Esto es debido a que en el tubo N 1 hay
mayor cantidad de substrato, por lo tanto la lactato deshidrogenasa producir mayor
cantidad de Piruvato, lo cual ocasionar que en el tubo N 1 haya una mayor
concentracin de NADH, adems de los ya presente en el homogenizado, luego
estos donaran sus electrones a la cadena transportadora de electrones formando una
mayor cantidad de azul de metileno reducido.

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-

Tubo N 3 y 4: Se observa un mismo color (azulado) con diferentes intensidades

(el tubo N 4 es ms intenso que el N 3), Esto debido a que en el tubo N 1 hay
mayor cantidad de substrato, por lo tanto suceder lo mismo que en los tubos 1 y 2,
con la diferencia que en estos tubos se tiene homogenizado de corazn, y este tiene
menor concentracin de Lactato deshidrogenasa y NADH.

Tubo N 1

Tubo N 2

Tubo N 3

Tubo N 4

Figura N

Figura N 1: Se muestra los resultados del Seguimiento de la reaccin catalizada por la

lactato deshidrogenasa, cada tubo contiene diferentes reactivos: 1) Lactato de sodio 0.1 M,
sol. de azul de metileno y homogenizado de hgado. 2) sol. de azul de metileno y
homogenizado de hgado. 3) Lactato de sodio 0.1 M, sol. de azul de metileno y
homogenizado de corazn. 4) sol. de azul de metileno y homogenizado de corazn.
2. Seguimiento de la reaccin catalizada por la citocromo oxidasa
Se observan los siguientes resultados:
-

Tubo N 1: Se onserva que no hay reaccin, tan solo se muestra el color inicial de la
solucin de P- fenilendiamina a un pH de 7.4, que vendra a ser la forma reducida.
Tubo N2: Se observa el cambio de la forma reducida a una forma oxidada (marrn)
por accin del Citocromo C oxidado.
Tubo N 3: Se observa que no hay reaccin, debido a que se produce una inhibicin de
la cadena de transporte electrnico mitocondrial (por el cianuro) a nivel del citocromo
oxidasa.

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-

Tubo N 4: Se observa un color marrn. Esto es debido a que en el homogenizado no

solo est presente la cadena transportadora, tambin existen NADH, lactato y enzimas
lactato deshidrogenasa. Esto ocasionara que el transporte de electrones se produzca por
el complejo NADH deshidrogenasa y no por el complejo succinato deshidrogenasa, ya
que est estinhibida por el malonato.

Tubo N 4

Tubo N 3

Tubo N

Tubo N

Figura N

Figura N 2: se muestra los resultados del Seguimiento de la reaccin catalizada por la

citocromo oxidasa, cada tubo con diferentes reactivos: 1) Sol. p-fenilendiamina y buffer
fosfato 0.1 M pH 7.4. 2) Homogenizado de corazn, Sol. p-fenilendiamina y buffer fosfato
0.1 M pH 7.4. 3) Homogenizado de corazn, cianuro de sodio 0.1 M y Sol. pfenilendiamina. 4) Homogenizado de corazn, malonato de sodio 0.1 M y Sol. pfenilendiamina.
3. Seguimiento de la reaccin catalizada por la succinato deshidrogenasa
-

Tubo N 1: Se observa un color naranja, esto debido a el transporte de electrones por

medio del complejo II de manera normal sin presencia de ningn inhibidor.
TuboN 2: se observa un color ligeramente naranja, esto debido a que se utiliz
malonato de sodio, (inhibidor competitivo del succinato deshidrogenasa ), pero como
podemos observar hay una reduccin del azul de metileno, debido a que en el
homogenizado no solo est presente la cadena transportadora, tambin existen NADH,
lactato y enzimas lactato deshidrogenasa.

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-

Tubo N 3: Se observa una coloracin verdosa, esto debibo a que no se utiliz el

sustrato (succinato).
Tubos N 4 y 5: se observa una diferencia de intensidad, esto es debido que el tubo 4
lleva substrato Succinato de sodio, lo cual aumentara la concentracin de Azul de
metileno reducido, a diferencia del tubo 5. Ambos tubos contiene cianuro (inhibidor).
Tubos N 6 y 7: se observa una diferencia de intensidad, esto es debido que el tubo 6
lleva substrato Succinato de sodio, lo cual aumentara la concentracin de Ferrocianuro,
a diferencia del tubo 7, donde habr una menor concentracin de ferrocianuro.

Tubo N

Tubo N

Tubo N

Tubo N

Figura

Tubo N

Tubo N

Tubo N

Figura N 3: Se muestran los resultados obtenidos en el seguimiento de la reaccin

catalizada por la succinato deshidrogenasa, cada tubo con diferentes reactivos. 1) Azul de
metileno, buffer fosfato 0.1 M, Succinato de sodio 0.1 M y homogenizado de hgado. 2)
Azul de metileno, buffer fosfato 0.1 M, Succinato de sodio 0.1 M, Malonato de sodio y
homogenizado de hgado. 3) Azul de metileno, buffer fosfato 0.1 M, agua bi-destilada,
Malonato de sodio y homogenizado de hgado. 4) Azul de metileno, buffer fosfato 0.1 M,
Succinato de sodio 0.1 M, cianuro de sodio 0.1 M y homogenizado de hgado. 5) Azul de
metileno, buffer fosfato 0.1 M, agua bi-destilada, cianuro de sodio 0.1 M y homogenizado
de hgado. 6) Azul de metileno, buffer fosfato 0.1 M, Succinato de sodio 0.1 M,
ferrocianuro de potasio 0.1 M y homogenizado de hgado. 7) Azul de metileno, buffer
fosfato 0.1 M, agua bi-destilada, ferrocianuro de potasio 0.1 M y homogenizado de hgado.

VI. DISCUSIONES

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En el seguimiento de la reaccin catalizada por el lactato deshidrogenasa, se utilizo azul de
metileno, el cual actuara como un aceptor de electrones, pasando de una forma oxidada
(azul) a una reducida (incoloro)4.

Se utilizo tambin el lactato de sodio, el cual actuara como substrato del lactato
deshidrogenasa, actuando con su cofactor NAD +, que se reducir a NADH, y el producto
ser Piruvato. El NADH luego pasara a la cadena transportadora de electrones para donar
sus electrones.5

Debido a su potencia de reduccin (Eo = 0.01 voltios), el azul de metileno actuara

aceptando los electrones luego de la reduccin del FMN a FMNH2 (Eo = -0.30 voltios) en
el complejo NADH deshidrogenasa, antes que estos pasen al Cit b oxidado (Eo = 0.12
voltios) del complejo citocromo bc1. Recordemos que el transporte de electrones se dar de
forma crecientes a sus potenciales de reduccin.6
En el seguimiento de la reaccin catalizada por el lactato deshidrogenasa, en los tubos 1 y
2, se observa un mismo color con diferentes intensidades. Esto es debido a que en un tubo
hay substrato y en el otro no, es decir la lactato deshidrogenasa producir mayor cantidad
de Piruvato, esto ocasionara que en el tubo 1 haya una mayor concentracin de NADH,
adems de los ya presente en el homogenizado, luego estos donaran sus electrones a la
cadena transportadora de electrones formando una mayor cantidad de azul de metileno
5
reducido. . Lo mismo pasara con los tubos 3 y 4. Tambin se observa que los tubos 1 y 2 son de
diferente color que los tubos 3 y 4. Esto es debido a que los tubos son de diferentes tejidos.
Los tubos 1 y 2 son del homogenizado de hgado y los tubos 3 y 4 son del homogenizado
de corazn. La explicacin bioqumica seria que en el hgado se produce el 90% de la
gluconeognesis, es decir habr una mayor concentracin de Lactato deshidrogenasa y
NADH.7 Es por esta razn que en los tubos de homogenizado de corazn presentara un
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color azul, ya que hay una mayor concentracin de Azul de Metileno oxidado, a diferencia del
hgado que muestra un color azul verdoso, debido que hay mayor cantidad de Azul de
metileno reducido (incoloro).
En la prueba siguiente se utilizo Sol. P-Fenilendiamina que se utiliza para la prueba de
oxidasa la cual se realiza en bacterias. Para efecto de la prctica, lo utilizaremos para el
seguimiento de la reaccin catalizada del citocromo oxidasa. Los colorantes de pfenilendiamina son aminas aromticas primarias, derivados diamino del benceno. La
citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo p-fenilendiamina pero oxida al
citocromo c, el que a su vez oxida el reactivo.8

La reaccin se puede observar en los tubos 1 y 2. En el tubo 1 no hay reaccin, tan solo se
muestra el color inicial de la solucin de P- fenilendiamina a un pH de 7.4, que vendra a
ser la forma reducida. En el tubo 2, se observa el cambio de la forma reducida a una forma
oxidada (marrn) por accin del Citocromo c oxidado.
Luego tambin se utilizo el cianuro de potasio, que produce una inhibicin de la cadena de
transporte electrnico mitocondrial a nivel del citocromo oxidasa. El cianuro es uno de los
venenos ms txicos y de accin mas rpida que se conoce. El cianuro se une al Fe +3 de la
cit a3 e impide que done sus electrones al O2.9

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En el tubo 3 no se observa el color marrn, lo cual indicara que la reaccin no se ha

completado. Esto es debido a que se utilizo cianuro, que como ya mencionamos impide la
llegada de los electrones al oxigeno.
Luego tambin se utilizo malonato de sodio, que es un inhibidor competitivo que se une al
sitio activo de succinato deshidrogenasa en el ciclo del acido ctrico, compitiendo con el
succinato debido al parecido de sus estructuras.10

Esto afectara a la cadena transportadora de electrones, sin que la reaccin con el pfenilendiamina se produzca, solo si es que trabajramos en prctica de forma aislada, pero
podemos observar en el tubo 4 como se produce la reaccin, observndose un color marrn.
Esto es debido a que en el homogenizado no solo esta presente la cadena transportadora,
tambin existen NADH, lactato y enzimas lactato deshidrogenasa. Esto ocasionara que el
transporte de electrones se de por el complejo NADH deshidrogenasa y no por el complejo
succinato deshidrogenasa.
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En el seguimiento de la reaccin catalizada por la succinato deshidrogenasa, se puede
observar en el tubo 1, el transporte de electrones por medio del complejo II de manera
normal sin presencia de ningn inhibidor. Luego se utilizo malonato de sodio en los tubos 2
y 3, como ya mencionamos el malonato acta inhibiendo competitivamente al succinato
deshidrogenasa10, pero como podemos observar hay una reduccin del azul de metileno
(incoloro) debido a que no trabajamos en practica de forma aislada, ya que en el
homogenizado no solo esta presente la cadena transportadora, tambin existen NADH,
lactato y enzimas lactato deshidrogenasa. Esto ocasionara que el transporte de electrones se
de por el complejo NADH deshidrogenasa y no por el complejo succinato deshidrogenasa.
En los tubos 4 y 5, utilizamos cianuro de potasio, que como mencionamos anteriormente
produce una inhibicin de la cadena de transporte electrnico mitocondrial a nivel del
citocromo oxidasa.6 Esto no afectara la llegada de electrones hacia el azul de metileno,
formando azul de metileno reducido (incoloro). Tambin se observa una diferencia de
intensidad, esto es debido que el tubo 4 lleva substrato Succinato de sodio, lo cual
aumentara la concentracin de Azul de metileno reducido, a diferencia del tubo 5, donde habr
una menor concentracin de Azul de metileno reducido. Para finalizar se utilizo Ferricianuro de
potasio 0.1 M, el cual actuara como un aceptor de electrones, pasando de Ferricianuro
(anaranjado) a Ferrocianuro (amarillo claro).11

Debido a su potencia de reduccin (Eo = 0.36 voltios), el Ferricianuro actuara aceptando

los electrones luego de la reduccin del Cit a3 oxidado a Cit a3 reducido (Eo = -0.35 voltios) en el
complejo citocromo oxidasa, antes que estos pasen al oxigeno (Eo = 0.816 voltios).
Recordemos que el transporte de electrones se dar de forma crecientes a sus potenciales de
reduccin.6 Esto lo podemos observar en el tubo 6 y 7, donde tambin se observa una
diferencia de intensidad, esto es debido que el tubo 6 lleva substrato Succinato de sodio, lo
cual aumentara la concentracin de Ferrocianuro, a diferencia del tubo 7, donde habr una
menor concentracin de ferrocianuro.

VII. CONCLUSIONES

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Se identifico la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa en diferentes

tejidos, siendo mayor en el hgado.

Se identifico la presencia de citocromo oxidasa con el p- fenilendiamina y el

efecto de sus inhibidores como el ion cianuro, actuando al nivel de citocromo
a3.

Se identifico la actividad de la enzima succnica deshidrogenasa mediantes el

uso de aceptores electrnicos coloreados como el azul de metileno, actuando al
nivel de las flavinas del complejo NADH deshidrogenasa.

Se identifico el efecto inhibidor de algunas sustancias como el malonato,

actuando a nivel del complejo succnico deshidrogenasa.

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VIII. CUESTIONARIO

1. Cul es la importancia del sistema redox en el metabolismo energtico?

La importancia del sistema redox es que gracias a este sistema los electrones liberados de la
oxidacin pasan con la ayuda de transportadores especficos a una cadena de electrones de
la membrana mitocondrial interna y, all, pasan al O2 formando H2O. Adems el transporte
de electrones genera la formacin de una gradiente de protones a travs de la membrana
mitocondrial interna que proporciona la energa necesaria para la sntesis de ATP. As los
transferidores de electrones ms importantes son los nucletidos de nicotinamida y de
flavina, donde absorben electrones e hidrogeno de forma reversible, y combinan as la
oxidacin de los nutrientes, el transporte de electrones mitocondrial y la obtencin de ATP.
Tambin proporcionan equivalentes de reduccin en forma de electrones e hidridiones
preparados para la biosntesis. 4
2. Usos clnicos de la evaluacin de las enzimas estudiadas
Para la lactato deshidrogenasa que es una enzima que se encuentra dentro de las clulas, su
aparicin en la sangre indica un proceso de destruccin celular, esta ocasionada por
infecciones, traumas o neoplasias. Niveles elevados de esta enzima pueden indicar infarto
agudo al miocardio, enfermedades hematolgicas, hepatopatas, metstasis, entre otros.5
En el caso de la citocromo oxidasa su evaluacin en procesos clnicos es ms que todo ante
una intoxicacin por cianuros, que se diagnostica fcilmente antes los sntomas
caractersticos de este tipo de intoxicaciones.6
La aparicin en la orina de niveles excesivos de succinato deshidrogenasa en conjunto con,
alfa cetoglutarato, citrato y malato; as como niveles anormales de fumarato indican un
trastorno conocido como deficiencia de fumarasa.7

3. Mencione 5 inhibidores respiratorios y precise en qu lugar de la cadena

respiratoria ejerce su accin.

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Barbitricos como el amobarbital.- actan Sobre la NADH

deshidrogenasa bloqueando la transferencia de electrones entre la flavina
y la ubiquinona. (Inhibidores del sitio I)

Malonato.- El malonato se une al sitio activo de la succinato

deshidrogenasa, compitiendo con el succinato. En la reaccin
de fosforilacin oxidativa, el malonato es un inhibidor del complejo II.

Antimicina y dimercaptol.- Actan bloqueando la transferencia de

electrones entre el citocromo b y el citocromo c1. (inhibidores de sitio III)

H2S, Cianuro y monxido de carbono.- Actan sobre el Hemo a3 de la

citocromo oxidasa impidiendo su interaccin con el oxgeno (inhibidores
del sitio IV).

4. Mencione 5 aceptores electrnicos artificiales

1. Azul de metileno
2. Metasulfato de fenacina
3. Ferricianuro
4. Menadiona
5. 2,6-diclorofenolindofenol

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Revert S.A. 4ta Edicin. Barcelona, 2008. Pg. 164-165
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