Practica de Raices de Analisis

Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro
Departamento de Ciencias del Suelo

Divisin de Ingeniera
Microbiologa de Suelos
Practica 1: Clareo y Tincin de races
M.C. Vctor Samuel Pea Olvera
Integrantes:
*Gabriel Alejandro Avendao Medina

*Elyud charles lira
*Arely Hernndez Acosta
*Nancy Vanesa Lozano Acatitla
*Mayda Rubida Prez Jimnez
Ingeniera Agrcola y Ambiental

Buena Vista, Saltillo Coahuila;
07/noviembre/2016
Antecedentes:
El procedimeinto de clareo y tincion para raices microrrizadas ha permitido el avance de las
investigaciones en el campo de la endomicorriza (V-A.), pues gracias a este se han podido
observar estrcuturas fungicas dentro de las raices que se encuentran dentro colonizando
(vesiculas, arbusculos e hifas).
Introduccion
El desarrollo vegetal puede ser promovido por ciertos grupos microbianos,
fundamentalmente los hongos micorrzicos y otros microorganismos presentes en la
rizsfera que actan coordinadamente con ellos en la interfase suelo-raz. Esta interaccin
afecta el ciclado y disponibilidad de los macro y micronutrientes necesarios en la nutricin
del vegetal, as como ciertas reacciones metablicas de estos microorganismos que son
claves para el mejoramiento de la estructura del suelo (Alarcn y Ferrera-Cerrato, 20009).
En aos recientes los hongos micorrzico arbusculares (HMA), han recibido considerable
atencin a causa de los beneficios nutricionales que ofrecen a las plantas, principalmente en
aquellas de inters comercial. Los HMA se establecen en la zona cortical del sistema
radical de las plantas y tienen la caracterstica de formar estructuras internas, las cuales de
acuerdo con su funcin pueden favorecer el intercambio nutrimental y el almacenamiento
de reservas (Gianinnazzi, 1991). Las estructuras que se forman en esta asociacin solo son
visibles al microscopio ptico y mediante una tincin especial previa decoloracin de las
races. El mtodo de tincin ms utilizado es el descrito por Phillips y Hayman (1970) en el
cual se emplea el colorante Azul de Tripano para hacer visibles las estructuras tpicas de la
simbiosis micorrzica (hifas, vesculas, arbsculos). Sin embargo, el Azul de Tripano est
sealado por la Agencia Internacional de Investigacin del Cncer como un potencial
agente cancergeno (Vierheilig et al., 1998) cuyos vapores pueden causar irritacin en la
piel, ojos, nariz, garganta y pulmones. Por razones de salud, seguridad e incluso.
ambientales, es preferible en la medida de lo posible, buscar sustitutos para el empleo de
este qumico daino. Recientemente se desarroll una tcnica simple de tincin con una
solucin a base de tinta china y cido actico (vinagre de uso domstico). Se trata de una
tcnica de tincin eficaz, fcil y segura ya que se utilizan compuestos no txicos que se
pueden obtener fcilmente y que adems son baratos; por estas razones se trata de una
tcnica excelente para situaciones de enseanza.
Revision de litratura
El trmino micorriza deriva del griego Mycos (hongo) y Rhizos (raz) y significa
"hongo de raz, es usado para definir la asociacin simbitica entre grupos particulares de
hongos y las races de la mayora de las plantas vasculares. Estas asociaciones son
benficas para la planta hospedera, as como para el simbionte. En la naturaleza se tienen
identificados seis tipos de micorriza bien diferenciados entre s (Smith y Read, 1997). Sin
embargo, desde el punto de vista forestal, agrcola, hortcola y frutcola son dos tipos los
ms importantes: la ectomicorriza y la endomicorriza mejor conocida como micorriza
arbuscular- (Ferrera-Cerrato y Alarcn, 2001).
Las micorrizas, trmino utilizado por Frank (1885), consiste en la asociacin entre la races
de una planta con las hifas de un hongo, esta relacin es tan abundante entre las plantas que
se estima que entre el 85% (Hawksworth et al. 1991) y 95% (Smith y Read 1997, Trappe
1977, 1987) de las plantas establecen la asociacin simbitica, mientras que por parte de los
hongos que se calculan 6000 especies que participan en la simbiosis (Smith y Read 1997),
la formacin de la simbiosis no solo comprende la presencia de ambos organismos, sino
que existan las condiciones micro y macroambientales adecuadas, que incluyen factores
fsicos, qumicos y biolgicos como temperatura, pH, entre otros. (Francis y Read 1994).
Tincin de Races para observar la colonizacin micorriza

La colonizacin de las clulas corticales de la raz por HMA, no altera la morfologa de la
raz, en contraste con las asociaciones ectomicorrzicas. Por lo tanto, para detectar y medir
la colonizacin micorrzica, las races son sometidas a un procedimiento de clareo y
tincin. El mtodo ms ampliamente utilizado es el descrito por Philips y Hayman (1970).
Kormanik y McGraw (1982) eliminan el fenol en las soluciones para tincin y
decoloracin, mientras que Koske y Gemma (1989) modificaron el procedimiento mediante
la eliminacin de cido lctico de estas soluciones sin interferir con la intensidad de la
tincin. Teniendo en cuenta el costo de los productos qumicos y el ahorro al reducir el
nmero de productos qumicos sin interferir con la calidad de la tincin, se propone para la
tincin de races el mtodo de Philips y Hayman (1970) modificado por Koske y Gemma
(1989).
Objetivo:
Practicar el manejo de la tecnica de clareo y tincion de raices microrizadas.
Materiales:
*Raices
*H2O2 10%
*KOH 10%
*Agua destilada
*HCl 10%
*Azul tripano 0.5% en lactoglicerol

*Olla de presion
Metodologa:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
Las races son colocadas en capsulas esterelizables

Las races con KOH 10% son calentadas por 10 minutos a 10 Ib de presin.
El KOH es retirado y las races son enjaguadas con agua destilada
Se agrega H2O2 10% por tres minutos y luego se enjagua con agua destilada
Se agrega HCl 10% por tres minutos y no se enjagua
Agregar la solucin colorante (azul tripano 0.5% en lactiglicerol), calentarlas por 10
minutos a 10 Ib de presin.
7) Retirar la solucin colorante y aadir lactoglicerol limpio para decolorar y eliminar
el exceso de coloracin.
Anotar observaciones:
Arely:
Para la realizacin de la prctica de clareo y tincin de races se tom en cuenta el mtodo
por Phillips & Hayman, mtodo explicado anteriormente, en este caso el KOH lo
agregamos para la clarificacin, el HCl es para la pre-tincin, en cuanto al azul tripano se
us para la tincin y el lactoglicerol para la decoloracin, adems de ser importante para la
conservacin de las races.
Es importante cumplir con todos los pasos que forman el mtodo ya que si llega a faltar
alguno los resultados no seran correctos. La pre-tincin, es donde se permite la
penetracin del colorante, por tanto esta nos indicara la cantidad de HCl que pueden ser
utilizados sin distorsionar la calidad de la tincin.
Elyud:
Para llevar a cabo una observacin de asociacin entre micorrizas y la planta se debe
realizar un proceso de clareo y tincin de las races, donde primero se coloca una muestra
de raicillas en una caja Petri sellada y se calienta en una olla de presin por un tiempo
definido, despus se escogen 20 raicillas y se acomodan dentro de un portaobjetos, luego
utilizamos hidrxido de potasio para la clarificacin, acido clorhdrico para la pre tincin,
azul de tripano para la tincin y Lactoglicerol para la decoloracin.
Al terminar este proceso se pudo observar en el estetoscopio donde las raicillas se
resaltaron con el fin de observar una asociacin micorrcica.
Conclusin
Para efectuar un estudio adecuado de las asociaciones micorrizicas es necesario usar un
mtodo de tincin de races que nos permita observar de manera adecuada dicha simbiosis,
este tipo de procedimientos incluyen varias estapas, estas etapas varan dependiendo del
tipo de raz a estudio que presente la especie. Por tanto podemos decir la optimizacin de
un protocolo permite una mejor visualizacin de la asociacin simbitica de las races de
una especie.
Por otra parte es importante conocer si una planta contiene micorrizas ya que los beneficios
que estas aportan a las plantas asociadas son que facilitan la nutricin, crecimiento y
desarrollo, mejoran su tolerancia frente a estrs hdrico y a agentes patgenos entre otras.
Referencias bibliogrficas
*http://www.scielo.org.pe/pdf/ecol/v14n1/a06v14n1.pdf
*http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/667/cap7.pdf
*http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/31353/1/josefelicianolipeztorres.p
df
Clareo y tincin de races
Poner races en
capsulas
Agregar HCl por 3

min.
Agregar
KOH
y
calentar por 10 min.
Enjaguar con agua

oxigenada
Retirar el KOH y enjaguar

con agua oxigenada.
Agregar agua
oxigenada por 3 min.
races listas para

observar
Quitar exceso de
colorante, aadir
lactoglicerol
Agregar azul tripano

y calentar por Ib

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*Gabriel Alejandro Avendao Medina

Ingeniera Agrcola y Ambiental

Tincin de Races para observar la colonizacin micorriza

*Azul tripano 0.5% en lactoglicerol

Las races son colocadas en capsulas esterelizables

Clareo y tincin de races

Agregar HCl por 3

Enjaguar con agua

Retirar el KOH y enjaguar

races listas para

Agregar azul tripano

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