Rev. Protección Veg. Vol. 24 No.

2 (2009): 106-116

ACTIVIDAD ANTAGÓNICA FRENTE A Pyricularia grisea (SACC.) Y

FITOESTIMULACIÓN EN EL CULTIVO DEL ARROZ DE CEPAS
AUTÓCTONAS DE Pseudomonas putida (TREV.)

Narovis Rives*, Yanelis Acebo**, M. Almaguer**, J.C. García** y Annia Hernández**

*Instituto de Investigaciones del Arroz. Km 16½, Autopista Novia del Mediodía, Bauta, La Habana, Cuba.
Correo electrónico: narovis@fbio.uh.cu; **Facultad de Biología. Universidad de La Habana. Calle 25,
# 455, Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba. Correo electrónico: annia@fbio.uh.cu

RESUMEN: La aplicación de inoculantes de origen bacteriano en cultivos de importancia económica,

constituye una alternativa ecológica que permite la obtención de mayores rendimientos y la conservación
del medio ambiente. La obtención y caracterización de cepas autóctonas, potencialmente eficientes en
la promoción del crecimiento vegetal y el control biológico de patógenos constituye un paso esencial
para el desarrollo de inoculantes microbianos. Esta investigación se desarrolló con el objetivo de
caracterizar cepas de Pseudomonas putida previamente aisladas del cultivo del arroz variedad J-104 en
cuanto a su actividad promotora del crecimiento vegetal y su efecto antagónico frente a Pyricularia
grisea. Se realizaron experimentos in vitro para detectar la producción de compuestos indólicos,
producción de sideróforos, actividad antagónica contra P. grisea y el efecto estimulador del crecimiento
vegetal de las cepas, en plantas de arroz de 12 días de edad sembradas en tubos de ensayo con medio
Murashige y Skoog (MS). Los resultados mostraron la capacidad de producir metabolitos del tipo ácido
3-indolacético (45,8 - 56 µg.mL -1) y sideróforos (7,3-39,4 µM) por las cepas en estudio, las que
manifestaron efecto antagónico frente a P. grisea (82-86% de inhibición del crecimiento fúngico) y como
promotor del crecimiento vegetal, esto último, a través de su efecto sobre algunos parámetros del
crecimiento evaluados (altura de la planta, largo de la raíz, masa fresca aérea y de raíz), destacándose
un comportamiento integral en las cepas de P. putida AJ9, AJ14, AJ20 y AJ18. Desde el punto de vista
práctico estos resultados indican las potencialidades de las cepas estudiadas para su utilización como
inoculantes microbianos en beneficio del cultivo del arroz.
(Palabras clave: arroz; Pseudomonas putida; Pyricularia grisea; promoción del crecimiento; actividad
antagónica)

ANTAGONISTIC ACTIVITY AGAINST Pyricularia grisea (SACC.) AND GROWTH

STIMULATION IN RICE OF Pseudomonas putida (TREV.) NATIVE STRAINS

ABSTRACT: The application of bacterial inoculants in crops economicaly important crops has been an
ecological alternative to improve crop yield and to preserve the environment. The obtaining and
characterization of native strains associated with several crops and potentially efficient to promote plant
growth and to biocontrol the phytopathogens are key steps to the development of microbial inoculants.
This research was carried out to characterize strains of Pseudomonas putida, isolated from rice (Oryza
sativa L. var. J-104) as phytostimulators and antagonistic agents against Pyricularia grisea. In vitro
experiments were carried out to detect the production of indolic compounds and siderophores, antagonistic
activity against P. grisea and to assess the phytostimulating effect of the strains in 12-day-old rice plants
grown in Murashige and Skoog medium. The results showed the ability of the strains to produce indolacetic
acid-like metabolites (45,8 to 56 µg·mL-1) and siderophores (7,3 to 39,4µM) . The strains showed antagonistic
effect against P. grisea (82-86% of fungal growth inhibition) and were also capable of promoting plant
growth (by increase in plant height, root length, root fresh weight and aerial part fresh weight), standing
out the strains AJ9, AJ14, AJ20 and AJ18 for the best performance. From the practical point of view,
these results show the potential of these strains to be used as inoculants in rice crop.
(Key words: rice; Pseudomonas putida; Pyricularia grisea; plant growth promotion; antagonistic activity)
 107

INTRODUCCIÓN Instituto de Investigaciones del Arroz (IIArroz, La Ha-

bana) sobre suelo Gley Vértico Crómico-Nodular
El cultivo del arroz (Oryza sativa L.) se enfrenta a Ferruginoso. Las mismas se identificaron mediante
graves problemas, entre ellos se destacan: la tasa el sistema API 20 NE (6) y se conservaron en medio
descendente de crecimiento de las cosechas, la es- Luria Bertani (LB) con glicerol al 40% a una tempera-
casez de mano de obra y la contaminación del medio tura de -20ºC.
ambiente (1). Uno de los factores que inciden en la
obtención de bajos rendimientos en este cultivo lo Se utilizó la cepa autóctona de P. grisea AAM-
constituye la aparición de enfermedades, una de ellas; 246 que pertenece a la Colección de Cultivos Fúngicos
la piriculariosis o añublo del arroz con una alta fre- de la Facultad de Biología con el número 356. Este
cuencia de aparición en la mayoría de los cultivo se encontraba conservado en medio Papa
agroecosistemas. Si las condiciones ambientales, el Dextrosa Agar (PDA) (Biocen) a 28oC.
grado de susceptibilidad de la variedad, así como la Producción de ácido 3-indolacético (AIA)
tecnología de cultivo empleada son favorables para
En tubos de ensayos que contenían 5mL de Caldo
que se desarrolle su agente causal (Pyricularia grisea
Triptona Soya suplementado con triptófano (0,1g.L-1),
Sacc.), esta puede provocar hasta el 100% de reduc-
se inocularon con 500 µL de una suspensión
ción de los rendimientos agrícolas (2). Es por ello,
bacteriana de cada aislado, ajustada a una concen-
que la búsqueda de alternativas ecológicas que per-
tración celular de 108 cel.mL-1, comparado con el tubo
mitan aumentar los rendimientos de este importante
0,5 de la escala de MacFarland. Los tubos se incuba-
cultivo, sin provocar afectaciones en el medio ambien-
ron por 48 horas a 30°C, posteriormente el contenido
te, constituye una prioridad para los investigadores,
se centrifugó a 5000 rpm por 15 minutos (Centrifuga
especialistas y técnicos arroceros a nivel mundial.
5702, Eppendorf).
La aplicación de inoculantes de origen bacteriano,
Para la detección cualitativa, se prepararon sus-
ha constituido una alternativa ecológica que permite
pensiones bacterianas de cada aislado en solución
la obtención de mayores rendimientos y la conserva-
salina fisiológica, ajustando la concentración celular
ción del medio ambiente. En este sentido, la obten-
a 108cel.mL-1. Se tomaron 500 µL de cada suspen-
ción y caracterización de cepas autóctonas asocia-
sión, se inocularon en tubos de ensayo con 5 mL de
das a estos cultivos, potencialmente eficientes en la
Caldo Triptona Soya suplementado con triptófano
promoción del crecimiento vegetal y control biológico
(0.1g·L-1) y se incubaron a 24 horas en agitación (150
de fitopatógenos, constituye un paso esencial para el
rpm) a 28ºC. Posteriormente, los cultivos se
desarrollo de estos productos biológicos (3).
centrifugaron (Centrifugue 5702, Eppendorf) a 5000
Las especies del género Pseudomonas se encuen- rpm durante 15 minutos, se tomaron 10 mL de los
tran entre las más estudiadas porque tienen la capa- cultivos libres de células y se concentraron en un
cidad de producir reguladores del crecimiento vege- rotoevaporador hasta su secado total (Büchi B-490).
tal y otros metabolitos con efecto antagónico y repre- Luego se añadieron 100 µL de etanol absoluto a cada
sivo del crecimiento de patógenos en la rizosfera (4). tratamiento. Las muestras (10 µL) correspondientes
También este género constituye un excelente ejem- a las cepas y un patrón de AIA sintético se aplicaron
plo de la combinación de múltiples mecanismos para en placas comerciales para cromatografía en Sílica
ejercer un efectivo control biológico (5). Gel 60 F 254 (MERCK). Se utilizó isopropanol-amonio-
Por lo anteriormente expuesto, este trabajo se agua (80-5-15) como sistema de solventes y el reactivo
desarrolló con el objetivo de caracterizar 10 cepas de de Salkowski como revelador.
Pseudomonas putida (Trev.) previamente aisladas del Para la determinación cuantitativa de AIA, a los
cultivo del arroz variedad J-104 en cuanto a la activi- cultivos libres de células se les añadió el reactivo de
dad promotora del crecimiento vegetal en el cultivo Salkowski (600mL de H2SO4 18M, 4,5g de FeCl 3
del arroz y su efecto antagónico frente a P. grisea. anhidro y se completó hasta 1L con agua destilada),
en una relación 1:1. Los cultivos se incubaron a tempe-
MATERIALES Y MÉTODOS ratura ambiente y oscuridad durante 30 minutos, luego
se leyó la absorbancia a 530 nm en espectrofotómetro
Cultivos microbianos: En este estudio se utiliza- (Genesys 20, Thermospectronic). Paralelamente se ela-
ron 10 cepas de Pseudomonas putida previamente boró una curva patrón con AIA sintético en concentra-
aisladas de la rizosfera de plantas de arroz de la va- ciones de 5 µg.mL-1 a 100 µg.mL-1. El experimento se
riedad J-104 sembradas en el área experimental del repitió tres veces con cinco réplicas por cepa.

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108

Producción de sideróforos rimento se repitió tres veces a razón de tres répli-

cas por tratamiento.
En el ensayo para la detección de sideróforos se
empleó el medio King B sólido, mediante la metodo- En el segundo experimento in vitro se siguió la
logía descrita por Schwyn y Neilands (7). Se utilizó la metodología descrita anteriormente, pero las bacte-
solución reveladora CAS (Cromo Azurol S) que indica rias se sembraron con hisopos estériles en forma cir-
la producción de este metabolito mediante un cambio cular, utilizando una plantilla de un diámetro de 55
de coloración en el medio de cultivo de azul a naran- mm, en el medio King B. Los discos del hongo se
ja. El experimento se repitió tres veces con cinco ré- colocaron de igual forma en el centro de las placas
plicas por cepa. Petri de 9 cm de diámetro. El porcentaje de inhibición
se determinó mediante la metodología descrita por
Para la cuantificación de este metabolito, se ino-
Hernández (6), utilizando como control, el crecimien-
cularon tubos con 5mL de caldo Casamino Ácido (Áci-
to del hongo en ausencia de la bacteria. El experi-
do Casamínico 5g·L-1, K2HPO4 1g·L-1, MgSO4 • 7H2O
mento se repitió tres veces a razón de tres réplicas
1.55g·L-1, H20d 1L) con 500 µL de una suspensión
por tratamiento.
bacteriana en solución salina fisiológica de cada ais-
lado, ajustada a una concentración celular de Determinación del efecto de las cepas de P. putida
108cel.mL-1. Los cultivos se colocaron en zaranda sobre la estimulación del crecimiento vegetal en
orbital durante 48 horas a 150 rpm y 37oC. Se deter- el cultivo del arroz
minó la absorbancia a 595 nm para determinar la con-
Se realizaron suspensiones bacterianas en solu-
centración celular y a 405 nm en el sobrenadante para
ción salina fisiológica estéril, ajustando la concentra-
cuantificar los metabolitos del tipo sideróforos en
ción celular a 108 cel.mL-1, según la escala de
espectrofotómetro (Genesys 20, Thermospectronic).
McFarland, tomándose cada una como un tratamien-
Determinación de la actividad antagónica de las to. Se estableció como tratamiento control de
cepas seleccionadas frente a Pyricularia grisea lasolución salina fisiológica estéril sin inocular. Se des-
infectaron 100 semillas de arroz variedad J-104 utili-
Se realizaron dos bioensayos in vitro para de-
zando hipoclorito de calcio al 5% durante 20 minutos,
terminar el efecto antagónico de las cepas en es-
según metodología descrita por Hernández et al. (10)
tudio frente P. grisea. En el primer experimento in
y se transfirieron individualmente a tubos de cultivos
vitro se siguió la metodología descrita por Bashan
de 20 x 3 cm que contenían 15 mL de medio Murashige
et al. (8). Para ello el hongo se sembró previamente
y Skoog (MS) (11).
en medio de cultivo PDA mediante siembra a pro-
fundidad (9) y se incubó a 30ºC durante 7 días. Se Posteriormente se adicionaron 100 µL de caldos
realizaron suspensiones bacterianas en solución de cultivos libres de células, procedentes de las sus-
salina fisiológica estéril, ajustando la concentra- pensiones bacterianas (500 µL de cada suspensión,
ción celular a 108 cel.mL -1, según la escala de se inocularon en tubos de ensayo con 5 mL de medio
McFarland. Se incubaron por 48 horas a 28ºC en King B líquido, se incubaron durante 24 horas en agi-
agitación a 125 rpm, (zaranda orbital C1 de New tación a 150 rpm a 28ºC y posteriormente se
Brunswick Scientific). A las 48 horas, se extrajeron centrifugaron (Centrifugue 5702, Eppendorf) a 5000
100 µL de estos cultivos y se sembraron por dise- rpm durante 15 minutos) y el control a los tubos de
minación mediante espátula de Drigalsky (9) en medio MS y se incubaron a temperatura ambiente en
placas Petri de 9 cm de diámetro con medio King régimen de fotoperíodo (14 horas de luz y 10 horas
B. Las placas Petri previamente sembradas con el oscuridad). A los 12 días, las plántulas se sacaron de
hongo se perforaron utilizando un obturador de 5 los tubos con mucho cuidado, se lavaron con agua
mm de diámetro. Los discos se colocaron en el destilada y se secaron con papel de filtro (Whatman).
centro de las placas sembradas con la bacteria, a Posteriormente se procedió a separar la parte aérea
razón de un disco para cada placa y cinco réplicas de las plantas, de la raíz, para determinar los diferen-
por tratamiento, luego se incubaron a 30ºC duran- tes parámetros de crecimiento (altura de las plantas,
te 7 días. La actividad antagónica de las bacterias largo de la raíz, masa fresca aérea y de la raíz) con la
se determinó a través de mediciones del diámetro ayuda de un pie de rey (mm) (Würth, Alemania) y una
de crecimiento del hongo en presencia del anta- balanza analítica (Sartorius, USA). Para la determi-
gonista y un control donde no se aplicó este últi- nación del peso seco, el material vegetal se colocó
mo. Con estos datos se determinó el porcentaje en un horno (Memmert, Bélgica) a 70ºC durante tres
de inhibición de las cepas sobre P. grisea, según días. Se establecieron 10 réplicas por tratamiento y el
metodología descrita por Hernández (6). El expe- experimento se repitió tres veces.

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Análisis biométrico Los niveles de producción de esta hormona obte-

nidos en el presente trabajo son elevados si se com-
De forma preliminar, a todas las variables se les
paran con los encontrados por Hernández (6) y Trujillo
realizó la prueba de normalidad de Shapiro y Wilk (12)
(14), con cepas de Pseudomonas fluorescens (5,90-
y homogeneidad de varianza, contenidas en el pa-
18,3 µg.mL-1) aisladas de la rizosfera del cultivo del
quete estadístico Statistica 6.1. A partir de estos re-
maíz.
sultados, se decidió realizar los análisis paramétricos
y no paramétricos según correspondiera. Asimismo, estos resultados son superiores a los
obtenidos por Gravel et al. (15) en una investigación
A los datos que presentaron distribución normal,
sobre el posible papel del AIA en la estimulación del
se les realizó la prueba de Student-Newman-Keuls
crecimiento en plantas de tomate inoculadas con una
(SNK) paramétrica. A los datos que no presentaron
cepa de Pseudomonas putida estudiada, en la que
una distribución normal, se les realizó la prueba de
obtuvieron una producción de 23,4 µg.mL-1 de este
Kruskal-Wallis completado por la prueba de compa-
metabolito.
ración de Mann-Whitney y la correspondiente correc-
ción de Bonferroni (13) o la prueba SNK no Es importante señalar, que la técnica utilizada para
paramétrica. Todas las pruebas estadísticas realiza- la cuantificación de sustancias estimuladoras del cre-
das están contenidas en el paquete estadístico cimiento del tipo auxinas, puede presentar
Statistica 6.1 interferencias por la presencia de otros indoles. No
obstante, es empleada por muchos autores para es-
RESULTADOS Y DISCUSIÓN tos fines (6,14,16,17).
Producción de sideróforos
Producción de ácido 3-indolacético (AIA)
Mediante el método cualitativo de detección de
Dentro de los mecanismos por los cuales las sideróforos se demuestra que todas las cepas tienen
rizobacterias pueden manifestar su acción se desta- la capacidad de producir este metabolito, lo que se
can la producción de compuestos indólicos, a los cua- denota por la presencia de halos de color naranja en
les se les atribuye el incremento en el desarrollo y las placas de medio de cultivo con el indicador Cro-
rendimiento de diversas especies de plantas. mo Azurol S (Fig. 3).
Al realizar el análisis cromatográfico se observa- La producción de sideróforos por cepas de
ron manchas de color rojizas en las placas de rizobacterias pertenecientes a diferentes grupos
cromatografía que se correspondieron con el patrón microbianos y su función en el control biológico de
de AIA sintético, lo que corrobora la producción de enfermedades de plantas ha sido informada por va-
este metabolito por las cepas seleccionadas y la efi- rios autores (6, 18, 19). En este trabajo se demuestra
cacia de la técnica colorimétrica utilizada (Fig. 1). que todas las cepas de P. putida utilizadas en el estu-
De manera general, las cepas en estudio demos- dio, tienen la capacidad de producir sideróforos bajo
traron poseer altos niveles en la producción de condiciones limitantes de hierro (Fig. 4).
auxinas, obteniéndose valores de AIA entre 45,8 y 56 Los mayores niveles de producción de sideróforos
µg.mL-1 (Fig. 2). Los mayores niveles en la produc- se obtienen en las cepas AJ9, AJ13, AJ14 y AJ24,
ción de esta auxina se alcanzaron con la cepa de P. destacándose las cepas AJ9 y AJ14 con las mayores
putida AJ16, aunque sin diferir significativamente de producciones. Se ha observado que las rizobacterias
las restantes cepas.

FIGURA 1. Análisis cromatográ-

fico del AIA producido por las
cepas de P. putida estudiadas./
Chromatographic analysis of the
IAA produced by P. putida
strains.

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110

FIGURA 2. Producción de
AIA por las cepas de P. putida
estudiadas./ Production of IAA
by P. putida strains in study.

FIGURA 3. Producción de
sideróforos en placas con el indica-
dor Cromo Azurol S. (a) control sin
inocular; placas inoculadas (b) AJ24;
(c) AJ9./ Production of siderophores
in plates with Chrome Azurol S. (a)
non inoculated control; inoculated
plates (b) AJ24; (c) AJ9.

45 a
ab
40
Concentración de
sideróforos (uM)

35 b
bc FIGURA 4. Producción de
30
sideróforos por las cepas de
25 P. putida estudiadas./
20 d d d Production of siderophores
15 by P. putida strains in study.
10 e e e Letras no comunes indican
5
diferencias significativas
entre los tratamientos para
0
p<0.05.
AJ9 AJ13 AJ14 AJ15 AJ16 AJ18 AJ19 AJ20 AJ23 AJ24
Cepas

con la capacidad de sintetizar estos compuestos son perjudica a las plantas colonizadas, por el contrario, se
altamente efectivas en el control biológico de ha planteado la existencia de mecanismos de incorpo-
fitopatógenos (19). Al formarse el complejo hierro- ración del hierro solubilizado por los sideróforos (20).
sideróforo, disminuye la disponibilidad de este en el
Experimentos en condiciones de invernadero de-
suelo, ya que los receptores proteicos que reconocen
mostraron que la cepa B10 de P. putida tiene la capa-
el complejo son específicos de cada especie
cidad de suprimir la pudrición provocada por Fusarium,
bacteriana, estableciéndose una competencia por el
sin embargo este efecto se pierde al adicionarle hie-
hierro frecuentemente fatal para el patógeno, que no
rro al suelo (que reprimió la producción de sideróforos),
posee mecanismos propios tan efectivos para la ad-
lo que demuestra el papel determinante que desem-
quisición de hierro. Este mecanismo, sin embargo no

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peñan los sideróforos en el control biológico de plantas en el control biológico de patógenos que afec-
patógenos (21). Buysens et al. (18) también demos- tan a cultivos de importancia económica, tales como
traron la efectividad de los sideróforos en el control el arroz (24, 25).
de enfermedades causadas por algunas especies de
Al establecerse la interacción entre los antagonis-
Fusarium y Pythium.
tas bacterianos y la cepa de P. grisea se observaron
La selección de cepas eficientes en la producción altos porcentajes de inhibición en el hongo, lográndose
de metabolitos que actúan como estimuladores del en el primer bioensayo entre el 82 y el 86% de inhibi-
crecimiento vegetal y como agentes de control bio- ción del crecimiento y en el segundo del 37 al 48%. El
lógico de patógenos es un aspecto de gran interés den- análisis estadístico de los valores no mostró diferen-
tro de la biotecnología agrícola; aspecto que podría cias significativas entre el comportamiento de las ce-
estar relacionado con los efectos beneficiosos obteni- pas (Fig. 6). Sin embargo, se debe destacar que en el
dos en las plantas de interés económico al inocular primer bioensayo se obtiene mayores porcentajes de
rizobacterias del género Pseudomonas (6, 16, 22, 23). inhibición que en el segundo, lo que podría estar rela-
cionado con la eficiencia del protocolo utilizado, dado
Determinación de la actividad antagónica de las
fundamentalmente por la forma en que se establece
cepas seleccionadas frente a Pyricularia grisea
la interacción entre el antagonista y el patógeno.
Las cepas de rizobacterias estudiadas mostraron
En los bioensayos cualitativos influye, entre otros
efecto antagónico frente a P. grisea (Fig. 5), lo que
factores, la concentración del inóculo del antagonis-
corrobora el efecto de las bacterias asociadas a las
ta, el grosor del agar, la concentración y dureza del

FIGURA 5. Efecto antagó-

nico de las cepas de P.
putida frente a la cepa de P.
grisea en estudio./
Antagonistic effect of P.
putida strains against P.
grisea.

A B

FIGURA 6. Efecto antagónico de la cepa de Pseudomonas putida AJ24 frente a Pyricularia grisea. (A) Bioensayo 1 y (B)
Bioensayo 2./ Antagonistic effect of AJ24 of P. putida strains against P. grisea. (A) Bioassay 1, (B) Bioassay 2.

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medio de cultivo así como las condiciones de producción de metabolitos que desempeñan una im-
incubación (26). En este estudio, a pesar de utilizarse portante función en el control biológico de patógenos,
el mismo medio de cultivo y condiciones experimen- sin embargo, es importante realizar estudios de
tales en ambos bioensayos, las diferencias obtenidas interacción planta-bacteria para conocer los verdade-
podrían estar relacionadas con la concentración del ros efectos beneficiosos que se ponen de manifiesto
inóculo, dado por el método de siembra utilizado y la en la interacción con los cultivos.
diferencia en cuanto a la exposición del hongo al efecto
Determinación del efecto de las cepas de P. putida
del antagonista. Otros aspectos que podrían haber
sobre la estimulación del crecimiento vegetal en
influido en los resultados son: la difusión de los
el cultivo del arroz
metabolitos en el medio, la complejidad del agar em-
pleado, así como el tamaño de las moléculas. En las Figuras 7, 8, 9 y 10 se muestra el efecto
promotor del crecimiento de las cepas de P. putida
El efecto antagónico que se pone de manifiesto
sobre plantas de arroz de 12 días de edad, demos-
entre los antagonistas microbianos y el hongo, podría
trándose la aparición de cambios fenotípicos en la
estar relacionado con la producción de metabolitos
planta, fundamentalmente en el sistema radical, lo que
de naturaleza antibiótica. Investigaciones relaciona-
se denota por un aumento en el número de raíces
das han señalado la capacidad que tienen las cepas
adventicias y laterales.
de Pseudomonas de suprimir patógenos presentes
en la rizosfera a través de la producción de 2,4 dimetyl- La evaluación de la altura de las plantas de arroz
phloroglucinol y pirrolnitrina (27). Asimismo, algunos inoculadas con las cepas estudiadas produjo diferen-
autores han demostrado la presencia de alcaloides cias significativas entre los tratamientos (Fig. 7). Los
del grupo de las quinolinonas, que exhiben actividad mayores valores de las mediciones de este parámetro
antibiótica con efecto antifúngico, en rizobacterias (27). se obtuvieron en los tratamientos donde se aplicaron
las cepas AJ9, AJ14; AJ13, AJ19, AJ20, AJ23, AJ18,
Es importante destacar que en este caso, también
AJ15, AJ16 que no presentaron diferencias significa-
podrían haber influido los sideróforos, si se tiene en
tivas entre ellos, aunque sí con el resto de los trata-
cuenta que el medio de cultivo utilizado para el desa-
mientos. A los controles correspondieron los valores
rrollo de los bioensayos posee bajo contenido de hie-
más bajos sin mostrar diferencias significativas con
rro, lo que favorece la producción de este tipo de
el tratamiento donde se inoculó la cepa AJ24.
metabolito.
En cuanto a la masa fresca aérea de las plantas
Diversos autores han encontrado resultados favo-
de arroz (Fig. 8), se observaron diferencias significa-
rables al aplicar rizobacterias como agentes de control
tivas entre los tratamientos. Se destacan con el mejor
biológico en otros sistemas planta-patógeno. Por ejem-
comportamiento las cepas AJ9, AJ14, AJ19, AJ20 y
plo, Hernández et al. (24) al aplicar las cepas de P.
AJ18.
fluorescens WCS 417, J-143 y B. cepacia 0057 al cul-
tivo del frijol, lograron disminuir la cantidad de lesiones De modo general, los resultados indican que exis-
provocadas por Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. te cierta relación entre la altura de las plantas y la
& Magn.) Pujol et al. (28), aplicaron la cepa de masa fresca aérea, lo que ha sido informado por otros
Pseudomonas fluorescens EPS62e para controlar los autores. En este sentido, Rives et al. (3) demostraron
altos índices de afectación provocados por Erwinia la existencia de una relación directa entre estos
amylovora (Burrill) en plantas de pera, obteniendo re- parámetros, mediante la inoculación de semillas de
sultados satisfactorios. Asimismo se ha señalado que arroz con cepas de Azospirillum y Herbaspirillum con
en el cultivo del maíz en los tratamientos donde las actividad promotora del crecimiento vegetal. Un com-
semillas fueron tratadas con cepas de P. fluorescens y portamiento similar fue informado por Pazos (29), al
Burkholderia cepacia, se observó reducción de los al- inocular plantas de arroz con cepas nativas de
tos índices de infección provocados por Fusarium Azospirillum brasilense.
verticillioides (Sacc.) Nirenb. (6). Sin embargo, se co- En este trabajo se demostró que la inoculación
noce poco de la factibilidad de aplicar rizobacterias para bacteriana favorece el desarrollo del sistema radical.
ejercer el control biológico de P. grisea y no existen El efecto de los diferentes tratamientos sobre la lon-
antecendentes que demuestren el efecto antagónico gitud de la raíz principal de las plantas de arroz se
de rizobacterias del género Pseudomonas frente a este muestra en la Figura 9, evidenciándose diferencias
patógeno. significativas entre los tratamientos. Se destacan los
De modo general, los resultados in vitro eviden- tratamientos inoculados con las cepas AJ9, AJ14,
cian las potencialidades de las cepas en estudio en la AJ20, AJ18; AJ16 y AJ15 que presentaron los mayo-

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6 a a
Altura de la planta (cm)

a
5 a a a
a a a
4 b b
3 bc
2

0
CONTROL KING B AJ9 AJ14 AJ13 AJ24 AJ19 AJ20 AJ23 AJ18 AJ16 AJ15

Tratamientos
FIGURA 7. Efecto de las cepas de P. putida estudiadas sobre la altura de las plantas./ Effect of P. putida strains on plant
height.
Letras no comunes indican diferencias significativas entre los tratamientos para p<0,05.

0,045
a
0,04 a
a a a
0,035
Masa fresca aérea(g)

bc b
0,03 bc
c c c
0,025 c
0,02
0,015
0,01
0,005
0
CONTROL KING B AJ9 AJ14 AJ13 AJ24 AJ19 AJ20 AJ23 AJ18 AJ16 AJ15

Tratamientos

FIGURA 8. Efecto de las cepas de P. putida sobre la masa fresca aérea de las plantas./ Effect of P. putida strains on aerial
part of the plant fresh weight.
Letras no comunes indican diferencias significativas entre los tratamientos para p<0,05.

9
8 a
7 a a a
a ab
6
b
Largo de la raíz (cm)

c b
5 c
4
3 c c
2
1
0
CONTROL KING B AJ9 AJ14 AJ13 AJ24 AJ19 AJ20 AJ23 AJ18 AJ16 AJ15

Tratamientos

FIGURA 9. Efecto de las cepas de P. putida sobre la longitud de la raíz./ Effect of P. putida strains on root lenght.
Letras no comunes indican diferencias significativas entre los tratamientos para p<0,05.

Rev. Protección Veg. Vol. 24 No. 2 (2009)

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0,03
a
Masa fresca de la raíz (g)

0,025
a
0,02

0,015
b
bc
0,01 c
c c
0,005 c c c c c
0
CONTROL KING B AJ9 AJ14 AJ13 AJ24 AJ19 AJ20 AJ23 AJ18 AJ16 AJ15

Tratamientos
FIGURA 10. Efecto de las cepas de P. putida sobre la masa fresca de la raíz./ Effect of P. putida strains on root fresh
weight.
Letras no comunes indican diferencias significativas entre los tratamientos para p<0,05.

res valores y diferencias significativas con el resto de En este estudio se demostró que las rizobacterias
los tratamientos. de P. putida estudiadas estimulan el crecimiento de
las plantas, con mejor comportamiento en la
Asimismo, se observa un efecto beneficioso de la
interacción planta-bacteria las cepas de P. putida AJ9,
inoculación bacteriana sobre la masa fresca de las
AJ14, AJ20 y AJ18.
raíces de las plantas de arroz de 12 días de edad
(Fig. 10). Se destacan las cepas AJ18 y AJ15 por los Desde el punto de vista práctico, estos resultados
mayores incrementos. tienen un gran valor, ya que se obtuvo un conjunto de
cepas nativas de P. putida potencialmente eficientes
Efectos similares en cuanto a incrementos en la
en la promoción del crecimiento vegetal y el control
masa fresca aérea y de raíz al inocular gramíneas
biológico de P. grisea, que constituyen reservas para
con rizobacterias han sido informados por diversos
la producción de inoculantes microbianos en benefi-
autores. Hernández et al. (24) y Egamberdiyeva (30),
cio del cultivo del arroz, una vez que se realicen estos
demostraron que la inoculación de plantas de maíz
ensayos a escala de macetas y campo para confir-
con rizobacterias provoca incrementos en el largo
mar que sus efectos son estables y repetibles en el
de la raíz, contribuyendo de esta forma a una mayor
tiempo.
absorción de nutrientes del suelo, ya que al aumen-
tar el sistema radical se produce un incremento pos-
terior en la adquisición de sustancias nutritivas y agua REFERENCIAS
por la planta. Un comportamiento similar fue infor-
mado por Rives et al. (3), al inocular plantas de arroz 1. FAO. (2007). FAO production yearbook. In: FAO
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la producción de sustancias reguladoras del crecimien-
to por las cepas en estudio. En este sentido, se de- (Consultado: 13 Feb 2007).
mostró que las cepas utilizadas en el bioensayo pro- 2. Álvarez AE, Zamora ZN, Jiménez EM.
ducen auxinas del tipo AIA, la que pudiera estar Comportamiento de variedades de arroz frente a
involucrada con los resultados obtenidos ya que la Pyricularia grisea (Sacc.) en la provincia Granma.
misma promueve el crecimiento y desarrollo de las
Rev Protección Veg. 2001;16(1):40-43.
plantas y se ha demostrado que la influencia de este
metabolito en el desarrollo y las funciones de la raíz 3. Rives N, Hernández A, Acebo Y, Heydrich M.
en plantas inoculadas, es probablemente uno de los Caracterización de algunos géneros bacterianos
factores de mayores beneficios para los cultivos, pu- asociados al cultivo del arroz variedad J-104.
diendo desempeñar una función vital en los efectos Revista Cubana del Arroz. 2006;2(3):7-13.
obtenidos en plantas colonizadas (31).

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