Fenoles Caimito Antcianina PDF
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ABSTRACT. Champa (Campomanesia lineatifolia), a fruit with high potential to be used as a treatment of chronic
diseases due to its chemical composition. It is grown in the municipality of Miraflores (Boyacá, Colombia).
Nowadays, post-harvest losses reach 97 %, and it is opening a research field focus in add it value. The aim of this
work was to establish the amount of phenolic compounds in extracts obtained by solid-liquid extraction of lyophilized
pulpe (1:10), using water, ethanol and ethanol-water mix (7:3) as solvents at three temperature levels, 20, 50 y 70°C.
Extraction yields ranged from 26.85 % to 50.07 %, were the higher numbers were obtained in aqueous extracts. It was
observed, that phenolic content increased with extraction temperature, in the range of 1469.32 ± 152.14 to 5272.51 ±
424.89 μg of galic acid/g of lyophilized pulp, where the higher figures were obtained with ethanol-water mix (7:3).
Anti-oxidant activity was found between 20.44 ± 2.57 to 51.01 ± 1.93 mmol/L TEAC/g lyophilized pulp, being the
ethanol was the solvents with lower values. A significant effect on phenolic compounds, yields, and activity were
observed with extraction temperature, with different trends depending on the solvent used. As a result of this research,
it is concluded that Campomanesia lineatifolia is a natural product with a high content of bio-active compounds, with
a great potential to be used in agricultural, pharmaceutical and cosmetic industries.
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INTRODUCCIÓN
En la actualidad, existe una tendencia marcada hacia el consumo de alimentos funcionales, que se aprecia
especialmente en las grandes superficies de venta, donde se ha incrementado la adquisición de “súper-alimentos”.1
Dentro de los alimentos funcionales, un sector importante corresponde a los que utilizan compuestos fenólicos como
aditivos.2 Es decir, compuestos con actividad antioxidante, capaces de prevenir o retardar la oxidación de otra u otras
moléculas, usualmente de sustratos de origen biológico como los ácidos nucleídos o lípidos. 3 El consumo de estos
compuestos dentro de los alimentos, aporta beneficios al bienestar del cuerpo humano, relacionados con el desarrollo
esquelético, desarrollo del tubo neural, crecimiento, función inmune, desarrollo cognitivo y psicomotor, tratamiento y
prevención de enfermedades cardiovasculares, oftalmológicas y diversas formas de cáncer, entre muchos otros.4
El término “fenoles” comprende aproximadamente 8000 compuestos que aparecen en la naturaleza. Muchas de estas
estructuras, se encuentran de manera natural en especies vegetales y su distribución en los tejidos y células de éstas,
varía considerablemente de acuerdo al tipo de compuesto y a la especie. 6 Las frutas se destacan por su alto contenido
de compuestos fenólicos, prinicpalmente los flavonoles. Por ejemplo, las manzanas poseen un alto contenido de
quercetina (0,036 mg/g) y ácido clorogénico (entre 25,08 y 61,47 mg/L en el puré, y entre 38,85 y 81,28 mg/L en el
concentrado), compuestos que también se han encontrado en arándanos y melocotón en concentraciones de 26,43 y
50,60 mg/L; de otro lado, las fresas contienen kaempferol (0,012mg/g) y en el zumo de uva presenta valores de
quercetina entre 7 y 9 mg/L.6
La región de los Andes se caracteriza por tener una alta biodiversidad que resulta de la variedad de ecosistemas dada
su ubicación geográfica. La uchuva, el tomate de árbol y el lulo son ejemplos de frutas originarias de la región
interandina, específicamente de Colombia, Ecuador y Perú, en las cuales se ha determinado la presencia de
compuestos fenólicos. Del mismo modo se ha observado la influencia de las condiciones agroecológicas sobre los
compuestos fenólicos presentes en las frutas. A manera de ejemplo, se presenta un estudio comparativo, en el que se
encontró que la pulpa de lulo originaria de Ecuador tiene un mayor contenido de estos compuestos (91 ± 17 mg de
ácido gálico por cada 100 gramos de fruta fresca), que la pulpa originaria de Colombia y de Costa Rica (con
contenidos de 58,3 ± 2,39 y 48 ± 3, respectivamente).7
La champa es un árbol frutal originario de la Amazonía, perteneciente a la familia Myrtaceae, cuyo nombre científico
es Campomanesia lineatifolia. Su fruto es una baya pequeña (7 cm de diámetro y 22 g de peso como promedio) (Fig.
1), altamente perecedera y de sabor agradable dulce acidulado. Para su cultivo se recomiendan temperaturas entre 22
y 30ºC, con precipitaciones superiores a 1.500 mmol/L anuales y suelos de texturas francas a arcillosas. 8
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El fruto de esta planta, se caracteriza por su alta cantidad de ácidos (especialmente ácido cítrico) y concentración de
azúcares (12% - 13 % grados Brix).9 La acidez total titulable de esta fruta es del 3 %. A pesar de estas cualidades, su
almacenamiento y comercialización en fresco se han limitado por la falta de desarrollo tecnológico. Se estima que en
cosecha y poscosecha se pierde hasta el 97 % del producto. Sus únicas formas de aprovechamiento están asociadas a
la producción artesanal de pulpa, jugos, vino, sabajón, yogurt, diferentes tipos de postres, dulces y mermeladas, entre
otros.10 En ese sentido, el objetivo de este trabajo fue evaluar diferentes condiciones de extracción sólido-líquido para
la obtención de extractos enriquecidos en compuestos fenólicos del fruto C. lineatifolia, como paso inicial al
aprovechamiento sostenible de esta especie.
MATERIALES Y MÉTODOS
La champa (C. lineatifolia) procedente del municipio Miraflores (Boyacá-Colombia) fue adquirida por medio de
agricultores de la región gracias a la gestión realizada por la Secretaria de Agricultura del municipio. Posteriormente,
la fruta se sometió a un proceso de selección, limpieza, desinfección y despulpado. Luego de estos tratamientos, la
pulpa fue caracterizada mediante la determinación de la acidez, pH, índice de madurez y sólidos y almacenada a
-30 ºC hasta su liofilización.11
Previo a la extracción la pulpa de champa fue liofilizada -20°C y 1 Bar por siete días, en un equipo Super Modulyo
Pirani 50I (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Para las extracciones se tuvieron como variables el solvente y la
temperatura, cada una en tres niveles de variación. La extracción fue realizada por medio del método solido-líquido
(lixiviación) a temperaturas de 20, 50 y 70 °C, empleando como disolventes agua destilada, mezcla etanol/agua
(70:30) y mezcla etanol/agua (96:4), con un tiempo de extracción de 4 h y una relación soluto: disolvente de 1:10.
Para los ensayos se empleó etanol al 96% (J. T. Baker Chem. Co, Phillipsbury, NJ). Los extractos obtenidos, se
concentraron por medio de un rotavapor (IKA Rv10 CS1, 150 mmol/LHg y 50 °C) y luego se secaron en estufa a una
50 °C, hasta peso constante. Cada extracción se evaluó por triplicado.
La concentración de fenoles totales en los extractos secos se determinó por el método de Folin-Ciocalteu.12 Para la
cuantificación de la actividad antioxidante, se adaptaron técnicas descritas con anterioridad de acuerdo a lo
mencionado a continuación.13,14 Para esto se prepararon disoluciones acuosas de cada extracto a una concentración
2000 ppm, de esta disolución se tomaron 500 μL y se le adicionaron 2000 μL del reactivo DPPH 0,1 mmol/L,
posteriormente se dejó en reposo por 30 min en oscuridad a 25 °C. La absorbancia fue determinada a 517 nm en un
espectrofotómetro (Spectronic 20 Genesys). Los resultados fueron expresados en mmol/L TEAC/g de pulpa seca. La
curva de calibración, fue elaborada con una disolución de Trolox (0,139 mmol/L), se tomaron de 0-500 μL y se
completó el volumen de cada uno a 500 μL con agua destilada.
La evaluación de las condiciones de extracción se realizó aplicando un análisis factorial de dos factores evaluados en
tres niveles cada uno: temperatura (20, 50 y 70 °C), disolvente (etanol (96%), mezcla etanol/agua (70:30) y agua
(100%)), con un intervalo de confianza del 95%, utilizando el software Minitab 16.
Resultados y Discusión
Caracterización Fisicoquímica
En cuanto a la caracterización la fruta, presentó una acidez titulable de 2,38 ± 0,05 % m/v expresado como ácido
cítrico. Este resultado es más bajo que el encontrado en el primer día poscosecha por otros investigadores10 siendo
aproximadamente 2,59 % m/v, lo cual se puede relacionar directamente con el estado de madurez en el que fue
cosechado el fruto.10 Comparando la acidez con la de otras frutas, se encuentran similitudes con el anón 2,48 %,
mango de clase 2,23 % y guayaba agria 2,97 %.15
El pH medido a la temperatura ambiente en la ciudad de Bogotá (18 °C), fue de 2,70 ± 0,02. Los sólidos solubles en
la pulpa de champa fueron equivalentes a 12,2 ± 0.02 °Brix, valor similar al de un estudio anterior,10 donde el
máximo registrado para el fruto pos cosecha fue de 13,2 ± 0,11 ºBrix. En cuanto al índice de madurez de la champa
empleada en este trabajo, éste fue de 5,12, valor similar a los encontrados para frutas como el anón (3,90), corozo
(5,55) y mango de paloma (5,95).12
En el procesamiento de la fruta, desde su obtención hasta su transformación en pulpa seca liofilizada, los
rendimientos fueron los siguientes: lavado y desinfección 95,02 %, despulpado 72,72 %, liofilizado 22,99 %, para un
rendimiento global del 15,89 %. El bajo rendimiento en la liofilización, está asociado a que en esta etapa se logra
disminuir la cantidad de agua de la fruta hasta un 6 %.
Se presentan los resultados correspondientes al rendimiento de cada una de las extracciones (Fig.2), observando que
los ensayos que permitieron obtener la mayor cantidad de extracto fueron aquellos en los cuales se empleó agua como
disolvente (alcanzando masas superiores a 4,5 gramos, equivalentes a rendimientos superiores al 45 %). De otro lado,
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el ensayo que presenta el menor rendimiento fue el realizado con etanol al 96 % a una temperatura de 20 °C,
obteniendo una masa de 2,5864 ± 0,1748 g, lo cual se traduce en un rendimiento de 25,86 %. Adicionalmente, se
observa en relación a la temperatura de extracción, que para los tres disolventes a 70 °C se obtienen mayores masas
de extractos secos, no obstante, para los tratamientos con agua y mezclas agua etanol el efecto de la temperatura sobre
la masa de extracto no fue significativo estadisticamente, mientras que para los extractos obtenidos empleando etanol,
este efecto si resulta significativo a las condiciones probadas.
Estos resultados pueden ser explicados de investigaciones anteriores, donde se ha establecido que el incremento de
temperatura favorece las reacciones de división y el rompimiento de la pared celular, debido a que la energía térmica
aumenta la vibración molecular y por tanto la división y separación de los compuestos, lo que favorece la ruptura de
fuerzas intermoleculares y de algunos enlaces. Además, el incremento de temperatura también puede contribuir a la
activación de enzimas que participen de la descomposición de los compuestos complejos que crean puentes de
hidrógeno con los compuestos fenólicos, facilitando la extracción de éstos. Sin embargo, puesto que los fenoles no
son los únicos compuestos en la matriz estudiada, pueden existir otras interacciones que afectan la cantidad de masa
de extracto obtenida.16
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En este sentido, el haber obtenido la mayor concentración de compuestos fenólicos con la mezcla de etanol agua
(70:30), revela que existe una variedad de compuestos fenólicos que son más solubles en esta mezcla que en los
disolventes puros. Cabe resaltar que la solubilidad en agua y alcohol de los compuestos fenólicos, generalmente es
mayor para los compuestos difenoles y polifenoles, indicando que este tipo de compuestos pueden estar presentes en
la C. lineatifolia. Esto es propuesto, teniendo en cuenta que los flavonoides se caracterizan por ser compuestos
polifenólicos y solubles en agua, y por ende podrían estar dentro del perfil del fruto. 19
En relación a la temperatura de extracción, se puede afirmar que la cantidad de compuestos fenólicos extraída es
proporcional al aumento de la temperatura. En un estudio, en el cual se buscaba optimizar el proceso de extracción de
antocianinas y se evaluaba la capacidad antioxidante de berenjena (Solana melonera L.), se presentó un
comportamiento similar, es decir se observó que el aumento de la temperatura de extracción generaba un incremento
en el rendimiento de obtención del pigmento, lo cual se relaciona probablemente con un incremento de la solubilidad
de las antocianinas y por ende el coeficiente de difusión del disolvente líquido en la matriz sólida que favorecía la
cinética de desorción de los compuestos desde la matriz.20
En el caso de las extracciones con la mezcla etanol-agua, el comportamiento es diferente, puesto que para las
temperaturas de 20 y 50 °C no existen diferencias estadísticamente significativas en cuanto a la cantidad de
compuestos fenólicos extraídos, sin embargo, en el caso de las extracciones con la mezcla etanol- agua a 70 °C la
cantidad de estos compuestos fenólicos si incrementó de manera significativa. Continuando con el análisis, en las
extracciones en las cuales se empleó como disolvente agua pura, se observó que mientras la cantidad de compuestos
extraída incrementaba al pasar de una temperatura de 20 °C a una de 50 °C, cuando ésta se incrementaba nuevamente
desde 50 ºC hasta 70 °C, no se presentaron diferencias entre estos tratamientos.
Según los resultados del análisis estadístico de los datos de la obtención de compuestos fenólicos y teniendo en cuenta
las variables analizadas, se evidenció que el disolvente y la temperatura, tienen un efecto significativo en la
extracción de compuestos fenólicos (P < 0,05), mientras que la interacción de disolvente–temperatura no tiene un
efecto significativo frente a la extracción de éstos (P > 0,05).
Retomando los resultados presentados (Fig.3), la mejor condición de extracción se presentó usando como solvente la
mezcla de etanol/agua (70: 30) a una temperatura de 70 °C, registrando el máximo de 5272,51 ± 424,89 μgAG/g de
pulpa liofilizada (896,32 ± 72,23 μgAG/g de pulpa húmeda).
Para tener un escenario de comparación con otras matrices, se presenta información sobre la extracción de estos
compuestos desde otras matrices (matrices con cantidades de compuestos fenólicos similares, aclarando que las
condiciones no son las mismas que se manejaron en este trabajo y por tanto la comparación no puede ser directa)
(Tabla 1).
Al comparar la cantidad de compuestos fenólicos registrada por los diferentes autores, para diferentes frutas y
tubérculos con el valor obtenido de la champa de 896,32 ± 72,23 μgAG/g en base húmeda, se evidencia que esta fruta
contiene una cantidad de estos compuestos comparable.
De otro lado, en un estudio realizado sobre otra fruta del mismo género de la champa, la Guabiroba brasilera (C.
adamantium) se reporta una concentración de compuestos fenólicos de 7 240 - 21 190 μg AG/g de muestra en base
seca.24 En este sentido, la máxima cantidad de compuestos fenólicos extraída a partir de C. lineatifolia que fue 5
272,51 ± 424,89 μg AG/g de pulpa liofilizada es 27,17 % menor a la menor cantidad registrada para C. adamantium.
Continuando con los resultados, se presentan la cuantificación de la actividad antioxidante para cada tratamiento (Fig.
4). Se evidencia que los extractos con mayor actividad antioxidante fueron los obtenidos mediante el uso de la mezcla
de etanol/agua (70:30) a una temperatura de 70 °C y agua pura a 50 °C, alcanzando actividades de 45 mmol/L
TEAC/g de pulpa en base seca (equivalentes a 7,65 mmol/L TEAC/g en base húmeda). Mientras el extracto que
registró la menor actividad antioxidante (20,4430 ± 2,5764 mmol/L TEAC/g de pulpa en base seca, el equivalente a
3,475 ± 0,4379 mmol/L TEAC/g en base húmeda) fue el obtenido usando como disolvente la mezcla de etanol agua
(70:30) a una temperatura de 50 °C.
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Contenido de compuestos
Fruta / tubérculo Solvente Referencia
fenólicos
Tamarillo metanol-fórmico (3 %) 2010,40± 0,02 μgGA/g BH 5
Ciruela metanol-fórmico (3 %) 1700,48 ± 0,0007 μgGA/g BH 5
Naranja metanol-fórmico (3 %) 1511,26 ± 0,0162 μgGA/g BH 5
Patata. metanol-fórmico (3 %) 1441,44 ± 0,06 μgGA/g BH 5
Betarraga metanol-fórmico (3 %) 1423,45 ± 0,02 μgGA/g BH 5
Kiwi metanol-fórmico (3 %) 1298,90 ± 0,03 μgGA/g BH 5
Carambola metanol-fórmico (3 %) 1140,26 ± 0,02 μgGA/g BH 5
Papaya metanol-fórmico (3 %) 977,16 ± 0,02 μgGA/g BH 5
Cereza metanol-fórmico (3 %) 994,08 ± 0,0157 μgGA/g BH 5
Mango metanol-fórmico (3 %) 971,52 ± 0,0135 μgGA/g BH 5
Aguacate metanol-fórmico (3 %) 597,96 ± 0,0061 μgGA/g BH 5
Lulo Metanol-agua (1:1) 583 ± 23,9 μg AG/ g BH 21
Uchuva Metanol-agua (1:1) 404,5 ± 9,3 μg AG/ g BH 21
Caimito Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 830,0 ± 0,45 μgGA/g BH 21
Aguaje Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 2810 ± 2,25 μgGA/g BH 21
Algarrobo Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 970,2 ± 2,69 μgGA/g BH 21
Palma de aceite Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 800,5 ± 3,44 μgGA/g BH 21
Arazá Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 1110 ± 3,64 μgGA/g BH 21
Mandarina
Arrayana Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 1870 ± 3,87 μgGA/g BH 21
Curuba Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 6350 ± 2,71 μgGA/g BH 21
Borojó Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 418 ± 1,54 μgGA/g BH 21
Guava Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 1920 ± 11,5 μgGA/g BH 21
Marañón Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 4450 ± 15,2 μgGA/g BH 21
Cassabanana Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 157 ± 1,13 μgGA/g BH 21
Copoazú Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 403 ± 0,57 μgGA/g BH 21
Granadilla Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 707 ± 2,27 μgGA/g BH 21
Guayaba Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 3090 ± 6,81 μgGA/g BH 21
Macadamia Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 387 ± 1,24 μgGA/g BH 21
Papaya Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 368 ± 0,76 μgGA/g BH 21
Naranjilla Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 583 ± 2,39 μgGA/g BH 21
Manzana pera Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 408 ± 1,74 μgGA/g BH 21
Chontaduro Metanol-Agua (1:1, v/v pH 2) 657 ± 2,07 μgGA/g BH 21
Aguaymanto Metanol 1540 ±3 μgGA/g BH 22
Papaya Metanol 1670 ±0,3 μgGA/g BH 22
Tomate de árbol Metanol 1300 ±0,8 μgGA/g BH 22
Tuna Roja Metanol 520 ±5 μgGA/g BH 22
Naranja Metanol 3370 µg AG/ g BH 23
Kiwi Metanol 2780 µg AG/g BH 23
BH. Base Húmeda
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Teniendo en cuenta los resultados del análisis estadístico, se establece que las dos variables evaluadas (temperatura y
tipo de disolvente) y su interacción tienen un efecto significativo sobre la actividad antioxidante (P < 0,05).
Mediante la comparación de las actividades antioxidantes obtenidas en este estudio con la registrada en otro trabajo
para el tamarillo, que fue de 213,67 ± 0,06 mmol/L TEAC/g pulpa base húmeda, el extracto de Champa (C.
lineatifolia) cuenta con una menor capacidad antioxidante. 5
En otro estudio realizado por Muñoz y colaboradores, se encuentra la actividad antioxidante para diferentes frutas,
incluido el carambolo, cuya actividad fue de 8,00 mmol/L TEAC/g de pulpa en base húmeda, cantidad muy cercana a
la máxima obtenida en los extractos de la champa (C. lineatifolia).25 Frutos como el yacon, noni, guinda, tumbo
serrano y el camu-camu presentaron actividades superiores al 22,20 mmol/L TEAC/g de pulpa mayores a la obtenida
para la champa.
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CONCLUSIONES
Se observó que el rendimiento en la extracción es dependiente del tipo de disolvente empleado, condición asociada a
la polaridad del solvente y a los compuestos presentes en la champa. La mejor condición de extracción de las
evaluadas para la obtención de extractos enriquecidos en compuestos fenólicos, se presentó usando como disolvente
la mezcla de etanol (70:30) a una temperatura de 70 °C, con el que se obtuvieron 5272,51 ± 424,89 μgAG/g de pulpa
liofilizada (896,32 ± 72,23 μg AG/g de pulpa húmeda), concentraciones comparables con los de otras frutas que ya
han sido empleadas para la extracción de estos compuestos como chontaduro, granadilla, caimito, papaya, entre otras.
Los resultados de este estudio muestran el potencial de la champa como fuente de sustancias bioactivas, lo que abre
las puertas a nuevos trabajos que puedan seguir aportando a la generación de alternativas para su uso industrial.
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