Bioquímica - Laboratorio

“AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCION E

IMPUNIDAD”

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

“Extracción del ADN”

INTEGRANTES:
 Barriga Ordinola, Lida  Ramos Gallo, Olenka

 Castro Arias, Fabián  Sánchez Juárez, Luis Orlando

 Delgado Albán Cristina  Sandoval Rumiche, Milagros

 Fiestas Mena, Valeria  Vargas Jiménez, Freshia

 Litano castillo Gina Alexandra  Zapata Pasara, Angie Nicole

 Guerrero Valladolid Brigieth

DOCENTES:
 Vílchez Sánchez, Ronald Alexander

 Icanaque Ordinola, Juan Damián

PIURA – PERÚ
2019
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INTRODUCCIÓN:

El ADN es una molécula formada por dos cadenas de polinucleótidos unidas

por puentes de hidrógeno. Los nucleótidos que presenta son: la timina,
adenina, guanina y la citosina; las cuales forman los genes, que de acuerdo
a la secuencia de orden en que se encuentran determinan las características
biológicas de todo ser vivo. Además, ésta molécula de vida está constituido
de un azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato.

La mayoría de los organismos, están formados por millones de células, el

ADN está presente en todas las células de estos seres vivos. En las células
procariotas el ADN se encuentra disperso en el citoplasma. Y por el contrario
en las células eucariotas está ubicado dentro de un núcleo, donde está
asociado con proteínas y el ARN.

Por otro lado, el ADN al ser una molécula larga puede en conjunto ser
visualizada y además al estar en todas las células de todos los organismos,
puede ser extraído con facilidad de cualquier tejido, para ello se requiere un
procedimiento que implica la ruptura de las células, la separación del ADN de
otros componentes celulares y por último la precipitación de esta molécula de
vida.

En el presente informe se mostrarán los procedimientos que se realizó para

obtener el ADN de las células vegetales y animal, en este caso de la cebolla
y el hígado de pollo respectivamente.
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OBJETIVO:
 Extraer el ADN de diferentes muestras vegetales y animales.
 Identificar la presencia de ADN.
 Reconocer la propiedad de desnaturalización.
 Utilizar técnicas sencillas para extraer el ADN de un producto
natural.
 Observar la estructura fibrilar del ADN.

FUNDAMENTO:

- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer

lugar, tiene que romperse la pared celular (en células vegetales) y la
membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A
continuación, debe romperse también la membrana nuclear para dejar
libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los
lípidos de las membranas celulares y las rompen.

- La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es
soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y
precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos
ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los
cuales son dejados en la solución acuosa.
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II. MATERIALES

Materiales Imagen referencial

Cebolla

Hígado de pollo

Sal de mesa

Agua destilada
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Detergente lavavajillas

Alcohol 96º

Varilla de vidrio

Tubo de ensayo
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Mortero

Bisturí

Vaso de precipitado

Probeta
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III. PROCEDIMIENTO

1.- En el vaso de precipitado

de 50 ml agregamos 5 mL de
detergente lavavajillas

2.- Añadimos 10 gr de sal.

3.- Añadimos 25 mililitros de

agua destilada con la pipeta.

4.- Mantuvimos en un baño

de hielo esta disolución.

5.- Cortamos la zona central

del vegetal elegido en
cuadrados, o el hígado de
pollo

6.- Trituramos los trozos del

vegetal (en el vaso de
precipitado de 250ml) con un
poco de agua en la licuadora
(la mezcla de células y agua
debe ser opaca), o triturando
en el mortero con arena fina.

7.- Mezclamos en el vaso de

precipitado de 250mL el
triturado celular con la
disolución inicial del vaso de
precipitación de 50 mL
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8.- Agitamos vigorosamente

la mezcla durante al menos 5
minutos, sin formar espuma

9.- Pasamos el líquido

obtenido por un colador
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10.- Retiramos 5 ml. de la

mezcla a un tubo de ensayo y
añade con la pipeta 5
mililitros de alcohol enfriado
a 0º C. Se debe dejar escurrir
lentamente el alcohol por la
cara interna del tubo de
ensayo, teniéndolo éste
inclinado. El alcohol quedará
flotando sobre la mezcla.

11.- Dejamos reposar durante

5 minutos hasta que se forme
una zona turbia entre las 2
capas.

12.- Introducimos una varilla

justo debajo del alcohol (la
zona turbia que queda entre
las 2 capas). Remueve la
varilla hacia delante y hacia
atrás y poco a poco se irán
enrollando los fragmentos de
mayor tamaño de ADN.
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13.- Pasado un minuto,

retiramos la varilla
atravesando la capa de
alcohol, con lo cual el ADN
quedará adherido a su
extremo, con el aspecto de
un copo de algodón mojado.
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IV. RESULTADOS.
a) Muestra vegetal:

 Solución que contiene: 5 ml de detergente lavavajillas, 10 gr de sal, 25

ml de agua destilada y el triturado celular de la cebolla.

 Muestra de la solución anterior, tras haberse colado, junto con alcohol de

96°, se obtuvo una muestra filamentosa en la superficie de la solución,
está posee ADN y pequeñas partes del ARN.
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b) Muestra animal:

 Solución que contiene: 5 ml de detergente lavavajillas, 10 gr de sal, 25

ml de agua destilada y el triturado celular del hígado.

 Muestra de la solución anterior, tras haberse colado, junto con alcohol

de 96°. Se obtuvo una muestra filamentosa en la superficie de la
solución, está posee ADN y pequeñas partes del ARN.
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V. JUSTIFICACIÓN:
El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado
con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza
añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de
sodio, el cual limpia los utensilios removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma
manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las
proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que
estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula.

El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el
núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas)
las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría
imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su
forma y se vuelve inactivo.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de
permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los
cuales son dejados en la solución acuosa. El proceso de extracción de ADN desde una
célula es el primer paso para muchos procedimientos de los laboratorios de biotecnología.

La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso
la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El
alcohol etílico sirve para precipitar el ADN los factores que afectan el rendimiento,
calidad y pureza del ADN son: la cantidad de material de partida, número de copias de
las moléculas de ADN, cantidad de tejido, condiciones en las que se encuentra el
material de inicio (fresco, congelado, fijado),contaminantes e interferentes en el material
biológico.
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VI. CUESTIONARIO
1- ¿Qué finalidad tiene el detergente fuerte sobre las células?
El detergente fuerte usado en esta práctica de laboratorio tiene como finalidad
emulsificar los lípidos de la membrana citoplasmática, además de la nuclear, de las
células del tejido tanto animal (En el caso del hígado de pollo) como vegetal (En el caso
de la parte central de la cebolla) que estamos utilizando. Al emulsificarse los lípidos, las
membranas se rompen permitiendo que las moléculas de ADN salgan al medio externo.

2- Dibujar la acción del detergente sobre las células.

3- Investiga y explica brevemente en qué consiste la electroforesis y para que se

usa en el caso del ADN.

La electroforesis es una técnica utilizada para separar el ADN, el ARN, o moléculas o

proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una corriente eléctrica para
mover las moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros del gel actúan como
un colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las
grandes. Las condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden ajustar para
separar moléculas en el rango de tamaño que se desee.

El proyecto genoma humano se llevó a cabo con algo que se llama electroforesis capilar,
mediante la separación de ADN en piezas más cortas y su separación en geles de
electroforesis que permite a los patrones de A, C, T y G ser caracterizados.
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También son muy importantes en la investigación de proteínas, y en la investigación de

mutaciones genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están mutados, son con
frecuencia más o menos largos, y, por lo tanto, aparecen en un gel de electroforesis de
manera diferente de lo normal. Las pruebas de diagnóstico para muchos casos todavía
se realizan mediante electroforesis.

Es una técnica muy utilizada en la investigación básica, muy importante para la

comprensión de la función de genes y proteínas, pero ahora ha irrumpido en el área de
diagnóstico clínico y forense. Una electroforesis se realiza generalmente en una especie
de caja que tiene una carga positiva en un extremo y una carga negativa en el otro. Y
como todos aprendimos en las clases de física, cuando se pone una molécula cargada
en un entorno así, las moléculas negativas van a la carga positiva, y viceversa.

Al analizar las proteínas en un gel, en una de estas cajas, por lo general se toma la
proteína completa para ver lo grande que es. Cuanto más corta, más migran en el gel,
de modo que la proteína pequeña terminará en la parte inferior del gel, porque han ido
más lejos, y las más grandes terminarán quedándose en la parte superior. En el caso del
ADN, el ADN es una molécula muy larga, así que no se puede hacer un gel de una
molécula entera de ADN de una célula.

Es tan grande que nunca se metería en el gel, así que lo que hacen los científicos es
cortar el ADN con cosas como las enzimas de restricción, que cortan el ADN en pedazos
más manejables, y entonces esas piezas, dependiendo de lo grande que sean, migran
más o menos por el gel y terminan más arriba o más abajo.
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V. CONCLUSIONES

 Como pudimos apreciar en la práctica; utilizamos detergente líquido, sal y

las muestras biológicas (cebolla e hígado). La sal evita la unión de proteínas
al ADN, lo que hace que precipiten y se separen más fácilmente del ADN,
el detergente se utiliza para romper la pared celular y la membrana
plasmática, así mismo sirve para romper la membrana nuclear y llegar al
núcleo donde se encuentra el material genético o ADN y liberarlo.
Finalmente, el alcohol, precipitó el ADN que es soluble en agua e hizo que
se desenrolle cayendo hasta quedarse entre el agua y el alcohol, debido a
que son dos líquidos con distintas densidades.

 Además, aprendimos que para el aislamiento de una célula vegetal primero

necesitamos romper la pared celular, luego la membrana plasmática y
finalmente la carioteca (proceso que se llevó a cabo durante el
desarrollo de la práctica) lo que provoco así el desenrrollamiento
del ADN, para finalmente obtener el producto filamentoso de la
extracción, cabe resaltar que no es ADN puro ya que, entremezclado
con él, hay fragmentos de ARN e incluso algunas proteínas.

 El procedimiento de extracción del ADN, mediante elementos cotidianos,

se podría realizar de una manera fácil y sencilla, y sobre todo con
muchísimo cuidado.
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Bibliografía
1. HARPER. BIOQUÍMICA ILUSTRADA. 31st ed. Mexico: McGrawHill
Education; 2018.

2. Baynes JW. BIOQUÍMICA MÉDICA. 4th ed. ESPAÑA: ELSEVIER

SAUNDERS; 2015.