Este documento presenta los procedimientos para realizar las tincciones de Gram y Ziehl-Neelsen. La tinción de Gram se utiliza para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la retención diferencial de colorantes. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para identificar micobacterias y otros microorganismos ácido-resistentes que se tiñen de rojo, mientras que el fondo se contra-tiñe de azul. Se explican detalladamente los pasos para llevar a cabo ambas tincciones.
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Este documento presenta los procedimientos para realizar las tincciones de Gram y Ziehl-Neelsen. La tinción de Gram se utiliza para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la retención diferencial de colorantes. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para identificar micobacterias y otros microorganismos ácido-resistentes que se tiñen de rojo, mientras que el fondo se contra-tiñe de azul. Se explican detalladamente los pasos para llevar a cabo ambas tincciones.
Este documento presenta los procedimientos para realizar las tincciones de Gram y Ziehl-Neelsen. La tinción de Gram se utiliza para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la retención diferencial de colorantes. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para identificar micobacterias y otros microorganismos ácido-resistentes que se tiñen de rojo, mientras que el fondo se contra-tiñe de azul. Se explican detalladamente los pasos para llevar a cabo ambas tincciones.
Este documento presenta los procedimientos para realizar las tincciones de Gram y Ziehl-Neelsen. La tinción de Gram se utiliza para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la retención diferencial de colorantes. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para identificar micobacterias y otros microorganismos ácido-resistentes que se tiñen de rojo, mientras que el fondo se contra-tiñe de azul. Se explican detalladamente los pasos para llevar a cabo ambas tincciones.
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UNIVERSIDAD CATÓLICA
DE CUENCA UNIDAD ACADEMICA DE SALUD Y BIENESTAR FACULTAD DE MEDICINA
CATEDRA: MICROBIOLOGIA Y PARSITOLOGIA I
CATEDRÁTICA: DRA. ANDREA ASTUDILLO. INTEGRANTES: MARITZA ENRÍQUEZ ANDREA ESCANDON ANDRES FLORES PARALELO: TERCER CICLO DE MEDICINA “A” TINCIÒN Las células bacterianas son ricas en ácidos nucleicos tienen cargas (+) en los grupos fosfatos que se combina con las cargas (+) de los colorantes básicos. Los colorantes ácidos no tiñen a las células bacterianas, se utilizan para teñir el material de fondo para proporcionar un contraste de color TINCIÒN DE GRAM Tinción utilizada para separar las bacterias en Gram (+) y Gram (-). Se fija la muestra en un portaobjetos mediante calentamiento o tratamiento con alcohol. Se expone ala muestra a violeta de cristal. Se añade yodo para formar el complejo con el colorante principal. TINCIÒN DE GRAM En la decoloración con alcohol o acetona el complejo: • Queda retenido en las bacterias Gram positivas y • Se pierde en las Gram negativas. Los microrganismos Gram (-) retienen el colorante safranina( color rojo). TINCIÒN DE GRAM El grado en el que un microrganismo conserva el colorante depende de: • Del microorganismo • De las condiciones del cultivo. • Habilidades tintoriales del microscopista. TINCIÒN DE GRAM TINCIÒN DE GRAM TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la identificación de microorganismos patógenos, como M. tuberculosis o el género Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes: Franz Ziehl, un bacteriólogo, y Friedrich Neelsen, un patólogo. TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN Esta tinción demuestra la capacidad de ciertas bacterias de resistir a la decoloración por ácidos y alcoholes, lo cual se correlaciona con su alto contenido en lípidos en la pared celular y presencia de ácidos micólicos que aumentan el carácter hidrófobo. Una de las bacterias que presentan esta característica es Mycobacterium tuberculosis Principal causante de la tuberculosis. TINCIÒN DE ZIEHL NEELSEN Se utiliza para teñir micobacterias y otros microorganismos acido resistentes. Se tiñen con carbolfucsina básica. Resisten a la descoloración con soluciones de acido-alcohol. Se realiza contra tinción del fondo con azul de metileno. Los microorganismos aparecen de color rojo sobre un fondo azul claro. Técnica Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes: ácido periódico 58% carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado:
0,5 g fucsina básica
50 cc agua destilada 5 cc etanol absoluto 28,5 g cristales de fenol derretidos hematoxilina alcohol ácido 1%: alcohol de 35º ácido clorhídrico PROCEDIMIENTO Etapa 1:
PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO
Tomar una cantidad homogénea de esputo y extenderla de un extremo a
otro del portaobjetos para lograr una película homogénea Etapa 2
CUBRIR El EXTENDIDO CON FUCSINA FILTRADA
Etapa 3
CALENTAR HASTA EMISIÓN DE VAPORES TRES VECES DURANTE 5 MINUTOS
Etapa 4
LAVAR CON AGUA
Etapa 5
CUBRIR CON SOLUCIÓN DECOLORANTE DURANTE 3 MINUTOS
Solución decolorante: alcohol ácido
Etapa 6
LAVAR CON AGUA
Etapa 7
CUBRIR CON AZUL DE METILENO DURANTE 1 MINUTO
Etapa 8
LAVAR CON AGUA Y SECAR AL AIRE
ETAPA 10
OBSERVACION MICROSCÓPICA Y LECTURA DE EXTENDIDOS
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Células Color
Bacilos y microorganismos Rojo brillante Alcohol Acido-Resistentes.
Gérmenes, otros organismos y
Diferentes tonalidades de azules material de soporte.
