Método de GRAM

MÉTODOS DE TINCIÓN
COMPUESTO
Nallely Honores Rogel & Daniela Zumba

DRA RAMIREZ AMAYA JOSEFINA BACTERIOLOGÍA
MÉTODOS DE TINCION
COMPUESTOS
La tinción de GAM
La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una

técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios
microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico
danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la
que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder
estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió
en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino también
para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar
el antibiótico más adecuado para tratarla.
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de

cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga
bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de
color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después
de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se
haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de
bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y
serían Gram negativas.
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la
clasificación de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los grupos
responde de forma diferente a cada tipo de antibióticos, por eso es una técnica
útil para seleccionar el fármaco antimicrobiano inicial ante una infección. Hay
que tener en cuenta que en ciertas situaciones (como la sepsis) es muy
importante iniciar un tratamiento antibiótico adecuado de forma precoz, por eso
la tinción de Gram se pide de urgencia en muchas ocasiones. [ CITATION Dav18 \l
10250 ]
Métodos
1. realizar un frotis y cubrir la preparación con violeta de genciana durante

un minuto luego lavar con agua.
2. Cubrir la preparación con Licor de Gram que actua como mordiente,
durante un minuto, luego lavar con agua
3. Decolorar la preparación con alcohol 70° o alcohol cetona hasta eliminar
el exceso de violeta genciana, luego lavar.
4. Cubrir el frotis con fusciana o safranina; si se usa fascina fenicada diez
segundos es suficiente, si se utiliza safranina de 30 a 60 segundos.
Luego lavamoss con agua secamos con papel filtro y queda lista para
ser observada con el lente de inmersión
1.- Violeta de genciana-1min, lavar con agua.

2.- Licor de gram-mordiente, 1min; lavar con agua.
3.- Alcohol cetona-15seg, lavar con agua.
4.- safranina-30seg, lavar con agua y secar con papel filtro.
La tinción de Ziehl-Neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar
microorganismos alcohol-ácido resistentes (AAR). El nombre de este
procedimiento de microbiología hace referencia a sus autores: el bacteriólogo
Franz Ziehl y el patólogo Friedrich Neelsen.
Esta técnica es un tipo de coloración
diferencial, lo que implica el uso de
distintos colorantes con la finalidad de
crear contraste entre las estructuras
que se desean observar, diferenciar y
posteriormente identificar. La tinción de
Ziehl-Neelsen sirve para identifica
ciertos tipos de microorganismos. Algunos de estos microorganismos son
micobacterias (por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis), nocardias (por
ejemplo, Nocardia sp.) y algunos parásitos unicelulares (por ejemplo,
Cryptosporidium parvum). Muchas de las bacterias pueden clasificarse a través
de una técnica común llamada tinción de Gram.
No obstante, algunos grupos bacterianos requieren otros métodos para poder

identificarlos. Técnicas como la tinción de Ziehl-Neelsen requieren
combinaciones de colorantes con calor para fijar el primero a la pared celular.
Luego viene un proceso de decoloración que permite obtener dos resultados:

resistencia o sensibilidad a la decoloración por ácidos y alcoholes.
2- Alcohol Acido:
Reactivos:
a. ClH 3 ml
1- Carbofucsina: b. Etanol 95º 100 ml
a. Fucsina Básica 0,3 g 3- Contracolorante:

a. Azul de Metileno 0,3 g
b. Etanol 95º 10 ml
b. Agua 100 ml
c. Solución Fenol 5% 90 ml
Técnica
1. Realizar un frotis, cubrirlo con papa el filtra y luego colocar fucsina. Con
en el mechero la lamina portaobjeto durante 5 minutos, separándola
cada vez que emita vapores, luego lavar con agua
2. Decolorar el frotis hasta eliminar el exceso de fuscina fenicada con
alcohol acido unos segundos lavar con agua luego.
Cubrir el frotis con azul de metileno un minuto. Lavar con agua, secar
con papel filtro y queda listo para observar con el lente de inmersión
Los bacilos tuberculosos y leprosos denominados alcohol-
acidorresistentes (por resistir la decoloración con el alcohol y el ácido),
se tiñen de color rojo, es decir han captada la fascina fenicada. Estos
bacilos resaltan su coloración roja sobre el fondo azul oscuro el azul
metileno; ambos bacilos aparecen como bastones finos rectos y
ligeramente curvos
En conclusión, Las bacterias que se observan de color rojo se
denominaran alcohol ácidos resistentes y las que se observan de color
azul no acido resistentes.
La tinción de ALBERT
Técnica
COLORACIÓN DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER (coloración de
gránulos metacromáticos):
Es una coloración simple y de gran utilidad para el género Corynebacterium.
Muchos microorganismos, tanto procarióticos como eucarióticos, pueden

acumular
gránulos de volutina, que se tiñen con colorantes básicos tales como azul de
metileno. Estos
cuerpos de denominan también gránulos metacromáticos, porque presentan un

efecto
metacromático, viéndose rojos cuando se tiñen con un colorante azul. En las

micrografías
electrónicas aparecen como cuerpos extraordinariamente densos a los

electrones. Los gránulos
deben su comportamiento metacromático a la presencia de grandes cantidades

de polifosfato
inorgánico que constituyen una fuente de reserva intracelular de fosfato.
Reactivos:
 Azul de metileno 0,3 g
 Alcohol Etílico 95º 30 ml
 Agua Destilada 100 ml
Técnica:
1. Realizar un frotis, cubrir la preparación con colorantes de Albert durante

4 minutos luego lavar con agua
2. Cubirir el frotis con Lugol durante dos minutos, luego lavar con agua,
secar con papel filtra y queda lista para la observación con el objetivo de
inmersión.
3. Si bien es cierto este método es compuesto por haberse utlizado mas de
un colorante no es menos cierto que tambien podría encasillarse dentro
de los métodos de tinciones especiales ya que con este método
podemos observar las granulaciones metacromáticas del bacilo diftérico
las misma que se observa de una coloración verde oscura y su cuerpo
de una coloración verde palida. Cuando la bacteria teñida no es el
diftérico no se observara estes granulaciones y únicamente nos
limitaremos a ver las bacterias teñidas de color verde.
Bibliografía
Corralo, D. S. (16 de 05 de 2018). Webconsultas. Obtenido de
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
Briceño, K. (s.f.). Lifeder.com. Obtenido de https://www.lifeder.com/tincion-

ziehl-neelsen/
I, D. R. (1999). Microbiologia General. En Manual práctico de microbiología.
Edición Masson. Obtenido de
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-
content/uploads/2017/02/03-COLORACIONES.pdf
Yepez, D. W. (s.f.). Libro Practica Dr Yepez.

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Nallely Honores Rogel & Daniela Zumba

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de

1. realizar un frotis y cubrir la preparación con violeta de genciana durante

1.- Violeta de genciana-1min, lavar con agua.

No obstante, algunos grupos bacterianos requieren otros métodos para poder

Luego viene un proceso de decoloración que permite obtener dos resultados:

a. Fucsina Básica 0,3 g 3- Contracolorante:

COLORACIÓN DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER (coloración de

Es una coloración simple y de gran utilidad para el género Corynebacterium.

Muchos microorganismos, tanto procarióticos como eucarióticos, pueden

cuerpos de denominan también gránulos metacromáticos, porque presentan un

metacromático, viéndose rojos cuando se tiñen con un colorante azul. En las

electrónicas aparecen como cuerpos extraordinariamente densos a los

deben su comportamiento metacromático a la presencia de grandes cantidades

inorgánico que constituyen una fuente de reserva intracelular de fosfato.

1. Realizar un frotis, cubrir la preparación con colorantes de Albert durante

Briceño, K. (s.f.). Lifeder.com. Obtenido de https://www.lifeder.com/tincion-

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