IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA DISOLUCIÓN

DE CUSO4.5H2O, POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE UV-VIS, MEDIANTE REGRESIÓN

LINEAL SIMPLE (RLS), APLICANDO EL MÉTODO DE ADICIÓN ESTÁNDAR.
Jesús David Bolaño Jiménez1, Marcos Barros Jiménez1

1
, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del atlántico, Km 7 Via Puerto,
Barranquilla, Atlántico.
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Abstract.

En esta práctica determinamos la concentración de una muestra problema mediante la ecuación

de la recta. Utilizando un espectrofotómetro y basándonos en la ley de Beer obtuvimos las
absorbancias de diferentes muestras de una concentración determinada, también el coeficiente
de absortividad molar y realizamos una curva de calibración.

KEYWORDS O PALABRAS CLAVES

Espectrofotometría, Ley de Lambert-Beer, absortividad molar, Uv-Vis, Absorbancia,

Transiciones electrónicas, adición estándar.

1. INTRODUCCION

Para que la radiación electromagnética incidente, interaccione con la materia tiene que tener una
λ del mismo tamaño o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por ello que la
radiación de la región del ultravioleta (≈ 1-400 nm) nos permite obtener información de las
transiciones electrónicas de las moléculas.

Figura 1. Diagrama básico del espectro electromagnético.

La espectroscopia UV-Vis se basa en el análisis de la cantidad de radiación electromagnética

(en el rango de longitudes de onda del ultravioleta y visible) que puede absorber o transmitir una
muestra en función de la cantidad de sustancia presente. Todas las técnicas de absorción
suponen que cuando una radiación incide sobre una muestra se produce una absorción parcial de
esta radiación, lo que hace que se produzca una transición entre los niveles energéticos de la
sustancia: átomo, molécula o ión, X, pasando esta al estado excitado, X*, el resto de radiación
es transmitida. Así analizando una u otra podemos relacionar la cantidad de especie activa
presente en la muestra.

X + hv  X*
X*  X + hν´, (v, < v)

∆E = Ef -E0 = hν

Figura 2. Nivel energético de la sustancia X.

∆E es característico de cada sustancia, lo que nos proporciona un análisis cualitativo de un

analito en una muestra. Además la cantidad de E absorbida o transmitida es proporcional a la
concentración de X con lo que también podemos hacer un análisis cuantitativo. La
proporcionalidad ente intensidad de luz absorbida o transmitida y la concentración de analito
viene definida por la ley de Lambert-Beer.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.
Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina un salto
desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado de mayor energía (estado
excitado), E2. Y sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada
molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas.
Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molécula esto
es, su espectro de absorción constituye una seña de identidad de la misma. Por último, la
molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético fundamental.
En espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación
electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En espectrofotometría
de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible
(400- 780 nm). Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado excitado
(A*) y el fundamental de la molécula (A) debe ser exactamente igual a la energía del fotón.
Cada molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su
estructura electrónica y que la distinguen del resto de moléculas.
Como consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la
longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad de cada molécula. Dos moléculas
distintas presentarán espectros de absorción distintos, como se representa esquemáticamente en
la siguiente figura:

Figura 3. Espectros de distintas sustancias.

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 Figura 4. Transiciones moleculares de las sustancias.

El espectrofotómetro es el equipo que utilizamos para medir la absorción o transmisión de luz

por parte de una muestra. Consta de los siguientes partes:
 Fuente de luz: suele ser una lámpara que emite una luz (por incandescencia de un
filamento) policromática, es decir que contiene distintas longitudes de onda con
distintas intensidades, I0.
 Sistema óptico: a través de filtros, lentes y redes de difracción se focaliza el haz de luz y
se selecciona una longitud de onda fija.
 Compartimiento muestra: es donde se coloca la muestra, con un espesor conocido,
normalmente disuelta y en una cubeta de 1cm de paso óptico, sobre la que se hace
incidir el haz de luz monocromática
 Sistema óptico: recibe la luz transmitida por la muestra, la focaliza y selecciona por
longitudes de onda
 Detector: recibe la señal de la intensidad de la luz transmitida a cada longitud de onda y
la transforma en señal eléctrica que un ordenador pueda procesar.

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 Figura 5. Diagrama tradicional del espectrofotómetro.
Para realizar un espectro de una muestra determinada se conecta la fuente de luz que como ya
hemos dicho emite luz policromática, a través del sistema óptico voy irradiando la muestra con
luz en un intervalo de λ y detectando cuanta de esa luz incidente I0, es transmitida, I, por la
muestra a cada λ.

Recta de calibrado. Seleccionando la longitud de onda máxima a la que absorbe mi sustancia y

utilizando unas muestras patrón, de concentración conocida puedo obtener los datos de
absorbancia frente a concentración, A vs [ ], que debidamente representados dan lugar una recta
(Ec. Lambert-Beer) de calibrado. A través de una recta de calibrado este método nos sirve como
análisis cuantitativo de una sustancia determinada.

Figura 6. Curva de calibrado.

Para una muestra de concentración desconocida tan solo hay que medir su absorbancia a la
longitud de onda del máximo y extrapolar en la curva de calibrado el valor de la concentración

La ley de Beer-Lambert, afirma que la absorbancia es directamente proporcional a la

concentración de la especie absorbente. Para conocer cómo se expresa la ley de Beer, se
imagina que una luz de potencia radiante P pasa a través de una capa infinitamente fina de la
disolución de espesor dx. La disminución de potencia (dP) es proporcional a la potencia
incidente (P), a la concentración de la especie absorbente, C, y al espesor de la sección

( dx ) :dP=−β Pc dx (1)

Donde 𝛽 es una constante de proporcionalidad, y el signo menos significa que P disminuye al

aumentar x. Es decir que la disminución de fotones (potencia) es proporcional al flujo incidente
de fotones (Potencia). La ecuación (1) se resuelve por variable separada y se obtiene:

P b
−dP dP
=βc dx →−∫ =∫ dx
P Po P 0

→−ln P−¿ ¿

Po
→ ln =βcb
P

Convirtiendo los logaritmos neperianos en decimales y usando la relación Z=¿ Se obtiene la

ley de Beer.

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 ( PoP )=( lnβ10 )cb
log → A=βcb

La absortividad molar 𝜀 puede valer desde 0 (si la probabilidad de absorción del fotón es 0)
hasta aproximadamente 105 𝑀−1 𝑐𝑚−1 (cuando la probabilidad del fotón se acerca a 1). A y 𝜀
depende de la longitud de onda de la luz.

El Método de Adición Patrón Se realiza añadiendo cantidades conocidas y crecientes de analito

a distintas porciones de muestra para construir la curva de calibrado (se debe incluir la muestra
sin adición). Se representa la señal obtenida para cada porción frente a la concentración o
cantidad añadida a dicha porción. La concentración de la muestra se obtiene como el punto de
corte de la prolongación de la recta en el eje de abscisas. Matemáticamente se iguala la señal a
cero y se despeja la concentración (cambiando de signo). Se aplica cuando se observa efecto
matriz. Pero, ¿cómo se detecta dicho efecto matriz? Se puede comprobar de forma sencilla
representando los datos del calibrado externo y los de adición patrón en el mismo gráfico. Si las
rectas son paralelas, es decir, tienen la misma pendiente, no existirá efecto matriz. En caso
contrario si habrá efecto matriz.

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2. EXPERIMENTAL

Preparación de la
disolución madre
CuSO4*5H2O

Principalmente se preparó una disolución

patrón (Madre) de CuSO4*5H2O de
concentración 15mM.

Preparación de las
disoluciones de
CuSO4*5H2O

Estas disoluciones fueron preparadas

siguiendo al pie de la letra las
indicaciones dadas en la tabla 1.

Espectro de absorción
del CuSO4*5H2O

Se determinó el espectro de absorción de

Abs de la disolución madre en UV-vis
(1000-400 nm) y se identificó la longitud
de onda máxima.

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3. RESULTS AND DISCUSSION

Tabla 1. Preparación de las disoluciones estándar de CuSO4*5H2O.

Disoluciones Volumen de la muestra Volumen de la disolución
problema (mL) estándar CuSO4*5H2O
Std 0 3 0
Std 1 3 1
Std 2 3 2
Std 3 3 3
Std 4 3 4
Std 5 3 5

Todos los resultados obtenidos en la práctica son los siguientes:

mol g
0,015 × 249,689 ×0,025 L=0,0936 g de CuSO 4∗5 H 2O
L mol

(0,0936 g)(100 % )
Gramos puros= =0,0945 g de CuSO 4∗5 H 2O
99 %

Los verdaderos gramos tomados en el laboratorio se dan a continuación:

g de CuSO 4∗5 H 2 O=0,0950 g

Por ende;

0,0950 g 0,0003804 mol mol

= =0,0152 =0,0152 M
g 0,025 L L
249,689
mol

Para hallar las concentraciones de las disoluciones estándar a partir de la solución madre se
realizaron los siguientes cálculos:

(0,0152 M )(0,0 L)
C= =0,0 M
0,025 L

(0,0152 M )(0,001 L)
C= =0,0006088 M
0,025 L

(0,0152 M )(0,002 L)
C= =0,0012176 M
0,025 L

(0,0152 M )(0,003 L)
C= =0,0018264 M
0,025 L

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 (0,0152 M )(0,004 L)
C= =0,0024352 M
0,025 L

(0,0152 M )(0,005 L)
C= =0,003044 M
0,025 L

Tabla 2. Concentración de los estándares.

Estándares Concentración (M)
Std 0 0
Std 1 0,0006088
Std 2 0,0012176
Std 3 0,0018264
Std 4 0,0024352
Std 5 0,003044

La concentración de cada una de las disoluciones estándares va aumentando a medida que se le

añade cierta cantidad de mL de la disolución patrón, esto indica que van aumentando el número
de mmoles presentes en la disolución.

A estas disoluciones se le fue medida su absorbancia a una longitud de onda máxima de 828 nm,
los resultados obtenidos se tabulan a continuación:

Tabla 3. Absorbancias obtenidas.

Estándares Concentraciones (M) Absorbancias (λmax)
Std 0 0 -0,002
Std 1 0,0006088 0,016
Std 2 0,0012176 0,011
Std 3 0,0018264 0,016
Std 4 0,0024352 0,014
Std 5 0,003044 0,033

abs
0.04
0.03
0.03 f(x) = 8.17 x + 0
R² = 0.68
Absorbancia

0.02
0.02
0.01
0.01
0
0 0 0 0 0 0 0 0
-0.01
Concentración

Figura 7. Curva de calibración Absorbancia vs Concentración.

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Con la ecuación de la recta podemos hallar la concentración de la muestra desconocida
mediante extrapolación lineal:

y=mx+b

y=8,1742 x +0,0021

0,0021
x= =0,0002569
8,1742

El valor de x hallado anteriormente corresponde a la concentración de la muestra problema

(MP) en 3 mL de disolución.
A continuación para poder determinar la concentración verdadera de la muestra problema, es
decir, la concentración en un volumen de 25 mL (volumen hasta donde fue aforada la
disolución), se realizó el siguiente factor de dilución:

( 0,0002569 M )(0,003 L)
[ MP ] = =0,000030828 M
0,025 L

Disolución Concentración
Muestra Problema 0,000030828

El coeficiente de absortividad molar de la sustancia patrón viene dado por la ecuación de la

recta, este coeficiente toma el valor de la pendiente, sabiendo que:

y=mx+b

y=8,1742 x +0,0021

Por ende, la pendiente (m) toma el valor de m= 8,1742 y el coeficiente de absortividad molar
(exilum) toma el mismo.

En la curva de calibración de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO 4*5H2O), se intentaba

observar la relación lineal que presenta la concentración vs absorbancia según la ley de Beer-
Lambert, esta relación no fue obtenida con precisión y exactitud debido a que se tenía una
disolución contaminada. Cuando una sustancia se encuentra contaminada se hace referencia que
se le introducen en una mezcla de reacción, materiales que no le corresponden a dicha sustancia;
esto se dedujo debido a que se hicieron una serie de repeticiones en la preparación de los
estándares para verificar el no tener algún error, luego se tomó el mejor método o técnica para
lograr dicha preparación, siendo este un método con pocos pasos para que así la acumulación de
errores fuera mínima, también se tomaron las medidas necesarias para que los errores personales
fueran lo más mínimos posibles, por ende al llevar nuestra disolución al espectrofotómetro se
esperaba un espectro muy cercano al teórico de esta sustancia, por lo contrario este arrojo un
espectro (barrido de 1000-400) el cual mostro varias longitudes de onda máximas (806 nm, 828

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nm, 874 nm), por ende se estipulo que la sustancia primaria ( sulfato de cobre pentahidratado) se
encontraba contaminada, el efecto de este se nota claramente también por el lado de las
absorbancias, ya que tomo valores muy atípicos, debido a que debía de aumentar conjunto las
concentraciones, a diferencia esta aumentaba y disminuía de una manera poco proporcional, el
espectro obtenido es el siguiente:

Abs vs λ
0.0500
0.0450
0.0400
0.0350
Absorbancia

0.0300
0.0250
0.0200
0.0150
0.0100
0.0050
0.0000
300.0 400.0 500.0 600.0 700.0 800.0 900.0 1000.0 1100.0
λ nm

Figura 8. Espectro de CuSO4*5H2O

Figura 9. Espectro del CuSO4*5H2O [0,008 M]

Al comparar estos espectros, podemos observar claramente que e1 observado en la figura 8 no

presenta picos bien definidos, esto se da más que todo cuando hay interacciones con el
disolvente, lo cual le confiere poca selectividad a la técnica. en el espectro de la figura 8, el que
fue obtenido prácticamente se presenta variedad de “picos” a longitudes de onda muy altas, esto
de manera inmediata nos hace referencia a que la muestra se encuentra contaminada de cierta

10
manera, por ende al medir los espectros a una longitud de onda máxima cualquiera la señal
analítica arrojada será errónea, esto influye directamente la linealidad en la curva de calibrado,
ya que las concentraciones no serán proporcionales a la señal analítica (absorbancia).

4. CONCLUSIONS

Debido a que la solución patrón se encontraba altamente en estado de contaminación, no

se logró observar con claridad la linealidad descrita por la ley de Beer-Lambert.
Conjunto a lo anteriormente dicho se le puede añadir que los valores obtenidos también
tienen cierto error debido a la incertidumbre que trae cada uno de los materiales usados
en la preparación de las disoluciones.
También se concluye que una manera o técnica para que los errores en una preparación
sean mínimos, es hacer la elaboración de la sustancia en el menor número pasos
posibles, esto con el fin de que el error también disminuya de una manera muy
perceptible para nosotros.
Finalmente antes de realizar cualquier tipo de medida u otro tipo de “experimento” se
debe de tener muy en cuenta que el reactivo implementado se encuentre en el mejor
estado posible, que las condiciones sean las más adecuadas para el procedimiento, para
así no tener pérdidas significativas debido a lo costoso que puede ser tomar estas
mediciones.

REFERENCES

[1] Skoog D, Holler F, Crouch S. Principios de Análisis Instrumental. Cengage Learning

Editores,
6ta edición. México 2008.

[2] Kenneth A. Rubinson y Judith F. Rubinson. Análisis Instrumental Prentice Hall. Madrid
2001.

[3] Rousseau F, Rouessac A. Análisis químico: métodos y técnicas instrumentales modernas.

Mac
Graw Hill/ Interamericana de España, Madrid 2003

[4] Skoog, d.a.; leary j.j., holler f. james; principios de análisis instrumental, 5° ed.; ed. mcgraw-
hill (1998).

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