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ACTIVIDADES bioquimica 2

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ACTIVIDADES

1. Indica en que se basa la espectrofotometría de absorción molecular y que


tipo de análisis se realiza.
La Espectrometría o Espectroscopia de Absorción Molecular (EAM) se basa en la
capacidad de las moléculas de absorber una parte de la radiación que reciben. Las
λ que cada sustancia absorbe (que no pueden atravesarla) son características de la
molécula y, en consecuencia, se pueden usar para identificarla.
➢ El análisis por EAM puede ser cuantitativo o cualitativo:
1. Análisis cualitativo. Se realiza con radiaciones de IR comparando el espectro de
absorción de la muestra problema con espectros patrones de composición conocida
e identificar las bandas comunes de absorción. En el laboratorio clínico se usa
principalmente para análisis de la composición de cálculos urinarios.
2. Análisis cuantitativo, que se realiza con radiaciones de UV-VIS y se fundamenta
la ecuación de Lambert-Beer para calcular la concentración del analito.

2. Explica como una especie química cambia su estructura electrónica global


y cómo se denominan dichos cambios.
Una especie química, según su estructura, (atómica, iónica o molecular), cuando
absorbe energía lumínica por colisión con un fotón, éste le comunica una cantidad
de energía que puede modificarla y hacerla pasar desde el estado de reposo,
fundamental o de menor energía, a un estado excitado o de mayor energía.
E1 (estado fundamental) → E2 (estado excitado) (radiación)
• En este estado, el aumento de energía produce cambios en los enlaces y en el
movimiento de los electrones en los átomos, de manera que cambia su estructura
electrónica global. Estos cambios se conocen como transiciones.

• Las transiciones que pueden producirse en una molécula dependen del tipo de
enlaces que existan entre sus átomos y de si la energía absorbida es suficiente para
producir tales transiciones. • Por eso, una molécula tiene la capacidad de absorber
REM a unas determinadas λ: a aquellas que tienen la energía igual a la necesaria
para pasar del estado fundamental al excitado. 3. Espectrofotometría de ab

3. ¿Qué cambios son capaces de producir las radiaciones UV-VIS sobre una
molécula?
transiciones electrónicas
4. Detalla cómo una molécula puede pasar del estado excitado al estado de
reposo.
El paso del estado excitado a estado de reposo puede hacerse también por diversos
caminos, inversos a los que se han citado, y pueden conllevar un descenso de
energía en forma de colisiones, que producen calor, también puede que ocurra la
transferencia de energía por emisión de un fotón, que es en lo que sucede en
algunos fenómenos de Espectroscopía.
5. ¿Qué es necesario para que una molécula absorción un determinado tipo
de radiación?

Para que se produzca la absorción de un cierto tipo de radiación, cada fotón


incidente debe tener una energía exactamente igual a la diferencia de energía
entre el estado basal (o fundamental) y el estado excitado

6. Razona que trata de decir la teoría cuántica cuando predice que el proceso
de transferencia de energía no puede ser parcial.

La “teoría cuántica” predice que si existe una colisión entre un fotón y una especie
receptora (átomo, ión o molécula), el proceso de transferencia de energía no puede
ser parcial, es decir, o se da la cantidad exacta de energía para que ocurra la
excitación o la energía no es absorbida. Este proceso se representa así:

M + h. ʋ = M*

M= especie no excitada
h. ʋ= energía del fotón
M*= especie excitada, que ha absorbido la radiación.

7. ¿Qué mide la absorbancia y la transmitancia en una sustancia problema en


disolución?

Absorbancia Mide la cantidad de radiación absorbida por el medio.


Transmitancia cociente entre la intensidad de la luz transmitida (It) (dejada pasar a
través de una muestra en solución) ,entre la intensidad de luz incidente (Io)
LA CANTIDAD DE LUZ QUE ATRAVIESA LA MUESTRA

8. Indica que es el espectro de absorción y cómo se representa gráficamente


.¿El espectro de una molécula es igual al de un átomo? Razona tu respuesta.

El ESPECTRO DE ABSORCIÓN, es el conjunto de bandas (transiciones


electrónicas) que indican la cantidad de luz absorbida por una sustancia a diferentes
valores de longitud de onda y es único para cada elemento o entidad química, por lo
que podemos decir que es su huella dactilar y permite su identificación mediante
comparación con patrones.
El espectro de absorción de una molécula es continuo, debido a que las
transiciones posibles son muy numerosas, es decir, existen en la molécula un
gran nº de niveles cuánticos, lo que supone una gran cantidad de líneas
espectrales, tantas que se superponen entre ellas dando lugar a los espectros de
bandas que abarcan un intervalo considerable de longitudes de onda.
2. El espectro de absorción de un átomo (el de un ión es muy semejante), es
diferente debido a que las transiciones son menores y el espectro es un espectro
de picos, no un espectro continuo.

9. Explica que enunció la ley de Lambert-Beer

La Ley de Lambert-Beer enuncia que la absorbancia de un analito es directamente


proporcional al coeficiente de absorción de la molécula, a la distancia recorrida por
el haz de luz en la disolución (ancho de la cubeta) y a la concentración de dicho
analito.
➢ Matemáticamente se expresa como: A = a . b . c a= cte de proporcionalidad
(absortividad) b = cm c = g/l

Si la concentración viene en mol/l: A = ε . b . c ε= coef de absorción molar o


coef de absorción ε = cte b = cm c = mol/l

10. ¿Qué permite el coeficiente de extinción molar?


identificar la sustancia.
obtener la concentración a partir de la medición de la Absorbancia.

El coeficiente de extinción molar es constante para un compuesto dadas unas


características establecidas, la Ley de Beer (en el intervalo de linealidad) permite:

•Conociendo el compuesto y, por lo tanto, su coeficiente de extinción molar, obtener


la concentración a partir de la medición de la Absorbancia.
Conociendo la concentración y midiendo la Absorbancia, calcular el coeficiente de
extinción molar y, por tanto, identificar la sustancia.

11. ¿Cómo sabemos que estamos ante una concentración falsa? ¿Qué
debemos hacer?

Para que esta Ley de Lambert-Beer se cumpla la concentración del analito debe
estar en los límites de linealidad, es decir, en el intervalo de concentraciones entre
las cuales existe una relación lineal entre la concentración y la absorbancia

La lectura de una Absorbancia fuera de la línea de linealidad proporciona


concentraciones falsas por lo que tendríamos que diluir la muestra para que su
concentración quede dentro de los límites de linealidad.

12. Indica al menos dos desviaciones instrumentales y químicas de de la Ley


de Lambert-Beer. RAZONA TU RESPUESTA
1. Tenemos una disolución con una transmitancia del 80%, ¿cual será su
absorbancia? T

A= 2-log(%T) =2-Log 80= 2-1.903=0.10 unidades de absorbancia

2. Tenemos una solución con una absorbancia de 0,74, ¿Cuál es su


transmitancia en porcentaje?

A= 0.74

%T= Antilog(2-0.74) =antilog(1.26)=18.19=18.2%

A= LOG 1/T

10^A= 1/T

13. Si en el caso anterior aumentamos los miligramos de soluto ¿ Que ocurre


con la absorbancia, aumenta o disminuye? ¿Y con la transmitancia?

Aumenta la absorbancia
Disminuye la transmitancia

PROBLEMAS

EJERCICIOS DE ABSORBANCIA, TRANSMITANCIA Y APLICACIÓN DE LA LEY


DE LAMBERT-BEER

1.Durante un experimento se ilumina una muestra con luz roja de un láser de


helio-neón, cuya longitud de onda es 633 nm. Un electro-fotómetro mide 30
mV cuando la luz del láser incide directamente y 10 mV cuando pasa a través
de una muestra. Calcula la transmitancia y la absorbancia

T=I/IO=10/30=⅓
A=-LOG(⅓)=log 3=0.48
A = 0.48
2. Si la misma sustancia se coloca en recipiente que tiene la mitad del espesor
del usado en el ejemplo 1, diga cuánto marcará el electro-fotómetro, cuando
se hace pasar por la muestra la luz del láser de helioneón. Calcula la
absorbancia y la transmitancia.

absorbancia es proporcional al grosor óptico disminuye a la mitad

A= 0,24.
La transmitancia

T = 10-A = 10^(-0.24) = 0,575

%T= antilog(2-0.24)= antilog 1.76=57.5


T= 0.575

El espectrofotómetro indica

0.575*30mV= 17.4mV

3. Se quiere determinar la absortividad molar de cierto compuesto patentado


que se encuentra en disolución. Para ello se ilumina la solución con luz
proveniente de una lámpara de sodio de 589 nm. La muestra será colocada en
un portamuestra de 1,50 cm de espesor. Se parte de una solución de
concentración 4,00×10^-4 moles por litro y se mide la transmitancia dando
como resultado 0,06. Determine con estos datos la absortividad molar de la
muestra.

A = ε⋅C⋅d

A = – log (T)
A = – log (0,06) = 1,22
ε = 1,22/(4,00×10^-4 M⋅1,5 cm)=1.22/0.0006mol*L*cm

ε=2030 (M⋅cm)^-1

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