Nombres: Viviana Dorado, Ailyn Omen, Daniela Tosse

TALLER RECUENTO MICROBIANO

Prof. SANDRA RIVAS ZÚÑIGA

1. Si partimos de 104 ufc/ml en un cultivo que tiene un tiempo de generación de 2 h,

¿cuántas células tendremos al cabo de 4, 24 y 48 h de cultivo?
Solución:

No = 104 ufc/mL
g = t/n
Nf = ? (evaluada en t = 4h, 24h y 48h)

Formula de Nf = No * 2n
 Para t = 4h
t 4h
n= = =2
g 2h
Ahora:
N f =No∗2 n=104∗22=40 x 103 ufc /mL
 Para t = 24h
t 24 h
n= = =12
g 2h
Ahora:
N f =No∗2 n=104∗212=41 x 106 ufc /mL
 Para t = 48h
t 48 h
n= = =24
g 2h
Ahora:
N f =No∗2 n=104∗224=17 x 1010 ufc/mL

2. Calcular el tiempo de generación de un microorganismo en un cultivo que pasa de

2x104 ufc/ml a 7x105 ufc/ml en 2.5 h.
Solución:

2x104 ufc/mL 7x105 ufc/mL

g=?

Formula de Nf = No * 2n

log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 7 x 105 )−log ⁡(2 x 10 4)

n= = =5,13 generación
0,301 0,301

t 2,5 h horas
g= = =0,487 h ≈ 0,5
n 5,13 generación generación
 3. Calcular la tasa de crecimiento (μ, expresada en h -1) de un cultivo bacteriano que
pasa de producir 3.0 g/l de proteína total a producir 10 g/l en 50 min.
Solución:

µ = ? (h-1)
3,0 g/L proteína 10 g/L proteína en 50 min

Formula K = n/t

log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 10 )−log ⁡( 3,0)

n= = =1,737 generación
0,301 0,301

Pasamos 50 min a horas

1h
50 min ¿ =0,83 h
60 min

Por lo tanto:
n 1,737 generación generación
K= = =2,085
t 0,83 h h

4. La tasa de crecimiento de un cultivo bacteriano es μ= 1.5 h -1. Si partimos de una

población inicial de 102 ufc/ml, ¿Qué número de bacterias por mililitro (ufc/ml)
habrá después de un cultivo de 10 h? ¿Cuánto es el tiempo de generación del
cultivo?
Solución:
µ = 1,5 h-1
No = 102 ufc/mL
t = 10h
N=?
g=?
1
μ=V =
g
Despejamos g de la formula anterior, entonces:
1
g= =0,667 h
1,5 h−1
 Para hallar n despejamos de la formula g = t/n
10 h
n= =14,99 ≈15
0,667 h
 Para hallar N
N=10 2∗215=33 x 106 ufc/mL

5. Una muestra de 100 ml de leche contiene dos poblaciones bacterianas: (A)

Lactobacillus lactis y (B) Brucella abortus, se somete a un proceso de
pasteurización alta (72°C, 15 seg), tras el cual sobreviven 105 bacterias de la
población A y 10 bacterias de la población B. La muestra de leche se deja a 25°C
 durante 48 horas. Calcular: (1º) El tiempo de generación de Lactobacillus lactis a
25°C si después de las 48 horas tenemos 10 14 bacterias. (2º) El número de bacterias
de la población B (Brucella abortus) tras las 48 horas de incubación si el tiempo de
generación es de 90 minutos. (3º) El número de bacterias totales en un mililitro de
leche tras las 48 horas de incubación.
Solución:

100mL de leche

A B
Lactobacillus lactis Brucella abortus
To = 72°C To = 72°C
to = 15 seg to = 15 seg
No = 105 No = 10
Tf = 25°C Tf = 25°C
tf = 48h tf = 48h
Nf = 1014 bacterias n = 90 min

1. Tiempo de generación de A:
log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 1014 )−log ⁡(105)
n= = =39,79 generación
log(2) log(2)

Para hallar g usamos la fórmula:

t 48 h h
g= = =1,206
n 39,79 generación generación

2. Número de bacterias en población B:

Pasamos 50 min a horas:

1h
90 min ¿ =1,5 h
60 min

Ahora aplicamos la formula Nf = No * 2n

Nf =No∗2 n=10∗21,5 =28 x 108

3. Número totales de bacterias en 1mL de leche

t = 48h
μ
log ( 1018 ) −log ( 1014 )= ( 48 h )
2,303
μ=0,288
0,693
g= =2,40 h
0,288
6. Un cultivo bacteriano tiene 109 bacterias de una población A, 10 bacterias de una
población B y 103 bacterias de una población C. (1º) ¿Cuál será la bacteria más
numerosa si se incuba el cultivo durante 48 horas a 37°C y los tiempos de
generación son gA= 3 horas, gB= 90 minutos y gC= 30 minutos? (2º) Calcular el
 tiempo de generación (g) de cada una de las poblaciones a 25°C si tras 48 horas de
incubación de la población A hay, 1015 bacterias, de la población B, 1016 bacterias y
de la población C, 1024 bacterias. (3º) ¿Cómo explica los resultados del apartado B?
Solución:

A = 109 bacterias
B = 10 bacterias
C = 103 bacterias
1. ¿Cuál será la bacteria más numerosa?
t = 48h
T = 37°C
gA = 3h
gB = 90min
gC = 30min

Hallamos Nf para cada una:

μ
log ( N )−log ( No ) = (48 h)
2,303
 Para A:
0,693
μA = =0,231
3h
 Para B:
0,693
μ B= =0,462
1,5 h
 Para C:
0,693
μC = =1,386
0,5 h

2. Tiempo de generación
To = 25°C
t = 48h

 A = 109 1015
log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 1015) −log ⁡(109)
n= = =19,93 generación
0,301 0,301
t 48 h h
g= = =2,4
n 19,93 generación generación

 B = 10 1016
log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 1016 )−log ⁡(10)
n= = =49,83 generación
0,301 0,301
t 48 h h
g= = =0,96 ≈57,8 min /generación
n 49,83 generación generación

 C = 103 1024
 log 10 ( N f )−log 10 ( N O ) log ( 103 )−log ⁡(1024 )
n= = =69,76 generación
0,301 0,301
t 48 h h
g= = =0,68 ≈ 41,2min /generación
n 69,76 generación generación
3. Según el tiempo de generación que se calculó, nossugiere que la población C
necesita el menor tiempo para dividirse, en comparación con la población A, esto
podría deberse a que la población C tiene una mayor cantidad de generaciones
celulares en 48h.
7. En una muestra de pollo se permite una carga de psicrófilos menor de 10 5 cel/g, al
realizar el análisis por recuento microscópico directo, se halló un promedio de 15
cel. Aplicando la fórmula se obtiene el siguiente número de células por mL.
a. 18x 105 cel/mL b. 19x106 cel/mL
5
c. 17x 10 cel/mL d. 16x 106 cel/mL
Solución:
Se hace por recuento al microscopio
105 cel/g
15 células de promedio
¿ 15 células∗25∗50∗10 3
¿ 18750000
19 x 106 cel/mL

La respuesta correcta es la b = 19x106 cel/mL

8. En un recuento de viables en placa para mohos y levaduras en galletas rellenas se

permite hasta 2x 102 ufc /g. Los datos obtenidos después de la siembra fueron: 10 -1 =
90 y 100 10-2 = 70 y 80 10 -3 = 50 y 60 10 -4 = 22 y 24 10 -5 = 20 y 22.
Especificar tipo de siembra, volumen de siembra, temp. de incubación, tiempo de
incubación, medio de cultivo, cálculos y resultados y recomendación.
Solución:
2x102 ufc/g 200ufc/g
Datos obtenidos: 10-1 = 90 y 100
10-2 = 70 y 80
10-3 = 50 y 60
10-4 = 22 y 24
10-5 = 20 y 22
 El tipo de siembra es el de siembra en superficie.
 El volumen de siembra sería 0,3mL.
 La temperatura de inclusión sería 26°C.
 Tiempo de incubación 7 días.
 El medio de cultivo sería SDA o PDA para hongos.
 Cálculos y resultados:
(22+24 )
Dilución 10−4 = ∗10000=230000
2
( 20+22 )
Dilución 10−5= ∗100000=2100000
2
 Por lo tanto, promedio es igual a:
( 230000+ 2100000 )
Promedio= =1165000
2
Recuento total: 12x105 ufc/g
 Recomendación: La galleta rellena No es apta para consumir debido a que excede la
cantidad de la norma.
9. En una muestra de agua de piscina se realizó un recuento por NMP para coliformes
totales, obteniendo en la lectura el siguiente resultado 0-0-1. Las diluciones
utilizadas fueron 10-4, 10-5, 106. La norma del Ministerio de Protección Social es la
siguiente: valor máximo aceptable de coliformes totales ≤ 10 ufc/ 100 mL. Realice
cálculos para obtener el NMP de coliformes totales en el agua analizada y dé la
recomendación.
Solución:
NMP coliformes totales: 0 – 0 – 1
Diluciones: 10-4 10-5 10-6
Norma: ≤10ufc/100mL
Código: 0 0 1 valor en tabla: 3/g

(3 mL∗1)/10−5
NMP= =3000 NMP
100

NMP = 3000 3x103ml

Recomendación: El agua de piscina No es apta para uso recreativo ya que se encuentra por
encima de la norma.
10. Responda lo siguiente:
a. ¿Cuáles son las características que debe reunir un microorganismo indicador?
b. ¿Por qué el número permitido de UFC de Coliformes Totales es siempre mayor que el de
Coliformes Fecales?
c. De acuerdo a la normatividad colombiana vigente ¿Cuáles son los límites permisibles en
cuanto a Coliformes Totales y Coliformes Fecales en el agua para consumo humano? Decir
cuáles son (# de la norma) las normas oficiales colombianas correspondientes.
d. ¿Por qué aun cuando los microorganismos patógenos se encuentran en poca
concentración en una muestra de agua, éstos pueden causar enfermedad?
Solución:
a. Los microorganismos indicadores son aquellos que tienen un comportamiento
similar a los patógenos, pero son mas rápidos, económicos y fáciles de identificar.
Deben reunir las siguientes características:
 Deben ser fáciles de aislar y cuantificar.
 No debe ser patógeno.
 Presentarse en número elevado, facilitando su aislamiento e identificación.
 El tiempo de supervivencia puede ser igual o un poco superior al de las bacterias
patógenas.
 Estar ausente de agua no contaminada y mantener una correlación de su presencia
con la de los patógenos, en mayor proporción.
 b. No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar
pruebas para diferenciarlos y emplearlos como indicadores de contaminación; se
distinguen, por lo tanto, los coliformes totales, quienes comprenden la totalidad del
grupo, y los coliformes fecales, aquellos de origen intestinal.
Los fecales son mucho más dañinos que los intestinales.
c. Los criterios de calidad admisibles para la destinación del recurso para el consumo
humano son:
Referencia Expresado como Valor
Coliformes totales NMP 20.000 microorganismos/100mL.
Coliformes fecales NMP 2000 microorganismos/100mL

 Decreto 1594 de 1984.

Derogado por el art. 79, Decreto Nacional 3930 de 2010, salvo los arts. 20 y 21.
Libro I del Decreto 2811 de 1974 en cuanto a usos del agua y residuos líquidos.
d. Porque a pesar de su baja concentración siguen teniendo la capacidad de contaminar
la muestra de agua ya que tienen características que los hace diferentes de los
compuestos químicos dado que son organismos vivos que no se disuelven en agua,
sino que se coagulan a sólidos en suspensión que están presentes en el agua.
11. Proponga un ejercicio y la solución de este usando el método de filtración por
membrana.
Solución:
Cálculo y expresión de resultados en un recuento en placa mediante filtración de membrana
en una muestra de agua residual donde no debemos realizar confirmación de las colonias.
El volumen de muestra filtrada es de 100 mL tanto de la muestra sin diluir como de cada
una de las diluciones ha sido de 100 mL.

El número de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Dilución 10-2 Dilución 10-3 Dilución 10-4
N° de colonias >300 93 10

El volumen total de muestra (Vtot) es: 0,11

Utilizando el cálculo adecuado, el resultado obtenido es:
Cs = 9,4 x 104 ufc/100 mL
12. A continuación, se detalla una norma microbiológica, defina cada una los siguientes
códigos: n, c, m, M, según el enunciado que aparece abajo:
n= 3, c=1, m=50, M=100 Coliformes fecales. ¿Cuál sería la recomendación si la
muestra presentara 51 ufc?
Solución:

n= es el número de muestras que se deben analizar, que en este caso serian 3 muestras.
c= es el número de muestras que se pueden encontras en m, es decir en el limite de
permisibilidad de buena calidad, en este caso se puede encontrar una muestra.
m= es el nível de permisibilidad que es 50, o cantidad de unidades formadoras que se
pueden encontrar, el cual es para muestras de buena calidad.
M= es el limite para mala calidad, el cual está en 100
Recomendación:
La muestra de Coliformes fecales al presentar 51 ufc indica que son esta entre el rango de
permisibilidad de buena calidad y mala calidad, por lo cual son indicadores de
contaminación.

13. Se realizó el recuento en una muestra de agua de pozo por filtración. Se filtraron
100mL de la dilución 10-1, se colocó la membrana en una placa de TSA y se incubó
por 48h, se contaron 30 colonias en la placa. ¿Cómo se expresa el resultado?
Solución:
Teniendo en cuenta que es un recuento en placa (unidades en ufc) y que se filtró una
muestra líquida (unidades en mL) el resultado se expresa así: 30x101ufc/mL. En este caso
se coloca la dilución inversa ya que en el recuento en placa se trabaja de este modo.

14. Las normas vigentes para la calidad microbiológica del pescado fresco indican:
n= 5, c=3, m=104 M=106 Heterótrofos psicrófilos.
n= 5, c=3, m=4 M=400 Coliformes fecales.
¿Cuál de los dos grupos (psicrófilos o coliformes) considera usted es más
contaminante? ¿Por qué?
Solución:
Teniendo en cuenta las normas vigentes para la calidad microbiológica, el grupo más
contaminante es el de los Coliformes fecales, ya que en el rango o límite de permisibilidad
de unidades bacterianas para los coliformes fecales solo acepta 4 unidades formadoras de
colonias, y en este caso son 400, por ello los coliformes fecales son mucho más indicadores
contaminantes que los Heterótrofos psicrófilos.

15. Las normas de calidad microbiológica de un producto farmacéutico líquido de uso

oral indican un límite de 500 ufc/mL para bacterias mesófilas. Se realiza el recuento
del producto en TSA, sembrando por placa profunda 1mL de las diluciones que se
indican en el cuadro, obteniendo los siguientes resultados:

Dilución sembrada y número de ufc

10-1 10-2
40/55 5/9

Realice los cálculos. De acuerdo con estos resultados ¿qué puede concluir?
Solución:
 Para dilución en placa 10-1
( 40+55 )∗101
=475 ufc
2

( 5+9 )∗102
=700ufc
2

475+700
Promedio= =587,5 ufc
2
Teniendo en cuenta los resultados obtenidos anteriormente podemos concluir que la calidad
del producto en cuestión no es recomendable para su consumo.