Practica 2

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INTEGRANTES DEL EQUIPO DE TRABAJO

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MANUAL DE PRACTICA DE TOXICOLOGIA I
PARA ESTUDIANTES DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

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PRACTICA N° 2
I.- TEMA
ENSAYOS PRELIMINARES EN LOS ANALISIS TOXICOLOGICOS
II.- OBJETIVO:
Conocer la importancia de la aplicación de los ensayos preliminares en los análisis

toxicológicos empleando “Papeles Sensibles” (papeles reactivos)
III.- INTRODUCCION
La parte de la muestra destinada para los Ensayos Preliminares, van a

permitirnos Orientar el análisis toxicológico, que por medio de ellos vamos a ir
desechando a cierto grupo de posibles tóxicos, así como, inducirnos a sospechar de la
causalidad de otros. Comprenden procesos físicos y químicos, estos últimos
consideran la utilización de REACCIONES DE COLORACION, EMPLEO DE
PAPELES SENSIBLES Y LAMINAS METALICAS.
Los Papeles Sensibles o también llamados Papeles Reactivos, van a dar una
información de la presencia de Tóxicos Volátiles y Gaseosos. Las Láminas Metálicas
permitirán detectar la presencia de Tóxicos Metálicos y No Metálicos.
Por otro lado, los ensayos biológicos son herramientas de diagnóstico

adecuadas para determinar el efecto de agentes físicos y químicos sobre organismos
de prueba bajo condiciones experimentales específicas y controladas. Estos efectos
pueden ser tanto de inhibición como de magnificación, evaluados por la reacción de
los organismos, tales como muerte, crecimiento, proliferación, multiplicación, cambios
morfológicos, fisiológicos o histológicos.
Los efectos pueden manifestarse a diferentes niveles, desde estructuras

subcelulares o sistemas de enzimas, hasta organismos completos, poblaciones o
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comunidades. Por tanto, la toxicidad será la capacidad de una sustancia para ejercer
un efecto nocivo sobre un organismo o la biocenosis, y dependerá tanto de las
propiedades químicas del compuesto como de su concentración, según sea la
duración y frecuencia de la exposición al tóxico, y su relación con el ciclo de vida del
organismo; las pruebas podrán ser de tipo agudo o crónico.
De manera general, los ensayos, también llamados pruebas de toxicidad, pueden ser
definidos de acuerdo con:
• Su duración: corto, mediano o largo plazo.
• El propósito para el cual son utilizados: control de calidad de vertidos, evaluación de

compuestos específicos, toxicidad relativa, sensibilidad relativa, etcétera.
Métodos de Screening
La aplicación de estos métodos es de carácter exploratorio y tienen como objetivo

identificar la presencia de una o varias drogas en una muestra sospecha. Las ventajas
de estos métodos son el requerimiento de una mínima extracción y procedimiento de
limpieza, además de que son relativamente económicos y de fácil aplicación a gran
escala. Sus principales desventajas son que tienen origen en la esencia u objetivo del
método, esto es: presentan un rango amplio, y no específico de espectro de
sensibilidad y especificidad.
PREPARACION DE LOS PAPELES SENSIBLES
- Cortar el Papel de filtro en tiras uniformes.

- Embeber estas tiras en sus respectivos reactivos.
- Eliminar el exceso a temperatura ambiente o a estufa a 80 C por unos 10'.
- Guardarlos hasta el momento de usarlos.
PREPARACION DE LA MUESTRA (ÓRGANOS)

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- Efectuar picadillos o papillas, si las muestras son vísceras (lo más rápido posible). Si
es una solución homogenizar.
- Transferir al frasco de experimentación, agregar cantidad suficiente de agua
destilada hasta que se forme una masa fluida y homogénea.
USO DE LOS PAPELES SENSIBLES
- Cuidadosamente suspender los papeles sensibles en el ambiente del recipiente, sin

rozarse entre ellos ni en el seno del líquido.
- Mantener en reposo en estas condiciones, al mismo tiempo observar detenidamente
los cambios de coloración en dichos papeles.
Los papeles sensibles a utilizar son:

P.S. de Nitrato de Plata al 5 %
1. P.S. de Acetato de Plomo al 10 %
2. P. S. Picrosado (grignard): Ac. Pícrico 1% + bicarbonato de sodio 2%
3. P. S. Alcalino: bicarbonato de sodio al 2% + sulfato ferroso 2 % + ácido clorhídrico
10%
4. Papel sensible de cloruro férrico 5% (para las muestras de orina)
REACCIONES DE COLORACIÓN EN LA ORINA.
Muestra Reactivo Respuesta
5 ml de orina Cloruro Férrico 5%, 5 Violeta: posibles Salicilatos

gotas
0,5 ml de orina Fujiwara (*) Rojo-Violeta: posibles

Hidrocarburos Halogenados
0,1 ml de orina 1 ml de o-cresol 0,1% 2 ml Azul: posible Paracetamol

hidrolizada
NH3 2 M
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MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE LAS DROGAS DE LA ORINA CON

OBJETIVO DE SCREENING
 10 ml de orina se ajusta a pH - 3 con ácido fosfórico ó tartárico se extrae dos
veces con 30 ml de de éter etílico y se combinan los extractos, se lava con 5 ml de
agua, el lavado se adiciona a la muestra y se retiene para posterior extracción. El
extracto etéreo se reextrae con 5 ml de solución saturada de bicarbonato de sodio,
y dicha solución después de separada se conserva para el análisis de posibles
salicilatos. En el extracto etéreo se pueden encontrar drogas neutras y ácidas. La
muestra inicial retenida se ajusta a pH - 8 con amoníaco diluído y se extrae dos
veces con 10 ml de cloroformo, se reúnen los extractos y se le añade unas gotas
de ácido Clorhídrico al 1 % en etanol, para evitar la pérdida de drogas volátiles.
Este extracto puede contener las drogas básicas. La muestra inicial que resultó del
paso anterior se somete a hidrólisis ácida (con ácido clorhídrico y se calienta a 100
C° por 30 minutos) y se extrae con dos porciones de 10 ml de éter etílico, se
combinan los extractos y se lavan con 5 ml de NaOH 1M. El extracto etéreo pude
contener benzofenonas. La fase acuosa se ajusta a pH - 9 y se extrae con una
mezcla de acetato de etilo: isopropanol 9:1. Este extracto orgánico puede contener
opiáceos que después del hidrólisis quedaron libres.
 A 20 ml de orina se divide en dos partes iguales, a una se le pone el pH ácido

con 1 o 2 ml de ácido sulfúrico concentrado y a la otra se le añade suficiente
bicarbonato de sodio como para saturar la solución. En ambos casos se extrae
con una mezcla de Cloroformo: isopropanol 9:1. Se concentran los extractos y se
disponen para el screening por cromatografía en capa delgada.
En el screening por Cromatografía en capa delgada se utilizan placas de silica gel

60 F-254 nm (con indicador fluorescente), y lo que variará serán las fases móviles y
los sistemas de revelado. Estos procedimientos se llevan a cabo siempre después de
la hidrólisis debido a que la mayoría de las drogas se excretan conjugadas en la orina.
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SCREENING DE DROGAS EN ORINA Y CABELLOS UTILIZANDO

HIDROLISIS
ENZIMÁTICA, ÁCIDA Y ALCALINA SEGUIDA DE EXTRACCIÓN EN FASE

SÓLIDA
En el caso de los pelos debemos recortarlos en pequeños pedacitos se lavan bien

con agua destilada para que suelte toda la grasa y por último se realiza un lavado con
metanol.
Se toman 5 ml de orina o de 50 a 100 mg de cabello y se procede a realizar uno de

los procedimientos de hidrólisis siguientes:
Hidrólisis Enzimática: Se le añade a la muestra 60 ul de una mezcla de

Glucuronidasa / arilsulfatasa y 1 ml de buffer fosfato de pH-6 y se encuba 14 horas a
37 °C.
Hidrólisis alcalina: Se le añade a la muestra 1 ml de NaOH 0,1 M y se coloca 24

horas a 60 °C. Posteriormente se lleva a pH-6 con buffer fosfato.
Hidrólisis ácida: Se la añade 1 ml de H2SO4 0.05 N y se encuba 12 horas a 37 °C.

Posteriormente se lleva a pH-6 con buffer fosfato.
USO DE LAS LAMINAS METALICAS
- Ciertos compuestos como el mercurio, arsénico, bismuto, antimonio, platino, hierro,

plomo. son revelados fácilmente empleando Laminas metálicas de cobre.
TECNICA OPERATORIA
1. Lavar las tiras de cobre con HNO3 2.5 N. y enjuagar con etanol 95 %, luego secar.
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2. Medir 10 ml. de orina o una alicuota de lavado gástrico, vómitos. Si fuera polvo,
tabletas o residuo, disolverlo o suspenderlo en 10 ml. de agua. Si son vIsceras,
pesar aproximadamente 2 g., añadir 20 ml. de agua destilada, efectuar papillas.
COMPONENTES Vasos de 50 ml.
I II III
_____________________________________________
Muestra Problema A 10 ml. - -
Muestra Problema B - 10 ml.
-
Muestra Problema C - - 10
ml.
Adicionar HCL cc. 1 ml. 1 ml. 1 ml.
Introducir a cada tubo las tiras de cobre recientemente
lavadas. Calentar suavemente de 20' a 01 hora.
Retirar la tira de cobre.
Observar é ínterpretar.
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IV.- MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES:
Material de Laboratorio:
Material Biológico:
REACTIVOS:
Equipos:
V.- PROCEDIMIENTO
Visualice los siguientes videos:

https://www.youtube.com/watch?v=jqsXtmu53jU
https://www.youtube.com/watch?v=LFr9IK3geIw
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VI.- RESULTADOS
Identifique materiales reactivos equipos y complete los espacios del informe

donde corresponda indicando el nombre del video observado.
VII.- DISCUSION
Realice una explicación de la homogenización de muestras biológicas y de
ensayos preliminares con el fundamento que sustente dichos procedimientos.
VIII.- CONCLUSIONES
IX.- CUESTIONARIO
1.- Describa las características físico- químicas de los siguientes reactivos:

- Nitrato de plata
- Cianuro de potasio
- Acetato de plomo
- Nitroprusiato de sodio
- Yoduro de potasio
- O – cresol
- Cloruro férrico
- Amoniaco
2.- Describa dos técnicas distintas a las ya referidas, empleadas como

determinaciones preliminares, determinaciones presuntivas usadas en análisis
químico-toxicológico.
3.- Establezca la diferencia entre una prueba preliminares y pruebas confirmatorias en
el trabajo Químico forense.
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4.- ¿Porque ciertos tipos de muestras biológicas necesitan ser hidrolizadas

previamente??
X.- REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

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RIESGO TOXICOLOGICO 1
TEMA: Riesgos potenciales de sustancias químicas empleadas en el mantenimiento y

limpieza de ambientes hospitalarios.
ACTIVIDAD:
Los estudiantes reunidos en equipos de trabajo indagan, revisan, discuten y explican
los riesgos toxicológicos para la salud de los seres humanos como consecuencia de
la manipulación o exposición de sustancias empleadas en el mantenimiento y limpieza
a nivel hospitalario.
• Hacer una lista con las principales sustancias empleadas para la limpieza y
mantenimiento de ambientes hospitalarios.
• Identificarlas desde el punto de vista químico y fundamentar su aplicación en
ambientes hospitalarios.
• Describir la toxicocinética y toxicodinamia de algunas de ellas
• Describir los efectos tóxicos principales e algunas de ellas
• Identificar la sintomatología de la intoxicación de algunas de ellas
• Proponer medidas de prevención en el manejo de algunas de ellas.
A.- Elaborar un resumen.
B.- CUESTIONARIO:
• ¿Cómo pueden presentarse las sustancias químicas? (SQ)

• ¿Qué significa Peligro y Exposición a Sustancias Químicas?
• ¿Qué significa Riesgo Químico?
• ¿Cómo pueden ingresar las Sustancias Químicas al organismo?
• ¿Cómo actúa la sustancia química en el organismo?
• ¿Qué daños pueden provocar?
• ¿Cómo se identifican las sustancias químicas?
• ¿Cuáles son las Medidas de Prevención del Riesgo Químico?
• ¿Qué importancia tiene conocer el pictograma de peligrosidad en el
laboratorio?

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MANUAL DE PRACTICA DE TOXICOLOGIA I

PARA ESTUDIANTES DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ENSAYOS PRELIMINARES EN LOS ANALISIS TOXICOLOGICOS

Conocer la importancia de la aplicación de los ensayos preliminares en los análisis

La parte de la muestra destinada para los Ensayos Preliminares, van a

Por otro lado, los ensayos biológicos son herramientas de diagnóstico

Los efectos pueden manifestarse a diferentes niveles, desde estructuras

• Su duración: corto, mediano o largo plazo.

• El propósito para el cual son utilizados: control de calidad de vertidos, evaluación de

La aplicación de estos métodos es de carácter exploratorio y tienen como objetivo

PREPARACION DE LOS PAPELES SENSIBLES

- Cortar el Papel de filtro en tiras uniformes.

PREPARACION DE LA MUESTRA (ÓRGANOS)

USO DE LOS PAPELES SENSIBLES

- Cuidadosamente suspender los papeles sensibles en el ambiente del recipiente, sin

Los papeles sensibles a utilizar son:

REACCIONES DE COLORACIÓN EN LA ORINA.

Muestra Reactivo Respuesta

5 ml de orina Cloruro Férrico 5%, 5 Violeta: posibles Salicilatos

0,5 ml de orina Fujiwara (*) Rojo-Violeta: posibles

0,1 ml de orina 1 ml de o-cresol 0,1% 2 ml Azul: posible Paracetamol

MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE LAS DROGAS DE LA ORINA CON

 A 20 ml de orina se divide en dos partes iguales, a una se le pone el pH ácido

En el screening por Cromatografía en capa delgada se utilizan placas de silica gel

SCREENING DE DROGAS EN ORINA Y CABELLOS UTILIZANDO

ENZIMÁTICA, ÁCIDA Y ALCALINA SEGUIDA DE EXTRACCIÓN EN FASE

En el caso de los pelos debemos recortarlos en pequeños pedacitos se lavan bien

Se toman 5 ml de orina o de 50 a 100 mg de cabello y se procede a realizar uno de

Hidrólisis Enzimática: Se le añade a la muestra 60 ul de una mezcla de

Hidrólisis alcalina: Se le añade a la muestra 1 ml de NaOH 0,1 M y se coloca 24

Hidrólisis ácida: Se la añade 1 ml de H2SO4 0.05 N y se encuba 12 horas a 37 °C.

USO DE LAS LAMINAS METALICAS

- Ciertos compuestos como el mercurio, arsénico, bismuto, antimonio, platino, hierro,

IV.- MATERIALES Y REACTIVOS

Visualice los siguientes videos:

Identifique materiales reactivos equipos y complete los espacios del informe

1.- Describa las características físico- químicas de los siguientes reactivos:

2.- Describa dos técnicas distintas a las ya referidas, empleadas como

4.- ¿Porque ciertos tipos de muestras biológicas necesitan ser hidrolizadas

X.- REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

TEMA: Riesgos potenciales de sustancias químicas empleadas en el mantenimiento y

A.- Elaborar un resumen.

• ¿Cómo pueden presentarse las sustancias químicas? (SQ)

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