ISSN: 2224-6185, 40(2), 2020

Artículo original

Evaluación ecotoxicológica de los residuales del Laboratorio de

Química Analítica
Ecotoxicological evaluation of the residuals of Analytical Chemistry
Laboratory

Lic. Yuleidis González-Pérez1 https://orcid.org/0000-0003-1654-6019

2*
Dra. Yudith González-Diaz https://orcid.org/0000-0003-1240-1146,
Adrianne Torres-Bastardo2 https://orcid.org/0000-0001-9304-8166
MSc. Dayana Marin-Sánchez1 https://orcid.org/0000-0002-7017-3287
Dr.C. Juan Alberto Castillo-Gart3 https://orcid.org/0000-0003-0896-9484

1
Centro de Toxicología y Biomedicina (TOXIMED), Santiago de Cuba
2
Facultad de Ingeniería Química y Agronomía, Universidad de Oriente, Santiago de
Cuba, Cuba
3
Unidad de Toxicología Experimental, Universidad de Ciencias Médicas “Dr. Serafín
Ruiz de Zarate Ruiz, Villa Clara, Cuba

*Autor para la correspondencia. Correo electrónico: yudith@uo.edu.cu

RESUMEN
Los bioensayos constituyen una excelente herramienta en la evaluación del riesgo
ambiental. El objetivo del presente trabajo fue realizar ensayos ecotoxicológicos con
el propósito de estudiar el efecto que los residuales del laboratorio de Química
Analítica pueden tener sobre el ecosistema a partir de las consecuencias que
produzca sobre una población de organismos que formen parte fundamental de la
cadena trófica. Se emplearon los bioensayos de laboratorio de toxicidad aguda con
larvas de Artemia sp y con semillas de lechugas (Lactuca sativa L.). Se probaron
cuatro concentraciones del residual en estudio: 5, 25, 50 y 100%, con tres réplicas
cada uno y un grupo control. En el ensayo de Artemia sp, se obtuvo un 100% de
mortalidad en todas las concentraciones probadas del residual ensayado. En cuanto
al ensayo con semillas de lechugas, se evidenciaron efectos fitotóxicos, para las
concentraciones evaluadas del residual, ocasionando inhibición en la germinación,
en la elongación de la raíz y del hipocótilo. Además se encontraron anomalías en los

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órganos de crecimiento de las plantas en las concentraciones de 5 y 25 %.

Quedando demostrado que los residuales obtenidos en el laboratorio de Química
Analítica de TOXIMED tienen efectos tóxicos tanto para los medios acuáticos,
como para los terrestres.
Palabras clave: ensayos ecotoxicológicos; Artemia; lechuga; concentración letal.

ABSTRACT
Bioassays are an excellent tool in environmental risk assessment. The objective of
the present work was to carry out ecotoxicological tests with the purpose of deducting
the effect that the residuals of the Analytical Chemistry laboratory can have on the
ecosystem from the consequences that it produces on a population of organisms that
are a fundamental part of the trophic chain. The bioassays of acute toxicity laboratory
with larvae of Artemia sp and with lettuce seeds (Lactuca sativa L.). Four
concentrations of the study residual were tested: 5, 25, 50 and 100%, with three
replicates each and a control group. In the Artemia sp assay, 100% mortality was
obtained in all tested concentrations of the residual tested. Regarding the test with
lettuce seeds, phytotoxic effects were evidenced, for the evaluated concentrations of
the residual, causing inhibition in germination, in the elongation of the root and
hypocotyl. In addition anomalies were found in the organs of growth of the plants in
the concentrations of 5 and 25%. It is demonstrated that the residuals obtained in the
laboratory of Analytical Chemistry of TOXIMED have toxic effects both for aquatic
and terrestrial environments
Keywords: ecotoxicological tests; Artemia, lettuce; lethal concentration.

Recibido: 20/09/2019
Aceptado: 25/01/2020

Introducción
En el mundo actual, presenta una elevada importancia dentro del campo de la
Toxicología, el estudio de los efectos tóxicos de compuestos químicos sobre el
organismo humano y otros organismos vivos, donde el grado de intoxicación va a
estar dado por el nivel de exposición frente a una determinada sustancia. Esta
exposición a bajos niveles muchas veces está relacionada con la aparición de

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efectos crónicos y con la proliferación de enfermedades aparentemente no

vinculadas a factores tóxicos. (1)
En la legislación de varios países como Estados Unidos, Canadá y los de la
Comunidad Europea, entre otros, se han incluido los ensayos con organismos vivos
para cuantificar el grado de toxicidad de efluentes industriales, aguas residuales y/o
residuos sólidos, para determinar los límites de descarga y los efectos tóxicos sobre
la biota. (2,3)
Los ensayos ecotoxicológicos ayudan a evaluar la calidad de los efluentes y de
(3)
esta forma prevenir o alertar sobre riesgos en el ecosistema. Actualmente se
utilizan diferentes especies de organismos acuáticos y terrestre de varios niveles
filogenéticos como “indicadores” para determinar los efectos tóxicos de
contaminantes vertidos o liberados en el ecosistema. (4)
Los residuos generados por el Laboratorio de Química Analítica del Centro de
Toxicología y Biomedicina (TOXIMED) son vertidos al medio ambiente, sin
tratamiento. En este artículo se realizan ensayos ecotoxicológicos con el objetivo de
inferir el efecto que estos residuales pueden tener sobre el ecosistema a partir de las
consecuencias que produzca sobre una población de organismos que forme parte
fundamental de la cadena trófica (bacterias, algas, invertebrados, peces).
Los efectos biológicos que se producen en los ensayos se pueden definir de
varias formas, los cuales van a ser los parámetros que se utilicen para determinar la
toxicidad. A continuación se definen dos de los parámetros más usados. (5)
1. Concentración efectiva (CEx): concentración del efluente que produce efectos
negativos apreciables en un porcentaje "x" de la población de ensayo. Se
usa el CE50 o EC50, que sería la concentración efectiva que afecta al 50 % de
la población.
2. Concentración letal (CLx): concentración del efluente que produce la muerte
de un porcentaje "x" de la población de ensayo. Se usa el CL50 o LC50, que
sería la concentración letal que elimina al 50 % de la población. Para emplear
los resultados de los ensayos de toxicidad se emplean las unidades de
toxicidad (UT), que se utilizan como criterio base de la normativa.
El objetivo del trabajo es evaluar los residuales generados en el laboratorio
medioambiental mediante el empleo de ensayos ecotoxicológicos.
El objetivo del trabajo es realizar ensayos ecotoxicológicos con el propósito de
estudiar el efecto que los residuales del laboratorio de Química Analítica pueden

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tener sobre el ecosistema.

Materiales y métodos
Al residual líquido procedente del laboratorio de Química Analítica, se le realizó la
evaluación de la toxicidad aguda mediante los siguientes bioensayos
ecotoxicológicos:
1. Toxicidad Aguda en Artemia sp
2. Bioensayo de Toxicidad Aguda con semillas de lechuga
(Lactuca sativa L)

Toxicidad aguda en Artemia sp

Esta prueba está basada en la determinación de la concentración de la sustancia en
estudio que provoca la muerte al 50 % de las nauplius (Larvas) de Artemia sp,
después de 24 h de exposición (CL50) además de efectos subletales. Es un ensayo
rápido que se realiza en una o dos etapas según sea necesario; una preliminar
que proporciona un valor aproximado de CL50 y determina el rango de
concentraciones a probar en el ensayo definitivo y una final la cual se realiza en los
casos donde el valor aproximado proporcionado por el preliminar no es suficiente.
Esta permite calcular la CL50 y determinar el 0 % y el 100 % de mortalidad.
Justificación del método a emplear: En la actualidad existe una tendencia a
reemplazar, reducir y/o refinar los métodos que utilizan vertebrados superiores por lo
que han surgido una serie de ensayos que emplean otros sistemas biológicos e
informáticos, estos son conocidos como los métodos alternativos a la
experimentación animal, muchos de estos métodos, como los que emplean
invertebrados, han sido utilizados además desde el punto de vista ecotoxicológico
para detectar el impacto de sustancias químicas, residuales y contaminantes en
general, en ecosistemas acuáticos, ya que son organismos representativos por
ocupar eslabones inferiores de la cadena trófica y cualquier alteración originada por
la presencia de un contaminante, tendría repercusión en los organismos superiores.
En este grupo de métodos se encuentra el Ensayo de Toxicidad Aguda en Artemia
sp, excelente para evaluar los efectos de productos químicos y residuales sobre
ecosistemas marinos. (6)
Justificación para la selección del sistema de estudio: La Artemia sp es un crustáceo
que normalmente constituye un excelente alimento para la cría de peces en los
sistemas de acuicultura y los ecosistemas marinos naturales. Al ser un organismo

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representativo de las cadenas tróficas de estos últimos constituye un elemento

básico que puede ser empleado con éxito en los bioensayos de ecotoxicidad para
conocer los efectos de los productos químicos. La selección del sistema de estudio
animal se sugiere entonces sobre la base de criterios prácticos de disponibilidad
durante todo el año, fácil manutención, conveniencia para la prueba, entre otros
factores relevantes de tipo económico, biológico y ecológico.
Caracterización del sistema de estudio: En este estudio serán utilizados quistes
viables de Artemia sp suministrados por el Centro de Investigaciones Pesqueras de
La Habana.
Condiciones previstas de alojamiento: los quistes son mantenidos en refrigeración
(4°C) y humedad relativa apropiada para su conservación.
El método de administración de la sustancia a probar es por aplicación al agua de
dilución de diferentes concentraciones del residual.
Niveles de concentración: Se probaron cuatro concentraciones (5, 25, 50, 100 %)
aplicadas de manera única, al comienzo del ensayo de toxicidad, cuyo tiempo de
duración es de 24 h. Se realizó el siguiente procedimiento experimental:
1) Incubación de los quistes de Artemia sp para la eclosión. (6)
Para lograr la eclosión de los quistes de Artemia sp se utilizó una cámara de
vidrio dividida en dos compartimentos por una lámina con pequeños orificios,
garantizando oscuridad en uno de ellos. Se le adicionó agua de mar artificial,
aireando a saturación aproximadamente durante 15 min antes de comenzar el
experimento, aireación que se mantuvo durante todo el tiempo que duró la
incubación. La temperatura se mantuvo en un rango de 27ºC a 30ºC. Se pesaron 25
mg de huevos y se le adicionaron al compartimento oscuro de la cámara de eclosión.

El otro se ilumino por una lámpara a una distancia de 30 cm de forma paralela a la

cámara, con el objetivo de atraer las larvas. Estas, al eclosionar, pasan a través de
los orificios por fototaxia positiva. Alrededor de las 24 h de haber puesto los huevos en
el agua debe ocurrir la eclosión dando lugar a larvas nauplius y la migración de estas
hacia la recámara iluminada donde se colectan, extraen y cuentan.

2) Ejecución del ensayo. Prueba de toxicidad.

Se depositaron 10 nauplius en cada recipiente (vasos de precipitado). El volumen de
agua transferido con las nauplius no debe ser superior a 50 µL. Se valuaron cuatro
concentraciones de la sustancia de estudio (5, 25, 50, 100 %) con tres réplicas cada
una, incluyendo un grupo control. Cada recipiente se completa con un volumen

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de 10 mL de las concentraciones respectivas del tóxico en estudio y se incuban en

oscuridad a temperatura de 25 °C por 24 h.

3) Tratamiento de los resultados

Culminado el período de exposición se cuentan en el estereoscopio las larvas
supervivientes y se anota cualquier comportamiento anormal. Los efectos sobre la
mortalidad se expresan como CL5024h, parámetro que se determina por el programa
profesional EPA PROBIT. Se realizó además como índice para evaluar la toxicidad del
vertido, la determinación de las UT (Unidades de Toxicidad). Estas se calculan
mediante la siguiente ecuación:
(1)

Siendo más tóxico cuanto más UT presente.

Bioensayo de Toxicidad Aguda con semillas de lechuga (Lactuca

sativa L)
El bioensayo con semillas de lechuga ha sido recomendado y aplicado por diferentes
organismos de protección ambiental para la evaluación ecotoxicológica de muestras
ambientales, ya que mide los procesos fisiológicos que ocurren durante el periodo de
germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula, siendo estos generales
para la gran mayoría de las semillas. De igual modo existen múltiples estudios
realizados que apoyan esta hipótesis,(7,8,9) demostrando la sensibilidad que
presenta esta especie comparada con otras especies de plantas frente a los
contaminantes ambientales, así como su importancia desde el punto de vista hortícola,
su rápida germinación, su fácil manutención en el laboratorio, su amplia
aplicación en muestras de diferentes características y orígenes, la sencillez, corta
duración del bioensayo, así como su buena correlación con otros sistemas de
prueba.(8,9)
Es un ensayo estático de toxicidad aguda (120 h de exposición) en el que se
evaluaron los efectos fitotóxicos de una muestra residual líquido en el proceso de
germinación de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) y en el desarrollo de las
plántulas durante los primeros días de crecimiento.
Las semillas de lechuga variedad BSS utilizadas, fueron suministradas por la
Empresa de Semillas de Santiago de Cuba, y almacenadas previamente en
ambiente seco y a 4°C. Para la ejecución del ensayo se seleccionaron
cuidadosamente por su forma y tamaño más frecuente. Se sembraron un total de 20

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semillas en placas de petri de 90 mm de diámetro cubiertas con un papel de filtro

Whatman de igual diámetro, dejando suficiente espacio entre ellas para su adecuado
crecimiento. Se probaron un control (agua destilada) y 4 concentraciones del
residual: 5, 25, 50, 100 %, usando como disolvente agua destilada, con 3 réplicas
cada uno, 3 mL de volumen de aplicación, y una temperatura mantenida de 22 ± 2°C
en la oscuridad. Como puntos finales para la evaluación de los efectos, se determinó
la CIg50 (concentración efectiva a la cual se produjo inhibición de la germinación al
50 %, respecto al grupo control); la CIr50 (concentración efectiva a la cual se produjo
inhibición en la elongación de la radícula al 50 %, respecto al grupo control) y la
CIh50 (concentración a la cual se produjo inhibición en la elongación del hipocótilo
al 50 %, respecto al grupo control).
Cada punto final se evaluó comparando el efecto generado en los organismos
expuestos a las muestras con respecto a la respuesta en los organismos del
control negativo sujetos a las mismas condiciones de ensayo, excepto por la
ausencia de muestra.
Terminado el período de exposición, se cuantificó el efecto en la germinación, en la
elongación de la radícula y del hipocótilo. Como criterio de germinación se
consideró la aparición visible de la radícula.
Para el análisis de la presencia de anomalías en las plántulas tratadas, se siguió la
metodología referida en el Manual para la Evaluación de Plántulas en los Ensayos
de Germinación. (4)
Se determinó la unidad de toxicidad letal (UTL) para el parámetro de germinación,
obtenida por el cociente entre la concentración verdadera medida de un tóxico o
sustancia en particular, dividida por la Clg50 de dicha sustancia, en este caso esta
relación se calcula con referencia a la concentración inicial del efluente (la
concentración real equivale al 100% del mismo), y se calculó mediante la siguiente
expresión:

(2)

Se tuvo en cuenta que las relaciones menores que uno indican niveles no
letales y mayores que uno muy letales. Además, se determinaron otros indicadores
que aportan elementos para la clasificación de los residuales, en cuanto a la
germinación se consideraron no tóxicas a las muestras en las cuales germinaron más

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del 90 % respecto del control con agua destilada; tóxicas a las que presentaban
valores comprendidos entre 75 % y 90 %, y muy tóxicas a las que tenían menos del
75 % de germinación respecto del control.
De igual modo para los parámetros de crecimiento se determinó la inhibición de la
elongación de la raíz e hipocótilo (Elr o EIh) mediante la fórmula:

(3)

donde:
Muestra: Promedio de la longitud de la raíz o hipocótilo, según sea en cada
caso, teniendo en cuenta que n= 20 para cada concentración donde se
presente crecimiento, expresada en mm.
Control: Promedio de la longitud de la raíz o hipocótilo, según sea en cada
caso, teniendo en cuenta que n= 20 para el grupo control, expresada en
mm.
Los resultados de la inhibición (El) se clasifican de la siguiente forma:
 El < 0: Tóxica (inhibición de la prolongación de la raíz o hipocótilo según el
parámetro medido);
 El > 0: Se consideró estimulación del crecimiento;
 El = 0: No tóxica.
Para el cálculo de los valores medios, porcentuales y las concentraciones efectivas
CIg50, CIr50, y CIh50 para cada punto final medido se empleó el programa Microsoft
Excel 2003. Estas últimas se calcularon a partir del estadígrafo Pronóstico, el
cual calcula o predice un valor futuro en una tendencia lineal usando valores
existentes.

Resultados y discusión
Toxicidad aguda en Artemia sp
Culminado el tiempo de exposición de la Artemia sp frente al residual líquido del
laboratorio de Química Analítica se observa que el porcentaje de mortalidad en los
controles fue menor del 10 % (3,33 %), por lo que se considera válida la prueba. (6.
Se muestran en la tabla 1 los resultados obtenidos al final de las pruebas, donde se
puede apreciar la existencia de una relación directamente proporcional entre el

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efecto adverso medido (mortalidad) y los niveles de concentraciones probados.

Se evidencia que el máximo efecto ocurre a partir de la concentración del 5 % con
un 100 % de mortalidad luego de 24 h y es válido referir que para la
concentración del 50 % la muerte es de manera instantánea para el 100 % de los
organismos expuestos, lo que se corresponde con la alta toxicidad del residual
líquido del laboratorio

Tabla 1- Resultados de la prueba de Toxicidad Aguda en Artemia sp.

donde:
T: Número total de Artemias vivas al final del ensayo
P: % de mortalidad al final del ensayo
El residual del laboratorio de Química Analítica en sus tres diluciones resultó letal
en un 100 % para las larvas de Artemia sp.

Evaluación de la fitotoxicidad en semillas de lechuga (Lactuca sativa)

Al finalizar el ensayo, en la totalidad de los controles se obtuvo un porciento de
germinación mayor del 90 % del total de las semillas plantadas, con crecimiento
normal y libre de malformaciones, por lo que se considera válido el ensayo. En la
tabla 2 y en la figura 1, se muestran los resultados obtenidos en el estudio
toxicológico del residual observándose que al 50 % y 100%, no existió germinación y
los porcientos de germinación al 5% y 25% de concentración del residual fueron muy
bajos (41,6 y 26,6 % respectivamente).

Tabla 2- Resultados del % de inhibición de la germinación de las semillas de Lactuca sativa

(lechuga)

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donde:
Ig: Porciento de inhibición de la germinación de las semillas

Fig. 1- Comportamiento del porciento de inhibición de la germinación en lechuga con

respecto a la concentración de la Mezcla del Residual.

Además, se encontraron anomalías en los órganos del crecimiento en las

concentraciones donde hubo crecimiento (5 y 25%), siendo más notorias
directamente proporcionales con la concentración probada del residual. Las más
significativas en la radícula fueron: quemaduras en ápice radicular por la exposición
a los tóxicos que componen el residual (figura 2), raíz atrofiada y/o raquítica (figura
3), mostrando afectaciones considerables y que enuncian la importancia de las
mismas en cuanto a la supervivencia y desarrollo normal de la planta, siendo el
parámetro más sensible en este estudio coincidiendo con lo reportado por otros
autores. (5)

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Fig. 2- Quemadura del ápice radicular por la exposición al residual objeto de estudio.

Fig. 3- Anomalías en la raíz de las semillas de lechugas por la exposición al residual objeto
de estudio.

Asimismo, en cuanto a las alteraciones en el crecimiento del hipocótilo las más

notables fueron: hipocótilo curvado, corto y engrosado (figura 4).

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Fig. 4- Anomalías en el hipocótilo de lechugas por la exposición al residual objeto de

estudio.

La toxicidad de una muestra residual, no solamente depende de los efectos

adversos de uno de sus componentes sino también de las posibles interacciones
entre ellos, aún cuando originalmente no sean potencialmente tóxicos. Es por ello,
que los efectos letales y subletales (incluyendo las anomalías) encontrados, pudieran
estar dados por la acción de las diferentes sustancias químicas que componen el
efluente evaluado y sus interacciones, partiendo de sus propiedades físico-
químicas, y analizando los posibles efectos que pueden ser aditivos o sinérgicos;
antagónicos; de potenciación o inhibición. (10)

Conclusiones

Después de haber realizado los estudios toxicológicos a los residuales obtenidos en

el laboratorio de química de TOXIMED hemos arribado a las siguientes
conclusiones:

1. Con el biomodelo de experimentación de Artemia sp el residual del

laboratorio en sus tres diluciones resultó letal en un 100%.
2. Al evaluar la fitotoxicidad en semillas de lechuga para las cuatro
concentraciones, se demostró que al 50 % y 100%, no existió germinación y
los porcientos de germinación al 5% y 25% de concentración del residual del
laboratorio de química Analítica fueron muy bajos (41,6 y 26,6 %
respectivamente).
3. En las concentraciones donde hubo crecimiento de las plantas de lechugas
(5%,25%) se encontraron anomalías en los órganos del crecimiento tales

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como: raíz raquítica y atrofiada, quemaduras en el ápice radicular e hipocótilo

curvado.

4. Quedó demostrado que el residual del laboratorio de Química tiene efectos

tóxicos tanto para los medios acuáticos, como para los terrestres.

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Conflicto de intereses
Los autores declaran que no existen conflictos de intereses.

Contribución de los autores:

Yuleidis González-Pérez y Yudith González-Diaz: Proceso experimental y

elaboración del informe final.

Adrianne Torres-Bastardo: Proceso experimental.

Dayana Marin-Sánchez Diaz: Revisión y corrección del informe final.

Juan Alberto Castillo-Garit: Revisión del informe final.

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