Manual de Hematologia

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MANUAL DE HEMATOLOGIA Cód.: GMLCMA-

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EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO HOSPITAL DE LA

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VEGA – PUESTO DE SALUD DE NOCAIMA
MANUAL DE HEMATOLOGIA
LABORATORIO CLINICO
Elaborado Por : Revisado Por : Molchizu Arango Aprobado Por :
Francia Contreras Hernando Duran

Cargo: Lider Laboratorio clinico Cargo: Asesora de calidad planeacion Cargo: Gerente
Fecha: 24/01/2019 Fecha: 29/01/2019 Fecha: 29/01/2019

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1. OBJETIVO GENERAL
Establecer y estandarizar los procedimientos realizados en el area hematológica de la ESE

Hospital de la vega.
1.1. Objetivos específicos
• Generar una herramienta de trabajo que permita desarrollar los procedimientos

del área de hematología del laboratorio clínico del Hospital de la Vega de una
manera uniforme.
• Brindar un protocolo de trabajo que cuente con todos los procedimientos que se
efectúan en el área de hematología del laboratorio clínico del Hospital de la
Vega.


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2. INTRODUCCION
La hematología es la rama de la medicina que se encarga del estudio de la sangre y sus

precursores, así como de los trastornos estructurales, bioquímicos, tratamiento y prevención
de las enfermedades que puedan conducir a una enfermedad.
Las enfermedades hematológicas afectan la producción de sangre y sus componentes, como

los glóbulos rojos, glóbulos blancos, la hemoglobina, las proteínas plasmáticas y el
mecanismo de coagulación (hemostasia).
3. TOMA DE MUESTRA
La mayoría de los exámenes que se efectúan en el área de hematología, se realizan con

sangre total, obtenida de una forma completamente aséptica y utilizando instrumentos nuevos
y ANTICOAGULANTES
Una vez extraída la sangre, se debe realizar agitacion del tubo varias veces en forma suave
para evitar que la muestra se coagule.


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3.1 . CARACTERÍSTICAS BÁSICAS DE LOS ANTICOAGULANTES MÁS USADOS EN

HEMATOLOGÍA
• No alterar el tamaño de los hematíes.
• No producir hemólisis.
• Evitar al máximo la agregación plaquetaría.
• No alterar la morfología de los leucocitos.
La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible, incluso mantenida
bajo refrigeración (4 ºC) si no pasan de las 2 horas. El tiempo máximo entre la extracción de la
sangre y su procesamiento depende del coagulante de elección y no debe ser más de 4
horas, a excepción del anticoagulante EDTA (etilendiaminotetracético) que puede ser hasta 24
horas (en refrigeración a 4 ºC) al fijarlo impiden su activación y, por ende, la coagulación
sanguínea
3.1.1.1. ANTICOAGULANTES SÓLIDOS EDTA
Es la sal disódica o tripotásica del ácido etilendiaminotetracético. La sal Disódica (Na2EDTA)

es menos soluble que la sal tripotásica (K3EDTA). Estos compuestos realizan su acción a


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través de un efecto quelante sobre el calcio, al fijarlo impiden su activación y, por ende, la
coagulación sanguínea
Ventajas del anticoagulante EDTA
• Respeta la morfología eritrocitaria (especialmente la sal tripotásica) y leucocitaria, de

manera que permite una demora de dos horas en la realización del frotis sanguíneo
después de la extracción sanguínea.
• Asegura la conservación de los elementos formes sanguíneos durante 24 horas si la
sangre se mantiene a 4 ºC.
• Al inhibir la aglutinación de las plaquetas, facilita su recuento o su expresión
semicuantitativa a partir del frotis.
• La concentración recomendada de EDTA es de 1,5 mg/mL de sangre. Una mayor cantidad
de anticoagulante puede producir retracción celular, con disminución del hematocrito, y un
aumento de la concentración media de la hemoglobina.
• Un exceso de sangre con relación al anticoagulante produce formación de microagregados
que pueden alterar los resultados.
• El empleo de tubos al vacío con una gota (50mL) de EDTA tripotásica comercial para 5 mL
de sangre es de interés práctico dado que es cien veces más soluble facilitando la mezcla
de sangre con anticoagulante.


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Desventajas del anticoagulante EDTA
• Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos, a los cuales les produce
encogimiento y cambios en su forma, por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de
sangre al anticoagulante.
4. CUADRO HEMATICO
El cuadro hematico se realiza por metodo automatizado en el equipo BC-3600.

El BC3600 es un analizador automatico para hematologia y un contador diferencial de tres
partes. Proporciona 21 parametros basicos,3 histogramas y un modo de medicion: CBC+3-
DIFF
Utiliza 3 métodos de medición:
• Citometria de flujo por laser para medicion de leucocitos (WBC)

• Impedancia eléctrica para determinación de el total de blancos (WBC), basofilos ,
eritrocitos (RBC) y plaquetas (PLT).
• Método colorimétrico para determinación de hemoglobina (HGB).
Citometria de flujo: la citometria de flujo es una tecnica de analisis celular multiparametrico
(permite la medida simultanea de multiples caracteristicas fisicas de una sola celula) y se basa
en hacer pasar una suspension de celulas alineadas y de una en una por delante de una haz


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de laser Una vez que un volumen predeterminado de sangre es absorbido por el analizador,
esta es diluida con cierta cantidad de reactivo, se inyecta en la cubeta de flujo.
Rodeadas de este fluido (diluyente), las celulas sanguineas pasan por el centro de la cubeta
de flujo en una unica columna a velocidades muy altas. Estas se exponen al rayo de luz, la
intensidad de la dispersion de la luz refleja el tamaño de la celula y la densidad intracelular.
el detector optico recibe este foco de luz y la transforma en impulsos electricos. Los datos de
los impulsos recogidos se utilizan para trazar una distribucion bidimensional (diagrama de
dispersion)
Impedancia eléctrica: Este método se basa en la medida de los cambios que provoca una
partícula en una resistencia eléctrica. La partícula, una célula sanguínea que se encuentra en
suspensión en el diluyente conductor que pasa a través de una abertura de dimensiones
conocidas. Se sumerge un electrodo en el líquido a ambos lados de la abertura para crear un
campo eléctrico. Cuando las partículas pasan a través de la abertura se produce un cambio
transitorio en la resistencia existente entre los electrodos. Este cambio da lugar a un impulso
eléctrico mensurable. El número de impulsos generados indica el número de partículas que
pasan a través de la abertura. La amplitud de cada uno de estos impulsos es proporcional al
volumen de cada una de las partículas. El impulso se amplifica y se compara con los canales
internos de tensión de referencia que únicamente acepta impulsos de una amplitud
determinada. Si el pulso generado es superior al umbral de WBC, se realiza un recuento como
WBC.


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Diferencial de blancos: Con ayuda del diluyente y el lisante el analizador puede separar en
base al tamaño, a los glóbulos blancos en tres subcategorías: linfocitos, células de tamaño
medio (monocitos) y granulocitos. Basándose en el histograma de WBC, este analizador
calcula linfocitos, células de tamaño medio y Granulocitos y expresa el resultado en
porcentajes y valores absolutos.
Método colorimétrico: La solución de WBC/HGB se coloca en el recipiente donde se mezcla

con burbujas y con una determinada cantidad de lisante, que convierte a la hemoglobina en
un complejo de hemoglobina que se mide a 525 nm. Se coloca un LED en un lateral del baño,
el que emite un rayo de luz que atraviesa la muestra y un filtro de 525 nm. A continuación se
mide la luz transmitida por medio de un fotosensor que se coloca en el lateral opuesto. La
señal se amplifica y la tensión se mide y se compara con la lectura de referencia en blanco
(lecturas recogidas cuando sólo hay diluyente en el baño). La concentración de HGB se
calcula con la siguiente ecuación y se expresa en g/L.
HGB (g/L) = constante x log (fotocorriente en blanco/fotocorriente de muestra
REACTIVOS UTILIZADOS
Para el funcionamiento del analizador automatic BC-3600 se necesitan de los siguientes
reactivos : Diluyente M-30, Lisante CFL, Enjuague, Limpiador E-Z, Limpiador de sondas.


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DILUYENTE M-30: Proporciona un entorno estable para el recuento y la medicion de

celulas sanguineas.
LISANTE CFL: Sirve para divider las paredes de los globulos rojos y foma un complejo
con la hemoglobin para realizer su medición y determina la cantidad total de WBC.
LIMPIADOR E-Z Se trata de una solucion de limpieza creada para cebar y limpiar las
lineas fluidicas y los tubos y para eliminar la albumina en sangre y los sedimentos.
LIMPIADOR DE SONDA: Se utiliza para limpiar el analizador con regularidad.
MANEJO DEL ANALIZADOR
1. COMPROBACIONES INICIALES
- Comprobar las conexiones electricas
- Comprobar la conexion del analizador al computador
- Comprobar la conexion a la impresora
- Comprobar que los reactivos esten conectados adecuadamente y que exista suficiente
cantidad de cada uno de ellos.
- Verificar que el recipient de desechos este vacio.
2. ENCENDIDO DEL SISTEMA
- Encender la UPS
- Encender el analizador
- Encender el computador


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MANEJO DEL ANALIZADOR BC-5380

MANEJO DEL EQUIPO BC 3600
Seguir el siguiente diagrma de flujo en el funcionamiento diario del analizador.
Comprobaciones
iniciales
Encendido: Incluye
encendido del
analizador e
inicializacion del
sofware
Control de Calidad
Diario
obtencion y
manipulacion de
muestras
procesamiento de
muestras
Apagado: Apagar el
analizador y cerrar el
sofware


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CONTROL DE CALIDAD
EL control de calidad se debe procesar diariamente antes de iniciar a procesar las muestras.
Es de obligatorio cumplimiento pasar los tres niveles y realizer analisis y medidas correctivas.
NOTA: Para una correcta orientacion relacionada con el funcionamiento de el

analizador BC-3600 ver manual del operador o guia rapida de manejo.
ALTERACION DE PARAMETROS DE CUADRO HEMATICO
Cuenta Leucocitaria (WBC):
Valor normal: 4.500 y 11.500 células por mm³ (o microlitro) de sangre, variable según las
condiciones fisiológicas (embarazo, stress, deporte, edad, etc.) y patológicas (infección,
cáncer, inmunosupresión, aplasia, etc.). Los glóbulos blancos o leucocitos se dividen en dos
líneas celulares los granulocitos o leucocitos polimorfonucleares y los agranulocitos o
leucocitos mononucleares. En el grupo de los granulocitos encontramos los neutrófilos, los
basófilos y los eosinófilos. Los agranulocitos incluyen los linfocitos y monocitos.
Los dos trastornos existentes de estas células sanguíneas son:



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Leucocitosis: (cuenta mayor de 10000/µl 103/mm3/ µl): Suele deberse al aumento de un

solo tipo de glóbulo blanco. Sin embargo, cuando es consecuencia del aumento de todas las
células de la línea blanca podemos sospechar hemoconcentración en el paciente. Se produce
leucocitosis en las infecciones agudas en las que el número de leucocitos depende de la
intensidad de la infección, la resistencia del paciente, su edad y la eficiencia y reserva de la
medula ósea.
Leucopenia: (cuenta por debajo de 4000/mm3 o 4 X103 /mm3): Se presenta en infecciones

virales y bacterianas, hiperesplenismo, depresión de la medula ósea por fármacos,
neutropenia inmunológica, y enfermedades ocupativas de la medula ósea (infecciones
micóticas o metástasis).
Neutrófilos:
Valor normal: 55 a 70 % de la cuenta leucocitaria normal, 2.500 y 7.500 células por mm³
Estas células son el tipo de leucocitos más numeroso e importantes en la reacción inflamatoria
del organismo. Constituyen la principal defensa contra la invasión microbiana a través del
proceso llamado fagocitosis.
Neutrofilia: (>8000/mm3 o >70%): Se presenta en infección bacteriana generalizada aguda,

inflamación, intoxicaciones, y algunas enfermedades virales por rickettsias.


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Neutropenia: (< 1.800/mm3 o <40% ): Se presenta en infecciones bacterianas agudas,

infecciones virales, infecciones por rickettsias, algunas enfermedades parasitarias y
hepatopatía.
Eosinófilos:
Valor normal: 0 a 3% de la cuenta leucocitaria total, 50 a 250 mm3
Los eosinófilos fagocitan los complejos antígeno-anticuerpo y se activan durante las ultimas
fases de la inflamación, son los encargados de responder ante patologías alérgicas y
parasitarias.
Eosinofilia (>5% o >500 mm3): Se produce en los casos de fiebre del heno, alergias, asma,
enfermedades crónicas de la piel (psoriasis, pénfigo), algunas infecciones (clamydia,
parásitos), enfermedades autoinmunes, o en respuesta a drogas.
Eosinopenia: (reducción de la cantidad de eosinófilos circulantes bajo 50/mm3): Las

principales alteraciones vinculadas con este desorden son: infecciones bacterianas agudas
con gran desviación a la izquierda, fiebre tifoidea.
Basófilos:
Valor normal: 0 a 1% de la cuenta total leucocitaria o 25 a 100 mm3



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Estas células son consideradas como fagocitos y contienen heparina, histamina y serotonina.
Basofilia (conteo mayor de 100/mm3): Se asocia comúnmente a leucemia granulocítica,

metaplasia mieloide, linfoma de Hodgkin. Menos frecuentemente se asocia a inflamación,
post-esplenectomía, infecciones (TBC, sarampión, influenza).
Basopenia (conteo menor a 20/mm3): Se asocia a la fase aguda de las infecciones,

reacciones al stress, tratamiento prolongado con corticoides, ausencia hereditaria de
basófilos, fiebre reumática en niños.
Monocitos:
Valor normal: 3 a 7% de la cuenta leucocitaria total o de 100 a 600/mm3.
Son las células con mayor tamaño en la sangre normal y constituyen la segunda línea de
defensa del organismo contra la infección.
Monocitosis (>800/mm3): Se presenta en infecciones bacterianas, TBC y endocarditis

bacteriana subaguda, sífilis, artritis reumatoide, VIH, LES y púrpura trombocitopenica.


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Reducción en la cuenta de monocitos (menos de 100/mm3): Se da con aplicación de

tratamientos con prednisona, artritis reumatoide y VIH.
Linfocitos:
Valor normal: 25 a 40% de la cuenta leucocitaria total o de 1000 a 4000/mm3.
Constituyen la fuente de inmunoglobulinas séricas y de la respuesta inmunológica celular y

tienen gran importancia en las reacciones inmunológicas.
Linfocitosis (>4000/mm3 en adultos, mayores de 7200/mm3 en niños, y 9000/mm3 en

recién nacidos): Se presenta en la linfocitosis infecciosa (principalmente virales: EBV, CMV,
infecciones tracto respiratorio superior, hepatitis viral, paperas, sarampión, toxoplasmosis;
principalmente en niños), mononucleosis infecciosa, TBC, brucelosis y tos ferina.
Linfopenia: (<1000/mm3 en adultos, 2500/mm3 en niños): Quimio y radioterapia, VIH, TBC.

Recuentos celulares bajo 500/mm3 significan que el paciente se encuentra muy susceptible a
infecciones, especialmente virales, por lo que se debe proteger de éstas.
Recuento Eritrocitario:
En la evaluación de esta serie se considera el conteo de glóbulos rojos o eritrocitos, el

hematocrito (HTO, porcentaje de la sangre que corresponde a glóbulos rojos), concentración


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total de hemoglobina (HGB, es la proteína dentro del eritrocito que trasporta el oxígeno por la
sangre), e índices de los glóbulos rojos como el volumen corpuscular medio (MCV, tamaño
globular promedio), concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC, concentración
promedio de hemoglobina de los eritrocitos), y distribución por tamaño de los glóbulos rojos
(RDW, dispersión en los tamaños de los eritrocitos).
• Volumen plaquetario medio (MPV por sus siglas en inglés) – el tamaño medio de
las plaquetas. Esto es importante porque las plaquetas nuevas son más grandes que
las viejas, y un MPV más alto indica una producción más alta de plaquetas.
• Hemoglobina corpuscular media (MCH por sus siglas en inglés) – la cantidad
media de hemoglobina en los glóbulos rojos.
• Concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC por sus siglas en
inglés) – la concentración media de hemoglobina en los glóbulos rojos. La MCHC le da
al médico una imagen de la palidez de las células; por ejemplo, de muy pálidas a rojas
oscuras. El grado de palidez puede ayudar a establecer un diagnóstico.
• Volumen corpuscular medio (MCV por sus siglas en inglés) – el tamaño medio de
los glóbulos rojos. "Macrocítica" describe el estado por el que un glóbulo rojo es más
grande de lo normal; "microcítico" se refiere al estado por el que un glóbulo rojo es más
pequeño de lo normal. El tamaño medio de un glóbulo rojo puede ayudar a establecer
un diagnóstico.
• Amplitud de distribución eritrocitaria (RDW por sus siglas en inglés) – la cantidad
de variación en el tamaño de los glóbulos rojos.


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• MCV: 82-98 fl.

• MCHC: 31-37 g/dl.
• MCH: 26-34 pg/célula.
• RDW: 11.5-14.5.
Tanto el número de eritrocitos, como el HTO son parámetros que evalúan la cantidad de
glóbulos rojos en la sangre. La reducción de estos valores, pueden interpretarse bajo una
condición llamada anemia, que puede ser originada por disminución de la hematopoyesis
medular, destrucción celular, pérdidas directas o indirectas por dilución sanguínea. Pueden
presentarse también en algunas enfermedades como: LES, fiebre reumática y endocarditis
subaguda, cirrosis, y reacción hemolítica. Por el contrario, el aumento de estos valores puede
interpretarse bajo una condición llamada policitemia o poliglobulia. Puede estar causada por
un aumento en la producción medular en forma primaria (Policitemia vera), secundaria a
enfermedades sistémicas (enfermedades pulmonares, enfermedad cardiovascular y renal), o
en forma indirecta (deshidratación, hipo ventilación). Un HTO mayor a 60% se asocia a
eritrocitocis, deshidratación intensa y hemoconcentración.
• A través de la concentración de la hemoglobina podemos evaluar si los eritrocitos

pueden cumplir su función: llevar oxígeno a la periferia del organismo, actividad llevada
a cabo por la hemoglobina del glóbulo rojo. La disminución de HGB se puede observar
en anemias primarias, embarazo, enfermedades renales, enfermedades autoinmunes,
problemas de alimentación. Los niveles altos de hemoglobina pueden estar en


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cardiopatías, deshidratación, enfermedades pulmonares crónicas, estancias en lugares

de mucha altitud.
Recuento de Plaquetas
• Valores normales: 150.000 a 400.000/mm3

• La actividad de las plaquetas es necesaria para la coagulación de la sangre, integridad
vascular, vasoconstricción, su adherencia y agregación son indispensables para la
formación del tapón hemostático que ocluye las roturas de los vasos pequeños.
• Exceso de plaquetas o trombocitosis: Ocurre en cáncer, esplenectomía,
traumatismo, artritis reumatoide, infecciones agudas, pancreatitis y TBC.
• Reducción de las plaquetas o trombocitopenia (<140.000/mm3): Esta
condición se observa en alteraciones congénitas; por disminución de la producción
como en las infecciones virales y el sarampión. Se genera también por aumento de la
destrucción, donde dentro de las causas no inmunes se encuentra la sepsis, y las
prótesis intravasculares; y dentro de las inmunes, las primarias: Púrpura
Trombocitopénico Idiopático, y secundarias a infecciones virales, bacterianas y drogas.
5. REALIZACIÓN Y TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO
La práctica del frotis sanguíneo, también llamado extendido, es de gran importancia en

hematología ya que el diagnóstico de muchas enfermedades hematológicas puede realizarse


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con sólo observar las características morfológicas de las células sanguíneas, de manera que
éste no debe ser excesivamente grueso ni excesivamente fino.
Todas las láminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodón y alcohol al
70% para eliminar la grasa que viene adherida.
MÉTODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS
Materiales
• Desinfectante
• Algodón.
• Lanceta descartable. Gota de sangre venosa a partir tubo con edta
• Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm)
Fundamento
Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjeto (25 x 75), empleando el
canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensión (ver fig.1).
Procedimiento.
Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se coloca una pequeña gota
de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de


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uno de los extremos. Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del
primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un ángulo de 45º.
Cuando se utiliza sangre anticoagulada (EDTA) el frotis se realizará dentro de las 2 primeras
horas de practicada la extracción de sangre, ya que de no ser así el efecto del anticoagulante
sobre los leucocitos produce hinchamiento nuclear con falso aumento del número de neutrófilos no
segmentados (bandas), vacuolización citoplasmatica y aparición de diversos artefactos.
Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en sentido

longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer
portaobjeto. El grosor del frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entre
sí ambos portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la extensión obtenida será gruesa y corta, si
es inferior a 45º será larga y fina. El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición
horizontal.
Fig. 1 extendido de sangre


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Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediata al punto de partida de la

extensión (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos.
Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensión y termina en un área donde

las células adoptan una posición acartonada (barbas). En esta región existe un exceso de
granulocitos y monocitos.
Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un reparto
equilibrado de células.
TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar

las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los eritrocitos, su contenido
de hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información obtenida de un frotis de
sangre periférica depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloración.
Materiales
• Colorante de Wright
• Frasco gotero.
• Solución amortiguada tamponada buffer


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Procedimiento
• Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20 minutos.

• Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante de Wright,
dejándolo por espacio de 5 minutos. Posteriormente se añade solución amortiguada
tamponada en partes iguales hasta obtener un brillo metálico, dejando 3 minutos
adicionales. Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
• Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la calidad de la coloración,
la cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se
coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca a un aumento de 100x La forma de los
glóbulos rojos se examinará detenidamente observando además del color (cantidad de
hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupación y distribución.
Calidad del frotis
Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una buena diferenciación de las
estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloración rosada de los hematíes y la
ausencia de precipitados. Los defectos más frecuentes observados en la tinción del frotis
sanguíneo son:
Coloración excesivamente azul, debido a:
• Frotis excesivamente grueso.


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• Lavado insuficiente.
• Tinción muy prolongada.
• Empleo de colorante excesivamente alcalino.
Coloración con una tonalidad rosada:
• El colorante, el tampón o el agua de lavado tienen un pH demasiado ácido.

• Presencia de precipitados:
• Obedecen a una acción excesiva del colorante. Esto se puede evitar
• Con la filtración.
INTERPRETACIÓN DEL FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA
Es el reflejo de un buen o mal funcionamiento de la médula ósea y de los diferentes factores que
influyen en la presencia de las células maduras en calidad y en cantidad normales en el frotis de
sangre periférica F.S.P.
Es preciso saber valorar un frotis de sangre periférica para conducir con acierto un paciente
anémico o con algún otro tipo de patología.
Glóbulos rojos:


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Los glóbulos rojos normales son normociticos - normocromicos, no obstante se pueden encontrar estas
características en algunos casos de anemias con o sin poiquilocitosis. Los términos normociticos -
normocromicos empleados para informar un F.S.P. se utilizan únicamente cuando el paciente no
presenta ninguna alteración en los glóbulos rojos.
• Anisocitosis (Diferentes tamaños)
Se informa como ligera, moderada o marcada especificando siempre a expensas de que esta
alterada la Anisocitosis. Ej: ligera (moderada o marcada) anisocitosois con presencia de glóbulos rojos
macrocitos + (+ + o + + +)
Criterios para evaluar la Anisocitosis:
• Deben contarse 10 campos y luego dividirse el resultado por 10

• Cuando hay macrocitos y microcitos en la misma lámina el resultado es la sumatoria de los dos.
• El resultado debe compararse con la siguiente tabla:
Normal Ligera Moderada Marcada

0-5 6-15 16-30 Mayor de 30


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Microcitosis: (Microcítico = glóbulo rojo de 3 a 5 u )
Normal Ligera + Moderada + + Marcada + + +

0-5 6-15 16-30 Mayor de 30
VCM(fl) 80-95 76-80 66-75 Menor de 65
Macrocitosis: (Macrocítico = glóbulo rojo mayor de 9 u )

0-5 6-15 16-30 Mayor de 30
VCM (fl) 80 - 95 96 - 108 109 - 120 Mayor de 120
• Poiquilocitosis: (Diferentes formas )
Se informa como ligera, moderada o marcada con presencia de y se especifica a expensas de que
esta dada y en que intensidad cada una .Ej: Moderada poiquilocitosis con presencia de
Leptocitos + + y Codocitos + .
Deben contarse 10 campos, sumar el valor total de cada uno y dividir por 10.
Forma anormal Normal Ligera + Moderada + + Marcada + +
Esferocito 0 1-5 6-15 Mayor de 15

Acantocito 0 1-5 6-15 Mayor de 15
Células falciforines 0 1-5 6-15 Mayor de 15
Dacriocitos 0-1 2-5 6-15 Mayor de 15


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Codocitos 0-1 2-5 6-15 Mayor de 15

Etc. 0-1 2-5 6-15 Mayor de 15
La intensidad general de la poiquilocitosis la puede obtener al evaluar 10 campos y observar las

diferentes formas que encuentra en el promedio de los 10 campos.
El criterio para esta evaluación es el siguiente:

0-5 6-15 16-30 Mayor de 30
• Inclusiones Eritrocitarias debe ser informado por cruces en los campos

Observados así:
Inclusiones Eritrocitarias Normal + ++ +++

Cuerpos de Howell - Joly 0 1-2 3-5 Mayor de 6
Punteado basófilo 0 1-2 3-5 Mayor de 6
Anillos de Cabot 0 1-2 3-5 Mayor de 6
• Punteado Basófilo: Corresponde a una acumulación de granulos que se tiñen de un

intenso color azul con los colorantes de Romanowsky, ya que están compuestos de
agregados Ribosómicos . Estos granulos muestran variación de tamaño y numero. El


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punteado basófilo se observa generalmente en trastornos causados por alteración de la

biosíntesis de la hemoglobina como anemia Megaloblástica, intoxicación por plomo.
• Cuerpos de Howell - Joly: Aparecen como inclusiones esféricas generalmente de 1 - 2 u

de diámetro que se tiñen intensamente de púrpura con los colorantes de Romanowsky .
Los observamos en todas las anemias hemolíticas graves, anemia Megaloblástica y
Talasemia. Un pequeño número de estas inclusiones aparecen tras la esplenectomia, la
Asplenia congénita, así mismo en la Mielofibrosis avanzada y en la Eritroblastosis fetal.
• Anillos de Cabot : Constituyen unas finas fibras que se tiñen de rojo violeta mediante
los colorantes de Romanowsky y se disponen concéntricamente a la membrana Eritrocitaria. El
anillo se puede encontrar acompañado de otras inclusiones como el punteado basófilo.
Hemoglobina
Con respecto a la cantidad de hemoglobina contenida ( Normocromía - Hipocromía ) y de la
madurez de la misma (Policromatofília) informar las deficiencias en relación de ligera, moderada o
marcada de acuerdo a los siguientes parámetros:
Hipocromía:

0-5 6-15 16-30 Mayor de 30
HCM ( pg ) 29 - 33 28-30 25-27 Mayor de 24


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Policromatofília:

0-15 1.6 - 2.5 2.6 - 3.5 Mayor de 3.6
Reticulocitos % 0 - 1.5 2-4 4-6 Mayor de 6
Plaquetas
Anotar si están aumentadas, disminuidas o normales en número. Se considera normal el encontrar un
promedio de 7 a 21 plaquetas por campo donde los glóbulos rojos apenas se toquen entre si. Es necesario
además de observar el número, anotar la morfología anormal, por lo tanto si las encuentra sin gránulos
infórmelas como plaquetas a granulares (plaquetas azules) anote además si se encuentran dispersas y si
hay predominio de macroplaquetas estas también se deben informar. Si encuentra las plaquetas
agregadas, informar y de tamaño normal infórmelas como normales en morfología.
6. RECUENTO DE RETICULOCITOS
Fundamento
La medula ósea es el principal centro de fabricación de células en nuestro cuerpo entre ellas
los eritrocitos. En este compartimento celular los precursores eritroides sufren un proceso de
maduración y diferenciación acompañado por un proceso de multiplicación en las fases
intermedias en la maduración antes de originar el eritrocito maduro que sale a circulación
sanguínea.


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Aunque todos y c/u de los estados previos al eritrocito reviste especial importancia, se
considera que los RETICULOCITOS tienen un importante rol a nivel clínico porque su
presencia en sangre periférica implica que necesariamente se dieron todos los pasos celulares
anteriores a el eritrocito, es decir, el número de Reticutocítos en sangre periférica es
prácticamente un reflejo del grado de actividad eritropoyética medular, significado que la
medula ósea encuentra perfectamente y esta originando eritrocitos. A esta capacidad que tiene
la médula de responder ante los estímulos adecuados para producir eritrocitos es lo que se
denomina capacidad RESPONDEDORA o Entropoyesis efectiva. Los Reticulocitos duran 2 - 3
días en medula y terminan su maduración 24 horas después en sangre periférica. Este espacio
de tiempo es importante porque siendo una célula inmadura es posible visualizarla en sangre
periférca, y a nivel del control analítico implica que la prueba debe procesarse inmediatamente
corque se corre el riesgo de que madure In vitro.
Los reticuiocitos son hematíes que han perdido su núcleo pero que no están completamente
maduros y que tienen restos de RNA(ribosomal) aspecto estructural que es explotado por
algunas técnicas de laboratorio. Existen una serie de colorantes llamados supravitales que
tienen la capacidad de precipitar y colorear dicho RNA haciéndolo visible ante el microscopio
de luz. Como ejemplos de estos colorantes esta: el azul de Cresil Brillante o Azul de metileno
nuevo. Al tratar una muestra de sangre con este colorante. Los Reticulocitos se van a observar
como eritrocitos que en su citoplasma tienen una fina malla de filamentos, malla que
corresponde al RNA precipitado.


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Debido a la presencia en el citoplasma celular del RNA que es de naturaleza acida este se va
a teñir con la parte básica del colorante dando un tono azul a la célula. En la medida en que
haya mayor concentración de reticulocitos la tonalidad azul va ha notarse más. A este
fenómeno en el cual los eritrocitos ante el Wright presentan una mezcla de células azul-grisosa
al extendido se le denomina POLICROMATOFILIA.
Muestra
Sangre total anticoagulada
Material
1. Colorante azul de cresil brillante

2. Tubos de ensayo de 13x100
3. Láminas
4. Baño de maría
5. Pipeta automática
6. Aceite de inmersión
Procedimiento
1. En un tubo colocar 100 ul de colorante y 100 ul sangre total, mezclar bien

2. Incubar a 37°C por 10 minutos
3. Con una pipeta o capilar, tomar una gota de la mezcla y transferirla a una lámina
portaobjetos para realizar extendidos.


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4. Realizar por lo menos dos láminas y dejar secar.

5. Tomar una lámina que se proceso con azul de Cresil, agrégarle aceite de inmersión y
realizar el recuento el objetivo de 100x.
6. Colorear la otra lámina con coloración de writgh y realizar recuento en objetivo de 100x
7. Buscar campos que contenga eritrocitos separados y seleccionar por lo menos 10
campos que tengan aproximadamente 100 eritrocitos.
8. Contar en estos 10 campos el número de retículocitos. Estos se observan como
eritrocitos con una red irregular, más o menos extensa de cadenas de puntos azules
oscuros que se distinguen perfectamente del resto de eritrocitos
9. Realizar los calculos.
Causas de error
1. Mal mezclado de la muestra

2. Menor tiempo de incubación
3. Colorante sin filtrar
4. Mal entrenamiento del personal
5. No seleccionar campos microscópicos con 100 hematíes aprox.
6. No guardar la proporción colorante-muestra


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Resultados
El resultado de obtiene mediante regla de tres o fórmula directa. Por ejemplo supongamos que
se observan los 10 campos y en total se identifican 50 reticutocitos (sin sacar promedio). Los
reticulocitos vistos en 10 campos corresponde a los vistos en 1000 eritrocitos (escogió 10
campos c/u de 100 eritrocitos aprox.), y el resultado no se expresa sobre 1000 sino sobre el
100%. La regla de tres a plantearse sería:
Si en 1000 Eritrocitostos hay 50 reticutocitos
En100 eritrocitos X
X = 5.0% Rta: Reticulocitos = 5.0%
Por fórmula sería: Reticulocitos % = Número de Reticulocitos x 100
Número de eritrocitos
Si reemplazarnos en nuestro ejemplo sería = 50 x 100/1000 = 5.0%
Este % de reticulocitos se conoce como Valor relativo pues está expresado sobre 100
eritrocitos sin conocer el número real de Eritrocitos del paciente. Para conocer el número real
de Reticulocitos en una muestra del paciente se calcula el Valor Absoluto el cual se hace
tomando como base el número de Eritrocitos que tiene el paciente (Recuento en cámara).
Ejemplo: si tengo el dato anterior pero el paciente tiene 3000000 Eritrocitos/mm³ El valor
absoluto es una simple regla de tres:


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Si en 1000 Eritrocitos hay 5 reticutocitos
En 3.000.000 X
X=15000 reticulocitos/mm³
Este dato de mm³ se pasa a unidades internacionales en L
15000 reticulocitos x 1 mm³ x l000000ul = 15x10 reticutocitos/L
lmm³ lul 1Lt
Valores de Referencia
Recién Nacido 4.0-7.0 %

Recuento Relativo: 2.0 -6.0%
Recuento absoluto: 110-330x10 9 /L
Adultos y Niños Recuento relativo: 0,2 -2.0 % Recuento absoluto: 24 -84 x10 9/L
7. HEMOPARASITOS EN GOTA GRUESA

7.1. Preparación en Gota Gruesa:
• En una lámina portaobjetos colocar 2 gotas de sangre en los extremos de la lámina

• Con la ayuda de otra lámina se extienden en forma de ZIG-ZAG


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• Dejar secar por espacio de 10 minutos

• Cuando esté completamente seca proceder a colorearla con la técnica de Wright modificada..
7.2. Coloración de Wright modificada:

• En un caja cóncava agregar 9 ml de buffer agua destilada + 1 ml de colorante de Wright
• Mezclar
• Colocar en la caja boca abajo la lámina del paciente en estudio.
• El colorante debe cubrirla por completo
• Dejar por espacio de 10 minutos
Secado
La lámina se coloca sobre una gradilla a secar sin escurrir
Lectura
• La lámina seca, es montada en el microscopio colocándole una gota de aceite de inmersión

para ser observada con objetivos de 100X
• Para la gota gruesa se procede igual.
• Se buscan en las dos láminas los Hemoparasitos que existan y se informan las especies de
Hemoparasitos presentes.
• Para hacer los cálculos se miran las formas: anillos gametos etc.
• Se realizan los cálculos y se informa según las normas que se dan a continuación


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Observaciones:
• En el Plasmodium falciparum se debe realizar el índice de parasitemia por separado para

gametocitos y formas anulares.
7.3. TÉCNICA PARA GOTA GRUESA
1 CM
1
C
M


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GRAFICO DE COLORACIÓN PARA GOTA GRUESA


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7.4. GRAFICO HEMOPARASITO EN EXTENDIDO


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7.5. GRAFICO PLASMODIUM VIVAX


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7.6. GRAFICO PLASMODIUM FALCIPARUM


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8. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

La velocidad de sedimentación globular es un examen hematológico que no está incluido en el
desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran
sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, así como en los procesos
inactivos o estrictamente locales.
8.1. MÉTODO DE WESTERGREN

8.1.1. Fundamento
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre
anticoagulada en un tubo en posición vertical. Se lee macroscópicamente la columna de
plasma al cabo de una hora de reposo.
8.1.2. Materiales
Tubos de Westergren.
Soporte para tubos de Westergren.
8.1.3. Procedimiento
En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8% se extrae sangre
venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre una superficie lisa. Se vierte
mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de Westergren, el cual tiene
una graduación de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo y presenta ambos extremos abiertos. La


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sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición vertical sobre una gradilla
especial que obtura ambos extremos.
8.2. Resultados
Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de plasma por
encima del paquete globular.
Valores de referencia
Hombres: 1 - 10 mm de altura/hora
Mujeres: 3 - 14 mm de altura/hora
9. Grupo ABO - HEMOCLASIFICACION
9.1 DEFINICION
Los grupos sanguíneos son antígenos localizados en la membrana del eritrocito. Llamado
sistema ABO y RH positivo o negativo
9.2 OBJETIVO
Realizar una reacción antígeno y anticuerpo con el fin de visualizar el tipo de sangre
correspondiente a cada persona.


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9.3 MATERIALES Y EQUIPOS

Hemoclasificación en placa - Placas de vidrio –Lancetas para toma periférica o sangre
anticoagulada o sin anticoagulante - Pipeta automática - Puntas amarillas - Palillos - Reactivos
anti A, Anti B, Anti D - Lápiz de cera o marcador de vidrio - Alcohol y algodón para toma
periférica.
9.4 DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO

* METODO EN PLACA
No ACTIVIDADES ESENCIALES RESPONSABLE DOCUMENTO / REGISTRO
1. Marcar una placa con A y B y Bacteriólogo(a)
Rh, marcar con el número de la
muestra del paciente.
2. Homogenizar la muestra Bacteriólogo(a)
mediante agitación suave
3.Colocar una gota de sangre con Bacteriólogo(a)
o sin anticoagulante o capilar de la
placa en cada pozo
4 agregar una gota de Anti A; otra Bacteriólogo(a)
gota de Anti B y otra gota de Anti D
5 Mezclar con un palillo, coger las Bacteriólogo(a)
placas y agitar suavemente para
observar la aglutinación
macroscópica.


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6 Leer por aglutinación Bacteriólogo(a)

7 Anotar los resultados en el Bacteriólogo(a) Registro diario de
registro respectivo inmunohematología
8 Transcribir los resultados en el Bacteriólogo(a) Solicitud y resultados de
Sistema de información laboratorio clínico.
CITISALUD
• PRUEBA EN TUBO (RECIEN NACIDOS)

No ACTIVIDADES ESENCIALES RESPONSABLE DOCUMENTO /
REGISTRO
1 Marcar un tubo con el número que le Auxiliar de laboratorio
corresponda al paciente Bacterióloga
2 Agregar al tubo solución salina Bacteriólogo (a)
3 Tomar la muestra con pipeta automática y Bacteriólogo (a)
agregar varias gotas de sangre al tubo.
4 Lavar los glóbulos rojos con solución salina Bacteriólogo (a)
durante un minuto 3 veces
5 Marcar 3 tubos: uno con A, otro con B y otro Bacteriólogo (a)
con Rh.
6 Agregar a cada tubo una gota de la Bacteriólogo (a)


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suspensión y una gota del correspondiente

anti suero: en el tubo marcado con A, una gota
del suero anti A, en el tubo marcado con B,
una gota del suero anti B y en el tubo marcado
con Rh una gota de suero anti D
7 Mezclar suavemente Bacteriólogo (a)
8 Centrifugar durante 1 minuto Bacteriólogo (a)
9 Leer por aglutinación Bacteriólogo (a)
10 Anotar los resultados en el registro Bacteriólogo (a) Registro diario de
respectivo hematología
11 Transcribir los resultados Sistema de Bacteriólogo (a) Solicitud y resultados
información CITISALUD de laboratorio clínico.
9.5 CONSIDERACIONES GENERALES

La aglutinación de las células rojas en presencia del antisuero indica que el resultado de la
prueba es positiva (+) es decir la célula roja posee el antígeno, la ausencia de aglutinación de
las células rojas indica que un resultado es negativo de la prueba y por lo tanto la célula roja
no presenta el antígeno.
Interpretación en placa
• Si la aglutinación se observa en A, es grupo A.
• Si la aglutinación se observa en B, es grupo B
• Si no aglutina en ninguno es grupo O


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• Si aglutina en A y B es grupo AB.

• Si la placa de Rh aglutina es Rh positivo y si no aglutina es Rh negativo.
Interpretación en tubo
• Si da aglutinación en el tubo marcado con A es grupo A
• Si la aglutinación da en el tubo marcado con B es grupo B
• Sino aglutina En el tubo A ni en el tubo B es grupo O
• Si aglutina en el tubo A y en el tubo B es grupo AB
• Si aglutina el tubo de Rh es Rh positivo, si no aglutina es Rh negativo.
9.6 CONTRAINDICACIONES
Ninguno
9.7 RIESGOS
- Derramamiento de la muestra
- Muestra mal identificada
- Confusión de muestras
- Interpretación errónea
9.8 INDICACIONES AL USUARIO
Ninguna.


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BIBLIOGRAFIA
HEMATOLOGIA. Fundamentos y aplicaciones clínicas. Bernadette Rodak / George A.

Fritsma / Elaine M. Keohane. 4 edicion. 2014.
MANUAL DEL OPERADOR. Analizador automatico para Hematologia. Shenzhen Mindray Bio-
Medical Electronics CO. 2010.
GUIA RAPIDA EQUIPO HEMATOLOGIA BC-3600


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Establecer y estandarizar los procedimientos realizados en el area hematológica de la ESE

1.1. Objetivos específicos

• Generar una herramienta de trabajo que permita desarrollar los procedimientos

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La hematología es la rama de la medicina que se encarga del estudio de la sangre y sus

Las enfermedades hematológicas afectan la producción de sangre y sus componentes, como

La mayoría de los exámenes que se efectúan en el área de hematología, se realizan con

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3.1 . CARACTERÍSTICAS BÁSICAS DE LOS ANTICOAGULANTES MÁS USADOS EN

• No alterar el tamaño de los hematíes.

• Evitar al máximo la agregación plaquetaría.

• No alterar la morfología de los leucocitos.

3.1.1.1. ANTICOAGULANTES SÓLIDOS EDTA

Es la sal disódica o tripotásica del ácido etilendiaminotetracético. La sal Disódica (Na2EDTA)

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Ventajas del anticoagulante EDTA

• Respeta la morfología eritrocitaria (especialmente la sal tripotásica) y leucocitaria, de

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Desventajas del anticoagulante EDTA

El cuadro hematico se realiza por metodo automatizado en el equipo BC-3600.

• Citometria de flujo por laser para medicion de leucocitos (WBC)

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Método colorimétrico: La solución de WBC/HGB se coloca en el recipiente donde se mezcla

HGB (g/L) = constante x log (fotocorriente en blanco/fotocorriente de muestra

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