Manual Homologado de Inmuno - 2022

MANUAL DE PRÁCTICAS DE INMUNOLOGÍA CELULAR Y
MOLECULAR
Manual de prácticas de laboratorio de

Inmunología Celular y Molecular.
Decanato de Ciencias Biológicas
1
MOLECULAR
HOJA DE VALIDACIÓN
Versión 2022
EDICIÓN ENERO 2022
ELABORÓ AREA FECHA Y FIRMA
Academia de Inmunología
ACTUALIZÓ
Academia de Inmunología
REVISÓ
María Alejandra Trujillo López
Coordinadora de academia de
Inmunología
APROBÓ
Responsable de Manuales del

Decanato
D.C. Tania Ávila Ruíz
Dirección de área de Biología
2
MOLECULAR
DIRECTORIO
DR. EMILIO J. BAÑOS ARDAVÍN

RECTOR
DR. MARIANO SANCHEZ CUEVAS

VICERRECTOR ACADÉMICO
M. EN C. LAURA CONTRERAS MIONI

DECANA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
D. EN C. TANIA ÁVILA RUÍZ

DIRECTOR DEL ÁREA
ACADEMIA DE INMUNOLOGÍA
3
MOLECULAR
Expresión reflexiva sobre la carrera
Para finalizar los dejo con…….
LAS ÚLTIMAS PALABRAS DIRIGIDAS HACIA LOS ESTUDIANTES EN PÚBLICO ANTES DE

SU MUERTE:
“JÓVENES CIENTÍFICOS: NO OS DEJÉIS CORROMPER POR UN ESCEPTICISMO ESTÉRIL Y

DEPRIMENTE; NO OS DESALENTÉIS ANTE LA TRISTEZA DE CIERTAS HORAS QUE PASAN
SOBRE LAS NACIONES.
VIVID EN LA SERENA PAZ DE LOS LABORATORIOS Y LAS BIBLIOTECAS. PREGUNTAOS

PRIMERO: ¿QUÉ HE HECHO POR INSTRUIRME? Y, DESPUÉS, AL IR PROGRESANDO. ¿QUÉ
HE HECHO POR MI PATRIA? HASTA QUE LLEGUE EL DÍA EN QUE PODÁIS SENTIR LA
ÍNTIMA SATISFACCIÓN DE PENSAR EN QUE DE ALGUNA MANERA HABÉIS
CONTRIBUIDO AL PROGRESO Y BIENESTAR DE LA HUMANIDAD”.
Luis Pasteur (1822 - 1895)
4
MOLECULAR
ÍNDICE
TEMA PÁGIN
A
Introducción………………………………………………………………………… 6
…
Propósitos del 7
laboratorio……………………………………………………...........
Normas de seguridad de los 8
laboratorios…………………………………….........
Reglamento del laboratorio o área……………………………........................... 9
Criterios de evaluación…………...................................................................... 1
0
PRÁCTICAS
Práctica 1. Frotis sanguíneo “Observación de 1

Leucocitos…..................................... 3
Práctica 2. Determinación de grupo 1
sanguíneo…………………………………………………… 7
Práctica 3. Técnicas de aglutinación “Reacciones 2
febriles”……………………………………. 0
Práctica 4. Toma de muestra sanguínea 2

………………………………………………………… 4
Práctica 5. Pruebas cruzadas …………………. 2

………………………………………………………. 9
Práctica 6. VDRL… 3
…………………………………………………………………………………………. 3
Práctica 7. Inmunocromatografía 3
……………………………………………………………………. 5
3
Bibliografía.......................................................................................................... 9
5
MOLECULAR
Introducción
Existe una estrecha relación entre los microorganismos y salud, de tal manera, que el
cambio o encuentro de estas poblaciones microbianas genera una Disbiosis, que se
asocia a un gran número de enfermedades incluyendo: infecciosas, autoinmunes,
crónicas degenerativas, como; enfermedad Inflamatoria intestinal (EII), síndrome irritable
(SI) e incluso enfermedades cardiovasculares y oncológicas. Por este motivo, estudiar y
comprender el mecanismo de inmunomodulación resulta de gran interés. (Hviid, et al.,
2011; Kalam, et al, 2018).
La inmunidad innata es la primera línea de defensa inespecífica, donde macrófagos,

células natural killer, neutrófilos, células dendríticas, que junto con Citocinas y sistema de
complemento, actúan en conjunto para eliminar al agente agresor. Este tipo de inmunidad
se caracteriza por un tiempo de respuesta rápida de segundos a horas, donde las células
de la inmunidad innata tienen la capacidad de reconocer patrones moleculares asociados
al patógeno (PAPMs), a través de receptores PRR (Receptores de reconocimiento a
patrones), donde los receptores tipo Toll (TLR), son los más estudiados. Este tipo de
inmunidad funciona de forma independiente a exposiciones previas al inductor (Albert et
al., 2008, Ruiz-Álvarez et al., 2010).
Una segunda línea de defensa es la inmunidad adaptativa, donde los linfocitos B y T

median la respuesta de defensa específica a través de sus receptores; receptor de células
B (BCR) para el linfocito B y receptor de células T (TCR) para el linfocito T. Esta línea de
defensa se caracteriza por su alta especificidad de reconocimiento del antígeno, de tal
manera que después del reconocimiento por el receptor BCR, se activa el linfocito B y
secreta inmunoglobulinas, respuesta de defensa conocida como inmunidad humoral.
Mientras que en la respuesta inmune celular es mediada por los linfocitos T, la activación
implica la acción de linfocitos CD4+ y los linfocitos CD8+.(Sánchez-Trincado et al., 2017).
La inmunidad adaptativa se caracteriza por su alta especificidad frente a un antígeno y la
regulación de la defensa, mediada por las citocinas, pero sin duda, una de las
característica principal de este tipo de inmunidad es su capacidad de generar memoria
inmunológica.(Albert et al., 2008, Kalam, et al.,2018).
El presente manual tiene como finalidad proporcionar a los estudiantes y catedráticos los
elementos necesarios para la realización de las prácticas de laboratorio y su evaluación,
como un medio del desarrollo de competencias en el reconocimiento de componentes del
sistema inmune, de la interpretación de técnicas de inmunodiagnóstico. Y profundizar en
la importancia del sistema inmune en la salud.
6
MOLECULAR
PROPÓSITOS DEL LABORATORIO
El alumno aprende a desarrollar destrezas en el manejo del paciente para la

obtención de muestras adecuadas para la posterior realización de pruebas diagnósticas
fundamentadas en reacciones antígeno-anticuerpo.
El alumno reconoce el fundamento y por lo tanto la correcta interpretación de

pruebas diagnósticas antígeno-anticuerpo.
El alumno aprende a distinguir entre pruebas diagnósticas antígeno-anticuerpo

presuntivas y confirmatorias.
El alumno desarrolla la habilidad del trabajo en equipo así como de la elaboración

de un reporte de laboratorio.
7
MOLECULAR
NORMAS DE SEGURIDAD DE LOS LABORATORIOS
Localiza los dispositivos de seguridad más próximos.

Estos dispositivos son elementos tales como extintores, lavaojos, ducha
de seguridad, mantas anti fuego, salida de emergencia. etc. Infórmate
sobre su funcionamiento.
No oler directamente las sustancias químicas.

Por tu seguridad evita oler directamente toda clase de sustancia química
que utilices en el laboratorio, ya que la sustancia podría llegar a ser
tóxica.
Precaución al encender fuego.

Al encender el mechero o lámpara de alcohol retira las sustancias volátiles.
Derrame de ácidos o álcalis.

Evitar el derrame de ácidos o álcalis en la mesa de trabajo. Si algo se
derramara notifique al profesor, de manera que puedan aplicarse los
procedimientos de limpieza adecuados.
Manejo de sustancias.
Siempre utilizar perillas para el pipeteo de sustancias tóxicas para evitar
ingerirlos o que hagan contacto con tu boca. También no olvidar
proceder siempre con precaución cuando transfiera sustancias de sus
recipientes. No cambiar las pipetas colocadas en los frascos de reactivos
de uno a otro, pues se contaminan los reactivos.
Llaves de paso.
Comprobar que las llaves del gas y de agua estén cerradas.
En caso de accidente.
Considera la seguridad de sus compañeros, por ello el laboratorio es un
lugar para trabajar con seriedad. En caso de cualquier accidente
personal o del material de trabajo, notifíquese inmediatamente al
maestro.
Ácidos diluidos.
Al preparar ácidos diluidos, nunca agregue agua sobre un ácido
concentrado. Si es necesario preparar un ácido diluido, debe agregarse
siempre el ácido concentrado, en pequeñas cantidades, sobre el agua y
agita
8
MOLECULAR
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
1. Todos los alumnos deberán usar bata blanca de manga larga, abotonada y limpia
dentro del laboratorio.
2. Queda estrictamente prohibido fumar, comer o beber, mascar chicle dentro del
laboratorio, aún fuera de la hora de laboratorio.
3. Traer sólo lo indispensable para laboratorio y colocarlo en el estante destinado para
ello.
4. Para la hora de entrada se tiene 10 minutos de tolerancia; después de éste tiempo no
se permitirá el acceso a laboratorio. Por reglamento UPAEP no se admiten justificantes de
ningún tipo.
5. La estancia de los alumnos dentro del área de laboratorio debe ser en un marco de
respeto, tanto para las instalaciones como para el personal que labora dentro de ellas, así
como para sus compañeros, si se incurriera en una falta de respeto se llamara la atención, a
la segunda vez se pedirá el retiro del laboratorio teniendo inasistencia y la sanción debida.
6. Obligatorio el haber estudiado con anterioridad la práctica correspondiente , si no
entiende algún procedimiento, pregunte de manera pertinente.
7. Los trabajos a entregar en la práctica según sea el caso se entregan a la semana
siguiente de haberla realizado, a través de Blackboard, no se reciben impresas.
8. El equipo que no asista con el material requerido para la práctica tendrá inasistencia.
9. En caso de accidente personal o del material de trabajo notifíquese inmediatamente al
maestro o instructor.
10. Comprobar que las llaves de gas y agua estén cerradas antes de salir del laboratorio
así como colocar los bancos debajo de las mesas y lavarse las manos antes de retirarse del
laboratorio, por favor hacer uso correcto y no desperdiciar el papel de secado.
11. Las preparaciones a observación o laminillas no deben ser desechadas con otro
material, el maestro o instructor será el encargado de retirarlas una vez observadas.
12. las mujeres deben traer el cabello perfectamente recogido y sin copetes, unas cortas,
no tacones ni sandalias, uniforme en perfectas condiciones de limpieza.
13. Los varones deben tener el cabello corto, sin excepciones, uniforme en perfectas
condiciones de limpieza.
14. Debe de considerarse al laboratorio de microbiología un lugar infecto contagioso por
el material que en él se maneja.
15. Estrictamente prohibido tener audífonos, lentes de sol, gorras, y el celular o
localizador prendidos dentro de las horas de laboratorio. evitar en todo momento utilizar el
celular.
16. Todas estas indicaciones han sido elaboradas pensando en tu seguridad y en la de tus
compañeros, el maestro o instructor podrá sancionar al alumno que no cumpla estas normas,
ya que de ello depende el aprovechamiento del laboratorio y tu aprendizaje.
ATENTAMENTE
COMITÉ DE SEGURIDAD
9
MOLECULAR
CRITERIOS DE EVALUACIÓN
Asistencia, puntualidad y permanencia en todas las prácticas.
1. Respeto a las normas y reglas de seguridad y de conducta dentro del

laboratorio.
2. No se permite el uso de celulares durante las sesiones de laboratorio.
3. Realizar de forma completa y correcta las actividades de

la práctica correspondiente.
Haber leído el manual de prácticas antes de realizar la actividad.
● Asistencia a todas las prácticas con uso de ropa blanca, zapatos cerrados
blancos con suela antiderrapante, bata blanca de manga larga y
correctamente abotonada, cubre bocas, guantes y lentes de seguridad
(cuando sea necesario).
● Entrega del informe de práctica, individual o en equipo según las

indicaciones de la actividad, en la fecha indicada por el profesor.
● Informe de acuerdo a la rúbrica
Los parámetros a evaluar del reporte serán:
Niveles de rendimiento
Criterios Principiante Competente Muy competente
Presentación 0 Puntos 0,5 Puntos 1 Puntos
No realiza una portada Realiza una portada para Realiza una portada para
para el trabajo que el trabajo que contenga, el trabajo que contenga,
contenga, el nombre de la el nombre de la el nombre de la
universidad el nombre de universidad el nombre de universidad el nombre de
la práctica, nombre del la práctica, nombre del la práctica, nombre del
estudiante con matrícula estudiante con matrícula estudiante con matrícula
y la fecha y entrega del y la fecha de entrega del y la fecha entrega del
trabajo trabajo, pero están en trabajo y están en orden
10
MOLECULAR
desorden o falta alguna y bien distribuidos en la
de estos puntos. Utiliza página, colocando toda la
letra arial. información centrada en
la página, dejando
espacios que permitan
que la información se vea
bien distribuida. Utiliza
letra Arial.
RESULTADOS 0 Puntos 1.5 Puntos 3 Puntos
No presenta resultados Presenta imágenes sin Presenta imágenes de

pie de figura las muestras observadas
en laboratorio con pie de
figura
Investigación 1 Puntos 3 Puntos 6 Puntos

y referencias
No cumple o cumple con Cumple en un 70% con Realiza la discusión
menos del 40% de los los siguientes requisitos: documentada de los
siguientes requisitos: Realiza la discusión contenidos revisados
Realiza la discusión documentada de los para la práctica y/o el
documentada de los contenidos revisados cuestionario y en las
contenidos revisados para la práctica y/o el preguntas donde tiene
para la práctica y/o el cuestionario y en las que hacer una
cuestionario y en las preguntas donde tiene investigación
preguntas donde tiene que hacer una bibliográfica, realiza
que hacer una investigación descripción por paráfrasis
investigación bibliográfica, realiza del contenido. Realiza
bibliográfica, realiza descripción por paráfrasis una conclusión personal
descripción por paráfrasis del contenido. Realiza o de equipo sobre el
del contenido. Realiza una conclusión personal o tema y resultados de su
una conclusión personal de equipo sobre el tema y práctica y además de que
o de equipo sobre el tema resultados de su práctica coloca las citas en
y resultados de su y además de que coloca formato APA. Al final del
práctica y además de que las citas en formato APA. trabajo coloca la o las
coloca las citas en Al final del trabajo coloca referencias utilizadas
formato APA. Al final del la o las referencias para su investigación. Se
trabajo coloca la o las utilizadas para su requieren un mínimo de 2
referencias utilizadas investigación. Se referencias.
para su investigación. Se requieren un mínimo de 2
requieren un mínimo de 2 referencias.
referencias.
11
MOLECULAR
4. Porcentajes del valor de los criterios de evaluación:
Criterios Porcentaje
Asistencia, puntualidad y respeto a las normatividad 10%
Habilidades y destrezas (competencias) en la realización de la práctica 30%
Informe de prácticas 60%
Total 100%
NOTA: La calificación obtenida de las prácticas del Laboratorio corresponde al

10% de la calificación total de la asignatura.
12
MOLECULAR
PRÁCTICA 1
OBSERVACIÓN DE LEUCOCITOS
PROPÓSITO
Realizar frotis sanguíneos preparados cuidadosamente y teñidos con el colorante de

Wright, el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un color púrpura facilitando su
diferenciación.
INTRODUCCIÓN
“Los cinco principales tipos de leucocitos son los neutrófilos (50-70%), los eosinófilos (1-
5%), basófilos (0.5-1.0%), linfocitos (20-30%), y monocitos (2 –6%). Por cuenta
diferencial se entiende la determinación del porcentaje relativo de cada tipo de leucocito
en una muestra de sangre. Se realiza en extendidos (frotis) preparados cuidadosamente
y teñidos con colorantes tales como Wright, el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un
color púrpura que facilita la diferenciación.”
Las células hematopoyéticas precursoras de la médula ósea e hígado fetal, que

se dirigen al timo mediante un fenómeno llamado "Homing," y penetran en él sufren
estadios de diferenciación, lo que da como resultado linfocitos T maduros que se vierten
en sangre y tejidos linfoides periféricos. La maduración del linfocito T en timo, se
acompaña de una serie compleja de cambios en su genotipo y fenotipo, el primer
marcador que aparece sobre su superficie es el CD2 (una glicoproteína que tiene función
de molécula de adhesión), posteriormente se lleva a cabo un rearreglo de los genes TCR
(receptor de la célula T) posteriormente aparece la molécula de superficie CD3
(marcador, al igual que el CD2, que poseen todos los linfocitos T y que sirve para la
transducción de señales). Al madurar el linfocito todavía en timo adquiere en su superficie
los marcadores CD1, CD4 y CD8 entre otros receptores y es en timo dónde se lleva a
cabo una selección de los linfocitos T eliminándose aquellas clonas de alta afinidad
autorreactivas y aquellas sin sentido, y perduran las clonas útiles. Los linfocitos se
caracterizan de acuerdo a marcadores de superficie; por ejemplo, los linfocitos T
citotóxicos expresan el CD8, mientras que los linfocitos T cooperadores expresan el CD4.
Dentro de las funciones de la respuesta inmune mediada por linfocitos T están:
respuestas efectoras antígeno-específicas mediante la secreción de citocinas,
citotoxicidad mediada por células e inmunidad mediada por células, intervienen en la
activación y diferenciación de células T y B (cooperación y amplificación), regulación de
respuestas inmunitarias. Los linfocitos B son las células precursoras de las células
plasmáticas (productoras de inmunoglobulinas), su fuente principal es hígado fetal y
médula ósea. La médula ósea es la encargada de madurar a los linfocitos B, a diferencia
de los T que se maduran, como ya se dijo, en timo. Las células B tienen en su superficie
marcadores específicos como el CD19 y CD20, así como receptores para C3b de
complemento.
Un frotis o extendido sanguíneo se hace con la finalidad de teñir las células sanguíneas
con colorantes policromatófilos y poder detectar alteraciones morfológicas de los
13
MOLECULAR
eritrocitos. De igual manera es posible identificar leucocitos (glóbulos blancos) con base a
afinidades tintoriales o morfológicas.
Los colorantes policromatófilos son mezclas de compuestos básicos como el azul de
metileno y ácidos como la eosina. La tinción dependerá de la afinidad ácido – base que
tengan las diferentes estructuras celulares. Los componentes ácidos, como el núcleo se
tiñen con el colorante básico, por lo que reciben el nombre de basófilos mientras que los
componentes básicos se tiñen con el colorante ácido (eosinófilos). Algunas estructuras
celulares se tiñen con ambos colorantes y se conocen como neutrófilos. En la siguiente
tabla se resume la información anterior.
Carácter de la Estructura celular que tiñe

Colorante Tipo
Colo
celular
r
Básico
Ácido Eosinófil
Rojo
o
Ácido
Básico Basófilo
Azul
Neutro Viol
Ácido y Neutrófilo
eta
Básico
Características de los leucocitos

Leucocitos (Granulocitos y Agranulocitos)
%
Micrografía Nombr Características principales
Nor
e
mal
Poseen un núcleo multilobulado (3-5
lobulaciones), y gránulos azurófilos
lisosomas), en su citoplasma contienen
Neutrófil 55-65
enzimas hidrolíticas, lisozima y
os
mieloperoxidasa, las cuales le permiten
actuar en la fase aguda de la inflamación.
Tienen un núcleo multilobulado y poseen

granulaciones acidofílicas que contienen
enzimas hidrolíticas y peroxidasa que son
Eosinófil 0.5-4
liberadas en las vacuolas fagocíticas.
os
Aumentan en infecciones parasitarias y
procesos alérgicos, principalmente.
14
MOLECULAR
Poseen un núcleo multilobulado y grandes
gránulos esféricos basofílicos y
metacromáticos dados por heparina e
Basófilo 0.5
histamina. Liberan además aminas
s
vasoactivas y sustancia de reacción lenta de
la anafilaxia.
Generalmente son células pequeñas que

contienen un núcleo circular oscuro y un
escaso citoplasma azul claro. Existen dos
tipos:
Linfocitos T: Se maduran en el timo y circulan

en la sangre periférica, donde ellos son los
principales artífices de la inmunidad celular.
Linfocito 25-35
Poseen funciones como cooperadores (CD4)
s
ó citotóxicos (CD8), modulando la respuesta
a través de sus efectos sobre otras células.
Linfocitos B: se maduran en la médula ósea y

son los principales encargados de la
respuesta humoral a través de la producción
de anticuerpos.
MATERIAL
Portaobjetos
Lancetas desechables
Torundas con alcohol
Colorante de Wright
Solución reguladora pH 6.4
Microscopio
PROCEDIMIENTO.
Obtención de la muestra:
PRECAUCIÓN: Toda muestra de sangre debe ser tratada como potencialmente
infecciosa, por lo que debe manejarse con precaución. Se debe tener mucho cuidado de
no contaminar con sangre las mesas e instalaciones del laboratorio.
1. La muestra se obtiene de la yema de algún dedo de la mano. Una vez elegido el
dedo, se da masaje suavemente para favorecer la hemoconcentración en la yema
del dedo.
2. Desinfectar la zona con un algodón empapado en alcohol. Se debe dar tiempo

para que el exceso de alcohol se evapore.
15
MOLECULAR
3. Utilizando una lanceta estéril, punzar el dedo.

A partir de la muestra de sangre preparar 2 extendidos (frotis) siguiendo las
indicaciones del instructor.
Dejar secar completamente los frotis, colocar en un puente de tinción y cubrirlos

(contar el número de gotas) con colorante de Wright. Dejar al colorante 10
minutos y añadir el mismo número de gotas de solución reguladora pH 6.4
durante 15 minutos.
Lavar suavemente la preparación con agua corriente por 30 segundos y

secar el exceso de agua.
Cuando la preparación esté completamente seca, colocar una gota de

aceite de inmersión y observar al microscopio con el objetivo de inmersión.
Para facilitar la identificación consultar las láminas a color que ilustran

los diferentes leucocitos.
RESULTADOS.
Observaciones, discusión fundamentada, conclusión, y aplicación en su área.
CUESTIONARIO
1.-¿Cuál es la principal implicación de limpiar el portaobjetos antes de depositar la

muestra?
2.-¿Cuál es el inconveniente de depositar una cantidad de muestra mayor a lo indicado?
3.-¿Qué implicación tiene dejar la laminilla (muestra teñida sobre el portaobjetos) el
tiempo recomendado el colorante?
4.-¿Por qué no retirar el colorante al poner el buffer?
5.-Mencione al menos otra tinción recomendada para teñir frotis sanguíneos y poder
observar a los diferentes tipos de leucocitos y a los eritrocitos
.6.-Mencione al menos dos alteraciones morfológicas de los eritrocitos.
BIBLIOGRAFÍA:
1. Abbas K. Abul. (2018). Inmunología Celular y Molecular. Elsevier. 9° Edición.
2. Alberts, Johnson, Lewis, Morgan, Raff, Roberts, Walter. (2017). Biología
molecular de la célula. Omega.
3. Iwasa J. & Marshall W. (2018). Karp: Biología celular y molecular. McGrawHill.
4. Lewis S. M., Bain B. J. & Bates I. (2008). Dice y Lewis Hematología Practica.
España. Elsevier.
16
MOLECULAR
PRÁCTICA 2.
GRUPO SANGUÍNEO
PROPÓSITO
Demostrar la presencia de los Ag eritrocitarios A, B y D por medio de una reacción
de aglutinación.
INTRODUCCIÓN
En 1901, Landsteiner observó que los eritrocitos humanos eran aglutinados cuando se
ponían en contacto con sueros humanos, actualmente sabemos que los eritrocitos o
glóbulos rojos poseen glucoproteínas en su membrana que se conocen como antígenos
de superficie. Los antígenos son sustancias capaces de despertar una respuesta
inmunológica cuando son inoculados en un ser vivo. Una de las respuestas inmunológicas
más importantes es la formación de anticuerpos. Los anticuerpos son proteínas que
reconocen, con gran especificidad, al antígeno que le dio origen.
Existen dos tipos de antígenos de superficie en eritrocitos: A y B, y estos determinan el

grupo sanguíneo. Las personas con grupo sanguíneo A tienen el antígeno A y anticuerpos
anti-B. Las personas con grupo sanguíneo B poseen el antígeno B y anticuerpos anti-A. El
grupo sanguíneo O carece de ambos antígenos y presenta anticuerpos anti-A y anti-B.
Existe un cuarto grupo sanguíneo llamado AB, cuyos eritrocitos tienen ambos antígenos y
no tiene anticuerpos contra ellos.
En el año 1940, se detectó la existencia de un nuevo antígeno en la membrana de los

eritrocitos de la mayoría de la población. Este nuevo antígeno fue denominado con los
iniciales Rh, ya que fue identificado por primera vez en la superficie de los glóbulos rojos
del simio Macaccus Rhessus. Se denominan Rh positivos a las personas cuyos glóbulos
rojos tienen el antígeno Rh (también denominada proteína D) en su superficie y que son
aglutinados por el anticuerpo anti-D. Se denominan Rh negativos los que no son
aglutinados y que, por tanto, no poseen el antígeno Rh en su superficie. Todo esto se
muestra en la siguiente tabla.
Reacción de Aglutinación
Grupo Antígeno Anticuerpos
en laboratorio
sanguíneo naturales
A A Anti-B Aglutina con reactivo anti-A
B B Anti-A Aglutina con reactivo anti-B
AB AB Ninguno Aglutina con reactivo anti-A y

anti-B
Anti-A No aglutina con reactivo
O Ninguno
Anti-B anti-A ni anti-B
17
MOLECULAR
Aglutina con reactivo anti-D
Rh +
Rh Ninguno
No aglutina con reactivo anti-D
Rh -
Ninguno Ninguno
Tabla de grupo sanguíneo. El grupo sanguíneo se puede determinar por el sistema
ABO, y además por la presencia o ausencia de otros antígenos eritrocitarios como el
antígeno D, que determina el Rh.
MATERIAL
Placa de lectura
Marcador
Anticuerpos monoclonales anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D; control negativo Rh
Muestra sanguínea, obtenida con lanceta
Agitadores de madera
PROCEDIMIENTOS
Obtención de la muestra:
PRECAUCIÓN: Toda muestra de sangre debe ser tratada como potencialmente

infecciosa, por lo que debe manejarse con precaución. Se debe tener mucho
cuidado de no contaminar con sangre las mesas e instalaciones del laboratorio.
4. La muestra se obtiene de la yema de algún dedo de la mano. Una vez elegido el

dedo, se da masaje suavemente para favorecer la hemoconcentración en la yema
del dedo.
5. Desinfectar la zona con un algodón empapado en alcohol. Se debe dar tiempo

para que el exceso de alcohol se evapore.
6. Utilizando una lanceta estéril, punzar el dedo.
Determinación del grupo sanguíneo:
1. Se colocan cuatro gotas de sangre en las zonas marcadas en la placa de lectura.

Se debe colocar suficiente cantidad de sangre de manera que no se seque
rápidamente.
2. Inmediatamente se agrega una gota de reactivo según se indica en la plantilla.
18
MOLECULAR
3. Utilizando un agitador de madera, se homogeniza la mezcla de sangre y reactivo.

Se debe utilizar un agitador para cada gota de sangre y evitar así la contaminación
de las muestras.
4. La prueba será positiva si se observa la formación de aglutinación (pequeños

grumos).
RESULTADOS
Coloca aquí los resultados obtenidos en el punto 4. Anota tus observaciones, anexa una
discusión fundamentada y tus conclusiones. Describe las aplicaciones que esta técnica
tiene en tu disciplina.
CUESTIONARIO
1. Con base en sus conocimientos ¿Cómo se justifica la hemaglutinación ocurrida en

el experimento?
2. ¿Por qué es importante la determinación del grupo sanguíneo en los pacientes?
3. ¿Qué consecuencias habría si se determina el grupo sanguíneo erróneamente?
BIBLIOGRAFÍA:

España. Elsevier.
PRÁCTICA 3.
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN “REACCIONES FEBRILES”
19
MOLECULAR
PROPÓSITO
Conocer aplicaciones de la reacción inmunológica de aglutinación mediante las
reacciones febriles.
INTRODUCCIÒN
Las reacciones de aglutinación y de precipitación son la base de la mayor parte de las
técnicas inmunológicas. Su principio se basa en la reacción antígeno-anticuerpo.
Para comprender lo anterior es necesario definir qué es un antígeno y un anticuerpo.
Antígeno es una sustancia de alto peso molecular, con cierta rigidez estructural que tiene
la particularidad de ser parcialmente “metabolizado” por células especializadas llamadas
macrófagos, por lo tanto, es capaz de generar una respuesta inmune en un organismo
que la detecte como un agente extraño.
Mientras que un anticuerpo es una glicoproteína, producida por linfocitos B activados,
llamados células plasmáticas, como respuesta a la presencia de un antígeno en el
organismo. Al mismo tiempo los anticuerpos pueden ser producidos por líneas celulares
in vitro, como es el caso de la producción de anticuerpos monoclonales. Dichos
anticuerpos llamados también inmunoglobulinas, se presentan en cinco clases principales,
IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, que se diferencian entre sí por sus características físicas,
químicas y biológicas.
Las pruebas realizadas con técnicas de aglutinación son de tipo semicuantitativo y un
poco complejas, son de utilidad pues la aglutinación de los antígenos nativos insolubles o
de las partículas recubiertas por el antígeno puede evaluarse a simple vista con o sin la
ayuda del microscopio. Entre las ventajas de las reacciones de aglutinación están su alto
grado de sensibilidad y la amplia variedad de sustancias identificables a través del uso de
partículas que están recubiertas por el antígeno/anticuerpo.
Clasificación de las reacciones de aglutinación:

 Aglutinación directa.
Se puede observar cuando un antígeno celular o de partículas insolubles
es aglutinado directamente por el anticuerpo específico para dicho
antígeno.
Ejemplos:
 Aglutinación de los eritrocitos del grupo A por antisueros
antiA.
 Aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero
anti-D
 Aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-
Brucella.
Gran cantidad de partículas como, eritrocitos, bacterias, hongos y virus pueden ser
aglutinados por anticuerpos séricos, algunas veces de manera inespecífica y otras muy
específica, siendo ésta última, respuesta a una previa inmunización del organismo
productor de los anticuerpos séricos. Las pruebas para identificar anticuerpos específicos
son llevadas a cabo titulando de forma seriada antisueros en diluciones al doble en
presencia de una cantidad constante de antígeno.
 Aglutinación indirecta
20
MOLECULAR
Se refiere a la aglutinación de las células recubiertas de antígeno o a las
partículas inertes que son portadoras pasivas de antígenos solubles.
Ejemplos:
o Utilización de partículas de gelatina en la búsqueda de anticuerpos contra
Treponema pallidum por aglutinación pasiva (TPPA)
o Fijación del látex para VDRL en la sífilis
o Utilización de eritrocitos en la prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) en
la búsqueda de anticuerpos contra Tripanosoma cruzi, agente causal de la
enfermedad de Chagas. De manera alterna, el antígeno puede ser
localizado recubriendo partículas de látex o eritrocitos con anticuerpo
purificado y practicando la llamada aglutinación inversa.
 Hemaglutinación viral
Otra categoría de aglutinación que involucra la aglutinación espontánea de
los eritrocitos por ciertos virus, es la reacción de hemaglutinación viral; la
cual, puede inhibirse de manera específica en presencia de anticuerpos
antivirales. Debido a ello la hemaglutinación viral puede emplearse para
medir la cantidad de virus o para determinar, por inhibición homologa, el
título de los anticuerpos dirigidos en contra de los virus hemaglutinantes.
 Inhibición de la aglutinación
La prueba de inhibición de la aglutinación puede ser usada como un
indicador sensible de la cantidad de antígeno en diversos líquidos de los
tejidos. La inhibición de la aglutinación con antígenos altamente
purificados.
Ejemplos:
 Hemaglutinación indirecta (pasiva) Este tipo de aglutinación
se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos de
antígenos, o anticuerpos acoplados de manera espontánea
(adsorción pasiva) o mediante un acoplamiento químico,
utilizando diversas sustancias para este fin, tales como
Ácido tánico Bencidina bisdiazoada (BDB), Cloruro crómico
(CrCIs), Glutaraldehído, clorurocianúrico entre otros.
Las reacciones febriles pretenden demostrar la presencia de anticuerpos aglutinantes

séricos contra bacterias que producen enfermedades febriles, como son la paratifoidea, la
fiebre tifoidea y el tifo.
Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente
contra Salmonella, Brucella y Rickettsia (reacción cruzada con Proteus OX – 19), éstos
son adquiridos ya como reactivos de uso clínico obtenidos por purificación de bovinos
sensibilizados, teniendo los siguientes reactivos:
Antígeno “O” Salmonella typhi (somático)
Antígeno “H” Salmonella typhi (flagelar d)
Antígeno “A” para S. paratyphi (flagelar a)
Antígeno “B” para S. paratyphi (flagelar b)
Antígeno Brucella abortus
Antigeno Proteus OX- 19
Los antígenos utilizados para determinación de Salmonella también son conocidos como
reacción de Widal para determinación de fiebres tifoidea, entérica y ondulante.
21
MOLECULAR
Los antígenos para determinación de Brucella detecta anticuerpos contra B. abortus y B
mellitensis, la brucelosis es una enfermedad aguda o crónica que cursa principalmente
con escalofríos, fiebre intermitente y debilidad general.
Las especies de Rickettsia que causan tifo tienen componentes antigénicos que cruzan
con Proteus OX. La prueba es conocida como Weil – Felix. Se recuerda que las
Rickettsias son cocobacilos pequeños pleomorfos que funcionan como parásitos
intracelulares, ocasiona tifus endémico conocido también como enfermedad de Brill
Zinsser o fiebre de las trincheras.
Material y reactivos
Aplicadores de
madera. Equipo
de antígenos:
1. Salmonella typhi (antígenos O y H).
2. Salmonella paratyphi A.
3. Salmonella paratyphi B (Salmolella schottmuelleri).
4. Brucella abortus.
5. Proteus
OX19.
6. Pipeta
serológica
7. Placa de
vidrio
Sueros testigos positivo y negativo.
Procedimiento
Procedimiento cualitativo
1. Coloque una gota del suero problema en cada una de las 6 divisiones de la placa de
vidrio.
2. Adicione una gota de cada antígeno, mezcle con un aplicador y gire
la placa con movimientos oscilatorios durante 2 a 3 minutos.
3. Las muestras positivas serán las que presenten aglutinación. Compare con
los testigos positivo y negativo.
RESULTADOS: Observaciones, discusión fundamentada, conclusión, y aplicación en su

área
CUESTIONARIO:
22
MOLECULAR
1. ¿En qué consisten las pruebas de reacciones febriles?
2. Describe brevemente ¿Qué es la reacción de Widal y para qué nos sirve?
3. ¿Qué información se puede obtener a partir de la aplicación de la prueba de Weil-

Félix?
4. Cuando se realiza una prueba de reacciones febriles y observamos aglutinación

directa ¿Qué información nos proporciona acerca de la relación existente entre Ag
y Ac presentes en las células?
5. ¿Cuáles son los tipos de análisis de las reacciones febriles?
6. ¿Qué es una reacción febril simple?
7. ¿En qué consiste las reacciones febriles con antibiograma?
8. ¿Cuáles son los factores que se deben tomar en cuenta para que el resultado de
la prueba de reacción febril sea confiable?
9. ¿Cuáles son las enfermedades que se detectan con el estudio de reacciones

febriles?
BIBLIOGRAFÍA:

España. Elsevier.
PRÁCTICA 4.
23
MOLECULAR
TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA
PROPÓSITO
Analizar el procedimiento de obtención de muestra sanguínea para la elaboración

de frotis sanguíneo y pruebas serológicas.
INTRODUCCIÓN
Casi todas las muestras de sangre se obtienen por punción venosa. Es el método
más fácil y adecuado para obtener un volumen de sangre suficiente para llevar a
cabo un gran número de pruebas.
La sangre es la muestra biológica más solicitada para el análisis por la gran
cantidad de información que ofrece sobre la enfermedad o salud de un paciente.
El estudio bioquímico de la sangre determina cómo están las sustancias
concentradas en la parte líquida de la sangre (suero).
La cantidad de sangre circulante en el hombre adulto es de unos 5 litros y en la
mujer de 4 a 4.5 litros.
La sangre está formada por un componente líquido llamado plasma y uno sólido o
corpuscular que comprende a los glóbulos rojos o eritrocitos, los glóbulos blancos
o leucocitos y las plaquetas.
Los glóbulos rojos tienen forma de disco bicóncavo. En su interior se encuentra
la hemoglobina (Hb). La función principal de esa proteína es el transporte de
gases (O2 y CO2) y es la responsable del color rojo de la sangre.
Los glóbulos blancos son células que aparecen incoloras al examen
microscópico. Se dividen de acuerdo a sus características morfológicas en dos
grupos. La función de estas células es la de tener la capacidad de englobar y
devorar los corpúsculos extraños que han penetrado en la sangre.
Las plaquetas son corpúsculos redondeados u ovales presentes en la sangre. Su
función consiste en participar en el complejo mecanismo de la coagulación de la
sangre.
El plasma es la parte líquida de la sangre, es de color paja, donde los eritrocitos,
leucocitos y plaquetas se encuentran en suspensión, además, contiene glucosa,
urea, creatinina, enzimas, electrolitos, gases disueltos, etc.
Debe tenerse cuidado de no confundir plasma con suero, ambos contienen lo
mismo a excepción de la proteína fibrinógeno que está contenida en el plasma. El
plasma se obtiene impidiendo la coagulación de la sangre por medio de
anticoagulantes, lo que propicia la separación de los elementos formes.
El suero por el contrario se obtiene una vez que se ha coagulado la sangre, es el
líquido transparente que se observa por encima del coágulo sanguíneo.
24
MOLECULAR
Anticoagulantes. Su acción consiste en impedir que el calcio intervenga en la
coagulación, bien sea precipitándolo como sal (oxalatos) o fijándolo en forma no
ionizada (citrato y EDTA). Por otro lado, la heparina actúa como agente
antitrombínico.
También puede obtenerse sangre no coagulada (líquida) removiendo la fibrina que
se va formando.
Los anticoagulantes más usados son: una mezcla de oxalato de amonio y potasio,
citrato trisódico, EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético) y heparina. Los tres
primeros impiden la coagulación sustrayendo calcio del plasma mientras que la
heparina neutraliza a la trombina. De todos ellos la heparina, es el mejor
anticoagulante cuando se busca reducir al mínimo la hemólisis.
Existen códigos de colores estandarizados para las diferentes presentaciones
comerciales de los tubos con anticoagulante como:
Tapón rojo. Tubo sin anticoagulante, se puede obtener suero tras retracción
(retiro) del coágulo.
Tapón violeta. Con anticoagulante EDTA.
Tapón verde. Con anticoagulante heparina sódica.
Tapón azul. Con anticoagulante citrato de sodio.
La obtención de una muestra de sangre para un análisis de laboratorio se realiza
por punción, esta puede ser venosa, capilar y con menor frecuencia arterial.
La sangre venosa se puede obtener de las venas superficiales, yugular o femoral.
En la mayor parte de los casos se usan las venas del pliegue del codo y
antebrazo, es decir, la mediana cefálica y la mediana basílica, la cubital anterior y
la radial. Estas venas se localizan o se palpan en casi todos los pacientes. Hay
casos, en los cuales resulta difícil localizar la vena, puede hacerse resaltar
pidiendo al paciente que cierre y abra su mano, o mediante masaje o por una
combinación de ambos procedimientos.
MATERIALES
Holder y aguja para toma de muestra al vacío
Jeringas de 3 mL
Torundas en con alcohol o benzal. Rollo de toallas desechables,
Gradilla
Torniquete
6 Tubos rojos vacutainer
PROCEDIMIENTO
Instrucciones para efectuar una punción venosa:
1. Lavado de manos.
25
MOLECULAR
2. Acomodar al paciente en una posición que sea confortable tanto para el propio
paciente como para el flebista, con el brazo apoyado en una superficie plana y
firme. La toma de muestra se debe realizar en un lugar perfectamente iluminado.
2. Preparación del tubo de ensaye para toma de muestras sanguíneas. Etiquetar
el tubo o los tubos a utilizar para la toma de muestra con los siguientes datos:
(fecha, materia, sección).
4. Palpación del trayecto venoso (la vena puede localizarse por su coloración
azulada o por la sensación de rebote firme y semejante al caucho).
Las venas más utilizadas para la venopunción están localizadas en el área
antecubital (figura 1):
a) Vena Cubital: Es la más larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la
musculatura del brazo.
b) Vena Cefálica: Tiene iguales características de la anterior, pero es un poco
menos gruesa.
c) Vena Basílica: Es más pequeña que las anteriores. Esta vena está cerca de la
arteria braquial, por lo que su punción es riesgosa y su área es más sensible y
dolorosa para el paciente.
5. Aplicación de la ligadura o torniquete 6 cm por arriba del sitio elegido y sujetar la
vena con una mano; al mismo tiempo, con la otra mano frotar la piel de la región
sobre la vena; a manera de expresión sanguínea de la región, llenar la vena de
abajo hacia arriba. Se sugiere presionar con el dedo índice sobre la vena por cinco
segundos y soltar bruscamente para mejorar la visibilidad de la misma.
6. Realización de antisepsia con alcohol etílico o isopropílico a 70% haciendo
movimientos circulares de adentro hacia afuera en forma de caracol (no se debe
regresar la torunda hacia el área desinfectada previamente). Dejar que seque
alcohol (no soplarle).
7. Se procede a la venopunción, procurando que el bisel de la aguja se encuentre
hacia arriba y en un ángulo de 45 grados con respecto a la piel.
a. Técnica de pinchazo: se realiza empujando la aguja a través de la piel hasta el
interior de la vena con un movimiento rápido. La aguja penetra la piel justo por
encima de la vena.
b. Técnica indirecta: Inserción de la aguja a través de la piel. La aguja penetra por
debajo del sitio en que la vena es visible; la penetración de la piel por encima de
la vena tiende a deprimirla, enmascarando su ubicación.
8. Disminuir lentamente el ángulo de la aguja e introducir la aguja hasta observar
el retorno venoso.
9. Al empezar a fluir la sangre, retirar torniquete una vez se haya alcanzado la
mitad del volumen requerido (si fuera un solo tubo) o tras completar un tubo
vacutainer (si son más tubos los requeridos).
10. Una vez que se haya obtenido la cantidad de sangre requerida, retirar el tubo
jalándolo hacia abajo y posteriormente retirar la aguja con suavidad.
26
MOLECULAR
13. Colocar gasa estéril o torunda alcoholada con previa eliminación del exceso de
antiséptico; ejercer presión durante dos minutos en el sitio de la punción para
favorecer la hemostasia (no doblar codo).
14. Retirar la aguja del holder y depositar en un contenedor RPBI
(punzocortantes).

Figura 1. Imagen tomada de: https://www.texasheart.org/heart-health/heart-

information-center/topics/vasos-sanguineos-del-brazo/
RESULTADOS.
CUESTIONARIO
27
MOLECULAR
1. Representa gráficamente el procedimiento realizado (imágenes, fotos,
dibujos).
2. Explica la importancia de una buena toma de muestra sanguínea en el

ejercicio de tu profesión.
3. Describe la forma en la que se prepara al paciente antes de tomar la
muestra.
4. ¿En qué posición debe estar la aguja al momento de tomar la muestra?

¿Por qué es importante?
5. ¿En qué parte de la muestra se encuentra el fibrinógeno? ¿Cuál es su

función?
6. ¿De qué forma se utiliza la heparina en la preparación de la muestra?
7. Describe el proceso del manejo de los residuos biológico-infecciosos dentro

del laboratorio y su importancia.
BIBLIOGRAFÍA:

España. Elsevier.
PRÁCTICA 5.
PRUEBAS CRUZADAS
28
MOLECULAR
PROPÓSITO
Determinar la compatibilidad entre los eritrocitos a transfundir son compatibles en el

sistema ABO con el receptor, así como detectar anticuerpos presentes en el receptor que
estén dirigidos a los antígenos presentes en los eritrocitos del donador con la finalidad de
resaltar la importancia de una correcta compatibilidad sanguínea entre donante y receptor
INTRODUCCIÓN
Ottenberg (1908) fue el primero en aplicar el descubrimiento de Landsteiner de los grupos

sanguíneos a la práctica transfusional, al encontrar, como prueba previa a la transfusión,
si el suero del receptor causaba lisis y aglutinación de los hematíes del donante, a ello se
le llamó pruebas cruzadas, Las pruebas cruzadas son pruebas de compatibilidad
realizadas in vitro que nos permiten observar lo que puede suceder en el paciente al
recibir la transfusión de algún componente sanguíneo, esto representa vital importancia
para prevenir a prevenir la transfusión de sangre incompatible. La metodología se basa en
lo estipulado en la Norma Oficial Mexicana (NOM003- SSA-1993) en la cual menciona
que siempre debe incluirse la técnica de antiglobulina humana como mínimo. Las técnicas
en medio proteico y con enzimas proteolíticas pueden ser útiles para la distinción de la
especificidad de un anticuerpo. La prueba cruzada mayor, denominada prueba de
compatibilidad, se realiza mezclando el suero del receptor con los eritrocitos del donador.
Si se produce hemaglutinación, esta sangre no puede darse al receptor porque tiene
anticuerpos capaces de reaccionar y destruir la sangre administrada. En la prueba
cruzada menor, los eritrocitos del receptor son incubados con suero del donador y se
observa si hay aglutinación. Si se produce hemaglutinación, la sangre del donador no
debe administrarse.
FUNDAMENTOS TEÓRICOS
La determinación del grupo sanguíneo es una técnica habitual en la transfusión de

hemoderivados, es necesaria porque sistema inmunitario de algunos individuos rechaza
los hematíes de otros. Esta reacción inmunológica está mediada por las
isohemaglutininas, que son anticuerpos (Ac) fácilmente detectables y cuantificables ya
que forman aglutinados visibles cuando se enfrentan a hematíes específicos. La detección
de isohemaglutininas en el suero o plasma de un individuo tiene un interés triple, por una
parte, se requiere para determinar correctamente el grupo sanguíneo y evitar reacciones
transfusionales graves; para evaluar la capacidad de producir anticuerpos de una persona
y finalmente para la tipificación de grupos sanguíneos. Se pueden determinar al menos 27
sistemas antigénicos hemáticos con sus correspondientes variantes alélicas. Los más
importantes en transfusión sanguínea, por su alta inmunogenicidad, son los sistemas H-
ABO y el factor Rhesus (Rh).
La importancia inmunológica de los antígenos H-AB0 está en el hecho de que las

personas toleran sus propios oligosacáridos, sin embargo, sintetizan gran cantidad
anticuerpos frente a los otros grupos sanguíneos. Debido a que se producen
espontáneamente, es decir sin contacto previo con hematíes de dichos grupos, se
29
MOLECULAR
consideran “anticuerpos naturales”, en el recién nacido alcanzan un nivel detectable en
plasma a las pocas semanas de edad. Hay evidencias que indican que en realidad se
sintetizan en respuesta a bacterias de la flora intestinal, ciertos tipos de polen y/o a
sustancias presentes en alimentos de origen animal, que contendrían oligosacáridos con
reactividad cruzada.
MATERIAL Y EQUIPO.
1. Muestras de sangre con y sin anticoagulante
2. Un juego de micropipetas y sus puntas desechables
3. Tubos Eppendorf de 1.5 ml
4. Solución salina isotónica (NaCl 0.85%)
5. Incubadora
6. Microcentrífuga
7. Solución de albúmina al 10%
PROCEDIMIENTO
Lavado y preparación de hematíes al 2%:
1. Anotar en el tubo Eppendorf el grupo hemático obtenido A; B; AB y O (indicar el RhD en

el caso del O) y si es donador o receptor (se hace un tubo para cada uno).
2. Colocar 30 µl de sangre
3. Centrifugar 1 minuto en la microcentrífuga.
4. Descartar el sobrenadante (preferentemente con una micropipeta).
5. Resuspender enérgicamente el pellet y añadir 1 ml de suero fisiológico.
6. Repetir los pasos 2 y 3.
7. Resuspender en 1485 µl de suero fisiológico. A esto se denomina hematíes fenotipados

y lavados al 2% (v/v), y serán compartidos por el grupo. Detección y caracterización de
isohemaglutininas en suero o plasma:
30
MOLECULAR
8. Usando la solución de hematíes fenotipados y lavados al 2% y plasma del donador y
receptor obtenido en la práctica anterior, se procede de la siguiente manera
9. Se disponen 4 tubos etiquetados como sigue:
a. PM/S =Prueba Mayor en solución salina
b. pm/s =Prueba Menor en solución salina
c. PM/A =Prueba Mayor en albúmina
d. pm/a =Prueba Menor en albúmina
10. Se agregan a cada tubo los siguientes reactivos en el orden indicado:
a. PM/S. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del donador
b. pm/s. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del receptor
c. PM/A. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de albúmina + 1 gota de
eritrocitos (al 5%) del donador
d. pm/a. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de albúmina + 1 gota de

eritrocitos (al 5%) del receptor
11. Se mezclan bien y se incuban a 37°C por 30 minutos.
12. Se centrifugan 1 minuto a 2000 r.p.m. y se busca la presencia de aglutinación.
13. En caso de que no se presente la aglutinación, los tubos se centrifugan nuevamente y

se descarta el sobrenadante. Se lava el paquete celular de cada tubo con 1 ml de solución
salina y se centrifuga nuevamente descartando el sobrenadante. Repetir el lavado 2
veces. Interpretación: Si hay aglutinación en cualquiera de los tubos, será indicativo de
que hay incompatibilidad entre el posible donador y el receptor (paciente). Si no la hay,
serán compatibles.
RESULTADOS.
CUESTIONARIO.
1.- ¿Qué significa una prueba cruzada positiva y una negativa?
31
MOLECULAR
2.- ¿Qué nos indica la prueba mayor y menor?
3.- ¿Qué factores pueden interferir en los resultados de una prueba cruzada?
4.- ¿Qué características debe tener un donador sanguíneo ideal?
5.- ¿Qué problemas puede generar una transfusión sanguínea no compatible?
6.- ¿Cuál es la estructura antigénica de los principales antígenos eritrocitarios?
PRÁCTICA 6.
VDRL
32
MOLECULAR
Introducción
La prueba de VDRL es una prueba no treponémica de aglutinación para la detección

cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas. La suspensión antigénica, una
mezcla de lípidos complejos, es aglutinada en presencia de reaginas presentes en la
muestra del paciente afectado por sífilis.
Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio
organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente
causal de la sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón,
liberando al torrente circulatorio pequeños componentes de estos órganos no reconocidos
por el propio individuo. El sistema inmunológico del paciente reacciona dando lugar a la
formación de reaginas (anticuerpos) frente a estos fragmentos.
Reactivos:
Antígeno Solución alcohólica con una mezcla de lípidos (cardiolipina, lecitina y

VDRL colesterol).
DIL VDRL Tampón fosfato 2 mmol/L, NaN3 0.95 g/L, pH = 6.0
Control (+) (+) Suero humano con título de reaginas ≥ 1.8; NaN3 0.95 g/L.
Control (–) (–) Suero animal. NaN3 0.95 g/L.
Procedimiento:
Método cualitativo:
1. Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
2. Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles
Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta de vidrio.
3. Homogeneizar suavemente la suspensión del antígeno VDRL antes de usar, y
dispensar una gota (20 µL) sobre cada una de las gotas anteriores.
4. Situar el portaobjetos sobre el agitador rotatorio a 180 rpm durante 4 minutos.
Método semicuantitativo:
Las muestras positivas pueden ser tituladas. El título se define como la dilución mayor que
da resultado positivo.
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
Lectura e interpretación:
Examinar mediante microscopio óptico (100 x) la presencia o ausencia de aglutinación
inmediatamente después de retirar el porta del agitador.
Tipo de aglutinación Lectura Resultado

Agregados grandes a medianas R Reactivo
33
MOLECULAR
Agregados pequeños W Reactivo
débil
Ningún agregado o ligera rugosidad N No reactivo
RESULTADOS
CUESTIONARIO
1. ¿A partir de cuándo ya puede salir positiva la prueba?
2. Mencione en que casos puede haber falsos positios
3. ¿Qué patologías pueden provocar reatividad del VDL?
4. ¿Por qué esta prueba no es confirmatoria para sífilis y cual si lo es?
BIBLIOGRAFÍA:

España. Elsevier.
PRÁCTICA 7. MARCADORES HEPÁTICOS.

INMUNOCROMATOGRAFÌA
34
MOLECULAR
PROPÓSITO
Determinar la presencia del antígeno de superficie de Hepatitis B en suero problema

mediante el uso de inmunocromatografía con el fin de comprender el fundamento de un
inmunoensayo para las pruebas rápidas.
INTRODUCCIÓN
En los últimos años, las técnicas inmunocromatográficas se han tornado populares
debido a que ofrece ventajas que incluyen una alta sensibilidad analítica, fácil operación,
rapidez en el diagnóstico, los reactivos son estables a temperatura ambiente y menor
costo en comparación con otros métodos diagnósticos. Además, permite utilizar
diferentes muestras como es sangre total, suero, plasma, orina, saliva y heces fecales.
En conjunto, estas ventajas han dado como resultado el desarrollo de pruebas rápidas
para distintas circunstancias clínicas. Así, las pruebas inmunocromatográficas se han
utilizado para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas como: dengue, hepatitis,
Helicobacter pylori, influenza, leishmaniasis, malaria, Taenia solium, rotavirus, sífilis,
tuberculosis y VIH.
También se utiliza para la detección de drogas de abuso como cannabinoides,
anfetaminas y cocaína. Además, se han desarrollado pruebas para determinar antígenos
tumorales, así como en análisis rutinarios como es el diagnóstico del embarazo.
Asimismo, la prueba permite combinar ensayos para detectar más de un antígeno, por
ejemplo, existen pruebas rápidas para detectar VIH y sífilis o más de una droga de abuso.
Cuando la muestra líquida se coloca por goteo en la almohadilla, el antígeno presente en

la muestra hace contacto con el conjugado formando un inmunocomplejo que se mueve
con la muestra por capilaridad hacia la almohadilla absorbente Figura 2. En el trayecto, el
inmunocomplejo hace contacto con el anticuerpo inmovilizado en la membrana, en
consecuencia, se forma otro inmunocomplejo que genera la formación de una línea
colorida (roja) que indica la presencia del antígeno de interés en la muestra (zona de
prueba). Si el antígeno no se encuentra en la muestra, entonces el conjugado migra solo
a través de la membrana y no forma el inmunocomplejo con el segundo anticuerpo, por
tanto, sigue su camino hasta encontrar un tercer anticuerpo dirigido contra el conjugado,
formando el inmunocomplejo que da origen a la línea colorida (zona de control). Debido a
que la muestra es líquida, el movimiento por capilaridad es rápido y permite determinar la
presencia o ausencia del antígeno en intervalos de tiempo menores a 10 minutos. Figura
3.
35
MOLECULAR
Figura 1. Tipos de muestras biológicas que se pueden usar en la

inmunocromatografía.
Figura 2. Formación del inmunocomplejo
Figura 3. Interpretación de los resultados. Una línea resultado negativo. Una línea
en las muestras resultado positivo.
36
MOLECULAR
Hepatitis B
La hepatitis B es causada por un virus que se transmite por sangre u otros fluidos
provenientes de una persona infectada. Este virus ataca al hígado produciendo una
infección aguda y en muchos casos crónica. La aparición del virus se caracteriza por el
dolor de las articulaciones y los músculos, asociados a una fatiga no específica, pérdida
del apetito, náusea y/o vómito. La ictericia puede aparecer en la fase aguda.
La hepatitis B es una de las mayores causas de hepatitis en la población mundial. Las
personas que son portadoras del virus pueden no tener el síndrome, pero pueden ser
fuentes de infección. El virus de la hepatitis B es esférico y su genoma le permite codificar
tres antígenos principales que son llamados:
Antígeno de superficie (AgHBs)

Antígeno de núcleo o core (AgHBc)
Antígeno interno estructural (AgHBe).
Todos ellos pueden ser detectados por métodos inmunológicos que los ponen en
evidencia. De acuerdo a su presencia o ausencia, es como se establece la etapa de la
evolución de la enfermedad del paciente.
PRUEBA DESCRIPCIÓN USO

HBsAg Proteína que está presente Usualmente es utilizado para detectar
en la superficie del virus, que infecciones por VHB y frecuentemente
estará presente en la sangre identifica a personas infectadas mucho
de personas con infecciones antes de que presenten síntomas; pero que
activas y crónicas por VHB es indetectable en sangre en personas en
recuperación. Es la forma principal para
detectar infecciones crónicas.
MATERIAL Y EQUIPO:
Pipetas Pasteur desechables
Sobre metalizado con inmunocromatografía para la detección de HBsAg en suero
Suero problema
PRECAUCIONES
37
MOLECULAR
Evite abrir el sobre metalizado hasta el momento de su utilización.
No pipetee el material con la boca y utilice una punta de pipeta desechable por cada
prueba.
Evite contacto directo de manos con ojos o nariz durante el desarrollo de la prueba.
PROCEDIMIENTO
1. Saque la prueba inmunocromatográfica del empaque.
2. Agregue 4 gotas de suero en la almohadilla de la muestra con una pipeta
Pasteur o sumerja la almohadilla en la muestra. Esta instrucción varía de
acuerdo con la prueba.
3. Tome el tiempo marcado en el inserto de la prueba, usualmente son 5
minutos. Importante: no lea la prueba después del tiempo especificado o
cuando esta se halla secado.
Resultados altamente positivos aparecerán a partir del 2do o 3er minuto.

Muestra positivas conteniendo una menor concentración de positividad podrán tardar
hasta 15 minutos en aparecer. No interprete resultados después de transcurridos 30
minutos.
Limpie profundamente el área de trabajo después de haber hecho las pruebas con
hipoclorito de sodio.
INTERPRETACIÓN
Positivo
La aparición de dos líneas rojizas (una en la zona de test “T” y otra en la zona de control
“C”) sugieren que en la muestra evaluada hay presencia de HbsAg a niveles por lo menos
de 1.5 ng/ml.
NEGATIVO
La presencia de únicamente una línea rojiza en la zona de control “C” sugiere que no hay
existencia de HbsAg en la muestra evaluada y el resultado es negativo.
RESULTADOS: Observaciones, discusión fundamentada, conclusión, y aplicación en su

área.
CUESTIONARIO
1. Investiga ventajas y desventajas de las pruebas rápidas de inmunodiagnóstico

2. Menciona cual es el fundamento de la inmunocromatografía.
3. ¿Qué es un antígeno?
4. ¿Qué es un anticuerpo?
5. ¿Qué es un inmunocomplejo?
Referencias bibliográficas
38
MOLECULAR
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Pathogens, infection, and innate immunity. Molecular biology of the cell, 1485-
1537.doi: 10.1093/aob/mcg023
2. Sanchez-Trincado, J. L., Gomez-Perosanz, M., & Reche, P. A. (2017).
Fundamentals and methods for T-and B-cell epitope prediction. Journal of
immunology research, 2017.
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McPherson RA & Henry JB, editores. El Laboratorio en el Diagnóstico Clínico.
Vigésima edición. Madrid: Marban; 2007: p.821-849.
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Immunoassays. Adv Biochem Eng Biotechnol. 109: 123-154.
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York: Springer; 2013: p.31-52.
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10. García Tamayo Fernando. Fundamentos de Inmunobiología, Facultad de Química,
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Salud¸1994. p.1-75.
39

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MANUAL DE PRÁCTICAS DE INMUNOLOGÍA CELULAR Y

Manual de prácticas de laboratorio de

EDICIÓN ENERO 2022

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Responsable de Manuales del

DR. EMILIO J. BAÑOS ARDAVÍN

DR. MARIANO SANCHEZ CUEVAS

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Asistencia, puntualidad y permanencia en todas las prácticas.

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3. Realizar de forma completa y correcta las actividades de

Haber leído el manual de prácticas antes de realizar la actividad.

● Entrega del informe de práctica, individual o en equipo según las

● Informe de acuerdo a la rúbrica

Los parámetros a evaluar del reporte serán:

Criterios Principiante Competente Muy competente

Presentación 0 Puntos 0,5 Puntos 1 Puntos

RESULTADOS 0 Puntos 1.5 Puntos 3 Puntos

No presenta resultados Presenta imágenes sin Presenta imágenes de

Investigación 1 Puntos 3 Puntos 6 Puntos

4. Porcentajes del valor de los criterios de evaluación:

NOTA: La calificación obtenida de las prácticas del Laboratorio corresponde al

Realizar frotis sanguíneos preparados cuidadosamente y teñidos con el colorante de

Las células hematopoyéticas precursoras de la médula ósea e hígado fetal, que

Carácter de la Estructura celular que tiñe

Características de los leucocitos

Tienen un núcleo multilobulado y poseen

Generalmente son células pequeñas que

Linfocitos T: Se maduran en el timo y circulan

Linfocitos B: se maduran en la médula ósea y

Torundas con alcohol

Solución reguladora pH 6.4

2. Desinfectar la zona con un algodón empapado en alcohol. Se debe dar tiempo

3. Utilizando una lanceta estéril, punzar el dedo.

Dejar secar completamente los frotis, colocar en un puente de tinción y cubrirlos