BIOQUÍMICA - PRÁCTICA

IV Ciclo de Estudios Semestre Académico 2021-I

INFORME S8: “DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN PLASMA”

DOCENTE
Dra. MARIBEL CECILIA ANAYA MEDINA

GRUPO

GRUPO 02

INTEGRANTES CÓDIGO

BANCES DELGADO MAYRA SADAE 71092075

CAVERO GONZALEZ CESAR 73306134
CHAFLOQUE SANCHEZ EDUARDO JOSE 72952894
CORREA VERA RENATO ANDRE 73130652
CUBAS LLALLE MIRSA DAYLITH 70397222
HERRERA MATOS MARICIELO ELIZABETH 71132015
MATTA PEREZ MARGORY IVETH 70825939
NECIOSUP LICLA SHIRLEY DAYANA 72653921
PORTILLA HURTADO MIGUEL ANGEL 72211707
ROMERO BARDALES ISABELA 71548130
RONCAL BAZAN ANDREA AMELIA 70926097
SANTAMARIA CORDOVA JENNY LILIANA 74052512
SOLIS ALARCON ALEXANDER JOSUE 74131795
VILLEGAS CHISCUL WALTER JESUS 74162165

PIMENTEL – PERÚ
2021-I
 INTRODUCCIÓN

El colesterol es el principal esteroide del organismo y se presenta en dos

formas: colesterol libre o éster de colesterol. Este es un componente
fundamental de las membranas celulares y resulta esencial para la división
celular. Se encuentra anclado estratégicamente en las membranas de cada
célula donde modula la fluidez, permeabilidad y en consecuencia su función. El
colesterol no es dañino en sí mismo ya que participa en procesos vitales para
el ser humano, pero un aumento excesivo de sus niveles puede ser perjudicial.
La importante función del colesterol en el organismo explica que todas las
células sean capaces de sintetizar colesterol o captarlo de la sangre a través
de receptores específicos.

El colesterol proviene de la dieta o es sintetizado por nuestras células

(principalmente en los hepatocitos); es precursor de otras biomoléculas
fisiológicamente importantes tales como, las hormonas esteroideas
(andrógenos, estrógenos, progestágenos, gluco y mineralcorticoides), ácidos
biliares y la vitamina D. Sin embargo, la acumulación excesiva de colesterol en
nuestros tejidos y altas concentraciones en sangre (hipercolesterolemia). El
control de los niveles de colesterol en la sangre se puede conseguir con
cambios en el estilo de vida (dieta saludable, ejercicio físico y dejar de fumar) y
con tratamiento farmacológico.

En el presente informe tendremos como objetivo determinar la concentración

de colesterol en plasma mediante un método espectrofotométrico, así como
también compararemos estos resultados, con los valores de los rangos de
referencia normales.
 OBJETIVOS

 Determinar la concentración de colesterol total en plasma, mediante un

método espectrofotométrico.
 Comparar el valor obtenido de colesterol total con los rangos de
referencia
I. MARCO TEÓRICO

Conocemos al colesterol con una composición similar a la grasa que solemos

encontrar en las células de nuestro organismo, y suele ser necesario hasta
cierto punto para poder equilibrar la generación de hormonas y sustancias
capaces de procesar la comida que consumimos diariamente, el cuerpo puede
producir el propio colesterol, aunque también puede tomarse de alimentos que
forman parte de nuestra dieta.

Lo necesario aquí es mantener los niveles de colesterol en sangre

relativamente estables ya que este tiene la capacidad de mezclarse con otras
sustancias, dando así inicio a la formación de una “placa” que tiene como
función adherirse a las paredes de nuestros vasos sanguíneos, produciendo de
esta manera, la arterioesclerosis (1).

El colesterol bueno (HDL), malo (LDL) y lipoproteína de muy baja densidad

(VLDL) son lipoproteínas, es decir, una combinación de grasas (lípidos) y
proteínas, todos estos tienen propósitos específicos.
 LDL significa lipoproteínas de baja densidad, muchas veces se le
llama colesterol "malo" porque un nivel alto de LDL lleva a una
acumulación de placa en las arterias.
 HDL significa lipoproteínas de alta densidad, usualmente se le
clasifica como un colesterol "bueno" porque transporta el colesterol
de otras partes de su cuerpo de vuelta al hígado y este se encarga
de eliminarlo.

Por eso resulta necesario conocer los valores predeterminados:

 Normal: < 200mg/dl.
  Normal alto: entre 200 - 240 mg/dl
 Alto: > 240 mg/dl

Colesterol HDL
 Se considera que es normal si es superior a 35 mg/dl en los
hombres y 40 mg/dl en las mujeres.

Colesterol LDL
 Normal: <100 mg/dl.
 Normal alto: 100-160 mg/dl.
 Alto: >160 mg/dl.

1.1 FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA

La determinación de colesterol en plasma se fundamenta en la siguiente

secuencia de reacciones enzimáticas.

Para el proceso de medición experimental de la concentración de colesterol

el plasma sanguíneo se trabajó con la muestra de sangre, la solución
estándar y el kit de colesterol que incluye las enzimas necesarias para
catalizar las reacciones de hidrólisis del colesterol, de este modo al
verterlas en el tubo de ensayo que contiene la muestra, generaremos
residuos consecutivos, el primero que es catalizado por la enzima colesterol
esterasa, el segundo por la colesterol oxidasa y el tercero por la
peroxidasa, para finalmente obtener la quinonimina (color rojo), el color de
este compuesto va a ser directamente proporcional a la concentración de
 colesterol en plasma, siendo así que, a mayor colesterol en plasma, el color
de la quinonimina será más intenso y por el contrario, a menor
concentración, el color será más opaco. De este modo, nosotros pudimos
comparar los resultados de la concentración de colesterol en plasma con
los rangos referenciales establecidos.

Desarrollo del cuestionario

1. ¿Cuál es la estructura del colesterol?
El colesterol básicamente se encuentra formado por
una molécula de ciclopentanoperhidrofenantreno y por cuatro carboxilos
condensados o fundidos, denominados: A, B, C y D, además de una
parte central de anillos bencénicos (uno de ellos con doble enlace), una
cadena alifática larga, algunos radicales metilo y un grupo (-OH), que es
fundamental porque constituye la parte hidrófila de la molécula. En la
molécula de colesterol se puede distinguir una cabeza polar constituida
por el grupo hidroxilo, así, el colesterol es una molécula hidrofóbica, pero
soluble en compuestos orgánicos como el cloroformo, propiedad que
poseen todos los lípidos(2).

Estructura química:
 Dos radicales metilos en las posiciones C-10 y C-13
 Una cadena alifática en la posición C-17
 Un grupo hidroxilo en la posición C-3
 Una insaturación entre los carbonos C-5 y C-6

2. ¿Cuáles son las funciones del colesterol en el organismo?

El colesterol está presente en las células de los animales vertebrados,
donde cumple el papel de componente esencial de las membranas
 plasmáticas de las células del organismo y precursor de lipoproteínas,
sales biliares, vitamina D y hormonas (sexuales y corticoesteroides). Por
su carácter hidrofóbico, en sangre es transportado por las lipoproteínas
y, a nivel celular se puede encontrar formando parte de las membranas
o en el citoplasma en forma de “gotitas grasas”, previa esterificación con
un ácido graso pues el exceso de colesterol libre es tóxico para la célula.
El acúmulo de colesterol esterificado intracelular, especialmente en
macrófagos, resulta perjudicial para el hombre, favoreciendo el
desarrollo de lesiones ateroscleróticas(2).

3. ¿Cuáles son las causas secundarias que producen

hipercolesterolemia?
El hipercolesterolemia es el aumento de los niveles de colesterol total en
la sangre por encima de los niveles estimados deseables para la
población general (200 mg/dl); a partir de un valor de 250 mg/dl se
considera patológico y un factor de riesgo para el desarrollo de las
enfermedades cardiovasculares (3).
El nivel de colesterol en la sangre está determinado por factores
genéticos y ambientales que incluyen: la edad, el sexo, el peso corporal,
la dieta, el consumo de alcohol y tabaco, el ejercicio físico, los
antecedentes familiares, los fármacos y también la presencia de
diferentes situaciones patológicas (3).
Se pueden distinguir dos tipos de hipercolesterolemia (3):
 Primarias: las que no se asocian a ninguna enfermedad y se
deben a causas genéticas.
 Secundarias: aquellas en las que el incremento de colesterol se
asocia a diferentes enfermedades.

Los hipercolesterolemias
primarios se deben a alteraciones
Los hipercolesterolemias secundarios se
genéticas que afectan a uno o
pueden asociar a enfermedades (3):
varios genes (poligénicas) de los
• Hepáticas: hepatitis y cirrosis.
sistemas transportadores del
• Endocrinas: diabetes,
colesterol o de las proteínas que
hipotiroidismo y anorexia nerviosa.
actúan en el metabolismo de éste.
• Renales: síndrome nefrótico e
En las poligénicas, además de
insuficiencia renal crónica.
factores genéticos participan
elementos ambientales
relacionados especialmente con la
ingesta de una alimentación
inadecuada, rica en alimentos con
Existen algunas sustancias cuyo consumo se asocia al hipercolesterolemia,
como los esteroides
4. ¿Qué factores anabolizantes
preanalíticosyinfluyen
el consumo
en excesivo de alcoholsérica
la concentración (3). de
lípidos?
La fase preanalítica es un importante componente en el desarrollo de la
parte práctica de laboratorio, sin embargo, se encuentra expuesta a
distintas variables que tienen la capacidad de afectar el resultado para
un paciente del cual se ha tomado una muestra; esta etapa abarca el
procedimiento de extracción, manejo y procesamiento antes del análisis.
Existen variables fisiológicas y circunstancias con las que se puede
encontrar el/la paciente que son algunos factores preanalíticos (1).
Las variables endógenas tales como metabolitos o anticuerpos
circulantes pueden interactuar con un método específico y obtener un
resultado analítico errado (1).
Los factores preanalíticos que influyen en la concentración sérica de
lípidos son:
 Biológicos: esto abarca la edad, sexo, raza.
 Hábitos: Esto depende del estilo de vida del individuo que va
desde la dieta, si sufre de obesidad o desarrolla alguna adicción
al tabaco, alcohol, café; si este realiza ejercicio o sufre de estrés
laboral.
 Toma de muestra: Ayuno, tipo de muestra, hemoconcentración,
almacenamiento.
 Clínicos:
 Causado por drogas: inmunosupresores(prednisolona),
antihipertensivos (tiazidas, betabloqueantes), esteroides
sexuales (estrógenos).
 Asociado a enfermedades: síndrome nefrótico, fallo renal
crónico, hepatitis, hipotiroidismo, cirrosis biliar, infecciones
(3).
 5. ¿En qué tiempo se recomienda confirmar un resultado de
dislipidemia?
Debido a la homeostasis en el organismo individuo que generan
fluctuaciones premetrológicas, se debe confirmar el primer resultado con
una nueva extracción y un nuevo análisis en un tiempo de al menos 2
semanas (4). Además, es necesario que el paciente mantenga su dieta
regular y un peso estable, incluso es importante suspender medicación
no imprescindible; todo esto durante las 2 semanas previas al análisis.
Durante la toma de muestra, tras 12 horas de ayuno, se debe procurar
realizarla en la misma postura con la que fue tomada la primera vez.
Existen excepciones si el paciente ha sufrido alguna enfermedad leve,
en ese caso esperar 1 semana más.

II. PARTE EXPERIMENTAL

a) Materiales
Equipos:
 Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
 Baño de agua
 Cronómetro.

Materiales:

 Recipiente de bioseguridad
 Gradilla.
 Tips para micropipetas
 Tubos de vidrio 13x100 mL.
 Cubetas del espectrofotómetro
 Micropipetas o pipetas para medir volúmenes indicados.
 Guantes

Reactivos:
 b) Procedimiento

PROCEDIMIENTO

MUESTRA PROCEDIMIENTOS

 Previo ayuno de 12 a 14 horas, 1. En tres tubos de ensayo

obtener suero o plasma rotulados como B, ST y M,
 En caso de que la muestra a colocar (Tabla 01):
emplear sea plasma, se 2. Mezclar e incubar durante 5
recomienda únicamente el uso minutos en baño de agua a
de heparina como 37ºC.
anticoagulante para su 3. Retirar y colocar en una cubeta
obtención. y realizar la lectura en el
 El colesterol en suero es espectrofotómetro a 505 nm,
estable por lo menos 1 semana llevando el equipo a cero con el
en refrigerador y 2 meses en blanco.
congelador, sin agregado de 4. Anotar los resultados de
preservantes. densidad óptica (DO) de los
tubos ST y M.

TABLA N° 1 Procedimiento de la práctica

REACTIVOS BLANCO (B) ESTÁNDAR (ST) MUESTRA (M)

Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0

Estándar (µL) - 10

Suero (µL) - - 10
CÁLCULOS
Se procesan las muestras de suero de 4 pacientes y los resultados de
absorbancia son:
• Muestra 1: 0.320
• Muestra 2: 0.169
• Muestra 3: 0.560
• Muestra 4: 0.420
• Si la absorbancia del estándar es 0.379 y la concentración del estándar
es de 200 mg/dL
a) Calcule la concentración de colesterol total de todos los pacientes.
Calculamos la concentración de colesterol utilizando la siguiente formula:

PACIENTE 01
DATOS:
 DO muestra: 0.320
 DO Estándar: 0.379
Concentración E: 200 mg/ dL

0.320× 200
=168.865 mg/dL
0.379

PACIENTE 02
 DO muestra: 0.169
 DO Estándar: 0.379
 Concentración E: 200 mg/ dL

0.169× 200
=89.1820 mg/dL
0.379

PACIENTE 03
 DO muestra: 0.560
 DO Estándar: 0.379
 Concentración E: 200 mg/ dL
0.560× 200
=295.514 mg /dL
0.379
 PACIENTE 04
 DO muestra: 0.420
 DO Estándar: 0.379
 Concentración E: 200 mg/ dL

0.420× 200
=221. 635 mg /dL
0.379

c) Resultados: En tablas estilo Vancouver

Logramos determinar la concentración de todos los pacientes con ayuda de la

formula ya mencionada, todo esto se observa en la tabla 2.

TABLA 2 Concentración de colesterol total de todos los pacientes

TOTAL/PACIENTE P1 P2 P3 P4

Concentración de 168.865 89.1820 295.514 221.635

colesterol (mg /dL)

d) Discusión

Según The National Cholesterol Education Program (NECP) los valores

de referencia del nivel de colesterol total en plasma son:

Tabla 3: Valores de referencia de colesterol total en adultos

Valor Clasificación
Deseable Menor 200 mg/dL.
Moderadamente alto Entre 200 – 239 mg/dL.
Elevado Mayor o igual 240 mg/dL.

Fuente:http://www.aefa.es/wp-content/uploads/2014/04/NECP-
guidelines-.pdf
En base a los resultados obtenidos identificamos:

 Paciente1 presenta una concentración de colesterol en plasma de

aproximadamente 168.87 mg/dL. Lo cual nos indica que presenta
un valor deseable y adecuado para su salud.
 Paciente 2 con una concentración de aproximadamente 89.18
mg/dL se ubica dentro del rango deseable.
 Paciente 3 tiene aproximadamente 295.51 mg/dL de colesterol en
plasma. El valor es superior al rango deseable, encontrándose en
un nivel elevado.
 Paciente 4 presenta una concentración aproximada de 221.63, el
cual se encuentra moderadamente alto.

Es importante considerar la edad del paciente puesto que existe una una
variación en los valores de referencia según Expert Panel on Cholesterol
Levels in Children del NCEP.

Tabla 4: Valores de referencia de colesterol total en infantes

Valor Clasificación
Aceptable <170 mg/dL
Limítrofe 170-199 mg/dL
Anormal > 200 mg/dL

Fuente:https://jacc.elsevier.es/index.php?p=revista&tipo=pdf-
simple&pii=XX735109720003990

Por lo tanto, la concentración de colesterol en sangre del paciente n°4

sería considerado dentro del nivel anormal en un niño.

El colesterol total en sangre involucra tanto al colesterol de lipoproteínas

de baja densidad (LDL) como el colesterol de lipoproteínas de alta
densidad (HDL). El LDL es considerado “el colesterol malo” puesto que
se acumula en arterias y las obstruye. Además, se caracteriza con
mayor riesgo anterogénico. Por lo contrario, el HDL presenta un menor
riesgo de presentar aterogénesis.

La dislipidemia se define como un aumento de la concentración

plasmática de colesterol y lípidos en sangre. La más frecuente con
trascendencia etiopatogénica en enfermedades cardiovasculares, es el
hipercolesterolemia, que consiste en niveles alto de colesterol y de LDL
en sangre. Además, es producto de un patrón de genética (el
hipercolesterolemia autosómico dominante) o de una alteración
lipoproteica asociada a una enfermedad adyacente.
III. CONCLUSIONES
IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Cándas B, Pocoví M, Romero C, Vella JC, Esteban M, Castro MJ,

et.al. Estrategia para el diagnóstico de las dislipidemias.
Recomendación 2018. Elsevier [Internet]. 2019 [cita 09 mayo 2021];
12(4): e21-e22. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista-
revista-del-laboratorio-clinico-282-articulo-estrategia-el-diagnostico-
dislipidemias-recomendacion-S1888400819300479

2. Argüeso R, Díaz J, Díaz J, Rodríguez A, Castro M, Diz F. Lípidos,

colesterol y lipoproteínas. Galicia Clin [Internet] 2011 [Consultado el 09
de mayo de 2021] 72(1); pág.: 7-17. Disponible en:
https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=4112097

3. López A, Macaya C. Libro de la salud cardiovascular del Hospital Clínico

San Carlos y de la Fundación BBVA [en línea]. Bilbao : Fundación BBVA
; 2009. [ citado el 08 de May 2021].Disponible en:
https://www.fbbva.es/wp-content/uploads/2017/05/dat/DE_2009_salud_c
ardiovascular.pdf

4. Maldonado Saavedra Octavio, Ramírez Sánchez Israel, García Sánchez,

José Rubén, Ceballos Reyes Guillermo Manuel, Méndez Bolaina
Enrique. Colesterol: Función biológica e implicaciones médicas[Internet].
Rev. mex. cienc. farm. 2012 [cita 09 mayo 2021]; 43(2): 7-22.
Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1870- 01952012000200002&lng=es.

5. Maldonado O, Ramírez I, García J, Ceballos M, Méndez E. Colesterol: Función biológica e

implicaciones médicas. Rev. mex. cienc. farm [revista en la Internet]. 2012 [citado 09 de mayo de
2021]; 43(2): 7-22. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?
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6. Cachofeiro V. Alteraciones del colesterol y enfermedad cardiovascular [Internet] 2018 [citado 09
de mayo de 2021] Disponible en:
https://www.fbbva.es/microsites/salud_cardio/mult/fbbva_libroCorazon_cap13.pdf