Este documento describe los pasos para extraer ADN de células vegetales como fresas, kiwi o plátanos. El procedimiento involucra triturar la fruta, agregar una solución salina y detergente para romper las membranas celulares, filtrar para separar el ADN de otros componentes celulares, y luego precipitar el ADN agregando alcohol, que causa que el ADN se separe de la solución acuosa y se haga visible. El objetivo es aplicar una técnica sencilla para aislar ADN vegetal y comprender el pro
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Este documento describe los pasos para extraer ADN de células vegetales como fresas, kiwi o plátanos. El procedimiento involucra triturar la fruta, agregar una solución salina y detergente para romper las membranas celulares, filtrar para separar el ADN de otros componentes celulares, y luego precipitar el ADN agregando alcohol, que causa que el ADN se separe de la solución acuosa y se haga visible. El objetivo es aplicar una técnica sencilla para aislar ADN vegetal y comprender el pro
Este documento describe los pasos para extraer ADN de células vegetales como fresas, kiwi o plátanos. El procedimiento involucra triturar la fruta, agregar una solución salina y detergente para romper las membranas celulares, filtrar para separar el ADN de otros componentes celulares, y luego precipitar el ADN agregando alcohol, que causa que el ADN se separe de la solución acuosa y se haga visible. El objetivo es aplicar una técnica sencilla para aislar ADN vegetal y comprender el pro
Este documento describe los pasos para extraer ADN de células vegetales como fresas, kiwi o plátanos. El procedimiento involucra triturar la fruta, agregar una solución salina y detergente para romper las membranas celulares, filtrar para separar el ADN de otros componentes celulares, y luego precipitar el ADN agregando alcohol, que causa que el ADN se separe de la solución acuosa y se haga visible. El objetivo es aplicar una técnica sencilla para aislar ADN vegetal y comprender el pro
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Práctica #2 de laboratorio
Biología I
Extracción de ADN
Introducción
Pregunta
Objetivos de la extracción de ADN
Los objetivos de esta extracción de ADN son:
1. Aplicar una técnica sencilla para obtener ADN de células vegetales.
2. Comprender el proceso necesario para la extracción del ADN.
El aislamiento del ADN usando el protocolo con sal común y lavaplatos es una alternativa simple, fácil, rápida, económica y no contaminante. Se basa en las características fisicoquímicas del ácido nucleico.
Hipótesis Material Material vegetal, preferiblemente fresas, kiwi o plátanos. Licuadora. Cuchillo. Baño de María (37ºC). Gasa o algodón. Taza para medir (100 ml) Frascos pequeños. Detergente liquido lavaplatos. Sal de cocina. Papel de filtro y colador. Alcohol, frio (5ºC)
Procedimiento El procedimiento para realizar el aislamiento del ADN sigue los siguientes pasos:
Paso 1: preparación de solución salina-jabonosa
Preparamos una solución salina-jabonosa compuesta con 100 ml de agua (media taza), 10 ml de detergente lavaplatos (1 cucharada) y 13 gr sal de cocina (una cucharada).
Paso 2: preparación de las frutas
Si usamos kiwi o plátano, lo pelamos y cortamos en cubos pequeños, luego lo trituramos licuamos. Si usamos fresas, las podemos colocar en una bolsa con cierre hermético y las machacamos.
Paso 3: adición de la solución de sal y detergente a la fruta
En el mortero con la fruta triturada (o en la bolsa con las fresas) vertemos la solución salina-jabonosa y continuamos el proceso de romper las frutas. Opcionalmente, podemos colocar el preparado en un baño de María a 37ºC durante 15 minutos para facilitar la extracción
Paso 4: separación del material sólido, proteínas y lípidos
Pasamos por un colador o papel de filtro para retirar el grueso de la sopa de fruta y luego, a través de la gasa o algodón, hasta obtener 5 ml del liquido filtrado en un tubo de ensayo o 50 ml en un frasco. El jugo de fruta salado-jabonoso se cuela y se filtra para quitarle los sólidos, proteínas y lípidos a la solución acuosa del ADN.
Paso 5: precipitación del ADN por acción del alcohol
Sobre el jugo de fruta, vertemos lentamente por las paredes del tubo de ensayo etanol o isopropanol frio. Dejamos reposar unos minutos. Debe aparecer una capa blanquecina gelatinosa.
Si introducimos una varilla de vidrio o un palito de madera, con movimientos
circulares podremos recuperar el ADN enrollado en la varilla.
RESULTADOS (medibles y graficados)
ANALSIS DE RESULTADOS ¿Qué variantes cambiarias para obtener mejores resultados?
CONCLUSIÓN BIBLIOGRAFÍA
Precipitación del ADN
El ADN se muestra como unas hebras blanquecinas entre el etanol y la solución
acuosa.
Después que son eliminados los lípidos y las proteínas, los grupos fosfato del ADN están cargados negativamente y son polares. El ADN se disuelve en soluciones acuosas, pero es insoluble en alcohol.
La adición de etanol y altas concentraciones de iones sodio que se unen a los
grupos fosfato, reduce las fuerzas repulsivas entre las cadenas y permite que el ADN se pliegue sobre si mismo haciéndolo insoluble. De esta forma precipita y forma una malla filamentosa blanquecina que contienen proteínas y otros materiales.
¿Cuál es el papel de la trituración?
Romper las paredes celulares y separar las células.
¿Cuál es el papel de la adición del detergente?
El lavaplatos o el champú ayuda a disolver la membrana celular que es una bicapa lipídica.
¿Cuál es el papel de la sal cloruro de sodio?
El cloruro de sodio o sal de cocina ayuda a separar algunas de las proteínas que están unidas al ADN. También mantiene las proteínas disueltas en la capa acuosa de forma a impedir que estas precipiten también con el alcohol, junto con el ADN.
Los iones sodio y cloruro neutralizan las cargas negativas del ADN. Adicionalmente, los cationes sodio (Na+) contrarrestan las cargas negativas de los fosfatos del ADN.
¿Para qué sirve el alcohol en la extracción del ADN?
El alcohol disminuye la constante dieléctrica de la solución acuosa. El etanol frio provoca que el ADN se separe del agua y precipite. Cuando el ADN se separa de la solución acuosa, tiende agruparse, lo que hace que sea visible. Las largas cadenas del ADN se enrollarán alrededor de la varilla al revolver la interfase entre las dos capas.
