UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

Influencia del pH, el tipo y dosis de biosorbente en la biosorción

de metales pesados de un efluente minero, usando

Saccharomyces sp y Penicillium sp

TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE INGENIERO AMBIENTAL

AUTOR(ES):

Br. AGUILAR SÁNCHEZ, Milagros Stefany

Br. PEREDA SALDAÑA, Juan Carlos

ASESOR:

Dr. QUEZADA ALVAREZ, Medardo Alberto

TRUJILLO – PERÚ
2020
JURADO CALIFICADOR

ii
 DEDICATORIA

A mis padres, Ana Sánchez y Milciades Aguilar.

Por sus múltiples sacrificios para darme lo necesario para alcanzar mis metas, por su
exigencia y confianza en mí y en mis capacidades. Gracias por su infinito amor,
comprensión y apoyo. Ustedes son mi principal motivación para no rendirme nunca. No les
fallaré.

A mi hermana Nicoll

Por ser parte de mi vida, ser mi cómplice y amiga.

A Paúl Panta

Por su apoyo incondicional en cada obstáculo que se me presentaba, no solo emocional,

sino también académico. Por sus acertadas palabras de apoyo, su increíble empatía y tino
para hacer que mis días malos se llenaran de luz. Me apoyó a que este año de transición se
volviera inolvidable, lleno de aprendizaje, crecimiento emocional y académico y, sobre
todo, amor. Te amo, Paúl.

Milagros Stefany Aguilar Sánchez

iii
 DEDICATORIA

A mis padres, Juan Pereda Salas y Flor Saldaña Rodríguez.

Por ser el faro, que me guía a lo largo de vida. Por ser el puerto, donde siempre encontré
refugio. Siendo pilares y ejemplos a seguir y a quienes amo con todo mi corazón. Y en
espera de poder compensar todos los sacrificios que hicieron por mí, infinitas gracias por
todo lo que me dieron tanto material como moral.

A mi hermano Jimmy

Por ser siempre mi razón de reír, con quien peleó y me recuerda siempre en ser feliz y
disfrutar de la vida a lo máximo.

A mis familiares

Por su constante apoyo, en especial para mis abuelos que presentes físicamente o no me
enseñaron grandes cosas a través de sus historias, anécdotas, enseñándome a ser mejor
persona con el mundo. Gracias a todos por estar siempre conmigo.

A mis amigos

De manera especial a Stefany Aguilar sin la cual no hubiera sido posible culminar esta
tesis, por su paciencia y su gran colaboración. A mis amigos y toda persona que apoyaron
en cierta medida para la culminación de esta tesis, a los cuales siempre estaré agradecido.

Juan Carlos Pereda Saldaña

iv
 AGRADECIMIENTOS

Agradecemos al Dr. Alberto Quezada, por su confianza en nosotros y por su asesoramiento

constante durante el desarrollo de esta tesis. Su aporte ha sido muy valioso y ha
enriquecido nuestra visión como investigadores.

A todos los integrantes del Laboratorio de Tecnologías Limpias y/o emergentes, por su
amistad, alegría y apoyo. Ustedes hicieron nuestra estancia en el laboratorio una
experiencia inolvidable y amena.

A nuestros amigos, que de una u otra forma contribuyeron al desarrollo de nuestra tesis, ya
sea apoyándonos con la logística o con la motivación para seguir adelante.

Los Autores

v
 INDICE

INDICE.................................................................................................................................vi

RESUMEN............................................................................................................................xi

ABSTRACT.........................................................................................................................xii

CAPÍTULO I..........................................................................................................................1

INTRODUCCIÓN.................................................................................................................1

1. REALIDAD PROBLEMÁTICA................................................................................1

1.1. ANTECEDENTES..............................................................................................1

1.2. MARCO TEÓRICO Y CONCEPTUAL.............................................................3

1.2.1. INDUSTRIA MINERA EN EL PERÚ............................................................3

1.2.1.1. EFLUENTE MINERO.................................................................................4

1.2.1.2. IMPACTOS GENERADOS POR LOS METALES PESADOS

PRESENTES EN EL EFLUENTE MINERO................................................................6

1.2.1.3. NORMATIVA NACIONAL PARA EL TRATAMIENTO DE

EFLUENTES DE MINERÍA........................................................................................10

1.2.2. BIOSORCIÓN DE METALES PESADOS...................................................11

1.2.2.1. MECANISMO DEL PROCESO DE BIOSORCIÓN................................12

1.2.2.2. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA BIOSORCIÓN...........................17

1.2.2.3. BIOMASA FÚNGICA...............................................................................20

1.2.2.4. DESORCIÓN Y REGENERACIÓN DE BIOSORBENTES....................23

1.2.2.5. APLICACIÓN A NIVEL PILOTO Y REAL EFLUENTES.....................24

1.2.2.6. COMERCIALIZACIÓN............................................................................26

1.3. PROBLEMA......................................................................................................28

1.4. HIPÓTESIS.......................................................................................................28

1.5. OBJETIVOS......................................................................................................28

1.6. JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA...............................................................29

CAPÍTULO II......................................................................................................................31

vi
 2. MATERIALES Y MÉTODOS.................................................................................31

2.1. MATERIALES Y REACTIVOS.......................................................................31

2.2. EQUIPOS E INSTRUMENTOS.......................................................................33

2.3. MÉTODOS Y TÉCNICAS................................................................................33

2.3.1. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS..............................................33

2.3.1.1. AISLAMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae.......................................33

2.3.1.2. AISLAMIENTO DE Penicillium hordei....................................................34

2.3.2. PRODUCCIÓN Y ACONDICIONAMIENTO DE BIOMASA...................35

2.3.2.1. PRODUCCIÓN DE Saccharomyces cerevisiae.........................................35

2.3.2.2. PRODUCCIÓN DE Penicillium hordei.....................................................35

2.3.2.3. ACONDICIONAMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae.......................35

2.3.2.4. ACONDICIONAMIENTO DE Penicillium hordei...................................36

2.3.3. IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS.........................................36

2.3.3.1. IDENTIFICACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae..................................36

a) IDENTIFICACION MACROSCOPICA..............................................................36

b) IDENTIFICACION MICROSCOPICA................................................................36

c) PRUEBA DE FERMENTACIÓN.........................................................................37

2.3.3.2. IDENTIFICACIÓN DE Penicillium hordei...............................................37

a) CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA...........................................................37

b) PRUEBA DE EHRLICH.......................................................................................38

2.3.4. MUESTREO Y CARACTERIZACIÓN DEL EFLUENTE..........................39

2.3.5. ENSAYOS DE BIOSORCIÓN......................................................................39

2.3.6. DISEÑO EXPERIMENTAL.........................................................................40

CAPÍTULO III.....................................................................................................................42

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN...............................................................................42

3.1. CARACTERIZACIÓN DEL EFLUENTE........................................................42

3.2. EL BIOSORBENTE..........................................................................................43

vii
 3.3. IDENTIFICACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae..........................................44

3.1.1. IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA DE Saccharomyces cerevisiae......44

3.1.2. IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA DE Saccharomyces cerevisiae.......44

3.1.3. PRUEBA DE FERMENTACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae................45

3.4. IDENTIFACIÓN DE Penicillium hordei..........................................................46

3.5. ENSAYOS DE BIOSORCIÓN.........................................................................50

3.5.1. CADMIO........................................................................................................50

3.5.2. COBRE..........................................................................................................57

3.5.3. PLOMO..........................................................................................................62

3.5.4. INTERACCIÓN ENTRE LOS METALES...................................................67

CAPÍTULO IV.....................................................................................................................69

4. CONCLUSIONES....................................................................................................69

CAPÍTULO V......................................................................................................................70

5. RECOMENDACIONES...........................................................................................70

CAPÍTULO VI.....................................................................................................................71

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS......................................................................71

CAPÍTULO VIII..................................................................................................................83

ANEXOS..............................................................................................................................83

viii
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1: Valor de exportaciones por sectores económicos (Valor FOB en millones de US$)
................................................................................................................................................5
Tabla 2: Características de los efluentes de Minas 1.............................................................7
Tabla 3: Algunos grupos funcionales identificados y estudiados relacionados con la
biosorción de metales pesados. El símbolo R representa un alquili tal como CH2-,CH3CH2-
Fuente: Wang & Chen (2009)..............................................................................................14
Tabla 4: Biosorbentes comerciales – Fuente: Kanamarlapudi et al., 2018..........................27
Tabla 5: Diseño experimental de la investigación...............................................................41
Tabla 6: Metales regulados por el D.S.N°10-2010-MINAN presentes en el efluente minero.
..............................................................................................................................................43
Tabla 7: Comparación de las características macroscópicas de Saccharomyces Cerevisiae
y los resultados obtenidos de la levadura aislada.................................................................44
Tabla 8: Comparación de las características microscópicas Saccharomyces cerevisiae y de
la levadura aislada................................................................................................................44
Tabla 9: Resultados de la prueba de fermentación...............................................................45
Tabla 10: Características Morfológicas y Prueba de Ehrlich – Penicillium hordei............49

ix
 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1 Hipótesis de los diferentes mecanismos de biosorción. M+: iones de los metales
pesados, C: agentes quelantes, BE: moléculas con iones intercambiables, BM: moléculas
con iones metálicos, TP: proteína de transporte. Fuente: Sri Lakshmi et al. (2018)...........12
Figura 2 Comparación entre el mecanismo de adsorción y el mecanismo de intercambio
iónico para la unión de metales. Fuente: Volesky (2003)....................................................16
Figura 3 En la figura observa la división celular y la presencia de gemación, las mismas
que permiten el crecimiento exponencial en las células de la levadura aislada...................45
Figura 4 bservación microscópica a 10x usando Amscope Software Microscope. A la
izquierda superior: conidias, a la derecha superior, izquierda y derecha inferior:
conidióforos..........................................................................................................................46
Figura 5 Anverso y reverso de la colonia de Penicillium hordei a los 7 d y 25°C en medio
YES, CYA y MEA, respectivamente; a la derecha inferior se observa el extrolito
producido en CYA...............................................................................................................47
Figura 6 Anverso y reverso de la colonia de Penicillium hordei y su producción de ácido a
los 7, 9 y 14 días en medio CREA, hecho con púrpura de bromocresol el cual actúa como
indicador de pH. La producción de ácido forma un halo amarillo alrededor de la colonia. 48
Figura 7 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de cadmio total a
30°C, 150 rpm y 48 horas....................................................................................................50
Figura 8 Diagrama de distribución de especies del cadmio................................................51
Figura 9 Comportamiento del pH durante el proceso de biosorción de cadmio, cobre y
plomo usando cepas fúngicas a 30ºC, 150 rpm durante 48 horas........................................53
Figura 10 Porcentaje de remoción de cadmio usando cepas fúngicas, a 30°C y 150 rpm
durante 48 horas...................................................................................................................54
Figura 11 Remoción de Cd a pH 4.5 por dos tipos de biosorbentes a 30°C, 150 rpm
durante 48 horas...................................................................................................................56
Figura 12 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de cobre total a
30°C, 150 rpm y 48 horas....................................................................................................57
Figura 13 Diagrama de distribución de especie de Cu+2 a diferentes pH (Isern Roselló &
Martínez Planas, 2011).........................................................................................................58
Figura 14 Influencia del pH en el porcentaje de remoción de cobre total en un efluente
minero después de 48 horas.................................................................................................59

x
Figura 15 Influencia del tipo de biosorbente en el % de remoción de cobre total a 30°C,
150 rpm y 48 horas...............................................................................................................62
Figura 16 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de plomo total a
30°C, 150 rpm y 48 horas....................................................................................................62
Figura 17 Diagrama de distribución de especies del Pb+2...................................................63
Figura 18 Influencia de la dosis en el porcentaje de remoción de plomo total en un
efluente minero después de 48 horas...................................................................................64
Figura 19 Influencia del tipo de biosorbente en la remoción de Pb de un efluente minero a
30°C, 150 rpm durante 48 horas..........................................................................................66
Figura 20 Remoción de metales pesados de un efluente minero usando Saccharomyces sp,
ph 4.5, dosis 0.1 g 30°C, 150 rpm durante 48 horas............................................................67
Figura 21 Efecto de la concentración inicial de metales tóxicos en la biosorción por
Penicillium sp Fuente: Sánchez et al., (2014)......................................................................68

xi
 RESUMEN

En esta investigación se estudió la influencia del pH, la dosis y el tipo de biosorbente en la

biosorción de cadmio, cobre y plomo de un efluente minero, usando Saccharomyces
cerevisiae y Penicillium hordei. Para ello, se trabajó a pH 2.5 y 4.5, con una dosis de 0.05
g y 0.1 g. Las cepas fueron aisladas e identificadas mediante pruebas morfológicas y
bioquímicas. Asimismo, Saccharomyces cerevisiae fue aislada de chicha de jora, mientras
que Penicillium hordei de un efluente de curtiembre. Posteriormente, el polvo de biomasa
fue puesto en contacto con 50 mL de efluente. Los ensayos se llevaron a cabo en un
agitador rotatorio a 150 rpm y 30°C durante 48 horas. Para el análisis estadístico se utilizó
el ANOVA, el cual demostró que existe una influencia significativa de los factores en la
biosorción de metales pesados. Finalmente, se realizó la Prueba de Tukey, para identificar
el mejor tratamiento de biosorción de los estudiados. Los resultados concluyeron que las
cepas remueven cadmio, cobre y plomo. Los valores más altos se encontraron en el
tratamiento que emplea Saccharomyces cerevisiae a pH 4.5 y dosis 0.1 g para los tres
metales mencionados. Los máximos porcentajes de remoción fueron 28% para cadmio,
31% para cobre y 82% para plomo.

Palabras clave: biosorción, metales pesados, cepas fúngicas, Saccharomyces cerevisiae,

Penicillium hordei, cobre, cadmio, plomo, pH, dosis, biosorbente

xii
 ABSTRACT

In this research, the influence of pH, dose and type of biosorbent on the biosorption of
cadmium, copper and lead from a mining effluent was studied, using Saccharomyces
cerevisiae and Penicillium hordei. For this purpose, a pH of 2.5 and 4.5 was used, with a
dose of 0.05 g and 0.1 g. The strains were isolated and identifiable by morphological and
biochemical tests. Likewise, Saccharomyces cerevisiae was isolated from chicha de jora,
while Penicillium hordei from a tannery effluent. Subsequently, the biomass powder was
contacted with 50 mL of effluent. The tests were carried out on a rotary shaker at 150 rpm
and 30 ° C during 48 hours. For the statistical analysis, the ANOVA was used, which
reported that there is a significant influence of the factors on the biosorption of heavy
metals. Finally, the Tukey test was performed to identify the best biosorption treatment of
those studied. The results concluded that the strains remove cadmium, copper and lead.
The highest values were found in the treatment that uses Saccharomyces cerevisiae at pH
4.5 and dose 0.1 g for the three mentioned metals. The maximum removal percentages
were 28% for cadmium, 31% for copper and 82% for lead.

Key Words: biosorption, heavy metals, fungal strains, Saccharomyces cerevisiae,

Penicillium hordei, copper, cadmium, lead, pH, dose, biosorbent

xiii
 CAPÍTULO I

INTRODUCCIÓN
1. REALIDAD PROBLEMÁTICA
1.1. ANTECEDENTES
Los metales pesados emitidos desde las actividades industriales son una amenaza
significativa para el ambiente y la salud pública debido a su toxicidad reportada
incluso en niveles de trazas (Gautam, Mudhoo, Lofrano & Chattopadhyaya, 2014), ya
que, a diferencia de los contaminantes orgánicos, no se biodegradan y tienden a
acumularse en organismos vivos (Fu & Wang, 2011). Esto causa que se concentren en
niveles tróficos consecutivos en un proceso llamado bioacumulación, pudiendo llegar
incluso al hombre a través de la cadena alimenticia.

La principal fuente de metales pesados son las actividades industriales, especialmente

las actividades mineras. Estas generan efluentes que, al ser incorporados a cuerpos de
agua sin previo tratamiento, alteran el equilibrio del ecosistema. Si bien es cierto que
la presencia de algunos metales pesados en el ambiente puede ser aprovechada por el
metabolismo de ciertos organismos, su presencia en altas concentraciones supone un
riesgo para la salud (O'Connell, Birkinshaw & O'Dwyer, 2008).

Consecuentemente, la remoción de metales pesados de medios acuáticos es un

problema ambiental importante. Asimismo, la necesidad de desarrollar tecnologías que
hagan cada vez más sencillo y barato el tratamiento de efluentes industriales
contaminados con metales pesados se ha incrementado. Los métodos usados incluyen
procesos químicos, físicos y microbiológicos (Yang et al., 2011). Las principales
técnicas de tratamiento de efluentes para la remoción de metales son la coagulación y
floculación, el intercambio iónico, la flotación, la filtración con membrana y química,
el tratamiento electroquímico y la adsorción (Carolin, Kumar, Saravanan, Joshiba &
Naushad, 2017).

La filtración por membrana es altamente eficiente y tiene requerimientos de espacio

bajos; sin embargo, resulta muy costosa. El tratamiento electroquímico es, también,
altamente eficiente y, su consumo de químicos es nulo. No obstante, su inversión
inicial y requerimientos energéticos resultan muy altos. Por otro lado, la coagulación
tiene un costo bajo; sin embargo, utiliza gran cantidad de químicos. Además, la

1
disposición final de los lodos residuales que genera presentan un problema a resolver.
La flotación es un método de tratamiento más prometedor que la coagulación, debido a
que produce una menor cantidad de lodos. Mientras que la precipitación química
puede inducir la formación de lodos tóxicos y es inapropiada para concentraciones
bajas de metales. Por otro lado, el intercambio iónico es ampliamente usado y requiere
un bajo costo de mantenimiento; sin embargo, el ensuciamiento de la membrana
representa un problema (Carolin et al., 2017).

Carolin et al. (2017) hizo un análisis de las ventajas e inconvenientes de los métodos
de tratamiento de efluentes contaminados con metales pesados. Su revisión indica que
el proceso de adsorción se ha convertido en una prometedora alternativa para
reemplazar los procedimientos convencionales de remoción de metales pesados. Sin
embargo, los estudios se enfocan principalmente a escala de laboratorio. Del mismo
modo, Fu y Wang, (2011) encontraron que el intercambio iónico, la filtración por
membrana y la adsorción son los métodos más estudiados para el tratamiento de
efluentes con metales pesados. La adsorción es reconocida como una técnica efectiva
y económica para efluentes de baja concentración. Vijayaraghavan y
Balasubramanian, (2015) indican que las tecnologías de adsorción más prometedoras
son las que usan biomasa. Los biosorbentes inmovilizan iones metálicos presentes en
soluciones acuosas. Es deseable que esta biomasa sea inerte y resistente a condiciones
extremas de operación, es decir, que operen en un amplio rango de pH, temperatura y
parámetros fisicoquímicos. La selección de la biomasa adecuada dependerá de los
costos, disponibilidad de la biomasa y los iones metálicos presentes.

Se han hecho estudios sobre diferentes tipos de biomasas, tales como bacterias, algas y
hongos, usados como adsorbentes (Rashid, Bhatti, Iqbal & Noreen, 2016). También se
ha evaluado la capacidad de adsorción de residuos de diferentes actividades, tales
como residuos agroindustriales, madera, hierbas medicinales, etc. Se ha reportado,
además, que algunos biosorbentes no solo adsorben metales pesados en la forma de
iones metálicos, sino también compuestos organometálicos (Gautam et al., 2014).

A pesar de los beneficios y ventajas que ofrece la biosorción anteriormente

mencionados, aún no se ha logrado un escalamiento a nivel industrial masivo. Esto
podría deberse a la falta de investigaciones en matrices reales y complejas como son
efluentes reales y soluciones multimetálicas. Esta investigación busca aportar

2
 precisamente en ese aspecto, ya que los experimentos se desarrollaron en un efluente
minero real y se evaluaron factores claves para la operación y costo del proceso de
biosorción tales como el pH, la dosis y el tipo de biosorbente.

1.2. MARCO TEÓRICO Y CONCEPTUAL

1.2.1. INDUSTRIA MINERA EN EL PERÚ
La Industria Minera está presente en 23 de las 25 regiones del Perú (Montesinos,
2017), formando parte importante de la economía del país con un aporte de 9.3% al
Producto Bruto Interno según el Instituto Nacional de Estadística e Informática
(2018) citado por el Ministerio de Energía y Minas (2019, p.6). Según la Edición
publicada el 31 de diciembre del 2019 del Boletín Estadístico Minero publicado por
el Ministerio de Energía y Minas, los valores de las exportaciones del sector minero
ascendieron a US$ 23,030 millones desde enero a octubre del 2019 entre productos
metálicos y no metálicos, tal como lo muestra la Tabla N°1. Esta cifra posiciona al
subsector minero siendo parte de más del 50% de las exportaciones nacionales,
incluyendo a minerales metálicos (58.4% del total) y no metálicos (1.3%). A lo
antes descrito, se deben sumar también las transferencias a las regiones por
concepto de Canon Minero, Regalías mineras legales y Contractuales y Derechos
de Vigencia y Penalidad, los cuales, a la fecha de la elaboración del Boletín
Estadístico Minero sumaron S/. 4,631 millones de soles. Además, es una fuente
importante de empleo, durante el año 2018 la actividad contó con 209,449
trabajadores. Todo lo antes mencionado reafirma que la actividad minera formal es
clave para el desarrollo del país. Es por ello, que la magnitud de esta actividad
exige a sus actores, tanto públicos como privados, que la desarrollen promoviendo
el desarrollo sostenible y teniendo en cuenta, a parte del factor económico, el
ambiental y el social.

Sin embargo, debido a factores sociales y ambientales, el sector minero se ha visto

envuelto en conflictos que evidencian desconfianza y rechazo de la población hacia
la minería. Muchos de ellos son causados por factores sociales, políticos, por el
fallo de los mecanismos de participación y comunicación de la empresa con la
población y; por el enorme impacto ambiental potencial que la minería puede
provocar sino se realiza responsablemente. Uno de los componentes más afectados
es el agua, debido tanto a su uso, ya que es necesaria para el proceso en las
diferentes etapas de la actividad, como a su posible contaminación, provocada por

3
 los efluentes que descargan las minas, muchas veces sin previo tratamiento a los
cuerpos de agua. Por lo tanto, es importante brindar soluciones para mitigar este
impacto, especialmente el que afecta el recurso hídrico, que es el efluente ácido de
mina o Drenaje Ácido de Mina, problema al que esta investigación busca ser una
alternativa de solución.

1.2.1.1. EFLUENTE MINERO

El Decreto Supremo N° 010-2010-MINAM (2010) define al Efluente Líquido
de Actividades Minero – Metalúrgicas como:

Cualquier flujo regular o estacional de sustancia líquida descargada a los

cuerpos receptores, que proviene de:
a. Cualquier labor, excavación o movimiento de tierras efectuado en el
terreno cuyo propósito es el desarrollo de actividades mineras o actividades
conexas, incluyendo exploración, explotación, beneficio, transporte y cierre
de minas, así como campamentos, sistemas de abastecimiento de agua o
energía, talleres, almacenes, vías de acceso de uso industrial (excepto de uso
público), y otros;
b. Cualquier planta de procesamiento de minerales, incluyendo procesos de
trituración, molienda, flotación, separación gravimétrica, separación
magnética, amalgamación, reducción, tostación, sinterización, fundición,
refinación, lixiviación, extracción por solventes, electrodeposición y otros;
c. Cualquier sistema de tratamiento de aguas residuales asociado con
actividades mineras o conexas, incluyendo plantas de tratamiento de
efluentes mineros, efluentes industriales y efluentes domésticos;
d. Cualquier depósito de residuos mineros, incluyendo depósitos de relaves,
desmontes, escorias y otros;
e. Cualquier infraestructura auxiliar relacionada con el desarrollo de
actividades mineras; y
f. Cualquier combinación de los antes mencionados. (art. 3.2)
Esta tesis se centrará en efluentes de mina ácidos o drenajes ácidos de mina
(DAM). Estos se forman a partir de la oxidación química de los sulfuros, la
cual es acelerada por la acción bacteriana. Sus valores de pH se encuentran
entre 2 a 6. Asimismo, contienen sólidos en suspensión, altas concentraciones
de sulfato y metales disueltos, tales como Mn, Fe, Al, Cu, K, Zn, Cd, Ca, Na,

4
 Pb, Mg, entre otros. Estos metales alcanzan decenas o centenas de miligramos
por litro (Montesinos, 2017).

Tabla 1: Valor de exportaciones por sectores económicos (Valor FOB en millones de US$)
Octubre Enero - Octubre
Descripción
2018 2019 Var. % 2018 2019 Var. % Part. %
I. Productos
tradicionales 2,775 2,892 4.2 % 29,587 27,248 -7.9% 70.7%
a) Mineros metálicos 2,234 2,426 8.6 % 23,837 22,516 -5.5 % 58.4 %
Cobre 1,071 1,159 8.2 % 12,167 11,125 -8.6 % 28.9 %
Estaño 27 20 -26.7 % 288 309 7.3 % 0.8 %
Hierro 35 85 140.4 % 398 794 99.6 % 2.1 %
Oro 729 741 1.6 % 6,889 6,648 -3.5 % 17.2 %
Plata refinada 10 7 -29.7 % 105 61 -42.4 % 0.2 %
Plomo 97 152 56.6 % 1,243 1,248 0.4 % 3.2 %
Zinc 187 194 3.6 % 2,233 1,796 -19.6 % 4.7 %
Molibdeno 75 68 -9.1 % 504 535 6.1 % 1.4 %
Otros 3 0 -96.1 % 11 2 -83.3 % 0.0 %
b. Petróleo y gas natural 361 212 -41.3 % 3,361 2,420 -28.0 % 6.3 %
c. Pesqueros 50 157 211.5 % 1,817 1,743 -4.0 % 4.5 %
d. Agrícolas 129 97 -24.5 % 572 569 -0.6 % 1.5 %
II. Productos no
tradicionales 1,190 1,204 1.1 % 10,847 11,163 2.9 % 29.0 %
a. Agropecuarios 576 607 5.3 % 4,649 4,916 5.7 % 12.8 %
b. Pesqueros 79 111 40.5 % 1,176 1,345 14.4 % 3.5 %
c. Textiles 134 110 -18.1 % 1,181 1,131 -4.2 % 2.9 %
d. Maderas y papeles 32 26 -18.5 % 283 270 -4.5 % 0.7 %
e. Químicos 142 135 -4.7 % 1,311 1,341 2.3 % 3.5 %
f. Minerales no
metálicos 48 47 -1.5 % 516 514 -0.3 % 1.3 %
g. Sidero – metalúrgicos
y joyería 106 107 0.3 % 1,122 1,072 -4.5 % 2.8 %
h. Metal – mecánicos 57 49 -14.3 % 483 470 -2.7 % 1.2 %
i. Resto 15 11 -25.3 % 126 104 -17.7 % 0.3 %
III. Otros 24 16 -32.8 % 141 138 -2.1 % 0.4 %
TOTAL 3,989 4,112 3.1 % 40,575 38,550 -5.0 % 100.0 %

5
Adaptado del Boletín Estadístico Minero publicado el 31 de diciembre del 2019 por el MINEM
Fuente: Banco Central de Reserva del Perú (BCRP)
Los explotación de yacimientos de sulfuros metálicos, hierro, carbón, entre
otros, causa que los minerales sulfurosos presentas en la mina queden
expuestos a la meteorización y, en consecuencia, puedan formar drenajes
ácidos. Para que este fenómeno sea posible se necesitan condiciones aerobias,
esto se resumen en cantidad de agua suficiente, presencia de oxígeno y
bacterias que actúen como catalizadores (Aduvire, 2006).

La producción de drenaje ácido es prolongada. Esta puede permanecer cientos

de años, indistintamente si la mina ha dejado de operar o no. Es por ello que,
una vez que el drenaje ha sido generado, su tratamiento se vuelve necesario.

Montesinos., (2017) realizó una caracterización de un efluente de una mina

ubicada en una de las cabeceras de la cuenca alta del Río Chancay,
perteneciente a la provincia de Huaral, en Lima. Para ello, se tomaron puntos
de muestreo en cada unidad minera considerando drenajes provenientes de
bocaminas. Los resultados muestran que los efluentes monitoreados califican
como aguas ácidas, moderadamente ácidas y aguas neutras. Además, contienen
una gran variedad de metales pesados, todos por encima de los Límites
Máximos Permisibles y muchos de ellos tóxicos para la salud humana y el
medio ambiente. Los resultados se muestran en la Tabla N°2. Los monitoreos
realizados a los efluentes de mina demuestran que su toxicidad proviene
principalmente de la presencia de metales pesados en altas cantidades,
superando por mucho los LMP.

1.2.1.2. IMPACTOS GENERADOS POR LOS METALES PESADOS

PRESENTES EN EL EFLUENTE MINERO
Los metales pesados son un término general usado para nombrar al grupo de
metales y metaloides que tienen una densidad atómica más prominente que 400
kg/m3 (Edelstein & Ben-Hur, 2018). En el ítem 1.1. se ha mencionado su
toxicidad incluso a niveles de trazas y el problema que su bioacumulación
provoca en la cadena trófica y al medio ambiente. Entre ellos encontramos al
cobre, cadmio, zinc, cromo, arsénico, boro, cobalto, titanio, estroncio, estaño,
vanadio, níquel, molibdeno, mercurio, plomo, etc.

6
 Tabla 2: Características de los efluentes de Minas 1
Conductivida Cianuro
Parámetro Caudal pH OD STS As Cd Cr Cu Fe Pb Hg Zn Al Ca Mn Mg
d Total
Unidad L/s u,e µS/cm mg/L
Concentraciones Totales
Nv 0 0.07 3.58 3460 32.4 1165 0.018 0.288 8.049 0.027 1.552 183 1.555 - 1027 30.51 158.3 85.69 71.05
Nv 1 0.11 7.97 587 2.59 1636 <0.005 0.048 0.1362 0.008 0.115 17.53 3.646 - 8.73 6.73 97.94 3.62 17.45
Nv 2 0.04 3.53 4170 3.11 382 0.013 0.942 10.076 0.108 10.67 210.3 7.062 - 936.8 72.14 262.2 114 123.1
H-1 0.09 6.3 213 3.43 11 <0.005 <0.005 0.0585 <0.001 0.074 1.833 0.808 - 16.14 1.49 24.2 3.48 8.2
H-2 0.14 5.3 113 4.15 <2 <0.005 <0.005 0.023 <0.001 0.007 0.103 0.056 - 6.98 0.7 6.83 0.68 2.84
LMP (*) - 6-9 - - 50 1 0.1 0.05 - 0.5 - 0.2 0.002 1.5 - - - -
ECA 3D1(**) - 6.5-8.5 2500 4 - - 0.1 0.01 0.1 0.2 5 0.05 0.001 2 5 - 0.2 -
ECA 3D2(**) - 6.5-8.5 2500 5 - - 0.2 0.05 1 0.5 - 0.05 0.01 24 5 - 0.2 250
Concentraciones Disueltas
Nv 0 0.07 3.58 3460 3.4 1165 0.018 0.018 7.564 0.018 1.548 79.4 0.854 <0.0002 983.8 23.63 141 57.97 65.66
Nv 1 0.11 7.97 587 2.9 1636 <0.005 <0.005 0.0073 0.001 0.003 0.028 0.018 <0.0002 0.129 0.052 82.6 1.13 13.59
Nv 2 0.04 3.53 4170 3.11 382 0.013 0.011 9.304 0.067 10.38 51.24 1.959 <0.0002 891.6 64.61 229.7 114 117.7
H-1 0.09 6.3 213 3.43 11 <0.005 <0.005 0.0585 <0.001 0.015 0.019 0.118 <0.0002 15.77 0.035 23.1 3.44 8.12
H-2 0.14 5.3 113 4.15 <2 <0.005 <0.005 0.023 <0.001 0.007 0.041 0.055 <0.0002 6.976 0.584 6.83 0.68 2.83
LMP (*) - 6-9 - - 50 1 0.1 0.05 - 0.5 2 0.2 0.002 1.5 - - - -
ECA 3D1(**) - 6.5-8.5 2500 4 - - 0.1 0.01 0.1 0.2 5 0.05 0.001 2 5 - 0.2 -
ECA 3D2(**) - 6.5-8.5 2500 5 - - 0.2 0.05 1 0.5 - 0.05 0.01 24 5 - 0.2 250

(*) D.S. N°010-2010-MINAM: Límites Máximos Permisibles para la descarga de efluentes líquidos de Actividades Minero – Metalúrgicas
(**) D.S. N° 015-2015-MINAM: ECA’s Agua Categoría 3 (subcategorías D1: Riego de cultivos de tallo alto y bajo y D2: Bebida de Animales)
Fuente.- Montesinos (2017)

7
Los organismos vivos necesitan ciertos metales como micronutrientes para su
crecimiento y sus funciones metabólicas. Por ejemplo, el hierro, zinc, cobre,
magnesio, manganeso y molibdeno son requeridos por los organismos en trazas
y tienen una bien definida función biológica, tales como: formar parte de los
ácidos nucleicos, clorofila, y otros componentes de las células. Además, tienen
un rol importante en la producción de metabolitos secundarios y enzimas. Así
es como, su deficiencia o exceso puede provocar problemas significativos en
los seres vivos y el medio ambiente (Parvaiz, Sema & Murat, 2016).

Sin embargo, los metales pesados no esenciales actúan diferente. El plomo,

mercurio, aluminio, cadmio, nickel, arsénico y cromo no tienen funciones
biológicas en los procesos bioquímicas o fisiológicos en las células y son
tóxicos en bajas concentraciones (Svecova, Spanelova, Kubal & Guibal, 2006).
Concentraciones elevadas de estos metales en los ecosistemas causan daños
considerables a la vegetación y la salud. Esto se debe a que no pueden ser
biológica o químicamente degradados, pueden presentarse en los suelos como
iones libres metálicos, complejos metales solubles y compuestos insolubles.

Los metales pesados existen en forma natural en rocas, suelos, agua y aire y
mientras sea en forma de trazas, su presencia no generará impactos graves
(Vardhan, Kumar & Panda, 2019). Sin embargo, es la actividad humana la que
aumenta su presencia en los componentes ambientales. En esta investigación se
hablará específicamente de la industria minera y los metales pesados que se
encuentran presentes en su efluente. Se centrará la investigación en el plomo,
cadmio y cobre. La elección de estos metales se debe a la alta toxicidad que
presentan, la cual se describirá a continuación.

a) Cadmio.- Es clasificado por la Environmental Protection Agency (EPA)

como un metal cancerígeno. Al ingresar al organismo, se almacena en primer
lugar en los riñones y el hígado, seguido del páncreas y las glándulas salivales
(Moreno et al., 2013). La vía de excreción es la orina. En cualquier caso, la
medida excretada de Cd en la orina es extremadamente limitada (0.005% a
0.01% del contenido total de Cd. Esto resulta en una alta retención en el
cuerpo. Además, el Cd tiene una vida media natural alta de más de 20 años.
Como principal órgano de almacenamiento de sustancias tóxicas, el riñón es el

8
órgano que muestra los primeros síntomas de envenenamiento. Intoxicación
crónica a niveles altos de Cd pueden causar daño hepático, degeneración ósea,
daño sanguíneo y disfunción renal. El límite permitido de Cd en agua de
consumo humano recomendado por el BIS es 0.003 mg/L (Vardhan et al.,
2019).

b) Cobre.- El cobre es un metal altamente tóxico, tanto para la salud como

para el medio ambiente. Es capaz de inhibir el crecimiento de plantas acuáticas
a concentraciones menores a 0.1 mg/L. Por ejemplo, dificulta la fijación de
nitrógeno de las algas verdes-amarillas, las cuales son muy sensibles a su
presencia. Sin embargo, si existen agentes complejantes en el entorno hídrico,
su toxicidad disminuye (Parvaiz et al., 2016).

El cobre es altamente tóxico también para los organismos invertebrados de

agua dulce y salobre, sin embargo, su mayor toxicidad se da en agua dulce. Es
el metal más tóxico para peces de agua dulce, siendo superado solamente por el
Hg. E incluso, puede provocar un efecto letal, es decir, la muerte del 50% de la
población considerada, a concentraciones de 0.006 mg/L. Sus especies más
tóxicas en agua dulce son: Cu2+ CuOH, Cu2(OH)22+.

En agua salobre la capacidad de complejar el Cu por las sustancias disueltas

disminuye la toxicidad del cobre. Sin embargo, se ha encontrado que, a una
concentración de 8 mg/L, el cobre puede provocar la muerte del 30% de
algunos peces en 96 horas.

Debido a su acción conjunta, la dosis letal para 96 h de exposición LD 50 varía

en el rango de 0,000 09-0,23 mg/L. No obstante, la concentración letal para
algunas clases de peces puede llegar hasta 10-50 mg/L al existir una dureza de
12 mg/L.

Con respecto a sus efectos a la salud, aunque el cobre para el ser humano no es
un tóxico agudo, dosis orales de 100 mg pueden provocar náuseas y síntomas
de gastroenteritis. Asimismo, no se han encontrado en el cobre propiedades
mutagénicas ni cancerogénicas (Moreno et al., 2013)

c) Plomo.- es reconocido plenamente como un ion de metales pesados que

genera un impacto significativo en los sistemas ecológicos, el medio ambiente

9
 y la salud humana, incluso a niveles de trazas. Cuando el plomo alcanza una
concentración superior a 5 µM en sangre, estudios han demostrado que el
plomo causa hipertensión, discapacidades del desarrollo, anemia, insuficiencia
renal, anomalías del sistema nervioso, reproductivo y disfunción. Por lo que, la
USEPA ha establecido como el límite máximo permisible de 15 µg/L para Pb
(II) en el agua potable. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha
establecido los límites de exposición permisibles para Pb (II) como 25 μg/Kg
de masa corporal para un periodo de una semana (Comité Mixto FAO/OMS de
Expertos en Aditivos Alimentarios, 2004). Así mismo, se ha comprobado que
la toxicidad del plomo produce disfunción neurótica, trastornos renales y
trastornos renales, etc (Akhmetsadykova, et al., 2013; Halttunen, Salminen y
Tahvonen, 2007).

1.2.1.3. NORMATIVA NACIONAL PARA EL TRATAMIENTO DE

EFLUENTES DE MINERÍA
El Estado Peruano es responsable del uso sostenible de los recursos naturales y
de la protección del medio ambiente, así lo establece La Constitución Política
(1993), en sus artículos 66°, 67°, 68° y 69°, donde señala la importancia de su
uso sostenible. Para ello, se vale de organismos a los cuales otorga
competencias para cumplir con sus responsabilidades. En el caso de los
problemas ambientales y de salud causados por la Industria Minera, los
organismos competentes son: el Ministerio del Ambiente (MINAM), el
Ministerio de Energía y Minas (MINEM) y el Ministerio de Agricultura y
Riego (MINAGRI).

El OEFA, un ente adscrito al MINAM, fue creado mediante D.L. N° 1013 y

tiene competencia en materia de fiscalización, supervisión, control y sanción en
temas ambientales. El MINEM tiene como órgano competente a la Dirección
General de Asuntos Ambientales Mineros (DGAAM) y la Dirección General
de Minería. Asimismo, cada región cuenta con una Dirección Regional de
Energía y Minas (DREMs) las cuales asumen entre sus funciones asuntos
ambientales. La ANA es un organismo adscrito al MINAGRI, ente del Sistema
Nacional de Recursos Hídricos.

10
Montesinos., (2017) hace un consolidado de la normatividad peruana sobre el
tratamiento de efluentes de minería:

 Ley General del Ambiente (Ley N°28611 modificada por D.L. N°1055).
 Ley Marco del Sistema Nacional de Gestión Ambiental (Ley Nº 28245
modificada por Ley N°29050) y su reglamento (DS N°008-2005-PCM).
 Ley de Recursos Hídricos (Ley N° 29338) y su reglamento (D.S. N°001-
2010-AG).
 Estándares Nacionales de Calidad Ambiental para Agua (D.S. Nº015-2015-
MINAM)
 Aprueban disposiciones para la implementación de Estándares Nacionales
de Calidad Ambiental para Agua (D.S. N°023 -2009-MINAM)
 Clasificación de Cuerpos de Agua Superficiales y Marino – Costeros
(R.J.N°202-2010-ANA).
 Límites Máximos Permisibles para la descarga de efluentes líquidos de
Actividades Minero – Metalúrgicas (D.S. N°010-2010-MINAM).
 Ley General de Minería (D.S. N°014-92-EM).
 Reglamento de Protección y Gestión Ambiental para las Actividades de
Explotación Beneficio, Labor General, Transporte y Almacenamiento Minero
(D.S. Nº040-2014-EM).

Por otro lado, en el Perú también se cuenta con las guías ambientales
publicadas por el Ministerio de Energía y Minas (MINEM):

 Protocolo de Monitoreo de Aguas y Efluentes.

 Guía Ambiental para el Manejo de Agua en Operaciones Minero –
Metalúrgicas.
 Guía Ambiental para el Manejo de Drenaje Ácido de Minas.
 Guía para el Manejo de Relaves Mineros.

También se ha considerado la guía ambiental publicada por la Autoridad

Nacional de Agua (ANA)

 Protocolo Nacional para el Monitoreo de la Calidad de los Recursos

Hídricos Superficiales (RJ N°010-2016-ANA).

11
1.2.2. BIOSORCIÓN DE METALES PESADOS
En esta investigación se ha hablado ya de los métodos convencionales de remoción
de metales en el ítem 1.1., donde se ha descrito las ventajas que tiene la biosorción
sobre estos y sus principales inconvenientes. En este ítem se describirá el proceso
de biosorción y su mecanismo a detalle.

Mrvčić, Stanzer, Šolić & Stehlik-Tomas (2012) definen a la biosorción como un

proceso fisicoquímico que consiste en la unión de iones metálicos (biosorbato) a la
superficie del biosorbente (de origen biológico), en el que no participa el
metabolismo del organismo. Este proceso es rápido y reversible. Su mecanismo se
describe a continuación.

1.2.2.1. MECANISMO DEL PROCESO DE BIOSORCIÓN

El mecanismo de biosorción es un proceso complejo. Los biosorbentes a usar
pueden unirse a los iones metálicos por unión física (interacción electrostática
o fuerzas de van der Waals) o química (desplazamiento de cationes metálicos
unidos (intercambio iónico) o protones), quelación, reducción, precipitación y
complejación. Ver Figura 1.

Figura 1 Hipótesis de los diferentes mecanismos de biosorción. M+: iones de los metales
pesados, C: agentes quelantes, BE: moléculas con iones intercambiables, BM: moléculas
con iones metálicos, TP: proteína de transporte. Fuente: Sri Lakshmi et al. (2018)

12
Los biosorbentes actúan en los metales pesados gracias a los grupos
funcionales, tales como grupos amina, amida, imidazol, tioéter, sulfonato,
carbonilo, sulfhidrilo, carboxilo, fosfodiéster, fenólico, imina y fosfatos.

Según Park D, Yun Y-S & Park JM (2010); Tsezos, Remoundaki &
Hatzikioseyian (2006), los principales factores que controlan y caracterizan los
mecanismos del proceso son:

 Las características químicas, estereoquímicas y de coordinación de los iones

metálicos, tales como su peso molecular, su radio iónico y su estado de
oxidación.
 Las propiedades del biosorbente, su estructura y naturaleza, ya sea en caso
del uso de microorganismos vivos o no vivos.
 Tipo del sitio de unión, ligando biológico o centro activo.
 Los parámetros del proceso como el pH, la temperatura, la concentración
inicial del metal como del biosorbente y los metales competidores presentes en
la solución.
 La disponibilidad de los sitios de enlace.

Todos los efectos ya mencionados influyen en la especiación del metal, es

decir, en la formación de nuevas formas de metal como resultado de la
biosorción. Por ejemplo: los sitios de unión son diferentes a diferentes niveles
de pH, es por ello que, si se quiere entender de forma completa el mecanismo
en la biosorción, es necesario identificar qué grupos funcionales se encuentran
presentes en la biomasa. Es importante mencionar que la mayoría de estos
grupos se han encontrado en la pared celular (Demirbas, 2008). Estudios
espectroscópicos han demostrado que los componentes celulares pueden actuar
como grupos funcionales en la biomasa (Gardea-Torresdey et al., 2004). Ver
Tabla 3. Es más, la mayoría de las superficies microbianas están cargadas
negativamente debido a la ionización de los grupos funcionales, lo cual
contribuye al atrapamiento de los metales (Yan & Viraraghavan, 2003).

13
 Tabla 3: Algunos grupos funcionales identificados y estudiados relacionados con la
biosorción de metales pesados. El símbolo R representa un alquili tal como CH2-,CH3CH2-
Fuente: Wang & Chen (2009)

Es importante mencionar que tanto biomasa muerta como viva puede remover
metales pesados, sin embargo, en esta investigación se ha considerado trabajar
con biomasa inactiva. Esto principalmente porque la biomasa muerta tiene
algunas ventajas frente a la biomasa viva tales como que, la primera se puede
obtener de residuos, no depende del suministro de nutrientes y no existen
posibles interferentes metabólicas.

Basados en la dependencia del metabolismo, los mecanismos de biosorción se

pueden dividir en: dependientes e intependientes del metabolismo. También se
puede dividir de acuerdo al lugar donde se desarrolla la remoción de metales:
la biosorción puede ser clasificada como extracelular que incluye acumulación,

14
precipitación y adsorción (procesos llevados a cabo en el exterior de la célula)
y acumulación intracelular. Esta última involucra el transporte del metal a
través de la membrana celular, la cual es dependiente del metabolismo y solo
puede llevarse a cabo por células viables (Ahluwalia & Goyal, 2007).

La biomasa remueve los metales pesados principalmente usando los siguientes

mecanismos:

a. Complejación y quelación: La remoción de metales pesados puede deberse

a la formación de complejos en la superficie celular debido a la interacción
entre los grupos funcionales y los metales. Un complejo es una molécula
poliatómica que consiste en uno o muchos átomos centrales, usualmente
cationes metálicos, rodeados y unidos a ligandos (otros átomos o grupos,
generalmente cargas negativas o neutros). Estos complejos compuestos pueden
ser neutros, o cargados positiva o negativamente. El número de átomos de
coordinación (en los ligandos) directamente unidos al átomo central se llama
número de coordinación, este puede ser mayor que la valencia del átomo
central. Los números de coordinación más comunes son 4 y 6, también se
pueden presentar 2 y 8. Si un ligando está unido al átomo central a través de
dos o más átomos de coordinación, el complejo recibe el nombre de quelato
(Naja, Murphy & Volesky, 2010).
b. Adsorción física: es el fenómeno en el que iones son transferidos de una
fase líquida a una fase sólida. Existen dos rutas por las cuales puede ocurrir en
la superficie: adsorción física, la cual es rápida y reversible y se debe a fuerzas
de atracción no específicas (tales como las fuerzas de Van der Waals); y la
segunda ruta es la adsorción electrostática, la cual es provocada por las fuerzas
de atracción coloumbicas entre las especies de solutos cargados y la fase de
adsorción, que generalmente es rápida y también reversible. (Won et al., 2008;
Sahmoune & Louhab., 2010; Sutherland & Venkobachar., 2010).

Intercambio iónico: Javanbakht, Alavi & Zilouei (2014) afirman que es con
los iones contrarios de los polisacáridos, uno de los principales componentes de
la pared celular de los microorganismos, con los cuales los iones metálicos
divalentes se intercambian. Como ya se ha mencionado el término intercambio
iónico no especifica exactamente el mecanismo de unión de la biomasa con el

15
 ion metálico, ya que este puede ser físico (fuerzas electrostáticas o fuerzas van
der Waals) o químico (enlace iónico o covalente).

Figura 2 Comparación entre el mecanismo de adsorción y el mecanismo de intercambio

iónico para la unión de metales. Fuente: Volesky (2003)
Vale la pena mencionar que el término sorción se refiere a la unión de un
catión metálico a un sitio libre que estaba anteriormente ocupado por otro
catión.

Naja, Murphy & Volesky (2010) describieron la principal diferencia entre el

mecanismo de adsorción y el mecanismo de intercambio iónico. El primero
puede ser descrito con el modelo de adsorción de Langmuir, el cual asume que
todos los sitios de unión en la biomasa están libres y listos para aceptar al
sorbato. Por lo tanto, una reacción de adsorción se describiría como:
+ ¿↔ BM ¿
−¿+ M ¿
B

Donde B, representa el sitio libre de unión, M representa el sorbato (metal) y

BM presenta el sorbato M adsorbido y unido a B.

Por otro lado, el modelo del intercambio iónico es describo por la siguiente
ecuación:
+ ¿¿
+¿ ↔BM +H ¿
BH + M

Donde B, el sitio de unión está ocupado por un protón (H), el cual forma parte
del intercambio iónico con catión metálico. Sin embargo, no se cumple la

16
 estequiometría no se cumple, ya que generalmente se liberan dos protones al
unirse un ion metálico divalente. Se puede observar la diferencia entre estos
mecanismos en la Figura 2.

c. Precipitación: este mecanismo puede ser dependiente o independiente del

metabolismo del microorganismo. En el primer caso se da cuando el metal es
removido por una reacción que se da entre un extrolito producido por el
sistema de defensa del microorganismo y el metal que se busca remover. En el
segundo caso la precipitación ocurre como resultado de una reacción entre el
metal de interés y la superficie de la biomasa (Ahalya, Ramachandra &
Kanamadi., 2003)

1.2.2.2. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA BIOSORCIÓN

En este ítem se detallan los principales factores que influyen en el proceso de
biosorción, sin embargo, es importante mencionar que no son los únicos.

a. El pH: En el proceso de biosorción de metales pesados en medios acuosos,

se ha demostrado que un factor importante es el pH. Debido a que, este
parámetro tiene una gran repercusión en la disociación del sitio de la superficie
del biosorbente, en los procesos químicos en el efluente tales como hidrolisis,
reacciones de oxidación y reducción, la especiación, la precipitación, la
complejación de enlaces orgánicos y/o inorgánicos, además de la
disponibilidad de los metales pesados (Esposito et al., 2002).
Así mismo, una rápida revisión de la bibliografía indica que, conforme
aumenta el valor del pH, aumenta la capacidad de biosorción de los iones de
metales pesados cargados positivamente dentro del medio acuoso. Sin
embargo, esta relación no depende solamente de la superficie celular. Es
importante mencionar el proceso de precipitación de los cationes metálicos
cuando este pH es demasiado elevado, por lo que es clave conocer el pH de
precipitación de los iones metálicos de interés. Asimismo, el pH óptimo en
cada sistema metálico es diferente. Mapolelo & Torto (2004) mostraron que el
pH es importante en la biosorción de Cd2+, Cu2+, Cr3+, Cr6+. Además,
demostraron que los pH óptimos para todos los iones metálicos son valores
altos, sin llegar a ser básicos, así para el Pb y Zn su valor óptimo es 5. Mientras
que, para los iones de Cd y Pb es de 5.8, para Cr 3+ y Pb el pH óptimo es de 5.2.

17
Sin embargo, cabe mencionar que superados los valores óptimos la biosorción
disminuyó conforme aumentaba el pH. Esto se puede deber a que un pH bajo,
la afinidad con el protón en el sitio de unión de la biomasa es mucho mayor
que la del ión metálico, en comparación con el pH más alto (Vianna et al.,
2000).
b. La temperatura: Otro factor relevante al momento de estudiar el proceso
de biosorción es la temperatura. Se ha demostrado que la temperatura suele
afectar positiva o negativamente en el proceso de biosorción en varios
intervalos. Generalmente, a mayor temperatura se obtiene una mejor biosorción
de los cationes metálicos, sim embargo esto produciría un daño estructural a la
superficie del biosorbente, siendo esta una limitante significativa (Park et al.,
2010). En un estudio previo, de biosorción usando residuos de té, para la
remoción de Ni 2+ se observó que al incrementar la temperatura de 25 a 60°C se
incrementó la biosorción en un 22%, esto podría deberse a que, a mayor
temperatura existe un incremento de la movilidad de cationes metálicos,
además de incrementarse el número de sitios de adsorción debido a la ruptura
de los enlaces en la superficie celular (Malkoc & Nuhoglu, 2005). Otro estudio
usando S. cerevisiae para la eliminación de Cr 6+, observa la misma relación: al
incrementar la temperatura entre los 25-45°C también aumenta la remoción,
explicando que una temperatura elevada producirá una alta afinidad de los
sitios activos de la levadura. Asimismo, se observó que la energía del sistema
beneficia a la fijación de Cr 6+
en la superficie celular. Sin embargo, si la
temperatura es muy elevada, ocurre una disminución en el proceso de sorción
de metal debido a la desnaturalización de los sitios de la superficie del
biosorbente (Goyal et al. 2003).
En este sentido, es primordial la elección de la temperatura óptima llevar a
cabo el proceso de biosorción de manera eficiente.
c. Concentración inicial del metal: Este es un factor importante por la
relación entre las fases líquidas y sólidas. Así se observó que la capacidad
biosorción, en la fase inicial del proceso aumenta con el incremento de la
concentración de cationes metálicos hasta llegar al equilibrio por saturación.
Pero, al observar la relación con la eficiencia de biosorción se observa que la
eficiencia decrece con el incremento de la concentración de iones metálicos.
Esto se puede explicar debido a que a baja concentración de metal ocurre una

18
interacción completa de los sitios activos y los iones de metales, favoreciendo a
la eficiencia de biosorción. A concentraciones elevadas de iones, existe un gran
número de iones metálicos que quedan sin unir en la solución (Naiya et al.,
2009). Si bien suele influir este factor, en efluentes reales no se puede
manipular.
d. Dosis del biosorbente: Este factor es de suma importancia debido a que, es
en la superficie del biosorbente donde se encuentran los sitios de unión para la
biosorción de metales y, por lo tanto, su dosificación juega un rol importante.
Generalmente, el incremento de la dosis de biomasa a una concentración inicial
fija de iones metálicos incrementa la biosorción de metales pesados, debido a
que, se incrementa el área superficial lo que aumenta los sitios de unión
disponibles (Kumar & Gaur, 2011).
En dosis bajas de biomasa, la cantidad de metal adsorbido por gramo de
biosorbente es elevada y viceversa. Esto se explica que, al tener una baja
proporción entre el adsorbato, en este caso el metal, y los sitios de unión de la
biomasa provocada por el insuficiente número de soluto podría existir una
interacción entre los sitios de unión. (Abdel -Aty et al., 2013).
e. Tiempo de contacto: En este factor del proceso de biosorción resulta de
vital importancia conocer el tipo de biomasa usada, así como la caracterización
de los iones metálicos presentes en la fase acuosa y sus interacciones entre
ellos. La tasa de biosorción suele ser rápida al principio con la absorción del
90% en la fase inicial, debido a la disponibilidad del total de los sitios activos
de la biomasa, esto decrece debido a que con el transcurrir del tiempo aumenta
la saturación provocada por los iones metálicos en el medio acuoso (Abdel-
Ghani et al., 2009).
f. Velocidad de agitación: Por último, otro factor que influye en la biosorción
es la velocidad de agitación, de la matriz efluente/biomasa. Así, se ha
demostrado que al incrementar la velocidad de agitación se incrementa también
la capacidad de biosorción de metales pesados por parte del biosorbente, ya
que esto hace que decrezca la resistencia en la transferencia de masa. Pero, a
pesar que se ha demostrado que una agitación elevada favorece a la adsorción
de los metales pesados en medios acuosos (Chong et al., 2013), esta agitación
extra puede generar que la naturaleza física del biosorbente usado se vea
afectada o incluso destruida. Por lo que al trabajar con una velocidad moderada

19
 se puede mejorar la homogeneidad del biosorbente en el medio generando una
elevada capacidad de biosorción. Además, cabe mencionar que si se trabaja a
elevadas velocidades de agitación se produce fenómeno conocido como vórtice
lo cual afecta a la homogeneidad de la suspensión celular en el medio. La
turbulencia elevada puede generar también que se reduzca el tiempo de
interacción entre el metal y la biomasa, afectando negativamente a la
biosorción (Liu et al., 2006).

1.2.2.3. BIOMASA FÚNGICA

Los hongos han sido usados como una fuente barata de material adsorbente, ya
que su pared celular está compuesta típicamente por quitina, glucano, manano,
proteínas y otros polímeros que poseen grupos funcionales carboxilo, fosforilo,
hidroxilo, amino, amina e imidazol en la superficie, y son adsorbentes
eficientes para la adsorción de metales (Ramrakhiani et al., 2011). Por otra
parte, los hongos crecen rápidamente y están disponibles tanto en el
laboratorio, así como en residuos de diferentes industrias como la de
fermentación. Diferentes tipos de hongos han sido usados como biosorbentes
para adsorber metales pesados (Gautam et al., 2014).

Por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae ha sido usada como biosorbente de

Mn(II) de agua subterránea (Fadel et al., 2017), Cu(II) (Gohari et al., 2013),
Cr(III) y Cr(VI) (Ramírez et al., 2012). Por otra parte, Penicillium
simplicissimum se ha investigado como biosorbente de Cd(II), Zn(II), Pb(II)
dando resultados satisfactorios (Fan et al., 2008). En el mismo estudio, Fan et
al. (2008) estudió la influencia del pH en el proceso de biosorción y encontró
que a pH bajos (<1), la capacidad de biosorción para todos los metales iónicos
es muy baja, esto es porque las grandes cantidades de iones hidrógeno
compiten con los metales pesados en los sitios activos. Mientras el pH
incrementa, más negativamente se carga la superficie de la célula y facilita el
consumo de metales. Sin embargo, el metal precipita a altos valores de pH
(>7), inhibiendo el contacto del metal con la biomasa.

Yin et al. (2017) usó Saccharomyces cerevisiae inmovilizado en microesferas

de quitosano magnético para remover Sr2+ de una solución acuosa. Su
investigación reportó que, a 30°C y pH de 8, la capacidad de adsorción

20
Saccharomyces cerevisiae es directamente proporcional a la concentración
inicial de Sr2+. Amirnia, Ray y Margaritis, (2015) estudió la capacidad de
adsorción de iones Pb (II) y Cu (II) usando Saccharomyces cerevisiae en
soluciones acuosas en un sistema continuo. Llegando a concluir que la
capacidad de adsorción de los iones Cu (II) es baja en comparación con los
iones Pb (II) para concentraciones iniciales de 10-180 mg/L. Además, logró
encontrar que 29.9 mg/g y 72.5 mg/g para iones de Cu (II) y Pb (II),
respectivamente, fueron las máximas capacidades de adsorción por parte de
Saccharomyces cerevisiae. Por su parte, Ayesha et al (2016) investigó la
capacidad de un material compuesto de bentonita de sodio y Pencillium
fellutinum de remediar soluciones acuosas contaminadas con Zn(II) y Ni(II).
Su investigación reportó que las condiciones óptimas de adsorción son a pH 6
(Ni) y 5 (Zn), con una dosis de adsorbente de 0.05g, tiempo de contacto 30
min, concentración inicial de 200 mg/L y temperatura 51°C.

Un ejemplo claro de que los residuos de procesos industriales pueden ser útiles
para la biosorción son los resultados de investigación de Svecova et al. (2006).
En este se usó Penicillium oxalicum var Armeniaca y Tolypocladium sp,
ambos residuos de la industria de la fermentación. El primero es usado en la
producción de un pigmento de alimentos rojo, mientras el segundo es usado en
la industria farmacéutica para producir un tipo de ciclosporina (antibiótico).
Ambos residuos fueron sometidos a procesos de biosorción de Cd, Pb y Hg.
Los resultados muestran que Penicillium oxalicum tiene una mayor capacidad
de adsorción que Tolypocladium sp, llegando incluso a 270 mg Hg/g.

Se han reportado estudios tales como el de Fadel et al. (2017); Gohari et al.
(2013); Ramirez et al. (2012); Yin et al. (2017) y Margaritis, (2015), descritos
anteriormente, que demuestran que de Saccharomyces cerevisiae tiene la
capacidad de adsorber metales pesados de medios acuáticos, debido a la
cantidad de grupos funcional por los cuales está compuesta su pared celular.

Con respecto al tipo de biosorbente, en esta investigación se usará como tales

dos microorganismos: Saccharomyces cerevisiae y Penicillium hordei. Ambas
cepas pertenecen al reino Fungi, grupo de organismos eucariotas y heterótrofos
que se alimentan mediante nutrientes que absorben del medio. A su vez, el

21
reino Fungi se divide en filos tales como Basidiomicetos, Ascomicetos,
Glomeromicetos, Zigomicetos y Quitridiomicetos (Ruggiero et al., 2015).
Saccharomyces cerevisiae y Penicillium hordei pertenecen al filo
Ascomicetos.

A pesar de que, ambos microorganismos pertenecen al mismo reino y filo, son

diferentes. Mientras que Saccharomyces cerevisiae es una levadura con un
aspecto húmedo, Penicillium hordei es un moho con aspecto algodonoso.
Además, los mohos como el Penicillium hordei cuentan con filamentos
microscópicos llamados hifas, a diferencia de las levaduras que no tienen hifas,
en lugar de eso forman estructuras multicelulares llamadas pseudohifas.
Mientras que los mohos pueden reproducirse de forma asexual
(esporangiosporas o conidias) o sexual (zygosporas, ascosporas o
basidiosporas), las levaduras se reproducen asexualmente por gemación o
brotación y por medio de esporas asexuales (Webster & Weber, 2007).

A partir de lo anteriormente descrito, se puede concluir que los factores más

importantes en el proceso de biosorción y los que según la bibliografía tienen
relevancia son: dosis de biosorbente, concentración de los iones metálicos, pH,
temperatura y presencia de otros compuestos orgánicos / inorgánicos (Parvathi
y Nagendran, 2007; Mapolelo y Torto, 2004; Ozer y Ozer, 2003).

Los estudios sobre biosorción se centran en la dosis de la biomasa para

determinar la capacidad de biosorción entre cada biosorbente, una estimación
de los costos de remoción, etc. La dosificación de un biosorbente influye
fuertemente en el proceso de la biosorción. En muchos casos, las dosis más
bajas de biosorbentes producen un mayor consumo y un menor porcentaje de
eficiencias de eliminación (Aksu y Çağatay, 2006; Vijayaraghavan et al.,
2006).

Sin embargo, no existen estudios en los que usen biomasa inactiva de estos
microorganismos como un biosorbente para la remoción de metales pesados en
efluentes reales de relaves mineros, por lo se considera importante definir las
condiciones que logren la mejor remoción usando estos tipos de biomasa,
tomando a consideración las diferencias físicas y químicas de un efluente real y
una solución ideal.

22
 Es por los motivos antes descritos que el tema de investigación que se
desarrollará, consiste en determinar la influencia del pH, la dosis y el tipo de
biosorbente en la biosorción de metales pesados de un efluente de una mina,
usando dos tipos de biosorbentes, tales como Saccharomyces cerevisiae y
Penicillium hordei.

1.2.2.4. DESORCIÓN Y REGENERACIÓN DE BIOSORBENTES

Al elegir el biosorbente, se debe tomar en cuenta su potencial de reutilización.
La capacidad de regeneración de la biomasa permite disminuir los costos
totales en el proceso, así mismo evita estar pendientes del suministro continuo
de nueva biomasa.

La desorción es un proceso que depende de las características de la biomasa

como la estabilidad mecánica y el mecanismo de eliminación. En este sentido
se conoce que los biosorbentes suelen tener un mecanismo de intercambio
iónico para los iones catiónicos de los metales pesados, el uso de una solución
ácida leve a fuerte permite la desorción. El empleo de estas soluciones en el
proceso de desorción presenta ventajas significativas para el costo del proceso,
ya que es una de las soluciones de desecho más comunes en las industrias. Si
los biosorbentes se usan en procesos de tratamiento de aguas industriales, se
pueden usar las soluciones ácidas del proceso para regenerar la biomasa. Sin
embargo, se debe tomar a consideración la integridad del biosorbente y su
capacidad de resistir el ambiente ácido.

Por otro lado, el intercambio iónico no es el único mecanismo por el que los
biosorbentes llevan a cabo la biosorción; para los mecanismos como la
complejación, la quelación y la microprecipitación, se necesita determinar de
manera más compleja de desorción. En tal sentido, es imprescindible tomar en
cuenta varios criterios que van a influenciar en la selección del biosorbente
adecuado, siendo aún más complicado en matrices complejas, como aguas
residuales. (Vijayaraghavan & Balasubramanian, 2015)

La desorción debe tener la capacidad de recuperar el metal, sobretodo en

metales con valor, en forma concentrada; además el biosorbente después del
proceso, debe conservar casi intacta su capacidad de biosorción para su
reutilización (Alluri, 2007). En consecuencia, para un eluyente apropiado se

23
 debe considerar los siguientes requisitos: contar con un bajo costo, ser
amigable con el medio ambiente, no de resultar dañino para la biomasa y
garantizar la capacidad intacta de unión de metales. (Vijayaraghavan, 2008)

Los eluyentes más usados son ácidos minerales diluidos (HCl, H2SO4 y HNO3),
los ácidos orgánicos (ácidos cítrico, acético y láctico) y agentes complejantes
(EDTA, tiosulfato, etc.) como soluciones destinadas a la recuperación del
biosorbente y la recuperación de metales. La eficiencia de la desorción se
puede determinarse por la relación S/L, es decir, la relación sólida a líquido. El
sólido hace referencia al biosorbente y el líquido al eluyente (volumen)
aplicado. Para una regeneración completa y determinar que el proceso es
económico, se debe obtener los valores más altos posibles de S/L (Vieira;
2000)

1.2.2.5. APLICACIÓN A NIVEL PILOTO Y REAL EFLUENTES

Se han realizado diversas investigaciones estudiando la tecnología de
biosorción a escala piloto para su uso en escala industrial. Artola A. et al.
(2001) desarrollaron una pequeña planta piloto con un asentamiento de
contacto de tres zonas en un deposito usando lodo digerido anaeróbicamente
como biosorbente para la eliminación de iones Cu (II). Se observó que la
remoción de metales es tan eficiente como los resultantes de los experimentos
por lotes, siendo de 90 mg/g del biosorbente. La técnica de flotación
biosorptiva se utilizó para la remoción de iones de níquel, cobre y zinc de las
soluciones acuosas utilizando tallos de uva como sorbente. Los experimentos
se llevaron a cabo en columnas de 10 L daño una remoción de metales eficiente
(Cu en 95%; Zn en 98%; Ni en 70%; Ca en 82%). Así mismo, el bisorbente
puede usarse en un segundo ciclo, regenerándolo con una mezcla acuosa de
sulfato de sodio y citrato de sodio (Zouboulis AI, et al. 2002)

Se está buscando aplicar el proceso de biosorción como método de tratamiento

de efluentes residuales. Los experimentos se llevaron a cabo con efluentes
recolectados de diversas fuentes en lugar de usar soluciones acuosas de metal,
una gran cantidad de estudios han concluido que presenta una remoción
altamente eficiente. (Sri Lakshmi et al. 2018)

24
Los residuos procedentes de galvanoplastia que contienen iones como Cu (II),
(6 mg/L), así como Zn, Cr(VI), Na, Ca y K, se trataron con diferentes agro-
residuos (biosorbentes naturales) en las condiciones óptimas determinadas por
ensayos en lotes como pH 6.0. La remoción de iones Cu resultó en una
eficiencia que varió de 77 a 95%. Así mismo, los demás metales presente en
los efluentes también se removieron en diversos grados (Singha B et al 2013)

En otro estudio, se recogió muestras de efluentes industriales de empresas de

producción química para remover Co (II), Cd (II), Cr (III) y Pb (II) empleando
cuatro tipos de algas rojas, que son la Corallina mediterranea, Galaxaura
oblongata, Jania rubens y Pterocladia capillacea. Se obtuvo una eficiencia de
biosorción entre 57% y 94% para los cuatro biosorbentes, siendo la Galaxaura
oblongata la presentó mayor eficiencia con un 84%, mientras que las
eficiencias de las demás biomasas fueron: Corallina mediterránea con 80%,
Pterocladia capillacea con 76% y Jania Rubens con 72%. El estudio concluye
que los cuatro tipos de algas presentan características que los pueden convertir
en biosorbentes prometedores resultando ser barato, eficiente y biodegradables
para reducir la contaminación del metal por el medio ambiente (Ibrahim WM et
al. 2011).

En un estudio, se evaluó la eficacia del bagazo de caña de azúcar en forma

inmovilizada y nativa para la remoción de cromo de las aguas residuales de la
planta de curtido de Kasur, en Pakistán. Se empleó una dosis de biosorbente de
0.1 g y se ajustó el pH a 2.0, los resultados mostraron una eficiencia en la
biosorción de 411 mg/g de biomasa, que representa la remoción del 73% del
cromo total de las aguas residuales. Así mismo de observó que la forma
inmovilizada de la biomasa presentó mayor eficiencia que la forma nativa y la
tratada químicamente (Ullah I, et al 2013)

En ciertas investigaciones se ha observado que la eficiencia de remoción de

metales pesados en efluentes reales puede verse afectada debido a la
complejidad de la matriz y la presencia de otros metales, materia orgánica,
aniones, etc., que pueden competir por los sitios de unión con la biomasa. Se
empleó Pleurotus ostreatusse para el tratamiento de aguas residuales de
galvanoplastia procedentes de Shahdra, Lahore, Pakistán. Se observó que la

25
eficiencia de la remoción disminuía ligeramente en el tratamiento real de las
aguas residuales. En caso de un efluente real, las eficiencias de remoción de
metal son Cu (II) 46.01%, Ni (II) 59.22%, Zn (II) 9.1% y Cr (VI) con 9.4%, en
contrates con la eficiencia del tratamiento en una solución mono metálica
sintética que tuvo una remoción para los metales previamente descritos de
52%, 63.52%, 10.9% y 11.8%, respectivamente (Barkley NP, et al.1991).

Así mismo, se usó como biomasa el alga Sargassum para descontaminar de

metales pesados la escorrentía de agua pluvial real de una zona urbana. Se
observó que este biosorbente removió iones metálicos; sin embargo, esta
presentó una ligera disminución de la eficiencia que el sistema de sintético
único de Pb, Cu, Zn y Mn, en condiciones similares. Esto se puede deber a la
presencia de otros contaminantes como aniones, compuestos orgánicos y otros
metales traza pueden competir con los sitios de unión existentes en la biomasa,
lo que genera una disminución en la eficiencia de la biosorción
(Vijayaraghavan K, et al. 2009).

Un estudio usó residuos de Emblica officinalis como biosorbente para la

remoción de Cu de las aguas residuales de galvanoplastia, solución
multimetales. Se separó la materia suspendida del agua residual, se diluyó a la
concentración final de Cu (II) de 38 mg y se ajustó el pH a 4.2 previo al ensayo
de biosorción. Se usó un proceso en columna (1 mL/min) que tenía una
eficiencia de remoción de 98.07% y para los ensayos por lotes del 65%. (Rao
RAK, et al. 2011).

Otro estudio a nivel piloto se usó una columna empacada de Spirogyra en

forma de gránulos para tratar efluentes industriales (1L, 0.6 mL/min). En esta
columna empaquetada se obtuvo una eficiencia de remoción de más del 90%
para Cu, Cd, Zn, Ni, Pb y Cr de las tres aguas residuales industriales. Pero fue
necesario ajustar el pH de 7.8 a 2 para el cromo y de 7.8 a 4.5 para los demás
metales (Singh A, et al. 2012)

De lo anteriormente expuesto se concluye que la biosorción es una técnica de

remoción de metales pesados prometedora para ser usada a nivel industrial y es
prioritario que las investigaciones se realicen en matrices complejas para
facilitar su escalamiento a nivel industrial.

26
1.2.2.6. COMERCIALIZACIÓN
Si bien la biosorción se presenta como una tecnología con gran ventaja, está
aún no se emplea ampliamente en el tratamiento de aguas residuales cargadas
con metales pesados, con excepción de empresas que ofrecen este tratamiento
alternativo. A pesar de ello, aún existen pocos ensayos destinados a la
comercialización del mismo (Sri et al 2018). Así en la Tabla 4 se muestran
biosorbentes comerciales disponibles actualmente.

Tabla 4: Biosorbentes comerciales – Fuente: Kanamarlapudi et al., 2018

Biosorbent Source
AlgaSORB Algal biomass
B.V.SORBEX Biomass from various sources
AMT-Bioclaim Bacillus sp.
Bio-Fix Different biomass
Rahco Different biomass
MetaGeneR Different biomass
AquaSorb Activated carbons
P.O.L. Sorb Sphagnum Peat Moss
MSR Rhizopus arrhizus
Azolla Biofilter Azolla filiculoides

Volesky B et al., (2005) afirma que la dificultad de comercialización de esta

tecnología se debe más a la falta de socios que a razones estrictamente técnicas.
Así mismo que el empleo de modelos de computadora basados en pruebas
piloto pueden disminuir el alcance de las pruebas de campo. Siendo estos datos
y los casos de aplicación atractivos para los inversores, consultores,
distribuidores y clientes.

Una de las compañías que comercializa la tecnología de biosorción es BV

Biosorbex Inc. compañía canadiense. Esta compañía ofrece el servicio de
remoción de metales pesados de aguas industriales mediante la biosorción en
reactores con biosorbentes novedosos como gránulos ofrecidos al 1/10 del
costo de las resinas de intercambio iónico. Los biosorbentes están hechos a
base de desechos industriales, biomasa de algas y biomasa especializada. Estos

27
 biosorbente operan en un pH 4-10 y a 5-75 ° C de temperatura mostrando una
eficiencia mayor al 99.9% en efluentes con 10-50 ppb de metales pesados y
materia orgánica menos a 5000 mg/L. ("For INVESTORS", 2020)

La biomasa AlgaSorb de la empresa Biorecovery Inc. es un alga inmovilizada

en gel de sílice que demostró tener una remoción exitosa de mercurio y en
presencia de Ca, Mg y materia orgánica; en un estudio piloto donde se usó dos
columnas en serie con diferentes biosorbentes de algas. Para la regeneración se
empleó tiosulfato de sodio (0,1 M) seguido de agua desionizada (10 volúmenes
de lecho). (Barkley NP, et al 1991).

También se comercializa el biosorbente denominado MSR que se produce a

partir de células Rhizopus arrhizus en estado inactivo e inmovilizado, estas
células inmovilizada se encuentra entre 0.5 y 1.2 mm de tamaño. Este
biosorbente tiene las características que lo hacen muy ventajoso al momento de
ser usado como biosorbente de un efluente real, tales como resistencia a
productos químicos, resistencia a la compresión, resistencia a la abrasión,
porosidad elevada y capacidad humectante considerable. Estas células
inmovilizadas se encuentran patentadas se demostrado su utilidad en la
recuperación de uranio de las operaciones de lixiviación (Tsezos M, et al.
1988).

1.3. PROBLEMA
¿De qué manera el pH, la dosis y el tipo de biosorbente influyen en la biosorción de
metales pesados de un efluente de una mina, usando Saccharomyces sp y Penicillium
sp?

1.4. HIPÓTESIS
Siguiendo las metodologías descritas en el Capítulo II de la presente investigación, se
espera que un pH ligeramente ácido y la mayor dosis del biosorbente actúen
aumentando la biosorción de metales pesados de un efluente de mina, usando
Saccharomyces sp y Penicillium sp. Debido a que, un pH ligeramente ácido va a
contribuir a aumentar la carga negativa de la superficie de la célula y la disponibilidad
de sitios activos y, por lo tanto, va a facilitar la biosorción de mentales. Asimismo, a
mayor dosis de la biomasa se favorecerá la relación biomasa/ion metálico, ya que
aumentará los sitios activos de la superficie celular.

28
1.5. OBJETIVOS
Objetivo general:

● Determinar la influencia del pH, la dosis y el tipo de biosorbente en la

biosorción de metales pesados de un efluente de una mina, usando Saccharomyces sp y
Penicillium sp

Objetivos específicos:

● Realizar la caracterización al efluente de mina usando el ICP-MS.

● Evaluar el efecto del pH en la biosorción de metales pesados de un efluente
de una mina, usando Saccharomyces sp y Penicillium sp.
● Evaluar el efecto de la dosis del biosorbente en la biosorción de metales
pesados de un efluente de una mina, usando Saccharomyces sp y Penicillium sp.
● Evaluar el efecto del tipo de biosorbente en la biosorción de metales pesados
de un efluente de una mina, usando Saccharomyces sp y Penicillium sp.

1.6. JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA

Vijayaraghavan et al., (2015) realizó una revisión crítica sobre el estado del arte del
proceso de biosorción y sus direcciones futuras. Su trabajo indica que las principales
razones por las cuales la biosorción no ha sido usada ampliamente en aplicaciones
comerciales de larga escala son las siguientes: (1) La falta de investigaciones en
soluciones multi-componentes y aguas residuales con matrices complejas, (2)
Entendimiento incompleto de las características físico-químicas de diferentes tipos de
biomasa, (3) La falta de estudio para mejorar el desempeño de los biosorbentes a
través de la funcionalización de la superficie y por último (4) la falta de incorporación
de la biosorción en plantas de tratamiento de aguas residuales.

La importancia de esta investigación se basa en los siguientes aspectos: (1) busca

aportar realizando los ensayos en soluciones multi-componentes y matrices complejas,
es decir, los ensayos de biosorción de la presente investigación se llevarán a cabo en
un efluente de mina real, (2) la biomasa que se usará como biosorbente es, a su vez,
potencial residuo industrial de fermentación, lo cual no solo abaratará el costo del

29
proceso, sino también contribuirá al adecuado manejo de residuos generados por la
industria.

Por otro lado, también se buscará establecer condiciones óptimas de operación, tales
como el pH y la dosis del biosorbente. El pH influencia fuertemente en el proceso de
biosorción, mientras que el tipo de biosorbentes y su dosis determinan costos de
instalación y operación. En este caso se busca trabajar con una levadura y un hongo
filamentoso.

Por lo tanto, conocer el pH, la dosis y el tipo de biosorbente será clave para el
desarrollo de la tecnología de la biosorción y su posterior implementación a nivel
industrial y, en consecuencia, para la remoción de metales pesados de efluentes
mineros, los cuales provocan serios problemas de contaminación ambiental y de salud,
problemática que se ha descrito a detalle en los ítems 1.1. y 1.2.

30
 CAPÍTULO II

2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES
Matraces de erlenmeyer de 150 mL. Embudo de vidrio. Marca Pyrex
Marca Pyrex Papel filtro N°80
Matraces de erlenmeyer de 500 mL. Frasco ambar
Marca Pyrex Parafilm
Matraces de erlenmeyer de 1000 mL. Papel aluminio
Marca Pyrex Crisoles
Fiola de 250 mL. Marca Pyrex Lamina cubreobjetos
Fiola de 200 mL. Marca Pyrex Varillas de vidrio
Fiola de 100 mL. Marca Pyrex Asa de siembra
Fiola de 50 mL. Marca Pyrex Pinzas
Fiola de 20 mL. Marca Pyrex Espátula
Fiola de 25 mL. Marca Pyrex Tubos falcom de 25 mL
Probeta de 1000 mL. Marca Pyrex Pipetas de 10 mL
Probeta de 500 mL. Marca Pyrex Pipetas de 5 mL
Probeta de 250 mL. Marca Pyrex Pipetas de 1 mL
Probeta de 10 mL. Marca Pyrex 6 frascos de muestreo plasticos de 1
Mortero litro
Vasos de precipitación de 500 mL. Etiquetas
Marca Pyrex Icepacks o gelpacks
Vasos de precipitación de 250 mL. Guantes

31
 Marca Pyrex Pizeta 500 mL
Vasos de precipitación de 100 mL. Lamina cubreobjetos
Marca Pyrex Mechero
Tubos de ensayo. Marca Pyrex Asa bacteriológica
Gradilla Punta de micropipetas de 1000 L
Placas petri. Marca Pyrex Punta de micropipetas de 100 L
Asa de Ticción
Lamina portaobjetos

REACTIVOS
4-dimetilaminobenzaldehído Sulfato de zinc
etanol al 96% Extracto de levadura
Agua destilada Azul de lactofenol
HNO3 Aceite de cedro
Creatina – 1H20 Agua glicerinada estéril
Sucrosa Nitrato de plomo
K3PO4·7H2O Hidróxido de sodio
Sulfato de magnesio Buffer pH= 10
Cloruro de Potasio Buffer pH= 7
Sulfato ferroso Buffer pH= 4
Sulfato de cobre Indicador Eriocromo negro T
Púrpura de bromocresol Solución estándar de EDTA 0.01 M
Agar Aceite de inmersión
Extracto de Malta Azul de bromotimol
Peptona bacteriológica Na2S2O2 grado alimentario
Glucosa Cloruro de sodio
Sacarosa Na2HPO4.12H2O
Lactosa KH2PO4
Galactosa Cloruro de Calcio
Trehalosa Bicarbonato de sodio
Rafinosa Sulfato de magnesio
Nitrato de sodio Sulfato de hierro pentahidratado
Sulfato de dipotasio

32
2.2. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
EQUIPOS
Incubadora rotatoria modelo LABSI-100A marca JSR
Cabina de Bioseguridad modelo BSC-1100IIA2-X Marca BIOBASE
Incubadora modelo JSGI-150T marca JSR
Espectrometría de Masas con Plasma Acoplado Inductivamente (ICP-MS) Thermo
Fisher Scientific
Espectrofotómetro UV-VIS modelo Orion AquaMate 8000 marca Themo Scientific
Estufa modelo 100-800 marca Memmet
Microscopio modelo Primo Start Pack 1 marca Zeiss
Autoclave modelo JSAC-40T marca JSR
Digestor de microondas Ethos-UP Milestone
Centrifugadora modelo PLC-012E marca Universal Centrifuge
Balanza analítica modelo AS 220/C/2 marca RADWAD
Potenciómetro modelo ORION STARTM A321 marca Themo Scientific
Equipo de absorción atómica PerkinElmer
INSTRUMENTOS
Mechero buzen
Micropipeta de 10 L marca Dragon Med
Micropipeta de 10 L marca Dragon Med

33
2.3. MÉTODOS Y TÉCNICAS
2.3.1. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
2.3.1.1. AISLAMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae.
Se aisló Saccharomyces cerevisiae a partir de una bebida fermentada local
“chicha de jora”, la cual utiliza los azúcares del maíz germinado para generar
alcohol (De Florio, (1986); Manrique, (1978)).
Para ello, se usó la metodología para aislamiento y selección de levaduras de
Estela Escalante (2016). Para el desarrollo del procedimiento se tomó una
muestra de 5 mL de chicha de jora y se adicionó en un tubo de ensayo que
contenía 10 mL de solución Raulin (Anexo 1.1.) dentro de la cabina de
bioseguridad. A continuación, se incubó durante 24 horas a 25°C. Todo esto
con el objetivo de eliminar las bacterias presentes.
Después, con una micropipeta de 10 L a 100 L, se tomó asépticamente una
alícuota de 50 L de la solución anterior a un tubo de ensayo que contenía 5
mL de agua estéril. Luego, se mezcló homogéneamente la suspensión celular
frotando circularmente el tubo en la palma de la mano.
Acto seguido, se transfirió con una micro pipeta estéril de 10 L a 100 L,
50L de la suspensión anterior a un primer tubo de ensayo (Tubo I) que
contenía aproximadamente 15 mL de agar Sabouraud (Anexo 1.2) estéril
fundido a 45°C. En este estado (sin solidificarse) se mezcló homogéneamente.
Luego, se transfirió con una micro pipeta 50 µL de esta suspensión (tubo I) a
un siguiente tubo de ensayo (tubo II) que también contenía agar Sabouraud
Na2S20 (Anexo 1.3.) estéril (aproximadamente 15 mL) fundido a 45ºC.
Posteriormente, se mezcló homogéneamente y se transfirió nuevamente 50 µL
de esta última suspensión diluida a un tercer tubo de ensayo (tubo III) que
contenía agar Sabouraud estéril con (aproximadamente 15 mL) fundido a 45ºC.
Finalmente, se mezcló homogéneamente. Los medios de cultivo se
esterilizaron a 121ºC por 15 minutos.
Teniendo los medios de agar Sabouraud fundidos (±45ºC) contenidos en los
tubos I, II, III se vertió asépticamente en placas Petri estériles, se mezcló
homogéneamente con movimiento horizontal-circular las placas Petri con agar
y se dejó solidificar.

34
 Se marcó las placas Petri en correspondencia a los tubos de ensayo (I, II, III) y
luego se incubó a 25ºC durante 2-3 días. Se trabajó dentro de la cabina de
bioseguridad a fin disminuir el peligro de contaminación. Una vez culminado
el tiempo de incubación y detectando crecimiento se colocó en el refrigerador
hasta su uso.

2.3.1.2. AISLAMIENTO DE Penicillium hordei.

Para el aislamiento y cultivo de cepas fúngicas, se siguió la metodología de
aislamiento de hongos de efluente de curtiembre de Zapana Huarache (2018).
Para ello, se colectaron muestras de agua de curtiembre. Estas se colectaron en
envases estériles de vidrio de 250 mL. De las muestras obtenidas, se realizaron
diluciones de 10-1,10-2,10-3. Posteriormente, se tomó una alícuota de 50 µL de
cada dilución y se sembró por triplicado en Agar Sabouraud, a temperatura
ambiente 21 ± 2 °C durante 7 días. Pasados los días de incubación, se
realizaron siembras tomando solo las cepas que tengan características similares
al género Penicillium empleando siempre el mismo medio en placas Petri, con
el objetivo de obtener cultivos de hongos filamentosos.

2.3.2. PRODUCCIÓN Y ACONDICIONAMIENTO DE BIOMASA

2.3.2.1. PRODUCCIÓN DE Saccharomyces cerevisiae.
La producción de las levaduras se realizó en medio YPD (Anexo 1.4.) (Fajardo
Castillo and Sarmiento Forero, 2007).
En primer lugar, se preparó un pre inoculo. Para ello, se usó 100 mL de caldo
YPD en un matraz Erlenmeyer de 250 mL al cual se inoculó una colonia de las
placas Petri obtenidas en el ítem 2.3.1.1. Acto seguido, se colocó en el agitador
rotatorio a 30°C y 200 rpm durante 24 horas.
Transcurrido este tiempo, se preparó 1 litro de caldo YPD y se ajustó el pH a
5.5 ± 0.2 con HCl 0.1 N y NaOH 0.1 N.
Luego, se distribuyó el caldo YPD en 14 matraces Erlenmeyer de 250 mL que
contenía aproximadamente 75 mL de medio cada uno. Posteriormente, se
autoclavó a 121°C durante 15 minutos. Después, se procedió a inocular
asépticamente cada matraz Erlenmeyer con 1 mL del pre inoculo. Finalmente,
los matraces se incubaron agitador orbital a 30°C y a 150 rpm durante 24
horas.

35
2.3.2.2. PRODUCCIÓN DE Penicillium hordei.
La biomasa fue cultivada en un shaker rotatorio a 120 rpm a 28°C en matraces
Erlenmeyer de 250 mL conteniendo 100 ml de medio de cultivo. La
composición del medio de cultivo se especifica en el Anexo 2.3. Se usó 1 L de
medio de cultivo y se distribuyó en 10 matraces. Después, se inoculó cada
matraz con 1 mL de suspensión de esporas del Anexo 2.2. La biomasa se
cosechó 48 horas después.

2.3.2.3. ACONDICIONAMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae

Finalizado el procedimiento de producción según el ítem 2.3.2.1., la biomasa se
separó del medio de cultivo. Para ello, se usaron tubos Falcon de 15 mL, donde
se centrifugó a 3000 rpm durante 10 minutos. Posteriormente, se eliminó el
sobrenadante y se realizó un lavado en un agitador magnético. La biomasa
centrifugada se colocó en un matraz Erlenmeyer de 2 L junto con una pastilla
magnética, y se lavó durante 10 minutos con agua ultrapura. La mezcla se
volvió a centrifugar y lavar, hasta obtener biomasa libre de medio de cultivo.
La biomasa lavada se colocó en placas Petri y se llevó a la estufa a 60 °C por
24 horas. Una vez seca, se molió en un mortero y se tamizó en la malla #70.
Finalmente, el polvo de biomasa se almacenó en un crisol y se guardó en el
desecador hasta su uso.

2.3.2.4. ACONDICIONAMIENTO DE Penicillium hordei

La biomasa producida en el ítem 2.3.2.2 se cosechó en forma de pellets, ya que
los hongos filamentosos tienen esa característica en producción en medio
líquido. Posteriormente, la biomasa se lavó dos veces en 1 L de agua ultrapura
en un agitador magnético. La separación de la biomasa – agua ultrapura se
realizó con un tamiz. La biomasa lavada se colocó en las placas y se llevó a la
estufa a 60 °C por 24 horas. Una vez seca se procedió a moler en el mortero y
se tamizó en la malla #70. Finalmente, se colocó en un crisol y se guardó en el
desecador hasta su uso.

36
2.3.3. IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
2.3.3.1. IDENTIFICACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae
a) IDENTIFICACION MACROSCOPICA
Primero, se preparó 200 mL de medio agar YPD. Se tomó una alícuota de 1
mL de los matraces de propagación (Ítem 2.3.2.1), se diluyó en tubos de
ensayo que contenían 9 mL de agua estéril y se hizo 3 diluciones. El medio aún
caliente, se vertió en 4 placas estériles y se dejó solidificar. Posteriormente, se
tomó una alícuota de la última dilución y se sembró procurando una separación
entre colonias.
Se dejó incubar a 30°C por 2 días. Finalmente, se observan las colonias
formadas a 2 días de incubación y se anotan las sus principales características
morfológicas (Altamirano Cahuancama, 2013).

b) IDENTIFICACION MICROSCOPICA
Para la identificación se realizó una tinción Gram Simple tomando en cuenta la
metodología descrita por López-Jácome et al. (2014). Para el procedimiento se
limpió 3 portaobjetos con alcohol etílico y se dejó secar. A continuación, se
colocó una gota de agua destilada estéril en el centro del portaobjetos. Con el
asa esterilizada y fría se tomó un poco de la levadura. Se procedió a flotar la
levadura dentro de la gota de agua. Luego se secó la muestra en el mechero,
para lo cual se conservó una distancia considerable a fin de evitar que se queme
o desnaturalice la levadura. Posteriormente, se adicionó el colorante el cristal
violeta para visualizar las células y se dejó reposar por 5 minutos.
Posteriormente, se lavó la muestra con agua destilada y se dejó secar.
Finalmente, se colocó una gota de aceite de inmersión y observó sus
características en el microscopio.

c) PRUEBA DE FERMENTACIÓN
Se preparó el medio de fermentación (Anexo III) (Wickerham, 1951). Para el
desarrollo de la prueba se consideraron 6 azucares (Glucosa, Sacarosa, Lactosa,
Galactosa, Trehalosa y Rafinosa). Se preparó dos tubos de ensayo para cada
azúcar, además de 6 tubos de medio sin azúcar. Se colocó una campana de
Durham por tubo y se procedió a autoclavar a 121° por 15 minutos (el aire de
la campana es expulsado durante el autoclavado). Se procedió a inocular los
tubos con 0.1 mL del cultivo de propagación, posteriormente se incubó a 25-

37
 30°C durante 3 semanas y se observó periódicamente la formación de gas y el
viraje color del medio. Un viraje de color al amarillo indica acidificación
mientras que al azul implica alcalinización. Cuando hay fermentación del
azúcar el medio acidifica. Como control se emplea un tubo sin azúcar.

2.3.3.2. IDENTIFICACIÓN DE Penicillium hordei.

La identificación a nivel de género y las características macro y microscópicas
se llevaron a cabo de acuerdo a Samson et al. (2010). La identificación a nivel
de especie se realizó usando el enfoque polifásico (Frisvad and Samson, 2004;
Visagie et al. 2014). Este consistió en una caracterización morfológica de
acuerdo a las claves y descripciones de Frisvad and Samson (2004), Pitt and
Hocking (2009). Estas claves pueden ser consultadas también en
Westerdijkinstitute (2018).

a) CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA
Se inoculó la cepa fúngica en los siguientes medios: Czapek Yeast Autolysate
(CYA), Yeast Extract Sucrose (YES) agar, MEA y Creative Sucrose (CREA)
agar (Frisvad and Samson, 2004). Las composiciones de los medios se
encuentran descritos en el Anexo 4. Las placas fueron incubadas por 7 días a
25°C y a 30°C (CYA). Luego de la incubación, sus características
macroscópicas fueron estudiadas: el diámetro de las colonias, la textura, el
color de las conidias, se observó los colores del anverso y el reverso de la
colonia, su grado de crecimiento y también la producción de ácido o base en
medio CREA, esta última prueba se realizó durante 7, 9 y 14 días. Para cada
medio solidificado se consideró conveniente la repetición de nueve placas. Las
medidas se realizaron usando un vernier y la observación de los colores se
realizó con luz diurna y se usó como recurso el libro Methuen ‘‘Handbook of
Colour’’ (Kornerup and Wanscher, 1978) para la diferenciación de colores.
Por otro lado, para la observación de sus características microscópicas se
realizó un microcultivo en medio MEA. La técnica consiste en cortar el agar
MEA en cuadrados pequeños de 0,5 cm y colocarlo en un portaobjetos. Este
fue ubicado en una placa Petri, la cual contiene una varilla de vidrio en forma
de triángulo que funciona como soporte. El hongo filamentoso se siembra en
las cuatro esquinas y el centro del agar y se colocó un cubreobjetos sobre el
mismo. Se vertió una solución de glicerina por el borde de la placa de Petri,

38
 para proporcionar una adecuada humedad evitando que se deseque el medio de
cultivo debido a lo prolongado de la incubación.
Tras tres días de incubación, cuando el crecimiento sobre el bloque fue
evidente, se recogió el cubreobjetos con una pinza estéril y se colocó sobre un
portaobjetos donde previamente se había colocado una gota de azul de
lactofenol. Para la observación microscópica, se usó del programa Amscope
Software Microscope.
Los caracteres microscópicos estudiados fueron: grado de ramificación de los
conidióforos, su dimensión, la forma y textura de las estípites, su
ornamentación y la forma y textura de las conidias.

b) PRUEBA DE EHRLICH
La preparación del reactivo Ehrlich se especifica en el Anexo 4. Se usó el
método del papel de filtro. Se cortó un tapón de agar de cuatro mm del centro
de una colonia que creció en CYA (incubado de 5 a 9 días a 25ºC) y se colocó
una pieza redonda (1 cm de diámetro) del papel de filtro humedecido
(Whatman No. 1) con el reactivo Ehrlich. Posteriormente, se posicionó el agar
y el papel sobre un portaobjetos. Si aparece un anillo violeta después de 2- 6
min. el cultivo contiene ácido ciclopiazónico o alcaloides relacionados. Si la
reacción llega después de 7-10 min. es considerado como débil. Después de 10
minutos, el anillo violeta se desvanecerá. Algunos hongos producen alcaloides
que reaccionarán con el reactivo de Ehrlich para dar anillos de color rosa a rojo
o amarillo.

2.3.4. MUESTREO Y CARACTERIZACIÓN DEL EFLUENTE

El muestro de efluente se realizó siguiendo el Protocolo de Monitoreo de Calidad
de Efluentes y Aguas Superficiales en las Actividades Minero-Metalúrgicas
(Ministerio de Energía y Minas, 2013).

Las muestras se colectaron del efluente principal ubicado en la bocamina de un

yacimiento minero ubicado el distrito de Sayapullo, provincia de Gran Chimú,
región La Libertad. Para ello, se usaron botellas de polietileno de 1 L almacenadas
en un contenedor hermético de tecnopor. La preservación de la muestra se realizó
con HNO3 concentrado, el cual se adicionó hasta alcanzar el pH >2.

39
 Para la caracterización de los metales totales presentes en el efluente se contrató al
laboratorio NKAP, el método usado y los límites de detección se muestran en el
Anexo V.

2.3.5. ENSAYOS DE BIOSORCIÓN

Los ensayos se desarrollaron en un sistema batch, estos se llevaron a cabo bajo
diferentes condiciones de pH, dosis y tipo de biosorbente. Para la investigación se
utilizaron matraces Erlenmeyer de 125 mL, cada uno de ellos conteniendo 50 mL
de la solución efluente-biomasa en un agitador rotatorio.

El efluente o drenaje ácido de mina usado fue el mencionado en el ítem 2.3.4. Se

ajustó el pH inicial del efluente usando HNO3 al 20% v/v y NaOH 5 N.y se midió
con un potenciómetro. Se trabajó con los valores de pH de 2.5 y 4.5. Los
biosorbentes fueron dos cepas aisladas y cultivadas de Saccharomyces cerevisiae y
Penicillium hordei, ambas en estado inactivo. La dosis de trabajo estuvo entre 0.05
g y 0.1 g de biosorbente para 50 ml de efluente, tal como se hizo en las
investigaciones de Fadel et al., (2017) y Fan et al., (2008). Para las mediciones se
usó una balanza analítica.

Los ensayos se realizaron bajo condiciones constantes de los siguientes parámetros:

La biosorción se llevó a cabo en un agitador rotatorio a 150 rpm a 30°C (Fadel et

al., 2017) durante 48 horas

Una vez culminados los ensayos, la biomasa fue separada del efluente usando papel
filtro N°388. Posteriormente, las muestras se digestaron usando el método
estandarizado 3015A, EPA. Por último, la concentración final de los metales se
determinó usando un ICP- MS (Cadmio total) y Espectrofotometría de absorción
atómica (Plomo y Cobre total). Todos los experimentos se hicieron por duplicado.

La eficiencia de biosorción (E) fue calculada usando la siguiente ecuación:

(Cf −Ci)
E=
Cf

Donde Cf es la concentración final (mg/L) y Ci es la concentración inicial (mg/L).

40
2.3.6. DISEÑO EXPERIMENTAL
El diseño experimental es del tipo factorial de 3 2, teniendo 9 tratamientos y una
repetición, haciendo un total de 18 tratamientos.

Variables independientes:

P = pH → donde P1: pH (2.5); P2: pH (4.5)

D = Dosis → donde D1: Dosis1 (0.05g) ; D2: Dosis2 (0.1g)

T = Tipo de biosorbente → donde T1: Penicillium sp ; T2: Saccharomyces

sp

Variable dependiente:

B = Porcentaje de remoción (%)*

*En este caso se tomó al porcentaje de remoción como la capacidad de biosorción

de metales pesados del efluente. Además, es importante mencionar que se medirá el
porcentaje de remoción de tres metales de la misma muestra: cadmio, cobre y
plomo. Es por ello que, el análisis estadístico de los datos se hará de forma
independiente para cada metal.

El diseño experimental de la investigación se muestra en la Tabla 5.

Tabla 5: Diseño experimental de la investigación

Variables independientes Variable dependiente

pH Dosis (g) Tipo Porcentaje de remoción (%)
% Cd total % Cu total % Pb total
2.5 0.05 Pencillium sp
4.5 0.05
2.5 0.1
4.5 0.1
2.5 0.05 Saccharomyces sp
4.5 0.05
2.5 0.1
4.5 0.1

41
 Métodos de análisis de datos
Para el análisis estadístico de los datos se utilizaron los programas IBM SPSS
Statistics y Minitab 19.
Se realizó un análisis de varianza (ANOVA) con el programa Minitab 19,
finalmente la prueba post hoc haciendo uso del Método de Tukey HSD, Duncan y
Scheffe. Con el programa IBM SPSS Statistics.

CAPÍTULO III
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En este capítulo se muestran los resultados de la caracterización del efluente minero
(metales totales), la identificación de las cepas fúngicas Saccharomyces cerevisiae y
Penicillium hordei mediante técnicas de identificación microscópica, macroscópica,
morfológica y bioquímica; así mismo los resultados de los ensayos de biosorción de Pb,
Cd y Cu para el diseño experimental seleccionado y los resultados de la influencia tanto
del pH, la dosis y el tipo de biosorbente en la biosorción de los metales mencionados.

3.1. CARACTERIZACIÓN DEL EFLUENTE

El efluente se caracterizó en el laboratorio NKAP en la ciudad de Cajamarca,
laboratorio acreditado por INACAL, aplicando el método EPA Method 200.7, Rev.
4.4. Los resultados de metales totales se muestran en el Anexo V.

42
 Se observó que los metales que se encuentran por debajo del límite de detección del
método EPA fueron plata, boro, berilio, cerio, mercurio, molibdeno, antimonio,
selenio y estaño, siendo que se presentan en concentraciones mínimas en el efluente
minero. Es por ello que, no representan peligro para el medio ambiente ni para la
salud, por lo que no se consideraron relevantes en esta investigación.

El aluminio y calcio se encontraron en concentraciones altas con 22.71 mg/L y 20.05

mg/L, respectivamente; sin embargo, no representan problemas significativos para el
medio ambiente. El potasio (4.0 mg/L), magnesio (5.83 mg/L), manganeso (8.3999
mg/L), sodio (3.71 mg/L), fósforo (1.79 mg/L) y sílice (23.98 mg/L), se presentan en
concentraciones relativamente significativas; sin embargo, son elementos que se
comportan como oligonutrientes, para los seres vivos.

En cuanto a los metales que son regulados por el Decreto Supremo N°010-2010-
MINAM, que Aprueban Límites Máximos Permisibles para la descarga de efluentes
líquidos de Actividades Minero-Metalúrgicas, los metales se presentan en la Tabla 6.

Tabla 6: Metales regulados por el D.S.N°10-2010-MINAN presentes en el efluente minero.

LMP D.S. N°10-2010-MINAM

Efluente
Parámetro Unidad Límite en cualquier Límite para el
minero
momento promedio anual
Arsénico Total mg/L 0.1 0.08 12.19
Cadmio Total mg/L 0.05 0.04 1.501
Cromo mg/L 0.1 0.08 0.007
Cobre Total mg/L 0.5 0.4 >20
Hierro mg/L 2 1.6 210.4
Plomo Total mg/L 0.2 0.16 1.276
Mercurio mg/L 0.002 0.0016 <0.001
Zinc Total mg/L 1.5 1.2 >20

Se determinó trabajar con cadmio, cobre y plomo debido a que superan los valores
mínimos en 30, 40 y 6 veces, además de la alta toxicidad e impacto ambiental que
presentan.

43
3.2. EL BIOSORBENTE
Para el desarrollo de esta investigación, se usaron biosorbentes acondicionados a partir
de microorganismos del reino Fungi. Se seleccionaron Penicillium hordei y
Saccharomyces cerevisiae, debido a que ambos son usados para procesos de
fermentación, por lo tanto, son residuos sólidos que necesitan ser valorizados. En esta
investigación se propone su uso como materia prima para la remoción de metales.
Los microrganismos se obtuvieron de diferentes fuentes. Penicillium hordei se obtuvo
a partir de un efluente de curtiembre y Saccharomyces cerevisiae a partir de una
bebida fermentada local llamada chicha de jora. Ambos microorganismos pasaron por
un asilamiento e identificación de la especie, según lo establecido en el ítem 2.3.1 y
2.3.3 de la presente tesis.
En los ítems 3.3. y 3.4. se muestran los resultados obtenidos para la identificación de
las cepas fúngicas, de las cuales una fue identificada como Penicillium hordei y la
otra como Saccharomyces cerevisiae.
A continuación, las cepas fúngicas ya identificadas se propagaron y acondicionaron tal
como lo detalla el ítem 2.3.2. Se obtuvieron 6.27 g de Penicillium hordei por L de
medio y 5.27 g de Saccharomyces cerevisiae. La biomasa preparada se mantuvo en el
desecador hasta su uso.

3.3. IDENTIFICACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae

3.1.1. IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA DE Saccharomyces cerevisiae
Los resultados de la identificación macroscópica que se llevó acabo con la levadura
aislada, se muestran en la Tabla 7. Los valores son promedio de las repeticiones
realizadas en 5 placas Petri.

Tabla 7: Comparación de las características macroscópicas de Saccharomyces Cerevisiae

y los resultados obtenidos de la levadura aislada.

CARACTERÍSTICAS Saccharomyces cerevisiae* Saccharomyces cerevisiae (cepa

aislada)
Tamaño UFC 3-5 mm 3.7 mm
Forma Circular Circular
Borde Entero Borde uniforme
Superficie Lisa Lisa
Aspecto Butiroso (como mantequilla) Butiroso (lechoso)
Elevación Convexa Convexa
Luz transmitida Opaca (no hay transmisión) Opaca
Luz reflejada Brillante Brillante
Consistencia Blanda Blanda
Pigmentación Crema- blanco Crema
44
 *Fuente: Leveau J et al. (2000); (Valdivieso Ugarte, 2006).

3.1.2. IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA DE Saccharomyces cerevisiae

Siguiendo la metodología descrita en el ítem 2.3.3. se realizaron los ensayos de
identificación microscópica. Los resultados se muestran en la Tabla 8 y la Figura 3.

Tabla 8: Comparación de las características microscópicas Saccharomyces cerevisiae y de

la levadura aislada

Características Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae (cepa

aislada)
Forma ovoide o circular Ovoide
Crecimiento exponencial dentro de las 48 Si
horas
Bordes lisos Si
Vacuolas grandes Si
Etapa de gemación durante las 24 horas Si

Figura 3 En la figura observa la división celular y la presencia de gemación, las

mismas que permiten el crecimiento exponencial en las células de la levadura aislada.

3.1.3. PRUEBA DE FERMENTACIÓN DE Saccharomyces cerevisiae

Siguiendo la metodología descrita en el ítem 2.3.3.1. se realizó la prueba de
fermentación. Los resultados se muestran en la Tabla 9.

Tabla 9: Resultados de la prueba de fermentación

Muestra Glucosa Sacaros Lactosa Galactosa Trehalos Rafinosa

a a
A + + - + + +
B + + - + + +
Control - - - - - -
Saccharomyces
+ + - + + +
cerevisiae

45
 Se confirmó la capacidad de fermentar glucosa, sacarosa, galactosa, trehalosa y
rafinosa, mientras que la lactosa no pudo ser fermentada. La cepa aislada fermentó
de manera rápida la glucosa y sacarosa mientras que la trehalosa presentó una
fermentación tardía (Gonzales-Lázaro, 2014).

Finalmente, con los datos recopilados de las Tabla 7, en donde se comparó las
características macroscópicas de Saccharomyces cerevisiae y la Saccharomyces
sp. aislada, se obtuvo que existía una gran similitud entre la cepa aislada y la cepa
de Saccharomyces cerevisiae; lo mismo ocurrió cuando se comparó las
características morfológicas microscópicas de la cepa aislada y S. cerevisiae, los
resultados se muestran en la Tabla 8. En la Tabla 9 se muestra que la levadura
aislada tiene las mismas características fermentativas que Saccharomyces
cerevisiae, por lo que se concluyó que la levadura aislada pertenecía a la especie
Saccharomyces cerevisiae.

3.4. IDENTIFACIÓN DE Penicillium hordei

Es conocido que las colonias fúngicas pueden exhibir diferentes características
morfológicas dependiendo de los factores ambientales, esto les permite adaptarse a los
cambios externos (Matsuura, 2002). La cepa aislada mostró diferentes características
en los cuatro medios solidificados después de una incubación de siete días los cuales
se especifican en la Figura 4 donde se visualiza las características microscópicas que
presentó la cepa aislada al observarlas mediante Amscope Software Microscope en
Mea con el proceso descrito en el Item 2.3.3.2, en la Tabla 10 se describe las
características de las conidias y otras estructuras morfológicas microscópicas. En la
Figura 5 y 6 se muestra las colonias formadas por la cepa aislada, el resultado del
análisis de estas características en los medios MEA CYA y YEA se muestran en la
Tabla 10. La observación de los colores se realizó con luz diurna y se usó como
recurso el libro Methuen ‘‘Handbook of Colour’’ (Kornerup & Wanscher, 1978) para
la diferenciación de colores. Los códigos de colores usados para el estudio se muestran
en el Anexo VI.

Finalmente, al analizar los resultado de la Tabla 10 en donde se recopilan los

resultados de todas las pruebas de identificación para determinar la especie de
Penicillium a la que pertenece la cepa aislada y tomando a consideración el análisis de

46
 las características y la prueba de Ehrlich, se identificó a la cepa como Penicillium
hordei.

Figura 5 Observación microscópica a 10x usando Amscope Software Microscope. A la

izquierda superior: conidias, a la derecha superior, izquierda y derecha inferior:
conidióforos

47
Figura 6 Anverso y reverso de la colonia de Penicillium hordei a los 7 d y 25°C
en medio YES, CYA y MEA, respectivamente; a la derecha inferior se observa el
extrolito producido en CYA.

48
Figura 7 Anverso y reverso de la colonia de Penicillium hordei y su producción de
ácido a los 7, 9 y 14 días en medio CREA, hecho con púrpura de bromocresol el
cual actúa como indicador de pH. La producción de ácido forma un halo amarillo
alrededor de la colonia

49
 Tabla 10: Características Morfológicas y Prueba de Ehrlich – Penicillium hordei

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y PRUEBA DE EHRLICH

CYA – Incubación 7 días a los 25°C

Diámetro de la colonia en mm 41-55
Anverso :verde oscuro (dark green) en el centro
Color observado
con bordes turquesa profundo (Deep turquoise)
Rojo parduzco ( Brownish Red) con bordes
Color en el reverso
yema amarilla (yolk yellow)
Reacción Ehrlich No reaccionó
MEA – Incubación 7 días a 25°C
Diámetro de la colonia en mm 33-40
Textura de la colonia Débilmente fasciculado
Observación del color de la colonia Verde jade
CREA – Incubación 7,10 y 14 días a 25°C
Grado de crecimiento Débil
Diámetro de la colonia en mm 19-21
Producción de ácido Débil
Producción de base: Después de 7 días Débil
Después de 10 – 14 días Débil
YES – Incubación 7 días a 25°C
Diámetro de la colonia en mm 53-54
Grado de esporulación Débil en el centro de la colonia
Color del reverso de la colonia Amarillo pálido (pale yellow)
CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS (MEA)
Longitud de conidias / anchura en um 2.62-3.61
Ornamentación Suave-lisa
Longitud de la fiálide en um 8.00-12.30
Longitud de la métula en um 9.89-14.90
Longitud de la estípide en um 20.71
Ancho de la estípite en um 2.60-2.80
Patrón del conidióforo Biverticilado y terverticilado
Textura de la conidia suave
Textura de la fiálide Suave
Adpresión Divergente
Fuente: Elaboración propia

50
3.5. ENSAYOS DE BIOSORCIÓN
3.5.1. CADMIO
a. Influencia del pH inicial
Debido a su efecto en la carga superficial del biosorbente y el grado de ionización, el
pH es un factor clave en el proceso de remoción de metales pesados (Asku, 2005). En
esta investigación, se consideró relevante trabajar a pH 2.5 y 4.5, esto principalmente
por dos razones: el drenaje ácido de mina recolectado se encuentra a pH 2.5 y trabajar
dentro de un rango ácido ofrece ventajas para el escalamiento a un nivel piloto. Por
otro lado, los experimentos de biosorción llevados cabo por cepas fúngicas a un pH >
6 muestran resultados insignificantes. Este comportamiento de decrecimiento de la
eficiencia de remoción a pH mayores a 6 se debe a que los metales empiezan a perder
solubilidad en la muestra y ocurre un fenómeno precipitación. Además, un incremento
en el pH podría aumentar la disociación de grupos funcionales presentes en la biomasa
(Bakatula et al., 2014).

Figura 8 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de cadmio total a

30°C, 150 rpm y 48 horas.

En la Figura 7, se presentan los resultados de la eficiencia de remoción de cadmio

total, en relación al pH. Los experimentos fueron replicados 2 veces, por lo que se
muestra un promedio de los valores obtenidos.

Tal como se muestra en la Figura 7, los porcentajes de remoción más altos se

obtuvieron a pH 4.5. Se reportó 19% y 20% para Penicillium hordei, y 22% y 27%
usando Saccharomyces cerevisiae. Los resultados concuerdan con estudios anteriores
que señalan que la remoción de cationes metálicos es mayor a pH > 4, ya que los
ligandos de la pared celular tales como los grupos carboxilo, fosfato, imidazol y amino

51
estarían expuestos y tendrían cargas negativas que atraerían a los cationes metálicos a
la superficie celular (Asku, 2005).

A pH 2.5, la eficiencia de remoción es menor. Investigaciones anteriores reportaron

que, a pH bajo, la biosorción en biomasa fúngica se ve limitada, esto podría deberse a
una posible competición con iones oxonios (hidronios), los cuales compiten con los
cationes metálicos y restringen la biosorción de esto (Dönmez et al., 1999).

El pH óptimo de cada metal es distinto, posiblemente debido a la química diferente de

cada especie dentro de las soluciones (Bakatula et al., 2014). En el caso del cadmio, se
realizaron dos blancos a cada pH trabajado: 2.5 y 4.5, y se comprobó con el análisis de
la varianza (Anova Factorial), que el pH es una variable significativa; asi mismo la
interacción entre las variables pH y Tipo de biosorbente (Ver Anexo 7.3.1). El pH 4.5
es el que presenta la mayor eficiencia de remoción, estos resultados concuerdan con la
Figura 8, donde se observa que a pH > 8 es donde empieza a precipitar este metal. Por
lo tanto, la remoción obtenida es producto, casi en su totalidad, de los procesos de
biosorción de la biomasa, ya que no existe remoción por precipitación, debido al rango
de pH en el que se trabajó.

Figura 9 Diagrama de distribución de especies del cadmio

Por otro lado, se analizó también el pH final de las muestras. Los resultados se
observan en la Figura 9. Se observó que a pH 2.5 para ambos biosorbentes los valores
se mantienen idénticos; esto podría indicar un efecto “buffering”, el cual podría
deberse a que la cantidad de protones unidos a la biomasa fue insignificante como para

52
cambiar el pH de la solución. Sin embargo, a pH 4.5 se reportó una diferencia entre el
comportamiento de ambas cepas fúngicas. En el caso de Penicillium hordei se
observó en decrecimiento en el valor del pH, mientras que para Saccharomyces
cerevisiae los valores aumentaron.

El decrecimiento del pH de la solución durante el proceso de biosorción podría indicar

la liberación de protones durante la disociación de los grupos funcionales presentes en
la biomasa (Svecova et al., 2006), lo cual podría indicar que el mecanismo de
biosorción principal en Penicillium hordei a pH 4.5 para la remoción de Cd, Pb y Cu
es el intercambio iónico en los grupos carboxílicos.

El aumento del pH en la solución para el caso de Saccharomyces cerevisiae podría

deberse a que, existe un remanente de medio YPD que no se ha eliminado por
completo, y al tener este un pH de 6.2, su liberación progresiva podría elevar el pH.

4.5

4
pH Final

3.5
Saccharomyces sp
3 Penicillium sp

2.5

2
2 2.5 3 3.5 4 4.5 5
pH Inicial

Figura 10 Comportamiento del pH durante el proceso de biosorción de

cadmio, cobre y plomo usando cepas fúngicas a 30ºC, 150 rpm durante
48 horas.

b. Influencia de la dosis
La dosificación del biosorbente es vital, ya que determinará el costo de adsorbente por
unidad de volumen de efluente a tratar. Además, tiene una gran influencia en el
proceso de biosorción, debido a que determina el potencial de la biomasa a través del
número de sitios de unión disponibles para la remoción de iones metálicos a una
concentración inicial específica (Bakatula et al., 2014).

53
 En el caso del cadmio se observó un incremento en el porcentaje de remoción con el
incremento de la dosis del biosorbente de 0.05 a 0.1 g, tal como lo muestra la Figura
10. Esta relación podría deberse a que, al existir una mayor dosis, también supone el
incremento del número de sitios activos de la biomasa (Verma, Singh & Gupta, 2013).
El mejor resultado obtenido fue 27% usando Saccharomyces cerevisiae a 0.1 g y pH
4.5.

Los porcentajes de remoción son mayores con el aumento de la dosis debido a que
existe una amplia disponibilidad de área de superficie. Sin embargo, es importante
tener en cuenta que estudios preliminares indican que una cantidad fija de biomasa
solo podría ofrecer un número finito de sitios de unión a la superficie, algunos de estos
podrían estar saturados por iones competidores, especialmente en este caso en el que
existen concentraciones altas de otros metales (cationes) en el efluente. Es por ello
que, el porcentaje de metales removidos en sistemas multimetales y matrices
complejas, tal como es este caso, es mucho menor en comparación con sistemas de un
solo metal, llegando como máximo a una remoción del 27% en la presente
investigación.

Además, la disminución en la eficiencia de remoción también podría ser resultado de

la presencia de contaminantes que podrían estar compitiendo por los sitios de unión de
las paredes celulares fúngicas (Javaid et al., 2011).

Figura 11 Porcentaje de remoción de cadmio usando cepas fúngicas, a 30°C y 150 rpm
durante 48 horas

La influencia de la dosis de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de

remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),
54
en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se
concluye que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo en la variable
de respuesta, sin embargo ninguna interacción de la dosis con las demás variables
resulto ser significativo (Ver Anexo 7.3.1).

c. Influencia del tipo

Se consideró relevante trabajar con Penicillium hordei y Saccharomyces cerevisiae,
debido a su disponibilidad como residuos industriales, lo cual abarataría costos. Sin
embargo, en este caso se ha trabajado con polvo de biomasa proveniente de células
aisladas y producidas a nivel laboratorio. Además, la biosorción depende también del
tipo de biomasa usado, ya que esta define los diferentes sitios de enlace o sitios
activos, según su género y especie (Bakatula et al., 2014).

Los resultados se muestran en la Figura 11, se observa que la mayor remoción

obtenida fue 27% y 22% usando Saccharomyces cerevisiae, esto indica que la
biomasa tiene mayor afinidad sobre el cadmio total que el Penicillium hordei. Los
resultados coinciden con los reportados por Sánchez, Marrugo & Urango (2014),
quien reportó que, a concentraciones iniciales bajas de cadmio, en una solución con
dos metales, cadmio y plomo, que competían por los sitios activos, el Penicillium sp
tuvo una mayor afinidad por el plomo en comparación al cadmio, ya que solo alcanzó
como máximo 14.6% de remoción de este último. El efluente minero usado en la
presente investigación contenía entre otros metales, plomo, del cual se hablará más
adelante.

Sin embargo, también se observa que a pH 2.5 es el Penicillium hordei el que obtiene
el mejor resultado, aunque este no es considerable ya que la diferencia solo es de un
punto en ambas dosis. Esto podría deberse a que Saccharomyces cerevisiae es mucho
más sensible al cambio de pH que Penicillium hordei, comprobándose así que las
interacciones entre las variables influyen también significativamente en el proceso de
biosorción, tal como lo indica el análisis de varianza (ANOVA).

Sánchez et al., (2014), con un estudio mediante el espectro de FT-IR, logró determinar
que los grupos funcionales presentes en la superficie celular de Penicillium sp, son -
OH, -NH, C-N, C-H, N-H y C=O. Con lo que respecta a Saccharomyces cerevisiae
estudios han encontrado en la superficie de la levadura grupos funcionales amino,

55
carboxilo o hidroxilo; lo que favorecen la biosorción de metales pesados (Brady &
Duncan, 1994a; Wang, 2002). En otro estudio se evidenció que los grupos funcionales
glucano, manano y quitina, de la pared celular también favorecen la biosorción de
metales pesados. (Brady et al., 1994b)

La mayor biosorción se da por Saccharomyces cerevisiae, esto se puede deber a que

como ya se explicó en la biosorción por parte de esta levadura intervienen una mayor
variedad de grupos funcionales, generando una mayor cantidad de sitios activos para
la unión de metales. Así mismo, cabe mencionar que según (Göksungur et al., 2005) la
biosorción de metales se mejora al trabajar a un pH ácido y básico moderado, ya que
carga negativamente la superficie celular y cambia el estado iónico de los grupos
fosfato, carboxilo y amino. También se ha comprobado que, a pH bajos la carga
superficial de las células positivamente, lo que disminuye la biosorción, además que
los hidronios compiten con los metales (Sağ & Kutsal, 1996). Lo que explica que no
se diferencie mucho la remoción entre ambas biomasas a un pH de 2.5, e incluso que
sea superada por un margen muy pequeño por Penicillium hordei.

Remoción de Cd
30
27
25
Porcentaje de remoción (%)

22
19 20
20 18
16 17
15
15

10

0
Penicillium sp Saccharomyces sp
Tipo de biosorbente

Dosis 0.05 - pH 2.5 Dosis 0.1 - pH 2.5 Dosis 0.05 - pH 4.5 Dosis 0.1 - pH 4.5

Figura 12 Remoción de Cd a pH 4.5 por dos tipos de biosorbentes a 30°C, 150 rpm
durante 48 horas.

La influencia del tipo de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de

remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),
en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, existe un
56
 efecto significativo en la variable de respuesta, así mismo que la interacción entre las
variables pH y Tipo de biosorbente (Ver Anexo 7.3.3).
d. Análisis estadístico por tratamiento
El análisis estadístico por tratamiento se realizó con el programa IBM SPSS Statistics
25 en donde se realizó el análisis Univariado de Varianza para Remoción de Cadmio
por Tratamiento, se determinó que existe diferencias significativas entre los
tratamientos.

El análisis Post-Hoc mediante las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo
uso del software IBM SPSS Statistics 25 (Anexo 7.3.2.). Después de haber realizado
los 8 tratamientos del diseño experimental, el que presentó la mejor eficiencia es el
tratamiento número 8, el cual se trabajó a un pH de 4.5, dosis de 0.1 g/50ml y usando
Saccharomyces sp, de todos los tratamientos estudiados.

3.5.2. COBRE
a. Influencia del pH inicial

Figura 13 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de cobre total a 30°C, 150
rpm y 48 horas.

Los resultados obtenidos para el cobre total fueron similares a los obtenidos para el
cadmio, tal como se muestra en la Figura 12. Los porcentajes de remoción más altos
para los dos tipos de biosorbente se obtuvieron a un pH inicial de 4.5. Para
Penicillium hordei reportó a este pH una remoción del 15% de cobre para una dosis

57
de 0.05g, mientras que para una dosis de 0.1g se obtuvo una remoción del 17%. Por
otro lado, Saccharomyces cerevisiae reportó una remoción del 21% para 0.05g y 31%
para una dosis de 0.1g. Se ha mencionado ya la posible explicación de este
comportamiento en el ítem a 3.4.1, donde se analiza la influencia del pH en la
biosorción de Cadmio.

Los resultados concuerdan con los encontrados por (do Nascimento et al., 2019), quien
afirmó que el pH 5 es el óptimo para la biosorción de Cu +2 por Saccharomyces
cerevisiae. Asimismo, Verma et al. (2013) estudió la biosorción de Cobre por
Penicillium hordei y señaló la tendencia de aumento de la remoción conforme
aumenta el pH, comportamiento que se da solo hasta pH menores a 5. Otros estudios
reportan el mismo comportamiento: pH inicial óptimo en la biosorción de Cu +2 a 4.5 y
a pH bajos la posible competencia entre los iones Cu+2 y los iones
hidronios (Razmovski & Šćiban, 2008; Li et al., 2008; Peng et al., 2010)

De la misma forma que en el estudio del Cadmio, se realizaron dos blancos a cada pH
trabajado: 2.5 y 4.5, y se confirmó que dentro de ese rango no existe una influencia
relevante del pH en la biosorción. Sin embargo, sí se observó una ligera disminución
del cobre total producto de la variación del pH, este valor se convirtió en la nueva
concentración inicial con el fin de tener la certeza de que la remoción del metal fuera
exclusivamente por efecto de la biomasa. Estos resultados concuerdan con la Figura
13, donde se observa que a pH > 5 es donde empieza a precipitar este metal, al
encontrarse el pH de trabajo 4.5 cerca del pH de precipitación, es probable que haya
empezado a perder solubilidad.

Figura 14 Diagrama de distribución de especie de Cu+2 a

diferentes pH (Isern Roselló & Martínez Planas, 2011)
58
 La influencia del pH de muestra en la variable de respuesta, porcentaje de remoción,
se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial), en la que se
observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se concluye
que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable pH, asi
como de las interacciones de las variables pH*Tipo (Ver Anexo 8.3.1).

b. Influencia de la dosis
Para el análisis del efecto de la dosis se trabajó con 0.05g y 0.1g de biosorbente en 50
mL de efluente minero lo que equivale a 1g/L y 2g/L respectivamente. Para el caso de
la remoción de Cu se muestran los resultados en la Figura 14.

Figura 15 Influencia del pH en el porcentaje de remoción de cobre total en un efluente minero

después de 48 horas.

Los resultados obtenidos para la influencia de la dosis en la biosorción de cobre total

son similares a los obtenidos para el cadmio total: a mayor dosis, mayor remoción.

Para el porcentaje de remoción se obtuvo que la biosorción de cobre total fue mayor a
dosis 0.1g para ambos biosorbentes. Para Penicillium hordei se obtuvo un 15% y 17%
a pH 2.5 y 4.5, respectivamente; mientras que para Sacharomyces sp se obtuvo 26% y
31% a pH 2.5 y 4.5, respectivamente. Estos resultados coinciden con lo encontrado
por Verma et al. (2013) para el caso del Penicillium sp y con datos obtenidos por do
Nascimento et al. (2019) para el caso de Saccharomyces cerevisiae. Para valores de
dosis mayores a 1.5 g/L se presenta una continuación de la tendencia debido a que
aumenta la superficie de contacto permitiendo una mejor remoción del metal.
(Razmovski & Šćiban, 2008).

59
La influencia de la dosis de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de
remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),
en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se
concluye que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable
dosis y de la interacción Dosis*Tipo en la variable respuesta (Ver Anexo 8.3.1).

c. Influencia del tipo

Como se observa en la Figura 15, la remoción más alta obtenida fue 31% usando
Saccharomyces cerevisiae, siendo además la que presenta un mayor porcentaje de
remoción con respecto al Penicillium hordei.

El análisis mediante espectro FTIR demostró que los enlaces disulfuros (–S – S–), así
como éster (S – OR) participan en la remoción de iones de cobre, muy aparte de los
grupos funcionales carboxilo e hidroxilo, en la superficie celular de Saccharomyces
cerevisiae que también favorecen la biosorción de metales pesados. (Gohari et al.,
2013)

Se observó que para la absorción de Cu mediante Penicillium sp. se dio mediante la

participación de grupos O–H y N–H. Asi mismo se observó que también existe una
importante participación en el proceso de biosorción por parte del grupo carboxilo.

Como ya se explicó anteriormente la biosorción mejorada de la levadura se debe a su

gran cantidad de sitios de unión, además que presenta una mayor cantidad de sitios
activos que podrían remover los metales competitivos. Adicionalmente, se observa que
presentó una mayor remoción de Cu que de Cd, así mismo la tendencia de disminuir la
biosorción a pH bajos, si bien es esta ocasión esa baja no se compara con lo observado
para Penicillium hordei. esto se podría deber a que como ya vimos los sitios activos
de enlace son limitados en comparación a la levadura por lo que la competencia de los
metales por acoplarse a los sitios activos es mayor por lo que a dosis bajas se observa
que con pH bajos la remoción de Cu se asemeja debido al fenómeno antes descrito del
comportamiento de la levadura a bajos pH. Esto no se refleja en la dosis más elevada
debido al número de sitios de enlace de la superficie celular.

La influencia del tipo de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de

remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),

60
 en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se
concluye que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable
Tipo de biosorbente y de las interacciones pH*Tipo de biosorbente y Dosis*Tipo de
biosorbente (Ver Anexo 8.3.3).

Remoción de Cu
35
31
30
26
Porcentaje de remoción (%)

25
21
20
16 17
15 15 15
15

10

0
Penicillium sp Saccharomyces sp

Tipo de biosorbente

Dosis 0.05 - pH 2.5 Dosis 0.1 - pH 2.5 Dosis 0.05 - pH 4.5 Dosis 0.1 - pH 4.5
Figura 16 Influencia del tipo de biosorbente en el % de remoción de cobre
total a 30°C, 150 rpm y 48 horas.

d. Análisis estadístico por tratamiento

El análisis estadístico por tratamiento se realizó con el programa IBM SPSS Statistics
25 en donde se realizó el análisis Univariado de Varianza para Remoción de Cobre por
Tratamiento, se determinó que existe diferencias significativas entre los tratamientos.

El análisis Post-Hoc mediante las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo
uso del software IBM SPSS Statistics 25 (Anexo 7.3.2.). Después de haber realizado
los 8 tratamientos del diseño experimental, el que presentó la mejor eficiencia es el
tratamiento número 8 de todos los tratamientos estudiados, en el cual se trabajó a un
pH de 4.5, dosis de 0.1 g/50ml y usando Saccharomyces sp.

61
3.5.3. PLOMO
a. Influencia del pH inicial

Figura 17 Influencia del pH y dosis del biosorbente en el % de remoción de plomo total a

30°C, 150 rpm y 48 horas.
Los resultados reportados para la biosorción de plomo total son similares a los
obtenidos para cobre total y cadmio total. Del mismo modo que los metales descritos
anteriormente y tal como se observa en la Figura 16, los porcentajes de remoción más
altos para los dos tipos de biosorbentes se obtuvieron a un pH inicial de 4.5, siendo que
el Penicillium hordei reportó a este pH una remoción del 52% y 76% para 0.05 g y 0.1
g de dosis, respectivamente. Por otro lado, Saccharomyces cerevisiae reportó 63% y
85% para 0.05 g y 0.1 g de dosis, respectivamente. Resultados que coinciden con Wang
& Chen, (2006), Massoud et al. (2019a) y Hadiani et al. (2018).

De la misma forma que los anteriores metales, se realizaron dos blancos a cada pH
trabajado: 2.5 y 4.5, y se confirmó que dentro de ese rango no existe una influencia
relevante del pH en la biosorción. Sin embargo, sí se observó una ligera disminución del
plomo total producto de la variación del pH, este valor se convirtió en la nueva
concentración inicial con el fin de evaluar exclusivamente el efecto de la biomasa en la
remoción de metales. Estos resultados concuerdan con la Figura 17: Diagrama de
distribución de especies del Pb+2, donde se observa que a pH > 6 es el punto de
precipitación del plomo; sin embargo, la pérdida de solubilidad del metal podría
iniciarse antes.

62
 La influencia del pH de muestra en la variable de respuesta, porcentaje de remoción,
se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial), en la que se
observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se concluye
que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable pH y sus
interacciones en la variable de respuesta (Ver Anexo 9.3.1).

b. Influencia de la dosis

Remoción de Pb- Penicillium Remoción de Pb-

sp. Sacharomyces sp.
80 76 90 85
70 80 70
58 70 63
60 52
60
Remoción %

Remoción %

50 44 pH 2.5 48 pH 2.5
50
40 pH 4.5 pH 4.5
40
30 30
20 20
10 10
0 0
0.05 0.1 0.05 0.1
Dosis de biosorbente g/50ml Dosis de biosorbente g/50ml

Figura 19 Influencia de la dosis en el porcentaje de remoción de plomo total en un efluente minero

después de 48 horas.
Como se observa en la Figura 18, el comportamiento nuevamente coincide con lo
encontrado para cadmio total y cobre total: los valores de remoción más altos se
encontraron a dosis 0.1 g. Para el Penicillium hordei se obtuvo un porcentaje de
remoción de 58% y 76% a pH 2.5 y 4.5, respectivamente. Mientras que, para
Saccharomyces cerivisae se obtuvo un porcentaje de remoción mayor a una dosis de
0.1g con 70% y 85% para ambos pH. Lo descrito guarda relación con los datos
obtenidos por Massoud et al. (2019b) y Armirnia et al. (2015) que describieron una
tendencia de aumento de la dosis y posterior aumento de la remoción.

La influencia de la dosis de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de

remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),

63
 en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se
concluye que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable
dosis y sus interacciones en la variable de respuesta (Ver Anexo 9.3.1).

c. Influencia del tipo

Los resultados se muestran en la Figura 19, se reporta que la mayor remoción obtenida
fue 85% usando Saccharomyces cerevisiae. Además, en tratamiento con las mismas
condiciones de dosis de biomasa y pH, se demuestra que existe una mayor remoción
de plomo por parte de la levadura, sim embargo la remoción con el hongo filamentoso
es también elevada.

En un estudio donde se usó como biosorbente Penicillium sp. que se aisló de un suelo
contaminado por actividades mineras. Asi mismo se realizó un análisis IR para
determinar los grupos funcionales que participaban en la biosorción de cadmio y
plomo, muestra bandas y picos muy característicos a los enlaces de grupos funcionales
-OH, -NH, C-N, C-H, N-H y C=O, además se observó que estos grupos presentan una
mayor afinidad por el plomo que por el cadmio (Sánchez et al., 2014) lo que se ve
reflejado en la mayor remoción del plomo que del cadmio en el efluente minero.

Se ha comprobado que el proceso de biosorción de metales pesados usando S.

cerevisiae se realiza de manera selectiva y se observó la competitividad de los metales
por los sitios de unión en la pared celular de la levadura. S. cerevisiae presenta un
grado de afinidad distinto para los iones metálicos, así se destaca el plomo como como
un metal de gran afinidad por la levadura por encima del cadmio y el cobre (Massoud
et al., 2019b)

En cuanto a los grupos funcionales que se encuentran en la pared celular de la

levadura S. cerevisiae y que participan en la biosorción de iones de plomo de observó
que son los grupos hidroxilo (–OH), carboxilo (–COOH), amina (–NH) y piridina en

Remoción de Pb total
90% 85%
Porcentaje de remoción (%)

80% 76%
70%
70% 63%
60%
58%
52% 48%
50% 44%
40%
30%
20%
10%
0%
Penicillium sp Saccharomyces sp 64
Tipo de biosorbente

Dosis 0.05 - pH 2.5 Dosis 0.1 - pH 2.5 Dosis 0.05 - pH 4.5 Dosis 0.1 - pH 4.5
 andamios minerales los más representativos (Ma et al., 2015) esto demuestra que al
existir grupos funcionales más complejos se mejora la remoción de iones metálicos,
por lo que la levadura presenta una mejora significativa en cuanto a la biosorción en
comparación con Penicillium hordei.

Figura 20 Influencia del tipo de biosorbente en la remoción de Pb de un efluente minero

a 30°C, 150 rpm durante 48 horas
La influencia del tipo de biosorbente en la variable de respuesta, porcentaje de
remoción, se determinó llevando a cabo el Análisis de Varianza (ANOVA factorial),
en la que se observó un valor-p menor al nivel de significancia α = 0.05, por lo que se
concluye que a un 95% de confiabilidad, existe un efecto significativo de la variable
tipo de biosorbente y sus interacciones en la variable de respuesta (Ver Anexo 9.3.1).

d. Análisis estadístico por tratamiento

El análisis estadístico por tratamiento se realizó con el programa IBM SPSS Statistics
25 en donde se realizó el análisis Univariado de Varianza para Remoción de Plomo
por Tratamiento, se determinó que existe diferencias significativas entre los
tratamientos.

El análisis Post-Hoc mediante las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo
uso del software IBM SPSS Statistics 25 (Anexo 7.3.2.). Después de haber realizado
los 8 tratamientos del diseño experimental, el que presentó la mejor eficiencia es el
tratamiento número 8, en el cual se trabajó a un pH de 4.5, dosis de 0.1 g/50ml y
usando Saccharomyces sp. De todos los tratamientos estudiados.

3.5.4. INTERACCIÓN ENTRE LOS METALES

La totalidad de los ensayos realizados fueron llevados a cabo exclusivamente en el
efluente minero para dilucidar la aplicabilidad de los biosorbentes usados bajo
condiciones batch. Es importante mencionar que no se le ha realizado ningún pre
tratamiento al efluente minero. A pesar de que el drenaje ácido contiene gran variedad
de metales pesados, solo se ha considerado cadmio, cobre y plomo. La selección de los
metales a trabajar se realizó tomando en cuenta la toxicidad de estos.

Como ya se ha mencionado anteriormente, los mejores resultados se obtuvieron a pH

4.5, dosis 0.1 g usando Saccharomyces cerevisiae. Como se observa en la Figura 20,
65
 se obtuvo la mayor remoción para el plomo total alcanzando 85%, en segundo lugar,
quedó el cobre total con 31% y, por último, la remoción más baja se obtuvo para
cadmio total con 27%.

Porcentaje de remoción de metales

usando Saccharomyces sp
90 85
80
70
60
Remoción %

50
40 31
28
30
20
10
0
Cd total Cu total Pb total

Figura 21 Remoción de metales pesados de un efluente minero usando Saccharomyces sp,

ph 4.5, dosis 0.1 g 30°C, 150 rpm durante 48 horas
Es importante mencionar que, además de las variables trabajadas en esta investigación,
una de los factores más importantes que podrían influir en la biosorción de metales es
la concentración inicial del ion. En este caso, la concentración del efluente fue de 1.73
mg/g de cadmio, lo cual pudo haber sido el causante de que la eficiencia de remoción
no fuera tan alta. Estudios anteriores como el de Sánchez et al. (2014) han estudiado la
concentración inicial del ión como variable de trabajo en la biosorción por
Penicillium sp y encontraron que, a mayor concentración inicial, mayor remoción, lo
que confirma lo ya mencionado. Ver Figura 21.

Figura 22 Efecto de la concentración inicial de metales tóxicos en la biosorción por

Penicillium sp Fuente: Sánchez et al., (2014)
66
En cuanto al cumplimiento de la normativa ambiental vigente, se analizó la
concentración final de los metales posterior a los tratamientos y se comparó con los
Límites Máximos Permisibles para la descarga de efluentes líquidos de actividades
minero metalúrgicas, aprobados mediante Decreto supremo N°010-2010-MINAM, así
se determinó que la remoción de cobre no fue suficiente para encontrarse bajo el límite
de 0.5mg/L, siendo la menor concentración encontrada la de 24.54 mg/L. Mientras que
la remoción de Cadmio, se logró resultados más satisfactorios, pero sin lograr ubicarse
dentro del límite permisible de 0.05 mg/L, siendo la menor concentración obtenida a
un con 1.26 mg/L. en cuanto al plomo en el cual se obtuvo la mayor remoción se
encontró que solo Saccharomyces Cerevisiae en un pH de 4.5 y dosis de 0.1g, se logró
una concentración final de 0.15 mg/L que es menor al LMP que es de 0.2 mg/L.

67
 CAPÍTULO IV

4. CONCLUSIONES

 Las cepas fúngicas identificadas como Penicillium hordei y Saccharomyces

cerevisiae demostraron tener capacidad de biosorción de cadmio, cobre y plomo,
alcanzando los niveles más altos de remoción a pH 4.5 y dosis 0.1g a condiciones
constantes de 150 rpm, 30ºC durante 48 horas.
 El pH inicial del efluente minero a tratar ejerce influencia significativa en la
biosorción de cadmio, cobre y plomo, obteniéndose los resultados más altos a pH
4.5. Los mayores valores de remoción fueron 28% para cadmio, 31% para cobre y
82% para plomo.
 La dosis del biosorbente ejerce influencia significativa en la biosorción de cadmio,
cobre y plomo. Asimismo, se encontró que la mayor dosis favorece la biosorción,
siendo 0.1g (2g/L) la que mostró los valores más elevados.
 El tipo de biosorbente demostró ejercer influencia significativa en la biosorción de
cadmio, cobre y plomo, siendo Saccharomyces cerevisiae la que presento los
valores más altos de remoción.
 Se ha logrado demostrar que el tratamiento que presenta mayor eficiencia de
biosorción de los metales cadmio, cobre y plomo, de todos los tratamientos
estudiados, es el tratamiento número 8 con un pH de 4.5, dosis de 0.1g/50ml y
usando Saccharomyces cerevisiae,

68
 CAPÍTULO V
5. RECOMENDACIONES
 Se recomienda hacer pre tratamiento a los biosorbentes estudiados para analizar
una posible mejora en su capacidad de biosorción.
 Se recomienda caracterizar el efluente de forma más amplia: determinar la DQO, la
dureza, la presencia de sulfatos, nitratos y otros contaminantes con el fin de
entender a profundidad la matriz en la que actúa el biosorbente y las posibles
interferencias.
 Se recomienda estudiar la desorción de los biosorbentes estudiados para analizar la
posible recuperación de metales y el reúso de la biomasa.
 Se recomienda estudiar el mecanismo de biosorción de Penicillium hordei y
Saccharomyces cerevisiae de forma detallada.
 Se recomienda analizar la concentración final de todos los metales presentes en el
efluente para analizar si también están siendo removidos por el tratamiento y,
además, explicar a detalle la posible competencia entre los iones metálicos.
 Se recomienda estudiar la biosorción de Saccharomyces cerevisiae en su estado de
residuo industrial.
 Se recomienda hacer un escalamiento de este tratamiento a nivel piloto para
determinar su viabilidad económica a nivel industrial.

69
 CAPÍTULO VI
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Abdel -Aty, A., Ammar, N., Abdel Ghafar, H., & Ali, R. (2013). Biosorption of cadmium and
lead from aqueous solution by fresh water alga Anabaena sphaerica biomass. Journal
Of Advanced Research, 4(4), 367-374. https://doi.org/10.1016/j.jare.2012.07.004.

Abdel-Ghani, N., Hegazy, A., & El-Chaghaby, G. (2009). Typha domingensis leaf powder for
decontamination of aluminium, iron, zinc and lead: Biosorption kinetics and
equilibrium modeling. International Journal Of Environmental Science &
Technology, 6(2), 243-248. https://doi.org/10.1007/bf03327628

Aduvire, O. (2006). Drenaje Ácido de Mina: Generación y Tratamiento. Madrid: Instituto

Geológico y Minero de España. Edición IGME. Código: SID-63187. Publicación
Electrónica 136pp.

Ahalya, N., Ramachandra, T. V. & Kanamadi, R. D. (2003) Biosorption of heavy metals.

Research Journal of Chemistry and Environment 7, pp. 71–79

Ahluwalia, S. S. & Goyal, D. 2007 Microbial and plant derived biomass for removal of heavy
metals from wastewater. Bioresource Technology 98, 2243–2257

Ahmed, M. and Ahmaruzzaman, M. (2016). A review on potential usage of industrial waste

materials for binding heavy metal ions from aqueous solutions. Journal of Water
Process Engineering, 10, pp.39-47.

Akhmetsadykova, S., Konuspayeva, G., Loiseau, G., Baubekova, A., Kanayat, S.,
Akhmetsadykov, N., & Faye, B. (2013). Protection against lead contamination by
strains of lactic acid bacteria from fermented camel milk. Emirates Journal of Food
and Agriculture, 25(4), 274-282.

Aksu, Z. (2005). Equilibrium and kinetic modelling of cadmium(II) biosorption by C. vulgaris

in a batch system: effect of temperature. Separation And Purification
Technology, 21(3), 285-294. https://doi.org/10.1016/s1383-5866(00)00212-4

70
Alluri HK, Ronda SR, Settalluri VS, Bondili JS, Suryanarayana V, Venkateshwar P. (2007)
Biosorption: An eco-friendly alternative for heavy metal removal. African Journal of
Biotechnology. 6: 2924-2931

Amirnia, S., Ray, M., & Margaritis, A. (2015). Heavy metals removal from aqueous solutions
using Saccharomyces cerevisiae in a novel continuous bioreactor–biosorption system.
Chemical Engineering Journal, 264, 863-872.
https://doi.org/10.1016/j.cej.2014.12.016

Angulo, F. (2006). Pérdida de la producción de las tierras agrícolas contaminadas por las
aguas del rio Moche, Sector Cushmun–Casmiche–año 2003-2004. ( Tesis de grado).
Universidad Nacional de Trujillo, Perú.

Artola A, Martin MJ, Balaguer M, Rigola M. Pilot plant biosorption in an integrated contact–
settling system: Application to Cu (II) removal by anaerobically digested sludge.
(2001) Journal of Chemical Technology and Biotechnology. 76:1141-1146

Bakatula, E., Cukrowska, E., Weiersbye, I., Mihaly-Cozmuta, L., Peter, A. & Tutu, H. (2014).
Biosorption of trace elements from aqueous systems in gold mining sites by the
filamentous green algae (Oedogonium sp.). Journal Of Geochemical Exploration, 144,
492-503. https://doi.org/10.1016/j.gexplo.2014.02.017

Barakat, M. (2011). New trends in removing heavy metals from industrial wastewater.
Arabian Journal of Chemistry, 4(4), pp.361-377.

Bouras, H., Yeddou, A., Bouras, N., Hellel, D., Holtz, M., Sabaou, N., Chergui, A. and
Nadjemi, B. (2017). Biosorption of Congo red dye by Aspergillus carbonarius M333
and Penicillium glabrum Pg1: Kinetics, equilibrium and thermodynamic studies.
Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers, 80, pp.915-923.

Brady, D., & Duncan, J. (1994a). Binding of heavy metals by the cell walls of Saccharomyces
cerevisiae. Enzyme And Microbial Technology, 16(7), 633-638.
https://doi.org/10.1016/0141-0229(94)90131-7

Brady, D., Stoll, A., Starke, L., & Duncan, J. (1994b). Chemical and enzymatic extraction of
heavy metal binding polymers from isolated cell walls of Saccharomyces cerevisiae.
Biotechnology And Bioengineering, 44(3), 297-302.
https://doi.org/10.1002/bit.260440307

71
Çabuk, A., Akar, T., Tunali, S., & Gedikli, S. (2007). Biosorption of Pb(II) by industrial
strain of Saccharomyces cerevisiae immobilized on the biomatrix of cone biomass of
Pinus nigra: Equilibrium and mechanism analysis. Chemical Engineering Journal,
131(1-3), 293-300. https://doi.org/10.1016/j.cej.2006.12.011

Carolin, C., Kumar, P., Saravanan, A., Joshiba, G. and Naushad, M. (2017). Efficient
techniques for the removal of toxic heavy metals from aquatic environment: A review.
Journal of Environmental Chemical Engineering, 5(3), pp.2782-2799.

Çetinkaya Dönmez, G., Aksu, Z., Öztürk, A., & Kutsal, T. (1999). A comparative study on
heavy metal biosorption characteristics of some algae. Process Biochemistry, 34(9),
885-892. https://doi.org/10.1016/s0032-9592(99)00005-9

Chen, H., Zhao, J., Dai, G., Wu, J., & Yan, H. (2010). Adsorption characteristics of Pb(II)
from aqueous solution onto a natural biosorbent, fallen Cinnamomum camphora
leaves. Desalination, 262(1-3), 174-182. https://doi.org/10.1016/j.desal.2010.06.006

Chong, H., Chia, P., & Ahmad, M. (2013). The adsorption of heavy metal by Bornean oil
palm shell and its potential application as constructed wetland media. Bioresource
Technology, 130, 181-186. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2012.11.136

De Florio Ramírez E. (1986) Estudio de la fermentación de chicha de jora. (Tesis de grado).

Universidad Nacional Jorge Basadre, Tacna

Defensoría del pueblo del perú. (2011). «Reporte de Conflictos Sociales N° 89».
(www.defensoria.gob.pe/conflictos-sociales-reportes.php; Consultado el 05 de mayo
del 2018).

Demirbas, A. (2008) Heavy metal adsorption onto agro-based waste materials: a review.
Journal of Hazardous Materials 157, 220–229.

Dirección de Promoción Minera del Ministerio de Energía y Minas. (2019). Boletín

Estadístico Minero (pp. 3-27). Lima.

Dix, N.J. and Webster, J. (1995). Fungal Ecology. Chapman and Hall, London.

do Nascimento, J., de Oliveira, J., Rizzo, A., & Leite, S. (2019). Biosorption Cu (II) by the
yeast Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology Reports, 21, e00315.
https://doi.org/10.1016/j.btre.2019.e00315

72
Edelstein, M., & Ben-Hur, M. (2018). Heavy metals and metalloids: Sources, risks and
strategies to reduce their accumulation in horticultural crops. Scientia
Horticulturae, 234, 431-444. https://doi.org/10.1016/j.scienta.2017.12.039

Esposito, A., Pagnanelli, F., & Vegliò, F. (2002). pH-related equilibria models for biosorption
in single metal systems. Chemical Engineering Science, 57(3), 307-313.
https://doi.org/10.1016/s0009-2509(01)00399-2.

Estela Escalante, W. (2016). Aislamiento y selección de levaduras. In: W. Estela Escalante,

ed., Guía de laboratorio de fermentaciones, 1st ed.

Fadel, M., Hassanein, N., Elshafei, M., Mostafa, A., Ahmed, M. and Khater, H. (2017).
Biosorption of manganese from groundwater by biomass of Saccharomyces cerevisiae.
HBRC Journal, 13(1), pp.106-113.

Fajardo Castillo, E. and Sarmiento Forero, S. (2007). Evaluación de la melaza de caña como

sustrato para la producción de Saccharomyces Cerevisiae. (Tesis de grado). Pontificia
Universidad Javeriana, Bogotá.

Fan, T., Liu, Y., Feng, B., Zeng, G., Yang, C., Zhou, M., Zhou, H., Tan, Z. and Wang, X.
(2008). Biosorption of cadmium(II), zinc(II) and lead(II) by Penicillium
simplicissimum: Isotherms, kinetics and thermodynamics. Journal of Hazardous
Materials, 160(2-3), pp.655-661.

Food and spoilage microorganisms. (2006). New York: Clive de W. Blackburn.

For INVESTORS. Bvsorbex.net. (2020). Consultado el 10 de mayo del 2020 de

http://www.bvsorbex.net/invest.htm.
Frisvad, J.C., Samson, R.A., 2004. Polyphasic taxonomy of Penicillium subgenus
Penicillium: a guide to identification of food and air-borne terverticillate Penicillia and
their mycotoxins. Stud. Mycol. pp. 1–173.

Frivsad, J. (1985). Creatine sucrose agar, a differential medium for mycotoxin producing
terverticillate Penicillium species. Letters in Applied Microbiology, 1(6), pp.109-113.

Fu, F. and Wang, Q. (2011). Removal of heavy metal ions from wastewaters: A review.
Journal of Environmental Management, 92(3), pp.407-418.

73
García Ventocilla, D., & Mamani Gamarra, G. (2008). Selección de levaduras nativas
Saccharomyces cerevisiae aisladas de chicha de jora del valle del Mantaro. (Tesis de
grado) Universidad Nacional del Centro del Perú, Huancayo.

Gardea-Torresdey, J. L., Rosa, G. D. & Peralta-Videa, J. R. (2004) Use of phytofiltration

technologies in the removal of heavy metals: a review. Pure and Applied Chemistry
76, 801–813.

Gautam, R., Mudhoo, A., Lofrano, G. and Chattopadhyaya, M. (2014). Biomass-derived

biosorbents for metal ions sequestration: Adsorbent modification and activation
methods and adsorbent regeneration. Journal of Environmental Chemical Engineering,
2(1), pp.239-259.

Gohari, M., Hosseini, S., Sharifnia, S., & Khatami, M. (2013). Enhancement of metal ion
adsorption capacity of Saccharomyces cerevisiae's cells by using disruption
method. Journal Of The Taiwan Institute Of Chemical Engineers, 44(4), 637-645.
https://doi.org/10.1016/j.jtice.2013.01.002

Gonzáles Lázaro (2014). Caracterización bioquímica y biotecnológica de la levadura

“Saccharomyces cerevisiae” GL15. (Tesis de maestrìa). Universidad de la Rioja,
Logroño, España.

Göksungur, Y., Üren, S., & Güvenç, U. (2005). Biosorption of cadmium and lead ions by
ethanol treated waste baker's yeast biomass. Bioresource Technology, 96(1), 103-109.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2003.04.002

Goyal, N., Jain, S., & Banerjee, U. (2003). Comparative studies on the microbial adsorption
of heavy metals. Advances In Environmental Research, 7(2), 311-319.
https://doi.org/10.1016/s1093-0191(02)00004-7

Hadiani, M., Darani, K., Rahimifard, N., & Younesi, H. (2018). Biosorption of low
concentration levels of Lead (II) and Cadmium (II) from aqueous solution by
Saccharomyces cerevisiae: Response surface methodology. Biocatalysis And
Agricultural Biotechnology, 15, 25-34. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2018.05.001

Halttunen, T., Salminen, S., & Tahvonen, R. (2007). Rapid removal of lead and cadmium
from water by specific lactic acid bacteria. International journal of food microbiology.
(Vol. 114). DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2006.10.040

74
Ibrahim W. (2011) Biosorption of heavy metal ions from aqueous solution by red macroalgae.
Journal of Hazardous Materials. 192:1827-1835

Isern Roselló, R., & Martínez Planas, M. (2011). Estudio experimental de la movilidad de
metales pesados en sedimentos de la cuenca del Jequetepeque, Perú. Barcelona:
Miralles Esteban, Núria. Retrieved from
https://upcommons.upc.edu/handle/2099.1/12248

Javaid, A., Bajwa, R., Shafique, U., & Anwar, J. (2011). Removal of heavy metals by
adsorption on Pleurotus ostreatus. Biomass And Bioenergy, 35(5), 1675-1682.
https://doi.org/10.1016/j.biombioe.2010.12.035

Comité Mixto FAO/OMS de Expertos en Aditivos Alimentarios. (2004). Evaluation of

certain food additives and contaminants. In Sixty-first report of the joint FAO/WHO
Expert committee on food additives (Vol. 99, pp. 139-144). WHO Tech.: Rep. Ser.

Kornerup, A., Wanscher, J., & Pavey, D. (1989). Methuen handbook of colour. Methuen.

Kumar, D., & Gaur, J. (2011). Metal biosorption by two cyanobacterial mats in relation to pH,
biomass concentration, pretreatment and reuse. Bioresource Technology, 102(3),
2529-2535. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2010.11.061

Leveau J, Bovix M. (2000) Microbiología industrial. Zaragoza: Acribia S.A

Li, X., Liao, D., Xu, X., Yang, Q., Zeng, G., Zheng, W., & Guo, L. (2008). Kinetic studies for
the biosorption of lead and copper ions by Penicillium simplicissimum immobilized
within loofa sponge. Journal Of Hazardous Materials, 159(2-3), 610-615.
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2008.02.068

Liu, Y., Fan, T., Zeng, G., Li, X., Tong, Q., & Ye, F. et al. (2006). Removal of cadmium and
zinc ions from aqueous solution by living Aspergillus niger. Transactions Of
Nonferrous Metals Society Of China, 16(3), 681-686. https://doi.org/10.1016/s1003-
6326(06)60121-0

López-Jácome, L., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. and Ortega-Peña, S. (2014). Las

tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad,
(3), pp.10-18.
Ma, X., Cui, W., Yang, L., Yang, Y., Chen, H., & Wang, K. (2015). Efficient biosorption of
lead(II) and cadmium(II) ions from aqueous solutions by functionalized cell with

75
 intracellular CaCO3 mineral scaffolds. Bioresource Technology, 185, 70-78.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2015.02.074

Magan, N. (1997). Fungi in extreme environments. In: D.T. Wicklow and B. So¨derstro¨m
(eds) The Mycota IV. Environmental and Microbial Relationships, pp. 99–114.
Springer-Verlag, Berlin.

Malca, l. (1997). Tesis: macro invertebrados bentónicos como indicadores de contaminación

por metales pesados en el río Moche. Trujillo-Perú.

Malkoc, E., & Nuhoglu, Y. (2005). Investigations of nickel(II) removal from aqueous
solutions using tea factory waste. Journal Of Hazardous Materials, 127(1-3), 120-128.
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2005.06.030

Manrique Sáenz I. (1978) Flora microbiana de la chicha de jora. (Tesis de grado).

Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima.

Mapolelo, M., & Torto, N. (2004). Trace enrichment of metal ions in aquatic environments by
Saccharomyces cerevisiae. Talanta, 64(1), 39-47.
https://doi.org/10.1016/j.talanta.2003.10.058.

Mara, D. and Horan, N. (2014). Handbook of Water and Wastewater Microbiology. San
Diego: Elsevier Science.

Massoud, R., Hadiani, M., Hamzehlou, P., & Khosravi-Darani, K. (2019a). Bioremediation of
heavy metals in food industry: Application of Saccharomyces cerevisiae. Electronic
Journal Of Biotechnology, 37, 56-60. https://doi.org/10.1016/j.ejbt.2018.11.003

Massoud, R., Khosravi-Darani, K., Sharifan, A., & Asadi, G. (2019b). Lead bioremoval from
milk by Saccharomyces cerevisiae. Biocatalysis And Agricultural Biotechnology, 22,
101437. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2019.101437

Matsuura, S. (2002). Colony patterning and collective hyphal growth of filamentous fungi.
Physica A: Statistical Mechanics and its Applications, 315(1-2), pp.125-136.

Ministerio de Energía y Minas (2013). Protocolo de Monitoreo de Calidad de Efluentes y

Aguas Superficiales en las Actividades Minero-Metalúrgicas. Lima, pp.14-16.

Ministerio de Energía y Minas (2019). Boletín Estadístico Minero. Recuperado de:

https://www.minem.gob.pe/_publicacion.php?idSector=1&idPublicacion=581

76
Ministerio del Ambiente (20 de agosto del 2010). Aprueban Límites Máximos Permisibles
para la descarga de efluentes líquidos de Actividades Minero – Metalúrgicas.
[Decreto Supremo Nº 010-2010-MINAM ] Diario Oficial El Peruano / Recuperado de:
http://www.minam.gob.pe/wp-content/uploads/2013/09/ds_010-2010-minam.pdf

Ministerio del Ambiente (19 de diciembre del 2015). ECA’s Agua Categoría 3 (subcategorías
D1: Riego de cultivos de tallo alto y bajo y D2: Bebida de Animales. [Decreto
Supremo N° 015-2015-MINAM] Diario Oficial El Peruano / Recuperado de:
http://www.minam.gob.pe/wp-content/uploads/2015/12/Decreto-Supremo-N
%C2%B0-015-2015-MINAM.pdf

Montesinos, M. (2017). Caracterización de efluentes de mina para elección de la alternativa

óptima de tratamiento (Tesis de grado). Pontificia Universidad Católica del Perú,
Lima.

Montoya, M. (2008). La Cordillera de los Andes es una esponja de agua.

(http://www.modestomontoya.org/.../EsponjaaguaAgronoticias.html; Consultado el 05
de mayo del 2018).

Moreno-LLechú, Lourdes María, & Vega-Pulido, Neibys, & Bazo-Toscano, Yanetsy, &
Cuevas-Guerra, Judith, & Cuevas-Guerra, Judith, & Hernández, Lizzie (2013).
Tóxicos ambientales y salud: Intervención educativa. Revista Cubana de Química,
XXV(1),82-91.[fecha de Consulta 23 de Febrero de 2020]. ISSN: 0258-5995.
Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=4435/443543730011

Mrvčić J, Stanzer D, Šolić E, Stehlik-Tomas V. (2012) Interaction of lactic acid bacteria with
metal ions: Opportunities for improving food safety and quality. World Journal of
Micro-biology and Biotechnology. 28:2771-2782

Naiya, T., Bhattacharya, A., Mandal, S., & Das, S. (2009). The sorption of lead(II) ions on
rice husk ash. Journal Of Hazardous Materials, 163(2-3), 1254-1264.
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2008.07.119

Naja, G., Murphy, V. & Volesky, B. (2010) Biosorption, metals. In: Encyclopedia of
Industrial Biotechnology: Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology (M. C.
Flickinger, ed.). 29 pp., DOI: 10.1002/9780470054581.eib166.

O'Connell, D.W., Birkinshaw, C., O'Dwyer, T.F., (2008). Heavy metal adsorbents prepared
from the modification of cellulose: a review. Bioresour. Technol. 99, 6709-6724.
77
Park, D., Yun, Y., & Park, J. (2010). The past, present, and future trends of
biosorption. Biotechnology And Bioprocess Engineering, 15(1), 86-102.
https://doi.org/10.1007/s12257-009-0199-4

Parvaiz, A., Sema, K., & Murat, D. (2016). Chapter 3 - Effect of Lead on Plant and Human
DNA Damages and Its Impact on the Environment. Emerging Remediation
Techniques, 41-67. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-803158-2.00003-5

Peng, Q., Liu, Y., Zeng, G., Xu, W., Yang, C., & Zhang, J. (2010). Biosorption of copper(II)
by immobilizing Saccharomyces cerevisiae on the surface of chitosan-coated magnetic
nanoparticles from aqueous solution. Journal Of Hazardous Materials, 177(1-3), 676-
682. https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2009.12.084

Ramírez Carmona, M., Pereira da Silva, M., Ferreira Leite, S., Vasco Echeverri, O. and
Ocampo-López, C. (2012). Packed bed redistribution system for Cr(III) and Cr(VI)
biosorption by Saccharomyces cerevisiae. Journal of the Taiwan Institute of Chemical
Engineers, 43(3), pp.428-432.

Ramrakhiani, L., Majumder, R., Khowala, S., (2011). Removal of hexavalent chromium by
heat inactivated fungal biomass of Termitomyces clypeatus: surfacecharacterization
and mechanism of biosorption. Chem. Eng. J. 171, 1060–1068.

Rao RAK, Ikram S. Sorption studies of Cu (II) on gooseberry fruit (Emblica officinalis) and
its removal from electroplating wastewater.(2011) Desalination. 277:390-398

Rashid, A., Bhatti, H., Iqbal, M. & Noreen, S. (2016). Fungal biomass composite with
bentonite efficiency for nickel and zinc adsorption: A mechanistic study. Ecological
Engineering, 91, pp.459-471.

Razmovski, R., & Šćiban, M. (2008). Biosorption of Cr(VI) and Cu(II) by waste tea fungal
biomass. Ecological Engineering, 34(2), 179-186.
https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2008.07.020

Ruggiero, M., Gordon, D., Orrell, T., Bailly, N., Bourgoin, T., Brusca, R., Cavalier-Smith, T.,
Guiry, M. and Kirk, P. (2015). A Higher Level Classification of All Living Organisms.
PLOS ONE, 10(4), pe 0119248.

78
Sağ, Y., & Kutsal, T. (1996). The selective biosorption of chromium(VI) and copper(II) ions
from binary metal mixtures by R. arrhizus. Process Biochemistry, 31(6), 561-572.
https://doi.org/10.1016/s0032-9592(95)00100-x

Samson, R.A., Houbraken, J., Thrane, U., Frisvad, J.C., Andersen, B., (2010). Food and
Indoor Fungi. CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre, Utrecht, The Netherland.

Sánchez, J., Marrugo, J., & Urango, I. (2014). Biosorción simultanea de plomo y cadmio en
solución acuosa por biomasa de hongos penicillium sp. Temas Agrarios, 19(1), 63.
https://doi.org/10.21897/rta.v19i1.725

Smith, D. Onions, A.H.S. (1994). IMI Technical Handbooks No. 2. The Preservation and
Maintenance of Living Fungi, 2nd edn. CABI Publishing, Wallingford.

Sri Lakshmi Ramya Krishna Kanamarlapudi, Vinay Kumar Chintalpudi and Sudhamani
Muddada. (2018) Application of Biosorption for Removal of Heavy Metals from
Wastewater, Biosorption, Jan Derco and Branislav Vrana, IntechOpen, DOI:
10.5772/intechopen.77315.

Svecova, L., Spanelova, M., Kubal, M. and Guibal, E. (2006). Cadmium, lead and mercury
biosorption on waste fungal biomass issued from fermentation industry. I. Equilibrium
studies. Separation and Purification Technology, 52(1), pp.142-153.

Tigini V, Prigione V, Anastasi A, Vaglio M, Varese G. (2010) In scale-up of biosorption

process for the textile wastewaters treatment using a selected fungal biomass. In: 22nd
IFATCC International Congress, AICTC. p. A09

Tsezos M, Noh S, Baird M. (1988) A batch reactor mass transfer kinetic model for
immobilized biomass biosorption. Biotechnology and Bioengineering.32:545-553

Tsezos M, Remoundaki E, Hatzikioseyian A. (2006) Biosorption-principles and applications

for metal immobilization from waste-water streams. In: Proceedings of EU-Asia
Workshop on Clean Production and Nanotechnologies; Seoul; pp. 23-33

Ullah I, Nadeem R, Iqbal M, Manzoor Q. (2013) Biosorption of chromium onto native and
immobilized sugarcane bagasse waste biomass. Ecological Engineering. 60:99-107

Valdivieso Ugarte, M. (2006). Obtención y caracterización de cepas de Saccharomyces

cerevisiae superproductoras de glutation (Tesis de Doctorado). Universidad de
Granada, España.

79
Vardhan, K., Kumar, P., & Panda, R. (2019). A review on heavy metal pollution, toxicity and
remedial measures: Current trends and future perspectives. Journal Of Molecular
Liquids, 290, 111197. https://doi.org/10.1016/j.molliq.2019.111197

Verma, A., Shalu, Singh, A., Bishnoi, N., & Gupta, A. (2013). (2013) Biosorption of Cu (II)
using free and immobilized biomass of Penicillium citrinum. Ecological
Engineering, 61, 486-490. https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2010.008

Vianna, L., Andrade, M., & Nicoli, J. (2000). Screening of waste biomass from
Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus oryzae and Bacillus lentus fermentations for
removal of Cu, Zn and Cd by biosorption. World Journal Of Microbiology And
Biotechnology, 16(5), 437-440. https://doi.org/10.1023/a:1008953922144

Vieira RH, Volesky B. (2000) Biosorption: A solution to pollution? International

Microbiology. 3:17-24
Vijayaraghavan K, Teo TT, Balasubramanian R, Joshi UM. (2009) Application of sargassum
biomass to remove heavy metal ions from synthetic multi-metal solutions and urban
storm water runoff. Journal of Hazardous Materials. 164:1019-1023

Vijayaraghavan, K. and Yun, Y. (2008). Bacterial biosorbents and biosorption. Biotechnology

Advances, 26(3), pp.266-291.

Vijayaraghavan, K., & Balasubramanian, R. (2015). Is biosorption suitable for

decontamination of metal-bearing wastewaters? A critical review on the state-of-the-
art of biosorption processes and future directions. Journal Of Environmental
Management, 160, 283-296. doi: 10.1016/j.jenvman.2015.06.030
Visagie, C.M., Houbraken, J., Frisvad, J.C., Hong, S.-B.B., Klaassen, C.H.W.W., Perrone, G.,
Seifert, K.A., Varga, J., Yaguchi, T., Samson, R.A., (2014). Identification and
nomenclature of the genus Penicillium. Stud. Mycol, 78, pp. 343–371.

Volesky B, Naja G. (2005) Biosorption: Application strategies. In: 16th International

Biohydrometallurgy Symposium; pp. 25-29

Volesky B. Equilibrium biosorption performance. (2003) Sorption and biosorption.

St.Lambert, Quebec: BV-Sorbex, Inc.; pp. 103–116.

Wang, J. & Chen, C. (2009) Biosorbents for heavy metals removal and their future.
Biotechnology Advances 27, 195–226.

80
Wang, J., & Chen, C. (2006). Biosorption of heavy metals by Saccharomyces cerevisiae: A
review. Biotechnology Advances, 24(5), 427-451.
https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2006.03.00

Wickerham, L. (1951). Taxonomy of Yeasts. United States Department Of Agriculture,

Washington, D. C., (1029), 13-14 EPA de EE. UU. 2007. "Método 3015A (SW-846):
digestión ácida asistida por microondas de muestras y extractos acuosos", Revisión 1.
Washington, DC
Yan, G. & Viraraghavan, T. (2003) Heavy-metal removal from aqueous solution by fungus
Mucor rouxii. Water Research 37, 4486–4496.

Yang, Y., Jin, D., Wang, G., Liu, D., Jia, X. and Zhao, Y. (2011). Biosorption of Acid Blue
25 by unmodified and CPC-modified biomass of Penicillium YW01: Kinetic study,
equilibrium isotherm and FTIR analysis. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces,
88(1), pp.521-526.

Yin, Y., Wang, J., Yang, X. and Li, W. (2017). Removal of Strontium Ions by Immobilized
Saccharomyces Cerevisiae in Magnetic Chitosan Microspheres. Nuclear Engineering
and Technology, 49(1), pp.172-177.

Zapana Huarache, S. (2018). Biorremediación de efluentes de curtiembres mediante hongos

aislados del parque industrial de rio seco (PIRS) – Arequipa, en condiciones de
biorreactor tipo airlift. (Tesis de grado). Universidad Nacional De San Agustín De
Arequipa, Arequipa.

Zhang, Y., Wei, D., Huang, R., Yang, M., Zhang, S., Dou, X., Wang, D. and Vimonses, V.
(2011). Binding mechanisms and QSAR modeling of aromatic pollutant biosorption
on Penicillium oxalicum biomass. Chemical Engineering Journal, 166(2), pp.624-630.

Zouboulis AI, Lazaridis NK, Matis KA. Removal of toxic metal ions from aqueous systems
by biosorptive flotation. (2002) Journal of Chemical Technology and Biotechnology.
77:958-964

81
CAPÍTULO VIII

ANEXOS

82
 ANEXO I

MEDIOS Y SOLUCIONES PARA EL AISLAMIENTO Y PRODUCCIÓN DE

Saccharomyces cerevisiae

1.1. SOLUCIÓN DE RAULIN

Estela scalante., (2016)

Peptona 5.0 g.L-1
NaCl 8.5 g.L-1
Na2HPO4.12H2O 9.0 g.L-1
KH2PO4 1.5 g.L-1
Agua destilada, pH a 7.2

1.2. AGAR/CALDO DEXTROSA SABOURAUD

Estela scalante., (2016)

Dextrosa 40.0 g.L-1
Peptona 10.0 g.L-1
Agar-agar* 15.0 g.L-1
Agua destilada, pH a 5.6
*No agregar en el caso del caldo
1.3. CALDO/AGAR SABOURAUD CON NA2S205

Estela scalante., (2016)

Dextrosa 40.0 g.L-1
Peptona 10.0 g.L-1
Agar-agar* 15.0 g.L-1
Na2S205 0.4 g.L-1
Agua destilada, pH a 5.6
*No agregar en el caso del caldo
*Dejar reposar por 8 horas antes de usar
1.4. AGAR/CALDO YPD

(Fajardo Castillo and Sarmiento Forero, 2007)

Extracto de levadura 10.0 g.L-1
Peptona 20.0 g.L-1
Dextrosa 20.0 g.L-1
Agar-agar* 15.0 g.L-1
Agua destilada, pH a 5.6
*No agregar en el caso del caldo

83
 ANEXO II
MEDIOS Y SOLUCIONES PARA LA PRODUCCIÓN DE Penicillium hordei
2.1. PREPARACIÓN DEL TWEEN 80
Preparar una solución de Tween 80 al 0.1% como sigue: De la formulación comercial,
hacer una dilución al 10%. Tomar 10 mL de Tween 80 y agregar 90 mL de agua
destilada. Esta solución se puede mantener en stock en refrigeración (10° C). Para la
preparación del Tween al 0.1%, tomar 1 mL de la solución al 10% y agregar 99 mL de
agua destilada. Esta solución se esteriliza en la autoclave a 15 libras de presión durante
20 minutos.
2.2. PREPARACIÓN DE LA SUSPENSIÓN DE ESPORAS
Se siembra 10 tubos de ensayo de 15 mL conteniendo 8 mL de Agar Sabouraud
inclinado a 25°C por 7 días. Con una punta esterilizada se agrega a cada tubo 2 mL de
solución Tween al 0.1%, con la ayuda de un asa estéril se empieza a raspar la
superficie haciendo que se desprendan la mayor cantidad de esporas y se homogeniza.
2.3. MEDIO PARA LA PRODUCCIÓN DE Penicillium hordei

Medio de cultivo Fan et al./ Journal of Hazardous Materials

(2008)
Dextrosa 20 g.L-1
Peptona 10 g.L-1
Cloruro de Sodio NaCl 0.2 g.L-1
Cloruro de Calcio CaCl2 0.1 g.L-1
Cloruro de potasio KCl 0.1 g.L-1
Fosfato dipotásico K2HPO4 0.5 g.L-1
Bicarbonato de sodio NaHCO3 0.05 g.L-1
Sulfato de magnesio MgSO4 0.25 g.L-1
Sulfato de hierro pentahidratado FeSO4.7H2O 0.005 g.L-1

84
 ANEXO III
MEDIO DE PRUEBA DE FERMENTACIÓN
(WICKERHAM, 1951)
Extracto de levadura 4.5 g.L-1
Peptona 7.5 g.L-1
Azúcar* 60.0 g.L-1
Azul de bromotimol**
Agua destilada, pH a 5.25
*autoclavar por separado del medio
**agregar una vez se haya ajustado el pH

85
 ANEXO IV
SOLUCIONES Y MEDIOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE Penicillium hordei

4.1. MEDIOS DE CULTIVO

Se le añadió sulfato de cobre y sulfato de zinc para asegurar un adecuado desarrollo de

la pigmentación verde del color conidial en las especies aisladas. (Smith, 1949;
Filtenborg et al.,1990). Todos los porcentajes están en peso/volumen.

Czapek – Dox (Cz) agar (Raper and Thom, 1949)

NaNo3 0.3%
Sacarosa 3.0%
K2HPO4.3H2O 0.13%
MgSO4·7H2O 0.05%
FeSO4·7H2O 0.001%
KCl 0.05%
CuSO4·5H2O 0.0005%
ZnSO4·7H2O 0.001%
Agar 1.5%
Agua destilada, pH final 6.3 + 0.2

Czapek Yeast Autolysate (CYA) agar (Pitt ,1979)

NaNo3 0.3 %
Extracto de levadura (Difco) 0.5 %
Sacarosa 3.0 %
K2HPO4.3H2O 0.13 %
MgSO4·7H2O 0.05 %
FeSO4·7H2O 0.001 %
KCl 0.05 %
CuSO4·5H2O 0.0005 %
ZnSO4·7H2O 0.001%
Agar 1.5%
Agua destilada, ph final 6.3 + 0.2

Blakeslee Malt Extract Autolysate agar (MEA)

(Raper and Thom, 1949)
Extracto de Malta 3.0%
Peptona bacteriológica 0.1%
Glucosa 2.0%
CuSO4·5H2O 0.0005%
ZnSO4·7H2O 0.001%
Agar 2.0%
Agua destilada, ph 5.3 + 0.3

Yeast extract sucrose (YES) agar (Frisvad, 1981;

86
 Filtenborg et al., 1990)
Extracto de levadura 2.0%
Sacarosa 15%
MgSO4·7H2O 0.05%
CuSO4·5H2O 0.0005%
ZnSO4·7H2O 0.001%
Agar 2%
Agua destilada

Creatina sucrosa (CREA) agar (Frisvad, 1981, 1985,

1993)
Creatina – 1H20 0.3%
Sacarosa 3%
K3PO4·7H2O 0.16%
MgSO4·7H2O 0.05%
KCl 0.05%
FeSO4·7H2O 0.001%
CuSO4·5H2O 0.0005%
ZnSO4·7H2O 0.001%
Púrpura de bromocresol 0.005%
Agar 1.5%
Agua destilada, ph ajustado a 8 + 0.25

4.2. PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE EHRLICH

Pesar 2 gramos de 4-dimetilaminobenzaldehído en etanol al 96% (85mL) y añadir 15
mL de HCL 10N. Disolver 2 gramos de 4-dimetilaminobenzaldehído en 85 mL de
etanol al 96%. Una vez disuelto, ir agregando poco a poco y con mucho cuidado 15
mL de HCL 10N. Mezclar la solución 1 minuto. Dispensar la solución en frasco
ámbar. Etiquetar la solución con los siguientes datos: nombre del reactivo, fecha de
preparación, nombre de la persona que la preparó y fecha de caducidad. Almacenar a
temperatura ambiente.

ANEXO V

87
RESULTADOS DE LA CARACTERIZACIÓN DEL EFLUENTE MINERO

88
89
 ANEXO VI
CÓDIGO DE COLOROES SEGÚN METHUEN ‘‘HANDBOOK OF COLOUR’’
(KORNERUP AND WANSCHER, 1978)

Izquierda (10A8): rojo alto o rojo vivo o rojo primario o señal rojo o rojo; Medio (10B8) -
Grosella roja o blanca rojiza o cereza (roja); Derecha (10C8): rojo pardusco o rojo sangre o
rojo bronce o rojo oriental o rojo pavo o rojo turco.

Izquierda (4A8): amarillo anaranjado o amarillo rojizo o naranja amarillento o amarillo

profundo o amarillo cadmio (profundo) o amarillo llama o amarillo azafrán. Medio (4B8) -
Yema amarilla. Derecha (4C8): amarillo oscuro o amarillo curry.

(27D8) - Verde profundo; (27D7) - Verde pavo real; (27D5) - Verde grisáceo; (27D4) -
Verde de Grecia o Español Verde o Verdigris; (27D3) - Verde opaco; (27D2) - Gris
verdoso; (27E5) - Jade Green; (27F8) - Verde oscuro; (27F3) - Níquel verde.

90
Izquierda (24D8) - Turquesa profundo; Medio (24E8): azul océano o azul marino; Derecha
(24F8) - Turquesa oscuro.

(27A8) - Verde o verde vivo o verde primario; (27A5) - Verde claro; 27A4 Verde Pastel;
(27A3) - verde pálido / (2A8) - Amarillo vivo o amarillo o amarillo de cadmio (claro) o
amarillo cromo o primavera o amarillo primario; (2A5) - Amarillo claro o Sol amarillo o
Sol; (2A4) - Amarillo pastel; (2A3) - Amarillo pálido, Amarillo pálido, Blanco
amarillento.

91
 ANEXO VII
RESULTADOS DE LOS ENSAYOS DE BIOSORCIÓN DE Cd TOTAL

7.1. RESULTADOS DE LOS TRATAMIENTOS DE BIOSORCIÓN DE Cd TOTAL

Tratamient Promedi
pH Dosis (g) Tipo % [Cd] final (ppm)
o o
1 2.5 0.05 15.99% 16.63% 16% 1.45
2 4.5 0.05 19.35% 18.71% 19% 1.39
Pencillium sp
3 2.5 0.1 17.27% 17.91% 18% 1.42
4 4.5 0.1 20.00% 20.01% 20% 1.38
5 2.5 0.05 14.71% 15.03% 15% 1.47
6 4.5 0.05 Saccharomyce 21.84% 21.84% 22% 1.34
7 2.5 0.1 s sp 16.63% 16.63% 17% 1.44
8 4.5 0.1 28.00% 25.00% 27% 1.26

7.2. BLANCOS DE LOS ENSAYOS DE BIOSORCIÓN DE Cd TOTAL

pH [Cd ppm] [Cd ppml] Promedio

B1 2.5 1.73 1.73 1.73
B2 4.5 1.72 1.72 1.72

7.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para el análisis estadístico del diseño factorial con 3 variables independientes, 2
niveles y una repetición, se utilizaron los programas IBM SPSS Statistics y Minitab
19.

7.3.1. ANÁLISIS DE VARIANZA (ANOVA FACTORIAL)

Análisis de Varianza de tres factores para determinar la influencia del pH de muestra,
dosis y tipo de biosorbente en el porcentaje de remoción de cadmio.

H0: La media de la variable o interacción en cada grupo es la misma.

H1: La media de la variable o interacción en cada grupo es distinta.

92
Las tres variables individuales tienen efecto sobre la variable respuesta; sin embargo, no
algunas interacciones como la interacciòn pH*Dosis y pH*Dosis*Tipo.

ELIMINANDO PH*DOSIS Y PH*DOSIS*TIPO.

Se observa que la interacción Dosis*Tipo no tiene influencia sobre la variable respuesta.

93
ANOVA FINAL (ELIMINANDO DOSIS*TIPO)

Según el ANOVA FINAL, hay influencia significativa de las 3 variables y de la

interacción pH*Tipo

7.3.2. ANÁLISIS POST-HOC

Se realizaron los análisis Post – Hoc de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo uso del
software IBM SPSS Statistics 25.

Análisis Univariado de Varianza para Remoción de Cadmio por Tratamiento

Se puede observar que existe diferencias significativas entre los tratamientos.

94
PRUEBAS POST HOC POR TRATAMIENTO

Se observa que según las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe, el mejor
tratamiento corresponde al tratamiento 8.

95
 ANEXO VIII
RESULTADOS DE LOS ENSAYOS DE BIOSORCIÓN DE Cu TOTAL
8.1. RESULTADOS DE LOS TRATAMIENTOS DE BIOSORCIÓN DE COBRE
TOTAL
Tratamie Dosis Promed [Cu ppm]
pH Tipo %
nto (g) io final
1 10
2.5 0.05 11% 11% 37.77
%
2 16
4.5 0.05 14% 15% 30.23
Pencillium %
3 sp 16
2.5 0.1 14% 15% 36.07
%
4 17
4.5 0.1 18% 17% 29.51
%
5 13
2.5 0.05 13% 13% 36.92
%
6 21
4.5 0.05 21% 21% 28.09
Saccharomy %
7 ces sp 27
2.5 0.1 24% 26% 31.41
%
8 31
4.5 0.1 31% 31% 24.54
%

8.2. BLANCOS DE LOS ENSAYOS DE DE BIOSORCIÓN DE COBRE TOTAL

pH [Cu total] [Cu total] Promedio

B1 2.5 42.44 42.44 42.44

B2 4.5 35.56 35.56 35.56

8.3 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para el análisis estadístico del diseño factorial con 3 variables independientes, 2
niveles y una repetición, se utilizaron los programas IBM SPSS Statistics y Minitab
19.

8.3.1 ANÁLISIS DE VARIANZA (ANOVA FACTORIAL)

Análisis de Varianza de tres factores para determinar la influencia del pH de muestra,
dosis y tipo de biosorbente en el porcentaje de remoción de cobre

H0: La media de la variable o interacción en cada grupo es la misma.

H1: La media de la variable o interacción en cada grupo es distinta.

96
Las tres variables individuales tienen efecto sobre la variable respuesta; sin embargo, no
algunas interacciones, tales como pH*Dosis y pH*Dosis*Tipo.

Eliminando PH*DOSIS Y PH*DOSIS*TIPO

Según el ANOVA, las tres variables tienen influencia significativa, al igual que las
interacciones pH*Tipo y Dosis*Tipo.

97
8.3.2 ANÁLISIS POST-HOC

Se realizaron los análisis Post – Hoc de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo uso del
software IBM SPSS Statistics 25.

Analisis Univariado de Varianza para Remoción de Cobre por Tratamiento

Se puede observar que existe diferencias significativas entre los tratamientos.

PRUEBAS POST HOC POR TRATAMIENTO

98
Se observa que según las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe, el mejor tratamiento
corresponde al tratamiento 8.

99
 ANEXO IX
RESULTADOS DE LOS ENSAYOS DE BIOSORCIÓN DE Pb TOTAL
9.1. RESULTADOS DE LOS TRATAMIENTOS DE BIOSORCIÓN DE PLOMO
TOTAL
Tratamient
pH Dosis (g) Tipo % Promedio [Pb ppm] final
o
1 2.5 0.05 43% 44% 44% 0.63
2 4.5 0.05 52% 52% 52% 0.47
Pencillium sp
3 2.5 0.1 57% 58% 58% 0.47
4 4.5 0.1 76% 75% 76% 0.24
5 2.5 0.05 48% 47% 48% 0.58
6 4.5 0.05 Saccharomyces 63% 64% 63% 0.36
7 2.5 0.1 sp 69% 70% 70% 0.34
8 4.5 0.1 84% 85% 85% 0.15

9.2. BLANCOS DE LOS ENSAYOS DE BIOSORCIÓN DE PLOMO TOTAL

pH [Pb ppm] [Pb ppm] Promedio

B1 2.5 1.12 1.12 1.12

B2 4.5 0.98 0.98 0.98

9.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para el análisis estadístico del diseño factorial con 3 variables independientes, 2

niveles y una repetición, se utilizaron los programas IBM SPSS Statistics y Minitab
19.

9.3.1 ANÁLISIS DE VARIANZA (ANOVA FACTORIAL)

Análisis de Varianza de tres factores para determinar la influencia del pH de muestra,
dosis y tipo de biosorbente en el porcentaje de remoción de plomo.
H0: La media de la variable o interacción en cada grupo es la misma.
H1: La media de la variable o interacción en cada grupo es distinta.

100
Las tres variables individuales y sus interacciones tienen efecto sobre la variable respuesta.

9.3.2 ANÁLISIS POST-HOC

Se realizaron los análisis Post – Hoc de Tukey HSD, Duncan y Scheffe haciendo uso del
software IBM SPSS Statistics 25.

Analisis Univariado de Varianza para Remoción de Cobre por Tratamiento

Se puede observar que existe diferencias significativas entre los tratamientos.

101
 PRUEBAS POST HOC POR TRATAMIENTO

Se observa que según las pruebas de Tukey HSD, Duncan y Scheffe, el mejor tratamiento
corresponde al tratamiento 8.

102
 ANEXO X
REGISTRO FOTOGRÁFICO

Fotografía N°2: Preparación del

Fotografía N°1: Aislamiento y
microcultivo para la identificación del
conservación de Penicillium sp
Penicillium sp

Fotografía N°3: Coloración con azul de

metileno para la observación en Fotografía N°4: Saccharomyces sp
microscopio para la identificación del aisladas en tubo inclinado de agar YPD
Penicillium sp

103
Fotografía N°5: Vista microscópica de Fotografía N°6: Prueba de
Saccharomyces sp a 40X en fermentación de la especie
microscopio óptico Saccharomyces sp con indicador

Fotografía N°7: Incubadora rotatoria Fotografía N°8: Producción de los

modelo LABSI-100A marca JSR microorganismos en la incubadora

104
 Fotografía N°10: Saccharomyces
Fotografía N°9: Producción de
cerevisiae en tubos Falcon luego de ser
Saccharomyces cerevisiae en medio YPD
centrifugada y separada del medio de
después de 24 horas
cultivo

Fotografía N°11: Saccharomyces cerevisiae Fotografía N°12: Tamiz N°70 usado

molida en el mortero para ambos microorganismos

105
Fotografía N°13: Pellets de Penicillium sp Fotografía N°14: Pesado del polvo de
en la etapa de producción biomasa

Fotografía N°15: Pellets de Penicillium sp Fotografía N°16: Penicillium sp molido

siendo tamizados y tamizado

106
 Fotografía N°18: Medición del pH del
Fotografía N°17: Muestreo del efluente
efluente

Fotografía N°20: Bocamina del

Fotografía N°19: Efluente minero
efluente minero

107
 Fotografía N°22: Matraces con efluente
Fotografía N°21: Efluente de mina a
de mina ajustado el pH y con biomasa
pH 1.90 preservado con HNO3
para ensayos de biosorción

Fotografía N°23: Matraces en Fotografía N°24:Filtracion de las

incubadora rotatorio para ensayos a muestras posterior a los ensayos de
30°C y 150 rpm biosorción

108
 Fotografía N°26: Tubos de ensayo
Fotografía N°25: Digestor de
donde se colocan las muestras a
microondas Ethos-UP Milestone
digestar

Fotografía N°28: Espectrómetro de

Fotografía N°27: Gráfica de la
Masas con Plasma Acoplado
digestión Tiempo vs
Inductivamente (ICP-MS) Thermo
Temperatura/Presión en el digestor
Fisher Scientific

109