Guía Biomol Tercer parcial

Práctica 10 Sistema CRISPR/Cas9

Sistema en donde una enzima “endonucleasa” llamada Cas 9, se une con diferentes
secuencias a un ARNm donde existen diferentes fragmentos: hace cortes
específicos dentro del ADN para editarlo. Quitar e insertar secuencias “mutaciones”.

Tecnología CRISPR/Cas9: herramienta molecular utilizada para “editar” o “corregir”

el genoma de cualquier célula.

Tijeras moleculares que son capaces de cortar cualquier molécula de ADN

haciéndolo de manera precisa y controlada. Esa capacidad le permite cortar el ADN
para modificar su secuencia, eliminar o insertar nuevo ADN.

Las siglas CRISPR/Cas9 provienen de Clustered Regularly Interspaced Short

Palindromic Repeats “repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente
interespaciales”. Cas 9: endonucleasa.

1987 → publicación de artículo→ Descripción de bacterias “Streptococcus pyogenes”

se defienden de infecciones víricas.

La bacteria tienen una enzima que son capaces de distinguir entre el material
genético de la bacteria y la del virus, cuando se distingue, destruye el material
genético del virus.

Zonas determinadas del genos: arqueas → llenas de repeticiones palindrómicas

“se leen igual al derecho y al revés”, sin ninguna función aparente.

Las repeticiones estaban separadas entre sí mediante unas secuencias

denominadas “espaciadores”, que se parecían a otras de virus y plásmidos.
adelante de esas repeticiones hay una secuencia “lider” (se llamó CRISPR)

Las proteínas Cas son capaces de tomar una pequeña parte del ADN viral,
modificarlo e integrarlo dentro del conjunto de secuencias CRISPR. Si la bacteria (o
su descendencia) se encuentra con ese mismo virus, ahora activará de forma
mucho más eficiente al material genético viral “sistema inmune de bacterias”.

Está regulado por un mecanismo:

● Adaptación
● Expresión procesamiento de crARN
 ● Interferencia

Agrupación CRISPR: cadena de repetición, “adaptación” secuencia del genoma

vírico, repetición y secuencia de otro virus incorporado. Pequeñas secuencias de
repeticiones o vírica= espaciadores

Expresión: ARNprecr → maduración → ARNcr “tiene la secuencia o el complejo

efector “las reconoce (en el citoplasma) y las corta cuando las identifica”

Interferencia: Si llega un fago y lee la secuencia y reconoce el daño corta esos

sitios y fragmenta el ADN para que la bacteria no se dañe.

Esa observación biológica se convirtió en una herramienta molecular útil en el

laboratorio en el 2012. Emmanuelle Charpentier (universidad de Umea) y Jennifer
Doudna (U, California de Berkeley)publicaron un artículo en la revista “Science”:
demostraba cómo convertir es máquina natural en una herramienta de edición
(programable). “servía para cortar cualquier cadena de ADN in vitro”, lograban
programar el sistema para una posición específica de un ADN cualquiera (no solo
vírico) y lo cortaran.

Diseño de molécula de ARN (CRISPR o ARN guía) → Se inserta en la célula →

Reconoce el sitio exacto del genoma → Enzima Cas9 corta.

El proceso de edición incluye dos etapas:

● El ARN guía se asocia con la enzima Cas9. es específico de una secuencia

concreta del ADN. “Por las reglas de complementariedad de nucleótidos se
hibridará en esa secuencia “la que se necesita editar o corregir”.
● Cas9 (endonucleasa “proteína que es capaz de romper un enlace”), corta el
ADN. ARN guía lleva a Cas9 al sitio de corte.

CRISPR-Cas9: Tecnología única que permite a genetistas e investigadores editar

partes del genoma, por eliminación, adición o alteración de secciones de la
secuencia del ADN.

Componentes del sistema CRISPR-Cas

● Ácido nucleico DIANA (ADN, ARN o ambos)

● Proteína Cas 9 Genes CAS CRISPR “Associated System Codifican para
Nucleasas”
 ● Motivos PAM “protospacer adjacent morif”, secuencias específicas de 3
nucleótidos.Si el ARN guía coincide con la secuencia de ADN junto a el PAM,
este “ARN” se unirá a la hebra de ADN complementaria.

Resumen del video:

Son secuencias de ADN cortas : de 23-55 pb de largo

Secuencias palindrómicas: se leen de la misma manera en ambos sentidos.

Las secuencias se encuentran repetidas en una región genómica y agrupadas. Se

encuentran interespaciados por otras secuencias (regiones pertenecientes a
bacteriofagos) “secuencias espaciadoras”.

La inmunidad CRISPR requiere genes asociados a CRISPR o genes cas (CRISPR

Associated), o genes transcrARN.

Ambas secuencias (repetidas y espaciadoras) se transcriben en un solo ARN, como

son palindrómicas formarán nubs en el transcrito “pre-CrARN” → se trancribirán

tracrARN “transactivadores” → van al pre-CrARN “maduración” → Ribonucleasa 3,

separa la secuencia y crean CrARN madura → Uno de los genes Cas se va a

transcribir y traducir en una enzima Cas tipo II → formará un complejo con el ARN =

Cas9 → forma el Complejo CRISPR/Cas9.

Infección por bacteriofago → Secuencia espaciadora → el mecanismo CRISPR: crea

un complejo CRISPR/Cas9 con la secuencia del bacteriofago y la afinidad
interactúan con el complejo. La secuencia viral tiene una secuencia PAM en la
secuencia 3’ (secuencias del material genético viral y el CRISPR/Cas debe
reconocer para realizar su función). CRISPR/Cas9 la secuencia más común es por
un nucleótido seguido por dos Guaninas: si se encuentra, el complejo comenzará a
separará la hebra bicatenaria y la enzima Cas9 cortará el material viral e
inactivando: Interferencia de CRISP tipo II.

Adaptación por CRISPR “Virus desconocido”: “Su material genético no se

encuentra en ninguna secuencia separadora”. Se expresan cas1-cas2 - interacciona
con el material desconocido y hará una secuencia espaciadora e incorporará dentro
del genoma bacteriano.

Sistema crispr/CPF1: La proteína solo requiere de un ARN CRISPR y no necesita

de un ARN transactivador “sistema simple”. secuencia PAM: extremo 5’ Tres
timinas seguido de cualquier nucleótido.

● Cas9: extremos romos (corta : un nucleótido seguido de dos guaninas)

● Cpf1: extremos pegajosos “cohesivo” (corta: un nucleótido seguido de tres
timinas)

La edición genética en el tratamiento de enfermedades tiene distintas implicaciones

dependiendo del tipo de célula que modifica. Se debe diferenciar primordialmente
entre células somáticas (todas las células del cuerpo: piel, hígado o pulmón), y
germinales (óvulos y espermatozoides)

● Modificaciones al ADN de células somáticas: sólo afectarán al paciente.

● Modificaciones al ADN en células germinales: pueden ser transmitido a
futuras generaciones.

Función de MYBPC3: mantener estructura del miocardio y regular su contracción y

relajación

Mutación del gen MYBPC3: codifica la proteína de unión a la miosina cardiaca.

“fallo en el miocardio, función en contracción y relajación no fisiológico” Se utiliza la
técnica CRISPR/Cas9, permite corregir mutaciones en embriones humanos
cultivados in vitro. Introducción o implementación de ARN guía y Cas9 para iniciar
con el proceso.

CRISPR/Cas en cultivos: Desarrollo de plantas o mejoras de plantas, El Cs es

radiactivo y viaja al interior de la célula por medio de canales, por medio de esta
técnica se eliminó la proteína que transporta el Cs radiactivo.

Práctica 11. Bioinformática

El término informática se refiere al tratamiento de la información, y a los métodos y

mecanismos para hacerlos. La informática médica se define como el campo
científico que tiene que ver con la información, los datos y el conocimiento
biomédico, su almacenamiento, recuperación y su uso óptimo para resolver
problemas y tomar decisiones.
Las enfermedades monogénicas se conocen también como enfermedades
hereditarias mendelianas “se produce por alteración de un solo gen”. Este tipo de
enfermedades se pueden clasificar según su patrón hereditario.

● Autosómica dominante: La alteración se da en una única copia del gen (de

las dos que se heredan de los progenitores) para provocar el trastorno.
Autosómica recesiva: Es necesario que ambas copias o alelos del gen
estén afectados.
● Herencia ligada al cromosoma X: Generalmente dominante para los
varones y recesiva para las mujeres (suelen ser portadoras del gen pero rara
vez se ven afectadas).
● Herencia ligada al cromosoma Y (holoándrica): Únicamente se manifiesta
en varones y se hereda siempre del padre.

Práctica 12 Genética en poblaciones

Algunas definiciones para tener el mismo idioma:

● Genotipo
● Fenotipo
● Ambiente

Poblaciones: Unidad de los procesos evolutivos no son los individuos sino las
poblaciones. Entidades supraindividuales que tienen continuidad biológica de
generación en generación y en su seno se producen los cambios
transgeneracionales que constituyen la evolución.

Población mendeliana: Unidad estructural de la evolución, sistema integrado de

organismos de la misma especie que se reproducen entre sí de manera “bisexual” y
entre los cuales la transmisión hereditaria es mendeliana.

Genética de poblaciones: Estudia la organización de la variación hereditaria en

grandes grupos de organismos, determinando estadísticamente las propiedades
genéticas de esos grupos, y los cambios de esas propiedades en el tiempo y en el
espacio.

Concepto fundamental de la genética de poblaciones:

● Reservorio génico
● Panmixia
● Frecuencias genotípicas
● Frecuencias alélicas

La genética de poblaciones es la subdisciplina de la genética que estudia procesos

regidos por leyes propias del nivel de organización poblacional.
Reservorio génico: info hereditaria contenida en la suma de los individuos que
constituyen la población.

Panmixia: Intercambio reproductivo en el cual cada individuo de un sexo se aparea

con el del sexo opuesto sin ninguna preferencia fenotípica o genotípica.

Frecuencia génica: Frecuencia génica o alélica consiste en la proporción de cada

alelo en un locus dado en una población específica. La suma de las frecuencias
alélicas en una población siempre es 1 (o 100%)

La frecuencia génica es la característica de interés en cuanto a la transmisión de los

genes en una población. En lo que respecta a los patrones de herencia de los
individuos, es de importancia la frecuencia genotípica, relacionada
matemáticamente con la frecuencia génica.

La frecuencia alélica se refiere a que tan común es un alelo en una población. Esto
se determina contando cuantas veces aparece un alelo en la población y dividiendo
esta cifra entre el número total de copias del gen.

𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑝𝑖𝑎𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑎𝑙𝑒𝑙𝑜 𝐴 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑜𝑏𝑙𝑎𝑐𝑖 ó𝑛

Frecuencia del alelo A= 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑝𝑖𝑎𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑔𝑒𝑛 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑜𝑏𝑙𝑎𝑐𝑖 ó𝑛

Los cambios en las frecuencias alélicas en generaciones sucesivas implican

que ha ocurrido evolución. (en largos periodos)

Los resultados del análisis de la frecuencia génica se expresan en proporciones,

por lo que la suma de las frecuencias de los alelos estudiados para el locus es igual
a uno: p (dominante) +q (recesivo)=1

Genética poblacional: Estudia la distribución de los genes en las poblaciones, y la

manera en que las frecuencias génicas y genotípicas cambian o se mantienen
constantes. Factores ambientales y factores genéticos se utilizan para evaluarlos.

Genética de poblaciones: objetivo específico es entender la relación entre dos

variables:
● Frecuencia génica: número de genes de una categoría sobre el número total
de genes en un locus dado.
● Frecuencias genotípicas: es el número de individuos de un genotipo sobre
el número total de individuos de la población.

Ley de Hardy Weinberg (1908) : Geffrey Hardy (matemático inglés) y Wilhelm

Weinmberg (médico alemán). Los genotipos generados por 2 o más alelos de un
locus, se distribuye en las poblaciones, en correspondencia con sus frecuencias, las
frecuencias de los alelos como las frecuencias de los genotipos generados por
estos, se mantienen constantes de generación en generación.

La ley de Hardy Weinberg constituye la piedra angular de la Genética poblacional.

La ley anuncia que los genotipos generados por dos o más alelos de un locus, se
distribuyen en las poblaciones, en correspondencia con sus frecuencias, y que tanto
las frecuencias de los alelos como las frecuencias de los genotipos generados por
estos, se mantienen constantes de generación en generación.

El equilibrio se mantiene:

● En poblaciones muy grandes

● Que se caractericen porque los matrimonios sean al azar
● Donde la tasa de mutaciones sea constante
● Y no existan factores de selección, ni de migración

Las frecuencias génicas o alélicas pueden calcularse a partir de las frecuencias

genotípicas, pero no se puede hacer al revés.

La ley de H-W afirma el equilibrio de la población genética cuando se cumplen las

condiciones de panmixia, tamaño de la población y ausencia de migración, mutación
y selección.

En condiciones anteriores, las frecuencias genotípicas de la descendencia

dependen sólo de las frecuencias génicas de la generación parental.

Si se altera el equilibrio en una población y volviera a restablecerse las condiciones

de H-W, el equilibrio se alcanzaría en la sig generación (aunque con nuevas
frecuencias génicas y genotípicas).

Permite calcular frecuencias de alelos (pyq), o frecuencias de genotipos (p2 +2pq

+q2) para poblaciones idealizadas (sin migraciones)

Permite comparar frecuencias de poblaciones observadas e idealizadas con la

prueba de Chi cuadrado.

Frecuencia fenotípica: número de individuos que expresan una cualidad del

fenotipo en estudio, en relación con el total de individuos de la población en
porcentaje.

Número de individuos con un determinado fenotipo

FF= 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑖𝑛𝑑𝑖𝑣𝑖𝑑𝑢𝑜𝑠

𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑖𝑛𝑑𝑖𝑣𝑖𝑑𝑢𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛 𝑢𝑛 𝑑𝑒𝑒𝑡𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑜 𝑔𝑒𝑛𝑜𝑡𝑖𝑝𝑜

Frecuencia genotípica: FG= 𝑁ú𝑚𝑒 𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑖𝑛𝑑𝑖𝑣𝑖𝑑𝑢𝑜𝑠
Frecuencia génica: número de veces que un alelo se encuentra presente en
relación con el número total de alelos, de la población en estudio para ese locus. Se
expresa sólo en proporción.

𝐹𝑟𝑒𝑐𝑢𝑒𝑐𝑛𝑖𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑑𝑒 𝑢𝑛 𝑎𝑙𝑒𝑙𝑜 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑜

F Génica= #𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑒𝑙𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑝𝑜𝑏𝑙𝑎𝑐𝑖 ó𝑛 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑢𝑛 𝑙𝑜𝑐𝑢𝑠

Según H-W: p+q= 1

Mosca de fruta: Drosophila melanogaster: tiempo de desarrollo de unos 10 día y

puede producir más de 1 000 huevos durante toda su vida. 1909 Thomas Hunt
Morgan de columbia Univertity lo considero el organismo perfecto, solo disponía una
cepa de tipo silvestre.

El primer mutante tenía ojos blancos en lugar de rojos. Encontraron 85 diferentes

mutantes. Algunas ocasiones muy raras ocurría un cambio espontáneo, o mutación
dentro de un gen, que se alteraba de manera permanente y podría transmitirse de
una generaciona la sig.

Tienen cuatros pares de cromosomas. Los dos homologos disimiles = determinan el

sexo.XX hembras y XY machos. Mosca= 4 cromosomas

Práctica 13. Árboles genealógicos

Hampton en 1975 comprobó que entre un 66 y un 80% de los pacientes eran

diagnosticados correctamente sólo por la historia clínica.

Genograma: representación gráfica (en forma de árbol genealógico) de la

información básica de, al menos, tres generaciones de una familia.

Anamnesis : preguntar por familiares hasta un segundo plano.

Antecedentes familiares que indican riesgo elevado para una patología:

 Inicio prematuro (en general, considerar precoz antes de los 50 años)
 Dos o más familiares afectados en la misma rama
 Afectación bilateral en órganos pares (pulmón, mama, riñon)
 Enfermedad multifocal.
Autosomico dominante: un copia mutada del alelo, no se salta generaciones
Autsomico recesivo: dos copias, se salta generaciones.
Mitocondrial: Solo las mujeres pueden heredar esta enfermedad, ambo sexos pueden
verse afectados, puede aparecer en todas las generaciones
Xdominante: Mujeres +afectadas, los padres no pueden transmitirlo
Xrecesivo: los varones son los más afectados, mujer es portadora y hereda a sus hijos.