Curva de Calibración +portada

HEMATOLOGÍA
25-03-2023
Informe
práctivo
Título:
Curva de calibración
Realizado por:
Lucía Guadalupe
1º Lab clínico
Informe práctico de la curva patrón
-Objetivos
La curva de calibración es un método analítico para determinar la concentración de una sustancia en
una muestra desconocida mediante la relación proporcional entre la concentración y una determinada
señal analítica. Para realizar una curva de calibración es necesario realizar la preparación de
soluciones de diferentes concentraciones.
-Material y equipos
1. Gradilla
2. Patrón
4. Micropipetas (1000uL) y sus respectivas puntas
5. Tubos de ensayo (2,5ml o más)
6. Cubetas de espectrofotometría
7. Parafilm
8. Reactivo Drabkin
9. Agua destilada
10. Espectrofotómetro
-Fundamento del espectrofotómetro

El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las moléculas para absorber las
radiaciones, entre ellas, las radiaciones dentro del espectro de UV. Las longitudes de onda de las
radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que absorben dependen de la
estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, entre otras).
La transmitancia de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que
llega al detector una vez que ha atravesado la muestra y la cantidad de luz que incidió sobre ella. Entre
más concentrada se encuentre la solución menos cantidad atravesará la misma, que esta será absorbida
por las moléculas que la conforman.
-Procedimiento
1. Realizar la dilución 1:10 de reactivo Drabkin en agua destilada. Como el volumen de trabajo es
cercano a 10ml se podría hacer la dilución tal que así: 9ml de agua destilada + 1 ml del reactivo.
2. Preparación de las disoluciones, en cada tubo de ensayo, según la tabla siguiente:
muestra Solo Sin 1/2 1/4 1/8

Drabkin diluir
Reactivo 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml

trabajo
Patrón de 500 µL 250 µL (de 250 µL 250 µL

Hb la anterior) (de la anterior) (de la anterior)
Agua 250 µL 250 µL 250 µL

destilada
3. Pipetear a partir de los tubos en las distintas cubetas de espectrofotometría. Tener en cuenta que
deben estar etiquetadas (1, ½, ¼ y 1/8).
4. Se llevan las distintas cubetas al espectrofotómetro al que se le asigna para el primer cálculo una
longitud de onda de 540nm. Las cubetas deben estar colocadas por el lado sin rugosidades para que la
luz pueda pasar correctamente.
5. Para el segundo cálculo se asignan 544nm.
-Resultados
Para 540nm. Para 544nm

-A del tubo 1= 0,450 -A del tubo 1= 0,462
-A del tubo 1/2= 0,329 -A del tubo 1/2= 0,339
-Análisis de resultados
Para la interpretación de resultados se realizan dos gráficas. La primera con los datos para 540nm y la
segunda para 544nm. La gráfica de la concentración en función de la absorbancia tiene un
comportamiento lineal lo cual indica una relación directamente proporcional entre la absorbancia y la
concentración de una solución.
¿Cuál sería la concentración para A=0,350?
Curva patrón
0,5
0,45
0,45
y = 0,1328x - 0,0865
0,4
0,35 0,329
0,3
Absorbancia
0,25
0,2
0,15 0,129
0,1 0,074
0,05
0
1,887 3,775 7,55 15,1
Concentración
540nm Lineal (540nm )
𝑦 = 0,1328𝑥 − 0,0865
0,350 + 0,0865
𝑥= = 3,287
0,1328
Se parte de que la concentración de patrón es 15,1 según lo establecido por el comerciante. Como se
ha diluido, su concentración disminuye. Por eso se observa que el primer valor del eje X es 1,887 (15,1
del patrón diluido 8 veces).
Se nos da una absorbancia de 0,350 y tenemos que averiguar, mediante la recta de tendencia de la
gráfica, la concentración de patrón. Tras sacar la ecuación de la recta, despejamos “x” y averiguamos
que, para una A de 0,350, tenemos una concentración de 3,287, es decir, que corta en el punto (3´287,
0´350).
Curva patrón
0,5
0,45
y = 0,1365x - 0,0895
0,4
0,35
0,3
Absorbancia
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
1,887 3,775 7,55 15,1
Concentración
544nm Lineal (544nm)
Para esta gráfica la ecuación de la recta de tendencia es: 𝑦 = 0,1365𝑥 − 0,0895.

0,350+0,0895
Se despeja la x de la misma manera que en la anterior: 𝑥 = = 3,220.
0,1365
Observamos que para una A de 0,350 se obtiene una concentración de 3,220.

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HEMATOLOGÍA

-Fundamento del espectrofotómetro

muestra Solo Sin 1/2 1/4 1/8

Reactivo 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml

Patrón de 500 µL 250 µL (de 250 µL 250 µL

Agua 250 µL 250 µL 250 µL

Para 540nm. Para 544nm

540nm Lineal (540nm )

544nm Lineal (544nm)

Para esta gráfica la ecuación de la recta de tendencia es: 𝑦 = 0,1365𝑥 − 0,0895.

Observamos que para una A de 0,350 se obtiene una concentración de 3,220.

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