Propagación Clonal in vitro de Piña (Ananas comosus L.

Merr)
Variedades Champaka y Hawaiana
Silvia Gicela Saucedo Aguiar1, Luis Edmundo Ramos Gavilanes1, Edgar Varas Giler2 y Fred Carmigniani Castro2
1
Unidad de Investigación Científica y Tecnológica, Universidad Técnica Estatal de Quevedo. Av. Walter Andrade.
Km 1.5 vía a Santo Domingo, C.P. 73. Quevedo. Los Ríos, Ecuador. silgisauce@yahoo.es.
2
Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Técnica Estatal de Quevedo. Quevedo, Los Ríos, Ecuador.

RESUMEN

Este trabajo fue realizado con la finalidad de establecer un protocolo para la propagación in vitro de piña (Ananas
comosus (L) Merr), así como determinar las mejores concentraciones de reguladores de crecimiento en el establecimiento,
multiplicación, enraizamiento y aclimatación ex vitro. Para el establecimiento de piña var. Champaka y Hawaiana la mejor
concentración fue en un medio de cultivo conformado por la totalidad de las sales del MS suplementado con BAP (0.5 mg
L-1); AIB (1.0 mg L-1) y ANA (1.0 mg L-1) obteniéndose el 47 y 56 % de supervivencia respectivamente. Para la proliferación
de brotes la mejor concentración fue en un medio de cultivo conformado por la totalidad de las sales del MS suplementado
con 3.5 y 4.0 mg L-1 de BAP en la var. Champaka y la var. Hawaiana con 3.5 mg L-1 de BAP. Para el enraizamiento ex vitro y
aclimatación la mejor respuesta al número de raíces se presentó en el testigo (sin hormona) var. hawaiana con un promedio de
7.25. La mayor longitud se evidenció en el testigo (sin hormona) con 3.55 cm se obtuvo una sobrevivencia de 93.75 % para
la var. Hawaiana y 79.16 % para la var. Champaka. Los mejores resultados en el enraizamiento y aclimataciones ex vitro de
vitroplantas de piña se obtuvieron con el testigo en la variedad Champaka y con la auxina ANA (ácido naptalenacetico) 50 mg
L-1 en la var. Hawaiana.

Palabras clave: In vitro, reguladores de crecimiento, explantes, hormona.

ABSTRACT

This work was realized by the purpose of establishing a protocol for the spread in vitro of pineapple (Ananas comosus
(L) Merr), as well as to determine the best concentrations of regulators of growth in the establishment, multiplication, to take
root and acclimatization ex vitro. For the establishment of pineapple var. Champaka and Hawaiian the best concentration was
in a way of culture shaped by the totality of you them go out of the MS suplement with BAP (0.5 mg L-1); AIB (1.0 mg L-1) and
ANA (1.0 mg L-1) 47 and 56 % of survival being obtained respectively. For the proliferation of outbreaks the best concentration
was in a way of culture shaped by the totality of you them go out of the MS suplement with 3.5 and 4.0 mg L-1 of BAP in the
var. Champaka and the hawaiian var. with 3.5 mg L-1 of BAP. For the enraizamiento ex vitro and aclimatization the best response
to the number of roots appeared in the witness (without hormone) var. Hawaiian with an average of 7.25. The major length
was demonstrated in the witness (without hormone) by 3.55 cm. There was obtained a survival of 93.75 % for the Hawaiian
var. and 79.16 % for the var. champaka. The best results in the enraizamiento and acclimatizations ex vitro of vitroplantas of
pineapple(pine cone) were obtained by the witness in the variety Champaka and by the auxina ANA (acid naptalenacetico) 50
mg L-1 in the Hawaiian var..

Key words: In vitro, regulators of growth, explantes, hormone.

INTRODUCCIÓN

La piña es una Bromeliaceae, la cual se propaga de yemas axilares, que permite mejorar sustancialmente
vegetativamente, presentando un porcentaje de el proceso de multiplicación (Casale y García, 1997).
multiplicación muy lento. En la actualidad ha adquirido En el país existen aproximadamente 7,000 hectáreas
gran importancia comercial a nivel mundial por la sembradas de piña de exportación. Esta fruta ocupa la
demanda de su fruto. Esto ha llevado a la búsqueda de primera posición entre las exportaciones no tradicionales
nuevos métodos de propagación, que permitan acelerar hortifrutícolas del Ecuador. Además de exportar piña
la producción de propágulos para la siembra en el fresca, también se exporta elaborados de piña en jugo/
campo entre los cuales cabe señalar el cultivo “in vitro” concentrado y conserva. En 1999, se exportaron 2,045 t
de jugo de piña y 385 t de piña en conserva (CORPEI,
2000).
Recibido: Octubre, 2007. Aceptado: Enero: 2008. Para el agricultor nacional la piña representa
Publicado como ARTÍCULO en Ciencia y Tecnología 1: 49-54. 2008. un cultivo de alta rentabilidad, de fácil manejo y con
 Saucedo et al.

buenas perspectivas comerciales. La existencia de concentración de la citoquinina a emplear en la

un importante mercado interno, pero sobretodo, las multiplicación in vitro de piña var. Champaka y
posibilidades de industrialización y exportación, crean Hawaiana. Para realizar este experimento se utilizaron
magnificas expectativas para este cultivo (Pacheco, vitroplantas proveniente de la etapa de establecimiento,
1984). La producción de plantas de piña a nivel las mismas que fueron sometidas a los siguientes
nacional asciende a 369´960,000 u en el año 1999, tratamientos: 1) Champaka + MS + BAP (3.0 mg L-1) +
las que alcanzaron a cubrir un total de 6,166 ha de las AIA (2 mg L-1); 2) Champaka + MS + BAP (3.5 mg L-1)
cuales 33,296,400 fueron plantas meristemáticas. La + AIA (2 mg L-1); 3) Champaka + MS + BAP (4.0 mg
producción nacional de plantas meristemáticas de piña L-1) + AIA (2 mg L-1); 4) Hawaiana + MS + BAP (3.0
en el año 1999 asciende a 8,324,100, de las cuales la mg L-1) + AIA (2 mg L-1); 5) Hawaiana + MS + BAP
tercera parte de la demanda fueron importadas de Costa (3.5 mg L-1) + AIA (2 mg L-1); 6) Hawaiana + MS +
Rica, Colombia, entre otros. BAP (4.0 mg L-1) + AIA (2 mg L-1).
Las variedades cultivadas en el ámbito mundial Se utilizó un diseño completamente al azar con
son: Cayena Lisa, Queen y Española. En el Ecuador las un arreglo factorial 2 (variedades) x 3 (concentraciones
variedades más sembradas son la Hawaiana, la Nacional de BAP) con cuatro tratamientos y cuatro repeticiones
y Champaka F-153 (Biblioteca Practica Agrícola y (cada unidad experimental estuvo conformada por ocho
Ganadera, 1987). En este trabajo se pretende establecer explantes). A los 60 días se evaluó número de brotes por
un protocolo para el establecimiento, multiplicación, y explante, longitud promedio de brotes y vigor.
enraizamiento in vitro de yemas axilares de retoños de
corona de Ananas comosus L. Merr, variedad Hawaiana Enraizamiento y aclimatación ex vitro
y Champaka F-153.
El objetivo en esta fase, fue la de determinar la
MATERIALES Y MÉTODOS mejor concentración de las auxinas AIB y ANA en el
enraizamiento de las vitroplantas de las var. Champaka
y Hawaiana. Se utilizaron vitroplantas de la etapa
Establecimiento e inducción del crecimiento de de multiplicación con una altura de cuatro a cinco
explantes de piña centímetros, con 2 o 3 pares de hojas. Posteriormente
y el oprtotocolo de desinfección? fueron colocadas en un sustrato de arena bajo túnel de
El objetivo de esta etapa fue encontrar un medio polietileno y con un riego de Microjet con una frecuencia
de cultivo adecuado para el establecimiento in vitro de de tres minutos cada tres horas. Las vitroplantas fueron
yemas axilares de piña var. Champaka y Hawaiana. La sometidas a los siguientes tratamientos: 1) Champaka
extracción y siembra de las yemas se realizó en la cámara + AIB (50 mg L-1); 2) Champaka + ANA (50 mg L-1);
de flujo laminar después de haber sido desinfectadas. 3) Champaka Sin hormona; 4) Hawaiana + AIB (50 mg
El medio de cultivo utilizado fue el MS (Murashige L-1); 5) Hawaiana + ANA (50 mg L-1); 6) Hawaiana sin
y Skoog, 1962) suplementado con thiamina 5 mg L-1; hormona.
Se dispuso de un diseño completamente al azar con
sulfato de adenina 40 mg L-1; myo-inositol 100 mg
un arreglo factorial 2 (variedades) x 3 (hormonas) con
L-1; sacarosa 30 g L-1; además; auxinas AIA, ANA, cuatro tratamientos y cuatro repeticiones (cada unidad
AIB en concentraciones de 1.0 a 2.0 mg L-1 y el BAP experimental estuvo conformado por ocho explantes).
en concentraciones de 0.5 a 1.0 mg L-1. Los explantes, A los 45 días se evaluó el porcentaje de enraizamiento,
fueron sometidos a los siguientes tratamientos: 1) número de raíces por planta, longitud de raíces, vigor
Champaka + MS + BAP (0.5 mg L-1); AIB (1.0 mg L-1) y supervivencia. En todas las fases de propagación se
y ANA (1.0 mg L-1); 2) Champaka + MS + BAP (1.0 mg utilizó la prueba Tukey al nivel de 0.05, para establecer
L-1); AIB (2.0 mg L-1) y ANA (2.0 mg L-1); 3) Hawaiana la diferencia entre medias.
+ MS + BAP (0.5 mg L-1); AIB (1.0 mg L-1) y ANA (1.0
mg L-1); 4) Hawaiana + MS + BAP (1.0 mg L-1); AIB RESULTADOS Y DISCUSIÓN
(2.0 mg L-1) y ANA (2.0 mg L-1).
Se utilizó un diseño completamente al azar con un Los resultados obtenidos durante el proceso de
arreglo factorial 2 (variedades) x 2 (medios de cultivo) micropropagación de la piña se analizaron por etapas.
con cuatro tratamientos y cuatro repeticiones (cada uni-
dad experimental estuvo conformada por ocho explan- Establecimiento e inducción del crecimiento
tes). A los 21 días se realizó la evaluación de manera
visual contando el número de explantes contaminados, En el Cuadro 1, se observa que la var. Champaka
fenolizados, quemados y la supervivencia. presenta el mayor valor promedio de contaminación
1.72, mientras que la Hawaiana presentó un valor
Multiplicación y elongación de los brotes promedio de 1.62 en las yemas establecidas; por lo que
se consideró que el método de desinfección propuesto
El objetivo de esta fase fue evaluar el tipo y la por Bravo (1997) y modificado en la concentración de

50
 Saucedo et al.

hipoclorito de sodio del 1.0 % al 0.1% dio resultados En lo referente a explantes fenolizados se obtuvo
eficientes. Esto concuerda con lo manifestado por un mayor promedio en la var. Champaka 1.09 y 0.90 en la
Okabe (1997), quien indica que el material proveniente Hawaiana; el medio de cultivo 2 (MS +BAP 1.0 mg L-1+
del campo debe desinfectarse antes de introducirlo a AIB 2.0 mg L-1 +ANA 2.0 mg L-1) fue el que presentó
condiciones asépticas. Por esta razón se recomienda mayor fenolización posiblemente este resultado podría
introducir el material al invernadero y tratarlo en un atribuirse al hecho de que el material vegetal utilizado
período prudente con fungicidas para bajar la incidencia provenía de la segunda generación de la planta, lo cual
de patógenos endógenos. concuerda con lo manifestado por Ramos (2000), quien

Cuadro 1. Efectos simples de dos variedades de piña y dos medios de cultivo en la etapa de
establecimiento

Explantes
VARIEDADES
Contaminados Fenolizados Quemados Vivos (%)

Champaka 1.72a† 1.09a† 1.12a† 46.88a†

Hawaiana 1.62a 0.90a 1.09a 56.25a
MEDIOS DE CULTIVO
MS+BAP 0.5 mg L-1 + AIB 1.0 mg L-1
1.80a 0.90a 0.90a 54.69a
+ ANA 1.0 mg L-1
MS+BAP 1.0 mg L-1 + AIB 2.0 mg L-1
1.55a 1.09a 1.31a 48.43a
+ ANA 2.0 mg L-1
CV% 22.21 22.15 34.19 26.65
†
Medias con la misma letra no presentan diferencias estadísticas (Tukey, P = 0.05).

indica que la síntesis de los precursores de fenoles es con la aplicación de auxina al medio de multiplicación
más activa y compleja en tejidos maduros que en los incide directamente en el número de brotes puesto que
tejidos jóvenes y está directamente influenciado por el al haber un balance de citoquinina-auxina provoca que
contenido de sales y reguladores de crecimiento en el los brotes no se elonguen en forma desordenada y se
medio de cultivo (Cuadro 1). La var. Hawaiana fue la inhiban el enraizamiento, estimulando la brotación.
que presentó un mayor porcentaje de explantes vivos De acuerdo a esto se puede observar que para
con un promedio de 56.25 y en cuanto a los medios de la variable número de brotes en la significación de la
cultivo el mejor fue el medio 1 para las dos variedades. interacción “variedad x concentración de BAP, la var.
En esta fase no se presentaron diferencias estadísticas Champaka presentó su mejor comportamiento con 3.5
para explantes contaminados, fenolizados, quemados y 4.0 mg L-1 de BAP y, la var. Hawaiana con 3.5 mg L-1
y vivos, tanto para variedades como para medios de de BAP (Figura 1).
cultivo (Cuadro 1). Asimismo, para longitud del brote, la variedad
Champaka presentó mejores resultados con 3.0 mg L-1
Multiplicación y elongación de los brotes de BAP y, la var, Hawaiana con 3.0 y 3.5 mg L-1 de BAP
(Figura 2).
En esta fase, la var. Champaka presentó el mayor
número de brotes por explante. Al respecto Escalona Enraizamiento y aclimatación ex vitro
(1999), manifiesta que con la aplicación de medios
líquidos en el cultivo de piña, se puede triplicar el Las variedades de piña presentaron diferencias
coeficiente de multiplicación. En cambio, para longitud estadísticas para porcentaje de enraizamiento, longitud,
y vigor de los brotes no se encontraron diferencias vigor y porcentaje de sobrevivencia. La variedad
estadísticas con respecto a la var. Hawaiana. Con la Champaka solo presentó mayor porcentaje de raíces;
concentración de 3.5 y 4.0 mg L-1 de BAP se encontró en cambio, la var. Hawaiana presentó mayor número de
el mayor número de brotes y con 3.0 mg L-1 de BAP la raíces por planta, longitud de raíz, vigor y sobrevivencia
mayor longitud de brotes (Cuadro 2). Esto concuerda con (Cuadro 3). Esto concuerda con lo manifestado por Pérez
lo manifestado por Daquinta (1998), quien menciona que (1998), quien manifiesta que en la etapa de enraizamiento,

51
 Saucedo et al.

es importante obtener un mayor número de raíces, aún mejor respuesta a la aplicación de hormonas por parte
de poca longitud, ya que las plantas obtenidas de cultivo de la var. Hawaiana, no así para la var. Champaka, cuya
in vitro requieren de un buen sistema radicular (mayor mejor respuesta es sin hormonas (Figuras 3 y 4). Esto
número de raíces) para tener éxito en transplante y concuerda con lo manifestado por Casale y García,
adaptación a condiciones de invernadero, a diferencia de (1987) quien manifiesta que cuando el enraizamiento
otras especies que son propagadas convencionalmente ocurre en tratamientos sin reguladores, se considera
en forma asexual y que no requieren de raíces o muy que la auxina no es necesaria para el enraizamiento,
pocas para ser transplantadas a sustrato. En lo referente ni crecimiento de las raíces de piña, lo cual también
al porcentaje de enraizamiento y sobrevivencia se fue encontrado durante la propagación in vitro de los
encontraron diferencias estadísticas para la hormona cultivares "Española Roja" y "Nacional". Esto difiere
ANA que presentó mayores valores. de lo manifestado por Fitchet-Purnell (1993) que han
En relación a la interacción “variedad x tipo de reportado buenos resultados con la aplicación de 1
hormona”, se encontró significación para la misma mg.L-1 de ANA para inducir el enraizamiento en la
en todas las variables estudiadas. Encontrándose una piña.

Cuadro 2. Efectos simples de dos variedades de piña y tres concentraciones de BAP en la etapa
de multiplicación
Explantes
VARIEDADES
Nº brotes/explantes Long. prom. de brotes Vigor
Champaka 9.75a †
0.49a
†
2.08a†
Hawaiana 8.67b 0.46a 1.92a
CONCENTRACIÓN DE BAP
3.0 mg L-1 3.63b 0.59a 1.75a
3.5 mg L -1
12.13a 0.44b 2.00a
4.0 mg L-1 11.88a 0.39b 2.25a
CV% 13.60 17.52 22.05
†
Medias con la misma letra no presentan diferencias estadísticas (Tukey, P = 0.05).

16
14
12
n° brotes/explante

10
8
6
4 Champaka
2 Hawaiana

0
3.0 3.5 4.0
-1
concentración BaP mg l

Figura 1. Interacción “variedad x concentración de BAP” en el número de

brotes en la fase de multiplicación

52
 Saucedo et al.

0.8

0.7

0.6

long. Prom. Brotes

0.5

0.4

0.3

0.2
Champaka
0.1 Hawaiana

0
3.0 3.5 4.0
concentración de BaP mg l-1

Figura 2. Interacción “variedad x concentración de BAP” en la longitud de

brotes por explante en la fase de multiplicación

Cuadro 3. Efectos simples de dos variedades de piña y tres concentraciones de hormona en la

etapa de enraizamiento

Explantes
VARIEDADES Enraizmiento # de raíces Longitud Vigor Sobrevivencia
(%) por planta raíces (cm) (Esc:1–3)*** (%)
Champaka 79.17b† 7.00a† 2.26b† 2.08b† 79.16b†
Hawaiana 93.75a 7.25a 3.55a 2.83a 93.75a
HORMONA
AIB** 78.13b 6.88a 2.64a 2.50a 78.13b
ANA** 92.19a 7.88a 2.78a 2.25a 92.19a
SIN HORMONA 89.07ab 6.63a 3.30a 2.63a 89.06ab
CV% 11.56 14.13 22.54 17.28 11.56
†
Medias con la misma letra no presentan diferencias estadísticas (Tukey, P = 0.05).
**AIB = Acido indolbutirico; ANA = Acido naftalenacético.
***1 = Bajo; 2 = Medio; 3 = Alto.

120

100
enraizamiento (%)

80

60

40
Champaka
20
Hawaiana
0
AIB ANA Sin
hormona

Figura 3. Interacción “variedad x tipo de hormona” en el porcentaje de

enraizamiento en la fase de enraizamiento

53
 Saucedo et al.

4
3.5

Prom. long. raices (mm)

3
2.5
2
1.5
Champaka
1
Hawaiana
0.5
0
AIB ANA Sin
hormona

Figura 4. Interacción “variedad x tipo de hormona” en el promedio

longitud de raíces en la fase de enraizamiento

CONCLUSIONES Daquinta, M. 1998. Propagación in vitro de la piña

(Ananas comosus (L.) Merr.). Tesis presentada en
En la fase de establecimiento el mejor medio opción al grado científico de Doctor en Ciencias
de cultivo fue el MS suplementado con 0.5 mg L-1 de Agrícolas. Universidad de Ciego de Avila, Cuba.
BAP 1.0 mg L-1 de AIB y 1.0 mg L-1 de ANA para las 99p.
dos variedades (Champaka y Hawaiana). En la fase Escalona, M. 1998. Propagación in vitro de la piña
de multiplicación la variedad Champaka presentó (Ananas comosus (L.) Merr.) en sistema de
mejor respuesta en el medio de cultivo suplementado inmersión temporal. Tesis para optar por el
con 3.5 mg L-1 de BAP y la variedad Hawaiana con grado científico de Doctor en Ciencias Agrícolas.
la concentración de 4.0 mg L-1 de BAP. Se obtuvo un Universidad de Ciego de Avila, Cuba. 26p.
buen porcentaje de enraizamiento y supervivencia en la Fitchet-Purnell, M. 1993. Maximum utilization of
variedad Champaka sin la utilización de hormona y en pineapple crowns for micropropagation. Acta
la variedad Hawaiana con la hormona ANA 50 mg L-1. Hort. 334: 325-330.
Murashige, T. and Skoog. F. 1962. A revied medium
for rapid growth and biossays with tobacco tissue
LITERATURA CITADA culture. Plant physiol. 15: 173 – 197.
Okabe, K. 1997. Principios básicos del cultivo de
Biblioteca Práctica Agrícola y Ganadera. 1987. Práctica tejidos vegetales (volumen 2) Informe final. ICTA
de los Cultivos. Oceano-Centrum. Tomo 2. (Instituto de Ciencias y Tecnología Agrícola).
Barcelona, España. p. 197 - 199. Voluntarios Japoneses en Cooperación Técnica
Bravo L. 1997. Effects of benzylaminopurine (BAP) con el Extranjero (JOCV). Bárcena. Guatemala.
on in vitro proliferation of pineapple (Ananas p. 90.
comosus (L.) Merr.). Acta Hort. 425: 235-242 Pacheco, M. 1984. El cultivo de la piña; Curso de
Casale, M. y García E, 1987. Multiplicación Clonal Fruticultura (segunda parte). Facultad de Ciencias
acelerada de tres variedades de piña, Centro de Agrícolas. Universidad Central de Ecuador.
Botánica Tropical. Caracas, Venezuela. pp. 248 Quito, Ecuador. pp. 88 - 107.
- 269. Pérez Ponce, J.N. 1998. Propagación y Mejora Genética
CORPORACION DE PROMOCION DE de Plantas por Biotecnología. Instituto de
EXPORTACIONES E INVERSIONES. Biotecnología de las Plantas. Volumen I.
(CORPEI). 2000. Grandes expectativas por la Ramos, L. 2000. Algunos avances en la morfogénesis
piña de exportación. EL AGRO. (ECUADOR) de la teca (Tectona grandis L.) Universidad de
N° 50 : 26-27. Ciego de Avila. Centro de Bioplantas. Tesis para
optar por el grado de Master en Ciencias. Santa
Clara, Cuba. 55 p.

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