SEGUNDO PARCIAL ANALÍTICA

DETERMINACIÓN DE CONTENIDO POR ESPECTROSCOPÍA UV-VIS

ABSORCIÓN DE RADIACIÓN POR FÁRMACOS

• Los métodos espectrométricos son un gran grupo de métodos analíticos que se basan en la
espectroscopía atómica y molecular.

• La espectroscopía es la ciencia que trata con la interacciones de varios tipos de radiación con la materia.

• La espectrometría y los métodos espectrométricos se refieren

a la medición de la intensidad de la radiación con un
transductor fotoeléctrico u otro tipo de dispositivo
electrónico.

• Uno de los métodos más utilizados en el análsis de sustancias y

en particular drogas, es el de la medida de la absorción o emisión
de nergía radiante.

• Es la energía transmitida en forma de radiación electromagnética,

que se describe en función de sus cualidades ondulatorias.

• La fracción de esta energía que podemos ver la llamamos luz.

ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

• Comprende una inmensa gama de longitudes de onda, pero la porción perceptible por el ojo humano
es muy pequeña y es lo que se conoce como
luz visible, cuyos colores son los del arco iris.
PROCESO DE ABSORCIÓN

• Cuando un haz de radiación pasa por una capa transparente de un sólido, líquido o gas, pueden
eliminarse selectivamente ciertas frecuencias del proceso de absorción.

• Esta energía se transfiere a los átomos o moléculas y estas pasan de un estado de energía a otro mayor
o estados excitados.

• La absorción produce por lo general una transición del estado fundamental a estados con mayor
contenido energético.

• Dependiendo de la cantidad de energía se pueden dar cambios como:

• Estas diferencias de energía, son únicas para cada especie, un

estudio de las frecuencias de radiación absorbidas ofrece un medio
de caracterizar a los constituyentes de la materia.

• Así se obtienen los espectros (Abs/ dif long) de absorción, que es

una gráfica de la reducción de potencia radiante (absorbancia) en
función de la longitud de onda o frecuencia.

LEY DE BEER

• Cuando un haz de luz monocromática atraviesa una solución que tiene una especie absorbente, la
energía radiante del haz se reduce progresivamente.

• Esto como consecuencia de :

o La reflexión de la luz con las paredes del recipiente que tiene la solución.

o La absorción por la partículas.

o De la dispersión de parte de la energía por las partículas de la especie absorbente.

o De la dispersión producida por las moléculas grandes presentes en la solución.

• La disminución de la energía va a depender de la concentración y de la longitud del corrido del haz a

través de la solución (camino óptico).

• La Ley de Beer expresa cuantitativamente estas relaciones.

• Si llamamos como I a la intensidad de la radación y la

definimos como el número de ergios que inciden en una
superficie de 1 cm2.
DESVIACIONES

Fundamentales

• Son debidas a las concentraciones.

• La ley de Beer solo explica el comportamiento de la soluciones diluidas.

• A concentraciones elevadas la distancia media entre las partículas absobentes disminuye, afectando a
las otras que se hayan en la vecinadad (puedo perder la linealidad de beer).

• Esta interacción modifica su capacidad para absorber radiación de una determinada longitud, y
provocara desviación de la lineal entre A y C.

Instrumentales (Equipo)

• Los absorbentes solo cumplen la Ley de Beer cuando se usa radiación monocromática. Problema
Instrumental.

• Para corregir este problema se hace una gráfica A vs longitud de onda (espectro).

• Luego se selecciona una zona donde no se presenten muhcas variaciones de la absorbancia.

Químicas (muestra/ sustancias)

• Desviaciones de la Ley de Beer como consecuencia de reacciones de asociación, disociación u otras que
la especie absorbente experimente con el disolvente.

• Ej: Con soluciones de dicromato potásio no amortiguadas, en las que existen los siguinetes equilibrios:
Cr2O7 + H2O → 2HcrO4 → 2H+ + 2CrO4-2.

• La mayoria de longitudes de onda los valores de ɛ del ion dicromato y dos especies de cromatos son muy
diferentes.
COMPONENTES DEL EQUIPO UV-VIS

• Fuente
• Algunos tipos de fuente que se usan son:
o Deuterio.
o Tungsteno.
o Diodos emisores de luz.
o Arco de Xenón.

• Selector de longitud de onda

• Permiten variar de forma continua la longitud de onda de la radiación en un intervalo amplio.
• Los analisis espectroscopicos requieren radiación que consiste en bandas (longitud de onda limitada
y continuas).
• Ranuras de entrada, espejo colimador, prisma, lente de enfoque, rendija de salida.

• Recipiente para las muestra (cubetas).

• Tiene que ser de un material que deje pasar la radiación en la región de interés.
• En Región UV se utilizan de cuarzo o sílice fundido.
• En Región visible se puede usar de plástico.

• Trasductores de la señal (DETECTORES)

• Celdas fotovoltaicas. • Fotodiodos de silicio.
• Fototubos. • Transductores de transferencia de
• Fotomultiplicadores. carga.
• Transductores de fotoconductividad

• Procesadores de la señal.
TIPOS DE EQUIPO UV VIS

• De haz sencillo

• De doble haz
o Analizo ambos al mismo tiempo

• De doble haz temporal

o No pasa al mismo tiempo en ambas, sino que rotan.
APLICACIÓN CUALITATIVA DE LOS ESPECTROS UV-VIS

• Las medida de absorción en las regiones uv-vis se utilizan

ampliamente para identificar y determinar una enorme
cantidad de especies inorgánicas y orgánicas.

Ejemplos:

ABSORCIÓN EN EL IR
¿QUÉ ES EL IR ?
• Es una molécula con momento dipolar y moléculas
polares.

• En la espectroscopía infrarroja (IR) la mayoria de las

moléculas absorben la luz en la región infrarroja del
espectro electromagnético, convitiéndola en vibración
moleculas.

El IR SE DIVIDE EN 3 ZONAS

• Infrarrojo cercano (más cerca de la luz visible)

• Infrarrojo medio.
• Infrarrojo lejano.

La energía de Radiación IR no funciona en UV/Vis.

En el IR pasa que, los espectros de absorción, emisión y reflexión IR se pueden explicar suponiendo que son un
resultado de cambios de energía producidas por las moléculas que tienen movimiento vibracionales y
rotacionales.

Cunado se aplica radiación a la moléculas estas se mueven por rotaciones o vibraciones.

¿ CÓMO SE ABSORBE EN EL IR ?

• Debe existir un cambio neto en el momento dipolar.

• El momento dipolar está determinado por la carga y la distancia de los centros de la moléculas.

• Especies homonucleares No tienen momento dipolar (O2/N2/Cl2).

TRANSICIONES VIBRACIONALES

• Se dan en el IR medio.

• En las vibraciones de relfexión podemos encontrar tijereteo, balanceo, aleteo y torsión.

• Moléculas de más de dos átomos puede presentar todos los tipos de vibraciones.
 • Dos categoria: Estiramiento y Flexión.

MODOS DE VIBRACIÓN
¿DE QUE DEPENDE EL MOVIMINETO DE UNA MOLÉCULA ?

• El movimiento de toda molécula en el espacio, o sea, el movimiento de traslación de su centro de

gravedad.

• El movimiento de rotación de la molécula completa alrededor de su centro de gravedad.

• El movimiento de cada uno de sus átomos respectos a los otros átomos, o sea sus vibraciones
individuales.

FUENTES EN EL IR

• Las fuentes de radiación del IR constan de un sólido inerte que se calienta en una temperatura entre
1500 y 2000 K.

• A esas temperaturas, la máxima intensidad radiante se produce entre 5000 y 5900 cm.

• A longitudes mayores o menores a esas se pueden presentar reducciones de la intensidad.

APLICACIONES EN EL IR
 ESPECTROMETRÍA DE LUMINISCENCIA MOLECULAR
PARTE 1. FUNDAMENTO TEORICO
GENERALIDADES

➢ Los limites de detección son más bajos que los encontrados en la espectroscopia por absorción.

➢ Se usan menos que los UV-Vis ya que las especies que emiten radiación son menores que las pescies
que absorben.

➢ La relación entre señal y concentración es lineal en amplio rango de concentración.

CLASIFICACIÓN DE LOS PROCESOS

1. FLUORESCENCIA MOLECULAR
• La exitación se da por medio de la absorción de fotones, cambia el spin y tiene una vida media
corta.

2. FOSFORESCENCIA MOLECULAR
• La exitación se da por medio de la absorción de fotones, no cambia el spin y tiene una vida media
larga.

3. QUIMIOLUMINISCENCIA
• Se basa en la radiación que emite una especie excitada que se forma en el curso de una reacción
química.

FLUORESCENCIA

➢ PRINCIPIO DE EXCLUSIÓN DE PAULI: En un átomo no puede haber dos electrones con números
cuánticos iguales.

➢ DIAMAGNETICOS
o Los electrones están apareados en sentidos opuestos y no Entonces
generan un campo magnetico.
Por cada orbital solo Podemos tener
➢ PARAMAGNETICOS 2 electrones, y estos electrones
o Son radicales libres (1 electrón solo en el orbital) y si los tienen direcciones (espin) opuestos.
atrae un campo magnetico.

ESTADOS DEL ELECTRÓN

 ➢ SINGULETE
o Todos los espines están apareados.
o Nivel fundamental del electrón.

➢ DOBLETE
o 1 electrón impar que puede tomar 2
direcciones.
o Estado fundamental del radical libre.

➢ TRIPLETE
o 1 de los electrones se va a un nivel de enrgía
superior.

PROCESOS DE DESACTIVACIÓN
➢ Son los procesos mediantes los cuales los
electrones buscan volver a su estado basal.

➢ PROCESOS RADIANTES
o Son los procesos en los cuales se emite un fotón
▪ Fluorescencia.
▪ Fosforescencia.

➢ PROCESOS NO RADIANTES
o Pierden energía sin emitir radiación (comparten energía)

▪ Relajación vibracional
• Transferencias rápidas de energía por las colisiones entre moléculas de las
especies excitadas y los solventes.

▪ Cruce entre sistemas

• Cruce entre estados electrónicos de multiplicidad distinta.
• Lo más común es pasar de sencillo a triple.
• Común en moléculas con yodo y bromo.

▪ Conversión interna
• Cruce entre sistemas de multiplicidad igual (sencillo-sencillo o triple-triple),
además, son procesos intermoleculares.
• Se pierde energía.

▪ Conversión externa
• Transferencia de nergía entre la molécula y otros solventes o solutos.
• Permite evaluar el efecto del solvente sobre la intensidad de fluorescenica.
 ➢ Relajaciones vibracionales
o Liberan energía poco a poco y para
hacerlo rápido únicamente por
fluorescencia y fosforescencia.

FOSFORESCENCIA

➢ Tiene una vida larga.

➢ Se favorece en estructuras con enlaces dobles altamente conjugados.
➢ Se observa a temperatura bajas y en solventes viscosos.
➢ Favorecida en moléculas de estruturas rígidas.
Estructuras conjundas si tienen
fosforescenica.

Estructuras conjundas si tienen

fosforescencia .

Rigidez: No se puede mover en el espacio solo con fenómenos radiantes.

Con temperatura hacia baja y solvente viscisi no hay fenómenos radiante.

FACTORES QUE AFECTAN ESTOS PROCESOS

TEMPERATURA Y SOLVENTE
➢ Al aumentar la temperatura, aumentan las colisiones.

➢ Al aumentar las colisiones es mas probable una desactivación.

➢ Al disminuir la viscosidad se aumenta la probabibliidad de conversión externa.

QUIMIOLUMINISCENCIA
 ➢ Principalmente las sustancias biológicas presentan quimioluminiscencia.

➢ Se produce cuando una reacción química genera una especie electrónicamente excitada que emite luz
al estado funcional.

PARTE 2. EQUIPO
FLUORIMETRO / FLUORÓMETRO

➢ La radiación emitida sale en varias direcciones por lo que se

mide en un angulo de 900 con respecto al haz de incidentes.

➢ La mayoria son de doble haz, tiene un haz de referencia y haz

para la muestra.

FUENTE
➢ Rayos laser.
➢ Arco de Xenón de alta presión, da una radiación continua.
➢ Arco de merucrio a baja presión.

CUBETAS
➢ De vidrio o sílice.
➢ Las huellas dactilares fluorescen.
➢ Diseñado para reducir la cantidad de radiación dispersada.

DETECTOR
➢ Detectores de Diodos en serie y transferencia de carga.
➢ La seña emitida es de baja intensidad.
➢ Tubos de fotomultiplicadores.

PARTE 3. APLICACIONES

3 CASOS
1. Medicamentos no fluorescente que por RXN química produce derivada fluorescente.

2. Medicamentos con fluorescencia intrínsexa.

3. Medicamentos no fluorescentes pero con “marcador” fluorescente.

F = K*Po*C K= Constante de proporcionalidad.

C = Concentración del analito en la muestra.
Po= Potencial radiante incidente.
 ESPECTROMETRIA DE MASAS
FUNDAMENTO TEÓRICO
• Obtención de iones de moléculas orgánicas en fase gaseosa que luego se separan de acuerdo a su masa
y carga (o le pone o le quita pero queda con carga).

DIFERENCIAS CON RESPECTO A LAS OTRAS TÉCNICAS

• Es un proceso o tecnica destructiva para las muestras.

• No utiliza radiación (entre mas grande sea el pico, más presencia va a ver).

• Relación masa/carga: Dos partículas con la misma relación masa carga se desplazan con la misma
trayectoria en el vacio al someterse a campos magnéticos.

ESTAPAS DEL RPOCESO

1- Vaporización de la muestra.
2- Generación de iones.
3- Separación de los iones por la relación masa/ carga.
4- Separa los iones formados.
SISTEMA DE ENTRADA

• OBJETIVO: Introducir pequeñas cantidades de la muestra para convertirse en iones gaseosos.

• Indirecta (vaporizo afuera): Vaporiza en recipiente externo y luego lo ingresamos al espectometro.

• Directa (dentro del equipo): Introduzco la muestra al equipo por medio de un capilar.

• A partir de un CG: La muestra se realiza en fase gaseosa.

FUENTE DE IONES
• Transforman los componentes de un muestra en iones.

• Ionización por impacto electrónico: Muestras son ionizadas por medio de un haz de electrones de
energía elevada que viene de un filamento incandescente.

• Ionización química: Agente ionizante es un ion que va a transferir su carga a la molécula de la muestra.

ANALIZADOR DE MASA
• Dispersar y agrupar los iones con base en la relaciones masa/carga.

• Analizador Magnético: Aplica un campo magnético para que los iones de acuerdo a su relación
masa/carga pueden separarse.

• Analizador cuadropolar: Cuatros barras metalicas paralelas que generan un campo magnético con un
potencial constante.

• Analizador de trampa de iones.

• Sistema de vacío: Mantener presiones bajas en todos los componentes del equipo para facilitar la
producción y manipulación de electrones e iones libres.

CONSIDERACIONES AL MOMENTO DE INTERPRETAR LOS DATOS

 • Las intensidades de los picos de los espectros varían según el haz de luz de electrones, localización de la
muestra con respecto a la luz, presión de vapor de la muestra, temperatura de la muestra.

• Se recomienda compara conta el espectro de un estándar obtenido en las mismas condiciones, antes de
comparar con uno de un biblioteca.

ION MOLECULAR (M)

• Brinda infromación sobre el peso molecular de la sustancia problema.
• Los otros picos del espectro tienen diferencia quimicamente lógica con respecto al ion molecular.
• Es el pico más grande, más no en intensidad.
El pico indica si
M-1 : Perdida de H+
se fragmenta o
no
M-2: Perdida de H2 M-17: Eliminación de un OH
M-18: Eliminación de H2O
M-15: Eliminación de un CH3 (grupo metilo)

M-16: Eliminación de un oxigeno, metano o grupo amino.