Monitoreo ambiental:

Evaluación microbiológica de cuartos

limpios y ambientes controlados
Control microbiológico de los medicamentos – FB5096
Docente: Mg. Sergio Renan Quevedo Torres
e-mail: sergio.quevedo@uwiener.edu.pe
Facultad de Farmacia y Bioquímica
 TEMARIO

1. Introducción
2. Clasificación de salas/cuartos limpios
3. Monitoreo microbiológico ambiental (MMA)
4. Programa de Monitoreo Microbiológico Ambiental
5. Plan de muestreo en el Programa de Monitoreo Microbiológico Ambiental
6. Importancia de un Programa de Monitoreo Microbiológico para Ambientes
Controlados
7. Conclusiones

2
LOGRO DE LA SESIÓN

Al finalizar la sesión el estudiante identifica y describe la

evaluación microbiológica en los diversos tipos de cuartos
limpios y superficies, en la industria farmacéutica.
REFLEXIÓN DESDE LA EXPERIENCIA

¿El ambiente de preparación

de productos citostáticos será
considerado una sala limpia?

¿Por qué?

¿Qué características observas?

 Recordando … “Medio ambiente”
 Limpieza, desinfección e higiene (Procedimiento para el manejo de
derrames)

 Instalaciones para el ensayo de esterilidad (Las Buenas prácticas de

fabricación (BPF) de la OMS para productos farmacéuticos estériles,
detalla los requisitos de cuarto limpio para una instalación de ensayo de
esterilidad).

 Considerar: flujo de aire, diferenciales de presión e instrumentos

indicadores, sistemas de calentamiento, ventilación y aire acondicionado
para la BPF de formas farmacéuticas no estériles y productos
farmacéuticos estériles.

 El monitoreo microbiológico ambiental (MMA) de la zona del ensayo de

esterilidad se debe realizar durante cada sesión de trabajo bajo las
condiciones operativas (dinámicas). Los límites se presentan en las BPF de
la OMS para productos farmacéuticos estériles.
 1. Introducción
 El objetivo de los laboratorios de las diferentes áreas de la microbiología es mantener
controladas todas las variables que intervienen en sus procesos.

 El monitoreo microbiológico ambiental (MMA) es una herramienta útil para el control de

los laboratorios y el monitoreo de las operaciones que se realizan durante un ensayo.

 Por requerimientos de los sistemas de calidad y para lograr el cumplimiento de los requisitos
derivados de las BPL; el MMA está vinculado al aseguramiento de la calidad mediante el
cual se obtienen evidencias documentadas para demostrar que un proceso conduce a
resultados de calidad dentro de las especificaciones predeterminadas.
 1. Introducción
 Existe una estrecha relación entre la calidad y el
monitoreo ambiental. La calidad conlleva al control, a
la mejora de los resultados de un ensayo, de un
producto o de un proceso. El monitoreo ambiental
controla el ambiente de las áreas de trabajo para
asegurar la calidad.

 El diseño de un monitoreo ambiental microbiológico

se realiza para conocer bajo qué condiciones
microbiológicas se realizan determinadas operaciones
que necesitan ser controladas, así como obtener
información sobre las condiciones microbiológicas de
las áreas y tomar acciones que permitan mantener
dichas áreas bajo un estricto control sobre la calidad
ambiental.
 1. Introducción
 El MMA es un procedimiento que nos permite determinar el
contenido microbiano de áreas, superficies, personal, equipo y otros.

 El MMA no sólo se requiere para la elaboración de productos estériles,

sino también para los productos no estériles.

 Mantener un control microbiológico ambiental es indispensable para

asegurar la calidad de los productos elaborados y es un índice del
estado higiénico del ambiente que rodea a las instalaciones.

 Se aplica para locales cerrados y limpios donde el número y variedad

de microorganismos desarrollados deben ser bajos y pocos.

 Las estrategias de monitoreo se establecen de acuerdo al área o

superficie a muestrear.
Cualificar Vs. Monitorizar
2. Clasificación de salas/cuartos limpios
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios

FED STD 209E fue oficialmente

cancelada por la Administración
de Servicios Generales de los
EE.UU. del Departament de
Comercio de 29 de noviembre de
2001, pero sigue siendo
ampliamente utilizado.
2. Clasificación de salas/cuartos limpios
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios
ÁREA CRÍTICA (Grado A)

 Es un área limpia diseñada para prevenir la

contaminación microbiana, en la cual existe un
alto nivel de control microbiológico, ya que en
ella tienen lugar pasos del proceso donde no se
permite la contaminación microbiana.

 Aquí, el producto, envases primarios y cierres

estériles se exponen a condiciones ambientales
Ejemplo:
diseñadas para preservar la esterilidad.
Zonas donde se realizan operaciones de alto
riesgo tales como las zonas de llenado, de
 Estas áreas usualmente se clasifican como A. El bandejas de tapones, de ampollas/viales
ambiente que rodea a la misma garantizará por abiertos y de realización de conexiones
diseño la clasificación. asépticas.
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios
CUARTO LIMPIO (Grado B)

Diseñado, mantenido y controlado para

prevenir contaminación microbiana o por
partículas de los productos.

Es el entorno para la zona de grado A en

el caso de preparación y llenado
asépticos.

Los accesos al área deben ser de la

misma clase
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios
ÁREA CONTROLADA (GRADOS C)

Área limpia que cuenta con un control

definido del ambiente respecto a la
contaminación microbiana o por
partículas, con instalaciones construidas y
utilizadas de tal manera que se reduzca la
introducción, generación y retención de
contaminantes dentro del área.

Permite almacenar material estéril y Ejemplo:

limpio. Zonas limpias para realizar fases menos críticas de la
fabricación de productos estériles o para realizar
actividades durante las cuales el producto no está
directamente expuesto (esto es, en un sistema cerrado).
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios
ÁREA DE APOYO (GRADO D)

Son áreas limpias clasificadas adyacentes a las

áreas donde se realiza el procesamiento aséptico.

En estas áreas se preparan los materiales para su

posterior limpieza, desinfección y/o esterilización/
despirogenización.

Además, pueden ser pesadas las materias primas

que componen una formulación no aséptica previo
a su introducción en el área de formulación.
 2. Clasificación de salas/cuartos limpios
 Las áreas limpias se diseñarán logrando obtener los niveles de limpieza del aire especificados tanto
para la condiciones de “REPOSO”, como para las condiciones de “OPERACIÓN”.

 Las áreas limpias destinadas a la fabricación de productos estériles se clasificarán, según las
características exigidas del aire en: A, B, C y D.
 Para alcanzar las clases B, C y D, el sistema de acondicionamiento y ventilación de aire estará
provisto de filtros de alta eficiencia, como filtros HEPA.
2. Clasificación de salas/cuartos limpios
3. Monitoreo microbiológico ambiental (MMA)
 3. Monitoreo microbiológico ambiental (MMA)
 Se realizará el control microbiológico ambiental de las áreas limpias durante la producción,
cuando los materiales estén en la zona, se estén desarrollando las actividades de
procesamiento y esté presente el personal operativo.

 Se tendrá en cuenta que su realización no interfiera con la operación.

 Se realizará el muestreo de las superficies y el personal después de las operaciones críticas

 También se establecerá una vigilancia microbiológica adicional para las operaciones que no
pertenecen a la producción, por ejemplo, después de un proceso de limpieza e higienización
o una actividad de validación.
 3. Monitoreo microbiológico ambiental (MMA)
 Los resultados del MMA serán considerados como información relevante durante la
evaluación de la documentación del lote para liberar el producto.
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental

 El programa de monitoreo debe realizarse cumpliendo con los requisitos

gubernamentales y las agencias regulatorias. Debe incluir:

- Medios de cultivo calificados capaces de cumplir con la detección de

bacterias y hongos y asegurar la detectabilidad de los microorganismos
después de la condiciones de exposición y a través de la vida útil del medio.
- Requerimientos para el flujo del personal, equipos y materiales de áreas
monitoreadas, como así también, accesos controlados de personal a
cuartos críticos.
- Sistema apropiado de almacenamiento de equipos cuando no se usan.
- Procedimientos escritos indicando los lugares de muestreo con un grado
de precisión tal que permita muestreos reproducibles.
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 1. Monitoreo del aire
 La evaluación de la calidad microbiológica del aire puede realizarse mediante métodos activos y pasivos

 Los métodos activos o volumétricos utilizan dispositivos para tomar un volumen definido de aire y luego
determinar las unidades formadores de colonias (UFC) presentes en él.

 Un ejemplo de estos dispositivos es el centrífugo de Reuter, el cual tiene una turbina que aspira el aire y
hace que las partículas impacten sobre una tira de agar colocada en la pared interna de la turbina.
 VIDEO: Monitoreo del aire:
Metodología activa o Volumétrica

https://www.youtube.com/watch?v=-lDRDFM7_qc
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 1. Monitoreo del aire

 El método más empleado es el pasivo o por

sedimentación en placas de Petri.

 En este método los microorganismos viables

presentes en el aire, son llevados a la superficie del
medio sólido por las corrientes de aire presentes en el
área. Es un método fácil, económico que permite
obtener información sobre los microorganismos
capaces de sedimentar en el aire.
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 2. Monitoreo de superficies
 Se emplean el método de hisopado y el de placa
de contacto (Rodac):

a) El método de hisopado: Utiliza un hisopo

humedecido, el cual se frota en tres direcciones
sobre un área predeterminada (Cuadrado de
10cmx10cm), luego se coloca en un diluente para
liberar los microorganismos presentes y de allí se
toma una alícuota y se siembra en un medio sólido.
Este método se utiliza para superficies irregulares o
de difícil acceso.
VIDEO: Monitoreo de superficies
Método del hisopado

https://www.youtube.com/watch?v=zzSkk6KZB54
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 2. Monitoreo de superficies
b) El método de la placa de contacto (Rodac): Son placas
llena de un medio nutritivo sólido con una superficie
convexa que se presionan sobre la superficie plana a
evaluar. Es utilizado para superficies planas.

 El desarrollo de esta técnica comienza a partir de

placas Rodac con medio Agar TSA y se hace contactar
la superficie con el agar para luego incubar en las
condiciones específicas, los resultados se expresan
como UFC por placa.
VIDEO: Monitoreo de superficies Método de
la placa de contacto (Rodac)

https://www.youtube.com/watch?v=AQdMCq90S9E
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
 Recordando … “Personal”
 Los ensayos microbiológicos deben ser realizados y
supervisados por una persona experimentada,
calificada en microbiología o su equivalente.

 El personal debe estar adecuadamente entrenado,

capacitado y documentado acerca de todos los
conocimientos necesarios para trabajar en áreas
asépticas donde se aplican técnicas microbiológicas, de
buenas prácticas de laboratorio, el uso de los medios de
protección, así como la higiene y hábitos personales.

 Debe estar entrenado en el manejo seguro de

microorganismos para la contención de los mismos
dentro de las instalaciones del laboratorio.
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 3. Monitoreo del personal
 El personal es el principal componente en las actividades
de un área y la principal fuente de contaminación.

 El monitoreo del personal constituye un buen indicador

de la disciplina tecnológica del mismo y es
recomendable realizarlo al final de las operaciones
críticas y del proceso.

 El método microbiológico empleado para el personal es

de acuerdo a la técnica de placa de contacto (Rodac)
por impresión de los cinco dedos de cada mano
enguantada. Los resultados se expresan en UFC por
guantes.
 4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. 3. Monitoreo del personal - Vestimenta necesaria para cada grado
 Grado D: Deberá quedar cubierto el cabello y, en su caso, la barba. Deberá llevarse un traje protector
general y zapatos o cubrecalzados, adecuados. Deberán tomarse medidas para evitar la entrada de
contaminación procedente del exterior en la zona limpia.

 Grado C: Deberá quedar cubierto el cabello, y en su caso, la barba y el bigote. Deberá llevarse un traje
de pantalón de una o dos piezas, recogido en las muñecas y con cuello alto, junto con zapatos o
cubrecalzados adecuados. Esta ropa no debe liberar prácticamente ninguna fibra ni partícula.

 Grado A/B: El cabello y, en su caso, la barba y el bigote se cubrirán totalmente con una cofia completa
que se introducirá en el cuello del traje; deberá utilizarse una máscara para evitar la emisión de gotitas.
Se utilizarán guantes apropiados esterilizados de goma o plástico, sin polvos de talco, y se llevará
calzado esterilizado o desinfectado.
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental
4. Programa de monitoreo microbiológico ambiental

(A, B)
(C)
 5. Plan de muestreo en el Programa de Monitoreo Microbiológico
Ambiental
 Los procedimientos normalizados de trabajo (PNTs) deben especificar:

- Frecuencia del muestreo.

- Momento en que las muestras son tomadas.
- Duración del muestreo.
- Tamaño de la muestra.
- Lugares donde se toma la muestra (visualizados en un plano)
- Técnica y equipo de muestreo.
- Niveles de alerta y acción.
- Respuesta apropiada frente a desviaciones a los niveles de alerta y
acción.
- Clasificación de áreas.
- Requerimiento para la identificación de los aislamientos.
- Requerimiento para los estudios de tendencias
 5. Plan de muestreo en el Programa de Monitoreo Microbiológico
Ambiental
 La identificación de los microorganismos aislados proporciona información valiosa, ya que permite, por
ejemplo, detectar el paso de contaminación desde el entorno a la zona crítica.
 6. Importancia de un Programa de Monitoreo Microbiológico para
Ambientes Controlados
 El programa de monitoreo microbiológico para ambientes controlados debe evaluar la efectividad de
las prácticas de limpieza y sanitización realizadas por el personal, que podría tener un impacto en la
carga biológica del ambiente.

 Debe proveer suficiente información para asegurar que el ambiente durante la manufactura está
operando dentro de un adecuado estado de control.

 El monitoreo microbiológico ambiental y el análisis de los datos, por personal calificado, permitirá
saber si el estado del ambiente de manufactura se mantiene bajo control a través del tiempo.

 El ambiente debe ser muestreado durante una operación normal para permitir la colección de datos
significativos. Los muestreos deben ocurrir con los materiales en el área, las actividades de los
procesos en funcionamiento, y el personal en su puesto de trabajo y en actividad.
 6. Importancia de un Programa de Monitoreo Microbiológico para
Ambientes Controlados
 El monitoreo, cuando aplique, deberá incluir cuantificación de los muestreos de aire en los cuartos, del
aire comprimido que entre a áreas críticas, superficies, equipos, recipientes contenedores, pisos, paredes
y ropa del personal.

 El objetivo de un programa es obtener una estimación representativa de la bio-carga del ambiente.

 Cuando se cuente con un número representativo de datos, se analizarán y se evaluarán tendencias de los
mismos por parte de personal entrenado en el tema. Las tendencias pueden ser visualizadas mediante la
construcción de cartas de control estadístico que incluyan niveles de alerta y acción.

 Un ambiente controlado es definido por certificación correspondiente a una operación estándar. Los
parámetros que son evaluados incluyen integridad de filtros, velocidad del aire, patrones de aire,
renovaciones de aire, presiones diferenciales. Estos parámetros pueden afectar la bio-carga microbiológica
del ambiente. El diseño, construcción, y las operaciones, pueden variar mucho entre distintas empresas,
haciendo difícil generalizar requerimientos para estos parámetros.
 7. Conclusiones
 La puesta en práctica del monitoreo microbiológico ambiental es una herramienta que permite
caracterizar desde el punto de vista microbiológico en qué condiciones realizamos las diferentes
operaciones.
 La evaluación tanto del grado de contaminación del aire como de la higiene de los equipos y del
personal son necesarias para establecer un control de inspección higiénico sanitario y llevar a
cabo un programa de limpieza y desinfección adecuados.
 Los resultados de los ensayos microbiológicos requieren un análisis cuidadoso para evaluar las
tendencias.
 Se deben lanzar niveles de alerta si se exceden los límites de carga microbiana de cada área
 Si se exceden los niveles con frecuencia se debe hacer una evaluación y tomar medidas para
disminuirla.
¿Preguntas?
¡Muchas gracias!