Etude Phytochimique

Etude phytochimique :
1.1. Origine du matériel végétal :
Le matériel végétal est constitué dùne racine à bulbe dùne espèce locale
(algérienne) cette dernière est récoltée de la région de Chefachefa de la
wilaya dÈl-Taref le mois de juin en 2010, La plante fraichement récoltée
est conservée à lòmbre dans un endroit sec et aéré, et dùne racine à
bulbe dùne espèce étrangère (chinoise) vendue sur le marché algérien.
1.2. Tests préliminaires de la composition chimique :
Dans ce travail, nous avons appliqué les tests préliminaires sur les deux
espèces dàil (Algérien et chinois).
? Quinones libres :
Un gramme de matériel végétal sec et broyé est placé dans un tube avec
15 à 30 ml d`éther de pétrole. Après agitation et un repos de 24 h, les
extraits sont filtrés et concentrés au rotavapor. La présence de quinones
libres est confirmée par làjout de quelques gouttes de NaOH 1/10, lorsque
la phase aqueuse vire au jaune, rouge ou violet (26).
? Alcaloïdes :
Préparation d'extraits méthanoliques :
Deux grammes de matériel végétal, sec et broyé, sont ajoutés à 100 ml de

méthanol 50 %. Après une sonication de 15 min et agitation toute la nuit,
les extraits sont filtrés et évaporés à sec à làide dùn évaporateur rotatif.
Les résidus sont repris dans quelques ml de méthanol pur. Ces extraits
sont soumis aux deux tests suivants.
Test de Mayer :
À 0,5 g de matériel végétal en poudre, on ajoute 15 ml dÈtOH 70 %. Après

une sonication de 15 min et une agitation de 20 h, on laisse reposer lèxtrait
jusqu`à décantation complète, suivie dùne filtration et dùne évaporation à
sec. Le résidu est repris dans quelques ml d`HCl 32 %.
La formation dùn précipité jaune, après ajout de quelques gouttes du
réactif de Mayer (mercuritétraiodure de potassium), témoigne de la
présence dàlcaloïdes (26).
Résultats & Interprétation
? Terpénoïdes :
À un gramme de poudre ajouter 20 ml d`éther et laisser macérer 24 heures

puis filtrer. Prélever 10 ml du filtrat précédent que lòn évapore à sec,
dissoudre le résidu dans un ml dànhydride acétique puis ajouter un ml de
dichlorométhane et repartir la solution entre deux tubes à essai. A làide
dùne pipette ajouter un ml de H2SO4 concentré au fond du tube sans
agiter. La formation dùn anneau rouge brunâtre à la zone de contact des
deux liquides et une coloration violette de la couche surnageante revèlent
la présence de stérols et triterpènes : cèst la réaction de Liebermann
Buchard (27).
? Saponosides
Leur présence est déterminée quantitativement par le calcul de lìndice de

mousse, degré de dilution dùn décocté aqueux donnant une mousse
persistante dans des conditions déterminées. Deux grammes de matériel
végétal sec broyé à tester sont utilisés pour préparer une décoction avec
100 ml dèau. On porte à ébullition pendant 30 min. Après refroidissement
et filtration, on réajuste le volume à 100 ml. À partir de cette solution mère,
on prépare 10 tubes (1,3 cm de diamètre interne) avec 1, 2, ... 10 ml, le
volume final étant réajusté à 10 ml avec de lèau distillée.
Chacun des tubes est agité avec énergie en position horizontale pendant
15 secondes. Après un repos de 15 min en position verticale, on relève la
hauteur de la mousse persistante en cm. Si elle est proche de 1 cm dans le
Xème tube, alors lìndice de mousse est calculé par la formule suivante : I=
hx . 5/0.0X
I . indice de mousse
hx . hauteur de mousse (en cm) dans le X
X . position de tube
La présence de saponines dans la plante est confirmée avec un indice

supérieur à 100 (26).
? Coumarines
Test de détection : 2 g de matériel végétal en poudre sont mélangés à
10 ml de CHCl3. Après un chauffage de quelques min et une filtration, les

extraits chloroformiques sont soumis à une CCM1, le solvant étant le
mélange toluène / AcEt (93:10). La visualisation du chromatogramme,
après migration, se fait à 365 nm en absence et en présence de NH3.
Test de confirmation : 1 g de poudre végétale est placé dans un tube, en

présence de quelques gouttes dèau. Les tubes sont recouverts avec du
papier imbibé de NaOH dilué et sont portés à 28
ébullition. Toute fluorescence jaune témoigne de la présence de

coumarines après examen sous UV (26).
? Flavonoïdes
a. Préparation des extraits :
100 ml de n- hexane sont ajoutés à 20 g de poudre dans une fiole. La

mixture est mélangée, couverte et laissée reposer pendant 24h, puis filtrée
sur papier filtre Wattman stérile. Le filtrat jaune obtenu est concentré à 10
ml dans un bain-marie.
Lèxtrait concentré est refroidi et conservé au réfrigérateur. Répéter la

même opération avec de l`éthyle acétate et de lèau distillée.
Lèxtrait aqueux est jaune pâle. Lèxtrait acétate d`éthyle est vert foncé.
b. Un ml de NaOH à 10% est ajouté à 3 ml dèxtraits (aqueux, hexanique et

acétate d`éthyle précédemment préparés). Lòbservation dùne coloration
jaune dans lèxtrait acétate indique la présence de flavonoïdes (27).
? Tanins
1,5 g de matériel végétal sec sont placés dans 10 ml de MeOH 80 %. Après

15 minutes dàgitation, les extraits sont filtrés et mis dans des tubes.
Làjout de FeCl3 1 % permet de détecter la présence ou non de tanins. La
couleur vire au bleu noir en présence de tanins galliques et au brun
verdâtre en présence de tanins catéchiques (26).
1.3. Identification de l'Alliine par chromatographie sur couche mince

(CCM) (15) :
Support : Gel de silice 60 F254 (séché à Lair) (Merk ; 5x10, feuille).
Solution à examiner :
Mélanger 1 g de la poudre dàil avec 5 ml de méthanol, agiter environ 1 min

et filtrer.
Le filtrat obtenu sert de solution à examiner.
Solution de référence :
Dissoudre en chauffant 5 mg dàlanine dans 5 ml de méthanol et avec

quelques
gouttes dèau.
Dépôts :
20 ul de chaque solution à examiner et 10 ul de solution de référence.
Solvants d`élution :
Ethanol- isopropanol- eau- acide acétique glacial (8 : 4 : 4 :4) (cuve

saturée)
Développement : 8 cm Durée : 60 min environ
29
Détection :
Après évaporation complète du solvant (sous courant dàir chaud)

pulvériser une solution à 0,2% de ninhydrine dans un mélange isopropanol
- acide acétique (95 : 5) etchauffer pendant 5 min à 120°C
26- N. Dohou, k. yamni, S. Tahrouch, L.M. Idrissi Hassani, A. Badoc, N.

Gmira., (2003). screening phytochimique dùneendémique ibéro-
marocaine,thymelaea lythroides. bull. soc. pharm. bordeaux, 142, 66-70.
27- Arima Ousmane Mamadou., (2005). étude phytochimique et de

làctivité antipaludique in vivo et in vitro de momordica balsamina linn.
(cucurbitaceae). université de BAMAKO. Faculté de médecine, de
pharmacie et dòdonto-stomatologie. 48-49-50.
CARACTERISATION PHYTOCHIMIQUE
Pour une première analyse rapide des composés chimiques présents dans chaque extrait, nous
avons effectué le « screening » phytochimique suivant:
II-1- Tests phytochimiques préliminaires
Des tests préliminaires ont été effectués selon les méthodes décrites par Harborne [63]. 100
mg de chaque extrait ont été dissous dans 100 mL de solvant adéquat afin d’obtenir une
solution (S). Cette dernière est ajoutée à des réactifs spécifiques pour mettre en
évidence la présence de certains métabolites secondaires.
T1: Test aux stérols (et) ou triterpènes (Réaction de LIBERMANN):
1 mLde la solution S
0,2 mL d’anhydride acétique
4 gouttes de H2SO4(concentré)
La coloration violette virant au bleu-vert indique la présence de stérols et/ou triterpènes
T2 : Test aux tropolones (Réaction de WIUSTATER):
1 mLde la solution S+ 0,2 mLde MeOH
1 goutte de FeCl3 au 1/200
0,6 mL d’eau + 0,4 mLde CHCl3
Si la couleur de la phase organique vire instantanément au rouge, ceci indique la présence
de noyau tropolone.
T3 : Test aux quinones libres(Réaction de BORNTRAEGER):
2 mLde NaOH 1/10
Si la coloration de la phase aqueuse vire au rouge puis au violet ceci indique la présence
des quinones libres.
T4: Test des flavonoïdes (Réaction de WILSTATER)

2 mLEtOH-H2O (1-1, v/v)
Quelques gouttes de HCl + copeaux de Mg
La coloration orangée à rouge violacée et bleue indique la présence des flavonoïdes.
T5: Test aux alcaloïdes(réaction de MAYER)
+ quelques gouttes de HCl (concentré) jusqu'à l'obtention d'un milieu acide
+ 5 gouttes de réactif de Mayer
La formation d’un précipité blanc indique la présence des alcaloïdes.
Préparation du réactif de Mayer :
- Solution A: 13,5g HgCl2+ 20 mLH2O.
- Solution B: 49,8g KI + 20 mLH2O.
Les deux solutions sont mélangées et diluées avec de l'eau à un litre.
Harborne JB. 1998. Phytochemical Methods: A guide to Modern Techniques of Plant
Analysis 3rd ed. New York: Chapman. Hall. Int. Ed 234-245.
Résumé: L^'activité antioxydante des extraits est evaluée par deux tests, les deux extraits
metanoliques unt une activité antioxydante interéssante qui est en relation avec les teneurs en
composés phenoliques et en flavonoides.

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1.1. Origine du matériel végétal :

1.2. Tests préliminaires de la composition chimique :

Préparation d'extraits méthanoliques :

Deux grammes de matériel végétal, sec et broyé, sont ajoutés à 100 ml de

À 0,5 g de matériel végétal en poudre, on ajoute 15 ml d`EtOH 70 %. Après

Résultats & Interprétation

À un gramme de poudre ajouter 20 ml d`éther et laisser macérer 24 heures

Leur présence est déterminée quantitativement par le calcul de l`indice de

hx . hauteur de mousse (en cm) dans le X

La présence de saponines dans la plante est confirmée avec un indice

Test de détection : 2 g de matériel végétal en poudre sont mélangés à

10 ml de CHCl3. Après un chauffage de quelques min et une filtration, les

Test de confirmation : 1 g de poudre végétale est placé dans un tube, en

Résultats & Interprétation

ébullition. Toute fluorescence jaune témoigne de la présence de

a. Préparation des extraits :

100 ml de n- hexane sont ajoutés à 20 g de poudre dans une fiole. La

L`extrait concentré est refroidi et conservé au réfrigérateur. Répéter la

b. Un ml de NaOH à 10% est ajouté à 3 ml d`extraits (aqueux, hexanique et

1,5 g de matériel végétal sec sont placés dans 10 ml de MeOH 80 %. Après

1.3. Identification de l'Alliine par chromatographie sur couche mince

Mélanger 1 g de la poudre d`ail avec 5 ml de méthanol, agiter environ 1 min

Le filtrat obtenu sert de solution à examiner.

Dissoudre en chauffant 5 mg d`alanine dans 5 ml de méthanol et avec

20 ul de chaque solution à examiner et 10 ul de solution de référence.

Ethanol- isopropanol- eau- acide acétique glacial (8 : 4 : 4 :4) (cuve

Développement : 8 cm Durée : 60 min environ

Résultats & Interprétation

Après évaporation complète du solvant (sous courant d`air chaud)

26- N. Dohou, k. yamni, S. Tahrouch, L.M. Idrissi Hassani, A. Badoc, N.

27- Arima Ousmane Mamadou., (2005). étude phytochimique et de

II-1- Tests phytochimiques préliminaires

T1: Test aux stérols (et) ou triterpènes (Réaction de LIBERMANN):

0,2 mL d’anhydride acétique

La coloration violette virant au bleu-vert indique la présence de stérols et/ou triterpènes

T2 : Test aux tropolones (Réaction de WIUSTATER):

1 mLde la solution S+ 0,2 mLde MeOH

1 goutte de FeCl3 au 1/200

0,6 mL d’eau + 0,4 mLde CHCl3

Si la couleur de la phase organique vire instantanément au rouge, ceci indique la présence

T3 : Test aux quinones libres(Réaction de BORNTRAEGER):

2 mLde NaOH 1/10

des quinones libres.

T4: Test des flavonoïdes (Réaction de WILSTATER)

2 mLEtOH-H2O (1-1, v/v)

Quelques gouttes de HCl + copeaux de Mg

La coloration orangée à rouge violacée et bleue indique la présence des flavonoïdes.

T5: Test aux alcaloïdes(réaction de MAYER)

+ quelques gouttes de HCl (concentré) jusqu'à l'obtention d'un milieu acide

+ 5 gouttes de réactif de Mayer

La formation d’un précipité blanc indique la présence des alcaloïdes.

Préparation du réactif de Mayer :

- Solution A: 13,5g HgCl2+ 20 mLH2O.

- Solution B: 49,8g KI + 20 mLH2O.

Les deux solutions sont mélangées et diluées avec de l'eau à un litre.

Harborne JB. 1998. Phytochemical Methods: A guide to Modern Techniques of Plant

Analysis 3rd ed. New York: Chapman. Hall. Int. Ed 234-245.

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