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    POS Ag HBs V

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    Aurelien Juvénal
    Ce document décrit la procédure pour réaliser un test ELISA de dépistage de l'antigène de surface du virus de l'hépatite B. La procédure comprend les étapes de préparation des réactifs, du protocole expérimental, de l'interprétation des résultats et du matériel utilisé.

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    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :

    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HBs KTI HUMAN Applicable le :


    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    Rédigé par : Vérifié par : Validé par :


    Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine

    Date
    Signatures

    1. OBJECTIFS ET PORTÉE
    a. Objectif

    Le dosage de l’antigène de surface du VHB permet le dépistage de celui-ci chez une personne.
    b. Personnes concernées
    Personnel de l’unité des ELISA
    2. Domaine d’application

    Unité des ELISA


    3. RÉFÉRENCES

    Fiche d’utilisation du réactif antigène HBs


    4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS

    Tâches Personnes autorisées Responsables

    Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL

    Validation du test Personnels de l’unité des ELISA MBEP Christian


    et le responsable technique

    5. PRINCIPE
    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HBs KIT HUMAN Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    Le principe du dosage de l’antigène HBs repose sur la technique l’ELISA de type sandwich qui utilise des
    anticorps anti-HBs fixés dans les puits et conjugués à la biotine ; au cours de l’incubation les antigènes
    présent dans l’échantillon se fixent aux anti-HBs et aux anti-HBs biotinylés un complexes anticorps-
    antigène-anticorps se forme ;  le conjugué 2 se fixe à ce complexe le lavage permet l’élimination des
    composants non fixés, le TMB est ajouté une coloration bleu se forme et vire au jaune à l’ajout du stop .
    L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration d’Ag HBs  dans l’échantillon.
    6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST

     PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE


    Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+24
    NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30 min avant utilisation
     MODE OPERATOIRE

    - Ajouter 100ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits ; recouvrir d’un film protecteur
    adhésif et incuber 60 min à 37 ͦ c
    - Diluer WCON-1 au 10+100 et ajouter 50ul dans les puits du control négatif, positif et
    l’échantillon mélangé prudemment incuber 60 min à 37 ͦ c
    - Diluer WCON-2 au 10+100 et ajouter 50ul de la solution diluée dans les puits mélangé
    prudemment recouvrir d’un film protecteur adhésif et incuber 30 min à 37 ͦ c
    - Laver 04 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 400ul de solution par
    puits)
    - Diluer le SUBSTRAT au 10+100 et ajouter 100ul de la solution diluée dans les puits recouvrir
    d’un film protecteur adhésif et incuber 20 min à 18-24 ͦ c à l’abri de la lumière
    - Ajouter 150ul du Stop
    - Lire à 450nm de densité optique dans les 3 min qui suivent l’ajout du stop.
    Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale.
    Le test est valable si : CP high > 1 ; MCN < 0.120 ; DO low / VS ≥ 1 et ≤ 4.5

    Interprétation des résultats qualitatifs


    Valeur seuil (VS) = moyenne CN + 0,120

    DO P
    - Si CO
    <1 → NEGATIVE

    DO P
    - Si CO
    =0,9−1,1 → refaire le test en doublant les puits du patient et si même résultat est observé,
    considéré POSITVE

    DO P
    - Si CO
    ≥1 → POSITIVE
    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HBs KIT HUMAN Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    7. MATERIELS UTILISES

     Micropipettes
     Plaque pour les puits
     Puits pour le test
     Réactif
     Gants
     Embouts
     Chronomètre
     Fiche de paillasse
     Combi Wash
     Huma Reader
     Eau distillée

    PROCÉDURE DE REALISATION DE Pages :
    CERIMED ANALYSES L’Ag HBs KIT HUMAN Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1

    ATTESTATION DE LECTURE
    Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures

    Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11

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