Chapitre 4 Les Dosages Spectrophotométriques - Prof

Thème : Constitution et
Première Spécialité Cours

transformations de la matière
Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques
I La concentration d’une espèce dissoute
La concentration d’un soluté en solution s’exprime en utilisant :

 soit la concentration en masse cm :
La concentration en masse d’un soluté est la masse de soluté dissous par litre de solution. Elle se note cm et
se mesure en g.L–1.
cm : concentration en masse en gramme par litre (g.L–1)

cm = m : masse de soluté en gramme (g)
V : volume de la solution en litre (L)
 soit la concentration en quantité de matière c (parfois appelée concentration tout court) :

La concentration en quantité de matière d’un soluté est la quantité de matière de soluté dissous par litre
de solution. Elle se note c et se mesure en mol.L–1.
c : concentration en quantité de matière en mole par litre (mol.L–1)
c = n : quantité de matière de soluté en mole (mol)
V : volume de la solution en litre (L)
Les deux concentrations sont liées par la relation :
cm = c × M M : masse molaire du soluté en g.mol–1

m M×n
En effet : cm = Or : m = M × n Donc : cm = = n ×M = c×M
V V V
Exercices :
a) On dissout 3,0 g de poudre de permanganate de potassium dans 150 mL d’eau. Calculer la concentration
en masse de permanganate de potassium de la solution obtenue.
cm = ,
= = 20 g.L–1
−
×
b) On dissout 0,50 mol de saccharose pour obtenir une solution de 200 mL. Calculer la concentration en
quantité de matière de saccharose.
,
c = = = 2,5 mol.L–1
× −
c) Après un effort, on prépare une boisson de concentration en masse de glucose de 18,0 g.L–1. Calculer la
concentration en quantité de matière c de cette solution (Mglucose = 180,0 g.mol–1)
,
c= =
,
= 0,100 mol.L–1
II Préparation de solutions
1) Par dissolution d’un soluté

Préparer une solution par dissolution consiste à dissoudre un soluté dans un solvant.
Première Spécialité Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques 1/5

On prépare toujours une solution dans une fiole jaugée suivant un protocole bien précis.
Protocole de dissolution
1) Peser la masse de solide dans une coupelle en utilisant la fonction tare de la balance.
2) Introduire le solide dans une fiole jaugée en utilisant un entonnoir et rincer la coupelle à l’eau distillée.
3) Ajouter de l’eau distillée aux ¾. Boucher et agiter pour dissoudre tout le solide.
4) Compléter d’eau distillée jusqu’au trait de jauge. Boucher, agiter pour homogénéiser une dernière fois.
2) Par dilution d’une solution mère

Diluer une solution, appelée solution mère, c’est lui ajouter du solvant pour obtenir une solution moins
concentrée, appelée solution fille.
La solution mère est la solution de départ. La solution fille est la solution obtenue après dilution.
Protocole de dilution d’une solution aqueuse
1) Prélever le volume Vmère à l’aide d’une pipette jaugée munie d’une propipette.
2) Introduire ce volume dans une fiole jaugée de volume Vfille.
3) Ajouter de l’eau distillée aux ¾. Boucher et agiter pour homogénéiser la solution.
4) Compléter d’eau distillée jusqu’au trait de jauge. Boucher, agiter pour homogénéiser une dernière fois.
 Formule de la dilution
Lorsqu’on dilue une solution mère, on ne fait qu’ajouter de l’eau à un prélèvement de
solution mère. On n’ajoute pas de soluté en plus.
La masse de soluté contenu dans le prélèvement de solution mère se retrouve donc
intégralement dans la solution fille.
On a donc : mmère = mfille
La masse de soluté se conserve au cours de la dissolution.
On a donc la formule de la dilution : cm,mère × Vmère = cm,fille × Vfille
On utilise également une notation moins lourde : cm0 × V0 = cm1 × V1

cm0 et cm1 doivent être en g.L–1. V0 et V1 doivent être en litre (L).

Le nombre d’entités, donc la quantité de matière se conserve au cours de la dissolution : nmère = nfille
On a donc la formule de la dilution : cmère × Vmère = cfille × Vfille
On utilise également une notation moins lourde : c0 × V0 = c1 × V1

c0 et c1 doivent être en mol.L–1. V0 et V1 doivent être en litre (L).
 Facteur de dilution
le plus grand
Le facteur de dilution F est défini par : F = = = =
le plus petit
F est sans unité et toujours supérieur à 1.
III Les dosages spectrophotométriques
1) Couleur d’une solution

Quand une solution colorée est traversée par de la lumière blanche, elle se comporte comme un filtre coloré qui
transmet certaines radiations et en absorbe d’autres.
Par exemple, une solution magenta de permanganate de

rouge rouge
potassium laisse passer les radiations magenta (bleue et rouge) et vert
absorbe les radiations vertes, complémentaires du magenta. bleu bleu
Dans le cercle chromatique, les couleurs complémentaires sont diamétralement

opposées.
La couleur d’une solution est celle qui est complémentaire de la couleur des
radiations absorbées.
Autrement dit, les radiations principalement absorbées par une solution sont
celles dont la couleur est complémentaire de la couleur de la solution.
Exemple : une solution de bleu de méthylène absorbe principalement les radiations jaunes, couleur
complémentaire du bleu de la solution.
2) Absorbance d’une solution

Pour être plus précis, on définit l’absorbance mesurant la capacité d'un milieu à absorber une radiation
de longueur d’onde λ qui le traverse.
Plus une solution est concentrée, plus elle semble foncée, plus son absorbance est grande. Si la solution est
transparente, alors la lumière n’est pas absorbée et son absorbance est nulle.

L’absorbance, notée A, est une grandeur positive et sans unité.
Elle est mesurée par un appareil appelé spectrophotomètre.
Le spectrophotomètre envoie une radiation de longueur d’onde λ et

d’intensité I0 données et la compare avec l’intensité lumineuse I sortant d’une
solution. Il calcule et affiche l’absorbance A.
Remarque : l’absorbance d’une solution dépend principalement de la nature de la solution, de sa concentration et

de la longueur d’onde λ de la lumière traversant la solution.
3) Spectre d’absorption d’une solution

En plaçant une solution dans la cuve du spectrophotomètre, on peut mesurer son absorbance pour chaque longueur
d’onde de la lumière visible (entre 400 nm et 800 nm).
On obtient le graphique appelé « spectre d’absorption » représentant

l’absorbance A de la solution en fonction de la longueur d’onde λ.
On constate que l’absorbance passe par un maximum Amax pour une valeur précise
de longueur d’onde notée λmax.
La longueur d’onde λmax correspond à la couleur la plus absorbée, qui est

complémentaire de la couleur de la solution.
4) Loi de Beer-Lambert
D’après la loi de Beer-Lambert, l’absorbance de la solution (pour
une longueur d’onde donnée) est proportionnelle à la
concentration de cette solution.
Par exemple, plus la quantité de sirop de menthe dans de l’eau

augmente, plus sa concentration est grande, plus la boisson est vert
foncé, plus son absorbance est grande.
Elle se note donc : A= k×c

Avec A : absorbance (sans unité)
k : constante (en L.mol–1)
c : concentration en quantité de matière (en mol.L–1)
La constante k s’exprime en fonction de la longueur ℓ de la cuve et d’une autre constante notée ε (lettre « epsilon »
dans l’alphabet grec) : A= ε×ℓ×c ou A = εℓc

Avec A : absorbance (sans unité)
ℓ : longueur de la cuve (en cm)
c : concentration en quantité de matière (en mol.L–1)
ε : coefficient d’extinction molaire (en L.mol–1.cm–1)
Ce coefficient caractérise la capacité qu’a une espèce à absorber la lumière d’une longueur d’onde donnée.
Remarque : La loi de Beer-Lambert est valable quand la solution n’est pas trop concentrée. Dans le cas contraire,
absorbance et concentration ne sont plus proportionnelles.

5) Dosages spectrophotométriques par étalonnage
Doser une espèce chimique en solution consiste à déterminer la concentration de
cette espèce.
Plusieurs méthodes existent pour effectuer un dosage. L’une d’elles est le dosage
spectrophotométrique par étalonnage, utilisant des solutions étalons.
Les différentes étapes de ce dosage sont les suivantes :
 1ère étape : Choix de la longueur d’onde de travail λmax

Grâce au spectre d’absorption, on choisit une longueur d’onde λmax pour laquelle
l’absorbance de l’espèce à doser est maximale, afin d’augmenter la précision des
mesures. Par exemple, on choisira une longueur d’onde correspondant au rouge pour
une solution de sulfate de cuivre bleu turquoise (cyan).
 2ème étape : Préparation des solutions étalons de concentrations

connues, par dilutions successives
On réalise, à partir d’une solution mère de l’espèce à doser, une échelle de teinte
en diluant successivement la solution mère pour obtenir des solutions filles de
moins en moins concentrées et surtout de concentrations connues. Ces solutions
sont appelées solutions étalons.
 3ème étape : Construction de la droite d’étalonnage : A = f (c)

Pour la longueur d’onde λmax, on mesure l’absorbance A des solutions étalons.
On trace la droite d’étalonnage représentant l’absorbance des solutions
étalons en fonction de leur concentration : A = f (c).
On sait qu’il s’agit d’une droite passant par l’origine car il y a proportionnalité
entre A et c d’après la loi de Beer-Lambert.
 4ème étape : Mesure de l’absorbance A0 de la solution de concentration inconnue c0
 5ème étape : Utilisation de la droite d’étalonnage pour déterminer la concentration inconnue c0
On peut procéder :
1) par lecture graphique sur la droite d’étalonnage.
2) par calcul à partir de l’équation de la droite.

La droite d’étalonnage passe par l’origine.
Son équation est de la forme : A = k × c avec k : coefficient directeur
de la droite qu’il faut calculer.
Pour cela : - On choisit un point M sur la droite,
- On lit ses coordonnées (cM, AM),
- On calcule le coefficient directeur k : k = en L.mol–1,
- On peut alors calculer la concentration c0 avec l’équation de la droite : c0 = .
Exemple :
Point M de coordonnées : (cM = 1,8 × 10–6 mol.L–1 ; AM = 0,3) M
0,3 –1
Coefficient directeur : k = AM = 5
−6 = 1,7 × 10 L.mol
cM 1,8 × 10
On mesure l’absorbance A0 = 0,22 d’une solution de
concentration inconnue. A 0,22
Sa concentration vaudra : c0 = 0 = = 1,3 × 10–6 mol.L–1.
k 1,7 × 105

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Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques

I La concentration d’une espèce dissoute

La concentration d’un soluté en solution s’exprime en utilisant :

cm : concentration en masse en gramme par litre (g.L–1)

 soit la concentration en quantité de matière c (parfois appelée concentration tout court) :

Les deux concentrations sont liées par la relation :

cm = c × M M : masse molaire du soluté en g.mol–1

1) Par dissolution d’un soluté

Première Spécialité Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques 1/5

2) Par dilution d’une solution mère

Protocole de dilution d’une solution aqueuse

On utilise également une notation moins lourde : cm0 × V0 = cm1 × V1

Première Spécialité Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques 2/5

On utilise également une notation moins lourde : c0 × V0 = c1 × V1

F est sans unité et toujours supérieur à 1.

III Les dosages spectrophotométriques

1) Couleur d’une solution

Par exemple, une solution magenta de permanganate de

Dans le cercle chromatique, les couleurs complémentaires sont diamétralement

2) Absorbance d’une solution

Première Spécialité Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques 3/5

Le spectrophotomètre envoie une radiation de longueur d’onde λ et

Remarque : l’absorbance d’une solution dépend principalement de la nature de la solution, de sa concentration et

3) Spectre d’absorption d’une solution

On obtient le graphique appelé « spectre d’absorption » représentant

La longueur d’onde λmax correspond à la couleur la plus absorbée, qui est

Par exemple, plus la quantité de sirop de menthe dans de l’eau

Elle se note donc : A= k×c

dans l’alphabet grec) : A= ε×ℓ×c ou A = εℓc

Première Spécialité Chapitre 4 : Les dosages spectrophotométriques 4/5

 1ère étape : Choix de la longueur d’onde de travail λmax

 2ème étape : Préparation des solutions étalons de concentrations

 3ème étape : Construction de la droite d’étalonnage : A = f (c)

 4ème étape : Mesure de l’absorbance A0 de la solution de concentration inconnue c0

2) par calcul à partir de l’équation de la droite.

- On peut alors calculer la concentration c0 avec l’équation de la droite : c0 = .

Première Spécialité Chapitre 3 : Les dosages spectrophotométriques 5/5

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