Microtubules

Les microtubules
Les microtubules
1. Structure et dynamique
1.1 Dimères de tubuline, fixation de GTP
1.2 Nucléation, polymérisation
1.3 Modifications post-traductionnelles et dynamique in vivo
1. Protéines associées aux microtubules
2.1 Protéines de régulation
2.2 Moteurs moléculaires
3. Rôles des microtubules
3.1 Forme et déplacement de la cellule
3.2 Transports et mouvements intracellulaire
4. Exemples de pathologies associées
Structure modulaire du microtubule
Monomères de tubuline (α β)
hétérodimères de tubuline
Microtubule
(13 protofilaments)
Fuseaux MT +
mitotiques Autres protéines
Axonème
(9+2 microtubules)
Polarisation du microtubule
Polarisation structurale:
dimères orientés : sous-unité α = extrémité –
sous-unité β = extrémité +
GTP/GDP sur sous-unité β : GTP extrémité + (coiffe)

GDP extrémité -
Polarisation fonctionnelle:
Extrémité - : dépolymérisation rapide
Extrémité +: polymérisation rapide
CONSEQUENCE:
Transports directionnels (vésicules, chromosomes…)
Orientation dans la cellule (polarité cellulaire, fuseau mitotique)
Le dimère de tubuline
Monomère: 3 sous-domaines:
- liaison au GTP (Nter, jaune)
- liaison au drogue (vert)
- liaison aux MAP (Cter, violet)
Sous-unité α : extrémité –
GTP non échangeable
Sous-unité β : extrémité +
GTP hydrolysable/GDP
M-loop : interactions avec

protofilament voisin
Formation du dimère de tubuline
Assemblage des 2 monomères + 2 GTP
fait intervenir aux moins 5 protéines
(cofacteurs A-E)
Cofacteurs A et B: participent au repliement (après action des chaperonines)
Supercomplexe C-D-E : dimérisation, activité GAP (pour sous-unité β)

Les microtubules
Polymérisation de la tubuline
Sous-unité α d’un dimère se lie à la sous-unité β du dimère précédent
Induction de l’hydrolyse du GTP (activité GAP de la sous-unité α)
Hydrolyse plus lente que la fixation d’un nouveau dimère : « coiffe de GTP »
Polymérisation de la tubuline
Sous-unité b liée au GTP :

liaison forte entre les dimères de tubuline
maintient rectiligne des protofilaments
vitesse polymérisation>vitesse dépolymérisation
Sous-unité b liée au GDP :

changement conformationnel
liaison plus faible entre les dimères
courbure des protofilaments si exposée
risque de dépolymérisation rapide
La coiffe de GTP permet un allongement du MT

Perte de la coiffe = catastrophe (dépolymérisation rapide)
Instabilité du microtubule
allongement Dépolymérisation rapide
Extrémité + : rôle essentiel de la coiffe de GTP

Video 161
Instabilité du microtubule
Exemple : le « tapis roulant » (threadmilling)
Concentration en tubuline > concentration critique

Addition de dimères en (+) plus rapide que la dépolymérisation en (-)
cf: décoloration au laser
La nucléation
Concentration cellulaire en dimère de tubuline < concentration critique

= pas d’allongement anarchique de microtubule dans la cellule
Allongement du MT impose le blocage de l’extrémité (-)
Centre organisateur des MT (MTOC, centrosome) :

Centrioles
Matériel péri-centriolaire (complexe protéique) contenant les sites de nucléation
Site de nucléation = anneau de tubuline γ
Le centrosome (MTOC)
MT
endoplasmic reticulum
Anaphase : Golgi apparatus
centrosome périnucléaire nucleus
MT occupent le cytoplasme centrosome
Complexes en anneau de tubuline γ
Site de nucléation :
favorise la polymérisation
fixe l’orientation du MT
Complexes en anneau de tubuline γ
Modèle:
6 petits complexes (γ-TuSC) contenant
chacun 2 tubulines γ
12 tubulines γ en contact avec la tubuline α

le 13ème protofilament se forme par
interaction avec le 12ème et le 1er
Autres protéines dans le complexe
Rem: « +3 start helix » : contact latéraux

entre protofilament majoritairement α-β
Diversité des tubulines
Tubuline α et β dans les microtubules

Autres tubulines dans structures particulières (centrosome…)
Polyglutamylation : 1-6 glutamates Modifications post-traductionnelles

Polyglycylation : 3-40 glycines augmentent la diversité des tubulines
Cycles tyrosylation/détyrosylation
Les tubulines modifiées peuvent avoir

des localisations particulières :
axonème, centriole, cils…
Ex: centriole contient tubuline polyglu
Ces modifications semblent

essentiellement modifier les interactions
avec les autres protéines (moteurs
moléculaires, stabilisation…)
Les microtubules
Les protéines associées aux microtubules: MAP
Protéines déstabilisatrices :
- coupure du microtubule (ex: katanin) créant de nouvelles extrémités
- déclenchent hydrolyse du GTP en (+) : perte de la coiffe
- séquestration des dimères
Nombreuses protéines de déstabilisation interviennent au cours du cycle
Régulation par d’autres protéines (kinase, phosphatase…)

Les protéines associées aux microtubules: MAP
Protéines stabilisatrices:
- inhibent la dépolymérisation
- peuvent lier les MT en faisceaux réguliers
- liaisons avec autres composants du cytosquelette, membranes etc
Heald, R. et al. J Cell Sci 2002;115:3-4
Les moteurs moléculaires
Kinésines et dynéines
Protéines ATPases (énergie), diméres (processivité)

Mouvement par changement conformationnel
Les moteurs moléculaires
Dynéines: vers le (-) Vidéo 167

Kinésines: vers le (+)
Adaptateurs: plusieurs objets transportés par un seul moteur
Ex des kinésines: actives seulement si cargo+adapateur sont fixés

(évite le transport à vide)
Adaptateurs: plusieurs objets transportés par un seul moteur
Les microtubules
Exemples de pathologies associées
Rôle de l’instabilité dynamique
A partir des MTOC , les MT s’allongent et disparaissent en permanence
Exploration aléatoire de l’ensemble de l’espace
Stabilisation sélective en fonction déstabilisation sélective en fonction

des MAP présentes des MAP présentes
Vidéo 163
Déplacement cellulaire
Interventions de tout le cytosquelette

(protéines de liaison: spectraplakines)
MT stabilisés par protéines de

liaison à (+) (+TIPs)
Allongement MT en réponse à
signal externe
Déplacement cellulaire
Exemple des contacts focaux

Le fuseau mitotique
Appareil mitotique: ensemble complexe de protéines dont l’action est coordonnée

Centrioles transportés aux pôles, les chromosomes en plaques puis séparation
Mouvements des chromosomes lors de la mitose
Positionnement en
plaque métaphasique
Séparation et
migration aux pôles
Mouvements des chromosomes lors de la mitose
Ensemble de protéines moteurs et

de stabilisation/déstabilisation du
kinétocore permettent le
mouvement des chromosomes
Division cellulaire et polarité
Les transports
Exemple de transport: formation du flagelle des spermatozoïdes

Les transports
Cellules spécialisées (neurones): orientation des MT dans l’axone

Pathologies associées aux microtubules
Exemple de formation d’aggrégats de la protéine Tau

PHF: paired helical filament
Mécanisme d’action de ces aggrégats n’est pas encore clair

Exploitation des MT par les virus (trafic des protéines)

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Les microtubules

GTP/GDP sur sous-unité β : GTP extrémité + (coiffe)

M-loop : interactions avec

Cofacteurs A et B: participent au repliement (après action des chaperonines)

Supercomplexe C-D-E : dimérisation, activité GAP (pour sous-unité β)

Sous-unité α d’un dimère se lie à la sous-unité β du dimère précédent

Induction de l’hydrolyse du GTP (activité GAP de la sous-unité α)

Sous-unité b liée au GTP :

Sous-unité b liée au GDP :

La coiffe de GTP permet un allongement du MT

allongement Dépolymérisation rapide

Extrémité + : rôle essentiel de la coiffe de GTP

Concentration en tubuline > concentration critique

Concentration cellulaire en dimère de tubuline < concentration critique

Allongement du MT impose le blocage de l’extrémité (-)

Centre organisateur des MT (MTOC, centrosome) :

12 tubulines γ en contact avec la tubuline α

Autres protéines dans le complexe

Rem: « +3 start helix » : contact latéraux

Tubuline α et β dans les microtubules

Polyglutamylation : 1-6 glutamates Modifications post-traductionnelles

Les tubulines modifiées peuvent avoir

Ces modifications semblent

Nombreuses protéines de déstabilisation interviennent au cours du cycle

Régulation par d’autres protéines (kinase, phosphatase…)

Protéines ATPases (énergie), diméres (processivité)

Dynéines: vers le (-) Vidéo 167

Ex des kinésines: actives seulement si cargo+adapateur sont fixés

A partir des MTOC , les MT s’allongent et disparaissent en permanence

Exploration aléatoire de l’ensemble de l’espace

Stabilisation sélective en fonction déstabilisation sélective en fonction

Interventions de tout le cytosquelette

MT stabilisés par protéines de

Exemple des contacts focaux

Appareil mitotique: ensemble complexe de protéines dont l’action est coordonnée

Ensemble de protéines moteurs et

Exemple de transport: formation du flagelle des spermatozoïdes

Cellules spécialisées (neurones): orientation des MT dans l’axone

Exemple de formation d’aggrégats de la protéine Tau

Mécanisme d’action de ces aggrégats n’est pas encore clair

Exploitation des MT par les virus (trafic des protéines)

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