CS 05888

ANNEE 2011-2012
THESE N° : 001
Université de Ouagadougou Université Claude Bernard Lyon1
Ecole Doctorale de la Santé Ecole Doctorale 341
THESE UNIQUE EN COTUTELLE
Doctorat es Sciences d’Application Pharmaceutique

Option : Pharmacologie Appliquée
Par
OUEDRAOGO Noufou
ETUDES PHYTOCHIMIQUE ET BIOLOGIQUE

DES METABOLITES SECONDAIRES DE
PTEROCARPUS ERINACEUS POIR.
(FABACEAE)
Soutenue le 14 Juin 2012

Devant le jury :
Présidente du jury :
Pr Odile G. NACOULMA : Biochimie/Université de Ouagadougou
Membres du jury :
Pr Jean-Baptiste NIKIEMA : Pharmacognosie/Université de Ouagadougou
Pr Jean KOUDOU : Chimie organique-Phytochimie/CAMES
Pr Marie-Geneviève DIJOUX-FRANCA : Pharmacognosie/Université Claude
Bernard Lyon 1
Pr José CHULIA : Pharmacognosie/Université de Limoges
Pr Innocent P. GUISSOU : Pharmacologie/Université de Ouagadougou
i
DEDICACE
Je dédie ce travail
A mon papa et mes mamans.

A mes frères, sœurs et toute ma famille.
A mes amis.
Et à tous ceux, qui d’une manière ou d’une autre ont
contribué à l’aboutissement de ce travail.
ii
REMERCIEMENTS
Ce travail a été réalisé grâce à l’appui financier de l’Agence Universitaire de la Francophonie
(AUF) et à l’appui technique du département de la Médecine-Pharmacopée
Traditionnelles/Pharmacie de l’Institut de Recherche en Science de la Santé (MEPHATRA-
PH/IRSS).
Nous tenons à exprimer notre reconnaissance :
Au Professeur Innocent Pierre GUISSOU
Directeur de l’école doctorale de la santé et coordonnateur de la formation doctorale en
pharmacologie et toxicologie appliquées à l’UFR/SDS à l’université de Ouagadougou, notre
directeur de thèse. Malgré vos multiples occupations, vous avez accepté de nous recevoir dans
votre équipe de recherche et de guider nos premiers pas dans le monde de la recherche. Nous
tenons à vous remercier pour la disponibilité, les conseils, l’encadrement et la confiance que
vous aviez placée en nous tout au long de ces années de coopération. Votre rigueur
scientifique et votre souci pour un travail bien fait nous ont séduits lors de notre formation.
Au Professeur Marie-Geneviève DIJOUX-FRANCA
Responsable du laboratoire de botanique, pharmacognosie et phytothérapie à la Faculté de
pharmacie de Lyon 1(ISPB), notre directrice de thèse. Nous tenons à vous remercier pour
nous avoir accueillis dans votre laboratoire, nous avoir fait confiance. Votre générosité et vos
conseils nous ont encouragés tout au long de ce travail. Un grand merci pour l’intérêt que
vous aviez accordé à ce travail. Nous avons été touchés par vos qualités scientifiques et
humaines, votre simplicité et votre disponibilité.
Au Professeur Jean KOUDOU
Directeur des programmes du Conseil Africain et Malgache pour l’Enseignement Supérieur
(CAMES) à Ouagadougou, codirecteur de thèse. Nous tenons à vous remercier pour votre
disponibilité, vos conseils, votre soutien moral et votre encadrement durant ce temps malgré
vos nombreuses occupations et vos lourdes responsabilités. Nous avons admiré vos qualités
scientifiques et humaines au cours de nos travaux.
Au Docteur Anne-Emmanuelle HAY
Maitre de conférences au laboratoire de botanique, pharmacognosie et phytothérapie de la
Faculté de pharmacie de Lyon 1(ISPB), codirectrice de thèse. Nous vous remercions pour
nous avoir guidés constamment dans notre travail, nous avoir aidés par votre expérience et
vos précieux conseils. Merci pour votre amour du travail bien fait, votre sympathie, votre
esprit d’ouverture, votre constante disponibilité et votre assistance multiforme sans faille tout
iii
au long de ce travail. Veuillez trouver dans ce travail l’expression de notre sincère gratitude
et notre profond respect.
A nos maîtres et juges

- Professeur Odile G. NACOULMA, vous nous faites l’honneur pour avoir accepté
d’évaluer ce travail et de présider ce jury malgré votre emploi du temps chargé
- Professeur Jean-Baptiste NIKIEMA, pour votre disponibilité et pour avoir fait partir
de ce jury malgré vos multiples occupations
- Professeur José CHULIA, pour l’honneur que vous nous faites en acceptant de juger
ce travail
Nous tenons à exprimer toute notre gratitude :

Au Professeur G. COMTE, directeur du Centre d’Etude des Substances Naturelles (CESN) et
son équipe (Université de Lyon 1), pour nous avoir ouvert les portes de son laboratoire pour la
réalisation des tests antioxydants et les analyses en CLHP.
Au Dr Irène GARCIA, du département de Pathologie et d’immunologie, CMU, Université de
Genève, Suisse, pour la réalisation des tests sur la formation de TNF et NO de cultures
cellulaires de macrophages.
A Mme Monique LUSSIGNOL pour nous avoir initiés en méthodologie de fractionnement,
isolement et identification en phytochimie.
A Mme Christine BAYET pour la qualité du traitement des données des spectres RMN.
Au Dr S. MICHALET, Mme CARRIER Michèle, Mr S. ACHARD et tout le personnel du
laboratoire de botanique, pharmacognosie et phytothérapie à l’ISPB pour leurs conseils, leur
soutien et leurs encouragements.
Au Dr M. LOMPO, Directeur adjoint de l’IRSS, pour la qualité de son encadrement lors des
travaux de pharmacologie.
Aux maitres de recherche Dr S. OUEDRAOGO, Dr F. KINI, Dr H. MILLOGO pour leurs
nombreux conseils, leur soutien moral et leur aide scientifique et technique.
Au Dr R. W. SAWADOGO et Dr A. TIBIRI pour leur disponibilité, leur esprit d’équipe et
leur qualité d’encadrement lors des traitements des données pharmacologiques.
A Dr N. SOME, Dr Y. OUEDRAOGO, Dr S. SOURABIE, Dr A. TRAORE, Dr S. TRAORE,
Dr B. OUATTARA, Dr J.-C. OUEDRAOGO, Mr I. TISSOLOGO, Mr B. YARO, Mr G. R.
KABORE, Mme YOUGBARE, Mme RAMDE pour leur soutien inestimable ; et à tout le
personnel de MEPHATRA-PH.
iv
A Dr M. TIENDREBEOGO, Dr HILOU, Dr M. COMPAORE et Dr R. MEDA et le personnel
du LABIOCA à l’UFR/SVT pour leurs conseils et leur soutien.
A mes amis Dr J.-P. OUEDRAOGO, Dr J. KABORE, L. BELEMNABA, C. HIEN-ZAGUE,
G. OUEDRAOGO, S. ILBOUDO, Dr R. BOLY, Dr F. ZONGO
A Mr Sébastien OUEDRAOGO et sa famille pour leur soutien moral et les encouragements
A Mme Alice ILBOUDO et sa famille, pour leur soutien moral.
Aux familles LUSSIGNOL et BAYET pour leur soutien et leur accompagnement hors
pédagogique tout au long de mes séjours à LYON.
A tous mes enseignants de l’UFR/SDS et de l’UFR/SVT de l’université de Ouagadougou, du
lycée municipal de Bobo Dioulasso et de l’école primaire publique de Gbapleu (RCI) pour
l’enseignement et les conseils que j’ai reçus durant toutes ces années d’études.
v
TABLE DES MATIERES
DEDICACE ................................................................................................................................. i
REMERCIEMENTS ................................................................................................................. iii
TABLE DES MATIERES ........................................................................................................ vi
TABLE DES FIGURES .......................................................................................................... xiii
TABLE DES TABLEAUX ..................................................................................................... xvi
ABREVIATIONS .................................................................................................................. xvii
RESUME .................................................................................................................................. xx
ABSTRACT ............................................................................................................................ xxi
LISTE DES PUBLICATIONS ............................................................................................... xxii
Introduction .............................................................................................................................. 1
CHAPITRE 1 : GENERALITES ............................................................................................... 6
1.1 La famille des Fabaceae ............................................................................................. 7
1.1.1.Position systématique de la famille des Fabaceae ou Leguminosae ......................... 7
1.1.2. Caractères morphologiques des Fabaceae ................................................................ 7
1.1.3.Utilisations en médecine traditionnelle ..................................................................... 8
1.2 Le genre Pterocarpus ................................................................................................. 9
1.2.1.Caractères morphologiques ..................................................................................... 10
1.2.2.Utilisation en médecine traditionnelle ..................................................................... 10
1.2.3.Métabolites secondaires isolés du genre Pterocarpus............................................. 12
1.2.4.Données pharmacologiques des métabolites isolés et extraits du genre Pterocarpus
.......................................................................................................................................... 21
1.3 L’espèce P. erinaceus .............................................................................................. 23
1.3.1.Caractères morphologiques ..................................................................................... 23
1.3.2.Répartition de P. erinaceus ..................................................................................... 24
1.3.3.Utilisations traditionnelles....................................................................................... 25
1.3.4.Autres utilisations .................................................................................................... 26
1.3.5.Métabolites secondaires isolés de l’espèce P. erinaceus ........................................ 26
1.3.6.Données pharmacologiques des molécules isolées de P. erinaceus ....................... 27
1.3.7.Données pharmacologiques antérieures sur l’espèce P. erinaceus ......................... 27
vi
1.4 Inflammation ............................................................................................................ 28
1.4.1.Définition ................................................................................................................ 28
1.4.2.Les causes de l’inflammation .................................................................................. 28
1.4.3. Immunité innée et réaction inflammatoire ............................................................. 28
1.4.4.Types d’inflammations ............................................................................................ 29
1.4.41.La réaction inflammatoire aiguë ....................................................................... 29
1.4.4.2.L’inflammation chronique................................................................................ 29
1.4.5.Les médiateurs de l’inflammation ........................................................................... 29
1.4.5.1.Le système du complément .............................................................................. 29
1.4.5.2.Amines vasoactives .......................................................................................... 30
1.4.5.3.Protéases et peptides......................................................................................... 30
1.4.5.4.La substance P .................................................................................................. 31
1.4.5.5.Médiateurs lipidiques ....................................................................................... 31
1.4.5.6.Le Platelet activating factor (PAF) ................................................................... 33
1.4.5.7.Les cytokines .................................................................................................... 34
1.4.5.8.Les radicaux libres oxygénés (RLO) ................................................................ 35
1.4.5.9.Le monoxyde d’azote (NO) .............................................................................. 35
1.4.6.Les étapes de l’inflammation aiguë ......................................................................... 36
1.4.6.1.Réaction vasculo-exsudative ............................................................................ 36
1.4.6.2.Réaction cellulaire ............................................................................................ 37
1.4.6.3.Détersion .......................................................................................................... 38
1.4.6.4.Réparation ........................................................................................................ 38
1.4.7.Quelques pathologies à composante inflammatoire ................................................ 39
1.4.7.1.Pathologies infectieuse ..................................................................................... 39
1.4.7.2.Arthrite rhumatoïde .......................................................................................... 39
1.4.7.3.L’asthme ........................................................................................................... 40
1.4.7.4.L’athérosclérose ............................................................................................... 40
1.4.8.Traitement pathologique ......................................................................................... 40
1.4.8.1.Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) ............................................. 41
1.4.8.2.Les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS) ....................................................... 45
vii
1.4.9.Effet antalgique ....................................................................................................... 46
1.4.10.Effet antipyrétique ................................................................................................. 47
1.4.11.Les antirhumatismaux ........................................................................................... 48
1.4.12.Médicament étiologique ........................................................................................ 49
1.4.13.Effets secondaires indésirables des anti-inflammatoires ....................................... 49
1.4.13.1.Les anti-inflammatoires non stéroïdiens ........................................................ 49
1.4.13.2.Les anti-inflammatoires stéroïdiens ............................................................... 51
1.4.14.Métabolites secondaires à propriétés anti-inflammatoires : triterpènes et
flavonoïdes ....................................................................................................................... 51
1.4.14.1.Les triterpènes ................................................................................................ 51
1.4.14.2.Les flavonoïdes .............................................................................................. 53
1.5 Antioxydants ............................................................................................................ 57
1.5.1.Définition ................................................................................................................ 57
1.5.2.Radicaux libres ........................................................................................................ 57
1.5.3.Sources de production des RLO .............................................................................. 58
1.5.3.1.Source exogène ................................................................................................ 58
1.5.3.2.Source endogène .............................................................................................. 58
1.5.4.Mécanisme d’action ................................................................................................ 60
1.5.4.1.Les antioxydants enzymatiques ........................................................................ 60
1.5.4.2.Les antioxydants non enzymatiques ................................................................. 60
1.5.5.Le stress oxydatif .................................................................................................... 62
1.5.6.Maladies liées au stress oxydatif ............................................................................. 62
CHAPITRE 2 : MATERIELS ET METHODES ..................................................................... 64
2.1.Matériels d’étude phytochimique ................................................................................... 65
2.1.1.Méthodes chromatographiques ............................................................................... 65
2.1.1.1.Chromatographie analytique ............................................................................ 65
2.1.1.3.Chromatographie préparative ........................................................................... 65
2.1.2.Méthodes physicochimiques ................................................................................... 66
2.1.2.1.Pouvoir rotatoire ............................................................................................... 66
2.1.2.2.Résonance magnétique nucléaire(RMN).......................................................... 67
2.2.Matériels d’étude biologique .......................................................................................... 67
viii
2.2.1.Matériel végétal ....................................................................................................... 67
2.2.2.Animaux de laboratoire ........................................................................................... 67
2.2.3.Matériels techniques pour les tests biologiques ...................................................... 68
2.2.4.Matériels divers ....................................................................................................... 68
2.2.5.Substances pharmacologiques ................................................................................. 68
2.3.Méthodes d’études phytochimiques ............................................................................... 70
2.3.1.Matériel végétal ....................................................................................................... 70
2.3.2.Extraction et fractionnement ................................................................................... 70
2.3.2.1.Décoction ......................................................................................................... 70
2.3.2.2.Criblage phytochimique (test colorimétrique) ................................................. 70
2.3.2.3.Ecorces du tronc de P. erinaceus ...................................................................... 70
2.3.2.4.Ecorces de racines de P.erinaceus .................................................................... 73
2.3.2.4.3.CLHP Analytique .......................................................................................... 75
2.3.2.5.Feuilles de P. erinaceus .................................................................................... 77
2.3.2.5.1.CLHP analytique ............................................................................................... 77
2.4.Méthodes d’études biologiques ...................................................................................... 82
2.4.1.Toxicité générale aigüe ........................................................................................... 82
2.4.1.1.Principe............................................................................................................. 82
2.4.1.2.Protocole........................................................................................................... 82
2.4.2.Activités anti-inflammatoires .................................................................................. 83
2.4.2.3.Test anti-œdémateux à la Carragénine ............................................................. 83
2.4.2.4.Test anti-œdémateux à l’huile de croton .......................................................... 84
2.4.3.Activités analgésiques ............................................................................................. 85
2.4.3.1.Test à l’acide acétique ...................................................................................... 85
2.4.3.2.Test au formaldéhyde ....................................................................................... 86
2.4.4.Activité antipyrétique .............................................................................................. 87
2.4.4.1.Principe............................................................................................................. 87
2.4.4.2.Protocole........................................................................................................... 87
2.4.5.Test de détermination de tumor necrosis factor alpha (TNF α) et de nitrite ........... 87
2.4.5.1.Principe............................................................................................................. 87
ix
2.4.5.2.Protocole........................................................................................................... 88
2.4.6.Activités antioxydantes ........................................................................................... 88
2.4.6.1.Méthode anti-radicalaire DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl) ................... 88
2.4.6.2.Méthode CUPRAC (cupric ion reducing antioxidant capacity) ....................... 90
2.4.7.Inhibition de la lipoxygénase .................................................................................. 91
2.4.7.1.Principe............................................................................................................. 91
2.4.7.2.Protocole........................................................................................................... 91
2.4.8.Inhibition de la peroxydation lipidique ................................................................... 92
2.4.8.1.Principe............................................................................................................. 92
2.4.8.2.Protocole........................................................................................................... 92
2.4.9.Analyse des résultats ............................................................................................... 93
2.4.10.Aspect éthique de l’étude ...................................................................................... 93
CHAPITRE 3, RESULTATS ET DISCUSSIONS .................................................................. 94
3.1.Résultats d’études phytochimiques ................................................................................ 95
3.1.1.Criblage phytochimique .......................................................................................... 95
3.1.2.Analyses CLHP ....................................................................................................... 96
3.1.2.1.Extraits des écorces de tronc de P. erinaceus ................................................... 96
3.1.2.2.Extraits des feuilles de P. erinaceus ................................................................. 97
3.1.3.Identification des composés isolés .......................................................................... 98
3.1.3.1.Composé PE.1 .................................................................................................. 99
3.1.3.2.Composé PE.2 ................................................................................................ 101
3.1.3.3.Composé PE.3 ................................................................................................ 103
3.1.3.5.Composé PE.5 ................................................................................................ 105
3.1.3.6.Composé PE.7 ................................................................................................ 108
3.1.3.7.Composé PE.8 ................................................................................................ 111
3.1.3.8.Composé PE.9 ................................................................................................ 115
3.1.3.9. Composé PE.11 ............................................................................................. 117
3.1.3.10.Composé PE.12 ............................................................................................ 121
3.1.3.11.Composé PE.14 ............................................................................................ 123
3.1.3.12.Composé PE.15 ............................................................................................ 126
x
3.1.3.13.Composé PE.16 ............................................................................................ 129
3.1.3.14.Composé PE.17 ............................................................................................ 131
3.1.3.15.Composé PE.18 ............................................................................................ 133
3.2.Résultats d’études biologiques ..................................................................................... 136
3.2.1.Toxicité générale aigüe ......................................................................................... 136
3.2.2.Effets anti-inflammatoires ..................................................................................... 136
3.2.2.1.Test anti-œdémateux à la Carragénine ........................................................... 136
3.2.2.2.Test anti-œdémateux à l’huile de croton ........................................................ 142
3.2.3. Effets analgésiques ............................................................................................... 144
3.2.3.1.Test à l’acide acétique .................................................................................... 144
3.2.3.2.Test au formaldéhyde ..................................................................................... 146
3.2.4. Effet antipyrétique ................................................................................................ 148
3.2.5.Effet inhibiteur de tumor necrosis factor alpha (TNF α) et de Nitrites ................. 150
3.2.5.1.TNF α ............................................................................................................. 150
3.2.5.2.Nitrites ............................................................................................................ 151
3.2.6. Effet antioxydant .................................................................................................. 152
3.2.7.Effet inhibiteur de la peroxydation lipidique et de la lipoxygénase ...................... 154
3.3.Discussions ................................................................................................................... 156
3.3.1.Etude phytochimique............................................................................................. 156
3.3.2.Etude biologique ................................................................................................... 157
3.3.2.1.Toxicité générale aiguë .................................................................................. 157
3.3.2.2.Activités anti-inflammatoires ......................................................................... 157
3.3.2.3.Activités analgésiques .................................................................................... 160
3.3.2.4.Activité Antipyrétique .................................................................................... 162
3.3.2.5.Détermination de la production de TNF α et de NO ...................................... 163
3.3.2.6.Activités Antioxydantes ................................................................................. 165
3.3.2.7.Inhibition de la peroxydation lipidique et de l’activité de la lipoxygénase.... 166
CHAPITRE IV : CONCLUSION GENERALE-PERSPECTIVES....................................... 168
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ............................................................................... 171
ANNEXE ............................................................................................................................... 194
xi
ARTICLES PUBLIES ............................................................................................................ 214
xii
TABLE DES FIGURES
Figure 1- 1: Divers types de feuilles chez les Fabacées (Guignard, 2004) ............................... 8
Figure 1- 2: Répartition géographique du genre Pterocarpus (Saslis-Lagoudakis et al., 2011)
.................................................................................................................................................. 10
Figure 1- 3: Nombre d’utilisation des espèces du genre Pterocarpus par catégorie de
pathologies (Saslis-Lagoudakis et al., 2011) ........................................................................... 11
Figure 1- 4: P. erinaceus : Plante (A), feuille (B), écorces de tronc (C) et fleurs et feuilles (D)
.................................................................................................................................................. 24
Figure 1- 5: Carte de repartition de Pterocarpus erinaceus sur le continent africain ............. 25
Figure 1- 6: Biosynthèse des prostaglandines et des thromboxanes (Cipollone et al., 2008) . 32
Figure 1- 7: Biosynthèse des leucotriènes (Werz et Steinhilber, 2006) .................................. 33
Figure 1- 8 : Réaction inflammatoire (diapédèse) (Béné et al., 2005) .................................... 37
Figure 1- 9: Mécanisme de la fièvre (Rogo von Vigier, 2002) ............................................... 48
Figure 1- 10 : pathogénie des lésions intestinales induites par les AINS (Thiéfin et
Beaugerie , 2005) ..................................................................................................................... 50
Figure 1- 11: Inter-relations entre les différents types de flavonoïdes (Markham, 1982) ....... 54
Figure 1- 12 : Production de RLO et système antioxydant enzymatique (Schäfer et Werner,
2008) 59
Figure 2- 1: Schéma d’extraction et de fractionnement des écorces de tronc de P. erinaceus 71

Figure 2- 2: Schéma de fractionnement d’extrait DCM (A) ................................................... 72
Figure 2- 3: Schéma de fractionnement de la phase AcOEt (D) ............................................. 73
Figure 2- 4 : Schéma d’extraction et de fractionnement des écorces des racines de P.
erinaceus .................................................................................................................................. 74
Figure 2- 5 : Schéma de fractionnement de l’extrait DCM (E)............................................... 75
Figure 2- 6 : Schéma de fractionnement de la phase BuOH (H) ............................................. 76
Figure 2- 7 : Schéma d’extraction et de fractionnement des feuilles de P. erinaceus ........... 78
Figure 2- 8 : Schéma de fractionnement de la fraction flavonoïdique (J) ............................... 79
Figure 2- 9 : Schéma de fractionnement de la phase AcOEt (O) ............................................ 80
Figure 2- 10: Schéma de fractionnement de la phase BuOH (P) ............................................ 81
Figure 3- 1: Profil CCM analytique de de la fraction flavonoïdique (L), des phases DCM (N),
AcOEt (O), BuOH (P) et phase aqueuse (Q) des feuilles de P. erinaceus ............................... 95
Figure 3- 2: Profil CCM analytique de DCM (A) à l’UV 254 et 366 nm puis après révélation
à la vanilline sulfurique. ........................................................................................................... 96
xiii
Figure 3- 3: Chromatogrammes CLHP de l’extrait MeOH (F) et des phases AcOEt (G) et
BuOH (H) des écorces de racines de P. erinaceus. Colonne : Kromasyl 250x4.6 mm ; 100 Å.
Gradient : 8 à 40% de MeOH dans H2O en 20 min ; 40 à 100% de MeOH dans H2O en 2 min ;
100% MeOH pendant 5 min..................................................................................................... 97
Figure 3- 4: Chromatogrammes CLHP de la fraction flavonoïdique (L), des phases DCM (N),
AcOEt (O), BuOH (P) et phase aqueuse (Q) des feuilles de P. erinaceus. Colonne : Kromasyl
250x4 ,6 mm ; 100 Å. Gradient : 2 à 100% MeOH dans H2O en 30 min, 100% MeOH pendant
5 min ......................................................................................................................................... 98
Figure 3- 5: Spectre RMN 1H du composé PE.1 (CDCl3, 300 MHz) ................................... 100
Figure 3- 6: Spectre RMN 13C du composé PE.1 (CDCl3, 75 MHz) .................................... 100
Figure 3- 7: Spectre RMN 1H du composé PE.2 (CDCl3, 300 MHz) ................................... 102
Figure 3- 8: Spectre RMN 13C du composé PE.2 (CDCl3, 75 MHz) .................................... 102
Figure 3- 9: Spectre RMN 1H du composé PE.3 (CD3OD, 300 MHz) ................................. 104
Figure 3- 10: Spectre RMN 13C du composé PE.3 (CD3OD, 75 MHz) ................................ 104
Figure 3- 11: Spectre RMN 1H du composé PE.5 (CDCl3, 300 MHz) ................................. 106
Figure 3- 12: Spectre RMN 13C du composé PE.5 (CDCl3, 300 MHz) ................................ 107
Figure 3- 13: Spectre DEPT 135 du composé PE.5 (CDCl3, 300 MHz) .............................. 107
Figure 3- 14: Spectre RMN 1H du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3) ................................. 109
Figure 3- 15: Spectre RMN 13C du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3) ................................ 109
Figure 3- 16: Spectre DEPT 135 du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3) ............................... 110
Figure 3- 17: Spectre HSQC du composé PE.7..................................................................... 110
Figure 3- 18: Spectre RMN 1H du composé PE.8 (CDCl3, 400 MHz) ................................. 112
Figure 3- 19: Spectre RMN 13C du composé PE.8 (CDCl3, 100 MHz) ................................ 112
Figure 3- 20 : Spectre DEPT du composé PE.8 (CDCl3, 100 MHz) ..................................... 113
Figure 3- 21: Spectre COSY du composé PE.8 .................................................................... 114
Figure 3- 22: Spectre RMN 1H du composé PE.9 (CDCl3, 300 MHz) .................................. 115
Figure 3- 23: Spectre RMN 13C du composé PE.9 (CDCl3, 300 MHz) ................................. 116
Figure 3- 24: Spectre DEPT du composé PE.9 (CDCl3, 75 MHz) ........................................ 117
Figure 3- 25: Spectre RMN 1H du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz) .............................. 118
Figure 3- 26: Spectre RMN 13C du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz) ............................. 119
Figure 3- 27: Spectre DEPT du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz) .................................. 119
Figure 3- 28: Spectre HSQC du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz) .................................. 120
Figure 3- 29: Spectre HMBC du composé PE.11 ................................................................. 120
Figure 3- 32: Spectre RMN 1H du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz) ........................ 124
Figure 3- 33: Spectre RMN 13C du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz) ....................... 124
Figure 3- 34: Spectre DEPT du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz) ............................. 125
Figure 3- 35: Spectre RMN 1H du composé PE.15 (CD3OD, 400 MHz) ............................. 126
xiv
Figure 3- 36: Spectre RMN 13C du composé PE.15 (CD3OD, 400 MHz) ............................ 127
Figure 3- 38: Spectre HSQC du composé PE.15................................................................... 128
Figure 3- 46: Spectre DEPT 135 du composé PE.18 (CD3OD, 400 MHz) ........................... 134
Figure 3- 47: Effet de DECEC, MeOH B et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris induit
par l’injection de la carragénine. ............................................................................................ 137
Figure 3- 48: Effet de DECFEU, MeOH (K) et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris
induit par l’injection de la carragénine. .................................................................................. 139
Figure 3- 49: Effet de DECRA et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris induit par
l’injection de la carragénine. .................................................................................................. 141
Figure 3- 50: Effet de DCM (A), DECEC, MeOH (B), friedeline (PE.1), lupeol (PE.2) et
épicatechine (PE.3) et hydrocortisone sur l’œdème de l’oreille induit par l’huile de croton. 142
Figure 3- 51: Effet de DCM (E) et de la phénylbutazone sur l’œdème de l’oreille induit par
l’huile de croton ..................................................................................................................... 143
Figure 3- 52: Effet de DECEC, MeOH (B), DECFEU, MeOH K, DECRA et de paracétamol
(PARA) sur le nombre de contorsions induit par l’injection de l’acide acétique................... 146
Figure 3- 53: Effet analgésique (test à la solution de formaldéhyde) des décoctés des écorces
de tronc (DECEC), feuilles (DECFEU) et des écorces de racines (DECRA) ........................ 147
Figure 3- 54 : Evolution de la température rectale en fonction du temps des décoctés des
écorces (DECEC), des feuilles (DECFEU) et des racines (DECRA) .................................... 149
Figure 3- 55: Effet inhibiteur des extraits sur la production de TNF α ................................. 150
Figure 3- 56: Effet inhibiteur des extraits sur la production de nitrite .................................. 151
xv
TABLE DES TABLEAUX
Tableau 1- 1 : Activités pharmacologiques de quelques espèces de Pterocarpus .................. 21
Tableau 2- 1: Préparation des échantillons pour le test antioxydant DPPH ........................... 89
Tableau 3- 1 : Effet anti-inflammatoire du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B)

des écorces de tronc de P. erinaceus, après 1h, 3h et 5h........................................................ 138
Tableau 3- 2 : Effet anti-inflammatoire du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH K)
des feuilles de P. erinaceus .................................................................................................... 140
Tableau 3- 3 : Effet anti-inflammatoire du décocté des écorces de racines de P. erinaceus et
de l’acide acétylsalicylique (AAS). ........................................................................................ 141
Tableau 3- 4: Effet analgésique du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B) des
écorces du tronc ...................................................................................................................... 144
Tableau 3- 5 : Effet analgésique de l’extrait méthanolique (MeOH K) et du décocté des
feuilles .................................................................................................................................... 145
Tableau 3- 6 : Effet analgésique du décocté des écorces de racines et du paracétamol ....... 145
Tableau 3- 7 : Pourcentage d’inhibition des décoctés des écorces de tronc (DECEC), feuilles
(DECFEU) et des écorces de racines (DECRA) .................................................................... 148
Tableau 3- 8 : Effet antioxydant du décocté, de l’extrait MeOH (B), des phases DCM (C) et
AoCEt (D), du trolox et de l’acide chlorogénique ................................................................. 152
Tableau 3- 9 : Effet antioxydant du décocté, de l’extrait MeOH (K) et de la fraction
flavonoïdique (FLAVO L) ..................................................................................................... 153
Tableau 3- 10 : Effet antioxydant de l’extrait MeOH (F), des phases AcOEt (G) et BuOH (H)
................................................................................................................................................ 153
Tableau 3- 11 : Effet inhibiteur des extraits sur la peroxydation lipidique et l’activité de la
lipoxygénase ........................................................................................................................... 154
xvi
ABREVIATIONS
AcOEt : acétate d’éthyle
AINS : anti-inflammatoires non stéroïdiens
AIS : anti-inflammatoires stéroïdiens
APG : Angiosperm Phylogeny Group
ARP : antiradical power
BMDM : Bone marrow-derived macrophage
BuOH : butanol
C. Seph : colonne de Sephadex
CC : colonne de chromatographie
CCM : Chromatographie sur couche mince
CCM prep. : Chromatographie sur couche mince préparative
CDCl3 : chloroforme deutéré
CD3OD : méthanol deutéré
CI50 : concentration inhibitrice 50
CIRDES : Centre International de Recherche-Développement sur l'Elevage en zone
Subhumide
CLHP : Chromatographie liquide à haute performance
COSY : correlated spectroscopy
COX 1 : cyclo-oxygénase 1
CUPRAC : cupric ion reducing antioxidant capacity
DBA : diphenylborate d’aminoéthanol
DCM : dichlorométhaane
DECEC : décocté des écorces de tronc
DECFE : décocté des feuilles
DECRA : décocté des écorces de racines
DEPT : distortionless enhancement by polarisation transfer
d : doublet (RMN)
δ : déplacement chimique (RMN)
DL50 : dose létale 50
DMEM : Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
xvii
DPPH : 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl
ELISA : enzyme-linked immunosorbent assay
FLAVO : flavonoïde
H2SO4 : acide sulfurique
HMBC : heteronuclear multiple bonding connectivity
HMQC : heteronuclear multiple quantum coherence
HSQC : heteronuclear single quantum connectivity
IFN γ : interféron gamma
IL-1β : interleukine 1β
J (Hz) : constante de couplage exprimé en hertz
IRSS : institut de recherche en science de la santé
LOX : lipoxygénase
LPS : lipopolysaccharide
m : multiplet (RMN)
min : minute
MeOH : méthanol
MEPHATRA/PH : department de medicine-pharmacopée traditionnelle-pharmacie
MHz : mégahertz
MPLC : medium pressure liquid chromatography
NaCl : chlorure de sodium
NF-κB : facteur nucléaire kappa-B
NO : monoxide d’azote
NOSi : monoxide d’azote synthase inductible
P. erinaceus : Pterocarpus erinaceus
PGE2 : prostaglandine E2
PGG2 : prostaglandine G2
PGI : prostacycline
PEG : polyethylèneglycol
ppm : partie par million
s : singulet (RMN)
SiO2 : silice
SPE : solid phase extraction
t : triplet (RMN)
TEAC : trolox equivalent antioxidant capacity
xviii
TNF α : tumor necrosis factor alpha
TXA2 : thromboxane A2
Rf : référence frontale
RLO : radicaux libres oxygénés
RMN 1H : résonance magnétique nucléaire du proton
13
RMN C : résonance magnétique nucléaire du carbone 13
UV : ultra-violet
VLC : vacum liquid chromatography
xix
RESUME
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) est une plante médicinale utilisée dans la prise en
charge de nombreuses pathologies dont les maladies à composante inflammatoire au Burkina
Faso. Les feuilles, le tronc, et les racines sont utilisés comme remède dans le traitement des
dermatoses, de l’inflammation, de l’ulcère, du rhumatisme, de la dysenterie, le paludisme,
etc. …
L’objectif de ce travail était de mener des études phytochimiques et pharmacologiques sur
des extraits de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) afin d’évaluer l’innocuité et
l’efficacité de cette plante en vue d’obtenir des pré-requis pour le développement d’un
phytomédicament.
L’étude phytochimique a été réalisée en utilisant des méthodes chromatographiques (CCM,
SPE, CC, VLC, MPLC, CLHP) et spectroscopiques (RMN 1D et 2D). Cette étude a permis
d’isoler 18 molécules dont 14 identifiées à savoir la friedeline (2 fois), le lupeol,
l’épicatechine, la rutine, la lutéoline, la quercétine-3-O-sophoroside, le kaempferol-3-O-
sophoroside, la quercétine-3-O-β-glucose, le stigmastérol, la friedeline, le 3α-
hydroxyfriedelan-2-one, l’α-sophoradiol et le maltol 6-O-apiofuranoside-glucopyranoside.
L’étude sur la toxicité aiguë a montré que les décoctés des feuilles (DECFEU), d’écorces de
tronc (DECEC), d’écorces de racines (DECRA) et les extraits méthanoliques des feuilles
(MeOH K), d’écorces du tronc (MeOH B) sont considérés comme des substances faiblement
toxiques selon l’échelle de toxicité de Hodge et Sterner et de l’OMS. Les effets anti-
inflammatoires, analgésiques et antipyrétiques des extraits issus des écorces de tronc, des
feuilles et des racines ont été validés sur des modèles animaux.
Les résultats obtenus dans les tests in vitro (antioxydant, tests sur l’inhibition de la production
de TNF α et de nitrite cellulaires, de la peroxydation lipidique et de la lipoxygénase) montrent
que les extraits manifestent des effets intéressants; plus particulièrement l’extrait
méthanolique des écorces du tronc (MeOH B) qui a le meilleur pouvoir antioxydant (ARP =
5 ; TEAC = 0,9) et la forte inhibition sur la peroxydation lipidique (37,25 %) et sur la
lipoxygénase (97,69 %). Par contre l’extrait méthanolique des feuilles (MeOH K) a présenté
la forte inhibition à la concentration de 50 µg/mL sur la production de TNF α (37,35 % et 30
%) et de NO (95 % et 50%) dans la culture de macrophages activés par LPS et LPS/IFN γ.
Mots clés : Pterocarpus erinaceus, anti-inflammatoire, analgésique, antipyrétique et

antioxydant
xx
ABSTRACT
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) is a medicinal plant used in the treatment of several
diseases including diseases inflammatory component in Burkina Faso. The leaves, stem and
roots are used as a drug in the treatment of skin diseases, inflammation, ulcer, rheumatism,
dysentery, malaria….
The aim of this study was to carry out phytochemical and pharmacological studies on extracts
of Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) to evaluate the safety and efficacy of this plant to
obtain the data for the development of a drug.
Phytochemical study has been performed using chromatographic methods (TLC, SPE, CC,
VLC, MPLC, HPLC) and spectroscopic (1D and 2D NMR). This study has been leading to
isolated 18 molecules including 14 identified namely friedelin, lupeol, epicatechin, rutin,
luteolin, quercetin-3-O-sophorosid, kaempferol-3-O-sophorosid, quercetin-3-O-β-glucose,
stigmasterol, 3α-hydroxyfriedelan-2-on, α-sophoradiol, maltol-6-O-apiofuranoside-
glucopyranoside.
The test on acute toxicity showed that the decoction of the leaves (DECFEU), stem (DECEC),
roots (DECRA) and methanol extracts of leaves (MeOH K), stem bark (MeOH B) are
considered slightly toxic substances according to the toxicity scale of Hodge and Sterner and
WHO. The anti-inflammatory, analgesic and antipyretic extracts from the stem bark, leaves
and roots have been validated en animal models.
The results obtained in vitro test (antioxidant test, tests on the inhibition of the production of
cellular TNF α and nitrite, lipid peroxidation and lipoxygénase) showed that the extracts
exhibited effects, especially the methanol extract stem bark (MeOH B) which has the best
antioxidant power (ARP = 5; TEAC = 9) and the strongest inhibition of lipid peroxidation
(37.25 %) and lipoxygénase (97.69 %). However the methanol extract of leaves (MeOH K)
presented strong inhibition at a concentration of 50 µg/mL on the production of TNF α (37.35
% and 30 %) and NO (95 % and 50 %) in the macrophages cultures active by LPS and
LPS/INF-γ.
Key words: Pterocarpus erinaceus, anti-inflammatory, analgesic, antipyretic and antioxidant
xxi
LISTE DES PUBLICATIONS
Articles
N. Ouédraogo, A. Tibiri, R. W. Sawadogo, M. Lompo, A. E. Hay, J. Koudou, M. G. Dijoux

and I. P. Guissou. Antioxidant anti-inflammatory and analgesic activities of aqueous extract
From stem bark of Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae). Journal of Medicinal Plants
Research (2011), 5, 2047-2053.
Ouédraogo Noufou, Sawadogo Richard Wamtinga, Tibiri André, Bayet Christine, Lompo
Marius, Hay A Emmanuelle, Koudou Jean, Dijoux Marie-Geneviève，Guissou Innocent
Pierre. Pharmacological properties and related constituents of stem bark of Pterocarpus
erinaceus Poir. (Fabaceae). Asian Pacific Journal of Tropical Medicine (2011), 412-420.
N. Ouédraogo, M. Lompo, RW. Sawadogo, A. Tibiri, A.-E. Hay, J. Koudou, M.-G. Dijoux,
I.P. Guissou. Étude des activités anti-infl ammatoire, analgésique et antipyrétique des
décoctés aqueux des feuilles et des racines de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae).
Phythérapie (2012), H1-7.
Ouédraogo Noufou, Hay A.Emmanuelle, Michalet S, Koudou Jean, Dijoux Marie-

Geneviève, Guissou Innocent Pierre. Phytochemical and biological investigations of methanol
extract from leaves of Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae). En préparation
Posters
Ouédraogo N., Bayet C, Hay A-E., Michalet S, Guissou I. P., Koudou J., Dijoux-Franca M.
G. Etudes préliminaires de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae). Colloque AFERP –
BESANCON (France), 16 au 18 Juillet 2010.
Ouédraogo N.,Tibiri A., Lompo M., Hay A-E., Sawadogo WR., Koudou J., Dijoux-Franca
M. G, Guissou I. P. Pharmaco-chimie des écorces de tronc de Pterocarpus erinaceus Poir.
(Fabaceae). 4è édition des Journées Portes Ouvertes/Doctorants, Ouagadougou (Burkina
Faso), 20 – 24 Février 2012.
xxii
Communications orales
Ouédraogo N., A. Tibiri, R. Sawadogo, M. Lompo, A.-E. Hay, J. Koudou, M.-G. Dijoux, I.
P. Guissou. Propriétés anti-inflammatoire, analgesique et antioxydante du décocté de
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae). FRSIT, Bobo Dioulasso (Burkina Faso), 27
Novembre – 04 Décembre 2010.
Ouédraogo N., Sawadogo R. W., Tibiri A. , Lompo M., Hay A.E., Koudou J., Dijoux M-G.
and Guissou I. P. Pharmacological and phytochemical investigations of stem bark of
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae). WANNPRES, Nigeria, 6-9 Août 2012.
xxiii
Introduction
Au fil des siècles, les hommes se sont appuyés sur la nature pour leurs besoins de base liés à
l’alimentation, à la construction, à l’habillement, à la santé (médicaments). Les plantes ont
constitué la base des systèmes de la médecine traditionnelle qui existent depuis des milliers
d’années et qui continuent de fournir à l’humanité de nouveaux remèdes (Gurib-Fakim,
2006). Selon l’OMS, « la médecine traditionnelle est la somme totale des connaissances,
compétences et pratiques qui reposent, rationnellement ou non, sur les théories, croyances et
expériences propres à une culture et qui sont utilisées pour maintenir les êtres humains en
bonne santé ainsi que pour prévenir, diagnostiquer, traiter et guérir des maladies physiques et
mentales » (Gurib-Fakim, 2006). Cette médication traditionnelle implique l’usage de plantes
médicinales, de parties d’animaux et de minéraux, de thérapies spirituelles, de techniques et
des pratiques manuelles, séparés ou en association. La médecine traditionnelle maintient sa
popularité dans les pays en voie de développement et s’étend de plus en plus aux pays
développés. En Chine par exemple, en plus de l’acupuncture très pratiquée, les préparations
traditionnelles à base de plantes représentent 30 à 50 % de la consommation totale en
médicaments. Aux Etats-Unis, selon la CACM (Commission for Alternative and
Complementary Medecine), en 2000, 17 milliards de dollars ont été dépensés en remèdes
traditionnels par 158 millions de personnes. De même, en Allemagne, 90 % de la population
prend un remède naturel à un moment ou à un autre de leur vie. Au Canada, un sondage a
montré qu’en 2005, 71 % de la population a recours au moins une fois à la médecine
complémentaire et prendrait régulièrement des produits de santé naturels (Morel, 2009). En
Inde, le terme Ayurveda, qui vient des mots indiens Ayar (vie) et veda (science), est l’une des
plus vielles médecines traditionnelles très pratiquées (Gurib-Fakim, 2006).
La médecine traditionnelle africaine est la plus vieille et la plus diversifiée des systèmes de
médecine. Ses pratiques, transmises de génération en génération, sont la preuve de l’innocuité
et de l’efficacité de cette médecine. Selon l’OMS, en Afrique, 80 % de la population a recours
à la médecine traditionnelle pour répondre à certains de leurs besoins au niveau des soins de
santé primaire. En plus du fait que la médecine traditionnelle fait partie intégrante du
patrimoine culturel, les faibles revenus des populations face aux coûts élevés des
médicaments modernes et l’accès facile à la médecine traditionnelle peuvent aussi expliquer
le recours à cette dernière.
1
Les propriétés thérapeutiques des plantes médicinales sont basées essentiellement sur la
composition des métabolites secondaires ayant des propriétés biologiques. Les plantes les
synthétisent notamment pour se défendre contre ou s’adapter à toute agression biotique
(bactéries, virus, champignons, parasites) ou abiotique (environnement). Ces composés ne
sont pas nécessaires à la croissance de la plante. Les plantes médicinales, devenues la
principale source naturelle de découverte de substances ou de molécules thérapeutiques
occupent une position importante dans le domaine de recherche de nouveaux médicaments.
Plusieurs molécules thérapeutiques disponibles dans les pharmacies sont issus directement ou
indirectement de plantes médicinales :
- Papaver somniferum L. (Papaveraceae) : morphine (morphine), analgésique ;
- Cinchona officinalis L., Cinchona pubescens Vahl. (Rubiaceae): quinine (quinine),
anti-malaria
- Salix alba L., Salix daphnoïdes Vill., Filipendula ulmaria (L.) Maxim. (Salicaceae) :
acide acétylsalicylique (Aspirine®), antipyrétique, analgésique et anti-inflammatoire ;
- Harpagophytum procumbens (Burch.) DC. (Pedaliaceae) : harpagoside et actéoside
(harpagoMed®), anti-inflammatoire et antipyrétique ;
- Ananas comosus (L.) Merr. (Bromeliaceae) : bromélaïnes (bromélaïne protéase) : anti-
inflammatoire ; (Goetz, 2011 ; Katzung, 2006).
Plus de 50 % des nouveaux produits chimiques enregistrés par le FDA (Food and Drug
Administration) de 1981 à 2002 comme anticancéreux, antimigraineux et antihypertenseurs,
sont des produits naturels ou des dérivés (Newman, 2003). Les échecs thérapeutiques et les
problèmes iatrogènes rencontrés par la médecine moderne font que la médecine traditionnelle
reste la voie alternative et d’espoir pour l’humanité. En effet, ces problèmes ont pour origine,
par exemple, l’émergence des souches microbiennes résistantes : le MRSA (Methicillin-
resistant Staphylococcus aureus) causant des infections nosocomiales dans les hôpitaux; la
chloroquinorésistance développée par diverses formes pathogènes de Plasmodium ; et
l’émergence des maladies (SIDA, EBOLA) sans traitement thérapeutique (Yasunaka et al.,
2005).
Les anti-inflammatoires font partir des classes thérapeutiques les plus utilisées dans le
monde. L’utilisation des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) et les anti-
inflammatoires stéroïdiens (AIS) dans la prise en charge des pathologies à composante
inflammatoire engendre des troubles gastro-intestinaux, rénaux et hémorragiques.
L’apparition de nouvelles classes d’anti-inflammatoires appelés « coxibs » (inhibiteurs
2
sélectifs de la cyclo-oxygénase 2) réduit les effets secondaires gastro-intestinaux mais induit
des risques cardiovasculaires et rénaux (Mukherjee, 2002).
Face à ces problèmes de santé publique que rencontre la médecine moderne, il devient
impérieux de valoriser la médecine traditionnelle par des études ethnobotaniques,
pharmacologiques, toxicologiques et phytochimiques sur l’efficacité et l’innocuité des plantes
médicinales en vue de découvrir de nouveaux médicaments ayant des effets secondaires
minimes.
Le Burkina Faso dispose d’une flore qui est constituée de végétaux inférieurs et supérieurs
appartenant à plusieurs familles parmi lesquelles la famille des Fabaceae. De nombreuses
espèces de cette famille telles que Parkia biglobosa Jacq., Crotalaria mucronata Desv.,
Indigofera tinctoria Var. Arrecta Benth, Indigofera nigritana Hook F., Stylosanthes erecta P.
Beauv., Sesbania pachycarpa DC., Crotalaria naragutensis Hutch. et Pterocarpus lucens
Lepr. (ex Guill. Et Perrott.) sont utilisées en médecine traditionnelle dans le traitement du
paludisme, des hémorroïdes, des dermatoses, des infections, des maux de ventre et de la
stérilité féminine (Mouity, 1999 ; Nadembega et al., 2011).
Le présent travail s’inscrit dans la perspective de la valorisation de la médecine traditionnelle
du Burkina Faso par des essais biologiques et la recherche de nouvelles molécules à visée
thérapeutique. Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) est une plante médicinale utilisée en
décoction dans le traitement des pathologies à composante inflammatoire (dermatoses,
inflammations, ulcère etc. …). Des essais biologiques in vivo (anti-inflammatoire,
analgésique, antipyrétique) et in vitro (antioxydant, inhibition de la production de TNF α et de
nitrite cellulaires, de la peroxydation lipidique et de la lipoxygénase) ont été menés avec des
extraits de feuilles, d’écorces de tronc et de racines ; une investigation phytochimique
approfondie a ensuite permis d’isoler et d’identifier 18 composés phytochimiques bioactifs
qui pourraient être responsables des effets thérapeutiques. Pour bien mener ce travail, nous
nous sommes fixés comme objectifs dans un premier temps de réaliser les évaluations
biologiques et dans un second temps de mener les études phytochimiques.
Ce travail a été réalisé dans le cadre d’une co-tutelle entre l’Université de Ouagadougou et
l’Université Claude Bernard Lyon 1. L’étude phytochimique a été réalisée dans le laboratoire
de botanique, pharmacognosie et phytothérapie de la faculté de médecine et pharmacie ; et les
essais dans le domaine de l’inflammation ont été menés dans le laboratoire de pharmacologie
de l’Institut de recherche en science de la santé (IRSS) et dans le laboratoire de
pharmacologie de l’UFR/SDS.
3
Objectifs de l’étude
Objectif général
L’objectif général de cette étude était de mener des études phytochimique et

pharmacologiques sur des extraits de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) en vue d’obtenir
des pré-requis pour le développement d’un phytomédicament.
Objectifs spécifiques :
 Réaliser des extractions méthanolique et dichlorométhanolique, et une décoction
aqueuse sur chaque partie de la plante.
 Effectuer des fractionnements par partition liquide-liquide et par des différentes
méthodes chromatographiques.
 Isoler et identifier les composés bioactifs par des méthodes chromatographiques
(CCM, SPE, CC, VLC, MPLC, CLHP) et des méthodes spectroscopiques (RMN 1D et
2D)
 Evaluer la toxicité aiguë des décoctés et des extraits méthanoliques.
 Tester in vivo les activités anti-inflammatoires, analgésiques et antipyrétiques des
extraits.
 tester in vitro l’effet des extraits sur la production de TNF α et de NO dans une culture
cellulaire RAW264.7.
 Tester le pouvoir antioxydant des extraits avec la méthode de DPPH et la méthode de
CUPRAC.
 Tester in vitro l’effet des extraits sur l’activité enzymatique de la lipoxygénase et sur
la peroxydation lipidique.
Pour atteindre ces objectifs, une méthodologie phytochimique et biologique adéquate a été
mise en place afin d’obtenir les résultats qui vont être discutés.
4
CHAPITRE 1 : GENERALITES
6
1.1 La famille des Fabaceae
1.1.1.Position systématique de la famille des Fabaceae ou Leguminosae
Les Fabaceae ou Leguminosae avec approximativement 720 genres et plus de 18000 espèces,
constituent la troisième plus grande famille des Angiospermes après celles des Orchidaceae et
des Asteraceae. Elle est composée d’arbres, d’arbustes et surtout de nombreuses espèces
herbacées vivaces ou annuelles. C’est le plus grand ensemble angiosperme, cosmopolite,
prédominant en individus et en espèces dans de nombreux biomes et surtout en région
tropicale (Wojciechowski, 2003).
Le concept Leguminosae est utilisé soit à un niveau familial (chez Engler), soit à un niveau
ordinal (chez Cronquist). Cependant, selon la classification phylogénétique, proposée par
l’Angiosperm Phylogeny Group (APG II, 2003), la famille des Fabaceae est une superfamille
cosmopolite composée de trois sous-familles, à savoir :
- Mimosoideae composée de 50 à 56 genres (Acacia, Albizia, Calliandra, Inga, Mimosa,
Parkia, Pithecellobium, etc ……) et de 3000 espèces. Cette sous-famille est
principalement répandue dans les régions tropicales.
- Faboideae ou Papilionoideae composée de 440 à 500 genres (Arachis, Astragalus,
Crotalaria, Desmodium, Eriosema, Erythrina, Indigofera, Lathyrus, Lonchocarpus,
Lupinus, Machaerium, Medicago, Ononis, Phaseolus, Pisum, Pterocarpus, Robinia,
Swartzia, Trifolium, Ulex, etc ……) et de 12000 espèces. Elle est répartie dans le monde
entier.
- Caesalpinioideae composée de 150 à 180 genres (Bauhinia, Caesalpinia, Cassia, Cercis,
Chamaecrista, Cynometra, Hymenaea, Macrolobium, Peltogyne, Senna, etc….) et de
2200 à 3000 espèces. Les Caesalpinioideae se rencontrent dans les régions tropicales.
1.1.2. Caractères morphologiques des Fabaceae

Les Leguminosae ont la capacité de fixer l’azote atmosphérique par l’intermédiaire d’une
association symbiotique entre les bactéries du genre Rhizobium et les racines des plantes.
Cette association forme ainsi des renflements ou nodosités qui permettent aux Fabacées
d’obtenir un niveau élevé d’azote afin de répondre aux exigences métaboliques. Les nodules
fixateurs d’azote sont présents chez les Mimosoideae et les Papilionoideae ou Faboideae
alors qu’ils sont absents chez les Caesalpinoideae.
7
Les feuilles : les feuilles sont primitivement alternes, composées-imparipennées et stipulées,
peuvent évoluer vers une feuille simple, ou vers une feuille composée-pennée. La foliole
terminale peut se transformer souvent en vrille et les stipules peuvent devenir plus
importantes que les feuilles et voire les remplacer (Figure 1- 1).
Les fleurs : les fleurs sont groupées en grappes plus ou moins allongées. La coupe florale est
peu marquée et presque plane ; le calice est composé de cinq dents qui se groupent parfois en
deux lèvres.
Le fruit : la principale caractéristique unificatrice de la famille des Fabaceae est le fruit. La
gousse ou légume est un fruit sec défini par une double ouverture ventrale et dorsale. La
gousse peut se transformer secondairement chez quelques espèces. Ainsi, la gousse peut
devenir pauciséminée (Arachis hypogaea) ou multiséminée (Sophora sp.) ; elle peut présenter
une fausse cloison longitudinale par introflexion (Astragalus sp.) ou devenir spirale (Alfa alfa)
(Guignard, 2004).
Figure 1- 1: Divers types de feuilles chez les Fabacées (Guignard, 2004)
1.1.3.Utilisations en médecine traditionnelle

Les Fabacées ont des propriétés thérapeutiques et sont utilisées tant en médecine
traditionnelle dans la prise en charge de plusieurs pathologies, qu’en médecine moderne. En
effet, des espèces des genres Parkia et Acacia sont utilisées traditionnellement dans le
8
traitement de l’hypertension, des dermatoses, de l’inflammation et de l’ulcère (Parkia
biglobosa, Acacia macrostachya, Acacia nilotica). Les isoflavones trouvées couramment chez
les Fabaceae sont utilisées pour réduire le risque de cancer et le taux de cholestérol. Les
phytoestrogènes du soja sont étudiés pour une utilisation comme hormone post-ménopause.
Les Légumineuses ont un effet hypoglycémiant quand elles sont consommées, ce qui les rend
un aliment recommandé pour les diabétiques (Gepts et al., 2005).
Erythrina senegalensis DC. est utilisée en décoction en pays Haousa au Nord du Nigéria pour
traiter la jaunisse, l’anémie, la dysenterie et la gonococcie (Sadu et al., 2000).
Les espèces du genre Desmodium sont utilisées dans les médecines traditionnelles chinoise et
indienne dans le traitement du rhumatisme, de la dysenterie, du paludisme, de la toux, de la
fièvre et de la douleur (Ma et al., 2011).
Bauhinia purpurea Lam. est utilisée en Inde, en Malaisie et au Pakistan dans la prise en
charge de la jaunisse, de la toux, du diabète, de l’ulcère, de la douleur, des convulsions et des
maladies infectieuses (Zakaria et al., 2011).
Les espèces du genre Senna interviennent en médecine traditionnelle au Nigeria, en Inde et au
Brésil pour soigner les dermatoses et les maladies infectieuses (Adedayo et al., 1999).
1.2 Le genre Pterocarpus

Le genre Pterocarpus appartient à la sous-famille des Faboideae. Le nom générique
Pterocarpus donné par Linné en 1974, est dérivé des mots grecs Pteros (aile) et Karpos
(fruit), se référant aux fruits ailés. Ce genre réparti dans les zones tropicales (Afrique
tropicale, Amérique latine et Asie du sud) est composé de plusieurs espèces telles que P.
indicus Willd., P. marsupium Roxb., P. officinalus Jacq., P. osun Craib., P. santalinus L. F.,
P. soyauxii Taubert., P. erinaceus Poir. etc …. (Seshadri, 1972).
Le genre Pterocarpus a fait l’objet de plusieurs traitements taxonomiques régionaux dont une
étude monographique de Rojo qui a estimé à 20 espèces composant le genre Pterocarpus ;
cependant le traitement de Lewis dénombre de 25 à 30 espèces ; l’estimation la plus récente
est celle de Klitgaard et Lavin (2005) où le nombre d’espèces est estimé à 35-40 (Saslis-
Lagoudakis et al., 2011).
Des espèces comme P. indicus Willd, P. marsupium Roxb, P. dalbergioides Roxb. et P.
soyauxii Taubert. sont reparties en Asie du Sud (Inde, Malaisie, Birmanie et Phillipines). En
Afrique, les espèces rencontrées sont : P. tinctorius Welw., P. osun Craib, P. mildbraedii
Harms., P. santalinus L. F. et P. erinaceus Poir. (Figure 1- 2).
9
Figure 1- 2: Répartition géographique du genre Pterocarpus (Saslis-Lagoudakis et al., 2011)
(11 : zone Amérique latine, 15 : zone Afrique tropicale et 6 : zone Asie du sud)
Selon la classification de l’APG, le genre Pterocarpus est répertorié de la manière suivante :

(http://www.botany.wisc.edu/garden/UW-Botanical_Garden/Fabaceae.html#anchor1227391
le 27/11/11)
Règne : Plantae
Division : Magnoliophyta
Classe : magnoliopsida
Ordre : Fabales
Famille : Fabaceae
Sub-famille : Faboideae ou Papilionoideae
Genre : Pterocarpus
1.2.1.Caractères morphologiques
Les feuilles du genre Pterocarpus sont alternes, pennées avec 7-9 folioles et rarement
unifoliées ; les stipules sont généralement de petite taille, parfois grandes. Les fleurs sont
petites, jaunes et odorantes. Le calice est à cinq dents et la corolle est papilionacée.
La gousse, contenant à 1, 2 ou 3 graines, est indéhiscente, plus ou moins irrégulière. Elle est
plate, orbiculaire et ovale (Guignard, 2004).
1.2.2.Utilisation en médecine traditionnelle

Les différentes espèces du genre Pterocarpus sont largement utilisées en médecine
traditionnelle contre de nombreuses pathologies. En effet, les cœurs de bois des espèces P.
10
santalinus L. F. et P. marsupium Roxb. sont utilisés en Inde dans le traitement des infections,
de l’inflammation, de la diarrhée, de la fièvre et du diabète (Maurya et Rya, 1985 ;
Krishnaveni et Rao, 2000). Les espèces P. osun Craib. et P. soyauxii Taubert. sont
respectivement utilisées au Nigéria et au Cameroun dans la prise en charge du rhumatisme, de
la fièvre, du diabète, des dermatoses, des parasitoses gastro-intestinales, de l’hypertension
(Ebi et Ofoefule, 2000 ; Tchamadeu et al., 2011). Une étude menée par Saslis-Lagoudakis et
al. (2011) sur la complilation de données d’ethnomédecine en Afrique tropicale, Amérique
latine et indo-malaysienne du genre Pterocarpus a indiqué que les espèces du genre sont
utilisées dans les pathologies suivantes : maladies cardio-vasculaires, gastro-intestinales,
génito-urinaire et fertilité, infection et fièvre, inflammation, système nerveux, douleur,
poisons, maladies respiratoires et dermatoses (Figure 1- 3). Ces mêmes auteurs ont indiqué
que les espèces P. osun, P. santalinus, P. sayauxii, P. tessmanii Harms., P. erinaceus, P.
dalbergioides, P. angolensis DC. et P. rohii Vahl. sont utilisées dans le traitement du
paludisme.
Figure 1- 3: Nombre d’utilisation des espèces du genre Pterocarpus par catégorie de

pathologies (Saslis-Lagoudakis et al., 2011)
11
1.2.3.Métabolites secondaires isolés du genre Pterocarpus
Dans la littérature, les principaux métabolites secondaires isolés du genre Pterocarpus sont les
terpènes et les isoflavonoïdes. Ces métabolites ont été généralement isolés du cœur du bois.
- Les terpènes
L’un des premiers terpènes connus du genre Pterocarpus a été un acide triterpénique, en
l’occurrence l’acide acétyloléanolique. D’autres études chimiques ont permis d’isoler de P.
santalinus L.F. des triterpènes tels que l’amyrone, la lupénone (1), l’épi-lupéol (7), le lupéol
(8), le sitostérol, le lupane-2α-3α-diol ; le lup-20(29)-èn-2α,3α-acétonide (3); le diosphénol; le
lup-(20)29-èn-2α-tosyloxy,3α-ol (4); le lup-(20)29-èn-2α-acétoxy,3α-ol (5) et la lup-20(29)-
èn-2α-acétoxy,3-one (6) (Kumar et al., 1975). Le triterpène pentacyclique, le 3-ketooléanane
(9) a été isolé pour la première fois du genre dans l’extrait hexanique de P. santalinus L.F.
(Krishnaveni et Rao, 2000).
(1) R1 = H2, R2 = O : lupénone

(2) R1 = R2 = OCOOH : lup-(20)29-en-2,3-diacétoxyl
(3) R1 = H2, R2 = OOC-(Me)2 : lup-(20)29-en-2,3-acétonide
(4) R1 = OTs, R2 = OH : lup-(20)29-en-2-tosyloxy,3-ol
(5) R1 = O-COOH, R2 = OH : lup-(20)29-en-2-acetoxy,3-ol
(6) R1 = O-COOH, R2 = O : lup-(20)29-en-2-acetoxy,3-one
12
(7) R1 = OH, R2 = H : épi-lupeol (9) 3-keto-oleanane
(8) R1 = H, R2 = OH : lupeol
Des investigations phytochimiques ont également permis de mettre en évidence la présence de
sesquiterpènes. En effet, Kumar et al. (1974) ont isolé le ptérocarpol (17), le β-eudesmol (16),
l’isoptérocarpolone (10), le ptérocarptriol (11) et ptérocarpdiolone (12), à partir des extraits
apolaires du cœur de bois de P. santalinus L.F. Les sesquiterpènes tels que selin-4(15)-èn-
1β,11-diol (14), β-chénopodiol (13) et brasudol (18) ont été isolés de P. marsupium Roxb.
(Adinarayana et Syamasundar, 1982).
(10) isopterocarpolone (11) pterocarptriol (12) pterocarpdiolone
(13) R1 = H, R2 = OH :β-chenopodiol
(14) R1 = OH, R2 = H : selin-4(15)-en-3β,11-diol
13
(15) R1 = OH, R2 = H: selin-4(15)-en-1β, 11-diol
(16) R1 = R2 = H : β-eudesmol
(17) R1 = H, R2 = OH : pterocarpol
(18) R1 = Br, R2 = H : brasudol
- Les isoflavonoïdes
La particularité du genre est sa richesse en isoflavonoïdes. Ces composés qui ont été les
premiers à être isolés de ce genre sont subdivisés en deux sous-groupes : les ptérocarpanes,
les isoflavones.
Les ptérocarpanes sont des isoflavonoïdes qui ont un système dihydrofurane condensé entre
les cycles C et B du noyau flavonoïdes. Les ptérocarpanes (-)-homoptérocarpine (23) et (-)-
ptérocarpine (24) ont été les premiers à être identifiés dans le genre Pterocarpus, et plus
précisément au sein de l’espèce P. santalinus L.F. (Seshadri, 1972).
Les premières isoflavones, tels que la prunétine (25), la muningine (31), la 7-méthyl
tectorigénine (32) et le santal (27), ont été isolées des espèces P. santalinus L.F., P. indicus
Willd. et P. osun Craib. La 3’-hydroxy-formononétine (33) et la pseudobaptigénine (34) ont
été isolées de P. dalbergioides Roxb. (Seshadri, 1972). Les ptérocarpanes tels que 8-hydroxy-
3,9-diméthoxyptérocarpane (19), 8-acétoxy-3,9-diméthoxyptérocarpane (20), 3,8-dihydroxy-
9-méthoxyptérocarpane (21) et 3,8-diacetoxy-9-methoxyptérocarpane (22) ont été isolés du
cœur de bois de P. soyauxii Taubert. par Bezuidenhoudt et al. (1987). Ces mêmes auteurs ont
isolé également les isoflavones suivantes : prunétine (25), di-O-acetylprunétine (26), santal
(27), tri-O-acétylsantal (28) et 5,4’-diacétoxy-7,3’-diméthoxyisoflavone (29).
14
(19) R1 = Me, R2 = OH : 8-hydroxy-3,9-dimethoxypterocarpane
(20) R1 = Me, R2 = O-COOH : 8-acetoxy-3,9-dimethoxypterocarpane
(21) R1 = H, R2 = OH : 3,8-dihydroxy-9-methoxypterocarpane
(22) R1 = COOH, R2 = OCOOH: 3,8-diacetoxy-9-methoxypterocarpane
(23) (-)-homopterocarpine
(24) (-)-pterocarpine
15
(25) R1 = OH, R2 = Me, R3 = R4 = H : prunétine
(26) R1 = OCOOH, R2 = Me, R3 = H, R4 = COOH : di-O-acetylprunétine
(27) R1 = R2 = OH, R3 = Me, R4 = H : santal
(28) R1 = R2 = OCOOH, R3 = Me, R4 = COOH : tri-O-acetylsantal
(29) R1 = OCOOH, R2 = Me, R3 = OMe, R4 = COOH : 5,4’-diacetoxy-7,3’-
dimethoxyisoflavone
(30) 6-hydroxy, 7,2’,4’,5’-tetramethoxyisoflavone
(31) muningine,
(32) 7-méthyl tectorigenine
16
(33) 3’-hydroxy-formononetine
(34) pseudobaptigenine
D’autres flavonoïdes tels que les aurones et les flavanols ont également été isolés du genre.
Une étude chimique réalisée par Maurya et al. (2004) sur le cœur de bois P. marsupium Roxb.
a permis d’isoler les aurones suivants : le ptéroside (37), le ptéroisoauroside (38), le
marsuposide (39). Kesari et al. (2004) ont, quant à eux, isolé et identifié deux aurones (la 6-
hydroxy-5-methyl-3’,4’,5’-trimethoxyaurone (35) et le 6,4’-dihydroxyaurone-4–O–rutinoside
(36)) ainsi que le vijayoside (41) et la vijayosine (42) (flavone C-glucoside) à partir de
l’extrait éthanolique du cœur de bois de P. santalinus L.F.
Les composés tels que l’épicatéchine, la ptérosupine (43), la liquiritigénine (44), la
marsupsine (40) et l’isoliquiritigénine (45) ont été isolés de P. marsupium Roxb. par
Farboodnlay et Ray (1993).
17
(35) 6-hydroxy-5-méthyl-3’,4’,5-triméthoxyaurone-4-O-α-L-rhamnopyranoside
(36) 6, 4’-dihydroxyaurone-4-O-rutinoside
18
(37) ptéroside
(38) R = OMe : pteroisoauroside

(39) R = H : marsuposide
(40) marsupsine
19
(41) vijayoside
(42) vijayosine
(43) pterosupine
20
(44) liquiritigénine (45) isoliquiritigénine
1.2.4.Données pharmacologiques des métabolites isolés et extraits du genre Pterocarpus

Les propriétés pharmacologiques des extraits et des métabolites secondaires de différentes
espèces ont été mises en évidence par plusieurs études (Tableau 1- 1) :
Tableau 1- 1 : Activités pharmacologiques de quelques espèces de Pterocarpus
Activités
Extraits/Composés actifs biologiques ou
Espèces Références
(partie de plantes) biochimiques
démontrées
Arokiyaraj et al.,
Extrait MeOH (feuilles) Antioxydant
(2008)
P. santalinus Extrait MeOH (feuilles,

Antibactérien Manjunatha, (2006)
L.F. écorces de tronc)
Savinine (lignane) Inhibition du TNF α Cho et al., (2001)
Extraits aqueux, éthanol et Anti- Kameswara et al.,

hexane (écorces de tronc) hyperglycémiant (2001)
21
Inhibition de COX Hougee et al.,
Pterostilbène
2 (2005)
Inhibition de α- Abesundara et al.,

Extrait aqueux (latex)
glucosidase (2004)
Mathew et al.,
Proptérol Antibactérien
(1984)
P. marsupium Fraction AcOEt (cœur du Anti-
Roxb. bois), marsupsine, hyperlipidémiant Farboodni et al.,
pterosupsine, liquiritigenine (1993)
Extrait aqueux (écorces de Anti- Grover et Rathi,

tronc) hyperglycémiant (2002)
P. osun Craib.
Extrait MeOH, CHCl3 Ebi et Ofoefule,
Antimicrobien
(écorces de tronc) (1999)
Tanins (écorces de tronc) Antiviral Zhang et al., (1990)
P. indicus Extraits DCM, AcOEt,

Willd. MeOH et BuOH (écocres de
Khan et Omoloso,
tronc, feuilles et écorces des Antibactérien
(2003)
racines)
P. soyauxii Extrait aqueux (écorces de Toxicité aiguë et Tchamadeu et al.,

Taubert. tronc) subaiguë (2011)
P. santalinoides Mustofa et al.,

Décoction (écorces de tronc) Antiplasmodial
DC. (2000)
22
1.3 L’espèce P. erinaceus
Synonymes : Pterocarpus africanus DC., Lingoum erinaceum Lam.

Noms courants : santal du Sénégal, kino de Gambie, vène
Noms en langues nationales: Mooré : Nohinka, Noèèga,
Dioula : Guénu,
Bobo : yini
1.3.1.Caractères morphologiques
Pterocarpus erinaceus Poir. est un arbre de 8 à 15 m de hauteur, à fût droit et cylindrique
atteignant un mètre de diamètre et à cime ovoïde ou arrondie. Il peut être caractérisé d’emblée
par son écorce foncée noirâtre très lamelleuse : la tranche est brune avec des stries rouges
laissant s’écouler une résine rouge translucide qui se dessèche et se durcit rapidement (Figure
1- 4).
- Les feuilles : elles sont alternes, composées imparipennées, à pubescence opprimée à la
face inférieure et mesurent 3 à 15 cm. Elles comportent de nombreuses nervures latérales
finement saillantes sur les faces et des inters-nervures tertiaires qui sont presque aussi
marquées que les nervures secondaires latérales.
- Les fleurs : de couleur jaune d’or, elles deviennent jaunes pâles. Elles sont pédicellées,
asymétriques, odorantes et mesurent 10 – 12 mm de long ; elles ont des pétales gaufrés et un
calice pubescent à 5 dents courtes.
- Fruits et graines : les fruits membraneux, mûrissent de décembre à janvier et mesurent 7,5
cm de diamètre. Ils persistent longtemps sur l’arbre. La graine est entourée d’une aile et
hérissé de poils épineux (Arbonnier, 2002).
23
Figure 1- 4: P. erinaceus : Plante (A), feuille (B), écorces de tronc (C) et fleurs et feuilles (D)
Photo Noufou à Diendrésso, en Juin 2011
1.3.2.Répartition de P. erinaceus
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) pousse dans les savanes soudano-guinéenne et
guinéennes. Cette espèce s’étend de l’Afrique de l’ouest à l’Afrique centrale. On la trouve
principalement dans les pays suivants : Bénin, Burkina Faso, Cameroun, République
centrafricaine, Tchad, Côte d'Ivoire, Gabon, Gambie, Ghana, Guinée, Guinée-Bissau, Mali,
Niger, Nigéria, Sénégal, Sierra Leone, Soudan, Togo (Figure 1- 5).
24
Figure 1- 5: Carte de repartition de Pterocarpus erinaceus sur le continent africain
(http://www.ville-ge.ch/musinfo/bd/cjb/africa/details.php?langue=an&id=62762
Consulté le 15/01/2011)
1.3.3.Utilisations traditionnelles
L’espèce Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) est utilisée en médecine traditionnelle dans
la prise en charge de nombreuses pathologies sur le plateau Mossi (Nacoulma, 1996) et dans
le centre-est du Burkina Faso (Nadembega et al., 2011). Toutes les parties de la plante sont
utilisées comme remèdes :
Ecorces : dermatoses, blessures, ulcère chronique, plaie infectée, rhumatisme, bilharziose
intestinale, dysenterie, lèpre, teigne capillaire, éléphantiasis, variole, gale, plaie rebelle,
affections respiratoires, de la blennorragie.
Racines : stérilité des femmes, stimulant de la reproduction, ulcère, maux de ventre.
Feuilles : parasitose, paludisme, fatigue générale, états fébriles, arythmie, anémie, parasiticide
interne.
Gui : morsure de chien, maladie du sommeil, antiseptique, antibactérien
Sève : blépharite, antiseptique oculaire
25
Au Ghana, les feuilles de P. erinaceus sont utilisées dans le traitement du paludisme en
association avec des feuilles d’Afzelia africana Smith (ex Pers.) (Fabaceae) (Asase et al.,
2005).
1.3.4.Autres utilisations
Les feuilles servent de fourrage pour alimenter des bétails et sont vendues sur les marchés à la
saison sèche pour des moutons, des chèvres, du bétail et des chevaux d'engraissement. P.
erinaceus produit également un bon charbon de bois. De plus, son bois est utilisé pour la
construction et la confection des meubles (coffrets, tabourets). Les extraits des écorces de
troncde P. erinaceus sont utilisés comme colorant pour la teinture.
1.3.5.Métabolites secondaires isolés de l’espèce P. erinaceus

Une investigation phytochimique menée par Bevan et al., (1965) a permis d’isoler des
isoflavonoïdes tels que muningine (31), prunétine (25), pseudobaptigenine (46), tectorigénine
(47), afromorsine (48), du cœur de bois de P. erinaceus.
(46) pseudobaptigénine (47) tectorigénine
(48) afromorsine
26
1.3.6.Données pharmacologiques des molécules isolées de P. erinaceus
Différentes investigations ont permis de mettre en évidence les propriétés pharmacologiques
de ces molécules. En effet, la tectorigénine (également isolée des rhizomes de Belamcanda
chinensis (L.) DC. (Iridaceae) supprime la production de prostaglandine E2 par inhibition de
l’induction de la cyclo-oxygénase 2 (COX 2) des cellules inflammatoires (Kim et al., 1999).
Une autre étude a permis de montrer que la tectorigénine inhibe l’expression de l’oxyde
nitrique synthase inductible (iNOS) et l’activation du facteur nucléaire kappa-B (NF-κB) dans
une culture de macrophages RAW 264.7 (Pan et al., 2008). Une étude menée par
Ngamrojanavanich et al. (2007) a montré une cytotoxicité modérée de la prunétine sur une
lignée cellulaire KB. L’afromosine et la soyasaponine isolées de Wistaria brachybotrys Sieb.
et Zucc. inhibent les tumeurs de la peau et du poumons chez la souris (Konoshima et al.,
1992).
1.3.7.Données pharmacologiques antérieures sur l’espèce P. erinaceus

Les activités antiplasmodiales modérées de l’extrait éthanolique et des fractions éther de
pétrole, chloroforme et aqueuse des feuilles de P. erinaceus ont été étudiées par Karou et al.
(2005). Nuhu et al.(2000) ont rapporté les activités antimicrobiennes de l’extrait hexanique
des écorces de tronc de P. erinaceus. Les travaux de Benie et Thieulant (2004) ont prouvé que
des extraits hydro-alcooliques de Cola nitida (Vent.) A. Chev. (Sterculiaceae), d’Afrormosia
laxiflora (Benth. Ex Bak.) Harms et de P. erinaceus (Fabaceae) ont provoqué un blocage
d’ovulation chez le rat femelle en inhibant la libération de l’hormone lutéinisante (LH) et non
sur la libération de l’hormone folliculo-stimulante (FSH).
27
1.4 Inflammation
1.4.1.Définition
L’inflammation est un ensemble d’événements bien coordonnés qui permet à tout tissu
vascularisé de répondre à toute agression. Cliniquement, l’inflammation se manifeste en
quatre signes cardinaux décrits, il y a 2000 ans, par un médecin romain nommé Celse à savoir
: rougeur (rubor), tumeur (tumor), chaleur (calor) et douleur (dolor) (Russo-Marie et al.,
1996).
1.4.2.Les causes de l’inflammation

Les principales causes de l’inflammation sont essentiellement reparties en trois groupes :
- Causes infectieuses: virus, bactéries, champignons, prions, protéines infectieuses
autres que les bactéries ou virus.
- Causes chimiques : substances toxiques (médicaments, environnementaux),
allergènes.
- Causes physiques : chaleur, froid, traumatismes (ouvert ou non), brûlure, radiations,
corps étrangers accidentels ou thérapeutiques (prothèse).
1.4.3. Immunité innée et réaction inflammatoire

La pénétration d’un agent pathogène dans l’organisme est confrontée à une réaction
immunitaire appelée immunité innée, provoquant ainsi la stimulation des cellules
immunitaires : monocytes, macrophages, neutrophiles, cellules endothéliales et lymphocytes.
Cette stimulation induite par l’agent pathogène nécessite le complexe du modèle récepteur de
reconnaissance appelé pattern-recognition-receptors (PRRs) qui constitue les éléments
essentiels de l’immunité innée. Parmi les PRRs, il existe des récepteurs de signalisation
appelés TLR (toll-like-receptors) ; ces récepteurs sont spécialisés dans la reconnaissance des
micro-organismes. Les récepteurs PRRs exprimés sur la plupart des cellules immunitaires
reconnaissent les motifs structuraux sur les enveloppes des micro-organismes appelés
pathogen-associated molecular patterns (PAMPs). Les interactions entre PAMPs et PRRs vont
conduire dans un premier temps à l’internalisation et à la destruction de l’agent pathogène par
phagocytose, et dans un second temps à l’induction d’un processus inflammatoire protecteur
(Hawiger, 2001). La réponse inflammatoire aiguë est ainsi déclenchée suite à la libération des
médiateurs (cytokines, chimiokines, prostaglandines, leucotriènes, radicaux libres, monoxyde
d’azote) issue de l’activation cellulaire. Ces médiateurs agissent en augmentant la
perméabilité des vaisseaux sanguins et pour attirer des molécules et des cellules du système
28
immunitaire vers le site infecté. En effet la réaction inflammatoire permet d’orienter les
éléments de l’immunité innée vers le site de l’infection (Kuby, 1992).
1.4.4.Types d’inflammations
Il existe deux types de réaction inflammatoire : l’inflammation aiguë et l’inflammation
chronique.
1.4.41.La réaction inflammatoire aiguë

La réaction inflammatoire aiguë est immédiate suite à une agression, elle peut durer quelques
heures ou jours. Ce succèdent de façon rapide l’agression, la destruction cellulaire, la
détersion et la réparation. Les inflammations aiguës guérissent spontanément ou avec un
traitement, mais peuvent laisser des séquelles si la destruction tissulaire est importante.
1.4.4.2.L’inflammation chronique
L’échec de la réaction inflammatoire aiguë conduit à l’inflammation chronique qui dure
plusieurs mois, années ou toute la vie de l’individu et implique la réaction immunitaire. La
chronicité est due à un défaut d’élimination de l’agent pathogène qui persiste ou à une
perturbation du mécanisme inflammatoire (cancer, maladies auto-immunes). A la différence
de l’inflammation aiguë les phénomènes vasculaire et cellulaire coexistent tout au long de
l’inflammation. Les macrophages constituent les principales cellules de l’inflammation
chronique, et les lymphocytes et les plasmocytes sont présents lorsque la cause est
immunitaire. Dans la plupart des inflammations chroniques, la composante vasculaire est
présente. En effet l’hyperplasie vasculaire des vaisseaux de petits calibres se caractérise par
une augmentation du nombre de vaisseaux et un épaississement de leur paroi avec une
hypertrophie des cellules endothéliales et des fibres musculaires (Russo-Marie et al., 1996).
1.4.5.Les médiateurs de l’inflammation
1.4.5.1.Le système du complément

Le système du complément est composé d’une trentaine de protéines dont l’activation
s’effectue par trois voies :
- Voie classique : elle est faite de composants C1, C4, C2 et C3 activés par des
immunoglobulines IgG et IgM, l’endotoxine et des enzymes à activité trypsinique (plasmine).
29
- Voie alterne : les composants sont B, C3 et D.C3. Cette voie ne nécessite pas d’activateurs,
elle se produit en absence d’anticorps.
- Voie tronc commun terminal : ses composants sont C5a, le complexe d’attaque des
membranes (CAM), C5b, C6, C7, C8 et C9. L’activation de cette voie commence par le
clivage enzymatique de C5 en C5a ou C5-anaphylatoxine et C5b par les C-convertases
classiques ou alternes (C4b2a3b et C3Bbc3b).
L’activation du complément aboutit à la formation du complexe d’attaque C5b6789 qui
détruit nombreuses bactéries. La formation des anaphylatoxines (C3a et C5a) est favorable au
processus inflammatoire. En effet les anaphylatoxines induisent la libération de l’histamine et
d’amines vasomotrices, accroissent la perméabilité vasculaire et présentent des propriétés
chimiotactiques. L’anaphylatoxine C5a qui est un puissant chimioattractant augmente la
production de cytokines pro-inflammatoires et active les polynucléaires neutrophiles. Les
anaphylatoxines C3b et C4b s’adhèrent aux bactéries favorisant ainsi leur phagocytose
(opsonisation).
1.4.5.2.Amines vasoactives
Ces substances sont présentes dans tous les tissus. Il s’agit essentiellement de l’histamine, la
sérotonine et l’héparine. L’histamine, libérée à partir des granules mastocytaires, a une
action vasodilatatrice et entraîne par là une augmentation de la perméabilité capillaire.
Substance très largement répandue dans le règne animal et végétal, la 5-hydroxytryptamine (5
HT) ou sérotonine provient essentiellement des mastocytes et des plaquettes. Elle a une action
vasodilatatrice.
1.4.5.3.Protéases et peptides
Il s’agit essentiellement de la plasmine, de la kallikréine et de l’élastase, produites par les
leucocytes activés. La plasmine a pour effet d’activer le facteur Hageman en particulier dans
son action sur le système formateur de kinines. La kallikréine produite par les polynucléaires
neutrophiles agit sur les kininogènes en libérant des kinines dont le principal actif est la
bradykinine. Les kinines sont de puissants peptides vasodilatateurs à la dose d’ordre de
nanogramme. Ils augmentent la perméabilité des vaisseaux et entraînent l’apparition de
l’œdème à une molarité dix fois inférieure à celle de l’histamine. Au cours de l’inflammation,
la bradykinine serait le responsable majeur de la douleur (Katzung, 2006).
30
1.4.5.4.La substance P
La substance P a un rôle pro-inflammatoire. La substance P favorise la libération des
cytokines pro-inflammatoires et de l’histamine. Elle augmente également la perméabilité
vasculaire.
1.4.5.5.Médiateurs lipidiques
Les médiateurs lipidiques comprennent les métabolites de l’acide arachidonique
(eicosanoïdes) et le facteur d’activation plaquettaire
Eicosanoïdes : ce sont les prostaglandines, les thromboxanes et les leucotriènes. L’acide
arachidonique est issu des acides gras membranaires sous l’action de la phospholipase A2. La
transformation de l’acide arachidonique libre en eicosanoïdes emprunte deux voies
enzymatiques :
- Voie cyclo-oxygénase : les cyclo-oxygénases (COX 1 et COX 2) sont localisées le
long du réticulum et de l’enveloppe périnucléaire dans les cellules de l’organisme. La
COX 1 est constitutive et ubiquitaire. Elle joue un rôle de régulateur dans différents
processus physiologiques tels que la cytoprotection gastrique, l’hémostase primaire,
l’homéostasie vasculaire et l’hémodynamique rénale. Cependant la COX 2 est
inductible et n’exprimée à l’état basal que dans la prostate et le cerveau ; sa synthèse
est stimulée par le TNF α et l’interleukine 1β. La COX 2 intervient dans différentes
réponses hormonales (ovulation, nidation, métabolisme osseux, métabolisme
hydrosodé).
Les cyclo-oxygénases (COX) ou prostaglandines endoperoxydes synthases (PGH S)
catalysent l’oxygénation de l’acide arachidonique, pour aboutir à la formation de la
prostaglandine G2 (PGG 2). Au cours d’une cyclo-oxygénation suivie d’une
peroxydation, la PGG 2 est transformée en prostaglandine H 2 (PGH2). La formation
d’éicosanoïdes biologiquement actifs à partir de PGH2 requiert l’activité de
différentes synthases spécificiques pour former PGD2, PGE2, PGF2α, prostacycline
(PGI2) et thromboxane A2 (TXA2) (Figure 1- 6) (Sawynok, 2003).
Les prostaglandines E2 sont responsables de la vasodilatation et de l’augmentation du
flux sanguin. Les PGE1 et PGE2 sont responsables de l’élévation de la température du
corps.
Les prostacyclines ont une action vasodilatatrice. Produite par les cellules
endothéliales, la prostacycline PGI2 est un important médiateur dans l’œdème et la
douleur de l’inflammation.
31
Le thromboxane A2 sécrété par les plaquettes sanguines induit l’agrégation
plaquettaire et l’augmentation de la perméabilité vasculaire et elle est
vasoconstrictrice.
- Voie lipoxygénase : les 5-, 12-, et 15-lipoxygénases interviennent dans la réaction
inflammatoire. Ces enzymes métabolisent l’acide arachidonique en acide
hydroperoxyeicosatétraénoïques (HPETEs), qui se tranforment en dérivé hydroxyles
(HETEs) et en leucotriènes. Le produit de la 5-lipoxygénase (présente dans les
cellules inflammatoires : basophiles, mastocytes, éosinophiles, macrophages) le
leucotriène A4 (LTA4) est transformé en leucotriènes B4 (LTB4), leucotriènes C4
(LTC4) et leucotriènes D4 (LTD4) (Figure 1- 7).
Les leucotriènes B4 participent au recrutement des polynucléaires neutrophiles. Ils ont
un effet chimioattractant pour les cellules inflammatoires. Les LTC4 sont des
vasoconstricteurs tandis que les LTD4 ont un effet amplificateur de la perméabilité
vasculaire. Les LTD4 et LTC4 sont des agents chimioattractifs puissants pour les
éosinophiles ; ils favorisent l’adhérence des éosinophiles, leur dégranulation et la
formation des radicaux oxygènés (Katzung, 2006).
Figure 1- 6: Biosynthèse des prostaglandines et des thromboxanes (Cipollone et al., 2008)
32
Figure 1- 7: Biosynthèse des leucotriènes (Werz et Steinhilber, 2006)
1.4.5.6.Le Platelet activating factor (PAF)

Le PAF est synthétisé dans les monocytes macrophages, polynucléaires neutrophiles,
plaquettes, cellules endothéliales. Le PAF est généré à partir d’un métabolite appelé lyso-PAF
sous l’action de acétyltranférase, issu du métabolisme de l’acide arachidonique. Le PAF est
synthétisé dans les cellules endothéliales et monocytes stimulées par l’histamine, le TNF α,
l’interleukine 1 et le leucotriène C4. Le PAF favorise l’agrégation plaquettaire et active une
série de fonctions des plaquettes, des macrophages, des neutrophiles et des éosinophiles
33
(activation ou agrégation, adhérence, augmentation du calcium intracellulaire, dégranulation,
production de radicaux libres).
1.4.5.7.Les cytokines
Les cytokines sont des polypeptides ou glycoprotéines médiateurs qui régulent les aspects de
l’immunité et de l’inflammation. En effet elles sont des messagers chimiques de la
communication intercellulaire. Les cytokines sont produites par plusieurs cellules telles que
les macrophages. Au cours de l’inflammation deux types de cytokines sont produits : les
cytokines pro-inflammatoires et les cytokines anti-inflammatoires. Ces deux types de
cytokines agissent sur leurs récepteurs de manière autocrine, paracrine et endocrine.
- Cytokines pro-inflammatoires : en réponse à toute stimulation inflammatoire en
exemple la lipopolysaccharide (LPS), les cytokines pro-inflammatoires sécrétées par
les macrophages sont le tumor necrosis factor alplha (TNF α), l’interleukine 1(IL 1) et
l’interleukine 6 (IL 6).
Le TNF α : le TNF α possède principalement deux récepteurs : TNFR1 et TNFR2. Le
TNR1 est constitutif et ubiquitaire, largement exprimé dans presque tous les types
cellulaires alors que le TNFR2 est inductible et est exprimé dans les cellules
immunitaires et endothéliales. Sa liaison aux récepteurs induit la sécrétion de
nombreux médiateurs de l’inflammation, la prolifération et la différenciation
cellulaire. Le TNF α stimule la production de PGE2 par les fibroblastes, IL-1, IL-6,
IL-8 et les radicaux libres oxygénés. Il est responsable de l’adhérence cellulaire à
l’endothélium (Landry et Gies, 2006).
L’interleukine 1 : deux types de récepteurs sont identifiés : IL1R de type I, exprimé à
la surface des lymphocytes T et les fibroblastes ; et IL1R de type II est exprimé au sein
des lymphocytes B, les monocytes et les neutrophiles. IL-1 active les neutrophiles et
stimule la libération des prostaglandines (PGE2) et responsable de la destruction du
cartilage. IL-1 agit en synergie avec le TNF α dans l’induction des protéases des
chondrocytes. IL-1 et TNF α entretiennent leur propre production. Ils induisent
différents types de cellules à produire des substances pro-inflammatoires telles que les
médiateurs lipidiques, les chémokines, les radicaux libres et les enzymes
protéolytiques.
L’interleukine 6 (IL-6) : IL-6 est une cytokine importante au cours de l’inflammation.
Sa production est stimulée par IL-1 et TNF α. Il induit la coagulation, stimule la
production des PAF par les neutrophiles et active les cellules endothéliales. IL-6
34
stimule la sécrétion de protéines par des cellules hépatocytes de la phase aiguë de
l’inflammation.
- Les cytokines anti-inflammatoires : l’interleukine 4 (IL-4), l’interleukine 10 (IL-10),
l’interleukine 13 (IL-13), l’interféron gamma (IFN γ) et le transforming growth factor
bêta (TGF β) sont les principales cytokines anti-inflammatoires qui réduisent les
réactions inflammatoires et immunitaires. Ils induisent des effets qui inhibent les
activités générées par IL-1 et TNF α.
L’interleukine 4 et l’interleukine 13 : l’IL-4 induit la production du collagène en
inhibant la collagénase. L’IL-4 inhibe la production de l’IL-1 et l’IL-6. L’IL-4 et l’IL-
13 sont des inducteurs puissants de l’immunoglobuline E (IgE).
L’interleukine 10 : l’IL-10 bloque la production des cytokines pro-inflammatoires (IL-
1, IL-6 et TNF α). L’IL-10 réduit l’expression des récepteurs de TNF α à la surface
des monocytes.
L’interféron gamma (INF γ): l’INF γ induit l’activité cytotoxique des macrophages
vis-à-vis des cellules tumorales. Il rend les macrophages résistant face au
développement des agents pathogènes (parasites, virus, bactéries).
Le transforming growth factor beta : le TGF β produit par les macrophages inhibe la
production d’IL-1 et de TNF α. Il a un effet inhibiteur sur la production de l’anion
superoxyde et de monoxyde d’azote, et sur le recrutement et l’activation des
leucocytes.
1.4.5.8.Les radicaux libres oxygénés (RLO)

L’activation des macrophages et des neutrophiles stimule l’activité de l’enzyme NADPH
oxydase qui provoque la génération de radicaux libres en particulier le superoxyde (O2-). Les
RLO ont la propriété d’éliminer les pathogènes phagocytés ou situés au voisinage des
phagocytes. Ils représentent la première ligne de défense non spécifique et essentielle dans la
défense de l’organisme. La production de l’anion superoxyde exerce un effet toxique pour les
tissus voisins.
1.4.5.9.Le monoxyde d’azote (NO)

Le monoxyde d’azote est synthétisé par une famille d’enzymes appelée NO-synthases
(neuronale, endothéliale et inductibles). Les NO-synthases inductibles (iNOS) s’expriment en
réponse aux cytokines pro-inflammatoires (IL-1β et TNF α) et aux endotoxines.
35
Les iNOS transforment la L-arginine en NO et en citruline. En présence de l’anion
superoxyde le NO forme un puissant composant cytotoxique, le peroxynitrite qui est un
oxydant contribue aux dommages tissulaires. Le NO induit la vasodilatation et régule le
recrutement des leucocytes.
1.4.6.Les étapes de l’inflammation aiguë

La réaction inflammatoire est un processus qui se déroule en quatre étapes : réaction vasculo-
exsudative, réaction cellulaire, détersion et réparation.
1.4.6.1.Réaction vasculo-exsudative
Cette réaction se caractérise par une congestion active, un œdème inflammatoire (exsudat) et
une diapédèse leucocytaire
Congestion active : cette phase est déclenchée sous l’action des médiateurs chimiques
(histamine, sérotonine) et des stimuli nerveux. Elle se caractérise par une
vasodilatation.
Œdème inflammatoire (exsudat) : l’augmentation de la perméabilité vasculaire des
parois entraîne le passage dans le tissu conjonctif interstitiel de l’exsudat constitué
essentiellement d’eau et de protéines plasmatiques.
Diapédèse leucocytaire : cette phase est la migration des leucocytes sous l’action de
bradykinine, des facteurs chimiotactiques et des dérivés de l’acide arachidonique, et
leur accumulation dans le foyer lésionnel. La migration leucocytaire comporte une
margination des leucocytes à proximité des cellules endothéliales, une adhérence
leucocytaire aux cellules endothéliales et un passage trans-endothélial des leucocytes
(Figure 1- 8).
36
Figure 1- 8 : Réaction inflammatoire (diapédèse) (Béné et al., 2005)
1.4.6.2.Réaction cellulaire
La réaction cellulaire se caractérise par la formation d’un granulome inflammatoire. La
composition cellulaire est constituée des cellules du sang (polynucléaires, monocytes et
lymphocytes) et des cellules du tissu conjonctif (fibroblastes, cellules endothéliales,
macrophages résidents et mastocytes). La composition du tissu varie en fonction du temps, les
polynucléaires caractéristiques de l’inflammation aiguë, après quelques jours ou semaines de
l’évolution de l’inflammation, laissent la place aux macrophages, aux lymphocytes et
plasmocytes. Puis progressivement sous l’influence des facteurs de croissance, le tissu de
granulation s’enrichit en fibroblastes et en cellules endothéliales formant ainsi des néo-
vaisseaux.
Le rôle du granulome inflammatoire est de :
 assurer la détersion par les phagocytes (polynucléaires et macrophages)
 développer une réaction immunitaire B et/ou T.
37
 sécréter des multiples médiateurs intervenant dans le recrutement cellulaire, la
phagocytose, défense immunitaire et la modification de la matrice conjonctive.
1.4.6.3.Détersion
C’est la phase d’élimination des tissus nécrosés, des agents pathogènes et du liquide
d’exsudat. Si la détersion est incomplète, l’inflammation aigüe va évoluer à une inflammation
chronique. La détersion s’effectue en deux mécanismes :
Détersion interne : élimination des tissus nécrosés, agents pathogènes par phagocytose
tandis que le liquide exsudat est drainé dans la circulation lymphatique et résorbé par les
macrophages.
Détersion externe : liquéfaction du matériel nécrosé (pus, caséum) et élimination par
fistulisation à la peau ou dans un conduit bronchique, urinaire, intestinal.
1.4.6.4.Réparation
Elle comprend deux étapes : la cicatrisation et la régénération
Cicatrisation : la cicatrisation aboutit à la formation d’un tissu conjonctif qui remplace les
tissus détruits lors de l’inflammation. La phase précoce de la cicatrisation est caractérisée par
l’élaboration de nombreux vaisseaux (angiogenèse). Ceux-ci peuvent prendre un aspect
exubérant appelé le bourgeon charnu.
Régénération : elle apparaît parallèlement à la réparation conjonctive. Les cellules
épithéliales détruites sont remplacées par la prolifération des cellules épithéliales saines
situées autour du foyer inflammatoire. Au niveau d’un revêtement (peau, muqueuses),
l’épithélium régénère de la périphérie au centre de la perte tissulaire.
La réponse inflammatoire qui devient pathologique peut se guérir de manière spontanée ou
par l’intervention thérapeutique (anti-inflammatoire stéroïdiens et non stéroïdiens). Lorsque la
guérison ne se fait pas, le processus inflammatoire évolue vers la chronicité avec une réponse
lymphocytaire comprenant l’activation et la prolifération des lymphocytes B et T.
L’évolution de l’inflammation dépend également de l’apoptose et nécrose cellulaires. Ainsi,
les cellules mortes par apoptose ne rélarguent pas leur contenu potentiellement nocif,
cependant les cellules en nécrose sont lysées et libèrent leur matériel cytosolique qui active
les cellules phagocytoses conduisant à l’aggravation de l’inflammation.
38
1.4.7.Quelques pathologies à composante inflammatoire
1.4.7.1.Pathologies infectieuse
Bactérienne: l’inflammation s’installe autour des corps étrangers ayant pénétré dans
l’organisme. Les bactéries libèrent les toxines (endotoxines et exotoxines) qui sont
responsables de la libération massive des cytokines pro-inflammatoires (IL 1β, IL 6, TNF α).
La toxine B (Clostridium difficile), le lipopolysaccharide (LPS) (E. coli), pneumolysine
(Streptococcus pneumoniae) stimulent la production des cytokines IL 1β, IL 6, TNF α par les
macrophages et monocytes, à des concentrations de l’ordre de nanomolaire (Brian et al.,
1996)
Parasitaires : l’infection parasitaire provoque une réaction inflammatoire caractérisée par une
activation des polynucléaires éosinophiles, des polynucléaires neutrophiles. Le TNF α joue un
rôle central dans les aspects générant la pathologie du paludisme. L’infection du plasmodium
falciparum induit la formation des prostaglandines qui provoquent des lésions tissulaires par
le stress oxydatif causé par la libération des radicaux libres oxygénés (Clark et Cowden,
2003).
Mycose : les champignons pathogènes sont responsables des lésions cutanées superficielles,
sous-cutanées ou viscérales. La candidose est riche en polynucléaires neutrophiles.
Virale : les virus sont des organismes microscopiques ayant un seul type d’acide nucléique
(ADN, ARN). L’infection virale peut donner deux types de lésions : une lésion cellulaire
directement induite par le virus et une lésion indirecte provoquée par la réaction immunitaire
dirigée contre les cellules infectées. L’infection du virus VIH de type 1 induit une production
d’IL 6 au niveau des monocytes ; en plus le taux d’IL 6 croit chez les personnes vivant avec le
VIH (Wolfgang, 1996).
1.4.7.2.Arthrite rhumatoïde
Elle est une pathologie inflammatoire chronique caractérisée par la dégénérescence du
cartilage articulaire associée à la prolifération du tissu osseux sous-jacent. Elle s’étend à toute
la synoviale et dans les cas graves peut atteindre d’autres organes. Contrairement au liquide
synovial normal acellulaire, l’arthrite rhumatoïde liquide synoviale est enrichie de
neutrophiles, macrophages et de lymphocytes T. L’IL 1 et le TNF α stimulent la production
des prostaglandines E et la collagénase ; ils interviennent dans la stimulation de la résorption
du cartilage en inhibant la synthèse du protéoglycane. (Feldman et al., 1996 ; Maini et Taylor,
2000).
39
1.4.7.3.L’asthme
L’asthme est une maladie inflammatoire chronique des voies respiratoires impliquant les
mastocytes, les éosinophiles et les lymphocytes T. De nombreux médiateurs sont impliqués
dans l’inflammation asthmatique. La bradykinine joue un rôle important comme activateur de
la sensibilisation des nerfs sensitifs dans les voies respiratoires, entrainant toux et oppression
thoracique (Barnes, 1993). Les leucotiènes (C4, D4 et E4) ont ensuite été identifiés comme
étant d’importants médiateurs de réactions d’hypersensibilité et de bronchoconstriction. Il est
admis que les leucotriènes jouent un rôle important dans l’asthme. Ces médiateurs sont
impliqués dans le recrutement des éosinophiles dans les tissus des voies aériennes, la
contraction des muscles lisses pulmonaires et la sécrétion de mucus. Après accummulation
aux sites inflammatoires, les éosinophiles ont le potentiel d’induire des lésions et un
dysfonctionnement des voies respiratoires par la libération de médiateurs lipidiques (PAF et
leucotriène C) (Hogan et Foster, 1997 ; Werz et Steinhilber, 2006).
1.4.7.4.L’athérosclérose
L’athérosclérose est une maladie chronique de la vascularisation influencée par de multiples
facteurs impliquant une réaction entre les composants du sang et de la paroi artérielle. Les
réactions inflammatoires et immunologiques jouent un rôle important au cours du
développement de la maladie (Zhao et al., 2009) . L’athérosclérose est la première cause de
nombreuses maladies cardiovasculaires y compris les maladies coronariennes de l’artère,
l’ischémie et de nombreux cas d’insuffisance cardiaque. L’athérosclérose est causée par
l’accumulation de lipoprotéines à faible densité (LDL) et des éléments fibreux dans les
grandes artères. Elle est initié par la migration transendithéliale et l’activation des monocytes
circulants et les lymphocytes sur le site de lésion vasculaire. Les cellules recrutées libèrent des
chimiokines et des cytokines pro-inflammatoires qui favorisent la prolifération vasculaire et la
migration des cellules musculaires lisses vers la lésion d’athérosclérose, ce qui augmente
l’épaississement néo-intimale. Les macrophages chargés de cholestérol subissent une nécrose
ou une apoptose (Lusis et al., 2004).
1.4.8.Traitement pathologique
La prise en charge de l’inflammation utilise une variété de médicaments anti-inflammatoires
qui inhibe le processus inflammatoire à plusieurs niveaux de l’inflammation. On note
40
essentiellement deux catégories d’anti-inflammatoires : les anti-inflammatoires non
stéroïdiens (AINS) et les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS).
1.4.8.1.Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS)

Les AINS classiques sont regroupés en sept classes chimiques en dehors des autres qui
agissent préférentiellement à un isoenzyme de la cyclo-oxygénase. Toutes les différentes
classes chimiques ont en commun l’inhibition de la production des prostaglandines à des
degrés différents (Katzung, 2006 ; Russo-Marie et al., 1998).
- Acides salicyliques et dérivés : l’acide acétylsalicylique (49) ou aspirine est la
molécule type de cette classe. Elle exerce un effet anti-agrégant plaquettaire à faible
dose, un effet antalgique et antipyrétique à dose moyenne et un effet anti-
inflammatoire à forte dose. Tous les salicylates non acétylés tels que le choline-
salicylate de magnésium, le salicylate de sodium et le salicyl-salicylate ont des effets
antalgiques et sont inhibiteurs compétitifs réversibles de la COX moindre que
l’aspirine.
(49) acide acétylsalicylique
- Acides phénylacétiques et apparentés : le diclofénac (50) est un dérivé de l’acide

phénylacétique, il inhibe les cyclo-oxygénases de manière non sélective.
(50) diclofénac
41
- Acides indolacétiques et dérivés : l’indométacine est la molécule de référence de cette
classe. L’indométacine (51) exerce des effets anti-inflammatoire et antalgique aux
mêmes doses. Elle possède des effets anti-agrégant plaquettaire et antipyrétique. Le
sulindac, tolmétine et ténidap font partis de cette famille chimique.
(51) indométacine
- Acides propioniques et dérivés : ce groupe exerce des effets pharmacologiques selon

les doses administrées. Ainsi, la dose administrée pour un effet anti-inflammatoire est
le double de celle administrée pour un effet antalgique et antipyrétique. L’ibuprofène
(52) et le kétoprofène sous leur forme pharmaceutique sont à faible dose à visée
antalgique et à forte dose à visée anti-inflammatoire.
(52) ibuprofène
- Acides anthraniliques et apparentés : cette famille chimique des AINS comprend les
fénamates : acide méfénamique, acide flufénamique, acide méclofénamique (53),
acide tolfénamique et acide niflumique. L’usage des fénamates est essentiellement dû
à leurs propriétés anti-inflammatoire et antalgique.
42
(53) acide méclofénamique
- Pyrazolones : le phénylbutazone (54) est un dérivé des pyrazolones, il possède un

puissant effet anti-inflammatoire. Sa toxicité, en particulier ses effets hématologiques
(anémie aplastiques) limite son emploi en thérapie.
(54) phénylbutazone
- Carboxamides du thiazine-dioxyde ( oxicams) : ce groupe comprend le piroxicam

(55), le meloxicam et le ténoxicam. Le piroxicam inhibe la migration des leucocytes et
la production des radicaux libres oxygénés à fortes doses.
(55) piroxicam
43
A ces différentes classes chimiques des AINS classique on distingue une récente classe
d’AINS. Il s’agit des inhibiteurs sélectifs de la COX 2, appelés coxibs. Les coxibs inhibent
plus activement la COX 2 que la COX 1. Cette classe régroupe le célécoxib (56), l’étoricoxib,
méloxicam, le rofécoxib (57) et le valdécoxib. Le célécoxib possède un pouvoir inhibiteur très
sélectif de la COX 2 environ 10 à 20 fois que la COX 1. Le méloxicam inhibe de manière
préférentielle la COX 2 comparativement à la COX 1.
(56) célécoxib (57) rofécoxib

Mécanisme d’action
Les anti-inflammatoires non stéroïdiens inhibent les isoenzymes COX1 et COX2. Les
isoenzymes COX1 et COX2 ont environ 60 % de la sequence d’acides aminés identique
cependant l’inductibilité reste la différence majeur entre ces isoenzymes. L’isoforme COX 1
est constitutivement exprimé dans la plupart des cellules et entraine la production de
prostaglandines homoéostatiques qui maintiennent l’intégrité des muqueuses grastro-
intestinale ainsi que le débit sanguin rénal. Il est également exprimé dans les plaquettes et
responsable de la production du thromboxane A2 qui intervient dans l’activation et
l’agrégation des plaquettes (Mukherjee, 2002).
Le COX 2 est inductible, il est prédominant dans les lésions tissulaires et est la principale
source de production des prostanoïdes pendant l’inflammation. Sa concentration
physiologique étant très faible dans les cellules (prostate, ultérus, cerveau, poumons) est
multipliée par 10 à 80 fois lors d’une inflammation (Burian et Geisslinger, 2005).
L’interaction des AINS avec les cyclo-oxygénases est, soit mixte avec une inhibition de la
COX 1 et 2, soit plus sélective vis-à-vis de l’une ou l’autre cyclo-oxygénase. L’acide
acétylsalicylique inhibe de manière irréversible la COX 1, l’aspirine acétyle la sérine (ser)
situé au voisinage du site actif et empêche la formation de la prostaglandine PGG2. Les autres
AINS inhibent les COX par un mécanisme réversible. L’indométacine et le sulindac sont
légèrement sélectifs pour la COX 1 ; le méclofénamate et l’ibuprofène inhibent les deux
44
cyclo-oxygénases. Les inhibiteurs sélectifs de la COX 2 (coxibs) ont des propriétés anti-
inflammatoire, antalgique et antipyrétique similaires aux AINS traditionnels. Les coxibs ont
moins d’effets indésirables digestifs, et ils n’ont aucun impact sur l’agrégation plaquettaire.
Les AINS ont d’autres mécanismes d’action à savoir l’inhibition du chimiotactisme, des
cytokines pro-inflammatoires et la production des radicaux libres oxygénés. Ils atténuent la
sensibilité des vaisseaux à la bradykinine et l’histamine et antagonisent la vasodilatation. A
dose thérapeutique les AINS traditionnels sont incapables de bloquer l’activité de 5-
lipoxygénase, ce qui pourrait accroître la production des leucotriènes (Katzung, 2006 ; Russo-
Marie et al., 1998).
1.4.8.2.Les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS)

Au niveau du cortex surrénal, le cholestérol est converti par des oxydases en corticostéroïdes
à 21 carbones (glucocorticoïdes) et en androgènes à 19 carbones (minéralocorticoïdes). Les
glucocorticoïdes et les minéralocorticoïdes naturels et synthétiques sont utilisés pour le
traitement de certains processus physiopathologiques. L’aldostérone le principal
minéralocorticoïde est caractérisée par ses effets sur la balance des ions monovalents
essentiellement la réabsorption du sodium, la sécrétion des ions potassium et hydrogène. Les
synthétiques de l’aldostérone tels que la désoxycortone et la fluoro-9 alpha-hydrocortisone
sont indiqués en thérapeutique en cas de déficit d’insuffisance surrénale et en d’hypotension
(Landry et Gies, 2003 ; Schorderet, 1992).
Le cortisol (58) qui est le principal glucocorticoïde est caractérisé par ses effets métabolique
du glucose et anti-inflammatoire. Toute modification structurale des minéralocorticoïdes et
des glucocorticoïdes sur l’oxygène en C3 et en C20, sur la double liaision en C4 – C5 et sur le
radical hydroxyl (OH) en C11entraine la perte de l’activité biologique (Schorderet, 1992).
Les anti-inflammatoires stéroïdiens constituent essentiellement les glucocorticoïdes :
hydrocortisone (58), prednisolone (60), bétamétasone (59), dexaméthasone. Les
glucocorticoïdes sont des dérivés de synthèse chimique du cortisol qui est une hormone de la
corticosurrénale. Les AIS possèdent un effet anti-inflammatoire lorsque l’organisme se trouve
dans un état pathologique.
45
(58) hydrocortisone (Cortisol) (59) bêtaméthasone
(60) prednisolone
Mécanisme d’action
La particularité des AIS est qu’ils interviennent à toutes les étapes du processus
inflammatoire. Ils diminuent le phénomène vasculaire et antagonisent les phénomènes
cellulaires précoces et tardifs de l’inflammation. L’efficacité anti-inflammatoire des AIS
s’explique par leur effet inhibiteur sur la production des cytokines, des médiateurs lipidiques
et les enzymes pro-inflammatoires. Ainsi au niveau des macrophages les AIS inhibent
l’activation de la phospholipase A2, la production des médiateurs lipidiques (prostaglandines,
leucotriènes, le PAF), des radicaux libres, du monoxyde d’azote et des cytokines. (Russo-
Marie et al., 1998; Muster, 2005)
1.4.9.Effet antalgique
La douleur est une expérience sensorielle et émotionnelle désagréable liée à des lésions
tissulaires réelles ou potentielles ou décrites dans des termes évoquant une telle lésion
(Moore, 2009). La douleur inflammatoire a une fonction protectrice de la région lésée ; et
46
cette action est due à l’intervention de plusieurs médiateurs chimiques et la compression des
terminaisons nerveuses par de l’œdème.
Les prostaglandines (PGE 2, PGD 2, PGI2) jouent un rôle essentiel dans la douleur
inflammatoire, ainsi elles ont la capacité d’abaisser le seuil d’excitabilité des nocicepteurs des
fibres C. Elles exercent leurs actions par activation de récepteurs spécialisés (EP1, EP2, EP3,
EP4, DP1, DP2, IP) couplés à une protéine G. La bradykinine, médiateur chimique produit
lors d’une inflammation, exerce son action nociceptive lors que son récepteur B1 est induit.
Le pouvoir analgésique des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) est lié à leur capacité
d’inhiber la biosynthèse des prostaglandines. La dose analgésique des AINS est faible
comparativement à celle de l’anti-inflammatoire (Kresec et al., 2007 ; Blatties, 2005).
1.4.10.Effet antipyrétique
La fièvre est définie comme étant une élévation de température du corps qui se manifeste en
réponse défensive à l’entrée d’un corps étranger. Elle est consécutive à un réglage transitoire
du thermostat hypothalamique à une température de 3 à 4 °C au plus. La fièvre est un
processus à distinguer de l’hyperthermie qui correspond à une augmentation de température
incontrôlée et est indépendante de la valeur cible de la thermorégulation hypothalamique
(Blatteis, 2005).
La fièvre est la conséquence de la biosynthèse des prostaglandines PGE 2 au niveau des
cellules endothéliales des vaisseaux sanguins de l’hypothalamus. Le pyrogène exogène qui
peut être soit un agent pathogène (virus, bactéries, champignons, endotoxine), soit un autre
corps étranger (greffe, allergène) ou des cellules cancéreuses activent les leucocytes. Les
leucocytes activés produisent des cytokines pro-inflammatoires (IL 1β, TNF α, IL 6) qui
stimulent la production de PGE 2.
L’effet antipyrétique des anti-inflammatoires non stéroïdiens est lié à une inhibition de la
biosynthèse de PGE 2. Le passage de l’acétaminophène (paracétamol), à travers la barrière
hémato-encéphalique, explique son effet antipyrétique et analgésique lié à l’inhibition de PGE
2. Des études suggèrent qu’il pourrait inhiber la cyclo-oxygénase 3 (COX 3) dans le système
nerveux central (Katzung, 2006). La COX 3 est une isoenzyme dérivées de la COX 1 avec un
intron de 33 acides aminés de plus que la COX 1 ; elle est sélectivement inhibée par le
paracétamol, l’antipyrine, la dipyrone et la phénacetine (Chandrasekharan et al., 2002).
47
Figure 1- 9: Mécanisme de la fièvre (Rogo von Vigier, 2002)
1.4.11.Les antirhumatismaux
Outres les anti-inflammatoires non stéroïdiens et stéroïdiens, les antirhumatismaux, utilisés
dans la prise en charge de l’arthrite rhumatoïde, ont des effets anti-inflammatoires. Il s’agit
des sels d’or, la ciclosporine et les anticorps anti-TNF α.
Les sels d’or : ils modifient le processus pathologique du rhumatisme arthrite.
L’aurothiomalate et l’aurothioglucose sont administrés par injection cependant l’auranofine
est administré oralement. Les sels d’or suppriment la fonction du système immunitaire par
réduction de l’activité des macrophages et des lymphocytes. En plus l’aurothiomalate réduit
les lymphocytes circulant et l’auranofine inhibe la libération des prostaglandines PGE2 et de
leucotriènes B4 des cellules synoviales (Vane et Botting, 1987).
La ciclosporine : elle exerce un effet immunosuppresseur principalement à travers l’inhibition
des lymphocytes T. la ciclosporine inhibe la production de récepteurs IL-1 et IL-2 et
l’interaction entre macrophages et lymphocytes. L’hypertension artérielle, la néphrotoxicité et
l’hépatotoxicité constituent les effets indésirables de ce médicament.
Les anticorps anti-TNF α : la cytokine TNF α joue un rôle important dans le processus
inflammatoire et dans le processus des destructions des os et du cartilage par leur action
directe sur les cellules synoviales (fibroblastes). La stratégie visant à bloquer le TNF α a
conduit au développement des anticorps monoclonaux anti-TNF α dont trois ont été mis sur le
marché. L’adalimumab et l’infliximab qui se complexent avec du TNF α soluble et prévient
48
son interaction avec les récepteurs de surfaces cellulaires p55 et p75 ; ce qui entraine un
rétrocontrôle négatif de la fonction des macrophages et des lymphocytes T. L’étanercept
inhibe ainsi la lymphotoxine-α en se liant aux molécules de TNF α (Katzung, 2006).
1.4.12.Médicament étiologique
La thérapie utilisée contre l’agent pathogène arrive à réduire le processus inflammatoire.
- Les tétracyclines sont des piégeurs des radicaux libres oxygénés et ont un pouvoir
antioxydant (Griffin et al., 2011).
- Les antibiotiques macrolides ont la capacité d’inhiber la production de l’interleukine 6
(IL6) et la biosynthèse des prostaglandines (PGE 2) (Vesna et al., 2011).
- La chloroquine et l’hydroxychloroquine utilisés dans le traitement du paludisme ont
une action anti-inflammatoire dans la polyarthrite rhumatoïde (Katzung, 2006).
1.4.13.Effets secondaires indésirables des anti-inflammatoires
1.4.13.1.Les anti-inflammatoires non stéroïdiens

L’inhibition de la biosynthèse des prostaglandines par les AINS entraine des effets
indésirables qui sont essentiellement gastro-intestinaux et rénaux. Les effets indésirables des
AINS sont généralement plus observés sur un traitement au long cours et/ou chez des patients
à risque.
- Effets gastro-intestinaux : les effets indésirables gastro-intestinaux des AINS non-
sélectifs de la COX constituent la principale cause. Ces effets qui sont dose-
dépendants sont à prédominance gastrique et comportent des douleurs, des brûlures et
des nausées. Les effets indésirables des AINS dépendent de l’inhibition des
isoenzymes COX 1 et COX 2. Les AINS inhibiteurs de la COX 1 provoquent les
dommages digestifs (ulcères gastroduodénaux, sténose, perforation) car la COX 1 est
constitutive et physiologique. Cependant les inhibiteurs sélectifs de la COX 2
(inductible) présentent moins d’effets indésirables digestifs comparativement aux
AINS non-sélectifs. La longue durée du traitement et la forte dose sont des facteurs
favorisant la survenue de la sténose (Figure 1- 10) (Muster, 2005 ; Martin, 2001).
.
49
Figure 1- 10 : pathogénie des lésions intestinales induites par les AINS (Thiéfin et
Beaugerie , 2005)
- Effets rénaux : les principales prostaglandines présentent dans le rein sont PGE2,
PGD2, PGF2 et PGI2. Elles interviennent dans la régulation de la microcirculation, le
transport tubulaire hydrosodique, le débit de filtration glomérulaire et la sécrétion de
rénine. Ainsi comme la COX 2 est constitutivement active dans le rein, les doses
recommandées des inhibiteurs sélectifs de COX 2 causent des toxicités rénales
(insuffisance rénale aiguë, rétention hydrosodée) similaires aux AINS classiques.
- Agrégation plaquettaire : les AINS inhibent la COX plaquettaire. Cette inhibition de la
biosynthèse des thromboxanes (agent agrégant plaquettaire) est responsable de
l’allongement du temps de saignement. Les inhibiteurs sélectifs de la COX 2
n’affectent pas l’agrégation plaquettaire (Muster, 2005 ; Martin, 2001 ; Thiéfin et
Beaugerie, 2005)
- Autres effets : les AINS induisent des effets hépatites (augmentation des
transaminases), pseudo-asthmatiques (broncho-constriction, crises d’asthme) et
50
l’hypertension. Les inhibiteurs de la COX 2 induisent des événements
cardiovasculaires thrombotiques. Le risque de toxidermie est observé avec la
phénylbutazone et les oxicams.
1.4.13.2.Les anti-inflammatoires stéroïdiens

Les anti-inflammatoires stéroïdiens qui sont essentiellement les glucocorticoïdes induisent des
effets indésirables. La corticothérapie provoque à long terme une fœtotoxicité, un ulcère
gastroduodénal, des hémorragies et une pancréatite aiguë (chez l’enfant). La corticothérapie
est à l’origine des troubles métaboliques (rétention hydrosodée, augmentation du catabolisme
protéique), des troubles endocriniens (atrophie corticosurrénale secondaire) et entraine une
complication infectieuse secondaire due à son effet immunosuppresseur (Muster, 2005 ;
Faure, 2009). Ils bloquent la synthèse de la mélanine ce qui entraine une dépigmentation des
patients soumis à une longue corticothérapie.
1.4.14.Métabolites secondaires à propriétés anti-inflammatoires : triterpènes et

flavonoïdes
1.4.14.1.Les triterpènes
Les triterpénoïdes sont des oligomères de l’isopentényl pyrophosphaste, lui-même impliqué
dans la biogénèse du squalène. Les dérivés du squalène constituent un large groupe de
molécules en C30 , plus ou moins oxygénés. La cyclisation du squalène conduit, en effet, à la
biogénèse de différentes classes de triterpènes : les mono-, di-, tri-, tetra- ou pentacycliques.
Les triterpénoïdes et leurs différentes formes (esters, éthers, glycosides) sont des métabolites
secondaires ubiquitaires dans la flore et les faunes terrestres et marines (Yadav et al., 2010).
51
(61) α-amyrine (62) taraxérol
(63) acide bétulinique (64) acide ursolique

Quelques molécules triterpéniques parmi les plus connues
- Propriétés anti-inflammatoires des triterpènes
Les triterpènes sont constitutifs et induisent une réponse défensive à toute agression
biologique et environnementale contre la plante. Plusieurs triterpènes issus de sources
végétales jouent un rôle important dans la réduction de l’inflammation. En effet, le lupeol, la
diosgénine, l’acide asiatique, l’avicine, l’acide madécassique, l’acide ursolique, la bétuline,
l’oléandrine inhibent l’activité du natural factor – kappaB (NF-κB) qui joue un rôle majeur
dans le processus inflammatoire et la cancérisation des cellules (Yadav et al., 2010).
L’activité anti-inflammatoire du taraxastérol, du moreténol et du neulupanol a été rapportée
par Mahato et Sen (1997). Le lupéol (200 mg/kg), administré oralement possède un effet anti-
52
inflammatoire comparable à celui de l’acide acétylsalicylique (100 mg/kg), cependant il n’a
aucun effet analgésique ou antipyrétique (Patocka, 2003). La production de TNF α, de IL 6 et
de monoxyde d’azote induite par LPS chez les macrophages RAW264.7 a été réduite par
l’acide oléanolique, l’acide 3-O-acétyl-ursolique et l’acide tormentique isolés de
Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai (Zhang et al., 2010).
Les saponosides ou saponines sont constitués structuralement d’une génine triterpénique ou
stéroïdique liée à un ou plusieurs sucres. Le nom saponoside vient du mot latin sapo signifiant
savon en raison de leurs propriétés de former des mousses en présence d’eau. Les saponosides
exercent plusieurs activités pharmacologiques telles qu’antimicrobienne, anti-inflammatoire,
anti-tumorale et antiparasitaire (Gauthier, 2008). En effet, les saponosides triterpéniques (β-
D-glucopyranosyl-2α-3β-6β-trihydroxy-2,3-galloyloléan-12-èn-28-oate ; arjunglucoside ;
combreglucoside) et les triterpènes pentacycliques (combrégénine, arjungénine,) isolés des
écorces de tronc de Combretum molle R.Br ex G. Don (Combretaceae) ont réduit l’œdème
induit par la carragénine (Ponou et al., 2008). Les saponines, ilwensisaponine A isolé des
fleurs de Verbascum lasianthium et les balanines B1 et B2, isolés de Balanites aegyptiaca L.
Delile (Zygophyllaceae), ont également inhibé l’œdème induit par la carragénine (Kupeli et
al., 2007 ; Speroni et al., 2005).
Le sitostérol, le stigmastérol et les saponines (sitostérol-3-glucopyranoside, diosgénin-3-
glucopyranosyl-1-glucopyranoside et diosgénin-3-rhamnosyl-1-glucopyranoside), isolés des
rhizomes de Dioscorea membranacea Pierre (Dioscoreaceae), ont réduit la production de NO
dans une culture de macrophage RAW264.7 (Tewtrakul et Itharat, 2007). Le sitostérol et le
stigmastérol sont également utilisés dans l’industrie pharmaceutique dans la fabrication des
drogues contraceptives et anti-inflammatoires (Bruneton, 2009).
1.4.14.2.Les flavonoïdes
Le terme flavonoïde vient du mot latin flavus qui signifie jaune. Les flavonoïdes constituent
une importante classe de composés naturels polyphénoliques qui a récemment fait l’objet de
considérables intérêts scientifique et thérapeutique. Les flavonoïdes sont responsables, entre
autres, de la pigmentation des fruits, feuilles et fleurs des plantes et assurent la protection des
plantes vis-à-vis des rayons ultra-violets (Morel, 2009). Les flavonoïdes ont une structure
commune de type diphénylpropanique (C6-C3-C6). Le cycle A, formé à partir d’une molécule
de résorcinol ou de phloroglucinol provient de la voie des acétates. Le cycle B provient de la
voie du shikimate (Ross et Kasum, 2002). Le premier intermédiaire formé dans cette voie de
53
biosynthèse est la chalcone et les autres flavonoïdes dérivent de celle-ci par plusieurs voies.
La chalcone est formée par condensation, catalysée par la chalcone-synthétase, de trois
molécules de malonyl-CoA avec d’un acide hydroxycinnamique. Plusieurs modification des
flavonoïdes peuvent se produire à des stades divers résultant en l’hydroxylation, la
méthylation ou la prénylation des groupes hydroxyle (OH), la dimérisation ou encore la
glycosylation (pour donner des flavonoïdes O- ou C-glycosides) (Bruneton, 2009 ; Markham,
1982).
Noyau flavonoïdique
Figure 1- 11: Inter-relations entre les différents types de flavonoïdes (Markham, 1982)
54
Les flavonoïdes peuvent être subdivisés en plusieurs groupes basés sur la présence ou non du
cycle C, le dégré d’insaturation et l’oxydation du cycle C ; on compte ainsi les flavones, les
flavonols, les flavanones, les flavanols, les chalcones, les anthocyanidines, les aurones et les
isoflavonoïdes. Plus de 6000 flavonoïdes ont été identifiés, ce large nombre est dû à la
combinaison possible entre les différents types d’aglycone et les différents sucres qui peuvent
y être reliés.
- Propriétés anti-inflammatoires des flavonoïdes
Les flavonoïdes sont connus pour leurs diverses activités biologiques et pharmacologiques
notamment anti-tumorale, anti-inflammatoire, antivirale, antimicrobienne, immuno-
modulatrice et anti-thrombotique. Plusieurs études pharmacologiques in vitro ou in vivo ont
montré les effets anti-inflammatoires des flavonoïdes à travers des tests menés sur les
animaux (souris, rats), les enzymes pro-inflammatoires (COX 1, COX 2 et LOX), les cultures
cellulaires et également leurs propriétés antioxydantes. En effet, une étude menée par Chi et
al. (2001) a révélé l’effet inhibiteur des cyclo-oxygénases (COX 1 et 2) et des lipoxygénases
(5- et 12-lipoxygénases) pour la kuraridine, la quercétine, la kuwanone, la sophoraflavanone
D, la kurarinone, la sanggenone D, la psoralidine.
Les flavonoïdes pourraient réguler les activités cellulaires de l’inflammation (mastocytes,
macrophages, lymphocytes, neutrophiles). En effet, une étude menée sur la réaction
inflammatoire allergique via les mastocytes a permis de constater que la quercétine, la rutine,
le kaempferol, la myricétine et la fisétine inhibaient la sécrétion d’histamine (Akroum, 2011).
La wogonine, la baïcaléine et la baïcaline isolées de Scutellaria baicalensis Georgi. ont
montré une activité anti-inflammatoire sur plusieurs modèles animaux. L’administration orale
de l’apigénine, du kaempferol et de la quercétine et leurs hétérosides respectifs ont présenté le
même effet anti-inflammatoire sur l’œdème induit par l’huile de croton et l’acide
arachidonique (Kim et al., 2004). Ces mêmes auteurs ont rapporté que les flavanones, les
flavones et les flavonols sont plus efficaces que les chalcones sur le modèle animal à la
carragénine. L’investigation de Toker et al. (2004) a montré que le kaempferol-3,7-O-α-
dirhamnoside et la quercétine-3,7-O-α-dirhamnoside isolés de Tilia argentea Desf. (Tiliaceae)
ont donné des effets analgésique et anti-inflammatoire sur le modèle animal (carragénine et
acide acétique).
55
L’effet anti-inflammatoire des flavonoïdes a été prouvé par des mécanismes cellulaires in
vitro. En effet, la quercétine a inhibé la production des cytokines pro-inflammatoires (TNF α,
IL 1β) et le monoxyde d’azote induite par LPS sur une culture cellulaire de macrophages. La
quercétine et le kaempferol ont inhibé la production de NO et l’expression de iNOS sur des
cultures cellulaires RAW264.7 et J774.2 stimulées par LPS (Gallego et al., 2007). Hougee et
al. (2005) ont montré que les flavones (lutéoline, chrysine et apigénine) ont inhibé plus la
production de TNF α, IL 1β et IL 6 que les flavonols (quercétine, kaempferol et morine).
- Biodisponibilité des flavonoïdes
L’absorption, le métabolisme, la distribution et l’élimination des composés phytochimiques

constituent un processus complexe impliquant une variété de modifications structurales dans
plusieurs tissus et cellules. La biodisponibilité d’une substance est définie comme la fraction
de la substance inchangée atteignant la circulation générale ou l’organe cible après
administration (Katzung, 2006 ; Haddad, 2008).
Après l’administration orale, la majorité des composés phytochimiques subissent des actions
enzymatiques et microbiennes de la flore intestinale avant leur absorption. Les aglycones
flavonoïdiques sont absorbées au niveau de l’intestin grêle, alors que les hétérosides
deflavonoïdes, avant d’être absorbés, doivent subir une hydrolyse enzymatique ou bactérienne
afin de se libérer de la partie osidique. Les sites importants du métabolisme des flavonoïdes
sont la lumière gastro-intestinale, les cellules de la paroi intestinale et le foie. L’absorption
n’est pas complète et la partie non absorbée sera éliminée (Erlund , 2002). La cinétique
d’absorption dépend de la complexité de l’extrait. En effet, Hollman et Katan (1997) ont
montré que 52 % des hétérosides de la quercétine de l’oignon sont absorbés contre 17 % de
rutine pure ou d’un mélange d’hétérosides de la quercétine de la pomme. Manach et al. (2004)
ont rapporté que la concentration plasmatique est de 0.3 – 0.75 µmol/L après la
consommation de 50–100 mg équivalent de quercétine, de catéchine ou épicatéchine
provenant de pommes ou d’oignons.
Au cours de l’absorption les substances subissent des réactions de biotransformation. Ces
réactions impliquent la glucuroconjugaison, la méthylation et la sulfatation. La
biotransformation des flavonoïdes améliorent leur solubilité afin de les excréter. Des
investigations ont permis de mettre en évidence les propriétés pharmacologiques des
métabolites et de la molécule correspondante. En effet, la quercétine et ses métabolites (3’-O-
méthylquercétine, quercétine-3’-O-sulfate, quercétine-3-O-glucuronide et 3’-O-
56
méthylquercétine-3-O-glucuronide) ont un effet inhibiteur de la formation de prostaglandines
(PGE 2), de leucotriènes (LTB4), de l’oxydation des lipoprotéines et une activité
antioxydante; et à la concentration physiologique (~2 µM) les métabolites sont moins actifs
comparativement à la quercétine (Loke et al., 2008). Cependant les études menées par Shirai
et al., (2002) sur une culture cellulaire 3T3 prétraitée avec la quercétine et son métabolite
quercétine 3-O-glucuronide, ont montré que le quercétine 3-O-glucuronide a été plus efficace
sur l’inhibition des radicaux libres oxygénés induits par H2O2 que la quercétine, elle même.
Après administration orale, les proanthocyanidines et les tanins sont métabolisés en acide
phénolique, catéchine ou d’épicatechine en majorité par la flore microbienne du colon avant
d’être absorbés. Ces unités de polyphénols traversent la barrière intestinale et arrivent au
niveau du foie où ils vont subir des réactions de biotransformation pour donner des formes
conjuguées. En effet, des études ont montré que la concentration plasmatique des métabolites
des flavanols est plus élevée que celle de la molécule parente (Manach et al., 2005 ; Aron et
Kennedy, 2008).
1.5 Antioxydants
1.5.1.Définition
L’antioxydant est défini comme étant toute substance qui, présente à faible concentration par
rapport au substrat oxydable, est capable de retarder ou d’inhiber de manière significative
l’oxydation du substrat (Niki, 2010). L’oxydation du substrat est causée par des radicaux
libres générés dans l’organisme dans des conditions physiologiques (métabolisme cellulaire
normal de l’oxygène) ou physiopathologiques (inflammation). Les antioxydants peuvent
être soit des enzymes aux propriétés catalytiques spécifiques, soit des protéines, soit des
petites molécules hydro ou liposolubles.
1.5.2.Radicaux libres
Un radical libre est défini comme étant un atome ou une molécule possédant un ou des
électrons non appariés. Les radicaux libres générés dans l’organisme sont généralement les
radicaux libres oxygénés (RLO) à savoir l’anion superoxyde (O2-°), le radical hydroxyle
(HO°), le radical perhydroxyle (HO2-°), les radicaux peroxyle (ROO°), et les non RLO tels
que le monoxyde d’azote (NO) et le peroxynitrite (ONOO-). Les RLO engendrent aussi des
molécules non radicalaires mais très réactives comme le peroxyde d’hydrogène (H2O2 ou eau
57
oxygénée) et l’acide hypochloreux (HOCl) (Cuzzocrea et al., 2001 ; Russo-Marie et al.,
1998).
1.5.3.Sources de production des RLO

On distingue essentiellement deux sources de production des radicaux libres :
1.5.3.1.Source exogène
L’exposition au tabac, aux herbicides, aux gaz tels que l’ozone, le dioxyde nitreux, aux gaz et
microparticules (< 10 µm) des échappements des véhicules, aux radiations UV et aux autres
polluants environnementaux constitue une source de production des radicaux libres
(Govindarajan et al. ;2005).
1.5.3.2.Source endogène
Dans les systèmes biologiques, il existe plusieurs sources de production de radicaux libres en
occurrence le système respiratoire mitochondrial, la NADPH oxydase, le monoxyde d’azote.
Les radicaux libres oxygénés sont produits lors du métabolisme cellulaire normal à de faibles
quantités séquestrées tandis que dans les conditions pathologiques la production des RLO
s’accroît et génère des dommages cellulaires et tissulaires. Les RLO ont pour rôle essentiel de
tuer les micro-organismes phagocytés ou situés dans le voisinage des phagocytes.
- La NADPH oxydase : elle est inactive dans les conditions normales et se trouve au
niveau des membranes des neutrophiles et macrophages. Lors d’un processus
inflammatoire la phagocytose déclenche l’activité enzymatique de la NADPH
oxydase, qui catalyse la production de l’anion superoxyde (O2-°). L’anion superoxyde
induit la production du peroxyde d’hydrogène (H2O2) et de l’acide hypochloreux
(HOCl).
2 O2 + NADPH 2 O2-° + NADP+ + H+
NADPH oxydase
2 O2-° + 2H+ H2O2 + O2
+ -
H2O2 + H + Cl H2O + HOCl
- Le système respiratoire mitochondrial : l’anion superoxyde est produit par la réaction

de l’oxygène avec le radical semi-ubiquinone lors du transfert de l’électron dans la
chaîne respiratoire.
- Le monoxyde d’azote : le monoxyde d’azote produit à partir d’oxygène et d’arginine,
est physiologique et a un rôle majeur dans le tonus vasculaire. Les cytokines pro-
58
inflammatoires et les endotoxines induisent la forme inductible de NO-oxydase à
produire plus de NO. Le NO réagit avec O2-° pour former un puissant oxydant qui est
le peroxynitrite (ONOO-), qui, à son tour se décompose en NO2° et en OH°.
La détoxification des radicaux libres se fait par des systèmes enzymatiques et non-
enzymatiques possédant un pouvoir antioxydant. Dans le cas où la détoxification est
insuffisante, les radicaux libres peuvent entraîner un stress oxydatif résultant d’une sévère
destruction cellulaire.
Figure 1- 12 : Production de RLO et système antioxydant enzymatique (Schäfer et Werner,

2008)
59
1.5.4.Mécanisme d’action
Dans les conditions physiologiques normales il y a un équilibre entre la production des
radicaux libres et les mécanismes endogènes de défense antioxydante. Cette défense
antioxydante est constituée du système enzymatique (la catalase, la peroxydase dismutase,
glutathion peroxydase), et des vitamines (A, E et C) et les polyphénols apportés par
l’alimentation.
1.5.4.1.Les antioxydants enzymatiques

Les antioxydants enzymatiques sont constitués essentiellement de la catalase, la superoxyde
dismutase (SOD) et la glutathion peroxydase. Toutes les cellules phagocytaires possèdent des
cuivre-zinc (Cu-Zn) superoxyde dismutase qui convertit l’anion superoxyde en peroxyde
d’hydrogène. Ce dernier est dismuté en oxygène et en eau par la catalase ; l’anion superoxyde
est transformé en eau lors d’une réaction couplée à l’oxydation de glutathion (GSH) catalysé
par le glutathion peroxydase (GPX). La forme oxydée du glutathion (GSSG) est non toxique
et peut être réduite en glutathion par NADPH grâce à la glutathion réductase.
SOD, Cu/Zn, Mn
2O2 + 2H+ 2H2O2 + O2
Catalase
2H2O2 2H2O + O2
GPX, Se
H2O2 + 2GSH GSSG + 2H2O
GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP
1.5.4.2.Les antioxydants non enzymatiques

Vitamine E : la vitamine E est un antioxydant lipophile et un composant lipidique des
membranes cellulaires. La forme d-α-tocophérol élimine les radicaux peroxydes qui se
forment lors de la peroxydation lipidique. La deuxième forme de la vitamine E, l’α-
tocotriénol joue le rôle de protecteur contre les radicaux libres. La vitamine E permet donc de
réduire la peroxydation des lipides dans la membrane cellulaire et dans les lipoprotéines de
faible densité (LDL) (Roth et Hejjel, 2003 ; Goudable et Favier, 1997).
60
Vitamine C : la vitamine C (acide ascorbique) est un puissant antioxydant hydrosoluble dans
les conditions physiologiques, cependant à forte concentration, elle peut jouer le rôle de pro-
oxydant. Elle n’est pas synthétisée par l’organisme, son apport est extérieur. Elle intervient
dans la conversion du radical tocophérol en α-tocophérol (vitamine E). La vitamine C protège
les vaisseaux sanguins contre les lipoprotéines de faible densité (LDL).
Caroténoïdes : les caroténoïdes sont des pigments liposolubles des plantes, ils possèdent un
pouvoir antioxydant considérable contre les radicaux peroxydes. Le plus étudié des
caroténoïdes est le β-carotène ou provitamine A, présent dans la carotte, l’orange et les
feuilles. Le β-carotène préviendrait le cancer et réduirait le risque des pathologies
cardiovasculaires (Lecerf, 2006). Le lycopène, un autre caroténoïde possède un pouvoir
antioxydant et est présent dans la tomate. Le lycopène réduirait, quant à lui, le risque
d’infarctus myocarde et l’athérosclérose (Menveille-Bourg, 2005).
Le Glutathion : le glutathion est un antioxydant direct intracellulaire et est un cofacteur de
l’enzyme glutathion peroxydase. Son rôle essentiel est de protéger les lipides, les protéines et
les acides nucléiques contre l’oxydation (Goudable et Favier, 1997).
Les oligoéléments : les oligo-éléments tels que le cuivre (Cu), le zinc (Zn), le magnésium
(Mn) et le sélénium (Se) sont indispensables pour l’activité antioxydante enzymatique (Zn,
CuSOD, MnSOD ; SeGPX). Le zinc est un inducteur des métallothionéines, des protéines
possédant une activité antioxydante (Pincemail et al., 2002).
Les polyphénols : les polyphénols sont largement répandus dans le règne végétal, on en
dénombre plus de 8000 structures de polyphénols. Les polyphénols regroupent les tanins, les
flavonoïdes, les coumarines, les lignines, les anthocyanes, les acides phénols, les stilbénoïdes.
Le point commun structural des groupements phénoliques est la présence d’un noyau
benzénique et d’au moins un groupe hydroxyle libre ou engagé dans une autre fonction
(Bruneton, 2009). Les polyphénols sont des antioxydants apportés par l’alimentation. Les
flavonoïdes, constituant un groupe important des polyphénols, sont regroupés en différentes
classes structurales : les flavones, les flavonols, les flavanones, les flavanols, les isoflavones,
les chalcones, et les anthocyanes.
L’une des propriétés biologiques la plus étudiée des flavonoïdes est leur pouvoir antioxydant
et leur capacité à piéger les radicaux libres produits lors de l’anoxie, de l’inflammation et
l’autoxydation lipidique (Ghedira, 2005). La configuration structurale et le nombre de groupe
hydroxyl (OH) influencent l’activité antioxydante des flavonoïdes. Ainsi la position d’OH en
3 du cycle C et la double liaison en position C2=C3 sont importantes pour l’activité
61
antioxydante. Les flavonoïdes hétérosides ont une moindre activité antioxydante
comparativement à l’aglycone correspondante.
Cependant dans certaines conditions les flavonoïdes se comportent comme des pro-oxydants.
Cette activité pro-oxydante est croissante avec le nombre de groupes hydroxyles (OH) sur le
cycle B dans la réaction de Fenton. En plus, l’autoxydation des flavonoïdes peut entrainer des
radicaux libres appelés radicaux phenoxyls. L’activité pro-oxydante est détectable à des
concentrations supérieures à 25 µM (Procházková et al., 2011). Les flavonoïdes inhibent les
enzymes impliquées dans le processus inflammatoire : xanthine oxydase, cyclo-oxygénases,
lipoxygénase.
1.5.5.Le stress oxydatif

Le stress oxydatif, conséquence naturelle du métabolisme de l’oxygène, est normalement
contrôlé par des systèmes de défense antioxydante endogènes qui sont de deux types : le
système enzymatique et le système non enzymatique. Le stress oxydatif est défini comme
étant le déséquilibre entre les oxydants et les antioxydants en faveur des oxydants (radicaux
libres) (Katalinic et al., 2004). Cette situation peut être due à un dysfonctionnement du
système respiratoire mitochondrial, d’une activation du système enzymatique (xanthine
oxydase, NADPH oxydase, glucose oxydase, monoamine oxydase) et une alimentation pauvre
en micronutriments antioxydants (Pincemail et al., 2002). Le stress oxydatif est un facteur
potentialisant l’apparition de plusieurs maladies métaboliques (l’athérosclérose, l’asthme, le
diabète…)
1.5.6.Maladies liées au stress oxydatif

- L’athérosclérose : c’est une maladie artérielle qui est caractérisée sur le plan anatomique par
un épaississement de l’intima avec présence de dépôts lipidiques. Cependant elle reste une
pathologie complexe dont le mécanisme moléculaire contribuant à sa pathogénèse n’est pas
complètement défini. L’athérosclérose est une maladie multifactorielle due à une oxydation
lipidique et une inflammation. L’infiltration monocytaire, les dépôts lipidiques et la
prolifération des cellules musculaires lisses pourraient être stimulés par l’oxydation des
lipoprotéines de basse densité (LDL). Les LDL oxydés jouent un rôle crucial dans la
pathogénèse de l’athérosclérose. Les LDL, d’abord faiblement oxydées, subissent une
oxydation plus poussée grâce à des mécanismes multiples faisant intervenir l’action des
radicaux libres oxygénés et impliquant l’activité de la NADPH oxydase qui stimule également
la production des RLO (Bonnetfont-Rousselot et al., 2002 ; Cipollone et al., 2008)
62
-Le diabète : les diabètes de type I et II sont associés à de nombreuses perturbations du statut
des microéléments. La concentration des oligoéléments (Cu, Zn) et les vitamines (E, C) sont
en baisse chez les patients diabétiques. L’hyperglycémie accroît l’activité des mitochondries
conduisant ainsi à la formation des radicaux libres (superoxyde, peroxynitrite). La vitamine C,
seule, n’arrive pas à améliorer les complications diabétiques, par contre combinée à la
vitamine E et autres antioxydants, le stress oxydatif est réduit (James, 2008 ; Mette, 1997).
- L’asthme : l’asthme est une pathologie chronique obstructive des voies respiratoires, qui est
cliniquement caractérisée par une inflammation et une obstruction des voies aériennes. Des
études menées sur les cellules issues du fluide de lavage broncho-alvéolaire (LBA) produisent
plus de radicaux libres oxygénés après exposition à un allergène. L’anion superoxyde produit
par les cellules LBA est responsable de l’aggravation nocturne des symptômes respiratoires
chez les sujets asthmatiques. L’activité de la Cu, Zn-SOD dans les cellules épithéliales
bronchiques est réduite chez les patients asthmatiques (Reimund, 2002).
Ce chapitre a permis dans un premier temps d’apporter des informations sur la famille
Fabaceae, le genre Pterocarpus et l’espèce P. erinaceus ; et dans un second temps de définir
l’inflammation, de décrire le processus inflammatoire et de donner des exemples de
pathologies à composante inflammatoire. L’utilisation de P. erinaceus contre l’inflammation
a été mise en évidence sur des modèles expérimentaux avec l’appui de l’étude phytochimique
afin de caractériser et d’identifier les composés chimiques qui seraient responsables de l’effet
pharmacologique.
63
CHAPITRE 2 : MATERIELS ET METHODES
64
2.1.Matériels d’étude phytochimique
2.1.1.Méthodes chromatographiques
2.1.1.1.Chromatographie analytique
Chromatographie sur couche mince (CCM): les plaques CCM analytiques ont été utilisées à
chaque niveau de nos travaux afin de vérifier le profil des fractions et des extraits mais aussi
la pureté des composés isolés. Les différents types de CCM analytique utilisés sont :
Les plaques CCM Gel de silice 60 F254, Merck (20 x 20 cm) sur support aluminium
Les plaques CCM phase inverse RP-18, Merck (20 x 20 cm) sur support aluminium
Les plaques CCM de polyamide 11F254, Merck, sur support aluminium
Le profil des CCM analytique est observé à la lumière visible ou à l’UV (254 et 366 nm)
avant et après pulvérisation d’un réactif. Les principaux réactifs utilisés pour observer les
différentes tâches sur les plaques CCM sont :
La vanilline sulfurique : elle est utilisée pour caractériser essentiellement les composés
triterpéniques et stéroïdiques. Elle est constituée d’un mélange solution A et d’une solution
B. La préparation des solutions est la suivante :
Solution A : 6 mL de H2SO4 dans 100 mL d’éthanol 96 %
Solution B : 6 g de vanilline dans 100 mL d’éthanol 96 %
Le mélange à volume égal des deux solutions est utilisé pour pulvériser les plaques CCM
analytiques.
Le DBA : 1 g de diphenylborate d’aminoéthanol dans 100 mL de méthanol plus 5 mL de PEG
400 (polyethylèneglycol). Ce réactif est généralement utilisé pour la caractérisation des
flavonoïdes.
2.1.1.2.Chromatographie liquide à haute performance (CLHP) : l’appareil utilisé est de

marque Thermo Separation Products (TSP) avec un détecteur à barrette de diode UV6000LP.
Cette chromatographie est utilisée pour analyser les extraits et fractions avant de les
fractionner.
2.1.1.3.Chromatographie préparative
Chromatographie sur colonne ouverte : elle est utilisée pour le fractionnement des différents
extraits et fractions. La hauteur et le diamètre des colonnes sont choisis en fonctions de la
quantité d’échantillon dont on dispose. Les éluants sont utilisés également en fonction de
65
l’allure de l’extrait sur la CCM analytique. Les différentes phases stationnaires en poudre
utilisées sont :
Gel de silice 60 (40 – 63 µm) (Merck)
Silice RP-18 (40 – 63 µm) (Merck)
Sephadex LH – 20 (Merck)
2.1.1.4.Extraction en phase solide (SPE : solid phase extraction) : cette technique
chromatographique permet de fractionner des échantillons en petite quantité sous une pression
faible. Des cartouches contenant ces différentes phases stationnaires citées ci-dessus sont
utilisées pour le fractionnement.
Chromatographie sur couche mince préparative (CCM prep.): on se sert de cette technique
pour purifier une fraction. La préparation se fait sur des plaques en verre (20 x 20 cm). Deux
phases stationnaires ont été utilisées :
45 g de CCM silice (Gel de silice 60 GF254) dans 120 mL d’éthanol 96 %
17g de CCM Polyamide (M N – Polyamide – DC6) dans 80 mL d’éthanol
96 %
2.1.1.5.Chromatographie liquide sous vide (CLV ou VLC : vacum liquid chromatography) :
elle est utilisée pour un fractionnement grossier avec différentes phases stationnaires. Cette
technique a comme avantage une économie de solvants.
2.1.1.6.Chromatographie liquide à moyenne pression (MPLC : medium pressure liquid

chromatography) : elle sert à fractionner un échantillon à l’aide d’une colonne et d’une
pompe Büchi. Pour fractionner un extrait on utilise une pré-colonne dans la quelle se trouve
l’échantillon adsorbé sur une petite quantité de phase stationnaire, cette pré-colonne est reliée
à une colonne remplie de la phase stationnaire.
2.1.2.Méthodes physicochimiques
2.1.2.1.Pouvoir rotatoire
Le pouvoir rotatoire d’un composé a été mesuré à l’aide d’un Polarimètre PERKIN-ELMER
241 (Lampe Na et Hg). La longueur de la cuve est de 1 dm et l’échantillon est dans le
méthanol à une température de 25°C. Le pouvoir rotatoire se calcule en utilisant cette
formule :
[α] = (α lu x 1000)/(C x l) ; (C en g/100 mL ; l en dm)
66
2.1.2.2.Résonance magnétique nucléaire(RMN)
Les appareils Bruker AvanceIII 500, Bruker DRX 400 et Bruker DRX 300 ont permis
d’effectuer l’enregistrement des différents spectres RMN. Les spectres RMN 1H ont été
13
enregistrés à 300 et 400 MHz et ceux de RMN C à 75 et 300 MHz. Les solvants utilisés
pour la solubilisation des composés sont deuterés. Les déplacements chimiques sont exprimés
en ppm (partie par million) en prenant comme origine le tétraméthylsilane (TMS).
RMN monodimensionnel (RMN 1D) : trois méthodes ont été utilisées :
- RMN 1H : est utilisée pour déterminer la structure d’un composé, elle fournit des
informations sur les différents types de protons que possèdent les composés.
13
- RMN C apporte plus d’information sur la structure d’un composé en fournissant le
nombre de carbones présents dans le composé.
13
- RMN C (DEPT) permet de mettre en évidence les carbones primaires(CH),
secondaires (CH2) et tertiaires (CH3), présents dans une molécule.
RMN bidimensionnel (RMN 2D) : trois méthodes sont utilisées
- Corrélation homonucléaire
COSY (1H – 1H) : elle fournit des informations sur les couplages homonucléaires 2J et 3J
entre les protons voisins et ceux qui sont adjacents.
- Corrélation hétéronucléaire
HSQC (1JH-C) : fournit des informations sur les couplages chimiques entre les carbones et
protons directement liés.
HBMC (2JH – C, 3JH – C) : permet de détecter les couplages chimiques à longue distance
2.2.Matériels d’étude biologique
2.2.1.Matériel végétal
Le matériel végétal est constitué des écorces de tronc, des feuilles et des écorces des racines
de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae).
2.2.2.Animaux de laboratoire
Des souris males et femelles de race NMRI pesant entre 24 et 35 grammes ont été utilisées
lors de nos études. Ces animaux ont été fournis par l'animalerie du département Médecine,
Pharmacopée Traditionnelle et Pharmacie (MEPHATRA/PH) et celle du Centre International
de Recherche-Développement sur l'Elevage en zone Subhumide (CIRDES) de Bobo
Dioulasso. Les animaux provenant de l’animalerie du CIRDES sont tabulés dans l'animalerie
67
du département Médecine, Pharmacopée Traditionnelle et Pharmacie (MEPHATRA/PH) à la
température comprise entre 20-25°C et avec une humidité de 75% pendant deux semaines
avant le début de l’expérience. Ils sont alimentés avec des granulés composés de poudres de
maïs et de poisson à 29% de protéines et ont un accès libre à l'eau courante. La photopériode
était de 12h/24h ; elles ont été soumises à l'éclairage nocturne et à l'obscurité diurne pour tenir
compte de leur cycle activité/repos inversé par rapport à celui de l’homme.
2.2.3.Matériels techniques pour les tests biologiques

 Plétysmomètre du type UGO BASILE 7141, Italy, a servi pour la mesure de l’œdème
au cours du test anti-œdémateux à la carragénine.
 Le spectrophotomètre Multiskan Ex (Thermo Electron Corporation) est utilisé pour la
lecture des plaques.
 Un thermomètre électronique digital de type Physitemp Thermalert ModelTH-8
Temperature Monitor, est utilisé pour la prise de température rectale des animaux.
 Une balance pèse-souris de marque Berkel type E
2.2.4.Matériels divers
 seringues 1 cc, microseringues (10, 25, 50 µL)
 pipettes, micropipettes,
 plaques de 96 puits
 la verrerie : béchers, erlenmeyers etc …
2.2.5.Substances pharmacologiques
 La levure de bière (Saccharomyces cerevisiae) (Arkopharma) est utilisée pour le test
antipyrétique.
 La carragénine (Sigma), l’acide acétique (Sigma) et le formaldéhyde (Sigma) sont
utilisés respectivement pour les tests de l’activité anti-inflammatoire et analgésique.
 L’huile de croton (Sigma), utilisé pour le test anti-inflammatoire locale sur l’oreille
des souris.
 La ketamine hydrochloride (Rotexmedica, Trittau, Germany), utilisée comme
anesthésique lors du test anti-inflammatoire local.
68
 Le paracétamol (Sigma), l’hydrocortisone (Sigma), l’acide acétylsalicylique (Sigma)
et la phénylbutazone (Sigma) sont tous des produits de référence utilisés lors des tests
in vivo.
 le DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl), pour le test antioxydant DPPH
 Le chlorure de cuivre II (CuCl2) (Sigma), la néocuproïne (2,9-dimethyl-1,10-
phenanthroline) (Sigma) et le tampon ammonium acétate (NH4Ac) (Prolabo) sont
utilisés pour le test antioxydant CUPRAC
 Le sodium tetraborate (Sigma), acide borique (Sigma), acide linoléique ont été utilisés
pour le test d’inhibition de la lipoxygénase.
 L’acide 2-thiobarbiturique (Sigma), le chlorure ferrique (FeCl2) (Prolabo) et l’acide
trichloro-acétique (Prolabo) utilisés pour le test d’inhibition de la peroxydation
lipidique.
 l’eau physiologique (0,9 % NaCl) ; l’eau distillée et le méthanol.
 La solution de DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium), la
lipopolysaccharides, l’interféron gamma, le kit d’ELISA (enzyme-linked
immunosorbent assay) et réactif de Griess ont été utilisés lors des tests de
détermination de TNF α et NO
69
2.3.Méthodes d’études phytochimiques
2.3.1.Matériel végétal
Les écorces de tronc de Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) ont été récoltées en Mars
2007 à Gourcy dans la région du nord (Burkina Faso) ; les feuilles et les écorces de racines
ont été récoltées en Mars 2008. La plante a été identifiée par le Pr Adjirma Thiombiano du
laboratoire d’écologie de l’Université de Ouagadougou, où un herbier a été déposé sous le
numéro ON 01. Le matériel végétal a été séché à l’abri du soleil et à température ambiante
sous ventilation. Après séchage, il a été broyé.
2.3.2.Extraction et fractionnement
2.3.2.1.Décoction
La décoction a été réalisée sur les trois parties (écorces de tronc, feuilles et écorces de racines)
de la plante. 50 g de poudre du matériel végétal ont été portés à ébullition pendant 30 min
dans un volume d’eau distillée de 500 mL. Après filtration et concentration, le décocté a été
lyophilisé. Des lyophilisats ont été obtenus : 5.2, 4.7 g et 4.2g respectivement issus des
écorces de tronc (DECEC), des écorces de racines (DECRA) et des feuilles (DECFE). Ces
lyophilisats ont servi pour les manipulations.
2.3.2.2.Criblage phytochimique (test colorimétrique)

Les procédures décrites par Ciulei (1982) ont été utilisées pour la mise en évidence les
principaux groupes chimiques des décoctés des écorces de racines (DECRA) et des feuilles
(DECFE). Les flavonoïdes ont été caractérisés par le test Shibata, les tanins et les polyphénols
par le test de chlorure ferrique. Le test de Liebermann-Buchard a permis de caractériser les
triterpènes/stéroïdes. La caractérisation des saponosides est basée sur l’apparition des mousses
après agitation des extraits.
2.3.2.3.Ecorces du tronc de P. erinaceus

661 g de poudre sèche des écorces de tronc de P. erinaceus ont successivement macéré
dans le dichlorométhane (DCM) (3x2 L) puis le méthanol (MeOH) (3x2.5 L) pendant 24
heures pour chaque macération. Après filtration et évaporation sous vide, un extrait au
dichlorométhane (A) (3.5 g) et un extrait méthanolique (B) (100 g) ont été obtenus. (Figure 2-
1)
70
Ecorces de tronc (661 g)
DCM 3 x 2L
Marc sec Extrait DCM

(A) (3.5 g)
MeOH 3 x 2.5 L
Marc sec Extrait MeOH (B) (100 g)

36 g, Repris dans 600 mL H2O (4 C, 20H),
puis Filtration
Solution aqueuse
DCM 3x 300 mL
Phase DCM (C) (100 mg) Phase aqueuse

AcOEt 3x 300 mL
Phase AcOEt Phase

(D) (1032 mg) aqueuse
Figure 2- 1: Schéma d’extraction et de fractionnement des écorces de tronc de P. erinaceus
2.3.2.3.1.Fractionnement de l’extrait DCM (A)
1.5 g de l’extrait dichlorométhane a été fractionné par chromatographie sur colonne

ouverte de silice (gel de silice Si 60 Merck, 40-36 µm). Le système d’éluant utilisé a été un
gradient de solvant : n-hexane/DCM (50/50 à 0/100) et DCM/AcOEt (100/0 à 0/100). 13
fractions (A.1 – A.13) ont été obtenues après rassemblement selon leur profil
chromatographique obtenu sur CCM analytique. La fraction A.4 a été fractionnée sur colonne
de silice Si 60 en utilisant un mélange n-hexane/AcOEt (100/0 à 70/30), et a permis d’isoler
le composé PE.1 (25mg). Le composé PE.2 (6 mg) a été isolé de la fraction A.8 par
extraction sur phase solide normale (SPE), l’éluant utilisé a été hexane/AcOEt (100/0 à 70/30)
(Figure 2- 2).
71
Figure 2- 2: Schéma de fractionnement d’extrait DCM (A)
2.3.2.3.2.Fractionnement de l’extrait MeOH (B)
L’extrait méthanolique (B) (36 g) a été repris dans de l’eau distillée tiède (600 mL). Après 20
h au réfrigérateur puis filtration, un résidu de tanins (12g) a été obtenu et la phase aqueuse a
été soumise à des partitions liquide-liquide successives avec le DCM (3 x 300 mL) puis avec
l’AcOEt (3 x 300 mL) (Figure 2- 1)
La phase AcOEt (D) a été fractionnée sur colonne d’exclusion de Sephadex LH-20 avec du
MeOH. Selon le profil chromatographique obtenu par CCM analytique, huit fractions (D.1 –
D.8) ont été rassemblées. Le composé PE.3 (27 mg) a été isolé à partir de la fraction D.3 à
l’aide d’une colonne ouverte de silice en utilisant un mélange n-hexane/AcOEt (60/40 à
0/100) (Figure 2- 3).
72
Figure 2- 3: Schéma de fractionnement de la phase AcOEt (D)
2.3.2.4.Ecorces de racines de P.erinaceus

750 g de poudre sèche des écorces de racines de P. erinaceus ont été mis
successivement à macérer dans le DCM (3x3 L) puis dans le MeOH (3x3 L). 5.6 g d’extrait
DCM (E) et 54.4 g d’extrait MeOH (F) ont été obtenus après filtration et évaporation des
solvants. L’extrait MeOH (F) repris dans de l’eau tiède (1,2 L) a été fractionné par
chromatographie de partage liquide-liquide successivement avec AcOEt (3 x 300 mL) puis
BuOH (3 x 300 mL) (Figure 2- 4).
73
Ecorces de racines (750 g)
DCM 3 x 3L
Marc sec Extrait DCM (E) (5.6 g)
MeOH 3 x 3 L
Marc sec Extrait MeOH (F) (54.4 g)

Repris dans 1200 mL H2O (4 C, 20H),
puis Filtration
Solution aqueuse
AcOEt 3x 300 mL
Phase AcOEt (G)(3 g) Phase aqueuse

BuOH 3x 300 mL
Phase BuOH Phase

(H) (11.2 g) aqueuse
Figure 2- 4 : Schéma d’extraction et de fractionnement des écorces des racines de P.

erinaceus
2.3.2.4.1.Fractionnement de l’extrait DCM (E)

Nous avons réalisé un premier fractionnement sur 4.2 g de l’extrait DCM (E) sur colonne
ouverte de silice en utilisant comme éluant un mélange hexane/DCM (100/0 à 0/100) puis
DCM/AcOEt (100/0 à 0/100).Les fractions obtenues ont été regroupées en 23 fractions (E.1 –
E.23) selon leur profil chromatographique observé par CCM analytique.
La fraction E.5 a subi un fractionnement à l’aide d’une colonne SPE en phase inverse
(Lichroprep RP-18, 40-60µm, Merck) et le composé PE.4 (13.8 mg) a été isolé ; l’éluant
utilisé a été MeOH/H2O (80/20 à 0/100) puis MeOH/DCM (100/0 à 50/50) (Figure 2- 5).
Le composé PE.5 (25 mg) issu de la fraction E.6, a été isolé par deux méthodes
chromatographiques différentes: SPE/RP-18 avec un éluant de MeOH/H2O (80/20 à 0/100)
puis MeOH/DCM (100/0 à 50/50) et une colonne d’exclusion Sephadex LH-20 en utilisant le
DCM comme éluant. Les fractions (E.8 – E.10) rassemblées ont été solubilisées dans le
MeOH et dans le DCM successivement afin d’enlever les impuretés ; ce qui a permis d’isoler
le composé PE.6 (42.5 mg). La fraction E.16 a subi un fractionnement sur SPE/RP-18 avec un
éluant MeOH/H2O (70/30 à 0/100) puis MeOH/DCM (100/0 à 70/30) et la fraction E.16.10
74
obtenue a été traitée sur colonne ouverte de silice en utilisant un gradient hexane/AcOEt
(100/0 à 40/60).Le composé PE.7 (2.6 mg) a été ainsi obtenu (Figure 2- 5).
La fraction E.19 a été fractionnée par SPE/RP18 en utilisant comme éluant : MeOH/H2O
(70/30 à 0/100) puis MeOH/DCM (100/0 à 0/100). 18 fractions (E.19.1 – E.19.18) et le
composé PE.8 (17,7 mg) ont été obtenus. Le composé PE.9 (14 mg), issu de la sous-fraction
E.19.19 a été purifié à l’aide d’une colonne de Sephadex LH-20 en utilisant le DCM comme
éluant (Figure 2- 5).
Extrait DCM ( E ) (4.2 g)

CC SiO₂
Hex/DCM (100/0 à 0/100) puis
DCM/AcOEt (100/0 à 0/100)
E.5 E.6 E.8 E.9 E.10 E.16 E.19

(57.7 mg) (67 mg) (329mg) (58 mg) (54 mg) (301 mg) (207 mg)
SPE/RP-18 SPE/RP-18
SPE/RP-18 SPE/RP-18
PE.6
(42.6 mg)
PE.4 E.6.2 E.16.10
(13.8 mg) (34.7mg) (165 mg) PE.8 E.19.19
(17.7 mg) (40 mg)
C Seph. LH 20 CC/SiO2
C Seph. LH 20
PE.7
PE.5 (2.6 mg)
(25 mg) PE.9
(14 mg)
Figure 2- 5 : Schéma de fractionnement de l’extrait DCM (E)
2.3.2.4.2.Fractionnement de l’extrait MeOH (F)

L’extrait MeOH (F) a été dissout dans 1.2 L d’eau distillée puis la solution a été laissée au
repos pendant 20 h à 4°C. Après filtration, la solution a été partitionnée successivement avec
de l’AcOEt (3 x 300 mL) puis du BuOH saturé en eau distillée (3 x 300 mL). La phase AcOEt
(G) (3 g) et la phase BuOH (H) (11.2 g) ont été obtenues. (Figure 2- 4)
2.3.2.4.3.CLHP Analytique
L’extrait MeOH (F), les fractions AcOEt (G) et BuOH (H) ont été analysés par CLHP
analytique dans les conditions suivantes :
75
Colonne : Kromasyl 250x4.6 mm ; 100 Å
Concentration d’échantillon : 10 mg/mL
Volume injecté : 10 µL Débit : 1 mL/min
Méthode d’élution : 8 à 40% de MeOH dans Eau en 20 min
40 à 100% de MeOH dans Eau en 2 min
100% MeOH pendant 5 min
254 nm, longueur d’onde de détection
2.3.2.4.4.Fractionnement de la phase BuOH (H)

La phase BuOH (H) (11.2 g) a subi un fractionnement à l’aide d’une chromatographie liquide
sous vide (VLC) sur silice en utilisant un mélange CHCl3/ MeOH (100/0 à 0/100). Quatre
fractions (H.1 – H.4) ont été obtenues. La fraction H.3 (3g) a été purifiée sur colonne de silice
pour donner 11 fractions notées H.3.1 à H.3.11 (éluant CHCl3/MeOH (100/0 à 0/100)). La
fraction H.3.7 (200 mg) a subi un fractionnement à l’aide d’une SPE sur phase inverse RP-18
et huit fractions (H.3.7.1 – H.3.7.8) ont été obtenues ; le système d’élution a été H2O/MeOH
(100/0 à 40/60). La purification de la fraction H.3.7.1 sur une colonne de Sephadex LH-20 a
permis d’isoler le composé PE.10 (23 mg). Deux composés, à savoir PE.11 (12.6 mg) et
PE.12 (21.5 mg), issus de la fraction H.3.7.3 (72 mg) ont été isolés à l’aide d’une
chromatographie sur couche mince (CCM) préparative sur phase normale en utilisant
MeOH/AcOEt (50/50) comme éluant (Figure 2- 6)
Figure 2- 6 : Schéma de fractionnement de la phase BuOH (H)
76
2.3.2.5.Feuilles de P. erinaceus
1 kg de poudre des feuilles sèches de P. erinaceus a été mis à macérer dans du MeOH
(4 x 2.5 L) puis dans MeOH/H2O (70/0) (3 x 2.5 L) sous agitation magnétique. Un extrait
MeOH (I) (60 g) et un extrait MeOH aqueux (J) (51.8 g) ont été obtenus. Les deux extraits ont
été rassemblés parce qu’ils avaient le même profil chromatographique sur CCM analytique.
La masse totale des deux extraits a été de 111.8 g (Figure 2- 7).
72 g de l’extrait méthanolique rassemblé des feuilles ont été dissouts dans 500 mL d’un
mélange MeOH/CHCl3 (50/50, v/v). La solution obtenue a été mise dans une ampoule à
décanter puis un ajout progressif d’eau distillée a permis d’obtenir deux phases. La phase
supérieure constituait la fraction flavonoïdique (L) (64 g) et la phase inférieure contenait de
la chlorophylle (M) (7.7 g) et des composés apolaires. (Figure 2- 7)
Une partie de la fraction flavonoïdique (41 g) dissoute dans 600 mL d’eau distillée a été
partitionnée successivement avec du DCM (3 x 200 mL) puis de l’AcOEt (3 x 200 mL) et
ensuite du BuOH (3 x 200 mL). Des fractions DCM (N) (50 mg), AcOEt (O) (814 mg) et
BuOH (P) (5.2 g) ont ainsi été obtenues. (Figure 2- 8)
2.3.2.5.1.CLHP analytique
La fraction flavonoïdique et les fractions DCM, AcOEt et BuOH ont été analysées par CLHP
dans les conditions suivantes :
Colonne : Kromasyl 250X4 ,6 mm ; 100 Å
Concentration d’échantillon : 10 mg/mL
Volume injecté : 10 µL Débit : 1 mL/min
Méthode d’élution : 2 à 100% MeOH dans Eau en 30 min
254 nm de détection
77
Feuilles sèches (1 kg)
MeOH 4 x 2.5 L
Marc sec Extrait MeOH (I) (60g)

MeOH/H2O 70/30,
3 x 2,5 L
Marc sec Extrait MeOH/H2O

(J) (51.8 g)
Extraits MeOH/H2O
et MeOH rassemblés
Extrait MeOH (K) (111 g)
Extrait MeOH (72 g) dissout dans 500

mL de MeOH/CHCl3 (50/50) puis
transvaser dans une ampoule à décanter
et ajout progressif d’eau distillée
Phase sup. (fraction Phase inf. (contenant la

flavonoïdique), (L) 64 g chlorophylle) (M ) 7.7 g
Figure 2- 7 : Schéma d’extraction et de fractionnement des feuilles de P. erinaceus
78
Fract. Flavonoïdique (L) (41 g)
Repris dans 600 mL H2O
Solution aqueuse
DCM 3 x 200 mL
Phase DCM Phase aqueuse

(N) (50 mg)
AcOEt 3 x 200 mL
Phase AcOEt Phase aqueuse

(O) (814 mg)
BuOH 3 x 200 mL
Phase BuOH Phase aqueuse

(P) (5.2 g) (Q) (31.6 g)
Figure 2- 8 : Schéma de fractionnement de la fraction flavonoïdique (J)
2.3.2.5.2.Fractionnement de la phase AcOEt (O)

La phase AcOEt (O) (814 mg) a subi un fractionnement à l’aide d’une chromatographie
liquide sous vide (VLC) sur gel de silice (200 µm, Merck) avec le gradient d’élution suivant :
hexane/AcOEt (50/50 à 0/100) puis AcOEt/MeOH (100/0 à 0/100). Trois fractions (O.1 –
O.3) ont été obtenues. (Figure 2- 9)
La fraction O.2 a été soumise à une purification sur une cartouche SPE (Lichroprep RP18,
MERCK), le système d’éluant utilisé est H2O/MeOH (100/0 à 0/100). D’après le profil
chromatographique CCM analytique, le composé PE.13 (7 mg) et 12 fractions (O.2.2 –
O.2.12) ont été obtenus. La fraction O.2.11 purifiée sur une colonne de Sephadex LH-20 dans
le MeOH, a permis d’isoler le composé PE.14 (3.1 mg). (Figure 2- 9)
79
Phase AcOEt
(O) (814 mg)
VLC SiO₂ , Hex/AcoEt (50/50 à 0/100)
puis AcOEt/MEOH (100/0 à 0/100)
O.1 O.2 O.3

(7.4 mg) (250 mg) (507mg)
SPE/RP-18
PE.13 O.2.11
(7mg) (8mg)
C Seph. LH 20
PE.14
(3.1mg)
Figure 2- 9 : Schéma de fractionnement de la phase AcOEt (O)
2.3.2.5.3.Fractionnement de la phase BuOH (P)

La phase BuOH a été fractionnée par chromatographie liquide moyenne pression (MPLC) sur
une colonne Lichroprep RP18 (40-63 µm, Merck). Le système de solvant utilisé comme
éluant est : H2O/MeOH (100/0 à 0/100). Au total 18 fractions (P.1 – P.18) ont été rassemblées
suivant leur profil chromatographique sur CCM analytique. (Figure 2- 10)
La fraction P.11 a été purifiée sur une colonne ouverte de silice avec le système d’éluant
suivant : AcOEt/MeOH/H2O (114/15/1 ; 100/21/9 puis 100/16.5/13.5). Cinq fractions (P.11.1
– P.11.5) ont été obtenues. La fraction P.11.3 a été purifiée sur une CCM préparative de silice
avec AcOEt/MeOH/ H2O (70/17/13) comme éluant ; ceci a permis d’isoler le composé PE.15
(6.5 mg). (Figure 2- 10)
La fraction P.12 a subi un fractionnement sur une colonne ouverte de silice avec un système
ternaire de solvant comme éluant : AcOEt/MeOH/H2O (85/8/7, 70/17/13 puis 65/20/15).
Treize fractions (P.12.1 – P.12.13) ont été rassemblées suivant leur profil chromatographique.
Une purification de la fraction P.12.2 sur colonne ouverte de Sephadex LH-20 a permis
d’isoler le composé PE.16 (32 mg) avec du MeOH comme éluant. La fraction P.12.7 a été
purifiée sur une CCM préparative de polyamide (MN Polyamid DC 6) avec l’éluant : H2O
/MeOH/Méthylethylcétone/Acétylacétone (13/3/3/1). Le composé PE.17 (9 mg) et trois autres
80
fractions (P.12.7.1 – P.12.7.3) ont été obtenus. Le fractionnement P.12.8 sur une colonne
ouverte de Sephadex LH-20 dans le MeOH a permis de purifier le composé PE.18 (7.7 mg).
(Figure 2- 10)
Phase BuOH (P) (5.2 g)

MPLC/RP-18
H₂O 100 % à MEOH 100 %
P.11 P.12
(270 mg) (708 mg)
CC/SiO2 CC/SiO2
P.11.3
(60 mg)
P.12.2 P.12.7 P.12.8
(70mg) (60mg) (35mg)
CCM SiO₂ prep.
C Seph. LH 20 CCM Poly prep. C Seph. LH 20
PE.15
(6.5 mg) PE.16 PE.17 PE.18
(32 mg) (9mg) (7.7mg)
Figure 2- 10: Schéma de fractionnement de la phase BuOH (P)
81
2.4.Méthodes d’études biologiques
2.4.1.Toxicité générale aigüe
2.4.1.1.Principe
Le principe consiste à administrer à des lots homogènes de souris une substance à des doses
croissantes et à déterminer le taux de mortalité au bout de 72 heures. Ce taux de mortalité
permet de déterminer la dose létale 50 (DL50).
La DL50 est définie comme étant la dose capable de tuer, dans des conditions déterminées, la
moitié des animaux mis en expérience dans une même espèce animale. (Wepierre, 1977,
Lompo 2008). La DL50 est évaluée selon l’échelle de valeur de toxicité de Hodge et Sterner
(Hodge et Sterner, 1943) et de l’OMS (ICPS, 2002).
2.4.1.2.Protocole
Voie intrapéritonéale : 4 lots de six souris Swiss NMRI ont reçu l’extrait méthanolique des
écorces de tronc (MeOH B) à des doses de 250, 500, 1000 et 1500 mg/kg de poids corporel
et le lot témoin a reçu de l’eau physiologique (NaCl 0.9 %). Après l’administration des
extraits les animaux ont été observés pendant 2 heures à l’issue desquelles ils sont alimentés.
Ils sont ensuite observés pendant 24, 48 et 72 heures au cours desquelles les symptômes
d’intoxications ont été notés
Voie per os : 5 lots de six souris Swiss NMRI ont reçu les extraits par voie orale à des doses
de 500, 1000, 1500, 2000 et 2500 mg/kg de poids corporel et le lot témoin a reçu de l’eau
distillée. Après l’administration des extraits les animaux ont été observés pendant 2 heures à
l’issue desquelles ils sont alimentés. Ils sont ensuite observés pendant 24, 48 et 72 heures au
cours desquelles les symptômes d’intoxications ont été notés. Les souris mortes ont été
dénombrées en fonction de la période d’observation pour déterminer la DL50. Les extraits
utilisés pour déterminer la DL50 ont été : les décoctés (feuilles, écorces de tronc, écorces de
racine) et les extraits méthanoliques (feuilles, écorces du tronc).
82
2.4.2.Activités anti-inflammatoires
2.4.2.3.Test anti-œdémateux à la Carragénine
2.4.2.3.1. Principe
L’injection de carragénine sous l’aponévrose plantaire de la patte postérieure de la souris
provoque une réaction inflammatoire qui peut être réduite par toute substance possédant un
pouvoir anti-inflammatoire (Winter et al., 1962). L’injection de la carragénine chez l’animal
provoque une inflammation aiguë impliquant la libération de plusieurs médiateurs chimiques
à savoir l’histamine, la bradykinine, la sérotonine et les prostaglandines. L’histamine et la
sérotonine interviennent dans la première phase de l’inflammation qui dure environ 60
minutes, la seconde phase qui dure au delà des trois heures voit la libération des
prostaglandines ; la libération de la bradykinine intervient entre ces deux phases.
2.4.2.3.2.Protocole
Les souris ont été mises à jeun pendant 17 heures avant le test. L’injection de 0,05 mL de
carragénine (1 % suspendue dans NaCl 0,9 %) a été réalisée sous l’aponémose plantaire de la
patte postérieure provoquant ainsi l’apparition d’œdème dans la région métatarsienne.
Des lots de six souris ont été constitués. Les différents lots ont été traités avec la drogue
végétale ou les substances de référence une heure avant l’injection de la carragénine. Les
substances de référence utilisées étaient l’acide acétylsalicylique comme AINS et
l’hydrocortine comme AIS. Les drogues végétales étaient constituées des décoctés (écorces de
tronc, feuilles et écorces de racines) et des extraits méthanoliques de feuilles et d’écorces de
tronc. Les doses utilisées pour chaque extrait ont été :
- décocté des écorces du tronc : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- décocté des feuilles : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- décocté des écorces des racines : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- extrait méthanolique des écorces du tronc : 100 et 200 mg/kg pour la voie per os et 50,
100 et 200 mg/kg pour la voie intrapéritonéale
- extrait méthanolique des feuilles : 100, 200 et 400 mg/kg (per os)
Le volume de la patte traitée a été mesurée avant, et 1, 3 et 5 heures après l’injection de la
carragénine. La variation du volume de la patte traitée permettait d’évaluer le pouvoir anti-
inflammatoire de toute substance. Le volume moyen de l’œdème de la patte traitée a été
calculé à partir de 3 mesures de déviation n’excédant pas 4 %. L’activité anti-inflammatoire a
83
été évaluée en pourcentage de réduction de l’œdème chez des rats traités par rapport aux
témoins blanc selon la formule suivante :
A −B
% Inhibition = X 100
A
A représente la différence moyenne du volume d’augmentation de la patte des souris du lot

témoin blanc et B représente la différence moyenne du volume d’augmentation de la patte des
souris des lots traités.
Selon que le pourcentage d’inhibition de l’œdème est positif ou négatif, on a une activité anti-
inflammatoire démontrée ou non. Si le PI est positif, selon qu’il est très bas ou très élevé,
l’activité anti-inflammatoire sera faible ou importante. L’effet des extraits est comparé à celui
obtenu avec les substances de référence.
2.4.2.4.Test anti-œdémateux à l’huile de croton
2.4.2.4.1. Principe
L’application de l’huile de croton sur la face de l’oreille provoque une inflammation, qui peut
être réduite par une application locale de toute substance anti-inflammatoire.
2.4.2.4.2.Protocole
Les souris ont été mises à jeun 17 heures et réparties en des lots de six. Avant l’application de
l’huile de croton, les animaux ont été anesthésiés par l’administration intra péritonéale d’une
solution de kétamine chlorhydrate à 150 mg/kg de poids corporel (Nikiéma et al., 2001 ;
Sawadogo et al., 2008). L’inflammation a été induite sur la face interne du pavillon de
l’oreille droite de la souris, par l’application de 5 µL de l’huile de croton dissoute dans le
dichlorométhane (pour les extraits DCM) et dans 42 % d’éthanol (pour le décocté et les
extraits MeOH) ; et l’oreille gauche non traitée a servi de témoin. Le lot témoin blanc a reçu
la substance irritante tandis que les autres lots ont reçu la drogue dissoute dans la solution de
l’huile de croton. Les extraits utilisés ont été :
- extrait DCM des écorces de tronc : 50, 100 et 200 µg/oreille
- extrait DCM des écorces des racines : 100, 200 et 300 µg/oreille
- décocté des écorces de tronc : 300 et 500 µg/oreille
- extrait méthanolique des écorces de tronc : 300 et 500 µg/oreille
Six heures après l’opération, temps correspondant au maximum de l’œdème (Colot, 1972),
les animaux ont été sacrifiés par rupture de la moelle épinière au niveau cervical par
84
étirement. Les oreilles gauches et droites ont été alors sectionnées au ras de leur implantation.
A l’aide d’une perce bouchon de 7 mm de diamètre, un morceau du pavillon de l’oreille a été
prélevé au niveau de la marge en pointe et pesé immédiatement. L’activité anti-inflammatoire
topique a été calculée selon la formule suivante :
A (%) = [(ΔPc – ΔPt)/ΔPc] x 100
où ΔP est la moyenne des différences de poids entre l’oreille droite et gauche des lots
contrôles (ΔPc) et des lots traités (ΔPt) (Sawadogo et al., 2008).
Les tests ont été réalisés dans la journée entre 10H et 16H pour éviter les éventuelles
variations des réponses dues aux fluctuations circadiennes des corticostéroïdes des animaux
(Lompo, 1999).
2.4.3.Activités analgésiques
2.4.3.1.Test à l’acide acétique
2.4.3.1.1.Principe
L’administration intrapéritonéale d’une solution d’acide acétique (0,6 %) chez la souris
provoque des contorsions abdominales. Le nombre de contorsions observé après
administration d’une substance pharmacologique permet d’évaluer son effet analgésique
périphérique.
2.4.3.1.2.Protocole
L’effet analgésique a été évalué sur le nombre de contorsions abdominales induite par
l’injection intrapéritonéale de l’acide acétique (0,6 %) suivant la méthode décrite par
Sawadogo et al., (2006). Les souris ont été mises en jeun 17 heures avant l’expérience. Des
lots de six souris ont été constitués. Le lot témoin blanc a reçu de l’eau distillée, les autres lots
ont reçu les extraits à étudier et les substances de référence. Des doses différentes ont été
administrées oralement aux souris en fonction de leur poids corporel. Les extraits et les doses
utilisés ont été :
- décocté des écorces du tronc : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- décocté des feuilles : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- décocté des écorces des racines : 200, 400 et 600 mg/kg (per os)
- Extrait méthanolique des écorces du tronc : 100 et 200 mg/kg pour la voie per os
- Extrait méthanolique des feuilles : 100, 200 et 400 mg/kg (per os)
85
Une heure après l’administration des extraits, les animaux ont reçu l’acide acétique par voie
intrapéritonéale à la dose de 10 mL/kg. Cinq minutes après l’injection de l’acide acétique, le
nombre de contorsion a été compté chez chaque souris durant 15 minutes. L’effet analgésique
a été évalué selon la formule suivante :
% inhibition = (1 - Wt/ Wb) x 100
Wb représente la moyenne du nombre de contorsions des souris du lot témoin blanc et Wt est
la moyenne du nombre de contorsion des souris du lot traité.
2.4.3.2.Test au formaldéhyde
2.4.3.2.1.Principe
L’injection d’une solution de formaldéhyde (2,5 %) à la patte postérieure de la souris induit
une réaction biphasique se traduisant par le temps (secondes) mis pour lécher la patte traitée :
phase immédiate (0 – 5 min) et la seconde phase (15 – 30 min). L’effet analgésique de toute
substance est évalué par la réduction du temps de léchage de la patte traitée.
2.4.3.2.2.Protocole
La méthode de Wibool et al., (2008) a été utilisée pour déterminer l’effet analgésique des
extraits et produits de référence. Des lots de six souris, mises en jeun 17 heures avant, ont été
constitués. Le lot témoin blanc a reçu l’eau distillée tandis que les autres lots ont été traités
avec les substances à étudier et les produits de référence. Une heure avant l’injection de la
solution de formaldéhyde (20 µL) à la patte postérieure droite, les souris ont reçu oralement
les extraits à différentes doses. Immédiatement après l’injection de la solution de
formaldéhyde, le temps de léchage de la patte traitée a été compté pendant cinq minutes, puis
entre 15 et 30 min. L’effet analgésique a été déterminé en fonction de la formule suivante :
% inhibition = (1 – Tt/Tc) x 100
Où Tt est le temps (en secondes) de léchage des souris traitées avec les extraits et les
substances de référence et Tc est le temps (en secondes) de léchage des souris non traitées.
86
2.4.4.Activité antipyrétique
2.4.4.1.Principe
L’injection sous cutanée d’une suspension aqueuse de levure de bière (Saccharomyces
cerevisiae) à 20 % chez la souris, induit une élévation de température. Cette hyperthermie
peut être réduite par une substance antipyrétique.
2.4.4.2.Protocole
Après la prise de la température rectale, les souris ont reçu par voie sous cutanée dans la
région dorso-latérale, une suspension aqueuse de levure (20 %) en raison de 1 mL pour 100g
de poids corporel (Sawadogo et al., 2006). Ensuite les animaux ont été mis en jeun de
nourriture 17 heures avant la mesure de l’hyperthermie et des lots de six souris ont été
constitués avec celles présentant une augmentation de température supérieure ou égale à 0,5
°C. Les lots ont été rendus homogènes quant au niveau de l’hyperthermie. Les différents lots
ont reçu par voie per os soit l’eau distillée, soit les extraits à étudier ou soit la substance de
référence (paracétamol, 100 mg/kg). Une heure après l’administration des extraits, la prise de
température a été faite toute les heures pendant cinq heures.
L’effet antipyrétique a été calculé selon la formule suivante :
% de réduction de la température = (1 – ΔT0/ΔTn) x 100

T0 = T0h - T-16h = variation de température rectale moyenne avant traitement antipyrétique.
Tn = Tnh - T-16h = variation de température rectale moyenne à la nème heure après traitement
antipyrétique.
T-16h = Température moyenne initiale du lot.
T0h = Température moyenne du lot après induction de l’hyperthermie soit 16 heures après
administration du pyrogène.
Tnh = Température moyenne du lot à la nème après traitement antipyrétique.
2.4.5.Test de détermination de tumor necrosis factor alpha (TNF α) et de nitrite
2.4.5.1.Principe
Le principe consiste à induire des macrophages cultivés in vitro à produire des cytokines pro-
inflammatoires tels que le tumor necrosis factor alpha (TNF α) et la nitrite, par l’ajout dans le
87
milieu de culture d’Escherichia coli (sérotype 055 : B5) LPS (1 µg/mL) ou LPS/IFN γ pour
une durée donnée.
2.4.5.2.Protocole
Selon Fotio et al., (2010) les extraits ont été solubilisés dans une solution de DMEM
(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium). Les cellules murines de la moelle osseuse ont été
différenciées en macrophages après culture de 1,5 x 106 cellules /puits dans une plaque de 24
puits. Chaque puits contenait du DMEM supplémenté avec 10 % du sérum de fœtus de veau
et 20 % de cellules RAW264.7 conditionnées comme source de facteur de colonie-stimulant
de granulocytes et de macrophages.
Après six jours de culture, la préparation cellulaire contenait 99 % de macrophages adhérents
qui représentaient environ 10 % du total des cellules initialement mises en culture. Les
macrophages dérivés de la moelle osseuse (Bone marrow-derived macrophage : BMDM) ont
été traités ou non avec différentes concentrations (25 ; 50 µg/mL) d’extraits pendant 30
minutes. Les BMDM ont été stimulés par Escherichia coli (sérotype 055 : B5) LPS (1 µg/mL)
ou LPS/IFN γ durant 24 heures. Le surnageant a été récolté pour la détermination de la
quantité de nitrite et de la cytokine tumor necrosis factor alpha (TNF α) :
 la quantité de TNF α, dans le surnageant de la culture cellulaire, a été évaluée en
utilisant le test d’ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
 L’accumulation de nitrite dans le milieu de culture BMDM a été déterminée comme
indicateur de la production d’oxyde nitrique par le réactif de Griess (1 % de
sulfanilamide et 0,1 % de naphthyethylenediamide dans 2,5 % d’acide phosphorique).
25 µl du surnageant récolté ont été mélangés avec 50 µl du réactif de Griess pendant 5
min. l’absorbance a été mesurée à 570 nm et la concentration de nitrite a été
déterminée par comparaison avec une référence à sodium courbe standard de nitrite.
2.4.6.Activités antioxydantes
2.4.6.1.Méthode anti-radicalaire DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl)
2.4.6.1.1.Principe
La méthode de mesure du pouvoir antioxydant par le DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl)
repose sur la capacité d’un composé à réduire le radical DPPH° :
88
DPPH° + AH DPPH – H + A°
+ AH + A+
(violette) (Incolore)
Violet jaune
La réduction se traduit par un changement de couleur de la solution qui vire du violet au jaune
en présence d’un antiradicalaire. La réaction est alors quantifiée en mesurant l’absorbance de
la solution par spectrophotométrie à 515 nm.
2.4.6.1.2.Protocole
L’acticité antiradicalaire DPPH° a été effectuée à la température ambiante suivant la méthode
de Brand-William (1995). 4 mg de DPPH ont été dissout dans 50 mL de MeOH ; 50 mg de
trolox dissout dans 10 mL de MeOH et 10 mg de chaque échantillon dissout dans1 mL de
MeOH.
A partir de la concentration mère (10 mg/mL pour les échantillons et 5mg/mL pour le trolox)
des dilutions au 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 et 1/32 ont été préparées. Sur une microplaque de 96 puits,
le remplissage de chaque puits pour chaque concentration a été fait selon le Tableau 2- 1
Tableau 2- 1: Préparation des échantillons pour le test antioxydant DPPH
Blanc réactif DPPH 100% Echantillons à

tester
Prise d’essai en 20
µL
Méthanol en µL 220 20
DPPH en µL 200 200
Volume final en 220 220 220
µL
89
Après une incubation de 30 min à la température ambiante, l’absorbance a été lue à une
longueur d’onde de 515 mn chaque minute pendant 45 min. Pour chaque échantillon
l’opération a été effectuée à trois reprises.
Le pouvoir anti-radicalaire des extraits a été évalué par rapport à la solution 100 % qui
renferme le méthanol (blanc réactif) et par rapport à la solution 100 % de DPPH. Une courbe
de pourcentage de DPPH restant, a été tracée en fonction da la quantité de l’échantillon
antioxydant/mg DPPH. Sur la courbe, la concentration nécessaire pour dégrader 50 % DPPH
(CI50, concentration inhibitrice) a été déterminée. Le pouvoir anti-radicalaire (antiradical
power : ARP) a été déterminé ainsi :
ARP = 1/CI50
NB : CI50 est exprimée en mg antioxydant/mg de DPPH restant
2.4.6.2.Méthode CUPRAC (cupric ion reducing antioxidant capacity)
2.4.6.2.1. Principe
Le test CUPRAC repose sur la capacité du complex cuivre(II)-néocuproïne à se faire réduire
en cuivre (I)-néocuproïne par le groupe réactif des polyphénols : Ar-OH selon la réaction
suivante :
2n Cu(Nc)22+ + Ar(OH)n = 2 n Cu(Nc)2+ + Ar(=O)n + 2n H+
Bleu Jaune
2.4.6.2.2.Protocole
Le test de CUPRAC a été réalisé suivant la méthode décrite par Apak et al. (2004). 10 mg de
chaque extrait ou fraction ont été dissout dans 1 mL de MeOH et les produits de référence ont
été préparés à une concentration mère de 1 mg/mL. Des dilutions au 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 et 1/32
ont été préparées à partir des concentrations mères. Les réactifs ont été préparés de la manière
suivante :
 0,8524 g de chlorure de cuivre II (CuCl2) dans 50 mL d’eau distillée
 0,039 g de néocuproïne (2,9-dimethyl-1,10-phenanthroline) dans 25 ml d’éthanol
 3,854 g de tampon ammonium acétate (NH4Ac) dans 50 ml d’eau distillée
90
Sur une microplaque de 96 puits, 50 µL de la dilution de chaque échantillon ont été repartis,
auxquels sont ajoutés 50 µL d’eau distillée, 50 µL de CuCl2, 50 µL de NH4Ac et 50 µL de
néocuproïne. Les solutions dans les puits ont été homogénisées puis laissées incuber à 25 °C
pendant 60 minutes. L’absorbance a été mesurée à 450 nm par un lecteur de plaque
(Multiskan EX). La capacité antioxydante est calculée en équivalent Trolox :
TEACmassique = E %échantillon / E %trolox
E % : est le coefficient d’extinction massique et exprimée en g/L
TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity) est défini comme étant la concentration
millimolaire de trolox ayant la capacité antioxydante équivalente à une solution de 1 mM de
la substance à étudier.
2.4.7.Inhibition de la lipoxygénase
2.4.7.1.Principe
Le prince consiste à inhiber in vitro la lipoxygénase à produire des leucotriènes et de la
lipoxine en présence d’une substance inhibitrice.
2.4.7.2.Protocole
La méthode spectrophotométrique développée par Malterud et Rydland (2000) a été utilisée
pour évaluer l’activité inhibitrice des extraits sur la lipoxygénase. Les réactifs ont été préparés
de la manière suivante :
 19,05 g de Sodium tetraborate (Na2B4O7, 10 H2O) dans 250 mL d’eau distillée afin
d’obtenir une solution A ; la solution B a été obtenue avec 4,34 g d’Acide borique
dans 350 mL d’eau. Le tampon borate 0.2 M, est obtenu en ajoutant la solution B à A
jusqu’à obtenir du pH 9.0, le volume a été ensuite ajusté à 1L.
 L'acide linoléique (substrat) a été laissé à l'air libre pendant toute une nuit à la
température du laboratoire pour être oxydé afin de favoriser l'activité de l'enzyme puis
il a ensuite été conservé au congélateur avant utilisation. 10 µL d'acide linoléique, 30
µL d'éthanol et 120 mL de tampon borate ont été mélangés pour obtenir 250µM
d’acide linoléique. La solution est utilisée dans un intervalle de 24 h.
91
 La solution d’enzyme est obtenue par préparation de la lipoxygénase (EC 1.13.11.12)
de type I-B (extraite du soja) (200 U/mL) dans du tampon borate.
400 µl d’une solution de lipoxygénase (167 U/ml), 100µl d’une solution d’extrait (à la
concentration finale de 50 µg/ml) sont mélangés et incubés pendant 2 min à 25°C. La réaction
est initiée par addition de 500 µl d’une solution de substrat d’acide linoléique (134 µM) et la
variation d’absorbance est suivie à 234 nm pendant 90 secondes. Tous les tests ont été réalisés
en triplicata. Le solu-medrol et l’hydrocortisone ont été utilisés comme produits de référence.
Les extraits suivants ont été testés :
- le décocté et l’extrait MeOH (B) des écorces de tronc
- le décocté, l’extrait MeOH (K) et la fraction flavonoïdique des feuilles
- le décocté, l’extrait DCM et l’extrait MeOH (F) des écorces de racines
L’activité inhibitrice de la lipoxygénase exprimée en pourcentage d'inhibition a été
déterminée en utilisant la formule suivante:
Pourcentage d’inhibition = (E – S)/E×100
Où E est l'activité de l'enzyme sans inhibiteur et S son activité en présence de l'extrait à tester.
2.4.8.Inhibition de la peroxydation lipidique
2.4.8.1.Principe
Le principe consiste à induire in vitro une peroxydation lipidique d’homogénat de foie de rat
avec un mélange de bichlorure ferrique (FeCl2) et de l’eau oxygénée (H2O2). La peroxydation
est inhibée en présence d’une substance à activité inhibitrice.
2.4.8.2.Protocole
L’activité inhibitrice de la peroxydation lipidique de foie de rat a été déterminée en utilisant
l’acide 2-thiobarbiturique. Le FeCl2–H2O2 a été utilisé pour induire la peroxydation de
l’homogénat de foie selon Su et al. (2009) avec quelques modifications. 0,2 ml d’extrait ou de
fraction à la concentration de 1,5 mg/ml ont été mélangés avec 1ml de 1% d’homogénat de
foie (chaque 100 ml de solution d’homogénat contient 1g de foie de rat), puis 50 µl de FeCl2
(0,5 mM) et 50µl de H2O2 (0,5 mM) ont été ajoutés. Le mélange est incubé à 37°C pendant 60
minutes, puis 1 ml d’acide trichloro-acétique (15%) et 1 ml d’acide 2-thiobarbiturique
(0,67%) ont été ajoutés et le mélange a été chauffé dans de l’eau bouillante pendante 15
minutes. L’absorbance est lue à 532 nm. La quercétine a été utilisée comme produit de
référence. Les extraits utilisés sont :
92
- le décocté et l’extrait MeOH (B) des écorces de tronc
- le décocté, l’extrait MeOH (K) et la fraction flavonoïdique des feuilles
- Le décocté et l’extrait MeOH (F) des écorces de racines
La capacité des extraits à inhiber la peroxydation lipidique du foie est exprimée en
pourcentage d’inhibition selon la formule suivante:
Pourcentage d’inhibition (%) = [1-(A1-A2)/A0x100]
A0 est l’absorbance du contrôle (sans échantillon), A1 est l’absorbance avec échantillon et A2
est l’absorbance sans homogénat de foie.
2.4.9.Analyse des résultats
L’analyse des résultats des tests in vivo a été réalisée sur la base du traitement statistique en
utilisant le logiciel Graph Prism version 5. One way ANOVA suivi de Dunnett’s test ont été
utilisés comme traitement statistique. Les différences sont considérées significatives si P (p
value) est inférieure à 0,05 comparativement au témoin. Le logiciel EXCEL a été utilisé pour
l’analyse statistique des résultats issus des tests in vitro.
2.4.10.Aspect éthique de l’étude

En l’absence de comité d’éthique nationale au Burkina Faso concernant les études chez les
animaux de laboratoires, tous les protocoles d’études et expériences in vivo ont été effectués
conformément aux protocoles déjà validés par l’Institut de Recherche en Sciences de la Santé
(IRSS, Burkina Faso) et qui respectent les normes internationales en la matière (lignes
directrices établies par l'Union européenne sur la protection des animaux (CCE Conseil
86/609) (Zimmermann, 1983).
93
CHAPITRE 3, RESULTATS ET DISCUSSIONS
94
3.1.Résultats d’études phytochimiques
3.1.1.Criblage phytochimique
Le criblage phytochimique colorimétrique a permis de caractériser la présence de tanins, de
flavonoïdes, de saponosides et de triterpènes/stéroïdes dans les décoctés des feuilles
(DECFEU) et des écorces de racines (DECRA) de Pterocarpus erinaceus.
L’analyse CCM lors des purifications des extraits a permis de mettre en évidence la présence
des flavonoïdes, des tanins et des coumarines dans les extraits MeOH (B), MeOH (F) et
MeOH (K) en utilisant les réactifs DBA et la vanilline sulfurique, et des triterpènes et
stéroïdes dans les extraits DCM (A) et DCM (E) en utilisant seulement la vanilline sulfurique.
Figure 3- 1: Profil CCM analytique de de la fraction flavonoïdique (L), des phases DCM (N),
AcOEt (O), BuOH (P) et phase aqueuse (Q) des feuilles de P. erinaceus
Le profil CCM montre à l’UV 366 nm des tâches de couleur jaune, bleu et vert après
révélation au DBA, indicateur de la présence des flavonoïdes (Figure 3- 1). Ces fractions ont
subi également une analyse CHLP analytique.
95
1 2 3 1 2 3
1 2 3
Lecture après pulvérisation
Lecture à 254 nm à la vanilline sulfurique
Lecture à 365 nm
1 Et 3 : Extrait DCM A
2 : phase DCM C Solvant : hexane/acétate d’éthyle 7,5/2,5 v/v
Plaque gel de silice support alu fluorescence à 254 nm
Figure 3- 2: Profil CCM analytique de DCM (A) à l’UV 254 et 366 nm puis après révélation
à la vanilline sulfurique.
Le profil CCM de l’extrait DCM (A) montre à l’UV 254 nm des tâches noires et à 366 nm des
tâches de couleur vert-clair, rouge (chlorophylle). Après révélation à la vanilline sulfurique
des tâches violettes apparaissent caractéristiques des triterpènes (Figure 3- 2).
3.1.2.Analyses CLHP
3.1.2.1.Extraits des écorces de tronc de P. erinaceus

L’extrait MeOH (F) et ses phases AcOEt (G) et BuOH (H) ont été analysés par CHLP
analytique ( Figure 3- 3) afin de comparer leurs profils chromatographiques et d’identifier les
composés UV-majoritaires. Les profils chromatographiques sont assez similaires et il apparait
essentiellement deux composés majoritaires dont la teneur est plus élevée dans la phase
BuOH (H). Il s’agit de composés relativement polaires.
96
Figure 3- 3: Chromatogrammes CLHP de l’extrait MeOH (F) et des phases AcOEt (G) et
BuOH (H) des écorces de racines de P. erinaceus. Colonne : Kromasyl 250x4.6 mm ; 100 Å.
Gradient : 8 à 40% de MeOH dans H2O en 20 min ; 40 à 100% de MeOH dans H2O en 2 min ;
3.1.2.2.Extraits des feuilles de P. erinaceus

Une analyse par CLHP analytique a été réalisée sur la fraction flavonoïdique (L) et les phases
DCM (N), AcOEt (O), BuOH (P) et aqueuse (Q) issues de l’extrait MeOH des feuilles de P.
erinaceus afin de comparer les profils chromatographiques et d’identifier les composés UV-
majoritaires. Les profils chromatographiques des phases sont différents ; mais il apparait des
pics similaires (identifiés par des chiffres de 1 à 5) entre les différents chromatogrammes
(Figure 3- 4).
97
Figure 3- 4: Chromatogrammes CLHP de la fraction flavonoïdique (L), des phases DCM (N),
AcOEt (O), BuOH (P) et phase aqueuse (Q) des feuilles de P. erinaceus. Colonne : Kromasyl
250x4 ,6 mm ; 100 Å. Gradient : 2 à 100% MeOH dans H2O en 30 min, 100% MeOH pendant
5 min
3.1.3.Identification des composés isolés

Plusieurs techniques chromatographiques ont été utilisées pour isoler et identifier les
composés présents dans les différents extraits de P. erinaceus. Les composés PE.1 et PE.2
issus de l’extrait DCM (A) et le composé PE.3 de la phase AcOEt (D) ont été isolés grâce aux
chromatographies sur colonne ouverte de gel de silice, de Sephadex LH20 et SPE (Lichroprep
RP18, MERCK). La combinaison de SPE (Lichroprep RP18, MERCK) et de chromatographie
sur colonne ouverte de Sephadex LH20 et de gel de silice a permis d’isoler PE.4, PE.5, PE.6,
PE.7, PE.8 et PE.9, composés issus de l’extrait DCM (E). Les composés PE.10, PE.11 et
PE.12, issus de la phase BuOH (H) ont été isolés à l’aide de la combinaison VLC, CCM
préparative et de colonne de Sephadex LH20. La VLC, la SPE (Lichroprep RP18, MERCK)
et la colonne de Sephadex LH20 ont servi à isoler les composés PE.13 et PE.14 de la phase
AcOEt (O). Les composés PE.15, PE.16, PE.17 et PE.18 de la phase BuOH (P) ont été
98
purifiés par les techniques de MPLC, de CCM préparative et de colonne de Sephadex LH20.
Le détail de ces fractionnements est exposé dans le chapitre II de ce manuscrit.
L’identification de ces composés purs isolés a été faite par l’utilisation combinée des
méthodes d’analyse suivantes :
 RMN 1D de proton et de carbone 13, DEPT 135
 RMN 2D (COSY, HMQC, HMBC)
 Pouvoir rotatoire
 UV 254 et 366 nm
 Par comparaison avec les données de la littérature
3.1.3.1.Composé PE.1
Le composé PE.1 (25 mg) se présente sous la forme d’une poudre blanche, soluble dans le
DCM et le chloroforme. Après migration dans un système de solvant hexane/AcOEt (90/10),
révélation à la vanilline sulfurique puis chauffage de la plaque CCM phase normale, il prend
une coloration orange caractéristique d’un triterpène avec un Rf de 0.42.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CDCl3) (Figure 3- 5) montre des signaux qui s’intensifient
entre 0.73 et 2.50 ppm. A haut champs, on distingue huit singulets caractéristiques de
groupements méthyles à δH 0.72 ; 0.86 ; 0.88 ; 0.96 ; 1.01 ; 1.01 ; 1.06 et 1.19 ppm.
L’analyse du spectre RMN 1H (Figure 3- 5) a été complétée par l’analyse du spectre RMN
13
C (75 MHz, CDCl3) (Figure 3- 6) présentant 30 signaux et qui confirme la présence d’un
triterpène avec huit méthyles dont les signaux peuvent être observés entre 6.8 et 35.0 ppm. Un
carbone très déblindé, résonnant à δC 212.0 ppm, correspond à une fonction carbonyle sur le
carbone 3. Sur la base de ces données et de celles de la littérature (Carlos et al., 2004 ;
Mahato et al., 1994), le composé PE.1 est identifié comme étant la friedeline. La friedeline a
été isolée à deux moments au cours du fractionnement sous les numéros PE.1 et PE.6.
La friedeline a été identifiée pour la première fois par Friedel en 1892 (Chandler et Hooper,
1979) et isolée des écorces de Siphonodon australe en 1956 (Shannon et Macdonald, 1963).
La friedeline, répandue dans le règne végétal (plantes supérieures, algues, mousses et lichens),
possède des propriétés antitumorale, anti-convulsion, anti-inflammatoire, antiulcéreuse
localement, antipyrétique et contre la dysenterie (Chandler et Hooper, 1979).
99
Figure 3- 5: Spectre RMN 1H du composé PE.1 (CDCl3, 300 MHz)
C-28 C-27
C-30 C-7
C-26
C-29 C-17 C-20 C-1 C-25 C-24 C-23
Figure 3- 6: Spectre RMN 13C du composé PE.1 (CDCl3, 75 MHz)
100
Friedeline
Le composé PE.2 (6 mg) se présentant sous forme d’une poudre blanche soluble dans le
DCM. Après migration dans DCM 100% puis révélation à la vanilline sulfurique et chauffage
de la plaque CCM gel de silice (60F254), il prend une coloration violette caractérisant la
présence d’un triterpène avec un Rf de 0.57.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CDCl3) (Figure 3- 7) présente plus de signaux dans les hauts
champs. L’étude du spectre montre la présence de trois zones spécifiques à un triterpène : une
zone à haut champ avec 7 méthyles (δH 0.77 à 1.20 ppm) ; deux singulet large à δH 4.56 et
4.69correspondent aux protons éthyléniques du carbone C-29, et à δH 3.21 le doublet de
doublet correspond au proton H-3 lorsque le carbone C-3 est substitué par un hydroxyle.
13
L’analyse du spectre RMN C (Figure 3- 8) révèle la présence de 30 carbones. Toutes ces
informations conduisent à l’identification du lupéol comparativement aux données de la
littérature (Mahato et Kundu, 1994 ; Fotie et al., 2005 ; Noungoué Tchamo et al., 1998).
Le lupéol possède de nombreuses propriétés pharmacologiques à savoir anti-inflammatoire,
antimutagénique, antitumorale et antiarthritique. Une étude menée par (Saleem et al., 2001) a
démontré l’effet protecteur du lupéol contre la tumeur cutanée provoquée chez la souris par le
traitement de peroxyde de benzoyle.
101
H-23
H-28
H-26 H-25 H-24
H-27
H-30
H-29
H-3
H-19
102
Lupéol
Le composé PE.3 (27 mg) présente un aspect rouge-brun. Il est soluble dans le MeOH. Son
Rf est de 0.34 dans un système de solvant MeOH/H2O (50/50) sur une plaque CCM RP-18.
Après révélation avec le DBA (diphénylborate d’aminoéthanol) il apparait rouge au visible.
Son pouvoir rotatoire : [α] = - 46 ° (C=0.19, MeOH).
1
Le spectre RMN H (300 MHz, CD3OD) (Figure 3- 9) présente des signaux de protons
aromatiques du cycle A (δH 6.75 – 6.96 ppm) et du cycle B (δH 5.90 – 5.94 ppm) d’un
flavonoïde. On note la présence des protons du noyau C entre δH 2.69 et 2.88et le signal à δH
4.17 ppm est attribuable à un groupement de type alcool secondaire -CH-OH.
103
H-6’, H-5’
H-6, H-8 H-2
H-2’
H-3 H-4
Figure 3- 9: Spectre RMN 1H du composé PE.3 (CD3OD, 300 MHz)
C-2’
C-5’ C-6
C-8 C-2 C-3
C-4’, C-3’ C-1’ C-6’ C-10 C-4
Figure 3- 10: Spectre RMN 13C du composé PE.3 (CD3OD, 75 MHz)
Le spectre RMN 13C (Figure 3- 10) montre la présence des 15 signaux confirmant la structure
de type flavonoïde. Ces informations comparées aux données de la littérature (Noungoué
Tchamo et al., 1998 ; Lhuillier, 2007) font ressortir que le composé PE.3 est l’épicatéchine, et
le pouvoir rotatoire précise qu’il s’agit de la (-)-épicatéchine (Foo et al., 1996).
L’épicatéchine réduit le taux de glucose dans les myocytes C2C12 (Deutschländer et al.,
2011).
104
(-) épicatechine
Le composé PE.5 se présente sous forme blanchâtre. Il est visible à l’UV 254 et 366 nm. Il ne
réagit pas avec la vanilline sulfurique. Son Rf est de 0,64 avec un éluant de DCM/MeOH
(50/50, v/v) sur une plaque CCM analytique de phase inverse.
Le spectre RMN 1H (Figure 3- 11), relativement simple montre 5 signaux à 1.23 (s, 6H), 1.28
(s, 6H), 7.12 (dd, J=2.4, 8.6 Hz, 2H), 7.36 (tl, J=2.1 Hz, 2H), 7.54 (d, J=8.6 Hz, 2H) (Figure).
105
La présence des deux groupes de 6 méthyles, et les intégrales des protons aromatiques,
suggèrent l’existence d’une symétrie dans la molécule. Par ailleurs, les multiplicités des
protons aromatiques ne sont compatibles avec aucune structure (en particulier le triplet avec
les constantes méta). Aussi, ce signal à  7.36 (tl, J=2.1 Hz, 2H) doit être interprété comme
deux doublets méta, appartenant à deux systèmes de spins différents permettant ainsi
d’envisager la présence de deux noyaux aromatiques portant 3 protons engagés dans un
système ABX.
13
La notion de symétrie est retrouvée sur le spectre RMN C où on observe 10 signaux entre
30.2 et 147.7 ppm, avec des déplacements parfois très proches (Figure 3- 12). On distingue
ainsi 6 carbones aromatiques (entre 120 et 150 ppm), 2 carbones quaternaires à  34.5/34.9 et
2 signaux de méthyles à  30.2/30.4.
106
Figure 3- 13: Spectre DEPT 135 du composé PE.5 (CDCl3, 300 MHz)
L’équivalence de 6 méthyles laisse penser à l’existence de 2 groupements de type tertiobutyl.

La combinaison des corrélations COSY 1H-1H, HSQC et HMBC a permis de proposer la
sous-structure suivante pour PE.5.
107
Corrélations HMBC Structure du composé PE.5
Il s’agit d’un composé nouveau. Les composés naturels présentant le motif terbutyl sont en
effet rares dans le règne végétal. Des analyses (SM, UV) viendront confirmer ou infirmer ces
hypothèses.
Le composé PE.7 (2.6 mg) se présente sous forme de poudre blanche soluble dans le DCM et
le CHCl3. Il absorbe à 254 et 366 nm et prend une coloration orange après révélation à la
vanilline sulfurique puis chauffage. Son Rf est de 0.30 dans un mélange hexane/AcOEt
(90/10, v/v) sur plaque CCM silice.
L’analyse du spectre RMN 1H (400 MHz, CDCl3) (Figure 3- 14) de ce composé met en
évidence la majorité des signaux dans les hauts champs, ce qui est caractéristique d’un
triterpène. On note la présence de huit groupements méthyles à δH 0.89 ; 0.94 ; 0.97 ; 0.99 ;
1.00 ; 1.03 ; 1.04 ; 1.17 ppm. Le spectre présente également :
 un double doublet à δH 2.50 ppm correspondant au proton méthylénique 1α (1α-H)
 un double doublet à δH 3.83 ppm attribué au proton méthinique hydroxylé 3β (3β-H)
 un triplet à δH 2.39 ppm attribué au proton méthylénique 1β (1β-H)
 un multiplet à δH 1.84 ppm correspondant au proton méthylénique 6β (6β-H)
 un doublet à δH 3.54 ppm correspondant à un groupement –CH-OH
108
Figure 3- 14: Spectre RMN 1H du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3)
13
L’analyse du spectre RMN C (Figure 3- 15) met en évidence la présence de 30 signaux
correspondant au nombre de carbones existants. Dans le champ le plus déblindé, le carbone à
δC 211.9 ppm correspond au signal du carbone C-2 portant le groupe cétone. Le carbone C-3
portant le groupe OH apparait à δC 77.2 ppm. Le spectre DEPT 135 (Figure 3- 16) a apporté
plus d’informations et a permis par déduction de déterminer sept carbones quaternaires dont
C-2.
Figure 3- 15: Spectre RMN 13C du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3)
109
Figure 3- 16: Spectre DEPT 135 du composé PE.7 (400 MHz, CDCl3)
Figure 3- 17: Spectre HSQC du composé PE.7
L’expérience HSQC (Figure 3- 17) montre que les protons méthyliques H-24, H-25, H-26, H-
27, H-28, H-29 et H-30 sont rattachés respectivement aux carbones C-24 (14.2 ppm), C-25
(17.4 ppm), C-26 (20.2 ppm ), C-27 (18.6 ppm), C-28 (32.1 ppm ), C-29 (31.7 ppm ) et C-30
(35.0 ppm). Sur la base des données apportées par les différents spectres (RNM 1H et 13
C,
110
DEPT) et celles de la littérature (Lingbo et al., 2005) le composé PE.7 s’avère être la 3α-
hydroxyfriedelan-2-one.
3α-hydroxyfriedelan-2-one
Le composé PE.8 (17.7 mg) se présente sous forme d’aiguilles blanches. Il prend une
coloration bleue après révélation à la vanilline sulfurique puis chauffage (5 – 10 min à
100°C). Dans un système d’éluant MeOH/DCM (60/40, v/v) sur plaque CCM phase inverse,
son Rf est de 0.66.
Le spectre RMN 1H (400 MHz, CDCl3) (Figure 3- 18) du composé PE.8 présente les signaux
rappelant là encore un triterpène dont huit méthyles angulaires à δH 0.79 ; 0.87 ; 0.91 ; 0.94 ;
0.98 ; 0.99 ; 1.02 ; 1.12 ppm. Nous observons également un proton vinylique à 5.25 ppm (t,
J= 3.6 Hz, H-12) et un double doublet à 3.22 ppm (dd, J=11.0, 4.9 Hz, H-3) et 3.44 ppm (t, H-
22) correspondant aux protons vicinaux.
111
Le spectre RMN 13C (Figure 3- 19) présente 30 signaux dont les carbones des 8 méthyles et
les carbones oléfiniques (120-145 ppm) mais le DEPT 135 °C (Figure 3- 20) a permis de
faire la différence entre les CH3 et les CH2 dans cette zone. Ainsi, on note la présence des
méthyles à δC 15.5 (C-25), 16.8 (C-26, C-24); 19.9 (C-27) ; 25.3 (C-30) ; 28.0 (C-23);
28.1 (C-28) et 32.7 (C-29).
112
Figure 3- 20 : Spectre DEPT du composé PE.8 (CDCl3, 400 MHz)
13
Les déplacements chimiques en RMN C des carbones oléfiniques C-12 et C-13 ont permis
de faire la différence entre un triterpène de type oléanane et de type ursane. En effet, les
carbones C-12 et C-13 ont des déplacements chimiques respectifs à δC 122.0 et 145.0 ppm
pour les structures de type oléanane et δC 129.1 et 134.2 ppm pour les structures de type
13
ursane (Mahato et al., 1994). Ainsi, étant donné que notre spectre RMN C présente des
signaux à δC 122.5 et 143.9 ppm pour les carbones C-12 et C-13, nous pouvons en déduire
que le composé PE.8 est de type oléanane.
113
Figure 3- 21: Spectre COSY du composé PE.8
Les expériences RMN 2D COSY, HMQC et HMBC ainsi que les données de la littérature
(Mahato et al., 1994 ; Ndom et al., 2001) ont permis de fixer les groupes OH sur les carbones
C-3 et C-22. De plus, selon Ndom et al., (2001) ces carbones hydroxylés ont pour
déplacements chimiques δC 79.0 et 76.6 ppm lors d’une configuration α et 78.1 et 75.6 pour
β. Sur le spectre RMN 13C, C-3 et C-22 ont pour valeurs 79.0 et 76.7 ppm laissant supposer
que le composé PE.8 est de configuration α.
Ainsi, avec toutes ces informations fournies, le composé PE.8 est identifié comme étant l’α-
sophoradiol.
L’effet hépatoprotecteur du sophoradiol et ses hétérosides a été mené sur l’hépatotoxicité
d’une lignée cellulaire hépatique (HepG2) induite par l’hydroperoxyde tert-butyle (t-
BuOOH). L’étude a montré que le sophoradiol a le même effet que la substance de référence
(la glycyrrhizine) (Kinjo et al., 2003).

114

-sophoradiol
Le Composé PE.9 (14 mg) se présente sous forme de poudre blanche, il prend une coloration
violette après révélation à la vanilline sulfurique puis chauffage. Son Rf est 0.40 dans
hexane/AcOEt (80/20, v/v) sur CCM en phase normale.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CDCl3) (Figure 3- 22) de ce composé présente des signaux
allant de 0.68 à 5.36 ppm. On observe la présence des six méthyles qui apparaissent à δH 0.68,
0.78, 0.82, 0.86, 0.91 et 1.03 ppm. L’analyse de ce spectre montre la présence de protons
oléfiniques à δH 5.35 ppm (t, J = 11.7 Hz, H-6) ; 5.15 ppm (dd, J = 15.2, 8.6 Hz, H-22) et 5.02
ppm (dd, J = 15.2, 8.6 Hz, H-23). Le proton H-3 apparaît comme un multiplet à δH 3.51 ppm
(Jamal, 2009).
115
13
Le spectre RMN C (Figure 3- 23) montre la présence de vingt neuf signaux. Les signaux
des carbones C-5, C-22, C-3 et C-6 apparaissent à δC 140.7, 138.3, 129.3 et 121.7 ppm. Les
déplacements chimiques des C-22, C-23 sont caractéristiques des Δ22–stérols (Rubinstein et
al., 1976). Les déplacements chimiques à δH 3.51 ppm et δC 71.8 ppm de C-3 ont montré
l’existence d’un hydroxyle. A l’issue de l’analyse des informations apportées par les
expériences DEPT (Figure 3- 24), COSY, HMQC et HMBC et par comparaison avec la
littérature, le composé PE.9 est identifié comme étant le stigmastérol.
Lagnika et al. (2008) ont rapporté les propriétés anti-inflammatoire, antipyrétique et
antimutagénique du stigmastérol et du sitostérol. Le stigmastérol a été isolé de Solanum
melongena L. (Solanaceae) et son inhibition sur la xanthine oxydase a été démontrée avec une
IC50 de 98.7 µM comparée à celle de la quercétine (25.9) (Chiang et Chen, 1993).
116
Figure 3- 24: Spectre DEPT du composé PE.9 (CDCl3, 400 MHz)
Stigmastérol
3.1.3.9. Composé PE.11

Le composé PE.11 (12.6 mg) a un aspect blanc. Après migration dans MeOH/AcOEt (50/50,
v/v) sur plaque CCM phase normale puis révélation à la vanilline sulfurique il apparait jaune-
brun et est visible à l’UV 254 nm. Son Rf est de 0.36.
Le spectre RMN 1H (400 MHz, CD3OD) (Figure 3- 25) du composé PE.11 présente des
signaux allant de δH 1.80 à 8.00 ppm. L’analyse montre la présence de protons osidiques dont
les déplacements chimiques se situent entre δH 3.36 à 3.20 ppm, et protons anomériques à δH
4.80 (d, J= 7.2 Hz) et 4.9 (d, J= 2.3 Hz). La constante de couplage de 7.2 Hz du signal à 4.8
ppm permet de déterminer la configuration du sucre correspondant comme étant β. La
117
présence de doublets à δH 8.00, 6.5 et d’un singlet à 2.4 ppm suggère l’existence d’un groupe
maltol (Haizhou et al., 2007).
13
Le spectre RMN C (500 MHz, CD3OD) (Figure 3- 26) met en évidence l’existence d’un
composé comportant 17 carbones. Par déduction avec l’expérience de DEPT 135°C (Figure
3- 27) on dénombre quatre carbones quaternaires. L’expérience de corrélation hétéronucléaire
HSQC (Figure 3- 28) a permis d’établir des liaisons géminales 1H-13C de ce composé. Ainsi,
les protons anomériques H-1’ (4.80 ppm) et H-1’’ (4.95 ppm) ainsi que le proton H-5 (6.45
ppm) sont respectivement liés aux carbones situés à δC 105.0, 111.0 et 118.0 ppm. Le spectre
des corrélations hétéronucléaires HMBC (Figure 3- 29) a permis d’identifier des corrélations
entre le proton anomérique H-1’’ et les carbones C-6’, C-4’’, C-2’’ et C-3’’ ; ainsi qu’entre H-
1’ et C-5’. Ainsi le second sucre est lié au premier sur le C-6’ et la chaîne est, elle-même,
portée par le C-3 du maltol.
Les analyses des spectres RMN 1H et 13C, DEPT 135, COSY, HSQC, ainsi que la mesure de
constantes de couplage ont permis d’identifier les unités osidiques comme étant un -
apiofuranosyl et un -glucopyranosyl. Les données de la littérature ont enfin, permis de
déterminer la structure complète du composé PE.11 comme étant le maltol -3-O-[-
apiofuranoside--(1-6)-glucopyranoside] (Haizhou et al., 2008).
Haizhou et al. (2008) ont isolé pour la première fois le maltol 6’-O--apiofuranoside--
glucopyranoside d’Elsholtzia rugulosa Hemsl. (Lamiaceae). A notre connaissance aucune
activité biologique n’a été rapportée pour ce composé.
118
Figure 3- 27: Spectre DEPT du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz)
119
Figure 3- 28: Spectre HSQC du composé PE.11 (CD3OD, 300 MHz)
Figure 3- 29: Spectre HMBC du composé PE.11
120
maltol 3-O-[-apiofuranoside--(1-6)-glucopyranoside]
Le composé PE.12 (21.5 mg) a un aspect blanc. Après révélation à la vanilline sulfurique il
apparait jaune-brun et est visible à l’UV 254 nm. Son Rf est de 0,60 avec un éluant de
MeOH/AcOEt (50/50, v/v) sur une plaque CCM silice.
Les spectres RMN du composé PE.12 rappellent beaucoup ceux de PE.11. En effet, sur le
spectre RMN 1H (500 MHz, CD3OD) (Figure 3- 30) on retrouve des signaux correspondant à
deux unités osidiques de 3.5 à 4.9 ppm. La présence de deux protons anomériques suggère
qu’ici aussi le composé comporte deux sucres. Parallèlement à ces signaux, le spectre montre
deux protons éthyléniques à H 6.7 (s, 1H) et H 7.6 (s, 1H) et d’un méthyl singulet à 2.5 ppm.
Ces derniers protons rappellent fortement le maltol du composé précédent. Cependant, les
deux éthyléniques ne doivent pas être sur la même double liaison car ils résonnent sous forme
de singulet.
121
L’analyse du spectre COSY 1H-1H permet d’identifier les deux sucres au -glucopyranose et
au -apiofuranose. Sur le spectre RMN 13
C la partie aglycone comporte 6 carbones à  27.2
(CH3), 106.4 (CH), 139.1 (C), 148.5 (CH), 154.7 (C) et 187.8 (C). Les corrélations HMBC
observées à travers 2 ou 3 liaisons ont permis de proposer différentes possibilités de structure
(entre parenthèses des corrélations de faible intensité):
- H 2.49 / C 139.1, 187.8
- H 6.74 / C 139.1, 148.5, (154.7), (187.8)
- H 7.66 / C 106.4, 139.1, 154.7, (187.8).
122
La structure permettant d’observer exactement toutes les corrélations HMBC est la
proposition C.
De plus, un des protons anomériques ( 4.95, d, J = 2,6 Hz) présente une corrélation avec le
carbone à  154.7 indiquant ainsi le point de fixation de la chaîne osidique sur ce synthon. La
recherche bibliographique n’a fait ressortir aucune structure équivalente. La combinaison des
corrélations COSY 1H-1H, HSQC et HMBC a permis de proposer pour le composé PE.12 la
structure suivante :
Les logiciels de simulations de spectres RMN ont apporté également des éléments en faveur
de cette structure. Des données d’analyses (SM, UV) viendront confirmer ou infirmer ces
hypothèses.
Le composé PE.14 (3.1 mg) a un aspect jaune. Il est visible à l’UV 254 et 366 nm. Il prend
une coloration orange avec le réactif DBA caractéristique de la présence d’un flavonoïde
portant deux hydroxyles sur le noyau B (Brasseur et Angenot, 1986). Son Rf est de 0.33 sur
une plaque CCM de phase inverse, après migration dans MeOH/H2O (70/30, v/v).
123
Le spectre RMN 1H (300 MHz, acétone-d6) (Figure 3- 32) présente des protons confirmant la
présence d’un flavonoïde. Les protons H-6 et H-8 du cycle A apparaissent en doublet, avec
une faible constante de couplage, respectivement à δH 6.21 et 6.51 ppm. Les protons H-2’, H-
5’ et H-6’ du cycle B sont situés à δH 7.52, 6.98 et 7.45 ppm respectivement.
Figure 3- 32: Spectre RMN 1H du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz)
L’analyse du spectre RMN 13C (Figure 3- 33) indique la présence de 15 carbones.

L’expérience de DEPT 135 présente 6 signaux correspondant aux carbones tertiaires CH ; et
par déduction 9 carbones quaternaires ont été identifiés.
Figure 3- 33: Spectre RMN 13C du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz)
124
Figure 3- 34: Spectre DEPT du composé PE.14 (acétone-d6 , 300 MHz)
Les informations fournies par les spectres RMN 1H, 13C et l’expérience de DEPT 135 (Figure
3- 34) concordent avec les données de la littérature (Bennaghmouch et al., 2002). Ainsi, le
composé PE.14 est identifié comme la lutéoline.
Ferreira et al. (2010) ont rapporté que la lutéoline inhibe les germes de Plasmodium
falciparum de souche chloroquine-sensible (3D7) et chloroquine-résitante (7G8) à des
concentrations respectives de 11 et 12 µM. Ces auteurs ont rapporté également les effets
anticancéreux et inhibiteurs de la profilation cellulaire et de l’angiogénèse.
Lutéoline
125
Le composé PE.15 (6.5 mg) se présente sous forme de poudre jaune. Il est visible à l’UV 254
et sombre à 366 nm. Il prend une coloration jaune au visible après migration dans
AcOEt/MeOH/H2O (70/17/13, v/v/v) puis pulvérisation avec le DBA. Le Rf est de 0.47 sur
phase normale.
L’analyse du spectre RMN 1H (300 MHz, CD3OD) (Figure 3- 35) présente des doublets à δH
6.2 et à 6.4 ppm caractéristiques de protons aromatiques. Ces déplacements chimiques
correspondent respectivement aux protons méta H-6 et H-8 du cycle A des flavonoïdes. Le
spectre indique des protons à δH 6.9, 7.5 et 7.6 ppm correspondant aux protons du cycle B.
L’observation des protons à δH 4.7 (d, J= 7.2 Hz) et 5.3 (d, J= 7.6 Hz) indique la présence de
deux protons anomériques de configuration . Les autres protons osidiques sont situés entre
3.2 et 3.8 ppm.
Le spectre RNM 13C (Figure 3- 36) présente 27 signaux. L’expérience de la DEPT (Figure
3- 37) a permis de mettre en évidence la présence d’un carbone secondaire CH2. Le spectre de
corrélations hétéronucléaires à courte distance HSQC (Figure 3- 38) permet d’établir des
corrélations entre H-8, H-6 et les carbones C-8, C-6 ; ainsi que les protons anomériques (H-
1’’ et H-1’’’) et les carbones (C-1’’ et C-1’’’). Sur le spectre HMBC, les protons anomériques
à δH 4.74 (H-1’’’) et 5.34 (H-1’’) montrent des corrélations permettant de déterminer leur
point de fixation en C-2’’ (82.9 ppm) et en C-3 (135.1 ppm), respectivement.
126
127
Figure 3- 38: Spectre HSQC du composé PE.15
Avec les informations basées sur les expériences de DEPT 135 (Figure 3- 37), HSQC (Figure
3- 38) et HMBC et les données de littératures (Samir et al., 2005), le composé PE.15 est
identifié comme étant le quercétine-3-O-sophoroside.
L’effet inhibiteur de la peroxydation lipidique et le pouvoir antioxydant de quercétine-3-O-
sophoroside ont été montrés par Plumb et al. (1997).
quercétine-3-O-sophoroside
128
Le composé PE.16 (32 mg) se présente sous forme de poudre jaune. Il est observable à l’UV
254 nm et apparaît sombre à l’UV 366 nm ; il prend une coloration jaune au visible après
migration dans AcOEt/MeOH/H2O (70/17/13, v/v/v) puis révélation au DBA. Son Rf est de
0.70.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CD3OD) (Figure 3- 39) du composé PE.16 a la même allure
que celui de PE.15. Mais la seule différence observée est la présence d’un seul proton
anomérique H-1’’. Les protons aromatiques H-6 et H-8 du cycle A des flavonoïdes
apparaissent respectivement à δH 6.14 et 6.32 ppm. Les protons situés à δH 7.67 (s, 1H), 7.53
(dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H) correspondent respectivement aux protons
H-2’, H-6’ et H-5’ du cycle B des flavonoïdes. Le seul proton anomérique H-1’’apparaît à δH
5.20 ppm (d, J = 7.3 Hz, 1H). La valeur de la constante de couplage suggère une
configuration  pour la partie glycoside.
13
Le spectre RMN C (Figure 3- 40) du composé PE.16 fait ressortir 21 carbones dont cinq
correspondent aux carbones du sucre. La corrélation entre H-1’’ et le carbone C-3 (135.6
ppm) suppose que l’unité osidique est fixée en C-3 de l’aglycone.
129
Les informations fournies par les spectres RNM 1H et 13

C et la littérature (Iwashina et al.,
1990 ; Markham, 1977) ont permis d’identifier le composé PE.16 comme étant le quercétine-
3-O-β-glucose (ou isoquercitrine).
Une étude menée par Arquimedes et al. (2011) a montré que le quercétine-3-O-β-glucose
réduit la pression artérielle en induisant une hypotension et il réduit l’activité d’ACE
(angiotensin converting enzyme) dans le sérum après 90 min d’administration intraveineuse.
quercétine-3-O-β-glucose (isoquercitrine)
130
Le composé PE.17 (9 mg) obtenu a un aspect de poudre jaune. Il est visible à l’UV 254 nm et
apparaît sombre à l’UV 366 nm. Après migration dans MeOH/H2O (50/50, v/v) puis
révélation au DBA, la tache correspondant à PE.17 vire au jaune visible. Sur une plaque
CCM de phase inverse son Rf est de 0.40.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CD3OD) (Figure 3- 41) présente des signaux typiquement
flavonoïdiques. Les protons à δH 8.05 (d, J= 8.8 Hz, 2H) et 6.92 (d, J=8.9 Hz, 2H)
correspondent respectivement aux protons H-2’, H-6’ et H-3’, H-5’ du cycle B des
flavonoïdes, lorsque celui-ci présence un axe de symétrie. Les protons à δH 6.40 (d, J=1.7 Hz)
et 6.21 (d, J=1.8 Hz) sont attribués aux protons H-8 et H-6 du cycle A des flavonoïdes. Les
protons localisés à δH 5.44 (d, J=7.5 Hz) et 4,77 (d, J=7.3 Hz) correspondent à deux protons
anomériques H-1’’ et H-1’’’.
13
L’analyse du spectre RMN C (Figure 3- 42) indique la présence de 27 carbones.
L’expérience de DEPT 135 indique l’existence de 9 carbones quaternaires par déduction dans
ce composé.
131
Les analyses des spectres RMN 1H et 13

C et l’expérience de DEPT 135 (Figure 3- 43) ont
permis d’identifier le composé PE.17 par comparaison avec les données de la littérature
(Markham, 1978 ; Jaromir, 1990) comme étant le kaempferol-3-O-sophoroside.
L’effet analgésique morphine et non morphinique du kaempferol-3-O-sophoroside a été
montré sur des modèles animaux (Palanichamy et Nagarajan, 1990).
132
kaempferol-3-O-sophoroside
Le composé PE.18 (7.7 mg) se présente sous forme de poudre jaune. Il est visible à l’UV 254
nm et apparaît sombre à l’UV 366 nm. Il prend une coloration orange au visible avec le DBA.
Son Rf est 0.51 avec un éluant AcOEt/MeOH/H2O (70/17/13, v/v/v) sur une plaque CCM
silice.
Le spectre RMN 1H (300 MHz, CD3OD) (Figure 3- 44) présente des signaux semblables à
ceux identifiés pour PE.17. Les protons H-8 et H-6 du cycle A apparaissent respectivement à
δH 6.4 et 6.2 ppm. Les protons du cycle B apparaissent à δH 7.7 et 6.9 ppm. Les protons situés
à δH 5.1 (d, J= 7.4 Hz) et 4.5 (s) ppm correspondent aux protons anomériques H-1’’ et H-1’’’.
Le signal à δH 1.10 ppm indiquant la présence d’un méthyle et le proton anomérique à δH 4.54
ppm ont permis d’identifier la présence de l’-rhamnose.
133
L’analyse du spectre RMN 13C (Figure 3- 45) indique 28 carbones dont ceux des sucres pour
lesquels les déplacements chimiques sont situés entre δC 68.5 et 78.2 ppm. Les carbones
anomériques C-1’’ et C-1’’’ sont, quand à eux, respectivement localisés à δC 104.7 et 102.4
ppm. Le carbone résonnant à δC 17.9 ppm caractérise le méthyle du rhamnose. Le composé
PE.18 comporte, par ailleurs, un carbone secondaire CH2 et 10 carbones quaternaires par
déduction avec l’expérience DEPT 135 (Figure 3- 46).
Figure 3- 46: Spectre DEPT 135 du composé PE.18 (CD3OD, 400 MHz)
Sur la base des informations fournies par les spectres RMN 1H et 13C et l’expérience de DEPT
135 et les données de la littérature, le composé PE.18 est identifié comme étant la rutine.
La rutine réduit l’œdème de la patte de rat à la cinquième heure après l’injection à la
carragénine (Selloum et al., 2003). La rutine a un faible effet inhibiteur de la production de
134
NO, TNF α et PE2 en milieu de culture de macrophages RAW 264.7 stimulé par LPS (Shen
et al., 2002).
Rutine
135
3.2.Résultats d’études biologiques
Des études biologiques ont été menées afin de montrer l’innocuité et l’efficacité des extraits et
fractions obtenus, de même que quelques composés isolés, à travers des méthodes in vivo et in
vitro.
3.2.1.Toxicité générale aigüe

 Voie per os
Aux doses de 500, 1000, 1500, 2000 et 2500 mg/kg de poids corporel de souris. Après deux
semaines d’observation, aucune mortalité n’est observée. Aucun changement de
comportement n’a été constaté comparativement au lot témoin. La DL50 limite est donc
supérieure à 2500 mg/kg de poids corporel.
 Voie intrapéritonéale
Aux doses de 250, 500, 750, 1000 et 1500 mg/kg de poids corporel, après 72 h d’observation,
aucun animal mort n’a été signalé ; et l’administration d’extrait n’a pas changé le
comportement des souris. La DL50 limite par cette voie est donc supérieure à 1500 mg/kg.
3.2.2.Effets anti-inflammatoires
3.2.2.1.Test anti-œdémateux à la Carragénine

 Ecorces de tronc de P. erinaceus
L’effet anti-œdémateux du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B) a été évalué aux

doses de 100, 200, 400 et 600 mg/kg. Les volumes et les pourcentages d’inhibition d’œdème
sont représentés respectivement sur la Figure 3- 47 et dans le Tableau 3- 1.
136
0,45
0,4
0,35
Volume d'oedème (mL)
0,3
0,25 ***
0,2
***
***
0,15 * ***
*** ***
0,1 ***
*** ***
***
0,05
0
1h 3h 5h
Temps (h)
Témoin DECEC 200 mg/kg DECEC 400 mg/kg

MeOH po 200 mg/kg MeOH ip 200 mg/kg AAS 150 mg/kg
n = 6. * : P< 0.05, ** : P< 0.01, *** : P< 0.001 est considéré significatif par rapport au témoin (analyse ANOVA
suivi de Dunnett’s test).
Figure 3- 47: Effet de DECEC, MeOH B et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris induit
par l’injection de la carragénine.
Figure 3- 47 représente l’évolution de l’œdème (mL) de la patte enflammée en fonction du

temps (h), des extraits (DECEC, MeOH B) et de la référence l’acide acétylsalicylique (AAS).
Le DECEC, le MeOH (B) et l’AAS réduisent l’œdème de la même manière parce que leurs
effets sur l’œdème sont plus intenses à la 1ère et à la 5ème heure comparativement au témoin.
137
Tableau 3- 1 : Effet anti-inflammatoire du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B)
des écorces de tronc de P. erinaceus, après 1h, 3h et 5h.
Doses (mg/kg Pourcentage d’inhibition (%)

p.c)
1H 3H 5H
Décocté 200 25.0 31.4 50.0
400 40.0 45.7 55.2
600 65.0 51.4 63.2
Extrait MeOH B (per os) 100 28.6 25.0 42.8
200 52.4 45.8 64.3
Extrait MeOH B (i.p.) 50 41.7 14.7 35.1
100 58.3 23.5 45.9
200 66.7 32.4 54.1
Les deux extraits (DECEC, MeOH B) ont présenté une inhibition dose-dépendante (Tableau
3- 1). Les résultats de l’administration i.p. de l’extrait méthanolique présentent une meilleure
inhibition à la première heure de l’inflammation comparativement à l’administration orale qui
est plus active à la cinquième heure. En effet, à la dose de 200 mg/kg de l’extrait MeOH (B),
l’inhibition observée à la première et cinquième heure est de 66.7 et 54.1 % pour
l’administration i.p. et 52.4 et 64.3 % oralement. L’effet anti-inflammatoire per os du décocté
et de l’extrait MeOH (B) a été plus efficace à la cinquième heure.
- Feuilles de P. erinaceus
L’extrait méthanolique (MeOH K) et le décocté des feuilles de P. erinaceus ont un effet anti-
inflammatoire aux doses de 100, 200, 400 et 600 mg/kg. Ces résultats sont consignés sur la
Figure 3- 48 et dans le Tableau 3- 2.
138
0,35
0,3
0,25 ***
Volume d'œdème (mL)
***
0,2
*
0,15 ** ***
*
* ** ***
0,1 * *
***
***
0,05
0
1h 3h 5h
Temps (h)
Témoin DECFEU 200 mg/kg DECFEU 400 mg/kg

MeOH K 200 mg/kg MeOH K 400 mg/kg AAS 150 mg/kg
n = 6. * : P< 0.05, ** : P< 0.01, *** : P< 0.001 est considéré significatif par rapport au témoin (analyse
ANOVA suivi de Dunnett’s test).
Figure 3- 48: Effet de DECFEU, MeOH (K) et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris
induit par l’injection de la carragénine.
La Figure 3- 48 montre l’évolution de l’œdème (mL) en fonction du temps (h) de DECFEU,

MeOH (K) et l’AAS. L’effet anti-œdémateux des extraits (DECFEU et MeOH K) et l’AAS
est plus accentué à la 1ère et à la 5ème heure comparés au témoin.
139
Tableau 3- 2 : Effet anti-inflammatoire du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH K)
des feuilles de P. erinaceus
Doses (mg/kg p.c) Pourcentage d’inhibition (%)

1H 3H 5H
Décocté 200 15.0 23.3 22.6
400 30.0 53.3 62.3
600 52.5 56.7 67.7
Extrait MeOH K 100 14.3 13.8 16.1

200 38.1 51.7 58.1
400 47.6 55.2 77.4
Les résultats présentés dans le Tableau 3- 2 montrent que le décocté et l’extrait méthanolique
des feuilles ont un pouvoir anti-inflammatoire. L’effet d’inhibition des deux extraits est dose-
dépendant vis-à-vis de l’oedème. L’inhibition exercée par l’extrait MeOH (K) a été plus
efficace que celle du décocté (Tableau 3- 2). La forte inhibition (77.4 %) a été observée avec
l’extrait méthanolique à la dose de 400 mg/kg à la cinquième heure.
- Ecorces de racine de P. erinaceus
Le décocté des écorces de racines (DECRA) aux doses de 200, 400 et 600 mg/kg, a été utilisé
pour évaluer l’effet anti-inflammatoire. Les résultats sont consignés sur la Figure 3- 49 et
dans le Tableau 3- 3.
140
0,35
0,3
Volume d'œdème (mL)
0,25 ***
***
0,2
***
0,15 * ***
* ***
0,1 ***
***
0,05
0
1h 3h 5h
Temps (h)
Témoin DECRA 200 mg/kg DECRA 400 mg/kg AAS 150 mg/kg
n = 6. * : P< 0.05, ** : P< 0.01, *** : P< 0.001 est considéré significatif par rapport au témoin (analyse
Figure 3- 49: Effet de DECRA et d’AAS sur l’œdème de la patte de souris induit par
l’injection de la carragénine.
La Figure 3- 49 présente des courbes représentant l’évolution de l’œdème, ont la même

allure. En effet à la 1ère et à la 5ème heure le DECRA et l’AAS sont plus efficace. L’AAS s’est
montré plus active sur l’œdème que le DECRA.
Tableau 3- 3 : Effet anti-inflammatoire du décocté des écorces de racines de P. erinaceus et

de l’acide acétylsalicylique (AAS).
Doses (mg/kg p.c) Pourcentage d’inhibition (%)

1H 3H 5H
Décocté 200 25.0 20.0 25.8
400 30.0 33.3 48.4
600 50.0 40.0 61.3
AAS 50 14.3 20.0 25.0

100 33.3 25.0 39.3
150 52.4 41.7 50.0
L’œdème induit par l’injection de la carragénine a été réduite à toutes les étapes par le décocté
des écorces de racines et par l’acide acétylsalicylique (AAS) de manière dose-dépendante.
L’inhibition du décocté a été plus significative à la cinquième heure après l’administration de
141
la carragénine. Ainsi à la dose de 600 mg/kg le décocté a réduit l’œdème aux pourcentages de
50.0 et 61.3 % respectivement à la première et cinquième heure (Tableau 3- 3). L’AAS a
présenté une inhibition plus efficace que le décocté.
3.2.2.2.Test anti-œdémateux à l’huile de croton

 Ecorces de tronc de P. erinaceus
Le décocté (DECEC), l’extrait méthanolique (MeOH B), l’extrait dichlorométhane (DCM A)

et les composés isolés (friedeline (PE.1), lupéol (PE.2) et épicatechine (PE.3)) ont présenté un
effet anti-inflammatoire local. Les résultats sont consignés sur la Figure 3- 50.
Poids de l'oedème (mg)
10
8 8
6 6
4 4
2
2
0
0
e
lle
e
lle
e
n
ill
ill
ill
oi
e
lle
lle
e
n
ei
ei
e
re
re
e
ill
ill
ill
oi
m
ill
ei
ei
or
r
r
re
re
re
m
o
/o
/o
/o
re
Té
or
/
/o
/o
ne g/o
g/
Té
/o
µg
µg
µg
µg
µg
µg
µg
µg
0µ
µg
µ
0
50
10
75
0
0
0
10
10
20
30
50
30
50
10
DCM (A)
ol
lin
hi
pe
dr
DECEC MeOH (B)

de
ec
hy
Lu
at
ie
ic
Fr
ep
Figure 3- 50: Effet de DCM (A), DECEC, MeOH (B), friedeline (PE.1), lupeol (PE.2) et
épicatechine (PE.3) et hydrocortisone sur l’œdème de l’oreille induit par l’huile de croton
L’œdème local induit par l’application de l’huile de croton a été réduit par le décocté, l’extrait
MeOH (B), l’extrait DCM (A), les composés isolés (friedeline (PE.1), lupéol (PE.2) et
épicatéchine (PE.3)) et la substance de référence (hydrocortisone) à différentes doses (Figure
3- 50). Nous avons utilisé deux témoins différents (DCM et 42% EtOH) pour des raisons de
solubilité des extraits. L’extrait DCM (A) et les composés apolaires isolés ont été plus actifs
par rapport aux extraits polaires. A 100 µg/oreille, l’extrait DCM (A) a présenté une inhibition
(69.8 %) supérieure comparativement à l’hydrocortisone (50.9 %). La forte inhibition
observée reste celle de l’extrait DCM (A) 91.7 % à 200 µg/oreille. La friedeline (48.2 %) et le
142
lupéol (61.1 %) ont été plus efficaces que l’épicatechine qui a montré une faible activité (16.9
%).
 Ecorces des racines de P. erinaceus
L’extrait dichlorométhane (DCM E) des écorces des racines a été utilisé pour déterminer
l’effet anti-inflammatoire local des écorces de racines. Les résultats sont représentés par la
Figure 3- 51.
15
10
0
µg ille
µg ille
Té e
µg ille
µg oin
µg oin
µg ille
e
ill
ill
e
re
re
10 ém
50 m
20 /or
30 /or
10 /or
20 /or
/o
/o
T
0
0
Z
Z
H
H
P
DCM (E) Phénylbutazone
Figure 3- 51: Effet de DCM (E) et de la phénylbutazone sur l’œdème de l’oreille induit par
l’huile de croton
L’inflammation locale induite a été réduite de manière dose-dépendante par l’extrait DCM (E)
des écorces de racines (Figure 3- 51). La phénylbutazone (76.5 %) utilisée comme substance
de référence a été deux fois plus efficace que l’extrait DCM (E) à la dose de 200 µg/oreille.
143
3.2.3. Effets analgésiques
3.2.3.1.Test à l’acide acétique

 Ecorces du tronc P. erinaceus
Les résultats de l’effet analgésique du décocté et de l’extrait méthanolique sont consignés

Tableau 3- 4: Effet analgésique du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B) des
écorces du tronc
Extrait Doses (mg/kg p.c) Nombre de Pourcentage

contorsions d’inhibition(%)
Témoin --- 67.5 ± 3.05 ---
Décocté 200 35.2 ± 1.2*** 50.1

400 23.3 ± 2.0*** 66.5
600 15.8 ± 1.7*** 76.5
Témoin --- 66.2± 2.0 ---
Extrait MeOH B 100 40.5 ± 1.8*** 38.8

200 20.2 ± 2.0*** 69.5
400 17.0 ± 3.0*** 74.3
Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type (n = 6). *** : P< 0,001 est considéré significatif par rapport
au témoin (analyse ANOVA suivi de Dunnett’s test).
L’effet analgésique du décocté (DECEC) et de l’extrait MeOH (B) des écorces de tronc a
réduit le nombre de contorsions de manière dose-dépendante. L’effet analgésique de l’extrait
MeOH (B) est plus efficace que celui du décocté. Ainsi à 400 mg/kg, le décocté (DECEC) et
l’extrait MeOH (B) ont respectivement réduit les contractions abdominales aux pourcentages
de 66.5 et 74.3 % (Tableau 3- 4).
 Feuilles de P. erinaceus
Le Tableau 3- 5 présente les résultats de l’effet analgésique de l’extrait méthanolique (MeOH

K) et du décocté des feuilles.
144
Tableau 3- 5 : Effet analgésique de l’extrait méthanolique (MeOH K) et du décocté des
feuilles

contorsions d’inhibition(%)
Témoin --- 66.2 ± 2.0 ---
Décocté 200 34.5 ± 1.8*** 47.9

400 25.3 ± 3.0*** 61.7
600 21.2 ± 2.0** 68.0
Extrait MeOH K 100 45.5 ± 1.8*** 31.2

200 26.2 ± 2.0*** 60.5
400 21.0 ± 3.0*** 68.3
Après l’injection de l’acide acétique (0.6 %) au lot témoin, le nombre de contorsions a été
compté. L’administration orale du décocté et de l’extrait MeOH (K) des feuilles de P.
erinaceus a réduit significativement (P< 0.001) le nombre de contorsions de manière dose-
dépendante. Les résultats dans le Tableau 3- 5 montrent que l’extrait MeOH (K) est plus
efficace que le décocté. En effet, l’extrait MeOH (K) (400 mg/kg) et le décocté (600 mg/kg)
ont présenté le même pouvoir analgésique (68 %).
 Ecorces de racines de P. erinaceus
Le décocté des écorces de racines a présenté un effet analgésique. Les résultats sont consignés
Tableau 3- 6 : Effet analgésique du décocté des écorces de racines et du paracétamol

contorsions d’inhibition (%)
Témoin --- 66.17 ± 2 ---
Décocté 200 34.7 ± 2*** 47.6

400 23.67 ± 3*** 64.2
600 17.67 ± 2*** 73.3
Paracétamol 50 40.17 ± 2*** 39.3

100 34.83 ± 1*** 47.4
200 17.5 ± 2*** 73.6
145
Le décocté et le paracétamol ont réduit significativement (P< 0.001) le nombre de contorsions
abdominales induits par l’injection de l’acide acétique. L’inhibition a été produite de manière
dose-dépendante. Le produit de référence (paracétamol) reste plus efficace. Mais à la dose de
600 mg/kg, le décocté a présenté le même effet analgésique (73 %) que le paracétamol à 200
mg/kg.
 Etude comparée de l’effet analgésique

La Figure 3- 52 montre l’effet analgésique comparé de DECEC, MeOH (B), DECFEU,
MeOH K, DECRA et de paracétamol (PARA).
Effet analgésique
30
Nombre de contorsions
25
20
15
10
DECEC 400 mg/kg MeOH B 400 mg/kg DECFEU 400 mg/kg

MeOH K 400 mg/kg DECRA 400 mg/kg PARA 200 mg/kg
Figure 3- 52: Effet de DECEC, MeOH (B), DECFEU, MeOH K, DECRA et de paracétamol
(PARA) sur le nombre de contorsions induit par l’injection de l’acide acétique
A la dose de 400 mg/kg de p.c, le MeOH (B) présente l’effet analgésique le plus efficace. A
cette même dose, il est plus actif que le paracétamol à 200 mg/kg de p.c. Parmi les décoctés,
le DECFEU présente un effet analgésique moindre comparé à DECEC et DECRA (Figure 3-
47).
3.2.3.2.Test au formaldéhyde
L’effet analgésique provoqué par les différentes doses des décoctés des écorces de tronc
(DECEC), des feuilles (DECFEU) et des écorces de racines (DECRA) comparativement aux
témoins de références (morphine et paracétamol) est représenté par Figure 3- 53.
146
Phase 1 (0 - 5 min) 200 Phase 2 (15 - 30 min)
Temps (s) de léchage

150
150
100
100
50 50
0 0
ce ne
IN
ol
0 m /kg
60 mg g
0 m /kg
g
60 mg g
0 m /kg
Pa orp /kg
IN
ol
0 m /kg
60 mg g
0 m /kg
kg
60 mg g
0 /kg
Pa r p k g
ce e
0 /k
g/k
0 /k
0 /k
0 /k
tam
ra hin
m
10 MO
10 MO
r a hi
g/
Mo mg/
20 mg
40 g
40 g
M g
20 mg
40 g
40 g
ta
0m
0m
TE
TE
0
0
20
20
DECRA DECFEU DECRA DECFEU
150 Phase 1(0-5 min) Phase 2 (15-30 min)

100
50
0
0 IN
0 IN
0 kg
0 kg
kg
0 kg
0 kg
kg
20 MO
20 MO
40 g /
60 g /
g/
40 g /
60 g /
g/
m
m
TE
TE
DECEC
Figure 3- 53: Effet analgésique (test à la solution de formaldéhyde) des décoctés des écorces
de tronc (DECEC), feuilles (DECFEU) et des écorces de racines (DECRA)
Les deux phases de la réaction ont été réduites par les décoctés (DECEC, DECFEU,
DECRA), le paracétamol et la morphine à différentes doses. Cependant, les décoctés et le
paracétamol ont présenté une inhibition plus efficace à la deuxième phase. Ainsi, à la dose de
600 mg/kg, le décocté de tronc (DECEC) et le décocté des feuilles (DECFEU) ont provoqué
respectivement un pourcentage d’inhibition de 36.6 et 54.1 % (première phase) et 55.7 et 61.3
% (deuxième phase). D’une manière générale l’inhibition des extraits est dose-dépendante. La
morphine (5 mg/kg), le paracétamol (300 mg/kg), le DECFEU (600 mg/kg) et le DECRA
147
(600 mg/kg) ont présenté sensiblement le même pouvoir inhibiteur de la douleur à la seconde
phase (Figure 3- 53).
3.2.4. Effet antipyrétique
Les résultats de l’effet antipyrétique des décoctés issus des écorces de tronc, des feuilles et
des écorces de racines sont consignés dans le Tableau 3- 7.
Tableau 3- 7 : Pourcentage d’inhibition des décoctés des écorces de tronc (DECEC), feuilles
(DECFEU) et des écorces de racines (DECRA)
Extrait et dose Pourcentage d’inhibition (%)

(mg/kg) 1H 2H 3H 4H 5H
Décocté des écorces de
tronc
200 15.3 17.6 21.2 38.8 58.8
400 27.9 35.4 53.2 65.8 68.4
Décocté des feuilles

200 4.3 11.4 18.6 22.9 40.4
400 15.7 33.7 60.2 78.3 84.3
600 26.4 40.3 65.3 100 100
Décocté des écorces de

racines
200 8.5 14.6 26.8 36.6 48.8
400 21.5 40.5 60.0 62.0 65.8
Paracétamol
100 44.7 43.5 48.2 52.9 68.2
148
Effet antipyrétique
38,5
38
Température rectale (°C)
TempératuCCre (°C)
37,5
37
36,5
36
T -17h T0h T1h T2h T3h T4h T5h
Témoin DECEC 400 mg/kg DECFEU 400 mg/kg

DECRA 400 mg/kg Paracétamol 100 mg/kg
Figure 3- 54 : Evolution de la température rectale en fonction du temps des décoctés des

écorces (DECEC), des feuilles (DECFEU) et des racines (DECRA)
L’étude de l’effet antipyrétique des décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) a montré que la
baisse de température est remarquable à partir de la deuxième heure après administration des
extraits et du paracétamol. En effet à la dose de 400 mg/kg l’activité des différents décoctés
présente la même allure de réduction de température (Figure 3- 54). A 400 mg/kg, le décocté
des feuilles (DECFEU) a présenté la meilleure réduction de la température comparativement
aux décoctés (DECEC, DECRA). A la dose de 600 mg/kg, le décocté des feuilles (DECFEU)
a inhibée totalement l’hyperthermie à partir de la 4ème heure après l’injection de la levure de
bière (Tableau 3- 7).
149
3.2.5.Effet inhibiteur de tumor necrosis factor alpha (TNF α) et de Nitrites
3.2.5.1.TNF α
La production de TNF α par les macrophages cultivés a été induite par l’ajout dans le milieu
de culture de LPS (lipopolysaccharide) ou de LPS/IFN (lipopolysaccharide/interféron). La
teneur de TNF α a été mesurée en utilisant le test ELISA. L’effet inhibiteur des différents
extraits testés a été représenté par des histogrammes dans la Figure 3- 55.
TNF α par les cellules RAW 264.7 (ng/mL)

40
35
TNF α(ng/mL)
30
25
20
15
10
5
0
RAW MeOH K MeOH K MeOH F MeOH F AcOEt G AcOEt G MeOH B MeOH B BuOH H BuOH H
CELL 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50
MIL LPS LPS + IFN
Figure 3- 55: Effet inhibiteur des extraits sur la production de TNF α
MeOH B : extrait méthanolique des écorces du tronc ; MeOH K : extrait méthanolique des feuilles ; MeOH F :
extrait méthanolique des écorces des racines ; AcOEt G : phase acétate d’éthyle ; BuOH H : phase butanolique ;
25 : 25 µg/mL ; 50 : 50 µg/mL ; MIL : milieu ; LPS : lipopolysaccharide ; IFN : interféron gamma
La quantité de TNF α produite par les macrophages suite à la stimulation de LPS ou LPS/IFN
a permis d’évaluer l’effet inhibiteur des extraits suivants : l’extrait MeOH (K), l’extrait
MeOH (F), la phase AcOEt (G), l’extrait MeOH (B), la phase BuOH (H). Les résultats
montrent que la teneur de TNF α induite par LPS/ IFN est supérieure à celle induite par LPS
seule. Sur le TNF induite par LPS, seul l’extrait MeOH (K) a présenté un effet inhibiteur
remarquable ; la phase AcOEt (G) a présenté un effet inhibiteur moindre par rapport à celui de
l’extrait MeOH (K).
150
La teneur de TNF α induite par LPS/IFN a été réduite par l’extrait MeOH (K), la phase
AcOEt (G) aux concentrations de 25 et 50 µg/mL. La phase BuOH (H) a réduit la production
de la cytokine à 50 µg/mL (Figure 3- 55).
3.2.5.2.Nitrites
L’ajout dans le milieu de culture de macrophages, de LPS ou de LPS/IFN a provoqué la
production de nitrites. La Figure 3- 56 représente l’effet inhibiteur induit par les différents
extraits testés sur la production de nitrite.
50
45
NITRITES par les cellules RAW 264.7 (µM)
40
35
Nitrites (µM)
30
25
20
15
10
5
0
RAW S. BIRREA MeOH K MeOH K FLAV L 25 FLAV 50 DECFEU DECFEU DECEC 25 DECEC 50
CELLS 25 50 25 50
Mil LPS LPS+IFN
Figure 3- 56: Effet inhibiteur des extraits sur la production de nitrite
DECEC : décocté des écorces de tronc ; DECFEU : décocté des feuilles ; MeOH K : extrait méthanolique des
feuilles ; FLAVO L : fraction flavonoïdique ; 25 : 25 µg/mL ; 50 : 50 µg/mL ; MIL : milieu ; LPS :
lipopolysaccharide ; IFN : interféron gamma ; S.BIRREA : Sclerocarya. birrea
Les résultats montrent que LPS/IFN induit plus de nitrite que LPS. La production de nitrite
induite par LPS ou LPS/IFN a été réduite par l’extrait MeOH (K) et la fraction flavonoïdique
(FLAV L) aux concentrations de 25 et 50 µg/mL. L’extrait MeOH (K) a présenté un effet
inhibiteur efficace par rapport à l’extrait méthanolique de Sclerocarya. birrea (A. Rich.)
Hochst. (Anacardiaceae) (25 µg/ml) utilisé comme témoin (Figure 3- 56). Le décocté des
écorces de tronc (DECEC) a présenté une faible inhibition sur la production de nitrite induite
par LPS/IFN, par contre le décocté des feuilles (DECFEU) n’a présenté aucun effet inhibiteur.
151
3.2.6. Effet antioxydant
L’effet antioxydant des différents extraits et fractions a été déterminé en utilisant la méthode
au DPPH et la méthode de CUPRAC. Dans la méthode au DPPH, l’effet antioxydant est
apprécié en considérant le pouvoir antiradicalaire (ARP = antiradical power) ; la valeur de
TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity) permet d’apprécier la capacité antioxydante
d’une substance dans la méthode de CUPRAC.
 Ecorce de tronc de P. erinaceus
Le Tableau 3- 8 représente le pouvoir antiradicalaire et la capacité antioxydante du décocté,

de l’extrait MeOH (B), des phases DCM (C) et AoCEt (D) et deux produits de référence
(trolox et acide chlorogénique).
Tableau 3- 8 : Effet antioxydant du décocté, de l’extrait MeOH (B), des phases DCM (C) et
AoCEt (D), du trolox et de l’acide chlorogénique
Echantillon DPPH CUPRAC

IC50 ARP E% TEAC
Décocté 0.30 ± 0.01 3.7 0.075 ± 0.008 0.8
Extrait MeOH B 0.20 ± 0.02 5 0.090 ± 0.005 09
Phase DCM C 0.50 ± 0.04 2 nd nd
Phase AoCEt D 0.30 ± 0.05 3.6 nd nd
Trolox 0.20 ± 0.01 4.8 0.100 ± 0.001 1.0
Ac. Chlorogénique 0.30 ± 0.03 3.7 nd nd

ARP: antiradical power; TEAC: trolox equivalent antioxidant capacity; nd : non déterminée
Le décocté et l’acide chlorogénique ont présenté le même pouvoir anti-radicalaire. L’extrait

MeOH (B) a donné le meilleur effet anti-radicalaire comparé au trolox et aux autres
échantillons. L’ARP de la phase AoCEt (D) est supérieur à celui de la phase DCM (C). Les
valeurs de TEAC du décocté (0.8) et de l’extrait MeOH (B) (0.9) sont intéressantes par
rapport à celle du trolox.
152
 Feuilles de P. erinaceus
Les résultats du pouvoir anti-radicalaire et de la capacité antioxydante du décocté, de l’extrait

MeOH (K) et de la fraction flavonoïdique (FLAVO L) sont consignés dans le Tableau 3- 9.
Tableau 3- 9 : Effet antioxydant du décocté, de l’extrait MeOH (K) et de la fraction
flavonoïdique (FLAVO L)

IC50 ARP E% TEAC
Décocté 0.8 ± 0.04 1.3 0.07 ± 0.007 0.7
Extrait MeOH K 1.1 ± 0.03 0.9 0.06 ± 0.005 0.6
FLAVO L 0.8 ± 0.02 1.3 0.055 ± 0.007 0.6
Rutine nd nd 0.29 ± 0.004 2.9

ARP: antiradical power; TEAC: trolox equivalent antioxidant capacity. nd : non déterminée
Le décocté et la fraction flavonoïdique ont présenté sensiblement le même pouvoir anti-

radicalaire. L’ARP de l’extrait MeOH (K) a été moindre comparativement au décocté et à la
fraction flavonoïdique. Les valeurs de TEAC du décocté (0.7), de l’extrait MeOH (K) (0.6) et
de la fraction flavonoïdique (0.6) ont permis de montrer que ces extraits possèdent un
pouvoir antioxydant mais moins prononcé que la rutine (2.9).
 Ecorces de racines de P. erinaceus
Le Tableau 3- 10 présente les résultats de l’activité antioxydante de l’extrait MeOH (F), des
phases AcOEt (G) et BuOH (H) exprimée en ARP avec la méthode au DPPH et en TEAC
avec la méthode CUPRAC.
Tableau 3- 10 : Effet antioxydant de l’extrait MeOH (F), des phases AcOEt (G) et BuOH (H)

IC50 ARP E% TEAC
Extrait MeOH F 0.5 ± 0.05 2.0 0.08 ± 0.002 0.8
Phase AcOEt G 0.5 ± 0.04 2 0.09 ± 0.004 0.9
Phase BuOH H 0.5 ± 0.01 2.0 0.10 ± 0.003 1

ARP: antiradical power; TEAC: trolox equivalent antioxidant capacity
153
Le pouvoir anti-radicalaire de l’extrait MeOH (F) a été le même que celui de la phase AcOEt
(G) et de la phase BuOH (H). L’extrait MeOH (F) et la phase AcOEt (G) ont donné une
capacité antioxydante remarquable avec des TEAC de 0.8 et 0.9 respectivement. La capacité
antioxydante de la phase BuOH (H) a été égale à celle du trolox (Tableau 3- 10).
Conclusion partielle
Au niveau de la méthode au DPPH, l’extrait MeOH (B) des écorces de tronc a présenté
l’activité antiradicalaire la plus importante (ARP = 5) suivi du décocté (DECEC) (ARP = 3.7).
Avec la méthode de CUPRAC, la meilleure activité a été celle de la phase BuOH (H) avec
TEAC = 1.
3.2.7.Effet inhibiteur de la peroxydation lipidique et de la lipoxygénase

Le Tableau 3- 11 présente l’effet inhibiteur de DECEC, DECFEU, DECRA, MeOH (B),
MeOH (K), MeOH F, FLAVO L et DCM E sur la peroxydation lipidique et la lipoxygénase.
Tableau 3- 11 : Effet inhibiteur des extraits sur la peroxydation lipidique et l’activité de la

lipoxygénase
Echantillon Inhibition(%)/Peroxydation Inhibition(%)/5-

lipidique lipoxygénase
DECEC 35.6 ± 1.5 61.9 ± 2
DECRA 30.4 ± 1 42.3 ± 0.4
DECFEU 31.0 ± 0.6 58.1 ± 1
MeOH B 37.3 ± 0.6 97.7 ± 0.5
MeOH K 35.6 ± 1 28.1 ± 0.7
FLAVO L 28.0 ± 1 16.3 ± 1
MeOH F 30.7 ± 0.5 45.1 ± 3
DCM E nd 54.2 ± 0.7
Quercétine 37.4 ±1 nd
SOLUMEDROL nd 21.5 ± 3
HYDROCORTISONE nd 42.1 ± 1
nd : non déterminée. DECEC : décocté des écorces de tronc ; DECFEU : décocté des feuilles ; DECRA : décocté
des écorces de racines ; MeOH B : extrait méthanolique des écorces du tronc ; MeOH K : extrait méthanolique
des feuilles ; FLAVO L : fraction flavonoïdique ; MeOH F : extrait méthanolique des écorces des racines ; DCM
E : extrait dichlorométhane des écorces des racines.
154
L’effet inhibiteur sur la peroxydation lipidique des extraits a été évalué à une concentration
unique (150 µg/mL). Les pourcentages d’inhibition oscillent entre 37.3 et 28.0 % ; l’extrait
MeOH (B) a présenté le meilleur effet tandis que le faible effet a été présenté par la fraction
flavonoïdique (FLAVO L). La quercétine utilisée comme produit de référence a présenté une
inhibition de 37.4 % à la concentration de 150 µg/mL.
L’effet des extraits sur l’activité enzymatique de la lipoxygénase a été déterminé à la
concentration de 100 µg/mL. Les valeurs d’inhibition varient entre 97.7 et 16.3 %. La forte
inhibition (97.7 %) a été obtenue avec l’extrait MeOH (B) et la faible inhibition (16.3 %)
avec la fraction flavonoïdique (FLAVO L). Les pourcentages d’inhibition du solu-medrol et
de l’hydrocortisone ont été respectivement de 21.5 et 42.1 %.
155
3.3.Discussions
3.3.1.Etude phytochimique
L’étude phytochimique a permis d’isoler et d’identifier 18 composés de P. erinaceus. La

friedeline (PE.1), le lupeol (PE.2) et l’épicatechine (PE.3) sont issus des écorces du tronc ; le
stigmastérol (PE.9), la friedeline (PE.6), le 3α-hydroxyfriedelan-2-one (PE.7), l’α-
sophoradiol (PE.8), le maltol 6-O-apiofuranoside-glucopyranoside (PE.11) et les composés
non identifiés PE.4, PE.5, PE.10, PE.12 ont été isolés des écorces de racines de P. erinaceus.
L’étude a permis de purifier au niveau des feuilles la rutine (PE.18), la lutéoline (PE.14), la
quercétine-3-O-sophoroside (PE.15), le kaempferol-3-O-sophoroside (PE.17), la quercétine-
3-O-β-glucose (PE.16) et le composé PE.13. Hormis le lupeol et l’épicatechine qui ont été
isolés respectivement des espèces P. santalinus et P. marsupium (Kumar et al., 1975 ;
Farboodnlay et Ray,1993), aucune étude antérieure n’a rapporté l’isolement et l’identification
de ces molécules du genre Pterocarpus et de l’espèce P. erinaceus.
Parmi les isoflavones (la muningine, la prunetine, la pseudobaptigenine, la tectorigenine,
l’afromosine) isolés de P. erinaceus par Bevan et al. (1965), aucun n’a été retrouvé au cours
de nos travaux. Ceci s’explique par le fait que les parties de la plante étudiées sont différentes.
En effet les isoflavones ont été purifiés du cœur de bois tandis que nous avons menés nos
travaux sur les écorces de tronc, les feuilles et les écorces de racines de P. erinaceus.
Ces résultats contribuent à enrichir le répertoire des métabolites secondaires du genre
Pterocarpus de types triterpénique et flavonoïdique, et ces derniers pourront servir de
complément à une étude plus approfondie de la chimiotaxonomie du genre Pterocarpus. C’est
la première fois que le maltol 6’-O--apiofuranoside--glucopyranoside est identifié et isolé
au sein des Fabaceae. Il a été isolé et identifié de l’extrait hydro-acétonique de Elsholtzia
rugulosa Hemsl. (Labiatae) pour la première fois par Haizhou et al. (2008). Les flavonoïdes
isolés sont ubiquitaires dans la famille des Fabaceae. En effet l’épicatechine a été isolé
d’Eysenhardtia subcoriacea Pennell par Mastache et al. (2008). La rutine et l’isoquercitrine
ont été isolés de Styphnolobium japonicum (L.) Schott et de Pterogyne nitens Tulasne
(Regasini et al., 2008; Kite et al., 2009). La lutéoline a été isolée de Senna alata (L.) Roxb.
par Hennebelle et al. ( 2009).
156
3.3.2.Etude biologique
3.3.2.1.Toxicité générale aiguë

 Voie orale
La détermination de la dose létale 50 (DL50) d’une drogue permet d’évaluer son niveau de
toxicité aiguë selon une échelle de toxicité de Hodge et Sterner (1943) et celle de l’OMS
(2002). Après deux semaines d’observation aux doses de 500, 1000, 1500, 2000 et 2500
mg/kg de poids corporel, aucune souris n’est morte. Ainsi avec une DL50 limite supérieure à
2500 mg/kg, selon l’échelle de toxicité, les décoctés issus des feuilles (DECFEU), d’écorces
de tronc (DECEC), d’écorces de racines (DECRA) et les extraits méthanoliques des feuilles
(MeOH K), d’écorces du tronc (MeOH B) sont considérés comme des substances faiblement
toxiques.
 Voie intra-péritonéale
Concernant l’administration par voie intrapéritonéale, les souris ont toléré l’extrait
méthanolique d’écorces de tronc (MeOH B) jusqu’à la dose de 1500 mg/kg de poids corporel.
La DL50 limite étant supérieure à 1500 mg/kg, l’extrait méthanolique d’écorces de tronc
(MeOH B) de P. erinaceus est donc considéré comme un produit faiblement toxique selon
l’échelle de toxicité.
3.3.2.2.Activités anti-inflammatoires
 Test anti-œdémateux à la carragénine
L’œdème induit au niveau de la patte par l’injection de la carragénine est un modèle animal
largement utilisé pour évaluer l’activité anti-inflammatoire des drogues. L’injection de la
carragénine provoque la libération de plusieurs médiateurs chimiques endogènes qui sont
responsables du processus inflammatoire. La manifestation de l’inflammation bi-phasique est
due à la libération des différents médiateurs endogènes. La phase initiale qui dure environ
1h30est due à la libération de l’histamine, de la sérotonine et de la bradykinine qui sont
responsables de l’augmentation de la perméabilité vasculaire. La biosynthèse des
prostaglandines et la formations des protéases et les lysosomes sont responsables de la
seconde et dernière phase qui intervient après la phase initiale (Santa et al., 2011, Vanderlinde
et al., 2009). La prostaglandine PGE2 reste la prostaglandine majoritaire au cours de
157
l’inflammation et induit l’œdème et l’hyperalgésie (Hata et Breyer, 2004 ; Simmons et al.,
2004).
Les décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et les extraits méthanoliques (MeOH B, MeOH
K) ont inhibé les deux phases de l’inflammation provoquée par l’injection de la carragénine.
Ainsi les extraits pourraient avoir une action antagoniste à la libération de l’histamine, de la
bradykinine, de la sérotonine et de la biosynthèse des prostaglandines. L’effet anti-
inflammatoire pourrait être dû aussi au blocage des récepteurs de ces différents médiateurs
endogènes. La forte inhibition de l’œdème a été observée à la 5ème heure pour les extraits
administrés oralement. Ceci suggère que l’action inhibitrice des extraits s’exercerait
davantage sur les cyclo-oxygénases (COX 1 et COX 2) qui sont responsables de la
biosynthèse des prostaglandines. L’œdème induit par la carragénine est sensible aux
inhibiteurs des cyclo-oxygénase (COX) et aux inhibiteurs de la lipoxygénase (Dhara et al.,
2000). Ceci suggère que l’effet anti-œdémateux des extraits pourrait être dû en partie à
l’inhibition de la lipoxygénase. La réduction de l’œdème au delà de la troisième heure après
l’administration de la carragénine corrèle raisonnablement avec les doses thérapeutiques de la
majorité des agents anti-inflammatoires cliniquement efficaces (Woldesellassie et al., 2011).
L’extrait méthanolique des feuilles (MeOH K) a présenté la meilleure inhibition (77.4 %) à la
dose de 400 mg/kg. Cependant l’administration intrapéritonéale de l’extrait méthanolique
(MeOH B) des écorces de tronc agirait plus sur la libération de l’histamine et la sérotonine
parce qu’il a présenté une forte inhibition à la première heure. Cette remarque est similaire
aux travaux de Mota et al. (1985) qui ont rapporté que l’effet pharmacologique de
l’administration i.p. de la fraction de tanins d’Anacardium occidentale L. (Anacardiaceae) a
été plus efficace comparé à la voie orale. En effet la voie digestive peut jouer un rôle de
barrière au passage des substances bioactives tandis que la voie i.p. offre une large
biodisponibilité aux substances bioactives.
L’activité intrinsèque des composants chimiques bioactifs et de leurs quantités sont
responsables de l’effet anti-inflammatoire des extraits. Nos travaux antérieurs (Noufou, 2006)
ont révélé la présence de tanins, de saponosides, de flavonoïdes et de triterpènes/stéroïdes
dans le décocté et l’extrait méthanolique des écorces de tronc. Plusieurs auteurs ont montré la
propriété anti-inflammatoire de ces composés (Wang et al., 2008 ; Wenzig et al., 2008). Le
criblage phytochimique a permis de caractériser les principaux groupes chimiques (les
flavonoïdes, les tanins et polyphénols, les saponosides et les triterpènes et stéroïdes) qui
pourraient être responsables des propriétés des décoctés des feuilles et d’écorces de racines de
P. erinaceus. Sulaiman et al. (2008) et Ijoema et al. (2011) ont rapporté que les flavonoïdes,
158
les tanins, les saponosides et les triterpènes/stéroïdes sont responsables de l’effet anti-
inflammatoire de l’extrait éthanolique et de Kaempferia galanga Linn. (Zingiberaceae) et de
l’extrait aqueux d’Ipomoea involucrata Beauv P. (Convolvulaceae).
L’extrait méthanolique (MeOH K) qui a présenté la forte activité (77.4 % à 400 mg/kg) a été
fractionné en phases DCM, AcOEt, BuOH et aqueuse. L’analyse par CLHP analytique de
l’extrait MeOH (K) et de ses fractions a permis de caractériser des flavonoïdes dont la rutine,
la quercétine-3-glucoside, la lutéoline, la quercétine-3-sophoroside, le kaempferol-3-
sophoroside ont été isolés lors de l’étude phytochimique. Les flavonoïdes sont connus pour
leur effet anti-inflammatoire (Bruneton, 2009 ; Zainul et al., 2008). Les propriétés anti-
inflammatoire, anti-cancérogène et antioxydant de la lutéoline ont été rapportées (Seelinger et
al., 2008). Rotelli et al. (2003) ont montré que la quercétine et la rutine ont réduit l’œdème
induit par la carragénine, mais la rutine a été moins active sur l’œdème induit sur l’oreille de
la souris par le xylène.
 Test anti-œdémateux à l’huile de croton
L’œdème induit par l’application de l’huile de croton sur la face interne de l’oreille de la
souris, est utilisé pour évaluer l’effet anti-inflammatoire local d’une substance. L’œdème
provoqué est dû à la libération d’histamine et de la sérotonine responsables de la
vasodilatation et de l’infiltration des leucocytes (Felipe et al., 2010), et à la production de IL
1β, de TNF α (Towbin et al., 1995). Le TPA (12-o-tetracanoilphorbol-13-acetate) composant
majoritaire de l’huile de croton active la protéine kinase C (PKC) avec la stimulation de la
phospholipase A2 conduisant à la libération de l’acide arachidonique et la biosynthèse des
prostaglandines et des leucotriènes (LT4) ainsi que la libération de TNF α et nuclear factor
kappa B (NF-κB) (Pinto et al., 2010 ; Saraiva et al., 2011 ; Gorzalczany et al., 2011).
Le décocté (DECEC), l’extrait MeOH (B) et l’extrait DCM (A) des écorces de tronc ont
inhibé de manière significative (p < 0.001) l’œdème induit par l’huile de croton. Il est
possible que le mécanisme d’inhibition de l’œdème soit dû au blocage de la libération des
médiateurs endogènes pro-inflammatoires, de IL 1β et de TNF α. L’effet inhibiteur de
l’extrait DCM (A) a été plus intense que celui de DECEC et MeOH (B). Cette différence
d’intensité d’activité s’explique par la composition chimique et la polarité des extraits. La
couche cornée qui constitue la barrière épidermique reste une barrière limitante de caractère
lipophile. Les composés lipophiles pourraient s’y dissoudre et diffuser dans la matrice
lipidique située entre les filaments de kératine et au sein des lipides intercellulaires (Lompo et
159
al., 1998). En effet l’extrait DCM (A) étant apolaire traverse facilement à travers la membrane
plasmique de l’oreille.
L’analyse CCM a permis de révéler la présence des triterpènes et stéroïdes dans l’extrait
DCM (A) dont la friedeline et le lupeol ont été isolés. La friedeline et le lupeol ont contribué à
l’activité de l’extrait DCM (A) avec des pourcentages d’inhibition respectifs de 48.2 et 61.1
%. En effet les effets anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique de la friedeline isolée
d’Azima tetracantha Lam. (Salvadoraceae) ont été rapportés par Paulrayer et al. (2011). Des
études ont rapporté aussi que le lupeol et ses esters isolés du latex de Leptadenia hastata
(Pers.) Decne (Asclepiadaceae) et des fleurs de Calendula officinalis L. (Asteraceae) ont
inhibé l’œdème induit par l’huile de croton (Nikiema et al., 2001 ; Akihisa et al., 1996).
L’effet anti-inflammatoire local de l’extrait DCM (E) des écorces de racines pourrait être lié
à l’inhibition de la biosynthèse des médiateurs pro-inflammatoires endogènes et aux
cytokines (IL 1β, TNF α). La présence des triterpènes/stéroïdes dont la friedeline, le
stigmastérol, le sophoradiol pourrait justifier son effet. Les propriétés anti-inflammatoires et
anticancéreuses de stigmastérol (Lai et al., 2010 ; Quilez et al., 2010 ), de la friedeline
(Tewtrakul et al., 2010) ont déjà été démontrées.
L’extrait DCM (A) a exercé significativement (p < 0.001) la forte activité anti-inflammatoire
locale (97.7 %) avec une dose de 200 µg/oreille. La différence d’efficacité entre les deux
extraits apolaires (DCM A et DCM E) serait liée à leur composition chimique. En effet entre
les deux extraits la friedeline a été le seul composé commun cependant son effet anti-
inflammatoire local a été moindre comparativement à celui du lupeol isolé de DCM (A).
3.3.2.3.Activités analgésiques
 Test à l’acide acétique
L’injection de l’acide acétique provoque une réaction composée de la contraction abdominale

s’accompagnant d’une extension des membres antérieures et l’allongement du corps. Cette
méthode est utilisée pour étudier l’effet analgésique périphérique d’une substance. Les
décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et les extraits méthanoliques (MeOH B, MeOH K)
aux doses testées ont réduit significativement (p < 0.001) le nombre de contorsions
abdominales comparés au témoin.
L’injection de l’acide acétique provoque une douleur inflammatoire viscérale par la
libération de la sérotonine, de l’histamine, de la bradykinine, de la substance P et des
prostaglandines (PGE2α, PGF2α) qui agissent en stimulant les neurones nociceptifs
160
périphériques (Zhu et al., 2011 ; Peerati et al., 2010 ; Yi et al., 2010). Ainsi il est possible que
le mécanisme de l’effet analgésique de ces extraits soit la réduction de la libération de
l’histamine, de la sérotonine et des prostaglandines, soit le blocage direct des récepteurs de
ces médiateurs endogènes. Comme l’injection de l’acide acétique induit également la
production des cytokines (IL 1β, IL 8 et TNF α) (Guginski et al. 2009), l’effet analgésique des
extraits serait lié partiellement à l’inhibition de ces cytokines.
L’effet analgésique des décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) serait à attribuer à la présence
des tanins, des saponosides, des flavonoïdes et des triterpènes/stéroïdes mis en évidence lors
des criblages chimiques. Zeashan et al. (2009) ont rapporté que les tanins, les saponosides, les
flavonoïdes et les triterpènes/stéroïdes possèdent des effets anti-inflammatoires et
analgésiques. L’action synergique de ces différents composés chimiques pourrait être
responsable des propriétés analgésique et anti-inflammatoire des extraits. La présence de
tanins et de flavonoïdes identifiés lors de l’étude phytochimique de l’extrait MeOH (B)
contribuerait à son effet analgésique.
On observe que les doses anti-inflammatoires des décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et
des extraits méthanoliques (MeOH B, MeOH K) sont supérieure à celles analgésiques. Ces
extraits se comportent ainsi comme les AINS dont les doses analgésiques restent faibles
comparativement à celles de l’anti-inflammatoire (Balou, 2005).
 Test au Formaldéhyde
En plus du test à l’acide acétique, le test au formaldéhyde est utilisé pour investiguer le
mécanisme de l’effet analgésique des extraits utilisés : décocté des écorces de tronc
(DECEC), décocté des feuilles (DECFEU) et le décocté des écorces de racines (DECRA) de
P. erinaceus. Le test se manifeste par une réponse à deux phases sur lesquelles les drogues
analgésiques agissent différemment. La première phase est déclenchée immédiatement après
l’injection de la solution de formaldéhyde et est caractérisée par la stimulation directe des
nocicepteurs (fibres C) et la libération de la substance P et la bradykinine; la seconde phase
est due à la douleur inflammatoire locale causée par la production d’oxyde nitrique, de la
sérotonine, de l’histamine et des prostaglandines (PGE2α, PGF2α) (Nonato et al., 2009 ; Peerati
et al., 2010, Shang et al., 2010).
Les résultats obtenus (Figure 3- 53) montrent que les décoctés inhibent toutes les deux phases
avec un effet plus élevé dans la seconde phase. Ceci corrobore avec leurs effets anti-
inflammatoires constatés au niveau du test à la carragénine. En effet l’effet analgésique
161
pourrait être lié à l’inhibition de la biosynthèse des prostaglandines (PGE2α, PGF2α) et les
autres médiateurs endogènes pro-inflammatoires. L’inhibition de la première phase suggère
que les trois décoctés pourraient avoir un effet analgésique central comparativement au
paracétamol. Les anti-inflammatoires stéroïdiens et non-stéroïdiens ont un effet moindre ou
pas d’effet sur la première phase. Les analgésiques centraux tels que les opioïdes inhibent les
deux phases tandis que l’inhibition de la seconde phase est caractéristique aux inhibiteurs des
cyclo-oxygénases (les anti-inflammatoires non stéroïdiens) (Mino et al., 2004).
Yashpal et Coderre (1998) ont rapporté que la réponse nociceptive et inflammatoire de la
solution de formaldéhyde est relativement affectée par des fortes doses des agents anti-
inflammatoires. Ce fait a été constaté sur les doses analgésiques au test à l’acide acétique
comparées à celles du test au formaldéhyde. Cette différence d’efficacité pourrait être due à
la persistance de la sensibilisation centrale de la solution du formaldéhyde (2.5 %). En effet
l’administration centrale des AINS et des AIS inhibe la nociception induite par la solution de
formaldéhyde (Yashpal et Coderre, 1994).
L’effet analgésique central et anti-inflammatoire des décoctés pourrait être attribué à la
présence de tanins, de flavonoïdes, de saponosides et de triterpènes/stéroïdes révélés dans ces
décoctés. Des études menées par Ahmadiani et al. (1998) ont montré que ces composés sont
responsables des effets inhibiteurs des deux phases du test au formaldéhyde.
3.3.2.4.Activité Antipyrétique
L’hyperthermie induite par l’injection de la suspension de levure de bière (20 %) a été réduite
sous l’effet antipyrétique des décoctés des écorces de tronc (DECEC), des feuilles (DECFEU)
et des écorces de racines (DECRA). L’effet anti-inflammatoire des décoctés permet de
suggérer que l’effet antipyrétique est dû à l’interaction des extraits avec la biosynthèse des
prostaglandines et la formation des cytokines. En effet l’injection de la suspension de levure
de bière induit la libération des cytokines pro-inflammatoires (IL 1β, TNF α) stimulant la
biosynthèse de PGE2 aux environs du centre hypothalamique thermorégulateur (Santos et al.,
2011). Or les prostaglandines (PGE 2) et les cytokines (IL 1β, TNF α) sont des importants
médiateurs responsables de la fièvre, de la formation de l’œdème et de la migration cellulaire
lors de l’inflammation (Kassuya, et al,. 2009).
Des saponosides, des tanins, des flavonoïdes et des triterpènes/stéroïdes ont été caractérisés
dans les décoctés DECEC, DECFEU et DECRA. Plusieurs études ont démontré que l’effet
antipyrétique d’extrait méthanolique des feuilles de Bombax malabaricum DC.
162
(Bombacaceae), d’extrait éthanolique des racines de Laportea crenulatasont Gaud
(Urticaceae) et d’extrait aqueux des feuilles de Prosopis cineraria (L.) Druce (Fabaceae) est
dû à la présence de ces groupes phytochimiques (Lincy et al., 2011 ; Khan et al., 2007 ;
Hossain et al., 2011)
La barrière hémato-encéphalique empêche des molécules de drogue ou d’autres produits
chimiques d’atteindre le système nerveux central (SNC). Il est également indiqué que le
passage d’une drogue à travers la barrière hémato-encéphalique est un des facteurs
contribuant à son activité antipyrétique (Zainul et al., 2008). L’effet antipyrétique des
décoctés pourrait être lié au passage de certains de leurs composés chimiques bioactifs à
travers la barrière hémato-encéphalique et/ou au blocage de synthèse de prostaglandine PGE
2. L’effet antipyrétique des décoctés est comparé à celui du paracétamol dont l’effet
antipyrétique et analgésique est lié à l’inhibition des prostaglandines dans les systèmes
nerveux central et périphérique (Lucas et al., 2005).
Les effets anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique in vivo sont associés aux

paramètres pharmacocinétiques notamment à la biodisponibilité des composés
phytochimiques bioactifs des extraits administrés. Ainsi ces effets pharmacologiques
dépendent de l’absorption à travers la paroi intestinale, le métabolisme et de la distribution
des composés phytochimiques présents dans les différents extraits. En plus le caractère
hydrophile des composés chimiques est un facteur déterminant pour le passage à travers la
paroi intestinale. En effet des études ont montré que les flavonoïdes et les tanins subissent une
métabolisation avant d’être absorbés et les métabolites sont ensuite biotransformés (Loke et
al., 2008 ; Manach et al., 2005).
3.3.2.5.Détermination de la production de TNF α et de NO

 Détermination de TNF α
Le TNF α est une des cytokines importantes qui jouent un rôle crucial dans le processus
inflammatoire, y compris la stimulation de la production de l’oxyde nitrique (NO) qui est lié
au stress oxydatif et aux maladies inflammatoires. Les extraits (MeOH K, AcOEt G, BuOH
H) ont inhibé la production de TNF α produite par les macrophages suite à la stimulation de
LPS ou LPS/IFN. L’activation de NF-ΚB (nuclear factor kappa B) suite à une infection (LPS)
contribue à l’induction de TNF α (Lee et al., 2003). L’effet inhibiteur des extraits actifs
pourrait être lié au blocage de l’activation de NF-ΚB. De plus l’inhibition de TNF α pourrait
163
résulter de l’inhibition de la régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle du ARN
messager de TNF α (Wang et al., 2002, Wadsworth et al., 2001 ).
L’inhibition de TNF α par l’extrait MeOH (K) pourrait être attribuée à la présence des
flavonoïdes dont la caractérisation a été faite par la CLHP analytique sur la fraction
flavonoïdique. En effet des études ont montré la capacité des flavonoïdes à inhiber la
production de TNF α (Wang et al., 2002 ; Kempuraj et al., 2005). Lihua et al. (2010) ont
montré que la lutéoline (molécule isolée de la fraction flavonoïdique) empêche l’expression
de TNF α par l’inactivation de NF-ΚB.
L’activité inhibitrice des phases AcOEt (G) et BuOH (H) pourrait expliquer l’effet inhibiteur
de MeOH F. L’inactivité de MeOH B pourrait être liée à son caractère hydrophile qui lui rend
incapable de passer à travers les membranes cellulaires. Cet extrait pourrait se comporter
comme le resveratrol, un composé anticancéreux. Le resveratrol induit la production de TNF
α par les macrophages stimulés par LPS ou IFN, cette production de TNF α conduit à la
cytostatique et à la cytoxicité des cellules malignes (Wang et al., 2002).
 Détermination de NO
L’oxyde nitrique ou monoxyde d’azote (NO) est important dans le maintien de la dilatation
des vaisseaux sanguins mais ses concentrations élevées peuvent entraîner des dommages
oxydatifs. En effet la NO qui est produite par l’oxyde nitrique synthase inductible suite à la
stimulation de TNF α, IFN et LPS, contribue au processus pathologique inflammatoire.
L’oxyde nitrique a été estimé en mesurant la quantité de nitrite formée dans le milieu de
culture cellulaire. L’extrait MeOH K a présenté une meilleure inhibition sur la production de
nitrite comparativement à la fraction flavonoïdique (FLAV L) et le décocté DECEC. Des
auteurs (Konho et al., 2011 ; Sheeba et al., 2009) ont rapporté que l’inhibition de la formation
de NO et de TNF α est due au blocage de l’activation de NF-κB. Des études récentes ont
montré que NF-κB est impliqué dans la régulation de l’expression de iNOS (inductible nitric
oxide synthase) et de COX 2 (Kang et al., 2009). Ainsi il est possible que l’effet inhibiteur de
la production de NO des extraits puisse être lié soit au blocage de l’activation de NF-κB ou
soit à l’inhibition de iNOS. A ce sujet, Kim et al. (2001) ont ajouté que l’inhibition de iNOS
se fait de manière indirecte soit sur la transcription de l’ARN messager de iNOS ou soit sur la
stabilisation de NF-κB.
L’inhibition de la formation de TNF α par l’extrait MeOH (K) peut être attribuée en partie à
son effet inhibiteur sur la libération de NO et son effet anti-inflammatoire observé à la 5ème
164
heure après injection de la carragénine. Le NO couplé au radical superoxyde forme le radical
peroxynytrite qui accroît la biosynthèse des prostaglandines (Houssain et al., 2010). Ceci
pourrait refléter l’effet anti-inflammatoire des extraits.
3.3.2.6.Activités Antioxydantes
Les radicaux libres oxygénés (O2-, H2O2, OH-) dans la physiologie normale cellulaire sont
immédiatement éliminés par les systèmes antioxydants endogènes (enzymatique et non
enzymatique). Lors d’une inflammation la production excessive de ces radicaux libres peut
entraîner une lésion cellulaire et tissulaire et la peroxydation lipidique contribuant ainsi au
maintien de l’inflammation. La NADPH oxydase, la xanthine oxydase et iNOS jouent un rôle
important dans la production de radicaux libres lors d’une inflammation.
L’activité antioxydante des extraits et des fractions a été évaluée en utilisant deux
méthodes (DPPH et CUPRAC). L’étude antiradicalaire (DPPH°) montre que tous les extraits
sont doués de capacité à piéger le radical DPPH°. La capacité de piéger le radical DPPH°
traduit le pouvoir d’éliminer les radicaux libres formés dans l’organisme. Le meilleur résultat
a été obtenu avec l’extrait MeOH B (ARP = 5), comparable à celui du trolox (ARP = 4.8)
utilisé comme produit de référence. L’extrait MeOH (K) a présenté la plus faible activité
(ARP = 0.9), les autres extraits ont présenté des valeurs intermédiaires (1.3 < ARP < 3.7). La
différence d’activité est probablement liée à la composition chimique des différents extraits.
La présence de l’épicatechine et de tanins (environ 1/3) dans l’extrait MeOH B pourrait
expliquer la forte activité antioxydante. En effet Geetha et al. (2004) ont mis évidence le
pouvoir antioxydant de l’épicatechine avec la méthode de DPPH.
La méthode de CUPRAC est la seconde méthode utilisée pour évaluer le pouvoir antioxydant
des différents extraits et fractions. Cette méthode est basée sur la réduction de l’ion Cu2+ à
Cu+ par un antioxydant. L’étude a montré que le pouvoir antioxydant des différents extraits
sont restés moindre comparativement au produit de référence, la rutine (TEAC = 2.9). Les
valeurs de TEAC de l’extrait MeOH (F), de la phase AcOEt (G), de la phase BuOH (H), de
l’extrait MeOH (B) et du décocté (DECEC) sont respectivement de 0.8 ; 0.9 ; 1 ; 0.9 et 0.75.
L’extrait MeOH (F), la phase AcOEt (G), la phase BuOH (H), l’extrait MeOH (B) ont un
pouvoir antioxydant similaire à celui de l’acide ascorbique et des flavanones (hespérdine ,
hespéretine) (Yildiz et al., 2008). Il a été rapporté que le pouvoir antioxydant obtenu avec
CUPRAC est plus efficacement extensible aux réactions possibles in vivo des antioxydants
165
(Ilhami et al., 2011). Ainsi la capacité antioxydante des différents extraits traduit leur capacité
à piéger les radicaux libres formés lors d’une inflammation.
Le pouvoir antioxydant des décoctés (DECEC, DECFEU et DECRA), de l’extrait MeOH (B)
et de l’extrait MeOH (K) pourrait contribuer à renforcer leur effet anti-inflammatoire dans le
modèle à la carragénine. En effet l’œdème induit par la carragénine chez l’animal provoque
l’activation de NADPH oxydase conduisant à la formation de radicaux libres qui stimulent la
libérations des médiateurs endogènes pro-inflammatoires (PGE 2) et de cytokines (IL 1β,
TNF α) (Deng et al., 2011 ; Impellizzeri et al., 2010).
Les résultats des deux méthodes utilisées montrent que les différents extraits possèdent une
activité antioxydante liée à la teneur des composés antioxydants qui pourraient agir de
manière synergique. Les méthodes phytochimiques utilisées (tests colorimétriques, CCM,
CLHP) ont permis de caractériser les flavonoïdes dans tous les extraits ; la quantité
flavonoïdique a été importante dans l’extrait MeOH (K) dont six flavonoïdes ont été isolés.
Les flavonoïdes sont connus comme des composés chimiques possédant de meilleure activité
antioxydante. Cependant le pouvoir antioxydant de cet extrait a été faible, ceci pourrait être
dû aux hétérosides flavonoïdiques qui le composent. A ce sujet Apak et al. (2007) ont
rapporté que la glycosylation attenue l’activité antioxydante des flavonoïdes.
3.3.2.7.Inhibition de la peroxydation lipidique et de l’activité de la lipoxygénase

 Inhibition de la peroxydation lipidique
Les radicaux libres oxydent les lipides insaturés de la membrane cellulaire conduisant à la
formation des peroxydes lipidiques. Les peroxydes lipidiques sont potentiellement toxiques et
possèdent la capacité de détruire les cellules. La peroxydation lipidique est impliquée dans
plusieurs conditions pathologiques incluant l’inflammation, le cancer, l’hépatotoxicité et les
maladies cardiovasculaires (Middleton et al., 2000). Le système FeCl2-H2O2 a été utilisé pour
induire la peroxydation lipidique dans l’homogénat de foie de rat. La peroxydation lipidique
induite a été inhibée à différents pourcentages d’inhibition selon les extraits utilisés (Tableau
3- 11). Nous suggérons que la réduction de la formation des peroxydes lipidiques par les
extraits est liée à leur pouvoir antioxydant.
Des auteurs ont rapporté que l’administration de la carragénine chez l’animal provoque une
peroxydation lipidique dans les tissus de la patte (Agha et Gad 1995 ; Tanas et al., 2010).
Ainsi l’effet anti-inflammatoire des décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et des extraits
méthanoliques (MeOH B, MeOH F) pourrait être attribué en partie à leur capacité de réduire
166
la peroxydation lipidique. Ces résultats suggèrent que l’effet réducteur de la peroxydation
lipidique de l’homogénat de foie induit par les extraits leur confère un pouvoir
hépatoprotecteur (Chang et al., 1994).
 Inhibition de l’activité de la lipoxygénase
La lipoxygénase (LOX) catalyse les premières étapes de la transformation de l’acide

arachidonique en leucotriènes qui sont des médiateurs des réactions inflammatoires et
allergiques incluant le rhumatisme, la rhinite, l’asthme, le cancer et les maladies
cardiovasculaires. Le test sur l’inhibition de l’activité de la lipoxygénase a été réalisé avec les
extraits suivants : les décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA), les extraits méthanoliques
(MeOH B, MeOH F, MeOH K), la fraction flavonoïdique et l’extrait DCM des racines (DCM
E). Les résultats du Tableau 3- 11 montrent que tous les extraits ont eu une action inhibitrice
sur l’activité de la LO. La forte inhibition a été observée avec l’extrait MeOH B (97.7 %)
comparé aux autres extraits et aux produits de référence (solumedrol et hydrocortisone). La
différence de l’efficacité pourrait être due à la composition chimique. La quantité élevée de
tanins de l’extrait MeOH (B) (environ 1/3) pourrait expliquer sa forte inhibition de l’activité
de LO. Les tanins sont des inhibiteurs de LOX (Bruneton, 2009), sont anticancéreux (Ramos,
2008) et ont des propriétés antioxydantes (Zhou et al., 2011), anti-inflammatoires et
analgésiques (Viana et al., 1997).
Holsapple et Yim (1984) ont rapporté que l’injection de la carragénine chez l’animal
provoque une biosynthèse de leucotriènes. Ceci suggère que l’effet anti-œdémateux des
décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et des extraits méthanoliques (MeOH B, MeOH K)
pourrait être associé à l’inhibition de la LOX.
167
CHAPITRE IV : CONCLUSION GENERALE-PERSPECTIVES
168
La présente étude répond à la question de la politique nationale de valoriser la médecine
traditionnelle à travers des études phytochimiques, toxicologiques et pharmacologiques afin
de mettre à la disposition des populations, des phytomédicaments améliorés et accessibles.
Pterocarpus erinaceus Poir. (Fabaceae) est une plante médicinale dont les différentes parties
sont utilisées dans le traitement de nombreuses pathologies y compris les maladies à
composante inflammatoire (ulcère, rhumatisme, dysenterie, inflammation, dermatoses …).
Notre étude a été menée sur deux grands axes à savoir la phytochimie et la biologie.
L’étude phytochimique a permis d’isoler et d’identifier 18 composés des différents extraits
issus des écorces de tronc, des feuilles et des écorces de racines de P. erinaceus :
- écorces de tronc : la friedeline (PE.1), le lupeol (PE.2) et l’épicatechine (PE.3)
- feuilles : la rutine (PE.18), la lutéoline (PE.14), la quercétine-3-O-sophoroside
(PE.15), le kaempferol-3-O-sophoroside (PE.17), la quercétine-3-O-β-glucose
(PE.16) et le composé PE.13
- écorces de racines : le stigmastérol (PE.9), la friedeline (PE.6), le 3α-
hydroxyfriedelan-2-one (PE.7), l’α-sophoradiol (PE.8), le maltol 6-O-apiofuranoside-
glucopyranoside (PE.11) et les composés PE.4, PE.5, PE.10, PE.12 sont en cours
d’identification.
L’étude biologique a été réalisée : in vivo (toxicité aiguë, anti-inflammatoire, analgésique,

antipyrétique) et in vitro (antioxydant, tests sur l’inhibition de la production de TNF α et de
nitrite cellulaires, de la peroxydation lipidique et de la lipoxygénase).
L’innocuité des extraits a été réalisée sur l’étude de la toxicité aiguë qui constitue le premier
volet de l’étude biologique. En effet l’étude a montré que les décoctés des feuilles
(DECFEU), d’écorces de tronc (DECEC), d’écorces de racines (DECRA) et les extraits
méthanoliques des feuilles (MeOH K), d’écorces du tronc (MeOH B) sont considérés comme
des substances faiblement toxiques selon l’échelle de toxicité de Hodge et Sterner.
L’étude anti-œdémateuse à la carragénine a montré que l’extrait méthanolique des feuilles
(MeOH K) a présenté la forte inhibition (77.4 %) à la dose de 400 mg/kg cependant l’extrait
dichlorométhanique des écorces de tronc (DMC A) présente la forte inhibition (91 %) à la
dose de 200 µg/oreille sur l’œdème induit par l’huile de croton.
L’évaluation de l’effet analgésique (à l’acide acétique) révèle que le décocté des écorces
du tronc (DECEC) manifeste l’effet le plus important parmi les décoctés et que de tous les
extraits, l’extrait méthanolique (MeOH B) des écorces du tronc est le plus actif. Par contre
169
avec la méthode au formaldéhyde, le décocté des écorces de racine se manifeste plus en
termes d’effet analgésique.
Les résultats des mesures d’activité antipyrétique montre que les décoctés sont actifs et plus
particulièrement le décocté des feuilles qui a présenté le meilleur effet, ce qui confirme son
utilisation contre la fièvre.
La production de TNF α et de NO cellulaires a été inhibée par différents extraits (MeOH
K, AcOEt G, BuOH H) dont l’extrait méthanolique des feuilles (MeOH K) a présenté une
inhibition remarquable. Les activités antioxydantes observées pour les différents extraits
renforcent l’hypothèse de l’activité anti-inflammatoire à travers l’élimination des radicaux
libre formés lors de l’inflammation.
L’étude sur la peroxydation lipidique a permis de montrer que l’effet inhibiteur des
décoctés (DECEC, DECFEU, DECRA) et des extraits méthanoliques (MeOH B, MeOH K)
contribue à l’effet anti-inflammatoire de ces extraits. L’inhibition de l’activité enzymatique de
la lipoxygénase a permis de montrer que les extraits inhibent la production des leucotriènes
(B4, C4, D4) qui participent au recrutement des polynucléaires neutrophiles et à
l’augmentation de la perméabilité vasculaire.
L’ensemble de ces résultats phytochimiques et pharmacologiques constituent des bases
scientifiques qui valident l’utilisation de P. erinaceus comme remède traditionnel contre
diverses pathologies à composante inflammatoire.
Les données phytochimiques et pharmacologiques obtenues lors de notre travail pourraient

être complétés par d’autres études :
- déterminer la structure des molécules isolées et non identifiées
- tester les composés isolés sur la lipoxygénase, la phospholipase A2 et les cyclo-
oxygénases (COX1 et COX2).
- tester l’extrait MeOH B et MeOH K sur des lignées cellulaires cancéreuses,
- tester les extraits et les composés sur la production cellulaire de TNF α, NO et NF-κB,
- déterminer l’effet analgésique central des extraits.
170
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193
ANNEXE
194
Composé PE.1 : Friedeline
C30H50O
PM : 426 uma
Nom IUPAC : Friedooleanan-3-one
Aspect : poudre blanche
PF : 286 – 288 ° C
CDCl3 CDCl3 (Ciangherotti et al., 2004)

δH (multiplicité, J en δC δH (multiplicité, J) δC
Hz)
1 1.62 -1.98 m 22.2 1.65 m ; 1.95 m 22.3
2 2.36 – 2.40 m 41.5 2.33 m ; 2.39 m 41.5
3 - 213.2 - 212.0
4 2.23 – 2.30 m 58.2 2.22 m 58.2
5 - 42.1 - 42.1
6 1.74 m 41.3 1.26 m ; 1.74 m 41.2

7 1.48 m 18.2 1.35 m ; 1.49 m 18.2
8 52.1 1.38 m 53.1
9 37.4 - 37.4
10 1.58 m 59.4 1.52 m 59.4
11 35.6 1.32 m ; 1.42 m 35.6
12 30.5 1.33 m 30.5
13 39.7 - 39.7
14 38.3 - 38.3
15 32.4 1.29 m ; 1.52 m 32.3
16 36.0 1.40 m ; 1.52 m 36.0
17 30.0 - 30.0
18 42.7 1.55 m 42.7
19 35.3 1.18 m ; 1.40 m 35.3
20 - 28.1 - 28.1
21 1.22 m , 1.41 m 32.7 1.25 m ;1.45 m 32.7
22 0.91 m ; 1.55 m 39.2 0.90 m ; 1.50 m 39.2
23 0.88 6.8 0.85 6.8
24 0.72 14.6 0.70 14.6
25 0.86 17.9 0.84 17.9
26 1.01 20.2 1.02 20.2
27 1.06 18.6 1.15 18.7
28 1.19 31.1 1.18 32.1
29 0.96 35.0 0.93 35.0
30 1.01 31.8 0.97 31.8
195
Composé PE.2 : Lupeol
C30H50O
PM : 426 uma
Nom IUPAC : (20)29-lupèn-3β-ol
PF : 208 – 209 ° C
CDCl3 CDCl3 (Noungoué, 1998)

δH (multiplicité, J en δC δH (multiplicité, J en Hz) δC
Hz)
1 38.7 38.7
2 27.5 27.5
3 3.2 m 79.0 3.15 m 79.0
4 38.9 38.9
5 - 55.3 - 55.3
6 18.3 18.3
7 34.3 34.3
8 40.9 40.9
9 50.5 - 50.5
10 37.2 37.2
11 21.0 21.0
12 25.2 25.2
13 38.1 - 38.1
14 42.9 - 42.9
15 27.4 27.4
16 35.6 35.6
17 43.0 - 43.0
18 48.3 48.3
19 2.4 m 48.0 2.4 m 48.0
20 - 151.0 - 151.0
21 29.9 29.9
22 40.0 40.0
23 0.97 s 28.0 0.97 s 28.0
24 0.76 s 15.4 0.76 s 15.4
25 0.82 s 16.1 0.83 s 16.1
26 1.03 s 15.9 1.03 s 15.9
27 0.94 s 14.6 0.95 s 14.6
28 0.78 s 18.0 0.79 s 18.0
29 4.56 ; 4.69 m 109.3 4.57 ; 4.68 m 109.3
30 1.67 s 19.3 1.68 s 19.3
196
Composé PE.3 : (-) épicatéchine
C15H14O6
PM : 290 uma
Nom IUPAC : épicatéchine
Aspect : brun- rougeâtre
UV : λmax(MeOH) 226, 278 nm
(Lhuillier, 2007)
MeOD CD3OD (Noungoué, 1998)

Hz)
2 4.8 79.6 4.8 79.9

3 4.2 67.2 4.2 m 67.5
4 2.7 dd (16.7 ; 2.8) 29.3 2.7 dd (17 ; 3) 29.3
2.9 dd (16.9 ; 4.5) 2.9 dd (17 ; 4.7)
5 157.6 157.7
6 5.9 d(5.9) 96.1 5.9 d (2.3) 96.4
7 - 158.1 - 158
8 5.9 d(5.9) 95.6 5.9 d (2.3) 95.9
9 157.0 157.4
10 99.8 100.1
1’ 132.0 132.3
2’ 6.96 s 115.6 6.97 d (1.7) 115.9
3’ 145.5 145.9
4’ 145.7 146.0
5’ 6.7 d(8.1) 115.0 6.7 d (8.1) 115.4
6’ 6.8 dd (8.2 ; 1.5) 119.1 6.8 dd (8.1 ; 1.7) 119.4
197
Composé PE.7 : 3α-hydroxyfriedelan-2-one
C30H50O2
PM : 442 uma
Nom : 3α-hydroxyfriedelan-2-one
PF : 232 - 234 ° C
CDCl3 CDCl3 (Lingbo et al., 2005)

Hz)
1 2.5 dd (13.6 ; 3.2) 36.1 2.5 (1 α-H) 36.1

2.4 t 2.4 (1 β-H)
2 211.9 - 211.7
3 3.8 m 77.2 3.8 dd (11.6) 77.0
4 54.5 54.6
5 38.1 38.1
6 1.8 m 40.6 1.8 40.7
7 17.6 17.6
8 53.1 53.2
9 37.6 37.6
10 60.4 60.5
11 35.0 35.1
12 30.3 30.4
13 39.6 39.6
14 38.3 38.4
15 32.3 32.4
16 35.9 36.0
17 30.0 30.0
18 42.7 42.7
19 35.3 35.4
20 28.2 28.2
21 32.7 32.8
22 39.2 39.3
23 1.04 10.8 1.04 10.8
24 1.03 14.2 1.03 14.2
25 0.89 17.4 0.89 17.5
26 1.01 20.2 1.01 20.2
27 0.99 18.6 0.98 18.6
28 1.17 32.1 1.17 32.1
29 0.99 31.7 0.99 31.8
30 0.94 35.0 0.94 35.0
198
Composé PE.8 : α-sophoradiol
C 30H50O2
PM : 442 uma
Nom: α-sophoradiol
PF : 268 ° C
CDCl3 CDCl3 (Ndom, et al. , 2001)

Hz)
1 37.0 36.6
2 2.1 d (11.2) 27.2 2.1 m 27.2
3 3.2 m 79.0 3.2 (11.00 ; 6.50) 79.0
4 37.5 37.5
5 55.2 55.2
6 18.4 18.4
7 32.9 32.9
8 39.7 39.9
9 47.6 47.6
10 37.0 36.9
11 23.5 23.5
12 5.3 t 122.5 5.2 t (3.52) 122.5
13 143.9 143.9
14 42.1 42.1
15 25.9 25.9
16 30.5 29.7
17 37.4 37.4
18 2.1 d 44.7 2.2 (10.20 ; 4.60) 44.7
19 46.1 46.1
20 30.5 30.5
21 41.5 2.2 (12.20 ; 3.80) 41.5
22 3.4 t 76.7 3.4 (13.68 ; 4.28) 76.6
23 0.87 28.0 0.89 28.1
24 0.79 16.8 0.77 15.6
25 1.00 15.5 0.97 15.6
26 1.04 16.8 1.02 16.9
27 1.12 19.9 1.09 20.0
28 0.91 28.1 0.85 28.2
29 0.98 32.7 0.95 32.2
30 0.95 25.3 0.92 25.4
199
Composé PE.9 : Stigmastérol
C29H42O
PM :412uma
Nom IUPAC : (3β,22E)-stigmasta-
5,22-dien-3-ol
Aspect :poudre blanche
PF : 165 ° C
CDCl3 CDCl3 (Jamal et al., 2009)

Hz)
1 36.5 37.4
2 28.3 28.4
3 3.5m 129.3 3.5 m 129.5
4 37.3 37.5
5 140.7 140.9
6 5.4 d (5.2) 121.7 5.4 d (4.8) 121.9
7 31.6 31.9
8 31.9 32.1
9 50.6 50.3
10 36.5 36.7
11 21.2 21.3
12 39.8 39.8
13 42.3 42.4
14 56.9 57.0
15 24.4 24.5
16 29.1 29.2
17 56.1 56.1
18 0.68 s 12.1 0.68 s 12.1
19 1.01 s 19.0 1.02 s 19.1
20 40.5 40.7
21 0.91 s 21.2 0.92 d (6.6) 21.4
22 5.16 dd (15.1 ; 8.4) 138.3 5.15 dd (8.8 ; 15.4) 138.5
23 5.02 dd (15.2 ; 8.5) 71.8 5.01 dd (8.8 ; 14.8) 72.0
24 51.2 51.4
25 45.8 46.0
26 0.85 19.4 0.86 d (7.7) 19.6
27 0.78 19.8 0.79 d (8.4) 20.0
28 25.4 25.6
29 0.82 12.3 0.82 t (7.3) 12.2
200
Composé PE.11 : maltol 6-O-apiofuranoside-glucopyranoside
C 17H24O12
PM : 420 uma
Nom: maltol 6-O-apiofuranoside-
glucopyranoside
CD3OD CD3OD (Haizhou et al., 2008)

Hz)
2 164.5 164.6
3 143.5 143.3
4 177.1 177.0
5 6.5 d (5.6) 118.0 6.5 d (5.6) 117.2
6 8.0 d (5.6) 157.3 8.0 d (5.6) 157.1
7 2.4 s 15.4 2.4 s 15.9
1’ 4.8 d (7.2) 105.0 4.8 d (7,6) 105.0

2’ 3.4 – 3.5 m 74.9 3.3 – 3.5 m 74.9
3’ 3.4 – 3.6 m 77.9 3.3 – 3.5 m 77.9
4’ 3.4 – 3.6 m 71.4 3.3 – 3.5 m 71.3
5’ 3.4 – 3.6 m 77.5 3.3 – 3.5 m 77.4
6’ 3.9 d 68.6 3.9 dd (2 ; 11.2) 68.5
3.6 d 3.6 dd (6.1 ; 11.2)
1’’ 4.9 d (2.3) 110.0 4.9 d (2.2) 110.7

2’’ 3.9 d (2.3) 77.8 3.8 d (2.2) 77.8
3’’ 80.5 80.4
4’’ 3.9 75.4 3.9 d (9.5) 75.3
3.7 3.7 d (9.5)
5’’ 3.6 s 65.6 3.5 s 65.5
201
Composé PE.14 : lutéoline
C 15H10O6
PM : 286 uma
Nom IUPAC : 5,7,3’, 4 ’-
tetrahydroxyflavone
Aspect : poudre jaune
PF : 328-330 ° C
(Bennaghmouch et al., 2002)
CD3OD CD3OD (Bennaghmouch et al., 2002)

Hz)
2 165.5 164.5
3 6.6 s 104.5 6.6 s 103.3
4 183.4 182.2
5 163.7 162.1
6 6.2 d (2.1) 100.2 6.2 d (2) 99.2
7 165.4 164.7
8 6.5 d (2.1) 95.1 6.5 d (2) 94.2
9 159.1 157.9
10 105.6 104.2
1’ 123.9 122.1
2’ 7.4 d (2.2) 114.4 7.4 d (2) 113.8
3’ 146.9 146.2
4’ 150.7 150.1
5’ 6.9 d (8.3) 116.9 6.9 d (7.9) 116.4
6’ 7.5 dd (2.2 ; 2.2) 120.4 7.4 dd (2 ; 7.9) 119.3
202
Composé PE.15 : quercétine-3-O-sophoroside
C27H30O17
PM : 626 uma
Nom : quercétine-3-O-sophoroside
UV : λmax(MeOH) 216, 344 nm (Samir et
al., 2005)
CD3OD DMSO-d6 (Viet et al., 1990)

Hz)
2 158.0 156.2
3 135.1 132.9
4 179.8 177.4
5 158.8 161.2
6 6.2 d (2) 99.9 6.2 d (2.1) 98.0
7 163.2 163.9
8 6.4 d (1.9) 94.7 6.4 d (1.5) 93.4
9 158.6 155.5
10 105.1 104.1
1’ 123.1 121.8
2’ 7.5 d (21) 117.8 7.6 d (2.4) 116.0
3’ 145.9 144.7
4’ 149.8 148.4
5’ 6.9 d (8.5) 116.2 6.9 d (8.5) 115.3
6’ 7.7 d (21) 7.6 dd (2.1 ; 8.5) 121.1
1’’ 5.3 d (7.6) 98 5.7 d (7) 98.6

2’’ 82.9 82.6
3’’ 75.6 76.6
4’’ 70.9 69.3
5’’ 77.9 76.5
6’’ 62.4 60.7
1’’’ 4.7 d (7.2) 105.8 4.6 d (7.9) 104.4

2’’’ 74.6
3’’’ 76.7
4’’’ 70.9 69.7
5’’’ 78.0 77.0
6’’’ 62.7 60.8
203
Composé PE.16 : quercétine-3-O-β-glucose (isoquercitrine)
C21H20O12
PM : 464 uma
Nom IUPAC : 3,3’,4’,5,7-
pentahydroxyflavone-3-glucose
PF : 225-227 ° C
(Gluchoff et al., 1997)
CD3OD CD3OD (Kim et al., 2004)

Hz)
2 159.1 159.2
3 135.6 135.8
4 179.6 179.6
5 163.3 163.2
6 6.1 s 99.8 6.2 s 100.1
7 166.0 165.3
8 6.3 s 94.7 6.4 s 94.9
9 158.5 158.6
10 105.7 105.8
1’ 123.2 123.2
2’ 7.7 s 117.6 7.7 s 117.7
3’ 145.8 146.0
4’ 149.7 150.0
5’ 6.8 d (8.5) 116.0 6.8 d (8.3) 116.1
6’ 7.5 d (8.4) 123.2 7.6 d (8.3) 123.3
1’’ 5.2 d (7.3) 104.4 5.2 d (7.6) 104.5

2’’ 75.7 75.9
3’’ 78.3 78.3
4’’ 71.2 71.4
5’’ 3.2 m 78.1 3.2 m 78.5
6’’ 3.7 d (2.1) 62.5 3.7 d (11.8) 62.3
3.6 d (5.2) 3.6 dd (5.3 ; 11.8)
204
Composé PE.17 : kaempferol-3-O-sophoroside
C27H30O16
PM : 626 uma
Nom: kaempferol-3-O-sophoroside
UV : λmax(MeOH) 216, 344 nm (Samir
et al., 2005)
CD3OD DMSO-d6 (Markham , 1978 ;

Budzianowski, 1990)
Hz)
2 158.3 156.4
3 134.9 133.1
4 179.7 177.5
5 163.1 161.2
6 6.2 d (1.8) 99.8 6.2 d (2.0) 98.6
7 165.3 164.0
8 6.4 d (1.7) 94.9 6.5 d (2.0) 93.6
9 158.3 156.4
10 104.7 104.2
1’ 122.8 121.1
2’ 132.3 130.6
3’ 6.9 d (8.9) 116.2 6.9 d (8.8) 115.2
4’ 161.2 159.7
5’ 116.2 115.2
6’ 8.1 d (8.8) 132.3 8.0 d (8.8) 130.6
1’’ 5.4 d (7.5) 99.8 5.6 d (7.0) 98.6

2’’ 82.5 82.0
3’’ 77.9 76.6
4’’ 71.1 70.0
5’’ 77.9 76.6
6’’ 62.4 61.0
1’’’ 104.7 103.6

2’’’ 4.8 d (7.3) 75.5 4.6 d (7.3) 74.3
3’’’ 78.2 76.7
4’’’ 71.3 70.5
5’’’ 77.9 76.7
6’’’ 62.0 61.4
205
Composé PE.18 : rutine
C27H30O16
PM : 610 uma
Nom IUPAC : 3,3’,4’,5,7-
pentahydroxyflavone-3-rutinoside
PF : 242 ° C
(Gluchoff et al., 1997)
CD3OD DMSO-d6 (Markham et Ternai, 1976)

Hz)
2 158.5 156.4
3 135.6 133.6
4 179.4 177.4
5 159.3 156.6
6 6.2 s 99.9 6.2 98.8
7 166.0 164.0
8 6.4 s 94.9 6.4 93.6
9 162.9 161.2
10 105.6 105.2
1’ 123.1 121.6
2’ 7.7 m 116.1 7.4 115.3
3’ 145.9 144.6
4’ 149.9 148.3
5’ 6.9 d (8.2) 117.7 6.9 116.5
6’ 123.6 7.5 121.6
1’’ 5.1 d (7.4) 104.7 5.9 103.4

2’’ 75.7 75.3
3’’ 78.2 77.4
4’’ 71.4 71.1
5’’ 77.2 76.6
6’’ 68.6 68.7
1’’’ 4.5 s 102.4 4.2 102.0

2’’’ 72.1 71.5
3’’’ 72.2 71.7
4’’’ 73.9 73.2
5’’’ 69.7 69.7
6’’’ 17.9 18.6
206
Activités anti-inflammatoires
Test anti-œdémateux à la Carragénine
- Ecorces de tronc de P. erinaceus
Tableau : Effet anti-inflammatoire du décocté (DECEC) et de l’extrait méthanolique (MeOH B) des écorces de tronc de P. erinaceus
Doses (mg/kg p.c) Volume d’œdème (mL) Pourcentage d’inhibition (%)
1H 3H 5H 1H 3H 5H
Témoin 0.20± 0.02 0.35 ± 0.03 0.38± 0.04 --- --- ---
Décocté 200 0.15± 0.02* 0.24± 0.02*** 0.19± 0.04*** 25.0 31.4 50.0
400 0.12± 0.02*** 0.19± 0.02*** 0.17± 0.04*** 40.0 45.7 55.2
600 0.07± 0.03*** 0.17± 0.03*** 0.14± 0.05*** 65.0 51.4 63.2
Témoin 0.21± 0.02 0.24 ± 0.03 0.28± 0.03 --- --- ---
Extrait MeOH B 100 0.15± 0.04** 0.18± 0.04** 0.16± 0.05*** 28.6 25.0 42.8
200 0.10± 0.03*** 0.13± 0.04*** 0.10± 0.02*** 52.4 45.8 64.3
Témoin 0.24± 0.03 0.34 ± 0.01 0.37± 0.06 --- --- ---
Extrait MeOH B 50 0.14± 0.02*** 0.29 ± 0.04 0.24± 0.04** 41.7 14.7 35.1
(i.p.)
100 0.10± 0.02*** 0.26± 0.04*** 0.20± 0.03*** 58.3 23.5 45.9
200 0.08± 0.03*** 0.23± 0.04*** 0.17± 0.03*** 66.7 32.4 54.1
Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type (n = 6). * : P< 0,05, ** : P< 0.01, *** : P< 0.001 est considéré significatif par rapport au témoin (analyse
207
- Feuilles de P. erinaceus
Tableau : Effet anti-inflammatoire du décocté (DECFEU) et de l’extrait méthanolique (MeOH K) des feuilles de P. erinaceus
1H 3H 5H 1H 3H 5H
---
Témoin 0.20± 0.03 0.30± 0.03 0.31± 0.01 --- ---
Décocté 200 0.17± 0.05* 0.23± 0.04*** 0.24± 0.02*** 15.0 23.3 22.6
400 0.14± 0.04* 0.14± 0.04** 0.12± 0.03*** 30.0 53.3 62.3
600 0.10± 0.02* 0.13± 0.04*** 0.10± 0.04*** 52.5 56.7 67.7
Témoin 0.21± 0.03 0.29± 0.03 0.31± 0.02 --- --- ---
Extrait
100 0.18± 0.03* 0.25± 0.03 0.26± 0.05* 14.3 13.8 16.1
MeOH K
200 0.13± 0.02*** 0.14± 0.04*** 0.13± 0.04*** 38.1 51.7 58.1
400 0.11± 0.04** 0.13± 0.04*** 0.07± 0.02*** 47.6 55.2 77.4
208
- Ecorces de racine de P. erinaceus
Tableau : Effet anti-inflammatoire du décocté des écorces de racines (DECRA) de P. erinaceus et de l’acide acétylsalicylique (AAS).
1H 3H 5H 1H 3H 5H
Témoin 0.20 ± 0.03 0.30 ± 0.03 0.31 ± 0.01 --- --- ---
Décocté 200 0.15 ± 0.05* 0.24 ± 0.04*** 0.23 ± 0.05*** 25.0 20.0 25.8
400 0.14 ± 0.02* 0.20 ± 0.03*** 0.16 ± 0.05*** 30.0 33.3 48.4
600 0.10 ± 0.03* 0.18 ± 0.03*** 0.12 ± 0.04*** 50.0 40.0 61.3
Témoin 0.21 ± 0.02 0.24 ± 0.03 0.28 ± 0.03 --- --- ---
AAS 50 0.18 ± 0.03 0.20 ± 0.02** 0.21 ± 0.03** 14.3 20.0 25.0
100 0.14 ± 0.04** 0.18 ± 0.02** 0.17 ± 0.06*** 33.3 25.0 39.3
150 0.10 ± 0.02*** 0.14 ± 0.02*** 0.14 ± 0.03*** 52.4 41.7 50.0
209
Test anti-œdémateux à l’huile de croton
- Ecorces de tronc de P. erinaceus
Tableau : Effet anti-inflammatoire local du décocté (DECEC), de l’extrait méthanolique
(MeOH B), de l’extrait dichlorométhane (DCM A) et des composés isolés (friedeline, lupéol
et épicatechine)
Extrait Dose Poids de l’œdème (mg) Pourcentage

(µg/oreille) d’inhibition (%)
Témoin (42% EtOH) --- 6.52 ± 0.7 ---
Décocté 300 5.51 ± 1.4*** 15.5
500 3.47 ± 0.5 46.9
Extrait MeOH B 300 3.7 ± 0.9*** 42.0
500 0.95 ± 0.7*** 85.4
(-) épicatechine (PE.3) 75 5.41 ± 0.4*** 16.9
Hydrocortisone 100 3.2 ± 1.23*** 50.9
Témoin (DCM) --- 8.43 ± 0.9 ---
Extrait DCM A 50 5.71 ± 0.9*** 32.3
100 2.55 ± 1.13*** 69.8
200 0.7 ± 0.5*** 91.7
Friedeline (PE.1) 100 4.37±1.5*** 48.2
Lupeol (PE.2) 100 3.28 ± 1.6*** 61.1
Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart type (n = 6). * : P< 0,05, ** : P< 0.01, *** : P< 0.001
est considéré significatif par rapport au témoin (analyse ANOVA suivi de Dunnett’s test).
210
- Ecorces des racines de P. erinaceus
Tableau: Effet anti-inflammatoire local de l’extrait dichlorométhane (DCM E) des écorces de
racines de P. erinaceus et de la phénylbutazone
Pourcentage
Extrait dose (µg/oreille) Poids de l’œdème (mg)
d’inhibition (%)
Témoin --- 9.01 ± 0.9 ---
Extrait DCM E 100 7.31 ± 0.5** 18.8
200 5.43 ± 1.3*** 39.7
300 4.2 ± 0.7*** 53.4
Témoin --- 10.2 ± 0.8 ---
Phénylbutazone 50 6.92 ± 1.6*** 32.2
100 4.9 ± 0.8*** 52.0
200 2.4 ± 1*** 76.5
est considéré significatif par rapport au témoin (analyse ANOVA suivi de Dunnett’s test).
211
Activités analgésiques
Test au formaldéhyde
Tableau : Effet analgésique des décoctés des écorces de tronc, des feuilles et des écorces de
racines, morphine et paracétamol
Organes et Doses (mg/kg Première phase (0 à 5 min) Deuxième phase (15 à 30 min)
Extraits p.c)
Temps de léchage (s) Pourcentage Temps de Pourcentage

léchage (s)
Tronc d’inhibition(%) d’inhibition(%)
Témoin --- 90.5 ± .5 --- 133. 7 ± 5.7 ---
Décocté 200 80.8± 3.7** 10.7 113.5 ± 3.7*** 15.1
400 74.3± 5.3*** 17.9 75. 7 ± 4.4*** 43.4
600 57.5± 4.2*** 36.6 59. 2 ± 5.4*** 55.7
Feuilles
Témoin 109 ± 7 --- 146.8 ± 7.3*** ---
Décocté 200 69.5 ± 5*** 36.2 114 ± 4.6*** 22.4
400 53.3 ± 7.3** 51.1 84.16 ± 5.4*** 42.7
600 50.0 ± 3.0*** 54.1 56.83 ± 5*** 61.3
Racines
Décocté 100 91.5 ± 7.0** 16.1 66.8 ± 5.0*** 54.5
200 78.0 ± 6.0*** 28.4 59.7 ± 7.0*** 59.4
400 44.2 ± 8.0*** 59.5 54.8 ± 7.0*** 62.7
600 37.3 ± 6.0*** 65.8 51.5 ± 5.0*** 64.9
Morphine 5 37.3 ± 5.0*** 65.8 53.0 ± 6.0*** 63.9
Paracétamol 100 73.5 ± 3.0** 32.6 107.8 ± 5.0** 26.6
200 57.5 ± 4.0*** 47.3 59.17 ± 5.0*** 59.7
300 45.2 ± 4.0*** 58.6 52.3 ± 5.0*** 64.4
est considéré significatif par rapport au témoin (analyse ANOVA suivi de Dunnett’s test
212
Activité antipyrétique
Tableau : Effet antipyrétique des décoctés des écorces de tronc (DECEC), des feuilles (DECFEU) et des écorces de racines (DECRA) sur l’hyperthermie
induite chez la souris par l’injection de la suspension aqueuse de levure de bière
Extraits et doses (mg/kg) Température (°C)
- 17 h 0h 1h 2h 3h 4h 5h
Témoin 37.0 ± 0.2 37.8 ± 0.4 37. 8 ± 0.3 37.7 ± 0.4 37.7 ± 0.3 37.8 ± 0.4 37.8 ± 0.4
Décocté d’écorces de tronc
200 36.7 ± 0.3** 37.6 ± 0.3*** 37.5 ± 0.4* 37.4 ± 0.4** 37.4 ± 0.2* 37.3 ± 0.5** 37.2 ± 0.4***
400 36.9 ± 0.2* 37.7 ± 0.4** 37.5 ± 0.5* 37.4 ± 0.4* 37.3 ± 0.4*** 37.2 ± 0.3** 37.2 ± 0.3*
Décocté de feuilles
200 37.0 ± 0.3* 37.7 ± 0.4** 37.6 ± 0.5*** 37.6 ± 0.3** 37.5 ± 0.3** 37.5 ± 0.4* 37.4 ± 0.5*
400 37.0 ± 0.4*** 37.8 ± 0.5* 37.7 ± 0.4** 37.6 ± 0.4** 37.3 ± 0.3* 37.2 ± 0.4** 37.1 ± 0.4*
600 36.9 ± 0.4* 37.7 ± 0.5** 37.5 ± 0.3** 37.4 ± 0.4*** 37.2 ± 0.5* 36.8 ± 0.4* 36.7 ± 0.5**
Décocté d’écorces de racines
200 37.1 ± 0.3 37.9 ± 0.5** 37.9 ± 0.4*** 37.8 ± 0.4** 37.7 ± 0.4** 37.6 ± 0.3** 37.5 ± 0.3*
400 37.0 ± 0.2* 37.8 ± 0.3** 37.6 ± 0.3** 37.5 ± 0.3* 37.3 ± 0.3* 37.3± 0.2** 37.3± 0.2**
Paracétamol
100 37.1 ± 0.4** 38.0 ± 0.4** 37.6 ± 0.5* 37.5± 0.4*** 37. 6 ± 0.4** 37.5 ± 0.5** 37.4 ± 0.4***
213
ARTICLES PUBLIES
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ANNEE 2011-2012

Université de Ouagadougou Université Claude Bernard Lyon1

Ecole Doctorale de la Santé Ecole Doctorale 341

THESE UNIQUE EN COTUTELLE

Doctorat es Sciences d’Application Pharmaceutique

ETUDES PHYTOCHIMIQUE ET BIOLOGIQUE

Soutenue le 14 Juin 2012

A mon papa et mes mamans.

A nos maîtres et juges

Nous tenons à exprimer toute notre gratitude :

Figure 2- 1: Schéma d’extraction et de fractionnement des écorces de tronc de P. erinaceus 71

Tableau 2- 1: Préparation des échantillons pour le test antioxydant DPPH ........................... 89

Tableau 3- 1 : Effet anti-inflammatoire du décocté et de l’extrait méthanolique (MeOH B)

Mots clés : Pterocarpus erinaceus, anti-inflammatoire, analgésique, antipyrétique et

Key words: Pterocarpus erinaceus, anti-inflammatory, analgesic, antipyretic and antioxidant

N. Ouédraogo, A. Tibiri, R. W. Sawadogo, M. Lompo, A. E. Hay, J. Koudou, M. G. Dijoux

Ouédraogo Noufou, Hay A.Emmanuelle, Michalet S, Koudou Jean, Dijoux Marie-

L’objectif général de cette étude était de mener des études phytochimique et

1.1.1.Position systématique de la famille des Fabaceae ou Leguminosae

1.1.2. Caractères morphologiques des Fabaceae

Figure 1- 1: Divers types de feuilles chez les Fabacées (Guignard, 2004)

1.1.3.Utilisations en médecine traditionnelle

1.2 Le genre Pterocarpus

Selon la classification de l’APG, le genre Pterocarpus est répertorié de la manière suivante :

1.2.2.Utilisation en médecine traditionnelle

Figure 1- 3: Nombre d’utilisation des espèces du genre Pterocarpus par catégorie de

(1) R1 = H2, R2 = O : lupénone

(10) isopterocarpolone (11) pterocarptriol (12) pterocarpdiolone

(30) 6-hydroxy, 7,2’,4’,5’-tetramethoxyisoflavone

(32) 7-méthyl tectorigenine

(38) R = OMe : pteroisoauroside

1.2.4.Données pharmacologiques des métabolites isolés et extraits du genre Pterocarpus

Tableau 1- 1 : Activités pharmacologiques de quelques espèces de Pterocarpus

P. santalinus Extrait MeOH (feuilles,

Savinine (lignane) Inhibition du TNF α Cho et al., (2001)

Extraits aqueux, éthanol et Anti- Kameswara et al.,

Inhibition de α- Abesundara et al.,

Extrait aqueux (écorces de Anti- Grover et Rathi,

Tanins (écorces de tronc) Antiviral Zhang et al., (1990)

P. indicus Extraits DCM, AcOEt,

P. soyauxii Extrait aqueux (écorces de Toxicité aiguë et Tchamadeu et al.,

P. santalinoides Mustofa et al.,

Synonymes : Pterocarpus africanus DC., Lingoum erinaceum Lam.

1.3.5.Métabolites secondaires isolés de l’espèce P. erinaceus

(46) pseudobaptigénine (47) tectorigénine

1.3.7.Données pharmacologiques antérieures sur l’espèce P. erinaceus

1.4.2.Les causes de l’inflammation

1.4.3. Immunité innée et réaction inflammatoire

1.4.41.La réaction inflammatoire aiguë

1.4.5.Les médiateurs de l’inflammation

1.4.5.1.Le système du complément

Figure 1- 6: Biosynthèse des prostaglandines et des thromboxanes (Cipollone et al., 2008)

1.4.5.6.Le Platelet activating factor (PAF)

1.4.5.8.Les radicaux libres oxygénés (RLO)

1.4.5.9.Le monoxyde d’azote (NO)

1.4.6.Les étapes de l’inflammation aiguë

1.4.8.1.Les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS)

(49) acide acétylsalicylique

- Acides phénylacétiques et apparentés : le diclofénac (50) est un dérivé de l’acide