Zoubeidi Chahinaz

UNIVERSITE DE OUARGLA N° d’ordre :
N° de série :
FACULTÉ DES SCIENCES ET SCIENCES DE L'INGÉNIEUR

DÉPARTEMENT DE GÉNIE DES PROCÉDÉS
Mémoire
Présenté pour l'obtention du diplôme de
MAGISTER
Spécialité : Chimie organique
Option : Chimie organique industrielle
Par Melle: ZOUBEIDI CHAHINAZ
Thème
ETUDE DES ANTIOXYDANTS DANS LE
Rosmarinus Officinalis.Labiatea
Soutenu le : 23 /06/2004 devant la commission d’examen :
Dr : TouhamiLANEZ M.C. Université de Ouargla Président

Dr : Lakhdar SAKHRI M.C. Université de Ouargla Examinateur
Dr : Med.Ridha OUAHRANI M.C. Université de Ouargla Examinateur
Dr : Ladjel SEGNI M.C. Université de Ouargla Rapporteur
Dr : Malek RASSOUL Prof. C.U.O.El Boaghi Co-rapporteur
2003-2004
Table des matières
TABLE DES MATIERES
INTRODUCTION
PARTIE THEORIQUE
Chapitre .1 : Introduction sur la Rosmarinus officinalis. L
I.1. FAMILLE LABIATAE ..................................................................... 3
I.2. GENRE ROMARIN ......................................................................... 4
I.3. SYSTEMATIQUE BOTANIQUE DE LA PLANTE .......................... 4
I.4. ORIGINE ET RECOLTE DE LA PLANTE ...................................... 5
I.4. DOMAINE D’UTILISATION DE LA PLANTE................................. 5
I.4.1.Industrie agro-alimentaire ..................................................................... 5
I.4.2.Industrie cosmétique et parfumerie...................................................... 6
I.4.3.La thérapie .............................................................................................. 6
Chapitre .2: Composition chimique du Romarin
II.1. CHRONOLOGIE DE LA RECHERCHE SUR LE ROMARIN ......... 7
II.2. HUILE ESSENTIEL ........................................................................ 8
II.3. COMPOSITION PHENOLIQUE...................................................... 9
II.3.1.Les radicaux libres .............................................................................. 13
II.3.2.Peroxydation........................................................................................ 14
II.3.3.Devenir les radicaux libres…………………………………………….. .. 15
Chapitre .3: Les antioxydants et le mécanisme d'oxydation
III.1.INTRODUCTION............................................................................. 13
III.2.MECANISME D’OXYDATION ........................................................ 13
III.2.1.Les radicaux libres ............................................................................. 13
III.2.2.Peroxydation....................................................................................... 14
III.2.3.Devenir les radicaux libres ................................................................ 15
III.3.NATURE ET ROLE DES ANTIOXYDANTS ................................... 15
III.3.1.Antioxydants préventifs..................................................................... 16
III.3.2.Antioxydants par piège radicalaire ................................................... 16
III.4. ANTIOXYDANTS UTILISES DANS L’INDUSTRIE COSMETIQUE
ET L’INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE................................................ 16
III.4.1.Tocophérols (vitamine E)................................................................... 17
III.4.2.Les antioxydants phénoliques .......................................................... 17
III.4.3.Toxicité topiques des antioxydants.................................................. 17
III.4.4.Les méthodes de mesures du pouvoir antioxydant........................ 18
Table des matières
PARTIE PRATIQUE
Chapitre .1 : Isolation et identification de l’Acide Carnosique .

I.1.MATERIELS ET REACTIFS ............................................................. 19
I.1.2.Réactifs ................................................................................................. 19
I.1.2.Matériels................................................................................................ 19
I.1.2.A.Matériels chromotypographiques.........................................................................19
I.1.2.B.Matériels spectroscopiques .................................................................................19
I.1.2.C.Matériel végétal ...................................................................................................20
I.2.METHODE D’ISOLATION (METHODE DE PARIS) ............................... 21
I.3.PURIFICATION ET IDENTIFICATION DE L’EXTRAIT DU ROMARIN .... 22
I.3.1.Techniques de Purification …………… …………………………………22
I.3.2.Les étapes d’identifications de l’extrait de romarin .......................... 22
I.3.2.A.Méthodes chromatographiques ...........................................................................22
I.3.2.B.Methodes spectrales............................................................................................28
I.4.CONCLUSION .................................................................................. 31
Chapitre .2 : Pouvoir antioxydant de l’Acide Carnosique
II.1 INTRODUCTION .......................................................................... 32
II.2 PRINCIPE (METHODE DE MILLER) : ......................................... 32
II.3. MATERIELS ET REACTIFS......................................................... 33
II.3.1.Réactifs ................................................................................................ 33
II.3.2.Matériels............................................................................................... 33
II.4. MODE OPERATOIRE .................................................................. 33
II.4.1.Préparations des solutions ................................................................ 33
II.4.2.Mesure de la densité optique du mélange ........................................ 34
II.4. RESULTATS ET DISCUSSIONS ................................................. 34
II.5. CONCLUSION.............................................................................. 38
Chapitre .3 : Activité antibactérienne de l’Acide Carnosique
III.1. INTRODUCTION .......................................................................... 39
III.2. PRINCIPE ..................................................................................... 39
III.3. PROTOCOLE EXPERIMENTALE............................................... .40
III.3.1.Milieux de cultures, réactifs et materiels ......................................... 40
III.3.1..A.Matériels ...........................................................................................................40
III.3.1..B.Materiels ..........................................................................................................40
III.3.2.Mode opératoire .................................................................................... 41
III.3.3.Résultats et discutions ............................................................ 42
III.3.1.A.Identification des souches de références .......................................................42
III.3.3 B.Sensibilité des germes à l’acide carnosique...................................................42
III.3.3.C.Bactéries.........................................................................................................43
III.3.3.D.Les levures .....................................................................................................44
III.4.CONCLUSION ................................................................................ 45
Table des matières
CONCLUSION GENERALE
BIBLIOGRAPHIE
ANNEXE
Liste des : Tableaux, Figures, Graphes et Schémas
Liste des : Tableaux, Figures, Graphes et Schémas
N° : Titres
Tab. 1 : Les déplacements chimiques du différents protons caractéristiques de l’extrait de

Romarin
Tab .2 :
Les densités optiques des différentes solutions à analyser
Tab. 3 :
Résultats de ré-identification des souches utilisées
Fig.1: Rosmarinus Officinalis. L

Fig.2: Les structures des mono-terpènes majoritaires dans l’huile essentielle de Romarin.
Fig 3 : Structures des acides phénoliques dans le Romarin.
Fig.4 : Structures des flavones de Romarin
Fig .5.a, b, c.: Structures des différents diterpènes phénoliques du Romarin.
Fig. 6 : Les étapes de la réaction d’oxydation
Fig .7 : Appareil de RANCIMAT.
Fig.8. : Schémas de protocole d’isolation de l’acide Carnosique
Fig.9 : Chromatogramme de l’extrait de Romarin(méthode : 1)
Fig .10.A: Chromatogramme de l’extrait de Romarin(méthode : 2)
Fig .10.B: Chromatogramme de l’extrait de Romarin par GCMS
Fig. 11: Le spectre de masse( MS) du pic1
Fig. 12: Spectre de masse( MS) du pic2
Fig.13: Spectre UV de l’extrait de Romarin
Fig.14: Spectre infrarouge de l’extrait du Romarin
Fig.15: spectre RMN1H de l’extrait de Romarin
Fig. 16 l’acide Carnosique
Fig. 17: Résultats final de la phase d’analyse
Fig. 18: Sensibilité de la souche d’Escherichia coli
Fig. 19: Sensibilité de la souche Pseudomenas Aeruginosa
Fig. 20: Sensibilité de la souche Staphylococus aureus
Fig. 21: Sensibilité de la levure Candida Albicans
Fig. 22:
Graph. 1 : Evaluation la densité optique (l’activité antioxydante) du blanc
Graph. 2 : Evaluation la densité optique (l’activité antioxydante) du BHT
Graph. 3 : Evaluation de la densité optique (l’activité antioxydante) de l’α-Tocopherol
Graph. 4 : Evaluation de la densité optique (l’activité antioxydante) de l’acide Carnosique
Graph. 5 : C.C.A. des différents antioxydants examinés
Schémas .1 : L’inversion de l’acide Carnosique par le processus de lactonisation
Schémas .2 : Le mécanisme réactionnel deβ- carotène avec le radical peroxylinoléique
Introduction
Introduction
L’utilisation des antioxydants est nécessaire, aussi bien dans le domaine pharmaceutique
que celui de l’agroalimentaire ou de la cosmétique, pour prévenir contre les phénomènes
d’oxydation qui dépendent, d’une part aux facteurs environnementaux tel que la chaleur, la
lumière, l’humidité, l’oxygènes de l’air et la présence des microorganismes et d’autres
facteurs liés au produit en particulier, les interactions contenu- contenant entre les
ingrédients de la composition (excipients, principes actifs) et les articles de
conditionnements, d’autre part.
La présence des antioxydants aident à contribuent la réduction des pathologies en

neutralisant les radicaux libres qui sont produits par oxydation dans les tissus gras présent
dans l’organisme au niveaux de plusieurs systèmes (la peau, les poumons, les conduits
sanguines,…), Ces derniers sont affectés par la réaction de réduction des radicaux libres ou
ils ont cumulatives ce qui peut engendrer les maladies dégénératives suivantes :
− Cataractes
− Arthrite
− Vieillissement
− Maladies cardio-vasculaires
− Problèmes pulmonaires
− Certains cancers
La neutralisation des radicaux libres par les antioxydants pu traduit par :
− Combat l’effet nocif des radicaux libres

− Stimulant immunitaire
− Prévient plusieurs formes de cancers
− Retarde le processus du vieillissement
− Accélère la guérison des plaies
− Prévient les dommages cellulaires
− Protèges contre les maladies cardio-vasculaires
− Protège contre les allergies
− Désintoxique.
Le problème de nos jours, est la présence d’une très grande quantité des Radicaux libres,
qui sont dus à la fumé de cigarette, la pollution (voitures, industries), les nourritures
- 1-
Introduction
grasses (toxines), l’exercice (excès d’oxygènes), les rayons soleil (cancers de peau) ; ainsi
que le manque d’une variété d’antioxydants qui peut inhiber leur oxydation.
Pour remédier à ces problèmes, des recherches sont menés pour découvrir de nouveaux
antioxydants naturels qui peuvent substituer les antioxydants synthétiques dont l’effet
carcinologiques a été prouvé.
L’une des principales sources qui peut aboutir des antioxydants naturels ont les caractères
demandées est la règne végétale, en particulier les plantes supérieur.
Des investigations scientifiques ont été effectués sur un nombre des composés phénoliques,
qui ont été isolés et caractérisés dans certaines familles des plantes tel que la famille
Labiatae qui ont un pouvoir antioxydant comparatifs ou supérieur aux substances
synthétiques ou naturels tel que butyle hydroxy toluène (BHT), butyle hydroxy anizole
(BHA), et les vitamines comme les tocophérols.
L’étude des Antioxydants dans le Romarin est une perspective pour la découverte
des nouvelles substances naturelles dans les plantes algériennes ayant un pouvoir
antioxydant important, afin d’enrichir une variété des antioxydants naturels pour :
Substituer les antioxydants synthétiques qui ont des effets indésirables

contre l’organisme
Trouver des remèdes aux maladies citées au-dessus.
L’étude que nous avons mené au CRD Saîdal est constituée de quatre parties principales,
qui sont les suivantes :
1ère partie:
Un rappel théorique sur la description botanique de la plante et leur composition chimique

ainsi le mécanisme d’oxydation et le rôle des antioxydants.
2ème partie
L’isolation et l’identification de diterpène phénolique majoritaire l’ Acide Carnosique

dans la Rosmarinus Officinalis.L- partie arienne, par des méthodes chromatographiques
et spectacles.
3ème partie
Evaluation de pouvoir antioxydant de l’extrait obtenus par apport aux antioxydants

témoins, qu’ ils ont plus utilisés dans l’industrie , cosmétique ou agroalimentaire pour leur
- 2-
Introduction
pouvoir antioxydant important, et qui sont les suivants :
Synthétiques, en citant : BHT ;
Naturels : α- tocophérol(vitamine E).
Suivit par une synthèse statistique qui valorise et compare le pouvoir antioxydant de
l’acide Carnosique par apport à eux.
4ème partie
Identification de l’activité antibactérienne et antifongique de l’acide Carnosique sur

certaines espèces pathogènes de références.
On résume les résultats obtenus dans une conclusion générales.
- 3-
Partie Théorique
Chapitre I
Introduction sur le Romarin

Chapitre I : Introduction sur la Rosmarinus Officinalis. L
I.1. FAMILLE LABIATAE
Famille connue de puis l’oligocène, c’est l’une des familles les plus répandues dans le
bassin méditerranéen et spécialement en Algérie. Elle comprend plus de 3300 espèces et
environ 200 genres [1].
La famille Labiatae est composée des plantes herbacées ou arbustes, très rarement arbres
ou lianes. Elles ont des feuilles dicusées, sans stipules, les tiges souvent quadrangulaires
inflorescences. Fleurs cinq mères en général hermaphrodite; dite bilabiée. Fruits
tétrachènères, rarement une drape, presque toujours exabluminée [2].
I.2. GENRE ROMARIN
Le Romarin du latin rosmarinus officinalis «Rosée de la mère » Il comprends moins que la

seule espèce lincène rosmarinus officinalis linnaeus même si celle-ci comprend un grand
nombre de variétés [1,2], Le R.Lavendulaceus est le plus reconnu en Algérie, en particulier
[3].
C’est un arbrisseau aromatique, toujours vert de 1 à 2 m et qui peut vivre plus de trente
ans. Il a des feuilles sessiles, étroitement lancéolés enroulées sur les bords et coriaces
blanchâtres en dessous.
Ses fleurs d’un bleu pâle, le plus souvent maculées intérieurement de violet, sont disposées
en courtes grappes denses. à deux lèvres distincts et deux étamines [4].
I.3. SYSTEMATIQUE BOTANIQUE DE LA PLANTE
La systématique botanique est pour un chercheur la carte d’identification de la plante et

sans cette dernière, il est très difficile d’entamer un travail de recherche. On peut résumer
la systématique botanique de la plante comme suit [3] (Fig.1) :
− Embranchement : Angiospermes
− Classe : Dicotylédones
− Ordre : Tubiflorae
− Famille : Labiatae
− Genre : Rosmarinus
− Espèce : Officinalis
Fig.1. Rosmarinus Officinalis. L-4-

I.4. ORIGINE ET RECOLTE DE LA PLANTE

Aire géographique
Le Romarin spontané qui pousse sur les côtes méditerranéennes, et le sud-ouest de l’Asie,
est souvent cultivé dans les jardins comme clôture. Le Romarin affectionne
particulièrement les terrains calcaires. C’est pourquoi on le trouve essentiellement dans les
garrigues maquis non- loin de la mer.
En Algérie, le Romarin est l’une des sept espèces végétales excédant 50.000 hectares sur le
territoire national [3].
Appellations régionales en Algérie : En plus souvent
Région de l’Est : Eklil
Région de l’Ouest : Helhal
Région du Centre : Yazir
Récolte de la plante
La récolte du Romarin en fleurs est possible pendant presque toute l’année, mai on la
pratique avec plus de profit de mais à juillet ou septembre en temps chaud et sec [4].
I.4. DOMAINE D’UTILISATION DE LA PLANTE

I.4.1. Industrie agro-alimentaire
Les extraits végétaux de Romarin présentent un pouvoir antioxydant important et peuvent

être appliqués à la conservation des aliments et des huiles lipidiques [5, 6], ces propriétés
sont dues aux acides polyphénoliques (rosmarinique, caféique) [6, 7].
Alimentation
Les deux, l’épice et l’huile sont largement utilisés en alimentation, l’épice est utilisé dans
les boissons alcoolisées, les aliments cuits, viande et produits de viande, condiment et
assaisonnement, les aliments industriels, casse-croûte, sauces et autres, avec le niveau
maximum utilisé est d’environ 0.41% (4.098 ppm) dans les aliments cuits. L’huile est
utilisée dans les boissons alcoolisées et non, les desserts glacés, confiseries, aliments cuits,
-5-
gélatines et pouding, viande et produits de viande, condiments et assaisonnement, entre

autres, avec le niveau maximum utilisé est d’environ 0.003 % (26.2 ppm) [5].
Alimentation diététique, Tisanes herbales
des infusions, des poudre, extraits sec ou autres préparations galéniques pour usage interne
et externe, principalement contre les douleurs d’estomac [5, 8].
I.4.2. Industrie cosmétique et parfumerie
Au 19ème siècle l’essence de Romarin servait à la préparation de la très célèbre eau de

Cologne de la reine de Hongrie. Aujourd’hui elle rentre dans la composition, de
savonnerie, détergents, crèmes et la plupart des eaux de Cologne ; le taux d’utilisation
maximum est rapporté à 1% dans la dernière catégorie [5].
I.4.3. La thérapie
Le Romarin était déjà cité en médecine arabe classique (Leclerc 1877) pour ses
propriétés hépatotrope, diurétique et emménagogue qui sont dues aux présences des
flavonoïdes à savoir des glucosides de la lutoline, de l’apigénone, et peut être de méthyl-
4΄-genkwanine en synergie avec les acides phénoliques [7, 8].
Les feuilles de Romarin sont utilisées dans la phytomédcine européen pour brûlures
d’estomacs et thérapie d’appui, des maladies rhumatismales ; en usage externe pour les
problèmes de circulation ; en bains, l’herbe est utilisé comme stimulant externe pour
l’accroissement sanguin fourni à la peau [5], C’est aussi un bon excitant de cuir chevelu [7].
On sait de longue temps que le Romarin est cholagogue et cholérétique, ces effets
semblent en relation avec la présence de nombreux acides phénoliques signalés dans
beaucoup de labiées (Lit- Vinenko, voir bugle, marrube), et qui sont ici les acides :
caféique, chlorogénique, néochlorogénique, reosmarinique, ce dernier, de saveur
astringente, consistant en un depside caféique et dihydrocaféique [5, 8, 9].
Les diterpènes phénoliques présentant dans le Romarin tel que l'acide carnosique et le
carnosol ont des effets d’inhibition contre des virus de HIV-1 [10] et certains cancers et
d’autre entrants dans cette fraction ont un effets carcinologique [5, 9, 11].
-6-
Chapitre II
Composition chimique du Romarin

Chapitre II : Composition chimique du Romarin
II.1. CHRONOLOGIE DE LA RECHERCHE SUR LE

ROMARIN
L’usage traditionnel de Romarin comme épice, ainsi que les propriétés antioxydantes de
leurs feuilles à laisser plusieurs groupes de recherche à étudier la composition de la plante
et les constituants responsables de cette activité.
La première approche pour l’utilisation des plantes aromatiques comme antioxydant est
décrite par Chipault et al en 1952.
En 1955, Rac et Ostric ont utilisé l’extrait des feuilles de Romarin comme antioxydant
naturel. [14, 16]
En 1966, Briscorn et al ont isolé le Carnosol dans le Romarin et ils ont attribuée l’activité
antioxydant ce principe actif.
Dans les années soixante et soixante-dix, la plus part des travaux dans cet axe sont
effectués par des chercheurs japonais, Satio et Al en 1976.
Fin des années soixante-dix, Chang et Al proposent un système d’extraction des

antioxydants naturels de Romarin et de Soja. Une revue complète de ce sujet est publiée en
1985 par Kramer.
Les propriétés antioxydntes de Romarin sont principalement, due à la présence des

diterpènes phénoliques (Schwarz et Ternes. en 1992 a, b, Schwarz et Al en 1992), tel que
l’acide Carnosique le Carnosol, le Rosmanol, etc [11]. Ces substances sont inscrites dans la
littérature.
Dans les années quatre-vingt, Inatani et Nakatani prend le chemin pour étudier les
constituants de la fraction de diterpènes phénoliques et qui sont responsables aux effets
antioxydants de Romarin [11, 12, 13].
Au début des années quatre-vingt-dix, les recherches sont orientés vers [10, 11, 12, 14] :
L’isolation de l’acide Carnosique à partir du Romarin et la synthèse des autres

diterpènes phénoliques;
L’étude des différentes activités biologiques de cette fraction(diterpènes
phénoliques)(in système vivo ou vitro).
-7-
II.2. HUILE ESSENTIELLE
L’huile essentielle de Romarin est un liquide incolore ou jaunâtre dont l’odeur est
fortement camphré, pénétrante de saveur très aromatique, Les sommités fleuries
fournissent plus de 10 à 25 ml/Kg [15], Le type algérienne renferme plus que [16] :
0,74 % dans la plante sèche ;

0,1 % dans les feuilles ;
1,4 % dans les fleurs et rameux.
Remarque : La teneur en huile essentielle dans le Romarin varie en fonction de l’origine
géo-climatique de la plante.
Plus de 50 composants mono-terpèniques rentrent dans la composition chimique d’huile

essentiel de Romarin dont les constituants principaux sont [5, 9,16] (Fig. 2).
− Camphre (15-25 %) − 1,8 Cinéol (15-50%)

− α- Pinène (19.6 %) − Limonène (3.6%)
− Bornéol libre et estérifié (10.0 %)
Un nombre de chercheurs s’intéressent à l’étude de la composition structurale d’huile

essentielle de Romarin ainsi que leur activité biologique(l’activité antimicrobienne et
antoxydante), on cite [9, 17,18 ]:
Rusmussen et Al en 1972
CABO Torres et Al en 1972
R.S. Farag et Al en 1989
Deans et Al en 1998
C (C H 3 ) 2
Camphre α -Pinène
Fig.2. Les structures des mono-terpènes majoritaires dans l’huile essentielle de Romarin.
-8-
II.3. COMPOSITION PHENOLIQUE
II.3.1.LES ACIDES PHENOLIQUES
Les acides phénoliques présents dans le Romarin et à des teneurs importantes sont[14] :
− l’acide rosmarinique
− l’acide caféique
− l’acide Néo-chlorogéniqu e
− l’acide vanillîque
OH
R O=CH-CH=C
2
HO
O
HO CH2-CH-COOH
R1
R1 R2 Acide Rosmarinique
Acide vanillîque COOH OCH3
l’acide caféique CH=CH-COOH OCH3
Fig. 3. Structures des acides phénoliques dans le Romarin.
Parmi les auteurs signalent la présence des ces acides phénoliques dans le Rosmarinus
Officinalis. L [8, 14] :
Benzeger et Al en 1980
Graza et Ruff en 1984
Lamaisons J-L, Petit Jeanen 1991
M.-Culvier et Al en 1996
Scarpati et Orient en 1958
II.3.2. FLAVONIODES
Plus de dix flavonïodes sont isolés et identifiés dans le Romarin, La plus part d’entre eux
sont des dérivés de flavone parmi eux on cite : l’apégénine, le genkwanine, le 6-méthoxy
genkwanine, etc.[8, 14]
-9-
Flavones
− Apigénine − Lutéoline
− Genkwanine − 6- méthoxy Lutéoline
− 6- méthoxy Lutéoline –méthyl éther − Genkwanine-4̀- métyl éther
− 4̀-,5, 7, 8 tétera –OH flavone − 6- méthoxyLutéoline
Ces molécules sont identifiées et isolées par plusieurs auteurs [8, 14], parmi eux :
Briesconet Domling en 1967

Briescon et Michel en 1968
Sendra et Al en 1969
Lallment Guillbert et Benzager-Beauquesne en 1970
Briescon et Al en 1973
M-E.Cuveller en 1996
R 5'
R 4'
R8
R7 O
R6
OH O
R6 R7 R8 R̀4 R̀5
Apigénine H OH H OH H
Genkwanine H OCH3 H OH H
6-méthoxy Genkwanine OCH3 OCH3 H H OH
Genkwanine-4̀- métyl éther H OCH3 H OCH3 OH
Lutéoline H OH H OH OH
6- méthoxy-Lutéoline –méthyl éther OCH3 OCH3 H OH OH
6- méthoxy-Lutéoline OCH3 OH H OH OH
4̀-,5, 7, 8 tétera –OH-flavone H OH OH OH H
6- méthoxyLutéoline 7-glucoside OH O-Gu H OH OH
Fig.4. Structures des flavones de Romarin
-10-
II.3.3. DITERPENES
Actuellement, plus de douze diterpènes, sont isolés et identifiés dans le Romarin [14], ils
sont responsables à l’activité antioxydante de la plante, à titre d’exemple: l’acide
Carnosique, le carnosol, le 12-Acide méthoxy carnosique, le rosmanol, l’epirosmanol, etc.
[10, 11 12, 13, 14, 19, 20, 21].
L’acide carnosique est le constituant majoritaire dans cette fraction phénoliques, Il a une
teneur plus de 0,35 % de feuilles sèches de la plante ainsi qu’un pouvoir antioxydant le plus
puissant qu’aux autres diterpènes [10, 11, 12, 21].
Plusieurs études montrent que les ditérpènes lactoniques importants présents dans le
Romarin sont des produits de processus de δ ou γ lactone de l’acide Carnosique [10, 11, 20,
21].
On peut groupés les diterpènes du Romarin on trois classes selon deux critères :
− La disposition de système de lactonisation.
− Les substitutions des fonctions hydroxyles ou méthoxy aux différents cites

actifs des molécules.
1èreClasse
Les diterpènes formés de lactone entre C6-C20 et une fonction hydroxyle ou méthoxyle au
carbones C7 (Fig. 5.a)
− Rosmanol est identifié par Inatani et Al, 1982.

− Epirosmanol est identifié par Inatani et Nakatani, 1984.
− Epirosmanol Ethyl éther est identifié par Inatani et Al,.1983.
L’élucidation structurale a été confirmée par plusieurs auteurs [8, 14].
2èmeClasse
La structure de cette catégorie est constituée d’un système de lactonisation au niveau de la

liaison C7 –C20 et d’une fonction hydroxyle ou méthoxyle au carbone C6 (Fig. 5.b):
− Carnosol et Epirosmanol sont identifiés par Inatni et Al en 1982.

− Epirosmanol ethyl éther, est identifié par Inatni et Al en 1984.
-11-
3ème Classe
Trois constituants rentrent dans la composition de cette classe, à savoir (Fig.5. c) :
− Rosmordial est identifié et isolé par Nikatani et Al en 1982.

− 12-Acide Méthoxy Carnosique est identifié et isolé par L.Stiven et AL en 1996.
− Acide Carnosique.
L’isolation et l’étude des effets biologiques de l’acide Carnosique sont achevés par
plusieurs auteurs, on cite :
− Briescorn et Al en 1969
− Inatani et Al en 1982
− K. Schawrz et W.Ternes en 1992
− Paris et Al en 1993
− L.Stiven et AL en 1996
OH OH
HO HO
O O
C C
O
O
R R
2
R R 2
1 1
R1 R2 R1 R2
Rosmanol H OH Carnosol H H
Epirosmanol OH H Epiisorosmanol OH H
Epirosmanol-étyl éther OCH3 H Epiisorosmanol- étyl éther OCH3 H
–a– –b–
OH
OH
O HO
O RO
CO
CHO
CHO
Rosmordiale Rosmanol R=H

Epirosmanol R = OH
–c–
Fig .5. Structures des différents diterpènes phénoliques du Romarin.
-12-
Chapitre III
Les antioxydants et le mécanisme

d’oxydation
Chapitre III : Les antioxydants et le mécanisme d’oxydation
III.1. INTRODUCTION
L’antioxydant, comme son nom l’indique est une substance chimique synthétique ou
naturelle qui empêche ou inhibe les réactions d’oxydation de type radicalaire des corps
gras.
L’utilisation des antioxydants dans l’industrie cosmétique, pharmaceutique ou alimentaire

est nécessaire à la conservation des corps gras qui entrent comme ingrédient dans les
préparations.
III.2. MECANISME D’OXYDATION
Dans l’oxydation d’un corps gras, en contact avec l’oxygène de l’air ou inclus dans une
membrane biologique, intervient un type particulier des intermédiaires réactionnels à
courte duré de vie les «radicaux libres».
III.2.1.Les radicaux libres
Les radicaux libres sont des espèces chimiques, neutres ou chargés, qui possèdent un
électron non approprié, dit aussi «électron célibataire», Cet électron leur confère des
propriétés physico-chimiques particulières.
Les radicaux libres sont instables et ont tendance à rechercher un état plus stable en
recouvrant un nombre pair d’électrons. La durée de vie des radicaux libres est très courte.
Une réaction en « chaînes » s’établit quant une nouvelle espèce radicalaire est formé.
Ils sont produit par :
Voie Chimique (agents oxydants ou des catalyseurs chimiques)

Voie Photochimique (rayonnement)
Voie Biologique (catalyseurs enzymatiques)
Les radicaux libres les plus importants sont ceux qui provient de l’oxygène dissout dans
l’eau, et de la peroxydation des corps gras (Fig. 6).
O2• «Anion supéroxyde»

R•+ O•–•O → R–O–O•
Radicaux Peroxydes:
OH• «Radical hydroxyle »
oxygénés:
Fig. 6. Les Radicaux Libres de Peroxydation.
-13-
III.2.2.Peroxydation
L’oxydation purement chimique d’un corps gras a pour origine trois étapes qui sont les
suivantes[22] (Fig. 7) :
Etape d’initiation
Lipide insaturé L-H transforme en radical L• , elle est primordiale, car les acides
polyinsaturés de très haute pureté longtemps stable en présence d’oxygène.
Etape de propagation
fixation d’oxygène sur L• pour conduire un radical hydroperoxyde LOO• ou elle constitue
au sens propre le phénomène de peroxydation, dans cette fixation constitue au sens propre
le phénomène de peroxydation, ce radical formé va initier à son tour l’oxydation d’une
autre molécule de lipide pour régénérer un radical L• et former un hydroperoxyde LOOH.
Etape de terminaison
Le processus de terminaison le plus important pour les radicaux hydroperoxydes est, à

température ambiante, celui qui passe par un tétra-oxyde et conduit à la formation d’une
cétone, d’un alcool et de l’oxygène dans un état singulière (phénomène de
rancissement)[22].
Corps gras
oxydation purement chimique en préesence d'O 2
R-H
initiateur
.
R + H
.
inducteur Cas n°1: Liaison de covalente C-H; ∆ E =77 kcal/mol
Cas n°2: Liaision de covalente C=H;∆°E =52 kcal/mol
Cas n°2:Liaison de covalente C=H;∆ E° =52 kcal/mol
R
H H
R
H
. R
R
Stabilisation par résonance

H
. .
H R
.
R
H
R R
+ O-O R
O-O
. O-O R
L'attaque de l'O 2avec les éspèces radicalaires Cette fixation d'oxygène constitue au sens
propre le phènomène de peroxydation
-14-
l'autoxydation
. . .
H ou R + L-H L + H2 Initiaion
. .
L + O2 LOO
. . Propagation
LOO + LH LOOH + L
Le radical formé va initier une nouvelle
autoxydation à son tour l'oxydation d'une
nouvelle molécule
L'étape de terminison que ne peut se faire que par:
α
A. Piégeage ( et là le rôle des antioxydants anti-radicalaires, exemple: -Tocopherols):
. .
LOO + α -ToH LOOH + α - To
B. Fusion:
- Formaion de dimères:
.
α -To + α -To
. Démerisation
- Formaion des produits inertes:

. .
LOO + α-To Produits inertes ( alcools, cétones, acides, ect.)
Fig. 7: Les étapes de la réaction d’oxydation
III.2.3.Devenir les radicaux libres
Les radicaux libres – oxygénés ou non – formés à partir des chaînes grasses se stabilisent
selon plusieurs mécanismes[22].
La migration des doubles liaisons avec changement de configuration ;

La rupture de la chaîne, avec création d’un nouveau radical ;
Le transfert de l’électron célibataire à une autre molécule, comme on l’avant vu,
initier une réaction en chaîne. Il peut s’agir du «piégeage»de radical par une molécule
capable de capter très facilement un l’électron célibataire, et là le rôle des antioxydants
antiradicalaires comme la vitamine E(α-Tocophérol), les gallates de propyle, les
polyphénoles ainsi que : les flavonîodes les diterpènes et les stérols.
La création de terminaison par dimérisation ou contact avec autre radical fournit
nécessairement des espèces nouvelles.
-15-
III.3. NATURE ET ROLE DES ANTIOXYD ANTS
On distingue deux types d’antioxydants[22, 23] :
III.3.1.Antioxydants préventifs
Ces produits sont capables d’inhiber la production des radicaux qui servent d’initiateurs à
la réaction d’oxydation, On peut les classés selon leurs rôles:
Substances décomposants les hydroperoxydes en alcools, comme les thiols

(glutathion, acides aminés soufrés) et des sulfures.
Substances complexants les doubles liaisons qui les rendent moins sensibles à
l’oxydation.
Protecteurs vis-à-vis des ultraviolets, comme les carotènes.
Chélatants des métaux promoteurs d’oxydation type Fer et Cuivre.
III.3.2.Antioxydants par piège radicalaire
Ce type d’antioxydants capables d’interrompre la réaction en chaîne en agissant comme

donneur d’hydrogène vis-à-vis d’un radical hydroperoxyde. C’est à cette catégorie
qu’appartient les α- tocophérols et les différents antioxydants phénoliques.
Les radicaux hydroperoxydes formés sont donc piégés par un capteur (α-tocophérols, les
polyphénols ainsi que : les flavonoïdes, les diterpènes etc, ou toute molécule présentante
une liaison « Captoaditive »)
Au fond, on comprend donc un piège à radicaux de ce type, se transforme lui-même en

radical libre, son pouvoir antioxydant dépend de la stabilité relative des différentes
réactions soit favorisée ou le cas échéant d’un antioxydants puisse être pro- oxydant,
initiateur de la peroxydation des lipides.
III.4. ANTIOXYDANTS UTILISES DANS L’INDUSTRIE

COSMETIQUE ET L’INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE
Les antioxydants utilisés dans ces industries doivent répondre à des critères de choix
sévères, parmi eux :
Ils doivent protéger de l’oxydation due à l’air ;
-16-
Les dégradations photo- induites ;

Ne pas altérer l’aspect, l’odeur ou la couleur des produits ;
Ne pas être toxique ou allergisant.
III.4.1.Tocophérols (vitamine E)
Les huit tocophérols et totriénol naturels isolés représentent une famille des produits très
homogènes, constitue d’un reste d’hydroquinone substitué par un ou plusieurs groupes
méthyles, et d’une chaîne polyisoprénique plus au moins saturée[22] .
Les tocophérols sont largement utilisés dans ces industries et principalement en association
avec d’autres antioxydants, parmi les tocophérols, les seuls qui aient une importance
pratique sont[22] :
L ’α- tocophérol, le plus actif du point de vue biologique tocophérol (le plus
présent dans l’huile de tournesol et l’huile d’olive) ;
Le β- tocophérol, présent dans l’huile de germe de blé ;
Le γ- tocophérol, principal tocophérol de l’huile de soja.
III.4.2.Les antioxydants phénoliques
On distingue deux types obtenus par voies différentes, qui sont les suivants :
D’origine naturels : Dans la nature et en particulier dans le règne végétal, de

nombreuses substances présentent des propriétés antioxydantes, on cite :
Les polyphénols dans certaines genres de la famille labiatae [1, 21, 22] comme
l’acides rosmariniques et les‘acides cafféïques, et
Les diterpènes, tel que l’acide carnosique, le carnosol, l’epirosmanol etc.;
Flavonoïde des plantes, quercétine, myricétine, etc.
Pour ces produits naturels, certains travaux font état de pouvoirs antioxydant
supérieurs à celui de BHT [11, 14, 21] .
Produits de synthèses : Il s‘agit du butyl hydroxy toluène ou BHT, du butyl

hydroxy anisole ou BHA et des esters de l’acide gallique tel que les gallates de
propyle, etc.[22]
-17-
III.4.3.Toxicité topiques des antioxydants
Le principal risque d’utilisation des antioxydants dans le domaine cosmétique ou le

domaine pharmaceutique est celui de réactions d’hypersensibilités au contact du peau[14,
22].
Il existe beaucoup de travaux de recherches sur les effets biologiques des BHA/BHT, qui
tournent autour de leurs actions au niveau du métabolisme énergétique des cellules ainsi
que l’effet carcinologique.
III.4.4.Les méthodes de mesures du pouvoir antioxydant
Il est relativement difficile de comparer l’activité des antioxydants entre eux, ce qui
permettrait de les classés selon une échelle unique.
En pratique, leurs utilisations sont, bien souvent empirique, et l’on se base sur les indices
chimiques permettant d’apprécier l’état d’oxydation d’un corps gras. Ce sont[21, 22,] :
Surtout l’indice de peroxyde ;

L’analyse des produits volatils en chromatographie en phase gazeuse par la technique
de l’espace de tête dynamique, et en particulier le dosage du pentane qui paraît un bon
traceur.
La tenue au Rancimat (Fig.8), appareil commercialisé depuis quelques années, et qui
réalise un test d’oxydabilité accélérée est très utile pour faire apparaître l’effet de l’addition
d’un antioxydant.
Pour mesurer l’activité antioxydante

proprement dite, telle que celle d’un extrait
naturel, on dispose d’une méthode décrite
par PRATT[23] est basée sur
l’autoxydation du β-carotène par l’acide
linoléique oxydé par l’air in situ, on mesure
par la spectrophotométrie la diminution de
la densité optique à 470 nm en présence ou
non de l’antioxydant[23] .
Fig.8. Appareil de RANCIMAT.
-18-
Partie Pratique
Chapitre 1
Isolation et identification de l’acide

Carnosique
Chapitre 1 : Isolation et identification de l’acide Carnosique
I.1.MATERIELS ET REACTIFS
I.1.1. REACTIFS
- Ethanol (pour HPLC ) 99.8 % Merck

- Acétonitrile(pour HPLC)Reidel de Haën
- n-Hexane (pour analyse)95% Prochima
- n-Heptane(pour analyse)99% Merck
- Bicarbonate de sodium- Prochima
- Acide Tri- Chloro Acétique T.C.A.(pur)LABOSI
- Acide Orthophosphorique(pur)Merck
- Eau distillée(laboratoire de chimie analytique CRD-SAIDAL ; pH =6.65)
I.1.2. MATERIELS
- Rota –vapeur : IKA. WERK-K

- Point de fusion : Buchi Melting Point B-545
I.1.2.A.MATERIELS CHROMATOGRAPHIQUES
On a utilisé deux équipements différents de la chromatographie liquide à haute

performance (HPCL) qui sont les suivants :
HPLC Analytique [Shimadzu]
- Pompe : LC-8A Shimadzu

- Unité de contrôle : SCL-10VAP VP Shimadzu
- Unité de détection : SPD 10AV .VP Shimadzu
HPLC Analytique [Waters]
- Pompe : 600pump Waters

- Unité de contrôle : Controller 600 Waters
- Unité de détection : 2487 Dual λ Absorbance Waters
Chromatographie gaz couplée à la masse(GC/MS) :
Chromatographie gaz(GC) : Agilent Technologies 6890N

Unité de détection(MS) : Agilent 5973 Network Mass Selective Detector
I.1.2.B. MATERIELS SPECTROSCOPIQUES

− Spectrophotométrie U.V. Visible : JASCO V530 UV- VIS
-19-
− Spectrophotométrie Infra Rouge : FITR Nicolet 550

− RMN1H : spectromètre RMN Varian 300 MHz ( Acétone d6; T Ambiante, TMS)
I.1.2.C. MATERIEL VEGETAL
La matière végétale est récoltée du la région de Batna l’Est d‘Algérie au mois de mai
(05.05.2003 - une semaine avant l’utilisation).
La partie récoltée est la partie arienne « feuilles, tiges, tiges », Elle était séchée pendant cinq
jours à l’air et à l’ombre, puis était conservée dans des flacons ombrés et bien fermés(sans
humidité).
-20-
I.2. METHODE D’ISOLATION (Méthode de Paris)

n La poudre sèche de la partie arienne de la plante est macérée dans l’éthanol pendant six
heures avec agitation ; l’opération est effectuée trois fois successive.
o Les solutions de macération sont filtrées et réunies dans un flacon ombré, après
évaporation de l’éthanol 98. 9 % ; on obtient un extrait sec.
p Ajouter le n-hexane, et conserver le mélange pendant soixante-dix heures, filtrer et

évaporer jusqu’au 1/3 de volume initiale de n-hexane. Laver trois fois l’extrait de n- hexane
par 1l de la solution de bicarbonates de sodium 0.5% puis réunir la phase aqueuse et ajuster
le pH de cette solution à 2.2 par l’acide phosphorique.
q Laver, encore une foie, la phase aqueuse acidifiée trois fois par le n- hexane, réunir la
phase organique et évaporer sous-vide à sec, le résidu se cristallise rapidement par l’addition
de n- hexane, on recristallise dans le n- pentane.
Protocole d’extraction ( méthode de Paris)
Matière végétale
n (partie arienne sèche)
macérée dans l’éthanol
o Résidu
Sec
Extrait de n- hexane
p Extrait
aqueux
Reextrait de n- hexane
q Acide Carnosique
(Cristaux) jaune
pâles)
Fig.9 : Schémas de protocole d’isolation de l’acide Carnosique
-21-
I.3. PURIFICATION ET IDENTIFICATION DE L’EXTRAIT

DE ROMARIN
I.3.1.TECHNIQUE DE PURIFICATION
Après la recristallisation de l’extrait obtenu par le n-heptane, des cristaux jaunes pâles sont
apparais et qu’ont un point de fusion est égale à 192.8°C. Selon les travaux effectués
auparavant, cette valeur est comparable au point de fusion de l’ acide Carnosique (189 à 192
°C) [10, 19, 21].
Le rendement de l’extraction en matériel végétal(partie arienne) est le suivant :
0.37% (extrait brut) ;

0.32% (extrait pur après la recristallisation par le n- heptane)
I.3.2. LES ETAPES D’IDENTIFICATIONS
Pour identifier la composition structurale de l’extrait obtenu de Romarin on a basé sur les
méthodes d’analyses suivantes :
I.3.2.A.METHODES CHROMATOGRAPHIQUES
Deux méthodes chromatographiques sont utilisées pour identifier l’extrait isolé:
− La chromatographie liquide à haute performance(HPLC)

− la chromatographie gaz couplé par à la masse(GC/MS)
Chromatographie liquide à haute performance(HPLC)
Conditions opératoires :
Deux modes chromatographiques ont été suivies, pour identifiée la composition de l’extrait
végétal obtenu et qui sont les suivants :
Méthode(1): La méthode est proposée par K.Schwarz et W. Ternes(1992) [11, 21] .
− Colonne(phase stationnaire) : C_18 ; Waters. 250x4.6mm

− Phase mobile :
• Acétonitrile : 65 %
• Eau acidifiée 0.5% de l’acide phosphorique et 1 mM d’EDTA : 35 %
-22-
− Longueur d’onde d’absorption maximale, λmax : 230 nm
− Débit de la phase mobile : 1 ml/min

− Mode d élution : Isocratique
− Volume injecté : 20µL
Méthode (2 ): La deuxième méthode était proposée, aussi par K.Schwarz et W.

Ternes(1992) pour séparer les différents diterpènes synthétisés à partir de l’acide Carnosique
puis était modifiée par S.L.Richheimer et al(1996) [11, 21] .
− Colonne(phase stationnaire) : C_18 ; ODS. 250x4.6mm

− Phase mobile :
• Acétonitrile : 65 %
• Eau acidifiée à 0.15% de TCA: 35 %
− Longueur d’onde d’absorption maximale λmax: 230 nm

− Débit de la phase mobile : 1 mL/min
− Mode d élution : Isocratique
− Volume injecté : 20 µL
Remarque :
− L’utilisation de la solution tampon de l’EDTA dans la phase mobile du la première

méthode vient pour éviter l’inversion lactonique de l’Acide Carnosique aux autres
diterpènes phénoliques au cours de la séparation[11, 21].
− Les solutions échantillons sont préparées dans l’éthanol (T = 98.9 %) .
Résultats et discussions :
D’après les chromatogrammes obtenus par les deux méthodes citées ci dessus, l’extrait
présente qu’un seul composant majoritaire correspond au pic suivant (Voir Fig. 10. A,B ).
Tr(méthode 1) = 13.047. min

Tr(méthode 2) = 28.217min
Ce qui confirme que l’extraction réalisée est sélective pour qu’un seul constituant. La teneur
de ce dernier est plus que 93.53% (selon l’identification par la méthode 1).
-23-
Fig. 10.A: Chromatogramme de l’extrait du Romarin(méthode : 1)
Fig. 10.B : Chromatogramme de l’extrait du Romarin(méthode : 2)
-24-
Chromatographie gaz couplée à la masse(GC/MS)
L’identification de la masse moléculaire des substances extraites à partir des plantes et qui
sont sensibles à la chaleur et à la lumière, nécessite des méthodes d’analyses un peu plus
délicates.
Plusieurs investigations montrent que l’acide Carnosique est très sensible à la chaleur et il
peut se converti facilement en Carnosol puis en d’autres dérivés par le processus de
lactonisation [11, 21] (Schémas. 1 ).
OH
HO
O
O
OH
Rosmanol
OH OH
HO OH
HO HO
HO
CO O
O
O
O
OMe
Acide Carnosique 7- Methyl-epirosmanol

Carnosol
OH
HO
O
O
OH
Epirosmanol
Schémas. 1 : Processus de l’inversion lactonique de l’Acide Carnosique
C’est pour cette raison que les méthodes décrites à la littérature pour identifier le spectre de
masse sont basées sur la chromatographie liquide couplée à la masse (LC/MS) [20].
Mais vu l’absence de cette méthode, on est poussé d’utiliser la chromatographie gaz couplée
à la masse (GC/MS), malgré l’influence de la température de séparation sur la structure de
nos produits.
Conditions opératoires :
− La colonne : DB5[ L : 30m ; ØI : 0.32, épaisseur de film : 0.25 µm ; poly-méthylphenyl

siloxane(5% phenyl) ]
− Température initiale : 80 °C(5 min)
− Température final : 285°C(5 min)
− La rampe : 3°C/min(70 min)
-25-
− Gaz vecteur : Hélium , débit = 50 kPa

− Débit de fuite : 50 ml/min
− Température de l’interface GC/MS : 250°C
− Température de MS(Impact Electronique) : 200°C
− Courant de MS(Impact Electronique) : 156 µA
Le chromatogramme obtenu(Fig .11) présente deux pics qui sont les suivants :
Pic1 à tr = 47.749 min

Pic2 à tr = 57.122 min
Abundance
240000
TIC: ACIC.D 47.749
220000
57.122
200000
180000
160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
10.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.0065.0070.00
Time-->
Fig. 11 : Chromatogramme de l’extrait du Romarin par GC/MS

Le balayage des deux pics majoritaires par le détecteur masse(MS) donne les spectres de
masse corresponds comme suit :
Abundance
Scan 4027 (47.749 min): ACIC.D

8500
8000
7500 286
7000
6500 230
6000
5500
5000
41 215
4500
4000
3500 243
115 123
3000
271
2500
55 69 128 204
2000
9 15 165
1500 187
1000 95
500 257
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450
m/z-->
Fig. 12 : Le spectre de masse( MS) du pic1
-26-
Abundance
Scan 5003 (57.122 min): ACIC.D

7000
6500
6000
5500
5000
286
4500
4000
3500
3000
41 230
2500
2000
1500 243
1000 55 69 115 128 204 218
271
91 103
500 332
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450
m/z-->
Fig. 13: Spectre de masse( MS) du pic2
Le pic1 à tr = 47.749 min donne un spectre masse similaire au spectre de masse du Caronsol
[11] (Annexe.1).
Selon les travaux de K.Schwarz et W.Ternes le pic2 à tr = 57.122 min présente un spectre
masse identique au spectre masse de l’acide Carnosique [11, 21] (Annexe.2). Le spectre masse
de l’extrait isolées du Romarin montre que la masse moléculaire du constituant majoritaire
est celle de l’acide Carnosique : M = 332.1 g/mol
Les fragments principaux pour les deux pics sont résumés comme suit :
Carnosol tr = 47.749 min Acide Carnosique tr = 57.122 min

m/z [+M - CO2] = 286 m/z [+M] = 332
m/z [+M - CO2 - 2H] = 284 m/z [+M - CO2 - 2H ] = 286
m/z [+M - CO2 - CH3] = 271 m/z [+M - CO2 - CH3] = 271
m/z [+M - CO2 - (2H + CH3] = 269
Vu les résultats obtenus par la chromatographie liquide à haute performance(HPLC) et

qui confirment la présence qu’un seul constituant majoritaire dans l’extrait du Romarin,
ainsi que les résultats obtenus par la chromatographie gaz couplée à la masse (GC/MS) et qui
confirment la présence des deux pics correspondants respectivement à l’acide le Carnosol
(pic1) et. l’Acide Carnosique (pic2), on peut déduire que la masse moléculaire du produits
majoritaire présent dans la fraction végétale isolée(M = 332 g/mol) est celle de l’Acide
Carnosique(M = 332 g/mol) [10, 11, 19, 21].
-27-
Pour confirmer les résultats d’identification obtenus par les analyses

chromatographiques, On a suivit certaines méthodes d’analyses spectrales, on cite:
− Spectrophotométrie U.V ;
− Spectrophotométrie Infrarouge ;
− RMN ¹H.
I.3.2.B.METHODES SPECTRALES
Spectrophotométrie U.V.
On a fait un balayage d’une solution de l’extrait préparé dans l’éthanol à une concentration
de 5 µg/ml. Le balayage est fait dans la gamme de 200 nm à 400 nm.
Le spectre UV de la solution d’extrait présente deux absorbances maximales correspond

respectivement les deux longueurs d’ondes suivantes(Fig. 14) :
λmax = 238nm
λ max = 288 nm
Les deux absorbances maximales correspondent , pratiquement à des transitions

électroniques des deux types :
- Transition n π* correspond a une fonction carbonyle -C=O

- Transition π π* correspond a une liaison insaturée -C=C-
Fig.14 : Spectre UV de l’extrait du Romarin(Ethanol)
-28-
Spectrophotométrie infrarouge(FTIR)
On a préparé une pastille de KBr par l’extrait solide, l’analyse spectrale par FTIR donne le
spectre suivant (Fig. 15) :
Fig.15 : Spectre infrarouge de l’extrait du Romarin
On peut déduit à partir des bondes présentes dans le spectre infrarouge, les fonctions
suivantes :
-1
3540 cm (VV) : correspond au groupe OH de C20(Dômling et al , K.Schewres et
W.Ternes [11])
-1
3460 cm (VV) : correspond aux groupes OH non associées de C11 et C12
-1
3000-1800 cm (V V): correspond aux groupes -CH,-CH2,-CH3, et -C =H
-1
1645 cm (VV) : correspond au C=O d’une fonction acide (Dômling et al , K.Schewres
et W.Ternes [11]).
-1
1560cm (VV): correspond au groupes C=C aromatiques.
-1
1500 à 1300 cm (VD) : corresponds aux groupes CH, CH2, CH3 et C-O
-1
760 et 610 cm (VD) : correspond à un cycle aromatique substitué(Ar-)
-29-
A partir de ces résultats et les données de la littérature, on peut conclure que le spectre
infrarouge du produit isolé traduit les principales bandes de l’acide Carnosique
Spectrophotométrie RMN 1H :
On a utilisé l’acétone d6 comme solvant, l’analyse par RMN 1H donne le spectre suivant
(Fig.16) :
17
OH
HO 12 15
HO 20
11 16
13
CO 14
1 9
2 10 8
3 5 7
4 6
19
18
Fig. 16 : spectre RMN 1H de l’extrait du Romarin
Résultats et discussions
1
Le spectre RMN H de l’extrait du Romarin montre les déplacements chimiques
caractéristiques suivantes(Tab. 3)
Tab. 3 : Les déplacements chimiques du différents protons caractéristiques de l’extrait du Romarin
Proton (H) δ(ppm) Multiplicité

1α 1.14 ddd
1β 3.46 dd
2α 1.97 ddddd
2β 1.50 dddd
3α 135 ddd
3β 157 dd
5 1.55 dd
6α 2.42 dddd
6β 1.85 dddd
7 2.81 dd du dd
14 6.52 s
15 3.22 m
16 1.17 d
17 1.18 d
18 1.01 s
19 0.94 s
-30-
On remarque que les signaux caractéristiques sont identiques aux signaux protons
correspondants à l’acide Carnosique( S.L.Richheimer et K.Schewres et W.Ternes)
I.4.CONCLUSION
On peut confirmé à partir des résultats d’identification de l’extrait de Romarin par les
différentes méthodes d ‘analyses suivies ,chromatographiques ou spectrales, que :
La méthode d’extraction suivit (méthode de Paris) est sélective pour qu’un seul
constituants majoritaire à un rendement notable(0.37%) ; ainsi la haute teneur et la haute
pureté du constituant majoritaire dans la fraction obtenu (≥ 90,%)
La structure chimique de la substance majoritaire est celle de la l’acide Carnosique

(Fig.17).
16
O
OHH
H
HOO 12 15
H
HOO 20
11
13
17
C
COO 14
1 9
2 8
3 5 7
4 6
− C20H28O4
− Pf = 192.8°C
19 18
Fig. 17 : Structure chimique de l’acide Carnosique
-31-
Chapitre 2
Pouvoir antioxydant de l’acide

Carnosique
Chapitre 2 : Pouvoir antioxydant de l’acide Carnosique
II.1 INTRODUCTION
Les méthodes qui permettent de déterminer l’activité antioxydante d’un composé ou d’un
mélange font appel à la mesure de l’oxydation des lipides. Les méthodes les plus
employées sont fondées soit sur le dosage des hydroperoxydes formés par l’autoxydation
des acides gras insaturés( Iodomètrie ou Colorimétrie), soit sur le dosage des produits
secondaires de l’autoxydation des corps gras insaturés[22].Une autre méthode fait appel à
l’appareil de Ranci-mat qui mesure la conductivité des produits de dégradation acides[21].
Dans ce travail nous avons retenu une méthode décrite par Marco, modifiée par la suite par
Miller et par Pratt[23].
II.2 PRINCIPE (METHODE DU Miller) :
L’acide linoléique en émulsion aqueuse est oxydé par l’oxygène. Les radicaux libres
formés sont piégés par le β- carotène. La mesure de l’activité antioxydante a été réalisée en
suivant la diminution de la densité optique en fonction du temps. En effet la décoloration
du β- carotène résulte du piégeage des radicaux formés au cours de l’autoxydation de
l’acide linoléique, ce qui a pour effet de diminuer la conjugaison, comme le montre le
• • • •
L H L + O-O L O O
•
L O O
+
O O L
•
+ L O O
O O L
L O O
schéma suivant(Schéma. 2).
Schémas .2 : Le mécanisme réactionnel deβ- carotène avec le radical peroxylinoléique
-32-
II.3. MATERIELS ET REACTIFS
II.3.1.REACTIFS
- Acide linoléique : Merck(T = 98%)
- Tween 40 : Fluka
- α- Tocophérols : Merck. SCR(100%)
- Chloroforme : Prolabo(pour analyse, 99.95%)
- Méthanol : Reidel de Haëw(pour HPLC ; 99.98)
- Oxygène pure(gaz comprimé).ENGI
- Argon (gaz 100%)ENGI
- Eau distillée de laboratoire de chimie analytique CRD SAIDAL(pH=6.65)
II.3.2.MATERIELS
- Bain-marie
- Agitateur IKA WERK.K
- Spectrophotométrie U.V.Visible
II.4. MODE OPERATOIRE
II.4.1.PREPARATIONS DES SOLUTIONS

Eau distillée préalablement oxygénée : l’oxygène pur est barboté dans l’eau distillée à
20°C pendant 15 min à raison de 100 ml/min.
Solution de β- Carotène : 20 mg de β- Carotène est dissout dans 10 ml de chloroforme

pour analyse. A 0.2 ml de cette solution placés dans un tube cylindrique calibré pour
spectrophotométrie, sont ajoutés 5 ml de chloroforme pour analyse. Cette solution
protégée de l’air, de la lumière et de la chaleur doit être utilisée dans l’heure qui suite.
Préparation d’émulsion : dans un ballon de 10 ml contenant 20 mg d’acide linoléique

et 200 mg de Tween 40 on introduit 1 ml de la solution β- Carotène. Après
évaporation de chloroforme sous courant d’argon, 50 ml d’eau distillés saturée en
oxygène sont ajoutés. Une agitation vigoureuse est nécessaire pour obtenir l’émulsion.
Solutions échantillon : On a préparé une solution de l’acide Carnosique isolé dans

méthanol de l’ordre ont des concentration d’ordre 1 mg/ml.
-33-
Solutions témoins : On a choisi deux antioxydant comme témoin, l’un synthétique qui
est le Butyl para Hydroxy Toluène(BHT) et l’autre naturel qui est l’α- Tocophérols.
D’une façon de maintenir la même concentration que la solution échantillon, et de
même concentration(d’ordre 1.mg/ml).
II.4.2.MESURE DE LA DENSITE OPTIQUE DU MELANGE

Dans un tube pour spectrophotométrie on mélange 5 ml de l’émulsion avec 0.2 ml de la
solution à doser(200ppm)[21]. L’essai à blanc est constitué de 20 mg d’acide linoléique,
200 mg de Tween 40 et 50 ml de l’eau préalablement oxygénée
La mesure de la densité optique à 470 nm est faite immédiatement après la mise en contact
de la solution à doser avec l’émulsion. Puis les tubes bouchés sont placés dans un bain
régulé à 50°C sous agitation, la densité optique est lue toutes les 15 minutes.
II.4. RESULTATS ET DISCUSSIONS
La mesure de l’activité antioxydante de la solution de l’acide Carnosique ou pour des

solutions témoins a été réalisée en suivant la diminution de la densité optique d’émulsion et
la solution échantillon après le contacte en fonction de temps.
En l’absence d’antioxydant la formation des radicaux libres n’est pas limitée et la

décoloration de β- Carotène est rapide. Par contre en présence d’un antioxydant, la chaîne
de production des radicaux libres est bloquée, et le β- Carotène reste inchangé jusqu’à
disparition de l’effet antioxydant. De ce fait la chute de la densité optique est d‘autant plus
important que l’activité antioxydante d’acide Carnosique (Tab. 2).
Tab .2 : Les densités optiques des différentes solutions à analyser
Temps(min) 0 30 60 90 120 150 180
Témoin 0.3723 0.1895 0.1218 0.0230 0.0456 0.0332 0.201
Ac carnosique 0.3752 0.3334 0.2823 0.2347 0.2086 0.1875 0.1714
α- Tocophérol 0.3773 0.3169 0.2545 02233 0.2001 0.1752 0.142
BHT 0.3794 0.3434 0.2819 0.2389 0.1875 0.128 0.1031
-34-
Blanc
0,4
0,3723
0,3 0
30
Do (Ab)
0,2 0,1895 60
90
0,1 0,1103 120
0,0623 150
0 0,0456
0,0332 180
0 30 0,0201
60 90 S1
120 150 180
Temps (min)
Graph. 1 : Evaluation la densité optique (l’activité antioxydante) de la solution du blanc
BHT
0,4
0,3794
0,3434
0,3
0,2819 0
30
Do (Ab)
0,2389
0,2
60
0,1875
90
0,1
0,128 120
0,1031 150
0
180
0 30 60 90 S1
120 150
180
Temps (min)
Graph. 2 : Evaluation la densité optique (l’activité antioxydante) de la solution du BHT
-35-
α-Tocopherol
0,4
0,3773
0,3 0,3169 0
Do (Ab)
0,2545 30
0,2 0,2233 60
0,2001
0,1752 90
0,1 0,142 120
0 150
0 30 S1
180
60 90 120 150 180
Temps (min)
Graph. 3 : Evaluation de la densité optique (l’activité antioxydante) de la solution du l’α-Tocopherol
Acide Carnosique
0,4
0,3752
0,3334
0,3 0
0,2823
30
Do (Ab)
0,2347
0,2 60
0,2086
0,1875 90
0,1714
0,1
120
150
0
180
0 30 60 90 S1
120 150 180
Temps (min)
Graph. 4 : Evaluation de la densité optique (l’activité antioxydante) de la solution du l’acide

Carnosique
-36-
Selon le principe de la méthode de Pratt la résistance d’un antioxydant est évaluée par la
diminution de la densité optique en fonction du temps.
La chute de la densité optique du blanc à 0 (t =180 min ),montre bien que l’acide
linoléique est dégradé par la chaleur au cours du temps, ce qui implique la nécessite de la
présence d’un conservateur « antioxydant » pour empêcher l’oxydation de ce
dernier(Graph. 1).
L’activité antioxydante peut évaluée par l’expression suivante (CAA) [24].
Do(180)E - Do(180)B
CAA =
Do(0)B - Do(180)B
− Do(180)E : la densité optique de la solution à examiner à t = 180 min

− Do(180)B : la densité optique du blanc à t = 180 min
− Do(0)B : la densité optique du blanc à t = 0 min
Les Graphes. 2, 3 et 4 montrent bien l’activité de l’antioxydant dans l’émulsion par

empêchement de :
L’oxydation de l’acide linoléique par la chaleur et l’oxygène dissout ;

La dégradation de β- carotène, qui jouit le rôle d’un antioxydant préventifs.
Les résultats obtenus du CAA pour les antioxydants étudiés (Graph. 5) déterminent la
différence du pouvoir antioxydants entre eux pour une quantité désirée(200ppm) [21, 24]
CAA(%): Blanc, BHT, a- Tocophérol et Acide Carnosique
0,8 68,20%
56,51%
0,6
CAA(%) 41,03%
0,4
0,2
0%
0
1 2 3 4
Graph. 5 : CCA des différents antioxydants examinés
-37-
II.5. CONCLUSION
Le pouvoir antioxydant de l’acide Carnosique(CAA = 68.20%) est plus important que les
autres antioxydants témoins soit synthétique(BHT : CAA = 56.51%) ou naturels (α-
Tocophérol : CAA = 41.03) pour une quantité de l’ordre de 200 ppm[11, 21].
On peut conclure que l’étude de l’effet antioxydant qu’on a effectué sur le diterpène
majoritaire du Romarin Algérien,confirme bien les résultats obtenus par des travaux
effectués, auparavant dans ce sujet, et que le Romarin est une source naturelle pour la
production des antioxydants poly-phénoliques.
L’étude du pouvoir antioxydant de l’acide Carnosique dans un processus chimique est une
initiation pour accéder à d’autres études de l‘effet inhibiteur de ce dernier dans les
systèmes biologiques qui ont défini le processus de plusieurs maladies permanentes tel que
le cancer de la peau, le vieillissement, cataracte, etc.[10, 19, 20].
-38-
Chapitre 3
Activité antibactérienne de l’acide

Carnosique
Chapitre III : Activité antimicrobienne de l’acide Carnosique
III.1. INTRODUCTION
La recherche de l’activité antibactérienne et l’activité antifongique consiste à estimer
l’inhibition de la croissance des micro-organismes (bactéries et levures) soumis au produit
à analyser(végétal ou synthétisé) et ceci par « méthode de diffusion sur milieu gélose ».
La méthode est validée par le laboratoire de microbiologie du CRD- SAÏDAL, son principe
est tiré par la méthode de titrage des ATB décrite dans la Pharmacopée européenne 2002 .
III.2. PRINCIPE
La méthode consiste à mettre en évidence une éventuelle activité antibactérienne, ou
antifongique de l’extrait de romarin, en le mettant en présence des germes testés, dont la
concentration et ajustée à 107- 108 germes/ml à l’aide d’un spectrophotomètre.
Des disques absorbants stériles sont imprégnés par une quantité de l’extrait végétal à
analyser déposée sur une gélose inocule avec les souches testées.
La diffusion de la solution d’extrait dans la gélose, permet d’inhiber la croissance des

germes tout autour du disque ; ce qui permet d’avoir comme résultat positif après
incubation une zone claire et distincte autour du disque, appelée zone d’inhibition.
Le choix des milieux de culture se fait suivant ceux permettant une bonne diffusion de la
solution d’extrait dans la gélose. Les milieux qui ont été utilisés pour notre étude sont le
milieu de Miller Hinton et le milieu de Sabourand.
Zone
d’inhibition
Milieu Muller- Hinton
ensemencé (couche de
surface : bactéries ou
levures dissoutes). Disque de papier
buvard imprégné de
Blanc : solvant de
l’extrait à analyser.
préparation de la
solution.
Fig. 18 : Résultats final de la phase d’analyse
-39-
III.3. PROTOCOLE EXPERIMENTALE

III.3.1.MILIEUX DE CULTURES, REACTIFS ET MATERIELS
III.3.1.A. MILIEUX DE CULTURES ET REACTIFS
− Ethanol(pour HPLC)
− Eau physiologique
Les milieux utilisés dans le cadre de ce travail sont qui ceux préconisés pour l’isolement et
l’identification des souches , il proviennent de l’IPA(Institue Pasteur Algérie).
− Milieu Muller Hinston pour les bactéries.

− Milieu sabourond pour les levures.
III.3.1.B.MATERIELS
Matériels biologiques
Les souches :
Les bactéries et levures sur lesquelles sont réalisés les testes, sont celles disponibles au
niveaux de laboratoire microbiologique du CRD –SAÎDAL.
Liste des souches utilisées :
Staphilococcus aureus ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Esherichia coli ATTC 4157
Candida albicans ATCC 2601

ATCC : American Type Culture Collection
Remarque : une étape de ré-identification réaliser pour les souches de références testées
par :
F Etude morphologique
F Etude biochimique
Pour confirmer la stabilité et la conformité des ces souches qui sont utilisées dans notre
étude.
Matériels non biologiques

− Spectrophotomètre
− Disque absorbants stériles de 6 mm de diamètre
-40-
III.3.2.MODE OPERATOIRE
Préparation de la 1ère couche de milieu
On fait fondre les milieux Muller-Hinton (MH) et Sabourand (SAB ) dans un bain marie à
95°C, après on verse aseptiquement une première couche de l’un des deux milieux dans
des boîtes de Pétri de 90 mm de diamètre à raison de 15 ml par boite avec trois répétitions
par souches ; on laisse refroidir et solidifier sur paillasse.
Préparation de l’inoculum
A partir d’une culture jeune de 18h pour les bactéries et de 48 h pour les levures, on réalise
des suspensions troubles en prélevant 3 à 5 colonies bien isolées et identiques, qu’on
dépose dans 5ml d’eau physiologique stérile, puis on agite au vortex et on réalise une
première lecture de la concentration de la suspension à l’aide d’un spectrophotomètre en
estimant la transmittance à λmax = 620 ± 20nm, qui doit être comprise entre 22% à 32%
pour les bactéries et entre 2% et 3%, et pour les levures(elle est de l’ordre de 107-
108germes /ml). L’inoculum doit être utilisé dans les 15 minutes qui suivent la préparation.
Remarque : Si une des valeurs trouvées à la première lecture n’est pas comprise dans
l’intervalle, On l’ajuste soit en ajoutant de l’eau physiologique si elle est inférieurs à la

valeur minimale ou en ajoutant des colonies si elle est supérieurs à la valeur maximale;
Préparation de la 2ème couche du milieu
On fait fondre les deux milieux MH et SAB ; on les laisse refroidir jusqu’à une température
de 45°C ; et on remplit avec des flacons de 50 ml de milieu pour chacune des souches. On
ensemence les milieux avec 200 micro-litre de chaque suspension et on agite
manuellement ; puis on dépose rapidement 4ml de chaque milieu ensemencé sur la surface
On laisse la deuxième couche solidifiée sur la paillasse.
Dépôt des disques
A l’aide d’une pince stérile on prélève à chaque fois un disque stérile, et on l’imbibe avec
la solution d’extrait, en mettant en contact le bout du disque avec la solution d’extrait dans
l’éthanol (de l’ordre 300ppm [10]), Celle-ci va être absorbée progressivement jusqu’à
imprégnation total de tout le disque on les dépose sur la surface de la gélose. On laisse
diffuser les boites de Pétri sur la paillasse pendant 30 minutes puis on l’incube à 37°C
pendant 24h les bactéries et à 25°C et pendant 48 h
les levures( le blanc est le solvant :
Ethanol).
-41-
III.3. RESULTATS ET DISCUTIONS

III. 3.1.IDENTIFICATION DES SOUCHES DE REFERENCES
Tous les résultats des testes concernant les caractères biochimiques et morphologiques des
souches de références utilisées sont résumées dans le tableau n°3.
Tab. 3 : Résultats de ré-identification des souches utilisées
Caractères Forme G Mobilité VF NR Citrate Indo VP RM Catalase Urée

Souches
Saphylococcus Cocci + - a.an.f - NE - - + + -

aureus
Pseudomonas Bacille + - a.an.f + NE - - + + -
aeruginosa droit
incurvé
Esherchia coli Batonnet - + a.an.f - NE - - + + -
droit
a.an: aérobie anaérobie facultif RM : Rouge de méthyle

NE : Non effectué VP : Voges-proskauer
+: Test positif G: Gram
-: Test négatif VF: Viande foie
Remarque: Par faut de moyens nous n’avons pas pu faire la ré-identification des leveurs.
III.3.2 SENSIBILITE DES GERMES A L’ACIDE CARNOSIQUE
L’étude de l’activité inhibitrice de la solution d’extrait a été effectuée par la méthode des
disques. Les résultats des tests effectués permettent de faire l’identification de l’activité
antibactérienne l’ acide Carnosique .
F Si la souche est sensible, une zone d’inhibition circulaire se forme, c’est à

dire que le développement des bactéries au niveau de la zone de diffusion
de l’échantillon est inactive (Fig .20)
F Si la souche est résistante, le diamètre de cette zone d’inhibition est

négligeable, d’autre part que les bactéries n’ont pas été inhibées par
l’échantillon qui diffusé(Fig .20)
-42-
III.3.2.C.BACTERIES
La méthode de diffusion sur gélose permet d’évaluer l’effet de la solution d’acide

Carnosique sur les germes de références pathogènes vu l’impact qu’ils ont sur l’organisme.
Les bactéries testées présentent une sensibilité à l’acide Carnosique mais à des degrés
différents, vu le diamètre des zones d’inhibition obtenus qui varient pour la même
concentration de l’acide Carnosique d’une souche à l’autre.
L’éthanol (blanc) ne présente aucun effet inhibiteur contre les souches ou la levure
utilisées.(Fig. 19, 20, 21 et 22).
Pour la souche Escherichia coli

on observe que la zone d’inhibition
varie de manière significative
(∅Inhibition = 24mm), la souche
manifeste une sensibilité relativement ∅
élevée par apport aux autres souches, E3 E2 E1 Blanc
ce qui implique que notre extrait

présente un effet inhibiteur contre la
souche Escherichia coli (Fig. 19). Fig. 19 : Sensibilité de la souche d’ Escherichia coli
Les résultats de la
sensibilité de Pseudomenas
Aeruginosa, vis à vis de la
solution échantillon diffusée ∅
montre une zone (∅Inhibition = E3 E2 E1 Blanc
19mm) d’inhibition moins
élevée que la zone d’inhibition
d’ Escherichia coli mais
n’empêche pas que notre extrait Fig. 20 : Sensibilité de la souche Pseudomenas eruginosa
présente un caractère inhibitrice
contre cette souche(Fig. 20) .
-43-
L’acide Carnosique présente

un effet inhibiteur faible contre la
souche de Staphylococus aureus
(∅Inhibition ≤ 13.5mm), ce qui montre ∅
E3 E2 E1 Blanc
que de l’acide Carnosique a un
caractère inhibiteur faible contre
cette souche (Fig. 21) .
Fig. 21 : Sensibilité de la souche Staphylococus aureus
D’après les résultats obtenu, on constate que l’acide Carnosique présente un effet
antibactérienne avec un degré d’inhibition qui diffère sur les souches étudiées, on peut
résumé l’effet antibactérienne de l’acide Carnosique selon le diamètre de la zone
d’inhibition comme suit :
Staphylococus aureus < Pseudo menas Aeuruginosa < Escher chia coli
(∅Inhibition ≤ 13.5 mm) (∅Inhibition = 19 mm) (∅Inhibition = 24 mm)
III.3.2.D.LES LEVURES
Le même principe est appliqué aux levures afin de déterminer leur profil de sensibilité vis
a vis de la solution d’échantillon.
Dans ce travail, on a étudier

l’effet de l’acide Carnosique sur une
seule espèce disponible au laboratoire
microbiologie de CRD-SAIDAL qui
il s’agit la Candida albicans, le
∅
diamètres de zone d’inhibition obtenu Blanc E1 E2 E3
est moins imporatant (∅Inhibition =12
mm) (Fig. 22) On confirme que l’acide
Carnosique présente un caractère Fig. 22 : Sensibilité de la levure Candida albicans

antifongique faible vis a vis de la
Candida albicans (pourune quantité
de 300ppm).
-44-
III.4. CONCLUSION
L’étude de l’activité antimicrobienne qu’on a entamer sur l’extrait de Romarin l’« acide
Carnosique » a permis de mettre en évidence la présence d’une activité antibactérienne de
ce dernier sur certaines espèces susceptible d’être pathogène pour l’homme, tel que :.
Staphylococus aureus
Pseudo menas aeruginosa

Escherichia coli
Candida albicans
Concernant les souches, les résultats obtenus ont montré que le degré d’inhibition, pour
une quantité de l’ordre de 300ppm de l’acide Carnosique, varie d’une souche à une autre et
qu’ on peut les résumer comme suit :
Staphylococus aureus < Pseudo menas Aeruginosa < Escherichia coli

(∅Inhibition ≤ 13.5 mm) (∅Inhibition = 19 mm) (∅Inhibition = 24 mm)
La candida albicans présente un effet inhibiteur léger contre l’acide Carnosique pour la
même quantité de l’acide Carnosique.
Cette étude identifiée l’activité antimicrobienne de l’acide Carnosique pour une

concentration bien définit, mais on peut évaluer cette étude pour une gamme des
concentrations au tour de cette valeur(300ppm).
-45-
Conclusion
Conclusion générale
Le travail effectué sur la plante Rosmarinus Officinalis. Labiatae a abouté aux résultats
suivants:
La plante est très riche en ditèrpénes phénoliques cela est bien confirmé par les
méthodes de séparation et d’analyses .
Le produit majoritaire dans l’extrait obtenu est l’acide carnosique.
L’étude de l’activité antioxydante de ce principe actif en comparaison avec des

témoins tels que le BHT et l’α-tocophérol confirme que l’acide carnosique isolé du
Romarin algérien est un puissant antioxydant .
L’activité biologique sur les bactéries telle que:Escherichia coli, Pseudomenas

Aeruginosa, Staphylococus aureus, Candida albicans, montre belle et bien que l’acide
carnosique possède un pouvoir bactéricide.
Bibliographie
Références
[1]. Jeaun Brineton. Pharmacognosie, phytpcimie- plante médicinale.1999, 3ème édition

[2]. RR. Paris, H. moyse, Matières médicales, Tome II, 1971, 2dition Masson, P 277.
[3]. O.P.U. NT. WS. Benston, Fleurs algeriennes. P 54
[4]. MED- CHECLIST. Edition W.Greuter. H. M. Burdet 1986- Volume : 3 ; P 2316
[5]. Albert.Y. Leung, Steven Foster, Encyclopedia of Common Naturel Ingradients Used In
Foods, Drugs, And Cosmetics, 2ème édition, 1996, Awrley- interscience publication, P 445.
[6]. Muzon Ozcan. Antioxydant Activity of Rosmary, 1999, 50(50), P: 355.
[7]. F.piozzi, J. Phytochemestry,1996,Vol :6, P 146
[8]. F.piozzi, J. Phytochemestry,1994,Vol :3, P 125
[9]. Deans et al, Chimical Composition, Antibactérial, and Antioxidantive Activity of Laurel,
Sage,rosmary, Oregano and Coriander Essential Oils.J. Essent. Oil Res.1998, 10, P 618
[10]. Paris et al, effect of Carnosolic Acid Products, 1993, Vol 56, N°8, P 1426.
[11]. Karin Schwarz and Waldemar Ternes, Isolation and Formation of Other Phenolic
Diterpens, Z, Lebenson unter frsch, 1992, Vol195, P 99.
[12]. N.Naktani and R.Inatani, Antioxidative Deterpenes from Rosmary, Agric Biol Chem.,
1984, 48(8), 2081,
[13]. Inatani.R., N.Nakatani, H.H.Fuwa, and h.Seta, Structure of a New Antioxidants Phenolic
Diterpens Isolated from Rosmary(Rosmarinus officinali. L.), Agric Biol Chem., 1983 ,46,P 1661.
[14]. M.-Culvier et al, Sage and Rosmary Phenolic Antioxidants, JAOCS., 1996, Vol(73), n°5
[15]. Jeaun Brineton. Pharmacognosie, phytpcimie- plante médicinale.1992, 2ème édition

[16]. Thèse de boukhalfa, Apport des Couplages CPG/MS et CPG/IR dans l’Analyse des
Mélanges Naturels Complexes, exemple l’Huile Essentiel de Romarin, USTHB, 1995.
[17]. RS Farag et al, Activity antioxidant of Spice essentiel oils, JAOCS, 1989, vol66, n°6,P 792
[18]. M.T. Baratte et al, Antimicrobial and Antioxidant Propreties of Essentiel Oils, Flavor Fragr,
J, 1998, 13, P 235.
[19]. Hiroygki. Haraguchi et al, Inhibtion of Lipid Peroxydation and Superoxide Génaration by
Diterpenoids from Rosmarinus Officinalis, Planta Med.1995, 61, p 333
[20]. Q Chen et Al, Rosmary antioxydants. JAOCS, 1992, vol 69, n°10, p 999
[21]. S. L. Richheimer et al, Rosmary Antioxidants, JAOCS, 1996, vol 73, n°4, P 507
[22]. M-C. Martin, M. Seller, Actifs et Additifs en cosmétologie, Lavoisier, 1992, P 112
[23]. M. S.TAGA , E.E.Miller et D.E.Pratt, Chia sudas as a source of lipid antioxidants,
J.Amer.Oil.Soc, 1984 : V(61) ; P 928.
[24]. Pharmacopée européenne 2002 ; P 576

Annexes
Annexe: 1
Annexe: 1
‫ﻣﻠﺨﺺ‬
‫ﻳﻬﺪف هﺪا اﻟﻌﻤﻞ إﻟﻰ دراﺳﺔ ﻧﺒﺎت ا آﻠﻴﻞ اﻟﺠﺒﻞ ﻣﻦ ﺣﻴﺚ ﺗﺸﺨﻴﺺ اﻟﻤﻮاد اﻟﻔﻌﺎﻟﺔ داﺧﻞ اﻟﻨﺒﺘﺔ و ﺧﺎﺻﺔ ﻋﺎﺋﻠﺔ اﻟﺪ ﻳﺘﺮﺏﻴﻨﺎت‬
‫اﻟﻔﻴﻨﻮﻟﻴﺔ و اﻟﺘﻲ ﺗﻌﺘﺒﺮ ﻣﻦ ﺏﻴﻦ اﻟﻤﻮاد و اﻟﻤﺘﻮاﺝﺪة ﺏﻜﻤﻴﺔ آﺒﻴﺮة داﺧﻞ اﻟﻨﺒﺘﺔ و ﺗﻌﺘﺒﺮ هﺪﻩ اﻟﻤﻮاد اﻟﻔﻌﺎﻟﺔ اﻟﻤﺴﺌﻮﻟﺔ ﻋﻦ‬
.‫اﻟﻔﻌﺎﻟﻴﺔ اﻟﺒﻴﻮﻟﻮﺝﻴﺔ ﺧﺎﺻﺔ اﻟﺤﻔﻆ ﻣﻦ اﻟﺘﺄآﺴﺪ و اﻟﺘﻲ ﺗﻌﺘﺒﺮ أهﻢ ﺧﺎﺻﻴﺔ ﻓﻲ ﻣﺴﺘﺨﻠﺼﺎت اﻟﻨﺒﺘﺔ‬
Résumé :
Ce travail de recherche rentre dans le cadre de l’étude de la plante médicinale

Rosmarinus Officinalis Labiatea et le pouvoir biologique attribue à cette plante.
Les principes actifs majoritaires sont les diterpènes phénoliques, ces derniers sont
les molécules responsables du pouvoir antioxydant.
Abstract :
This research task returns in the framework of the medicinal plant Rosmarinus
Officinalis Labiatae and especially the biological capacity allotted to this plant. The
majority active ingradients are the phenolic diterpenes the latter are the molecules
person in charge on the antioxydant capacity for the plant.

Zoubeidi Chahinaz

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Zoubeidi Chahinaz

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Zoubeidi Chahinaz

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

UNIVERSITE DE OUARGLA N° d’ordre :

FACULTÉ DES SCIENCES ET SCIENCES DE L'INGÉNIEUR

Par Melle: ZOUBEIDI CHAHINAZ

ETUDE DES ANTIOXYDANTS DANS LE

Soutenu le : 23 /06/2004 devant la commission d’examen :

Dr : TouhamiLANEZ M.C. Université de Ouargla Président

TABLE DES MATIERES

Chapitre .1 : Isolation et identification de l’Acide Carnosique .

Liste des : Tableaux, Figures, Graphes et Schémas

Tab. 1 : Les déplacements chimiques du différents protons caractéristiques de l’extrait de

Fig.1: Rosmarinus Officinalis. L

La présence des antioxydants aident à contribuent la réduction des pathologies en

La neutralisation des radicaux libres par les antioxydants pu traduit par :

− Combat l’effet nocif des radicaux libres

Substituer les antioxydants synthétiques qui ont des effets indésirables

Un rappel théorique sur la description botanique de la plante et leur composition chimique

L’isolation et l’identification de diterpène phénolique majoritaire l’ Acide Carnosique

Evaluation de pouvoir antioxydant de l’extrait obtenus par apport aux antioxydants

pouvoir antioxydant important, et qui sont les suivants :

Synthétiques, en citant : BHT ;

Naturels : α- tocophérol(vitamine E).

Identification de l’activité antibactérienne et antifongique de l’acide Carnosique sur

On résume les résultats obtenus dans une conclusion générales.

Introduction sur le Romarin

I.1. FAMILLE LABIATAE

I.2. GENRE ROMARIN

Le Romarin du latin rosmarinus officinalis «Rosée de la mère » Il comprends moins que la

I.3. SYSTEMATIQUE BOTANIQUE DE LA PLANTE

La systématique botanique est pour un chercheur la carte d’identification de la plante et

Fig.1. Rosmarinus Officinalis. L-4-

I.4. ORIGINE ET RECOLTE DE LA PLANTE

Appellations régionales en Algérie : En plus souvent

Région de l’Est : Eklil

Région de l’Ouest : Helhal

Région du Centre : Yazir

I.4. DOMAINE D’UTILISATION DE LA PLANTE

Les extraits végétaux de Romarin présentent un pouvoir antioxydant important et peuvent

gélatines et pouding, viande et produits de viande, condiments et assaisonnement, entre

Alimentation diététique, Tisanes herbales

I.4.2. Industrie cosmétique et parfumerie

Au 19ème siècle l’essence de Romarin servait à la préparation de la très célèbre eau de

Composition chimique du Romarin

II.1. CHRONOLOGIE DE LA RECHERCHE SUR LE

Fin des années soixante-dix, Chang et Al proposent un système d’extraction des

Les propriétés antioxydntes de Romarin sont principalement, due à la présence des

L’isolation de l’acide Carnosique à partir du Romarin et la synthèse des autres

II.2. HUILE ESSENTIELLE

0,74 % dans la plante sèche ;

Remarque : La teneur en huile essentielle dans le Romarin varie en fonction de l’origine

Plus de 50 composants mono-terpèniques rentrent dans la composition chimique d’huile

− Camphre (15-25 %) − 1,8 Cinéol (15-50%)

Un nombre de chercheurs s’intéressent à l’étude de la composition structurale d’huile

II.3. COMPOSITION PHENOLIQUE

II.3.1.LES ACIDES PHENOLIQUES

Fig. 3. Structures des acides phénoliques dans le Romarin.

Briesconet Domling en 1967

Fig.4. Structures des flavones de Romarin

− La disposition de système de lactonisation.

− Les substitutions des fonctions hydroxyles ou méthoxy aux différents cites