Manual de Análise de Sementes Florestais

2010
MANUAL DE PROCEDIMENTOS PARA ANLISE DE SEMENTES FLORESTAIS
Manuel de Jesus da Lima Jr.
MANUAL DE PROCEDIMENTOS PARA ANLISE DE SEMENTES FLORESTAIS
Manuel de Jesus da Lima Jr.
2010
O Manual de Procedimentos para Anlise de Sementes Florestais foi publicado em 2010. Copyright: O manual de procedimentos para Anlise de Sementes Florestais est disponvel no site da Rede de Sementes da Amaznia www.sementesrsa.org. O texto da publicao pode ser reproduzido em parte ou completo, desde que citado a fonte. Citao: Lima Junior, M. J.V. ed. Manual de Procedimentos para Anlise de Sementes Florestais. 146p, UFAM - Manaus-Amazonas, Brasil. Endereo: UFAM Universidade Federal do Amazonas, Centro de Sementes de nativas do Amazonas (CSNAM)- Faculdade de Cincias Agrrias. Av. General Rodrigo Otavio Jordo Ramos, 3000, Japiim CEP. 69077000. Manaus- Amazonas Editor: Manuel de Jesus Vieira Lima Junior Fotografia: Vanessa Souza da Silva Projeto grfico: Raul Sena Manaus- AM Apoio: O manual tem apoio do projeto CNPq CT- Amaznia, intitulado Manuteno de Germoplasma ex situ e Fomento Propagao de Espcies Nativas, Rede de Sementes da Amaznia, Rede de Sementes RIOESBA, Rede de Sementes Rio-So Paulo e Curso de Ps-Graduao em Cincias Florestais e Ambientais-UFAM.
ndice
CAPTULO 1
Anlise de sementes Amostragem Anlise de pureza Determinao do grau de umidade Teste de germinao Determinaes adicionais
>>
CAPTULO 2 >>
15 27 39 55
CAPTULO 3 >>
CAPTULO 4 >>
CAPTULO 5 >>
CAPTULO 6 >>
123
CAPTULO 7
Limpeza de materiais, equipamentos e instalaes do laboratrio de anlise de sementes >> 127
Captulo 1
Anlise de sementes
Lima Jr., M.J.V., Figliolia, M.B., Pia-Rodrigues, F.C.M.; Gentil, D.F.O.; Souza, M.M.; Silva, V.S.
1.1 A finalidade da anlise de sementes

Com a intensificao do comrcio de sementes, comearam a surgir problemas relacionados avaliao da qualidade. As adulteraes para a venda eram de ocorrncia bastante comum. As boas sementes eram misturadas com sementes de qualidade inferior, que tornava praticamente impossvel a distino entre elas [2]. Estas e outras prticas inescrupulosas estimularam, em muitos pases, um estudo mais intenso e aprimorado da Tecnologia de Sementes e criao de laboratrios onde as sementes pudessem ser analisadas. Assim, a anlise de sementes teve a sua origem determinada pela necessidade de regulamentar o comrcio de avaliar e definir padres de qualidade, detectar fraudes e gerar conhecimento para o estabelecimento de leis [2]. A nica maneira segura de conhecer a qualidade real de um lote de sementes atravs da anlise fsica e fisiolgica, bem como saber das peculiaridades de cada espcie para poder interpretar corretamente os resultados. Isto representa garantia para produtores, comerciantes e
Captulo 1
agricultores, por possibilitar a aquisio de lotes de sementes com qualidade conhecida e, ao mesmo tempo, reduzir riscos provenientes da aquisio de produtos com qualidade desconhecida e com preos irreais, no condizentes com o lote [2]. Durante o beneficiamento, as sementes so submetidas a procedimentos manuais ou mecnicos que, quando no ajustados corretamente espcie, podem no efetuar a limpeza necessria, a correta classificao e, at mesmo, provocar danos s sementes, afetando o seu poder germinativo e seu vigor [2]. As informaes, que permitem avaliar se as tcnicas de beneficiamento esto sendo ou no adequadas, so obtidas atravs de anlises de amostras retiradas antes e durante o beneficiamento, o que resulta em objeto de pesquisa da qualidade de sementes das espcies florestais nativas. Aps o beneficiamento, as sementes devem ser misturadas para promover uma boa homogeneizao, ser acondicionadas em embalagens apropriadas, constituindo assim o lote respectivo, que dever ser armazenado em ambiente apropriado natureza da semente. Desse lote, deve ser retiradas amostras de sementes destinadas s anlises de pureza fsica, de umidade, de germinao e peso de mil sementes, entre outras, a fim de determinar sua qualidade. importante que a amostragem seja feita corretamente de modo a representar com segurana a qualidade do lote que a originou. Todas as sementes comercializadas devem ser embaladas e etiquetadas. Na etiqueta devem constar, de maneira clara e completa, o nome da espcie, a procedncia das sementes, a identificao do produtor e os atributos das sementes como porcentagem de germinao, de pureza, e de teor de gua das sementes. Os dados de identificao do lote e da qualidade das sementes contidas nas etiquetas das embalagens permitem aplicao e a fiscalizao da Legislao Brasileira sobre Sementes e Mudas [2]. Uma vez embaladas e convenientemente etiquetadas, as sementes so postas venda de acordo com
An lise de sementes
padres pr-determinados. Durante este perodo, tais sementes esto sujeitas fiscalizao do comrcio por parte dos rgos oficiais, que retiram amostras de diferentes lotes das diferentes espcies e procedncias para anlise e comparaes. Caso os resultados no correspondam aos que esto especificados na etiqueta ou no preencham os padres mnimos para a comercializao, as sementes podem ser retiradas do comrcio e o responsvel sujeito s sanes [2]. Toda a comercializao dentro do pas, as exportaes, a fiscalizao e a legislao de sementes encontram-se respaldadas pelos resultados dos testes realizados em Laboratrios de Anlise de Sementes, de acordo com as Regras para Anlise de Sementes (RAS). A fixao de bases para a distribuio, valorao, armazenamento, necessidade de tratamento e descarte de sementes, tambm feita em funo da anlise de sementes. As anlises de sementes realizadas antes ou durante o perodo de armazenamento so teis para indicar se todo o processo de produo de sementes foi feito corretamente; por exemplo, o grau de umidade das sementes, mostra se as sementes necessitam ou no de secagem; o valor de pureza diz se as sementes precisam de ser beneficiadas novamente; se h infestao de patgenos; entre outros [2]. Uma vez satisfeitos os padres mnimos, um lote de qualidade superior pode ser comercializado a um preo melhor do que um lote de qualidade inferior, mesmo estando de acordo com os padres. Desta forma, permite estabelecer bases de referncia para a compra e venda [2]. Aps a interpretao dos resultados da anlise, pode-se determinar o valor das sementes para a semeadura. Muitas vezes, a utilizao de sementes de baixa qualidade tem como consequncia a necessidade de ressemeadura; esta operao extremamente prejudicial porque, alm de onerar o processo de produo, pela aquisio de nova quantidade de sementes e por repetir a operao, pode haver a perda da poca mais recomendada
Captulo 1
para a semeadura [2]. Durante as diversas fases da produo de sementes, a anlise pode ser feita com o objetivo de avaliar a qualidade das sementes e, com isto, identificar problemas e suas possveis causas, e desenvolver ou sugerir mtodos para corrigi-los. Assim, um laboratrio de anlise um centro de controle de qualidade, onde h possibilidade de se determinar em que ponto do programa houve falhas, comparar lotes de diversas procedncias, alm de contribuir para a manuteno ou melhoramento da qualidade dos lotes [2]. 1.2 A importncia das Regras para a Anlise de Sementes (RAS) A anlise de sementes realizada com a principal finalidade de avaliar o conjunto de caractersticas que determinam o valor das sementes para comercializao e armazenamento. Porm, para que os objetivos esperados sejam atingidos, necessrio que se tenham instalaes e equipamentos adequados, pessoal treinado, mtodos e procedimentos padronizados, e um programa de pesquisa em anlise de sementes que procure desenvolver novos mtodos e aperfeioar os existentes, possibilitando tambm estabelecer parmetros de comparao entre diferentes lotes, bem como as condies adequadas de armazenamento [1]. de fundamental importncia que os mtodos padronizados forneam dados precisos e confiveis. Os resultados somente tero o valor necessrio e indispensvel, se forem comparveis entre diferentes anlises, analistas e laboratrios, dentro de uma determinada tolerncia. Entretanto, os nveis de preciso e de uniformidade dos resultados so limitados pelo conhecimento da espcie, pelos equipamentos disponveis e pela habilidade do analista. As Regras para Anlise de Sementes (RAS) renem um conjunto de tcnicas, procedimentos e prescries que norteiam o tecnologista na realizao da anlise,
An lise de sementes
padronizando a metodologia empregada para uma dada espcie. Os mtodos includos nas RAS passam, previamente, por processos de aferio e validao da metodologia, cujos dados podem ter sido obtidos tanto em pesquisas cientficas, como no acmulo de experincias e observaes efetuadas em anlises de rotina. Ambos os caminhos tm a sua importncia e devem continuar a ser seguidos; no entanto, programas de pesquisa destinados ao aperfeioamento da metodologia devem ser considerados como prioritrios, visando revises e atualizaes para melhor atender s exigncias do progresso da tecnologia de sementes [1]. Os tecnologistas de sementes florestais tm encontrado dificuldades no estabelecimento de condies e tcnicas adequadas para os diferentes tipos de sementes, devido grande variao morfolgica que apresentam. Soma-se a isso o fato de que, em muitas espcies nativas, trabalha-se com o fruto e no com a semente, uma vez que a sua extrao trabalhosa, como ocorre em Centrolobium tomentosum, C. robustum, Dypterix alata, Alleurites mollucana e Pterodon pubescens, entre outras. H tambm, o caso de sementes que esto contidas no interior de vagens indeiscentes e de difcil beneficiamento, como em Peltophorum dubium e Mimosa scabrella, cujas tcnicas de beneficiamento j foram estudas e estabelecidas. Essa grande diversidade na morfologia dos frutos e sementes de espcies florestais nativas tem comprometido e, muitas vezes, causado insegurana quanto confiabilidade dos resultados obtidos nas anlises [1]. A partir de 1967, com a implantao de incentivos fiscais aos (re) florestamentos, houve demanda de sementes florestais em larga escala no Brasil. Aps 40 anos, considera-se que a pesquisa na rea de anlise de sementes florestais fez avanos considerveis, mas ainda h um grande nmero de espcies florestais nativas, de valor econmico para o Brasil, sobre as quais existem poucas informaes [3]. Somente com a ampliao do conhecimento gerado pela pesquisa em anlise e tecnologia de
Captulo 1
sementes de espcies florestais nativas, espera-se que sejam realizados, periodicamente, procedimentos de validao de testes e a incluso dessas novas espcies nas RAS.
1.3 Atividades do laboratrio de sementes

O cotidiano dos servios, relacionados anlise de sementes, contempla uma rotina estabelecida atravs das seguintes atividades principais: Amostragem; Recebimento e protocolo das amostras; Preparao da amostra de trabalho; Anlise de pureza; Peso de mil sementes; Determinao do grau de umidade; Teste de germinao; Arquivo da contra-amostra; Emisso de boletins; Emisso de resultados; Limpeza de materiais, equipamentos e instalaes.
1.4 Infraestrutura do laboratrio de sementes

Para a instalao de um laboratrio necessria uma infraestrutura mnima adequada s normas especficas e ao volume de sementes que ser analisado, composta por [4]: Sala de recepo e protocolo: a sala deve ser ampla e conferir suporte necessrio ao armazenamento das amostras. o local onde se realiza a checagem e a confirmao das informaes inerentes s amostras e lotes de se-
10
An lise de sementes
mentes, e posterior protocolo. Sala de preparao das amostras: o local onde as amostras recebidas sero homogeneizadas e reduzidas aos pesos adequados para as anlises. Deve possuir divisores e homogeneizadores apropriados s diferentes espcies, bandejas, placas de petri, balanas analticas com precises variadas, dentre outros materiais. Sala de instalao e avaliao dos testes: a sala onde os testes sero realizados e avaliados, com bancadas, mesas e cadeiras de alturas apropriadas, alm de material e equipamentos de suporte s avaliaes, como pinas, luminrias e lupas de aumentos de acordo com a necessidade dos diferentes testes, paqumetro digital, papel especfico para germinao, reagentes, dentre outros. Sala do teste de umidade: a sala de instalao e avaliao dos testes de umidade, com bancada apropriada para o uso de balanas analticas, dessecadores, estufas de secagem, cadinhos e demais materiais e equipamentos empregados nessa anlise. Deve conter uma ante-sala e estar posicionada em local livre de correntes de ar. Sala de germinadores (cmaras de germinao): o local que contem os germinadores, em nmero suficiente, com termmetros de mxima e mnima, e ser refrigerada. Sala de arquivo de contra-amostras: o local onde sero armazenadas as contra-amostras compatveis com o nmero de amostras recebidas, protegido contra a ao de insetos e roedores, com sistemas de refrigerao e de desumidificao do ar, visando garantir a conservao das contra-amostras dos lotes de sementes at o perodo recomendado ao descarte. Escritrio: o local onde, aps a emisso dos formulrios de avaliao dos diferentes testes,
11
Captulo 1
os resultados das anlises sero analisados e processados para compor os respectivos boletins de anlise, com equipamentos e material de consumo necessrio. Todos os equipamentos apropriados s anlises, como paqumetros digitais, balanas analticas, estufas e cmaras de germinao (Figura 1), devem ser periodicamente, calibrados e submetidos manuteno para assegurar a preciso dos resultados.
Figura 1. Equipamentos utilizados em laboratrio de sementes.
Cmara de germinao
Balana analtica de preciso
Estufa de secagem
Dessecador
12
An lise de sementes
1.5 Perfil dos profissionais do laboratrio de sementes

O perfil das pessoas envolvidas determinante para o sucesso, porque o trabalho exige responsabilidade, disciplina, organizao, acuidade visual e, principalmente, pacincia, por se tratar de uma atividade rotineira, que exige horas de dedicao para a realizao e encerramento de uma anlise. Outros aspectos relevantes so a tica profissional e a capacidade de apresentao, defesa, discusso e argumentao sobre os testes, alm da habilidade em trabalhar em equipe [4]. A avaliao da qualidade do trabalho dos analistas e tcnicos de laboratrio realizada, normalmente, atravs de testes de aferio, treinamentos e reciclagens. Quando so verificadas dificuldades na execuo de testes para uma dada espcie, torna-se necessrio buscar treinamento especfico at a adequao necessria, para que todos atendam o mesmo padro referencial [4].
1.6 Referncias
1 FIGLIOLIA, M.B.; OLIVEIRA, E.C.; PIA-RODRIGUES, F.C.M. Anlise de sementes. In: AGUIAR, I.B.; PIA-RODRIGUES, F.C.M.; FIGLIOLIA, M.B. (coord.) Sementes florestais tropicais. Braslia: ABRATES, 1993. p.137-174. 2 MARCOS FILHO, J.; CICERO, S.M.; SILVA, W.R. Avaliao da qualidade das sementes. Piracicaba: FEALQ, 1987. 230p. 3 SILVA, E.M.N. Laboratrio de anlise de sementes (LAS) e regras para anlise de sementes (RAS). In: RODRIGUES, F.C.M.P. (coord.) Manual de anlise de sementes florestais. Campinas: Fundao Cargill, 1988.
13
Captulo 1
p.41-43.
ZORATO, F. Evoluo do laboratrio de anlise de
sementes. Net, Revista SEED News, nov. e dez., ano IX, n. 6. Disponvel em: <http://www.seednews.inf.br/portugues/seed96/artigocapa96.shtml>. Acesso em: 12 mar. 2009.
14
Captulo 1 2
Amostragem tema
2.1 Introduo
A quantidade de sementes encaminhada aos laboratrios para anlise , em geral, muito pequena em relao ao tamanho do lote que representa. Desse modo, a finalidade da amostragem obter uma amostra que represente o lote, de tamanho representativo para os testes, na qual estejam presentes os mesmos componentes e em propores semelhantes do lote de sementes que a originou [1]. Como exemplo, em um lote com massa de 1 tonelada de sementes de Pinus caribaea, as RAS recomendam que a amostra a ser remetida ao laboratrio sejam no mnimo de 100g, o que significa a reduo de 10.000 vezes o tamanho do lote. Isto reflete a importncia da amostragem correta, em que seja mantida a composio inicial do lote e nas mesmas propores [2]. Uma das caractersticas mais importantes de um lote a sua homogeneidade. Assim, quanto maior for a homogeneidade do lote de sementes, mais representativa ser a amostra destinada anlise. O conceito de lote ho-
Captulo 2
mogneo dado como sendo uma quantidade de sementes cujas partes que a compem estejam razovel e uniformemente distribudas por toda a sua massa. Esta uniformidade se refere em qualquer um dos atributos que possa ser determinado em um exame ou teste [3]. Na prtica, a amostragem ser recusada se o lote for to heterogneo que as diferenas entre as amostras simples sejam visveis ao amostrador. Caso seja verificada a heterogeneidade em um lote de sementes, este problema pode ser resolvido dividi-se o lote em outros menores, fazendo uma nova homogeneizao do lote ou realizando novo beneficiamento [1].
2.2 Definies
As Regras de Anlise de Sementes definem: Lote: uma quantidade definida de sementes, identificada por letra, nmero ou combinao dos dois, da qual cada poro , dentro de tolerncias permitidas, homognea e uniforme para as informaes contidas na identificao [1] (Figura 1).
Figura 1. Lote de semente de leucena (Leucaena leucocephala Lan).
16
Amostr agem Amostragem
Para sementes florestais o lote deve ser constitudo por sementes colhidas numa mesma poca, mesmo estgio de maturao, tendo a mesma origem ou procedncia, especificando-se o tipo de rea em que as sementes foram produzidas (rea de colheita ACS, rea de produo APS ou pomar de sementes - PS), ou a categoria de sementes (identificada, selecionada, qualificada ou testada). Para o seu acondicionamento, so empregados diversos tipos de recipientes, como sacos de algodo ou plstico, barricas de papelo ou caixas de madeira. O lote pode ser constitudo por um ou vrios recipientes [2]. As RAS prescrevem o tamanho mximo do lote para vrias espcies florestais exticas; no entanto, no existem prescries para a grande maioria de espcies nativas [2]. O peso mximo do lote pode ser determinado por comparao com uma espcie cujas sementes tenham tamanho e peso semelhante ao da espcie em anlise tamanho do lote depende da espcie e do tamanho das sementes, sendo no mximo de 5.000 kg (como Quercus spp.) para sementes de dimenses iguais ou maiores do que as de quiabo, e no mnimo 1.000 kg (como Cedrela spp, Pinus spp. e Eucalyptus spp.) para sementes menores do que as de quiabo. Nas RAS espcies florestais com tamanho mximo de lote. Acer spp. 500 kg; Betula spp, Calocedrus e Taxodium distichum 300 kg. Devido irregularidade de produo e baixa produtividade, comum um nmero considervel de espcies brasileiras florestais nativas produzirem, em determinados anos, uma quantidade to pequena de sementes fazendo com que os lotes apresentam geralmente poucas sementes. Outro aspecto importante a ser considerado o tamanho das sementes, especialmente as grandes, como Dypterix alata, Alleurites mollucana, Terminalia catappa, entre outras, que contm cerca de 60, 100 e 200 sementes/kg, respectivamente. Neste caso, pode acontecer que o lote contenha apenas as sementes necessrias para as demandas de plantio, no havendo sementes suficientes para os testes de controle de qualidade [2].
17
Captulo 2
Amostra simples: uma pequena poro de sementes retirada de um ponto do lote, por meio de aparelho mostrador ou manualmente, de diferentes recipientes ou pontos do lote. As pores devem ser iguais [1]. Amostra composta: a amostra formada pela combinao e mistura de todas as amostras simples do lote. Esta amostra usualmente bem maior que a necessria para os vrios testes e normalmente necessita ser adequadamente reduzida antes de ser enviada ao laboratrio [1]. Amostra mdia: a prpria amostra composta ou subamostra desta, recebida pelo laboratrio para ser submetida anlise e deve ter os pesos, especificados nas RAS (Tabela 1). geralmente resultante da homogeneizao e reduo da amostra composta, podendo ser a prpria quando o seu peso estiver de acordo com o exigido [1]. Amostra de trabalho: a amostra obtida no laboratrio, por homogeneizao e reduo da amostra mdia, at os pesos mnimos requeridos e nunca inferiores aos prescritos para os testes das RAS [1]. Subamostra: a poro de uma amostra obtida pela reduo da amostra de trabalho, sendo utilizadas como replicatas (repeties) nos testes [1]. Amostra duplicata: a amostra obtida da amostra composta e nas mesmas condies da amostra mdia e identificada como Amostra duplicata. obtida para fins de fiscalizao da produo e do comrcio de sementes, no caso da necessidade de uma reanlise [1].
18
Amostragem Amostr agem
Tabela 1. Tamanho mximo dos lotes e mnimo das amostras mdias de algumas espcies florestais. Espcies Acacia spp Cedrela spp Cryptomeria japnica Cupressus sempervirens Eucalyptus camaldulensis Eucalyptus citriodora Eucalyptus deglupta Eucalyptus globulus Eucalyptus grandis Eucalyptus maculata Eucalyptus pauciflora Eucalyptus robusta Eucalyptus saligna Eucalyptus tereticornis Ginkgo biloba Gleditsia triacanthos Koelreuteria paniculata Leucaena leucocephalla Pinus banksiana Pinus caribaea Pinus elliottii Pinus kesiya Pinus koraiensis Pinus oocarpa Pinus palustris Pinus taeda Taxodium distichum Tectona grandis Fonte: Brasil (2009) Tamanho mximo do lote (kg) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 5.000 1.000 1.000 5.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 300 1.000 Peso mnimo da amostra mdia (g) 70 80 20 40 15 40 10 60 5 40 60 15 15 15 500 sementes 800 800 240 20 100 160 80 2.000 70 500 140 500 2.000
2.3 Procedimentos e cuidados na amostragem

Os procedimentos de amostragem incluem a homogeneizao do lote e das amostras, e a retirada e a re-
19
Captulo 2
duo das amostras[2]. Homogeneizao: se faz necessria, uma vez que os componentes mais pesados do lote tendem a se depositar na parte inferior do recipiente. Em todas as etapas do processo de amostragem e obteno das amostras simples, necessria a homogeneizao do lote, manualmente (sementes grandes) ou com uso de equipamentos (homogeneizador de solo, divisor cnico e amostrador). Retirada: a retirada das amostras deve ser efetuada manualmente ou com uso de amostradores. A amostragem manual a mais adequada para sementes de muitas espcies arbreas. Neste sistema de amostragem, deve-se ter o cuidado de manter a mo fechada, evitando que as sementes escapem por entre os dedos. Entretanto, difcil obter amostras representativas manualmente a mais de 40 cm de profundidade e, quando for necessrio obt-las, o encarregado da amostragem deve solicitar que alguns sacos ou embalagens sejam parcial ou totalmente esvaziados para facilitar amostragem, e em seguida, reensacar as sementes. Reduo: na reduo das amostras so empregados divisores de solo ou cnicos de menor tamanho, ou rguas quando efetuada manualmente. A poro a ser reduzida passada no equipamento onde dividida em duas fraes, sendo uma desprezada. Com a frao restante, repete-se o procedimento at se obter a amostra do tamanho desejado. Com o uso de rguas, a amostra subdividida consecutivamente, sendo uma das pores sempre desprezada. A cada novo lote amostrado, os instrumentos e os equipamentos devem ser limpos para evitar contaminao.
20
2.4 Intensidade de amostragem

As RAS determinam o nmero de amostras simples que devem ser obtidas a cada lote de sementes. Para lotes de acondicionados em recipientes com capacidade de mais de 100kg durante o beneficiamento a RAS determinam [1]:
Lotes a granel Tamanho do lote (Kg) At 500 501-3.000 3.001 20.000 Acima de 20.000 Nmero de amostras simples 5 amostras simples, pelo menos 1 amostra simples para cada 300Kg, mas no menos do que 5 1 amostra simples para cada 500Kg, mas no menos do que 10 1 amostra simples para cada 700Kg, mas no menos do que 40
Em lotes de sementes acondicionadas em recipientes, como sacos, tambores e outros, com capacidade de at 100kg, a intensidade mnima de amostragem dever [1]:
Lotes de sementes acondicionadas em recipientes com capacidade de at 100Kg No. de recipientes do lote 1-4 5-8 9-15 16-30 31-59 60 ou mais Nmero de amostras simples 3 amostras simples de cada recipiente 2 amostras simples de cada recipiente 1 amostras simples de cada recipiente 15 amostras simples no total 20 amostras simples no total 30 amostras simples no total
Para sementes acondicionadas em recipientes pequenos, como latas, envelopes e pacotes usados no comrcio varejista, recomenda-se que o peso mximo de 100 quilos seja tomado como unidade bsica e os pe-
21
Captulo 2
quenos recipientes combinados, de maneira a formar as seguintes unidades de amostragem [1]: 20 recipientes de 5 kg; 33 recipientes de 3 kg; 100 recipientes de 1kg; 1.000 recipientes de 100 g; 10.000 recipientes de 10 g. A amostragem realizada nas unidades bsicas deve ser feita tomando-se recipientes inteiros e fechados. Os contedos combinados dos diversos recipientes devem suprir as quantidades mnimas para a amostra mdia. De acordo com a legislao vigente (Lei 10.711/2003 e Decreto 5.153/2004), a amostra mdia ou submetida ser acondicionada em recipiente que dever ser identificado com os seguintes dados: espcie, cultivar (quando for o caso), categoria, natureza da semente, data de coleta da semente, identificao do lote, indicao do tratamento, quando for o caso, determinaes solicitadas, data da amostragem, identificao e assinatura do amostrador. As sementes de natureza intolerante ao dessecamento sero amostradas somente por meio manual, acondicionadas de modo a assegurar a manuteno de sua umidade e encaminhadas imediatamente para anlise.
2.5 Recepo, embalagem e armazenamento das amostras

O intervalo entre a amostragem e a anlise da amostra mdia deve ser o menor possvel, para evitar alteraes na qualidade das sementes [1]. A amostra mdia deve estar identificada e embalada de acordo com tipo de anlise a ser realizada, como por exemplo: em embalagens porosas, para os testes de pureza e germinao; embalagens hermticas e completamente cheias, para os
22
testes de umidade e peso de mil sementes. Aps a recepo, a amostra recebe um registro para identificao interna no laboratrio de sementes [4]. As embalagens individuais devem ser acondicionadas de maneira a evitar danos durante o transporte, sendo preservadas contra o excesso de calor, umidade e contaminao [1]. Caso seja necessrio algum tempo para realizar a anlise, a amostra mdia deve ser armazenada em local preferencialmente climatizado, de tal modo que as alteraes na qualidade das sementes como teor de gua, porcentagem de germinao e dormncia sejam as mnimas possveis. O remanescente da amostra mdia, depois de retiradas as amostras de trabalho, colocado em recipientes apropriados e ir constituir a amostra de arquivo, devendo permanecer armazenado por um perodo equivalente ao da validade do teste de germinao [1]. As amostras devem ser armazenadas em locais adequados, de acordo com a espcie, com controle de temperatura e umidade relativa. O laboratrio no pode ser responsabilizado pelo declnio da porcentagem de germinao durante o armazenamento das amostras de arquivo. As amostras enviadas ao laboratrio em embalagens hermticas devero ser armazenadas nas condies semelhantes s originais de embalagem.
2.6 Equipamentos e materiais necessrios para a amostragem

So necessrios os seguintes equipamentos e materiais [4]: Amostradores; Embalagens diversas para coleta de amostras simples; Divisores de amostras (divisor de solo, cnico e
23
Captulo 2
centrfugo); Rguas e; Balanas. O uso de equipamentos de amostragem tem sido restrito s espcies arbreas florestais com sementes de pequeno tamanho, como Eucalyptus ssp., Tibouchina ssp. e Pinus ssp., entre outros [2]. O divisor de solo adequado para sementes de espcies florestais, principalmente aquelas que fluem com dificuldade. No caso de sementes grandes, empregada a reduo manual.
2.7 Amostragem para sementes de espcies florestais

A irregularidade da produo e a baixa produtividade na maioria das espcies florestais, principalmente daquelas pertencentes aos grupos ecolgicos das secundrias e das tolerantes, fazem com que muitas vezes no se obtenham, numa colheita, quantidades de sementes suficientes para compor uma amostra mdia, contendo o mnimo de 2.500 sementes para a anlise de pureza, conforme as recomendaes das RAS [2]. Outro problema est relacionado ao tamanho da semente. Vrias espcies apresentam sementes grandes, ultrapassando o peso limite de 1.000 g para amostras de trabalho na anlise de pureza, sem atingir o nmero mnimo determinado pela RAS. Como por exemplo, na anlise de pureza de Licania tomentosum (oiti), que apresenta cerca de 100 sementes por quilograma, para uma amostra de trabalho prescrita pela RAS seriam necessrios 25 kg, o que muitas vezes pode ultrapassar a produo de um determinado ano [2]. O Instituto Florestal de So Paulo adota, para casos semelhantes, o seguinte procedimento: calcula-se o nmero de sementes necessrio para os testes de pureza, germinao e umidade e duplica-se ou triplica-se esse
24
valor para o estabelecimento da amostra mdia, em funo da quantidade disponvel. No caso do oiti, a amostra mdia seria de 2,5 kg [2]. As RAS citam que, no caso de lotes pequenos e de sementes muito caras, permitido se trabalhar com amostras mdias menores, tendo no mnimo, o peso suficiente para a realizao dos testes solicitados, devendo constar o peso real da amostra mdia no Boletim de Anlise de Sementes. So considerados pequenos os lotes iguais ou menores do que 10% do peso mximo de lote indicado nas RAS [2].
2.8 Referncias
1 BRASIL. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Regras para anlise de sementes. Braslia: MAPA/ACS, 2009. 395p. 2 FIGLIOLIA, M.B.; OLIVEIRA, E.C; PIA-RODRIGUES, F.C.M. Anlise de Sementes. In: AGUIAR, I.B.; PIA-RODRIGUES, F.C.M.; FIGLIOLIA, M.B. (coord.) Sementes florestais tropicais. Braslia: ABRATES, 1993. p.137-174. 3 MARCOS FILHO, J.; CICERO, S. M.; SILVA, W.R. Avaliao da qualidade das sementes. Piracicaba: FEALQ, 1987. 230p. 4 SILVA, E.M.N, Amostragem. In: RODRIGUES, F.C.M.P. (coord.) Manual de anlise de sementes florestais. Campinas: Fundao Cargill, 1988. p.44-50.
25
Captulo 3
Anlise de pureza
3.1 Introduo
a primeira anlise a ser realizada com a amostra de trabalho de um lote de sementes e visa avaliar, por meio de procedimentos tcnicos em laboratrio, a qualidade da fsica da semente. A anlise de pureza tem como objetivo determinar a composio percentual por peso e a identidade das diferentes espcies de sementes e do material inerte da amostra e por inferncia a do lote de sementes [1]. De acordo com a Lei de Sementes e Mudas, a anlise de sementes dever ser realizada em laboratrio credenciado para a anlise de sementes florestais e em conformidade com as metodologias e procedimentos estabelecidos nas Regras para Anlise de Sementes. A amostra de trabalho separada nos trs componentes: semente pura, outras sementes (que dificilmente ocorrem em lotes de sementes florestais e somente possvel no caso de o beneficiamento no ser realizado com os cuidados e tcnicas devidas) e material inerte, que so indicados em porcentagem por peso da amostra de tra-
Captulo 3
balho. As sementes puras e o material inerte so indicados em porcentagem por peso e as outras sementes indicadas relacionando-se o nmero de outras sementes pelo peso da amostra de trabalho. Cada tipo de material inerte presente deve ser identificado tanto quanto possvel e, quando solicitado pelo requerente, sua porcentagem em peso pode ser determinada [1]. Deve-se destacar que o teste de germinao, por ser conduzido com a utilizao de sementes fisicamente puras, que so separadas da amostras de trabalho recebidas, fornece resultados complementares aos da anlise de pureza. Assim, o valor do lote, ou melhor, o seu potencial de estabelecimento no campo, pode ser avaliado quando se considera, em conjunto, os resultados dos testes de pureza e de germinao [3]. As amostras de sementes de natureza intolerante ao dessecamento devem ser analisadas prioritariamente.
3.2. Componentes da amostra

Sementes puras: so consideradas sementes puras todas as sementes e/ou unidades de disperso pertencentes espcie em exame, indicada pelo requerente ou identificada como predominante na amostra, devendo ainda ser includas nesta poro todas as variedades botnicas e cultivares da espcie. Considera-se a poro do lote pertencente espcie em exame, desde que represente mais do que 5 % do peso da amostra de trabalho. Quando uma amostra apresenta duas espcies com mais de 5 % do peso da amostra, pode-se considerar que h uma mistura [1]. Alm das sementes inteiras, maduras e no danificadas da espcie, devem ser includas como puras as sementes que se encontrarem nas seguintes condies [1]: Sementes inteiras de tamanho inferior ao normal, enrugadas, chochas, imaturas, trincadas, infectadas ou germinadas, desde que possam
28
An lise de pureza
ser definitivamente identificadas como sendo da espcie em exame; Sementes levemente atacadas por molstias, desde que seja possvel identific-las com preciso como pertencentes espcie em exame; Fragmentos de sementes e/ou unidades de disperso, quebrados, porm maiores que a metade do seu tamanho original, desde que apresentem uma poro aderida do tegumento, em espcie pertencentes famlia Leguminosae; Unidades de disperso intactas tambm designadas como disporos, isto , aqunios, nculas, vagem ou smara, de difcil beneficiamento e cujas sementes esto contidas no seu interior, como Peltophorum dubium, estas podem ser analisadas e comercializadas nesta forma: a regra da metade se aplica aos fragmentos slidos, entretanto, pode haver dificuldade na classificao das sementes que tenham um orifcio no tegumento. Se o orifcio for suficiente para permitir uma avaliao segura do contedo da semente, o julgamento feito de acordo com o tamanho da massa de tecido remanescente. Se a verificao no puder ser feita facilmente, a semente ser considerada pura. No preciso virar a semente procura de orifcios ou outros danos. O analista, durante a realizao do teste de pureza, no deve se preocupar com as condies fisiolgicas e sanitrias das sementes, mas com a identificao desse material. Outras sementes: devem ser includas, neste grupo, todas as sementes e/ou unidades de disperso de qualquer espcie cultivada ou silvestre, bulbilhos ou tubrculos de plantas reconhecidas como daninhas ou invasoras e que no sejam as da espcie em exame. exceo daquelas que, por serem to mal desenvolvidas ou severamente danificadas, no concorrem com a cultura e
29
Captulo 3
as quais devem ser includas no material inerte [1]. Em lotes de sementes florestais, a classe outras sementes no comum, devido s tcnicas de produo e colheita. O aspecto mais importante do teste de pureza a proporo entre sementes puras e impurezas [2]. Material inerte: deve incluir unidades de disperso e todos os outros materiais e estruturas no definidas como semente pura ou outras sementes, como [1]: Unidades de disperso nas quais no contenha semente; Pedaos de unidades de disperso quebrados ou danificados iguais ou menores do que a metade de seu tamanho original; As expanses aladas das sementes dos gneros Cedrus, Picea, Tsuga e Pinus, que se encontram ainda aderidas, devem ser inteiramente removidas e consideradas como material inerte. As expanses aladas das sementes dos gneros Abies, Larix, Libocedrus e Pseudotsuga, e das espcies Pinus echinata, P. elliotti, P palustris, P. regida e P. taeda, que se encontram aderidas, devem ser removidas e consideradas como material inerte, exceto a parte que reveste a semente que difcil de ser removida pelos processos normais de beneficiamento, sem danificar a semente. As expanses aladas dos gneros Acer, Betula, Catalpa, Chamaecyparis, Cupresseis, Fraxinus, Liquidambar, Liriodendron, Platanus, Thuja e Ulmus, no devem ser removidas; Sementes de Fabacea, Cupressaceae e Taxodiaceae com tegumento inteiramente removido. Em Fabaceae, cotildones separados so considerados material inerte; Sementes portadoras de molstias e que tenham sido atacadas por fungos com formao de esclercios ou gros com carvo, bem como as galhas que resultam da infestao de nematides,
30
An lise de pureza
tambm so consideradas material inerte; Todos os materiais da frao leve, quando a separao for feita pelo Mtodo da Ventilao Uniforme, exceto outras sementes; Na frao pesada, quando a separao for feita pelo Mtodo da Ventilao Uniforme, todo material que no seja semente pura e outras sementes, como partculas de solo e areia, pedras, palhas, pedaos de tegumento ou pericarpo, escamas de cones, pedaos de casca de caule e flores, cuja presena deve ser indicada no Boletim de Anlise;
3.3 Equipamentos e materiais para a anlise de pureza

So necessrios os seguintes equipamentos e materiais: Boletim de Anlise especfico; divisores de amostras (de solos, cnicos ou centrfugo); balanas com diversas sensibilidades; rguas; mostrurio de sementes; diversos tipos de lupas; diafanoscpio; pinas; esptulas; pincis; estiletes; recipientes variados (vidros de relgios, placas de petri, etc.); jogos de peneiras; folhas de cartolina branca ou azul-clara; sopradores pneumticos; dentre outros [1].
3.4 Procedimentos e clculos

Recepo da amostra mdia Ao receber a amostra mdia para anlise de pureza, o analista dever verificar as condies da embalagem, determinar o peso da amostra e protocolar no Boletim de Anlise. Caso a amostra esteja desconforme, deve ser recusada [3].
31
Captulo 3
Preparao da amostra de trabalho A amostra de trabalho deve ser obtida por homogeneizao e diviso da amostra mdia, de tal maneira que seja representativa do lote. Deve conter o peso exato ou ligeiramente superior ao mnimo exigido para as anlises. Deve sempre ser preferido o mtodo mecnico de diviso, mas no sendo possvel o seu uso, pode se usar o mtodo manual at alcanar o peso desejado da amostra de trabalho para a realizao dos testes [1]. Peso mnimo da amostra de trabalho Espcies relacionadas nas RAS: Os pesos das amostras de trabalho para as diferentes espcies de sementes nunca deve ser menor que o indicado para a espcie nas RAS. A anlise pode ser realizada sobre uma amostra de trabalho com o peso prescrito pelas RAS ou sobre duas subamostras com no mnimo a metade deste peso, cada uma retirada independentemente da amostra mdia [1]. Espcies no relacionadas na RAS: O peso das amostras para a anlise de pureza e das sementes nocivas pode ser determinado por comparao com uma semente de espcie relacionada nas RAS, que tenha tamanho e peso semelhante, desde que a amostra de trabalho para a pureza tenha no mnimo 2.500 sementes [1]. Para sementes extremamente grandes ou pequenas, o peso da amostra de trabalho deve basear-se numa amostra contendo nunca menos que 2.500 sementes, desde que no seja maior do que 1.000 g e nunca menor do que 0,1 g [1]. A amostra de trabalho ou as subamostras e para cada um de seus componentes devem ser pesadas, em gramas, at o nmero mnimo de casas decimais (Tabela 1) necessrio para calcular a porcentagem de seus componentes, com uma casa decimal [1].
32
An lise de pureza
Tabela 1. Nmero de casas decimais exigidas para a amostra de trabalho e para cada um de seus componentes. Peso da amostra de trabalho (g) Menor que 1.000 1,000 a 9,999 10,00 a 99,00 100,00 a 999,9 1.000 ou mais Fonte: Brasil (2009). Nmero de Casas decimais 4 3 2 1 0
Com o avano das pesquisas, novas metodologias vm sendo estudadas no sentido de tornar as anlises mais prticas e eficientes. Quanto anlise de sementes florestais, em especial as sementes de Eucaliptus spp., o tamanho prescrito para a amostra de trabalho varia de 2 a 20 g, o que demanda um tempo do laboratorista de aproximadamente 8 horas para proceder a anlise de pureza, apesar do auxlio de um jogo de peneiras. Na busca de maior agilidade dos trabalhos de anlise, foi sugerida uma nova metodologia (Figura 1) para Eucalyptus spp., em que a anlise seja feita em amostras de 0,5 g, reduzindo o tempo de anlise para aproximadamente 4 horas, com resultados prximos aos das amostras de 5 g. Essa metodologia deve ser ainda repetida e avaliada em vrios laboratrios, para que venha constar nas RAS [2].
33
Captulo 3
Figura 1. Metodologia de anlise de pureza para sementes de Eucaliptus spp Fonte: Figliolia et al., (1993)
Separao dos componentes A amostra de trabalho ou as subamostras, depois de pesadas e conferidas quanto autenticidade dos dados do requerente com relao espcie, deve(m) ser criteriosamente examinada(s) e separada(s) nos trs componentes seguintes: sementes puras (SP), outras sementes (OS) e material inerte (MI) [1]. A separao da Semente Pura deve ser realizada com base na definio de semente pura, contida nas RAS e baseada no exame de cada partcula da amostra de trabalho, mas, em certos casos, procedimentos especiais so obrigatrios, como o uso de peneiras ou sopradores. A separao das sementes puras deve ser feita com base nas caractersticas morfolgicas visveis, por meio de presso ou de processos mecnicos, mas sem prejudicar a capacidade germinativa das sementes [1]. Identificao dos componentes e clculos Aps a separao dos componentes, procede-se a identificao e contagem das outras sementes encontradas na amostra, anotando-se na ficha de anlise os respectivos nomes e nmeros por peso da amostra [1]. Depois de caracterizada a natureza do material
34
An lise de pureza
inerte, pesa-se tais componentes, anotando-se na ficha de anlise o resultado desta pesagem. Conservando-se este material no prato da balana e juntando-se a ele as outras sementes (previamente identificada, contadas e anotadas), faz-se nova pesagem, obtendo-se, assim, o peso total das impurezas, o qual , por sua vez, anotado na ficha de anlise [1]. A pesagem direta das sementes puras depende do tamanho da amostra de trabalho [1]: Quando o peso da amostra for inferior a 25 g: as sementes puras so pesadas diretamente. Os clculos das porcentagens por peso das trs determinaes (material inerte, total de impurezas e sementes puras), devem ser baseados na soma dos pesos correspondentes ao total de impurezas e sementes puras e no no peso inicial da amostra de trabalho. Essa soma deve, entretanto, ser primeiramente comparada ao peso inicial, a fim de verificar se houve excessiva variao de peso ou outro erro qualquer. No deve haver mais de 1 % de variao entre o peso inicial e o peso final da amostra de trabalho. Se o ganho ou perda for maior do que 1 % devese refazer a anlise; Quando o peso da amostra for igual ou superior a 25 g: o peso das sementes puras obtido por diferena, subtraindo-se do peso inicial da amostra de trabalho o peso total de impurezas. As porcentagens do material inerte e total de impurezas devem ser baseadas no peso inicial da amostra e a das sementes puras ser obtida subtraindo-se de 100 a porcentagem do total de impurezas. Exemplo 1. Clculo da porcentagem da pureza de uma amostra de trabalho com peso inferior a 25 g [4]. Um laboratrio recebeu uma amostra mdia de Eucalyptus saligna de 17 g. Aps a devida diviso, obteve-se
35
Captulo 3
uma amostra de trabalho de 5,864 g. Passando a efetuar a separao dos componentes, obteve-se os seguintes pesos: material inerte (MI) = 4,603 g; total de impurezas (TI) = 4,968 g; sementes puras (SP) = 0,870 g. Calcular a porcentagem de pureza da amostra. a) Clculo do peso final (Pf) Pf = TI + SP Pf = 4,968 + 0,87 = 5,838 b) Comparao entre peso inicial e peso final da amostra 5,864 100% x 1% 5,864 x 0,01 = 0,05864 (1%) 5,864 0,05864 = 5,80536 ou, 5,864 5,838 = 0,026 0,026 < 0,05864
Exemplo 2. Clculo da porcentagem de pureza de uma amostra de trabalho com peso igual ou superior a 25 g [4]. Um laboratrio recebeu uma amostra mdia de Pinus caribea com peso de 115 g. Aps a devida diviso, obteve-se uma amostra de trabalho de 52,47 g. Aps a separao dos componentes, obtiveram-se os seguintes pesos: material inerte (MI) = 1,25 g e total de impurezas (TI) = 2,18 g. Calcular a porcentagem de pureza da amostra.
c) Clculo da porcentagem total de impurezas 5,838 100% 4,968 x x = 85,1% % impurezas = 85,1% d) Clculo da porcentagem de pureza % pureza = 100 85,1% = 14,9% % pureza = 14,9%
Neste exemplo, no houve variao entre o peso inicial e o peso final superior a 1%, podendo-se ento calcular as porcentagens de impurezas e pureza.
36
3.5 Apresentao dos resultados
b) Clculo da porcentagem de pureza % pureza = 100 4,2 = 95,8% % pureza = 95,8%.
a) Clculo da porcentagem do total de impurezas 52,47 100% 2,18 x% x = 4,2% % impurezas = 4,2%
An lise de pureza
Quanto apresentao dos resultados desta anlise, existem prescries citadas nas RAS, as quais se encontram enumeradas a seguir [1]: 1. Os resultados do exame de sementes puras, material inerte e total de impurezas devem ser expressos em porcentagem por peso e com uma casa decimal; 2. Quando a amostra em exame apresentar uma mistura de espcies, a palavra MISTURA deve aparecer claramente escrita no boletim de anlise e cada espcie deve ser citada separadamente, sendo tambm determinadas as suas porcentagens por peso e com uma casa decimal; 3. No caso de espcies florestais do gnero Eucaliptus, cujo resultado expresso em nmero de plntulas por peso da amostra, a semente pura no normalmente determinada; 4. As outras sementes e a natureza do material inerte presente devem ser identificadas tanto quanto possvel. O resultado de outras sementes deve ser expresso em nmero de sementes encontradas por peso da amostra de amostra de trabalho ou por unidade de peso; 5. Quando a porcentagem de alguns componentes for inferior a 0,05, a palavra TRAO dever ser registrada; 6. Se o resultado da avaliao de algum dos componentes for nulo, este dever ser informado como 0,0 no espao apropriado; 7. Os espaos vazios do boletim devem ser inuti-
37
Captulo 3
lizados com o sinal - 0 -; 8. A presena de sementes atacadas por doenas ou insetos deve ser relatada; 9. Quando, por qualquer motivo, forem examinadas menos que 2.500 sementes, na anlise de pureza, a seguinte nota deve constar no Boletim de Anlise: O peso da amostra de trabalho foi tomado de acordo com as RAS, mas continha apenas sementes; 10. Quando duas ou mais anlise de pureza so feitas sobre a mesma amostra de trabalho, o resultado final deve ser a mdia dos resultados obtidos; 11. Todos os resultados parciais devem ser includos no clculo da mdia, a menos que seja evidente que um ou mais deles sejam incorretos e, nesse caso, tais resultados no sero utilizados no clculo; 12. O Boletim de Anlise no pode conter rasuras.
3.6 Referncias 1 BRASIL. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Regras para anlise de sementes. Braslia: MAPA/ACS, 2009. 395p. 2 FIGLIOLIA, M.B.; OLIVEIRA, E.C; PIA-RODRIGUES, F.C.M. Anlise de sementes. In: AGUIAR, I.B.; PIA-RODRIGUES, F.C.M.; FIGLIOLIA, M.B. (coord.) Sementes florestais tropicais. Braslia: ABRATES, 1993. p.137-174. 3 MARCOS FILHO, J.; CICERO, S.M.; SILVA, W.R. Avaliao da qualidade das sementes. Piracicaba: FEALQ, 1987. 230p. 4 SILVA, E.M.N. Anlise de pureza. In: RODRIGUES, F.C.M.P. (coord.) Manual de anlise de sementes florestais. Campinas: Fundao Cargill, 1988. p.51-59.
38
Captulo 1 4
Determinao do tema grau de umidade

4. 1 Introduo
Determinaes peridicas do grau de umidade entre a colheita e a comercializao permitem a identificao de problemas que porventura ocorram ao longo das diferentes fases do processamento e possibilitam a adoo de medidas adequadas para a sua soluo [5]. Com essa informao, possvel manejar corretamente as sementes utilizando-se, se necessrio, prticas adequadas que propiciem sua conservao por maiores perodos, como o caso de sementes do grupo das ortodoxas que requerem baixo grau de umidade para a manuteno de viabilidade e que apresentam alto contedo de umidade na colheita, necessitando de secagem, previamente ao armazenamento. No caso das ortodoxas, as sementes com alto grau de umidade tendem a perder a viabilidade mais rapidamente se no forem manejadas corretamente. Isto porque, a umidade propicia uma intensificao da atividade respiratria da semente, consumindo suas reservas nutritivas. Como conseqncia, libera calor tornando o ambiente de
Captulo 4
armazenamento propcio ao aparecimento de agentes patognicos [3]. A determinao do grau de umidade tambm um critrio importante para o estabelecimento de preos. Em alguns casos, a matria seca pode estar sendo comercializada junto com a gua, acarretando maior custo no transporte da semente com maior grau de umidade do que o necessrio. No entanto, essa considerao s vlida quando se utiliza embalagens impermeveis, caso contrrio, a tendncia de se estabelecer uma umidade de equilbrio com o ambiente [7]. A umidade e a temperatura so fatores preponderantes no armazenamento de sementes. A longevidade prolongada quando a semente armazenada com baixa umidade e temperatura. Entretanto, essa regra no se aplica as espcies recalcitrantes cujas sementes requerem alto grau de umidade para seu acondicionamento, como o caso de Hevea brasiliensis, Theobroma cacao, Carapa sp., Virola surinamensis, Inga uruguensis, Araucaria angustiflia e Euterpe edulis, entre outras [3]. A gua pode se apresentar sob diferentes formas em uma semente [5]: gua absorvida ou gua livre: presa ao sistema coloidal por meio de foras capilares, ocupando espaos intercelulares e poros do material. gua adsorvida: tambm livre presa ao sistema atrao molecular; sendo retida por adeso de suas molculas ao material slido;. gua de constituio e/ou de composio: est unida quimicamente substncia adsorvente ou forma parte integrante dessa substncia e s pode ser removida sob condies especiais. A tentativa de sua remoo pelo calor pode provocar volatilizao de outras substncias e acarretar erros nas determinaes. As diferentes formas com que a gua se apresenta na semente podem causar dvidas quanto determinao correta do grau de umidade, isto , quanto eficincia dos mtodos para avaliar a presena das diferentes formas de
40
Determinao do grau de umidade
gua nas sementes. No entanto, deve ser ressaltado que, quando se procura determinar o teor de gua de uma amostra, no to importante o conhecimento da presena desta ou daquela forma de gua [5] e sim, assegurar a remoo mxima, tanto quanto possvel da gua e que no sejam volatilizados outros elementos volteis que no somente a gua . Os testes so realizados de acordo com as prescries das RAS, as quais nem sempre so adequadas a determinadas espcies, dadas as grandes variaes morfolgicas, fisiolgicas e na composio qumica das sementes e/ou unidades de disperso existentes entre as espcies florestais [6]. As RAS prescrevem o peso mnimo de amostras mdias nos mtodos de estufa de 100 g para espcies que devem ser modas e de 50 g para as demais espcies que no necessitam de moagem. Essas quantidades nem sempre so possveis para grande nmero de espcies arbreas com sementes grandes, como o caso de Dypterix alata, que possui em mdia 60 unidades de disperso (frutos) por quilograma [6]. O objetivo desta anlise determinar o teor de gua das sementes por mtodos adequados para uso em anlise de rotina [1].
4.2 Princpio bsico

A determinao do grau de umidade baseia-se na perda de peso das sementes quando secas em estufa. A gua contida nas sementes expelida em forma de vapor pela aplicao do calor sob condies controladas, ao mesmo tempo em que so tomadas precaues para reduzir a oxidao, a decomposio ou a perda de outras substncias volteis durante as operaes [1]. A reduo do peso reflete a perda de gua das sementes e, baseado neste princpio, as pesagens realizadas antes e aps a secagem fornecem dados para o clculo do
41
Captulo 4
grau de umidade [1].
4.3 Sementes ortodoxas e recalcitrantes de espcies florestais

O controle do grau de umidade de sementes ortodoxas tem grande importncia na colheita e no beneficiamento, na conservao do poder germinativo e do vigor durante o armazenamento, na escolha do tipo de embalagem, no controle de insetos e de microorganismos e do peso durante a comercializao. No caso das sementes recalcitrantes, essa verificao essencial manuteno da qualidade fisiolgica, principalmente durante a etapa de secagem, at ser atingido o grau de umidade de segurana, abaixo do qual a viabilidade e, ou, ou vigor comeam a ser afetados negativamente. Apesar de estar prescrita nas RAS a amplitude de tolerncia mxima de 0,6 a 2,8% para as diferenas entre duas subamostras de trabalho (repeties) de sementes de espcies arbreas e arbustivas, dentre as quais muitas que apresentam comportamento recalcitrante, os resultados de uma mesma determinao so, geralmente, discrepantes, cujas diferenas ultrapassam esses limites. As causas dessas variaes ainda no foram devidamente esclarecidas e comprovadas, muito embora se saiba que o grau de umidade individual de sementes recalcitrantes possa variar consideravelmente e o coeficiente de variao possa ser maior do que o verificado em amostras similares de sementes ortodoxas. Adicionalmente, os mtodos para determinao do grau de umidade daquelas sementes foram pouco estudados [4]. A perda de peso das sementes, que ocorre durante a secagem, est relacionada tanto com a temperatura sob a qual est submetida quanto ao perodo de exposio a essa temperatura. Assim sendo, as RAS prescrevem as temperaturas de 105C por 24 horas e 103C por 17 horas, sendo estas as mais utilizadas no Brasil, para as espcies
42
florestais, com sementes de tamanho grande e para as contidas dentro de frutos indeiscentes, ou 130C por 1 a 4 horas, sendo esta mais empregada para as grandes culturas. Outro mtodo que vem sendo muito estudado o de estufa a 70C at peso constante [4; 6].
4.4 Mtodos de estufa

Para que os resultados obtidos nos diversos laboratrios possam ser uniformes e comparveis entre si h necessidade de se seguir rigorosamente as instrues do mtodo adotado, oficialmente estabelecidos pelas RAS para uso nos laboratrios de anlise de sementes do pas. Os mtodos baseiam-se na perda de peso das sementes quando secas em estufa. considerado um mtodo preciso, mas alguns fatores podem interferir nos resultados obtidos [5]: O tamanho da amostra ou erros de amostragem, a temperatura de secagem, o tempo de permanncia das sementes na estufa, a preciso pesagens ou erros na pesagem, etc. O procedimento adequado para cada espcie previamente prescrito e qualquer alterao em uma das instrues pode provocar alteraes nos resultados. A temperatura empregada pode ser suficiente para remover substncias volteis juntamente com a gua, provocar a decomposio ou a oxidao de outras, e consequentemente, variaes no peso da amostra; isto ocorre principalmente nos estgios finais da secagem. A pesagem do material ainda quente provoca alterao no comportamento das balanas de preciso. Devido s condies de adequao dos laboratrios brasileiros para a conduo destes mtodos, a determinao em estufa 105C 3C por 24 horas foi adotado como oficialmente como mtodo padro no Brasil, podendo ser utilizado em qualquer espcie, inclusive essncias florestais. Os resultados so expressos em porcentagem com base no peso mido da amostra.
43
Captulo 4
4.4.1 Mtodo de estufa a 105 3C por 24 horas [1] Empregado para todas as espcies e com sementes inteiras; Regular a temperatura da estufa a 105C, admitindo-se uma variao 3C; Secar os recipientes por 30 minutos em estufa a 105C ou atravs de procedimento similar e resfri-los em dessecador; Conduzido com duas repeties; Usar sementes inteiras, qualquer que seja a espcie; Pesar o recipiente e sua tampa, devidamente identificados, em balana com sensibilidade de 0,001g, anotando-se os resultados (peso da tara = T); Distribuir uniformemente as amostras nos recipientes; Pesar novamente os recipientes contendo as sementes, juntamente com as respectivas tampas, obtendose o peso bruto das sementes midas (Pu); Colocar os recipientes na estufa 105C, sobre as respectivas tampas; Iniciar a contagem do tempo de secagem somente depois da temperatura retornar a 105C. Manter as amostras na estufa durante 24 horas; Retirar as amostras da estufa aps o perodo de secagem, tampar rapidamente os recipientes e coloc-los em dessecador at esfriar e pesar, obtendo-se o peso bruto das sementes secas (Ps); Utilizar como dessecantes slica gel, pentxido de fsforo, alumina ativada ou peneira molecular 4A, pelotas 1,5mm; Quando, durante a determinao da umidade em certas espcies, houver risco de algumas serem jogadas fora do recipiente, pela ao do calor, este deve ser cobrindo com tela de material no corrosvel. 4.4.2 Mtodo de estufa a baixa temperatura 101-105C por 17 horas [1] Esse mtodo o mais indicado para as espcies flo-
44
restais, sendo considerado seguro para aquelas que contenham substncias volteis. o mtodo bsico de referncia para introduo de novas espcies e mtodos adotados pelas Regras Internacionais de Anlise de Sementes da International Seed Testing Association- ISTA. O procedimento deste mtodo o mesmo do mtodo anterior exceto: A temperatura da estufa deve ser mantida a 103 2C; O perodo de permanncia das amostras na estufa deve ser de 17 1 hora.
4.5 Procedimentos
4.5.1 Amostragem A amostra deve ser retirada de diferentes locais de um lote, para que possa represent-lo fielmente. Imediatamente aps sua obteno, deve ser acondicionada em recipiente intacto prova de umidade (hermeticamente fechado) e do qual tenha se extrado o ar, tanto quanto possvel. A utilizao de embalagem permevel acarretar alteraes no grau de umidade durante o perodo compreendido entre a sua retirada e a anlise, o que no correto. Essa amostra enviada ao laboratrio separada das destinadas s demais determinaes [1]. A determinao deve ser iniciada o mais rpido possvel aps o recebimento, observando-se que a temperatura da amostra esteja em equilbrio com a temperatura do ambiente. Durante a determinao, a exposio da amostra ao ambiente do laboratrio deve ser reduzida ao mnimo e para espcies que no necessitam de moagem no mais que dois minutos devem separar a remoo da amostra do recipiente em que foi enviada at a colocao da amostra de trabalho no recipiente de secagem e, para as sementes modas, 30 segundos. Alm disso, devem ser preservadas de altas temperaturas para reduzir a possibi-
45
Captulo 4
lidade de alteraes causadas pela respirao das sementes [1]. 4.5.2 Pesos das amostras O peso mnimo das amostras mdias, nos mtodos de estufa, de 100 g para as espcies que devem ser modas (sementes grandes) e 50 g para as espcies que sero usadas inteiras [1]. No caso de sementes pequenas e/ou caras permitido enviar amostras mdias menores, tendo no mnimo o peso suficiente para a realizao dos testes solicitados. Deve ser feita a seguinte declarao e esta dever constar no campo Observaes do Boletim de Anlise de Sementes: A amostra mdia pesou ...g [1]. Antes da retirada das amostras de trabalho, a amostra mdia deve ser cuidadosa e rapidamente homogeneizada, reduzindo-se ao mximo a exposio das sementes ao ambiente, podendo ser feita da seguinte forma [1]: Misturar a amostra em seu recipiente com uma colher, ou; Colocar a abertura do recipiente original contra a abertura de um recipiente similar e despejar a semente de um para o outro. Devem ser retiradas, no mnimo, trs pores de diferentes pontos e combinados para formar a amostra de trabalho de tamanho requerido; O peso da amostra dever ser anotado em espao especfico no boletim de anlise. Os recipientes devem ser abertos no momento do incio do teste. Essas preocupaes so necessrias a fim de que o grau de umidade das sementes se conserve praticamente inalterado at a ocasio da sua determinao em laboratrio. A determinao deve ser realizada em duplicata, isto , com duas amostras de trabalho, sendo estas retiradas independentemente da amostra mdia, colocadas em recipientes secos, com tampa e previamente pesados [1]. Para os mtodos de estufa, o peso requerido depender do dimetro do recipiente usado (Tabela 1).
46
Tabela 1. Peso da amostra de trabalho requerido de acordo com o dimetro do recipiente. Dimetro do recipiente (cm) 5-8 8 Fonte: Brasil (2009). Peso da amostra de trabalho (g) 4, 5 0,5 10,0 1,0
Para sementes grandes de espcies florestais que necessitam de corte, um tamanho diferente de amostra de trabalho pode ser necessrio. Para sementes cortadas, a amostra deve ser de tamanho suficiente para a retirada de duas repeties, onde cada uma tenha peso aproximado de cinco sementes intactas. A pesagem das amostras de trabalho ou subamostras a serem utilizadas e a respectiva anotao desses pesos so suficientes para que se considere cumprida a recomendao de um incio imediato do teste. Uma vez registrados os pesos iniciais das amostras, qualquer alterao que posteriormente venha a ocorrer na umidade das sementes no ter, em curto prazo, maior influncia sobre os resultados [1].
4.5.3 Moagem A moagem ou de corte recomendada para sementes grandes (equivalentes a menos de 5.000 unidades por quilograma de sementes puras ou ao peso individual superior a 0,2 g) de espcies arbreas e arbustivas, e para sementes com tegumento que impedem a perda de gua, a menos que seu contedo em leo torne difcil esta operao ou sujeitas a ganhar peso pela oxidao do material modo. Essa preparao visa assegurar que as amostras sequem mais rpida e uniformemente do que se fossem constitudas por sementes inteiras. A moagem deve ser feita numa poro da amostra mdia, antes da obteno das duas amostras [1]. As sementes de leguminosas e espcies florestais exigem uma textura mais grossa, no mnimo, 50% do ma-
47
Captulo 4
terial modo deve passar atravs de peneira de malha de 4,00 mm, e no mais do que 55% deve passar atravs de uma peneira com abertura de 2.00mm. O moinho deve ser ajustado para se obter partculas do tamanho requerido [1]. Para estabelecer a textura indicada, uma pequena quantidade da amostra moda e a seguir rejeitada. Uma vez estabelecida textura requerida, tritura-se uma quantidade ligeiramente superior exigida para o teste. O tempo total do processo de moagem no deve exceder a dois minutos [1]. 4.5.4 Corte O corte indicado quando no for possvel realizar a moagem, sendo recomendado para as sementes grandes de espcies florestais (peso de mil sementes > 200g) e sementes com tegumento muito duro, como de Fabaceae (Leguminosae), e/ou sementes com alto teor de leo. Devem ser cortados em pequenos pedaos, menores do que 7,0mm. O corte deve ser realizado em duas amostras, cada uma de peso aproximado ao de cinco sementes intactas, retirada da amostra mdia. As amostras devem ser rapidamente cortadas, recombinadas e misturadas com uma colher, antes de serem retiradas as duas repeties, as quais devem ser colocadas em recipientes previamente pesados. A exposio da amostra ao ambiente no deve ser superior a quatro minutos. 4.5.5 Pr-secagem Deve-se realizar a pr-secagem nos testes com moagem, em sementes com grau de umidade acima de 17%. Sementes de espcies que apresentam dificuldade de moagem devero sofrer tambm pr-secagem, mesmo quando mais secas do que 17% [1]. Retiram-se da amostra mdia duas amostras, cada uma com o peso suficiente para atingir, depois de prsecas, o peso mnimo indicado nas RAS. Essas amostras
48
so pesadas e colocadas em recipientes de peso previamente conhecidas e secas para reduzir o grau de umidade a um valor que permita a moagem satisfatria [1]. Depois de pr-secas as amostras so repesadas em seus recipientes para determinar a perda de peso e a seguir so modas separadamente e o material sujeito aos procedimentos prescritos no subitem 4.4 (Mtodos em estufa) [1]. Exceto para o caso descrito a seguir, as amostras, dependendo do grau umidade, devem ser pr-secas em uma estufa de temperatura constante de 130C por 5 a 10 minutos, e depois, expostas ao ambiente do laboratrio por aproximadamente duas horas [1]. Para o caso de espcies com grau de umidade acima de 30%, as amostras devem ser secas durante o perodo de 12 horas, sobre uma estufa aquecida [1]. A pr-secagem no obrigatria para as sementes de espcies florestais em que o corte indicado.
4.6 Equipamentos
Para determinao do grau de umidade so necessrios [5]: Estufa dotada de sistema eltrico de aquecimento, controle termosttico, isolamento eficiente, com temperatura uniforme em todo o seu interior e a temperatura especificada ao nvel da prateleira, equipada com prateleiras removveis, perfuradas onde so colocados os recipientes que contem amostras e, com sistema de circulao de ar forado. A capacidade de aquecimento deve ser tal que aps o pr-aquecimento temperatura requerida, seguido pela abertura e colocao dos recipientes, a estufa alcance a temperatura indicada em at 30 minutos; Balana de pesagem rpida e com preciso de 0,001g; Recipientes de metal no corrosvel ou de vidro com aproximadamente 0,5mm de espessura, com tampa
49
Captulo 4
bem ajustada, para evitar trocas de vapor d'gua das sementes com o ar exterior durante a preparao e as pesagens; tanto o recipiente como a sua tampa devem ser identificados com o mesmo nmero e mantidos limpos e secos e, quando necessrio, seque-os por 30 minutos a 105C, ou por procedimento similar e resfrie-os em dessecador. Os recipientes devem ter capacidade efetiva para que a amostra de trabalho seja distribuda de modo a no ultrapassar 0,3g/cm; Dessecadores com suporte de metal espesso ou porcelana, contendo slica-gel, cloreto de clcio, pentxido de fsforo ou alumina ativa; usados como desidratante. A slica-gel mais utilizada; quando seca tem colorao azul e, quando mida, rosa; Bandejas, luvas, termmetros escala de 0,1 de intervalo, pinas, ferramentas de corte como bisturi, tesoura de poda, alicate, ou qualquer outro instrumento de corte adequado; Moinho ajustvel, de material no corrosivo e que no absorva gua, ser de fcil limpeza, permitir que a moagem seja executada de forma rpida e uniforme, sem o desenvolvimento de calor e, tanto quanto possvel, sem contato com o ambiente externo ; ser ajustvel, de maneira a obter as partculas das dimenses indicadas; Peneiras de arame no corrosivo, com abertura de malhas 0,50mm; 1,00mm; 2,00mm e 4,00 mm ; Boletim de Anlise especfico.
4.7 Clculo para Determinao do Grau de Umidade

O grau de umidade calculado atravs da seguinte expresso e expresso em porcentagem [1]:
50
%de Umidade (U) = 100 (P p) P-t onde: P = peso inicial, peso do recipiente e sua tampa mais o peso da semente mida; p = peso inicial, peso do recipiente e sua tampa mais o peso da semente seca; t = tara, peso do recipiente com sua tampa. A pesagem deve ser em gramas, com trs casas decimais. O resultado final obtido atravs da mdia aritmtica das porcentagens de cada uma das repeties retiradas da amostra de trabalho[1]. A aproximao dos resultados, quando necessria, deve ser feita depois de calculada a mdia das repeties. Toda frao inferior a 0,05 deve ser desprezada. O resultado dessa determinao deve ser informado no campo destinado a Outras Determinaes do Boletim de Anlise de Sementes em porcentagem e com uma casa decimal[1]. Os resultados tambm podem ser expressos em relao ao peso das sementes secas[1]: %U(bs)= Pu Ps x 100 Ps T Para a converso dos valores de uma base para a outra, utiliza-se as seguintes expresses[5]: U(bu)= U(bs) U(bs)= U(bu) 100 + U(bs) 100 + U(bu) onde: U(bu) = porcentagem de gua calculada em funo do peso das sementes midas e U(bs) = porcentagem em funo do peso das sementes secas.
51
Captulo 4
4.8 Tolerncias
A diferena entre os resultados das duas amostras (repeties), no deve exceder de 0,5%. Se essa diferena for maior, a determinao deve ser repetida com outras amostras de trabalho, novamente coletas para este fim. Se as repeties desta segunda determinao tambm estiverem fora da tolerncia, verifique se a mdia dos resultados dos dois testes est dentro da tolerncia de 0,5%. Se estiver, informe o resultado mdio [1]. Para sementes de espcies florestais e arbustivas, onde a variao normalmente excede 0,5%, a amplitude de 0,3% a 2,5% permitida e relacionada ao tamanho da semente e ao grau de umidade inicial (Tabela 2). Essa tabela fornece as diferenas mximas toleradas entre os resultados de duas repeties. usada de acordo com a mdia inicial do grau de umidade da amostra e a diferena tolerada para cada tamanho da semente [1].
Tabela 2. Nveis de Tolerncia para diferenas entre as repeties na determinao do grau de umidade em sementes florestais e arbustivas. Tamanho da semente Nmeros de sementes puras/kg > 5000 > 5000 < 5000 < 5000 < 5000 Grau de umidade (%) < 12 > 12 < 12 12-25 > 25
Classe
Tolerncia (%)
Sementes pequenas Sementes pequenas Sementes grandes Sementes grandes Sementes grandes Tamanho da semente Sementes pequenas * Sementes pequenas**
0,6 0,8 0,7 1,1 2,8 >25 0,6 2,,8
Mdia do grau de umidade (%) <12 12 a 25 0,3 0,4 0,5 0,8
* Sementes pequenas so aquelas com um tamanho tal que o peso de mil sementes menor do que 200g
52
** Sementes grandes so aquelas com um tamanho tal que o peso de mil sementes maior do que 200g Fonte: BONNER, F.T. (1984).
4.9 Referncias
1 BRASIL. Ministrio da Agricultura e Reforma Agrria. Regras para anlise de sementes. Braslia: 2009. 365p. 2 BONNER, F.T. Tolerance limits in measurement of tree moisture. Seed Science and Technology, Zurich, v.12, p.789-794, 1984. 3 FIGLIOLIA, M.B.; OLIVEIRA, E.C; PIA-RODRIGUES, F.C.M. Anlise de Pureza. In: AGUIAR, I.B.; PIA-RODRIGUES, F.C.M.; FIGLIOLIA, M.B. (coord.) Sementes florestais tropicais. Braslia: ABRATES, 1993. p.145-148. 4 GENTIL, D.F.O.; FERREIRA, S.A.N. Preparao das subsamostras, temperatura e perodo de secagem na determinao do grau de umidade de sementes de camucamu (Myrciaria dubia (H.B.K.) McVaugh). Revista Brasileira de Sementes, vol. 24, no 2, p.62-69, 2002. 5 MARCOS FILHO, J; CICERO, S.M.; SILVA, W.R. Avaliao da qualidade das sementes. Piracicaba: FEALQ, 1987. 230p. 6 PIA-RODRIGUES, F.C.M; FIGLIOLIA, M.B.; PEIXOTO, M.C. Teste de Qualidade In: BORGUETTI, et al. (orgs.), Germinao do bsico ao aplicado. So Paulo, Ed. ARTMED, 2004. 7 SILVA, E.M.N, Determinao de Umidade. In: PIARODRIGUES, F.C.M.(coord.) Manual de anlise de sementes florestais. Campinas: Fundao Cargill, 1988. p.61-69
53
Captulo 5
Teste de germinao
Ferraz, I.D.K., Calvi, G.P.
5.1 Introduo
Normalmente, fcil distinguir entre uma planta viva ou morta. Entretanto, esse no o caso em sementes. Para avaliar a vida das sementes existem procedimentos especficos: o teste direto avalia a germinabilidade das sementes e os testes indiretos avaliam a viabilidade das mesmas. Em geral, deve ser dada sempre preferncia a um teste direto de germinao. Porm, s vezes este teste pode ser impraticvel; neste caso, um dos testes indiretos pode ser aplicado. Precisa-se ter em mente que um teste de germinao no laboratrio deve refletir o potencial mximo de germinao de um lote de sementes sob condies ambientais ideais. Portanto, o resultado nem sempre reflete a emergncia no viveiro ou uma previso do resultado no viveiro. Em geral, um teste de germinao no laboratrio uma superestimao do resultado no viveiro e um teste de viabilidade uma superestimao do resultado do teste de germinao. Os resultados de um teste de germinao devem
Captulo 5
ser independentes da pessoa de execuo e devem ter replicabilidade, ou seja, um teste subsequente, do mesmo lote de sementes, deve dar o mesmo resultado, dentro de limites estatisticamente definidos. Para tal, h a necessidade de adoo de procedimentos padronizados que so as Regras para Anlises de Sementes (RAS) [18]. O uso de RAS, aplicando a mesma metodologia em diferentes laboratrios, fundamental para a avaliao da qualidade de um lote de sementes para fins comerciais. O teste deve refletir a qualidade das sementes e no a qualidade das condies do teste. Assim, as condies do teste devem corresponder s exigncias das sementes em termos das condies ambientais como temperatura, substrato, umidade e luz. Visando subsidiar o comrcio de sementes para a propagao das espcies, o teste de germinao avalia a aptido das sementes de formar uma plntula normal sob condies favorveis de campo. A anlise permite ao produtor estimar a quantidade de sementes necessria para a semeadura e avaliar o investimento econmico pela comparao de lotes de sementes, com diferenas na qualidade. A validade dos resultados dos testes de germinao , s vezes, questionada, pois, no laboratrio, as condies so controladas, a fim de possibilitar a mxima capacidade germinativa das sementes. Como mencionado acima, a germinao no laboratrio nem sempre igual ao desempenho no campo, onde as condies ambientais no so controladas e, s vezes, adversas ao processo de germinao e desenvolvimento do vegetal. No entanto, as discrepncias entre os resultados do laboratrio e campo podem ser reduzidas, quando as sementes apresentam alto vigor. As RAS apresentam as especificaes para a germinao de 276 espcies florestais e arbustivas. Muitas no so nativas no Brasil ou na Amrica do Sul, so originrias da Amrica do Norte, Europa, frica ou Austrlia, como Pinus, Eucaliptus, Tectona, Alnus, etc. Frente alta biodiversidade das florestas neotropicais, este nmero
56
Teste de germinao
muito pequeno. Porm, para que uma nova espcie possa ser includa nas RAS h um longo protocolo a ser seguido. Os resultados cientficos devem ser confirmados com sementes de vrias procedncias e diferenas no vigor; em seguida, a metodologia selecionada deve ser validada entre os laboratrios credenciados, antes que as recomendaes possam ser includas nas RAS. Os estudos na tecnologia de sementes das espcies florestais nativas so ainda muito incipientes, em comparao aos das espcies de importncia agrcola, que j foram estudadas e domesticadas por dcadas ou at sculos. Seguem alguns pontos que so particulares s espcies florestais, diferenciando-as das espcies agrcolas. A diversidade de espcies arbreas muito alta. No se conhece o nmero exato de espcies florestais no Brasil. Estima-se que somente na regio amaznica existem num total entre 4.000 a 5.000 espcies de rvores [66]. Somente em uma rea de 500 ha foram identificadas 1.077 espcies de rvores nas proximidades de Manaus [65]. Em outros 70 ha, na mesma regio, foram registradas 698 espcies arbreas com DAP igual ou acima de 10 cm [64]. Devido a esta alta diversidade, existem poucas informaes sobre cada espcie. Um dos maiores problemas , ainda, a correta identificao botnica das rvores. s vezes os frutos, sementes e mudas nem foram ainda adequadamente descritos. A produo de sementes de muitas rvores irregular e no anual. Muitas espcies apresentam sementes grandes e sensveis ao dessecamento (recalcitrante) [24]. As sementes de espcies florestais podem apresentar estruturas especficas de proteo e/ou disperso que podem dificultar a coleta e aumentar o tempo de germinao. As rvores tm um ciclo de vida longo (dcadas e at centenas de anos) e podem demorar anos at a primeira frutificao. Desta forma, a produo em nmero de sementes geralmente pequeno e, consequentemente, o lote das sementes. Dentro das espcies nativas, existem espcies raras e/ou ameaadas de extino que exigem procedimentos diferenciados, devido o
57
Captulo 5
alto valor ecolgico das sementes. Assim, nem todos os procedimentos geralmente aplicados s sementes agrcolas podem ser transferidos diretamente s espcies florestais. Neste captulo, os procedimentos mais importantes para a avaliao da germinao das sementes florestais foram extrados das RAS. Quando considerado oportuno, os procedimentos foram comentados e ilustrados com exemplos disponveis, na maioria das vezes de espcies florestais da Amaznia. O intuito dos autores foi facilitar a aplicao das RAS para iniciantes em avaliao de sementes florestais. Desta forma, este captulo se entende como um complemento s RAS e no dispensa sua consulta.
5.2 DEFINIES
As RAS apresentam definies bsicas de termos utilizados para os testes de germinao, entende-se por: 5.2.1. Germinao: a emergncia e desenvolvimento das estruturas essenciais do embrio, demonstrando sua aptido para produzir uma planta normal sob condies favorveis de campo. 5.2.2. Porcentagem de germinao: corresponde proporo do nmero de sementes que produziu plntulas classificadas como normais obtidas sob as condies e perodos especificados para cada espcie. 5.2.3. Estruturas essenciais: So estruturas que permitiro que uma plntula possa continuar seu desenvolvimento at tornar-se uma planta normal. Nestas, so consideradas a avaliao do sistema radicular (razes primria, secundrias e, em alguns gneros, razes semi-
58
Teste de germinao
nais) e da parte area (hipoctilo e/ou epictilo, cotildones, primeiras folhas e gema terminal). O detalhamento da avaliao do sistema radicular e da parte area varia para os diferentes tipos de germinao. Geralmente, avaliada a plntula como toda e, em seguida, cada estrutura. Uma breve discusso sobre tipos de germinao encontram se neste captulo no item 5.5. 5.2.4. Plntulas normais: so aquelas que apresentam potencial para continuar seu desenvolvimento e dar origem a plantas normais, quando desenvolvidas sob condies favorveis. Para serem classificadas como normais, as plntulas devem estar de acordo com uma das seguintes categorias: Plntulas intactas devem apresentar todas as suas estruturas essenciais bem desenvolvidas, completas, proporcionais e sadias. Dependendo da espcie podem ser encontradas diferentes combinaes das estruturas essenciais. Plntulas com pequenos defeitos podem ser includas nas plntulas normais, desde que mostrem um desenvolvimento satisfatrio e equilibrado, quando comparadas com uma plntula intacta do mesmo teste. Entende-se por pequenos defeitos: a) No sistema radicular: raiz primria com dano limitado ou com pequeno retardamento no crescimento; raiz primria deficiente, mas com razes secundrias suficientemente bem desenvolvidas; b) Nas estruturas areas: hipoctilo, epictilo ou mesoctilo com danos limitados; cotildones e primeiras folhas com danos limitados - metade ou mais da rea total do tecido deve funcionar normalmente (regra dos 50 %); folhas primrias com tamanho reduzido a, no mnimo, um quarto do tamanho normal. Plntulas com infeco secundria podem ser includas nas plntulas normais mesmo quando seriamente deterioradas devido presena de fungos ou bactrias, se ficar evidente que a prpria semente no a fonte da in-
59
Captulo 5
feco e se possvel verificar que todas as estruturas essenciais esto presentes. A morfologia da plntula deve ser bem conhecida para definir qual estrutura essencial ou no. Vrias plntulas de espcies florestais mostram alta taxa de regenerao, mesmo quando danificadas; por exemplo, em Eugenia stipitata com germinao hipgea (H-C-R), quando h ferimento do meristema apical, observa-se alta regenerao do eixo nas axilas dos cotildones e catfilos. A relao entre a parte area e a raiz pode variar, dependendo da espcie, tornando-se difcil julgar um desenvolvimento equilibrado sem conhecer as caractersticas da espcie; por exemplo, Schizolobium amazonicum apresenta um crescimento da raiz muito reduzido em comparao da parte area. Difcil tambm julgar at que estdio do desenvolvimento as plntulas devem ser acompanhadas para avaliar o desenvolvimento normal; por exemplo, em Hevea guianensis, o epictilo pode apresentar entre 14 a 29 cm, antes da primeira folha. 5.2.5. Plntulas anormais: so aquelas que no mostram potencial para continuar seu desenvolvimento e dar origem a plantas normais, mesmo crescendo em condies favorveis. As plntulas anormais podem ser classificadas em: Plntulas danificadas apresentam qualquer uma das suas estruturas essenciais ausentes ou to danificadas que no possa ocorrer desenvolvimento proporcional; Plntulas deformadas apresentam desenvolvimento fraco, com distrbios fisiolgicos, ou com estruturas essenciais deformadas ou desproporcionais; Plntulas deterioradas apresentam quaisquer uma de suas estruturas essncias infectadas ou deterioradas, como resultado de uma infeco primria (originada da prpria semente). Nas RAS pode ser encontrada uma srie de caractersticas que definem a anormalidade de uma plntula, dentre as quais pode ser citadas:
60
Teste de germinao
a) sistema radicular atrofiado, ausente, retorcido, desproporcional em relao s outras estruturas, preso dentro do tegumento, com geotropismo negativo; b) parte area deformada, quebrada, ausente, deteriorada devido a uma infeco primria. Nas avaliaes da germinao, devem ser desconsideradas anomalias causadas pelo mtodo de germinao como, por exemplo, raiz com crescimento horizontal, devido a germinao sobre papel; eixo curvado, causado pela altura da caixa de germinao; estiolamento, devido a insuficincia de luz, entre outras. No ponto de vista dos autores, os mtodos de germinao so limitados, principalmente para sementes grandes, pois estas necessitam maior espao, dificultando um desenvolvimento normal no laboratrio. Uma srie de deficincias fsicas das plntulas em espcies agrcolas pode ser causada pela colheita e processamento mecnico das sementes ou por ao de defensivos agrcolas. A frequncia destes danos deve ser bastante reduzida em essncias florestais nativas, pois estas sementes so, geralmente, coletadas e processadas ainda de maneira manual. Alm disso, anormalidades na fase de plntulas em espcies agrcolas, que possuem ciclo de vida curto, podem comprometer o seu desenvolvimento. Desta forma, vale uma reflexo se estes mesmos defeitos podem prejudicar o desenvolvimento de espcies florestais que teriam anos e dcadas para se recuperar de um dano nos cotildones ou nas primeiras folhas. Considera-se mais importante na avaliao de essncias florestais, a observao da integridade dos meristemas (apical e radicular) e do eixo que possibilite o desenvolvimento. 5.2.6. Unidade - sementes mltiplas: so sementes que podem produzir mais que uma plntula no teste de germinao. uma caracterstica da espcie e pode ocorrer quando: a) a unidade de semeadura contm mais que uma semente verdadeira;
61
Captulo 5
b) uma semente verdadeira contm mais que um embrio; c) os embries esto unidos. Para efeito do teste de germinao, quando uma semente produz mais que uma plntula normal, somente uma plntula contada para a determinao da porcentagem de germinao. Caso haja interesse, pode-se determinar o nmero de plntulas formadas por cem unidades ou o nmero de sementes que produziram uma, duas ou mais plntulas normais. H uma srie de espcies florestais que contm mais que uma semente verdadeira na unidade de semeadura, como por exemplo Byrsonima chrysophylla (murici [20]. Mais que um embrio foi observado em sementes de Iryanthera juruensis (ucubarana-pun [20]. Carapa procera (andirobinha) geralmente apresenta sementes poliembrinicas, nunca observado em C. guianensis (andiroba) [24]. Algumas sementes quando cortadas em duas ou mais partes, podem produzir uma plntula normal de cada um das fraes, como por exemplo, Eugenia stipitata [9]. Outras podem produzir caules secundrios nas axilas dos cotildones, principalmente quando um desenvolvimento normal impedido devido falta de espao vertical no germinador, sendo mais frequente em plntulas com germinao hipgea, como por exemplo, Carapa guianensis. Estes caules no devem ser confundidos com plntulas de sementes mltiplas, pois apresentam somente uma raiz para vrias partes areas. 5.2.7. Sementes no germinadas: so as sementes que, no final do teste de germinao, no germinaram devido a diferentes causas. Podem ser classificadas como: Sementes duras no absorvem gua e no intumescem e, no final do teste de germinao, continuam duras como no incio. Esse fenmeno causado pela impermeabilidade do tegumento gua, sendo considerado um tipo de dormncia. Ao verificar a presena de sementes duras no final
62
Teste de germinao
do teste de germinao, elas devem ser contadas, anotadas na ficha de germinao e permanecer no substrato por um perodo adicional de at sete dias, juntamente com as sementes que, nessa ocasio, ainda se encontrem somente intumescidas e/ou em estado inicial de germinao. As plntulas normais encontradas no fim do perodo adicional so includas na porcentagem de germinao, e as sementes que permaneceram duras so informadas separadamente. Quando requerido pelo interessado, o laboratrio poder aplicar um tratamento especfico para superar a dormncia das sementes. Neste caso, so conduzidos testes com e sem pr-tratamento com a mesma amostra, e os resultados so indicados no Boletim de Anlise. Sementes dormentes embora aparentemente viveis, no germinam, mesmo quando colocadas nas condies especificadas para a espcie em teste. Podem ser capazes de absorver gua e intumescer, mas no germinam e nem apodrecem at o final do teste. importante ressaltar que nem todas as sementes classificadas como dormentes ao final do teste de germinao so viveis. A viabilidade dessas sementes pode ser verificada por testes indiretos. O mais comum a colorao com tetrazlio, pois somente tecidos vivos se tornam vermelhos. Os tecidos mortos continuam na cor original geralmente branco ou marrom. As RAS possuem um captulo especialmente para detalhar os procedimentos para o teste de tetrazlio. Portanto, as RAS distinguem as sementes com dormncia devido a impermeabilidade do tegumento (chamadas sementes duras) das sementes com outros tipos de dormncia (chamadas sementes dormentes). Esta diferenciao baseada na praticidade, pois, quando as sementes apresentam outros tipos de dormncia h uma gama de possibilidades para sua superao. Nas RAS so listadas, alm das recomendaes para o teste de germinao, como temperatura, substrato e perodo para primeira contagem e contagem final, in-
63
Captulo 5
strues especficas para a superao da dormncia para todas as espcies listadas. Sementes mortas no germinaram, no esto duras, nem dormentes e, ao final do teste, geralmente apresentam-se amolecidas e atacadas por microrganismos. Outras categorias de sementes no germinadas podem ser sementes vazias, sementes sem embrio ou sementes danificadas por insetos.
5.3. EQUIPAMENTOS PARA GERMINAO

As RAS no determinam quais os tipos de equipamentos devem ser usados durante os testes de germinao, a escolha depende da estrutura do laboratrio. Porm, para que os resultados reflitam o potencial mximo de germinao das sementes, as condies ambientais devem ser mantidas, durante o teste, o mais prximo do timo possvel. Para tal, necessrio o uso de equipamentos adequados, em bom estado de conservao e funcionamento. As RAS descrevem como equipamentos para os testes de germinao, apenas germinadores e contadores de sementes para a semeadura. Os germinadores so bastante variveis quanto ao tamanho, sistema empregado para a acomodao das amostras, dispositivos para o controle de temperatura, luz, umidade relativa do ar interno e de outros detalhes. Os germinadores mais usados se enquadram em um dos tipos a seguir: Cmara de germinao (germinador) consiste, em linhas gerais, de uma cmara com paredes duplas, adequadamente isoladas a fim de diminuir as variaes internas de temperatura, e, so equipados com um conjunto de bandejas onde as amostras podem ser colocadas para germinar. Existem germinadores de cmara mais simples que possuem apenas o aquecimento, assim somente tempe-
64
Teste de germinao
raturas iguais ou superior a do ambiente podem ser reguladas. Modelos mais modernos possibilitam tambm a refrigerao; desta forma, a temperatura pode ser ajustada abaixo da do ambiente. As RAS prescrevem que a variao de temperatura no interior do equipamento no deve ser maior que 2 C, em cada perodo de 24 horas. Hoje em dia, muitos equipamentos possuem um timer para programar o fotoperodo (perodo de luz e escuro) e um timer para programar o termoperodo (alternncia de temperatura) simulando as condies naturais. Na programao, deve-se observar que a temperatura baixa sempre coincida com o perodo escuro e a temperatura alta com o de luz. Quando a luz for indicada para o teste de germinao, deve-se oferecer, no mnimo, 8 horas de luz. Nos casos de espcies que exigem testes de germinao em temperaturas alternadas, e, se o equipamento disponvel no for capaz de proporcionar tais condies, as amostras devem ser transferidas diariamente de um germinador para outro, regulados a temperaturas diferentes, para conseguir o termoperodo. Existem equipamentos que permitem o controle da umidade no interior da cmara. Caso o modelo empregado no tenha esta funo, pode ser necessrio que os substratos, contendo as sementes, sejam envolvidos por materiais resistentes a troca do vapor dgua ou mantidas em recipientes para evitar dessecao excessiva. Sala de germinao os princpios de construo e funcionamento so semelhantes ao de cmara de germinao, porm suficientemente grande para permitir a entrada de pessoas. As amostras so colocadas em prateleiras laterais ou sobre carrinhos. Devem ser instalados ventiladores para reduzir a possibilidade de estratificao da temperatura, bem como umidificadores para manter um alto grau de umidade relativa, quando os testes no forem colocados em recipientes prova de umidade. Combinao de cmaras e salas de germinao a sala, construda com isolamento trmico, mantida, por
65
Captulo 5
meio de um sistema de refrigerao, a uma temperatura constante. Nesta so colocados germinadores tipo simples, dotados apenas com aquecimento e regulados individualmente temperatura desejada. A temperatura da sala deve corresponder a mais baixa usada nos testes de germinao. Tanto temperaturas constantes como alternadas podem ser obtidas com esta combinao. Contador de sementes - possibilita a contagem das sementes para a instalao dos testes de germinao. Os contadores depositam as sementes acima do substrato de forma uniforme e equidistante. Os equipamentos possuem placas perfuradas e podem ser acoplados a um sistema de suco (contadores a vcuo), com o qual as sementes so sugadas nas perfuraes. Assim, pode-se fazer a semeadura de milhares de sementes em pouco tempo, sem a necessidade de cont-las individualmente. Maiores detalhes dos contadores de sementes podem ser obtidos nas RAS. As RAS prescrevem que, sempre que possvel, devem ser utilizadas contadores de sementes, para facilitar a operao e garantir a seleo ao acaso das sementes. Entretanto, devido grande biodiversidade e grande variao em tamanho e forma, necessrio a criao de modelos exclusivos para a maioria das espcies. Outro assim, o uso de contadores de sementes invivel para espcies com grande variao no tamanho e em sementes muito grandes. Por exemplo, Lecythis barnebyi possui sementes com comprimento mdio de 3,8 cm variando de 2,3 a 8,8 cm [20]; Scleronema micranthum tem sementes com massa mdia de 89 g, variando de 31 a 220g (outros exemplos podem ser encontradas na Tabela 5.1). 5.3.1. Condies sanitrias dos materiais e equipamentos O resultado do teste de germinao deve refletir a qualidade das sementes submetidas; desta forma, a germinao no pode ser influenciada negativamente por fatores externos, incluindo a contaminao com fungos e
66
Teste de germinao
bactrias. Assim, todos os utenslios usados nos testes de germinao devem ser conservados limpos e os substratos, depois de esterilizados ou descontaminados, devem ser acondicionados em locais secos e protegidos de p. Os utenslios reutilizveis, como as placas de petri, caixas plsticas, gerbox e recipientes de alumnio devem ser cuidadosamente lavados com gua e sabo e secados aps o uso. Os germinadores devem merecer especial ateno, devendo ser lavados com gua e sabo e desinfetados periodicamente. A desinfestao pode ser feita com lcool a 70%, Lysoform, paraformol, glutaraldeido e outros, cada um deles empregado na dosagem recomendada na embalagem. Tambm deve ser levada em considerao a condio sanitria das sementes utilizadas no teste. Embora as RAS no recomendem nenhum tratamento antifngico especfico, quando um fungicida for usado, o nome do produto qumico, a porcentagem de ingrediente(s) ativo(s) e sua(s) dosagem(ns) dever(o) ser informado(s) no Boletim de Anlise de Sementes. Rotineiramente, em algumas espcies florestais feita a assepsia das sementes com soluo comercial de NaClO (hipoclorito de sdio) a 1 ou 2 %. Para tal, 1 mL ou 2 mL, respectivamente, da soluo comercial de hipoclorito de sdio so dissolvidos em 100 mL de gua. As sementes, depois de imergidas na soluo, so agitadas cuidadosamente e deixadas em repouso por dois minutos. Em seguida, utiliza-se uma peneira para lavar as sementes em gua corrente e por ltimo enxgue com gua destilada. As sementes so dispostas sobre papel absorvente para secagem. A assepsia com hipoclorito de sdio pode causar efeitos negativos na germinao, principalmente quando aplicada em concentraes maiores. Portanto, recomenda-se somente o uso deste produto aps avaliao prvia.
67
Captulo 5
5.4. INSTALAO DO TESTE DE GERMINAO

Como princpio bsico, os testes de germinao devem ser conduzidos sob condies ideais de temperatura, luz e umidade, de modo a possibilitar uma germinao uniforme, rpida e completa da amostra de sementes da espcie em questo, e possibilitar o desenvolvimento das plntulas at que possam ser classificadas como normais ou anormais. Os testes devem ser padronizados para que os resultados de um mesmo lote possam ser reproduzidos e comparados entre laboratrios, dentro dos limites tolerados pelas RAS (ver tabelas de tolerncia). Nas RAS encontra-se uma longa listagem, que ocupa mais que 40 pginas, com instrues para a execuo dos testes de germinao das sementes listadas. 5.4.1. Amostra de trabalho e tolerncias dentro e entre testes As sementes utilizadas no teste de germinao devem ser tomadas, ao acaso, da poro de Semente pura da anlise de pureza. O restante da amostra deve ser conservado at o final do teste, para eventual necessidade de repetio. As RAS exigem o uso de 400 sementes para a realizao do teste de germinao, usando quatro repeties de 100 sementes ou, oito de 50, ou ainda 16 de 25. Por outro lado, para algumas espcies, como as do gnero Tibouchina e Eucalyptus, que possuem sementes muito pequenas, as repeties para o teste de germinao podero ser formadas por peso. As tabelas de tolerncia permitem a comparao dos resultados dentro do teste, entre testes ou com um padro estabelecido. As RAS permitem, na avaliao do teste de germinao, utilizar 2,5 % de probabilidade para as espcies agrcolas e 1 % de probabilidade para sementes de espcies florestais, considerando que a maior variabilidade natural contribui para o aumento da diferena entre resultados. Esta permisso ba-
68
Teste de germinao
seia-se no fato que, a tolerncia aumentada com a diminuio da probabilidade. A reduo do nmero de sementes por repetio, traz, como conseqncia, a perda de preciso. No caso especfico do teste de germinao, as tabelas de tolerncia foram elaboradas para quatro repeties de 100 sementes. Desta forma, quando se utiliza sub-repeties de 50 ou de 25 sementes, os resultados devem ser agrupados para formar quatro repeties de 100 sementes. Portanto, as tabelas de tolerncia exigidas nas RAS no podem ser aplicadas, quando se utiliza um nmero menor de sementes para o teste de germinao, como por exemplo, quatro repeties de 25 sementes. So disponveis nas RAS, referente ao teste de germinao, as seguintes tabelas, indicando as tolerncias mximas admitidas para comparao de resultados: das repeties do mesmo teste; de amostras de trabalho obtidas da mesma ou de diferentes amostras mdias do mesmo lote, analisadas no mesmo laboratrio; de amostras de trabalho obtidas da mesma ou de diferentes amostras mdias do mesmo lote, em diferentes laboratrios; relativos a cada repetio do mesmo teste de germinao (repeties por peso); do teste de germinao ou de tetrazlio da amostra com o padro estabelecido. (uso exclusivo pela fiscalizao, a partir de resultados de anlises fiscais); de dois testes de germinao realizados a partir de diferentes amostras mdias do mesmo lote, quando o resultado da segunda anlise pior do que o resultado da primeira anlise, realizada no mesmo laboratrio ou em diferentes laboratrios. O cumprimento de utilizar 400 sementes para um teste de germinao nem sempre possvel para sementes florestais por principalmente trs motivos: o primeiro
69
Captulo 5
refere-se disponibilidade de sementes. Muitas espcies florestais produzem uma pequena quantidade de sementes por ano que, dependendo do valor dessas sementes, no vivel a utilizao de 400 sementes para o teste de germinao. O segundo motivo est relacionado ao tamanho das sementes. Muitas espcies florestais possuem sementes muito grandes (Tabela 5.1) o que pode inviabilizar o teste de germinao por questes prticas como, por exemplo, falta de espao nos germinadores ou necessidade de caixas de germinao muito grandes. Por exemplo, para sementes de Scleronema micranthum (cardeiro), as 400 sementes pesariam 35,6 kg (Tabela 5.1). Devido ao tamanho das sementes, sero necessrias sub-repeties com 25 sementes cada. O recipiente de cada uma das 16 sub-repeties dever medir 42 x 42 cm, no mnimo. Necessariamente, a avaliao da germinao das sementes desta espcie requer a reduo do nmero de sementes. O terceiro refere-se a espcies raras e/ou ameaadas de extino (Aniba rosaeodora, pau-rosa) que exigem tambm procedimentos diferenciados, de preferncia no destrutivos. Como a reduo do nmero de sementes para o teste de germinao no prevista pelas RAS, h necessidade de rever esta possibilidade e adequar as tabelas de tolerncia. 5.4.2. Semeadura e espaamento O espaamento entre as sementes no teste de germinao deve ser uniforme e suficiente para minimizar a competio e contaminao entre as sementes e impedir, ao mximo, o entrelaamento entre as plntulas. O espaamento mnimo depende do tamanho das sementes. Nas RAS, recomendada uma distncia de 1,5 a 5,0 vezes a largura ou o dimetro da semente. O espaamento adequado deve considerar tambm o aumento do volume das sementes devido ao processo de embebio. 5.4.3. Substrato A semeadura deve ser realizada em embalagens
70
Teste de germinao
contendo o substrato mais apropriado para as sementes a serem testadas. O substrato tem funo de prover o ambiente de germinao das sementes e desenvolvimento das plntulas. Os tipos de substratos mais utilizados, descritos e prescritos nas RAS para as espcies listadas, so o papel e a areia. Para espcies no listadas nas RAS, a escolha do substrato deve levar em considerao aspectos morfolgicos das sementes (principalmente tamanho e formato), suas exigncias em relao gua e a luz e, tambm, a facilidade que o substrato oferece no momento das avaliaes da germinao. A seguir, sero abordadas as diferentes formas de utilizao dos substratos recomendados pelas RAS e os tipos de sementes para os quais so mais adequados. 5.4.3.1. Papel: o papel comumente utilizado como substrato nos testes de germinao pode ser mais espesso (tipo mata-borro) ou mais fino (tipo toalha ou de filtro). As especificaes gerais do papel se encontram nas RAS, assim como a descrio de testes biolgicos necessrios para verificar a toxidade do substrato. A esterilizao do papel, caso necessria, pode ser feita em autoclave a uma atmosfera e 120 C por 30 minutos ou, alternativamente, em estufa regulada a 105 C durante duas horas. Existem as seguintes formas de semeadura no papel: Sobre papel (SP): as sementes so colocadas para germinar sobre duas ou mais folhas de papel que podem ser colocadas em caixas de plstico incolor e transparente, em placas de Petri ou diretamente sobre as bandejas do germinador. Este substrato indicado para sementes pequenas, achatadas e exigentes a luz. No recomendado para sementes redondas, pois estas podem ter dificuldade na absoro de gua, deslizar no substrato prejudicando o espaamento e as avaliaes. Entre papel: as sementes so colocadas para germinar entre duas ou mais folhas de papel, sendo descritas as seguintes variaes: 1) Entre papel (EP): as sementes so se-
71
Captulo 5
meadas acima de uma ou mais folhas de papel e cobertas frouxamente com mais uma camada de papel. recomendado para sementes pequenas, que preferem ambientes midos e no so sensveis luz; 2) Envelope: as sementes so colocadas em envelopes de papel dobrados, podendo ser posicionados na vertical ou horizontal dentro dos germinadores; 3) Rolo de Papel (RP): as sementes so colocadas para germinar entre folhas de papel. As folhas so enroladas e os rolos colocados no germinador, na posio vertical ou horizontal. o mtodo mais recomendado para sementes de tamanho relativamente grande e no sensveis luz, porm inconveniente para sementes de germinao lenta. Papel plissado (PP): as sementes so colocadas para germinar entre folhas de papel plissado como uma sanfona. Usualmente, so formadas pelo menos cinco canaletas com cinco sementes cada. As folhas plissadas so ento colocadas em caixas ou diretamente nas bandejas do germinador com, geralmente, uma folha de papel lisa ao redor do papel plissado, para garantir condies uniformes de umidade. Este mtodo mais indicado para unidades de germinao ou sementes mltiplas. 5.4.3.2. Areia: usada como substrato, para confirmar a avaliao de um teste de germinao com resultado duvidoso, quando as plntulas apresentarem sintomas fitotxicos ou quando recomendada nas RAS. Pode ser usada em substituio ao papel, quando a avaliao de uma amostra for impraticvel por excesso de infeco. Especificaes gerais e controle de qualidade do substrato areia podem ser encontradas nas RAS. A areia pode ser lavada e esterilizada antes de seu uso em autoclave a 1 atm e 120 C durante 60 minutos ou em estufa a 200 C por duas horas. A areia pode ser reutilizada e, neste caso, deve ser peneirada, lavada, secada e esterilizada antes da reutilizao. A areia utilizada em testes com sementes tratadas quimicamente deve ser obrigatoriamente descartada.
72
Teste de germinao
A areia tem como inconveniente a desuniformidade na reteno e distribuio da gua, uma vez que a gua tende a se depositar na parte inferior do substrato. Desta forma, a areia mida deve ser sempre revirada antes do uso, para homogeneizar a umidade. especialmente indicada para sementes grandes e globosas. Entretanto, estas necessitam recipientes maiores, contendo muito areia, o que torna os recipientes pesados, dificultando seu manuseio incluindo a danificao das prateleiras dos germinadores. A semeadura com areia pode ser feita de duas maneiras: Entre areia (EA): as sementes so colocadas sobre uma camada uniforme de areia e cobertas com areia solta de aproximadamente 1 cm. Este mtodo mais utilizado para sementes grandes (maior que 2 cm), no exigentes luz e de lenta germinao. Sobre areia (SA): neste caso, as sementes so colocadas sobre uma camada uniforme de areia e comprimidas contra a superfcie da mesma. recomendada para sementes exigentes em luz e para aquelas, cujas plntulas no processo de germinao, no suportam resistncia fsica como, por exemplo, Couratari sp. (tauari) e algumas espcies do gnero Aspidosperma (carapanaba). 5.4.3.3. Solo: no recomendado pelas RAS nos testes de rotina de germinao como substrato preferencial, devido dificuldade de obter estoques padronizados. O solo pode ser usado para avaliao em caso de fitotoxidez ou em testes de vigor. 5.4.3.4. Vermiculita: a vermiculita expandida um produto industrializado, formado essencialmente por silicatos hidratados de alumnio e magnsio. Por ser um produto de origem mineral , portanto, inorgnico, sendo tambm insolvel em bases e cidos fracos e solventes orgnicos, apresenta ainda um pH praticamente neutro. Necessita, para sua formao, um aquecimento (cerca de 800 C) que promove a evaporao da gua e a expanso das
73
Captulo 5
partculas que se transformam em flocos sanfonados. Cada floco expandido aprisiona ar inerte, o que confere ao material excepcional leveza, principalmente quando comparada com a areia. Embora no mencionada nas RAS como substrato para testes de germinao, a vermiculita amplamente utilizada na produo de mudas de espcies florestais, pois apresenta boa capacidade de absoro e reteno de gua, promove boa aerao e possibilita o desenvolvimento adequado das plntulas. A vermiculita pode ser esterilizada antes do uso em autoclave ou descontaminada em estufa. No mercado, possvel encontrar vermiculita de diferentes granulometrias, sendo as mais finas indicadas para sementes menores e as mais grossas para sementes maiores. O substrato no adequado para sementes muito pequenas, devido dificuldade de avaliao das sementes mortas e vazias ao final do teste de germinao. Pode ser utilizada nas modalidades: Entre vermiculita (EV): indicada para sementes de tamanho mdio a grande de forma globosa, exigentes em umidade do substrato e no exigentes a luz. Sobre vermiculita (SV): indicada para sementes exigentes em luz e para aquelas, cujas plntulas no processo de germinao, no suportam resistncia fsica como, por exemplo, Couratari sp. (tauari) e algumas espcies do gnero Aspidosperma (carapanaba). 5.4.4. gua O fornecimento de gua condio essencial para que as sementes iniciem a germinao e as plntulas se desenvolvam normalmente. Sementes que reduziram no final da maturao o seu teor de gua toleram, geralmente, um dessecamento adicional que possibilita o armazenamento; estas sementes so chamadas tolerantes ao dessecamento ou ortodoxas. Quando entram em contato com gua, intumescem e aumentam seu volume antes de germinar. De outro lado, as sementes sensveis ao dessecamento ou recalcitrantes, no passam, no final da
74
Teste de germinao
maturao, por uma fase de dessecamento na planta-me. Estas necessitam manter o seu teor de gua alto para no perder a germinabilidade. Sementes recalcitrantes, quando semeadas, normalmente no aumentam visualmente o seu volume. A embebio das sementes tolerantes ao dessecamento apresenta um padro tipicamente trifsico [15]. Na primeira fase, observa-se o aumento do peso e, consequentemente, do volume. Esta fase ocorre em sementes vivas e mortas devido um processo fsico. Nesta fase, a velocidade de embebio est condicionada composio qumica das sementes e a permeabilidade do tegumento, alm da disponibilidade de gua. Na segunda fase, o peso da semente se mantm estvel e, somente as sementes vivas, apresentam atividade metablica. Os processos biolgicos diferenciam esta fase da primeira. As sementes mortas, aps a embebio na primeira fase, so atacadas por microrganismos e apodrecem. A terceira fase inicia-se com a protruso de uma parte do embrio, geralmente, a raiz primria; entretanto, em sementes florestais j foram observadas primeiramente a protruso de outras estruturas como o hipoctilo em Hevea sp. (seringueira) e Carapa sp. (andiroba) ou a parte area em espcies com germinao bipolar, exemplo Bertholletia excelsa (castanha-da-amaznia). Na terceira fase a plntula se desenvolve e, com o crescimento, observa-se aumento de peso. A gua a ser empregada no teste de germinao tem suas especificaes definidas pelas RAS. De maneira geral, deve ser livre de impurezas orgnicas e inorgnicas e apresentar pH de 6,0 a 7,5. Recomenda-se gua destilada, caso a gua da torneira no atenda estas caractersticas. Para maior controle da qualidade da gua, as RAS recomendam a realizao peridica da anlise da gua. A quantidade inicial de gua no teste de germinao depende da natureza e da quantidade do substrato, alm de exigncias especficas das sementes. Especialmente no uso de papel, deve ser evitado que se forme uma pelcula de gua em torno das sementes, pois esse
75
Captulo 5
excesso restringe a aerao e prejudica a germinao. Durante todo o teste, o substrato deve estar suficientemente mido. Se necessria, a adio subsequente de gua fica a critrio do analista, mas deve ser evitada sempre que possvel, uma vez que pode aumentar as variaes entre as repeties e entre os testes. O ressecamento durante os testes de germinao pode ser reduzido, mantendo os recipientes fechados ou a umidade relativa dentro do germinador alta (> 90 %). Caso o germinador utilizado no possua sistema de controle da umidade interna, pode-se colocar recipientes com gua no interior do equipamento ou umidificadores. As RAS apresentam procedimentos bsicos para determinar a quantidade de gua de acordo com os diferentes tipos de substratos. Substrato de papel para a maioria das sementes recomenda-se adicionar uma quantidade de gua de duas a trs vezes o peso do papel. Considerando que um litro de gua pesa um quilograma, a quantidade de gua adicionada pode ser medida em volume. Por exemplo, para 100 g de papel, deve-se adicionar de 200 a 300 mL de gua, que corresponde de 200 a 300 g de gua. Substrato de areia a quantidade de gua depende da granulometria da areia e deve ser determinada previamente visando padronizar os testes de rotina do laboratrio. Devem ser levadas em considerao as exigncias das sementes. Os seguintes exemplos so fornecidos nas RAS: sementes de cereais (exceto as de milho) podem ser semeadas em areia com umidade de 50% da sua capacidade de reteno; sementes grandes de Fabaceae e de milho exigem areia umedecida a 60% da capacidade de reteno. Na determinao da capacidade de reteno da areia recomenda-se, por exemplo, pesar 500 g da areia seca e colocar em um filtro de papel, tipo coador de caf comercial. Em seguida, adicionar uma quantidade de gua previamente determinada (por exemplo, 200 mL). Decorridos aproximadamente 15 minutos, o excesso de gua aparado determinado e, por diferena, pode-se determi-
76
Teste de germinao
nar a quantidade de gua retida na areia. A quantidade retida corresponde a 100% da capacidade de reteno. Com uma regra de trs pode ser calculada a quantidade de gua para 50% ou 60% da capacidade de reteno. 5.4.5. Oxignio Aps a primeira fase de embebio, a necessidade de oxignio aumenta, devido a ativao do metabolismo. Se o suprimento com oxignio no for adequada, haver retardamento do processo de germinao e a formao da plntula normal poder ser prejudicada. A maioria das espcies no exige concentrao de oxignio maior que 10 % [48]. Esta necessidade facilmente suprida pelo ar, que apresenta cerca de 20 % de oxignio. Desta forma, pouca nfase dada pelas RAS aos cuidados relacionados aerao das sementes. As recomendaes gerais so que sejam evitados todos os fatores que limitem o suprimento de oxignio, como excesso de umidade e proximidade excessiva entre as sementes na semeadura. 5.4.6. Temperatura A temperatura regula a germinao em vrias formas: determina a capacidade de germinao (porcentagem final), a velocidade de germinao (tempo para primeira contagem e contagem final) e, em algumas espcies, pode superar uma dormncia primria e/ou secundria ou induzir uma dormncia secundria. As temperaturas cardeais limitam a faixa de temperatura onde a germinao ocorre e, definem as condies timas do processo. Entende-se como temperatura mnima e mxima, as condies trmicas nas quais, abaixo ou acima, respectivamente, no se observa mais a germinao. Na temperatura tima, as sementes apresentam a maior porcentagem de germinao em menor perodo de tempo. A temperatura tima de germinao no comum para todas as espcies, sendo geralmente relacionada com as condies climticas do habitat natural. Assim, espcies tropicais exigem geralmente uma temperatura mais
77
Captulo 5
elevada do que espcies de zonas temperadas. Algumas sementes germinam melhor em temperatura constante (por exemplo, Jacaranda copaia - caroba ou par-par). Porm, no ambiente natural as flutuaes de temperatura, relativas aos perodos diurno e noturno, podem ser significativas; assim, algumas espcies exigem temperaturas alternadas (termoperodo) para a germinao das sementes, como por exemplo, Dalbergia nigra (jacarand-da-bahia) e Trema micrantha (trema) (Tabela 5.2). Recentemente foi revelado que, em espcies pioneiras tropicais, a necessidade de temperaturas alternadas para a germinao depende do tamanho das sementes. Sendo que sementes muito pequenas germinam somente em temperaturas constantes e necessitam de luz; com aumento do tamanho, as sementes podem germinar no escuro, porm exigem temperaturas alternadas [53; 61]. Nas RAS so informadas, para todas as espcies listadas, as temperaturas adequadas, nas quais os testes de germinao devem ser conduzidos. Porm, como j mencionado anteriormente, ainda so poucas as espcies florestais tropicais includas. Para que uma nova espcie possa ser includa nas RAS h um longo procedimento. Os resultados cientficos devem ser confirmados com sementes de vrias procedncias e diferenas no vigor; em seguida, a metodologia selecionada deve ser validada entre os laboratrios credenciados, antes que as recomendaes possam ser includas nas RAS. Os resultados de alguns trabalhos cientficos, tratando da temperatura de germinao de mais de 80 espcies tropicais e subtropicais so apresentados na Tabela 5.2. A anlise destes dados mostra a temperatura de 25C como a mais indicada para a maioria destas espcies (excluindo as com indicaes de temperaturas alternadas; Figura 5.1). Desta forma, caso a espcie seja de origem tropical e no listada nas RAS, recomenda-se realizar, inicialmente, o teste de germinao na temperatura constante de 25C. Uma vez conhecida a temperatura na qual se deve conduzir o teste de germinao, a mesma deve per-
78
Teste de germinao
manecer to uniforme quanto possvel no interior do germinador. Como mencionado anteriormente, variaes na temperatura podem afetar a velocidade, a porcentagem e a uniformidade da germinao, provocando resultados que no condizem com a qualidade das sementes em avaliao. Desta forma, as RAS prescrevem que a variao de temperatura, devida ao equipamento, no deve ser maior que 2 C, em cada perodo de 24 horas. Quando indicado a alternncia de temperatura para a realizao do teste, a temperatura mais baixa deve ser mantida, geralmente, durante 16 horas (perodo noturno) e a mais alta por oito horas (perodo diurno). 5.4.7. Luz As sementes possuem todas as reservas necessrias para formao da plntula normal, sendo que, somente posterior a germinao, h necessidade de fotossntese para o crescimento da planta. Assim, a luz no considerada um fator essencial para a germinao, como gua, oxignio e temperatura adequada. Existem algumas sementes que germinam somente na presena de luz, chamadas de sementes fotoblsticas positivas e outras que somente germinam no escuro, chamadas fotoblsticas negativas. Estas exigncias so classificadas como dormncia e, neste caso, a presena ou ausncia de luz so vistas como fatores que superam a dormncia. Entretanto, a maioria das espcies produz sementes que so fotoblsticas neutras e germinam na presena ou na ausncia de luz. O fotoblastismo positivo possibilita que as sementes percebam a aproximao com a superfcie do solo e a abertura de dossel. Em pioneiras neotropicais, foi recentemente mostrado, que a necessidade de luz se reduz gradativamente com aumento do tamanho das sementes, at o ponto em que todas as sementes podem germinar no escuro [53]. Para sementes maiores, a alternncia de temperatura se torna mais importante; pois, devido maior quantidade de reservas, as plntulas
79
Captulo 5
podem alcanar a superfcie do solo, mesmo quando as sementes esto enterradas profundidades que a luz no alcana [75; 61]. A associao entre o tamanho das sementes e o estmulo da germinao pela luz e temperaturas alternadas foi demonstrada para espcies da floresta pluvial tropical semidecdua do Panam [61] e para pioneiras da Amaznia Central [12]. Uma lista de algumas espcies com sementes fotoblsticas positivas encontrase na Tabela 5.3. As plantas possuem fotoreceptores (como o fitocromo, criptocromo e precursores de clorofila), que desencadeiam o processo do desenvolvimento tpico na presena de luz (fotomorfogenese). O fitocromo, que apresenta maior sensibilidade na luz vermelha, tambm responsvel pela quebra de dormncia das sementes fotoblsticas positivas. Portanto, mesmo para as fotoblsticas neutras, a iluminao desejvel nos testes de germinao, pois a morfologia de uma planta desenvolvida na luz diferente do que no escuro. A escurido torna as plntulas estioladas, hialinas e sensveis ao ataque de microrganismos. Alm disso, certos defeitos, como deficincia de clorofila, no podem ser detectados. A luz empregada nos testes de germinao pode ser proveniente de fontes naturais ou artificiais. Neste ltimo caso, as RAS recomendam lmpadas fluorescentes de luz branca e fria devido a relativamente baixa emisso de raios infravermelhos, pois estes podem aumentar a temperatura do experimento; alm disso, a emisso espectral na regio vermelho relativamente alta e aciona o fitocromo. As sementes fotoblsticas positivas devem ser iluminadas durante, no mnimo, oito horas a cada ciclo de 24 horas. O ciclo de 8 horas luz e 18 horas escuro, foi desenvolvido para espcies de zonas temperadas. Em regies tropicais o perodo diurno e noturno similar. Nos laboratrios de pesquisa, utlilizam-se, muitas vezes, perodos iguais com 12 horas de escuro e 12 horas de luz. Sementes fotoblsticas devem ser colocadas para germinar sobre o
80
Teste de germinao
substrato e a luz deve ser distribuda uniformemente, alm de evitar qualquer filtrao diferencial da luz antes que esta alcance as sementes. A avaliao para fins comerciais de espcies com sementes fotoblsticas negativas desconhecida pelos autores deste captulo; porm, quando for o caso, deve ser feita no escuro e com luz de segurana verde.
5.5. TIPOS DE GERMINAO

Nas RAS foram includas dois tipos de plntulas: com germinao hipgea ou com germinao epgea, baseado no trabalho de Klebs [40]. Tradicionalmente, na germinao hipgea subentende-se que os cotildones so criptocotiledonar, quer dizer, permanecem cobertos por uma ou mais camadas do pericarpo ou pelo tegumento da sementes durante a germinao e na germinao epgea os cotildones emergem da semente e so fanerocotiledonar. Porm, estas caractersticas so independentes do alongamento do hipoctilo, que o responsvel pela elevao dos cotildones acima do nvel do solo. Desta forma os tipos de germinao podem ser detalhados, considerando trs aspectos distintos: (1) a posio dos cotildones relativa posio da semeadura: no caso de germinao hipgea (H), os cotildones permanecem na altura da semeadura, quer dizer no h crescimento do hipoctilo; e, na germinao epgea (E), o crescimento do hipoctilo eleva os cotildones acima do solo; (2) a exposio dos cotildones da semente: quando criptocotiledonar (C), os cotildones permanecem no interior da semente; e, quando fanerocotiledonar (P), os mesmos emergem da semente e (3) a forma e funo dos cotildones, quando no apresentam reservas so do tipo foliar (F), finos e apresentam funo fotossintetizante ou haustorial (absorvendo as reservas do endosperma e/ou perisperma); e quando possuem reservas (R) so grossos e no-fotossintetizantes. Estas caractersticas podem ser
81
Captulo 5
combinadas fatorialmente (2 x 2 x 2), o que resulta em oito diferentes tipos de germinao. Todas as combinaes j foram encontradas em espcies florestais tropicais, sendo que algumas com maior frequncia que outras. Em todos os oito casos, a protruso do embrio ocorre em somente um lado da semente, na regio da micrpila, denominada como germinao unipolar. Porm, em algumas sementes (exemplos em Lecythidaceae, Caryocaraceae, Clusiaceae, etc.), o hipoctilo o rgo de armazenamento e os cotildones so rudimentares ou ausentes. Nestas sementes, a raiz e a parte area emergem em lados opostos da semente, determinado como germinao bipolar (em dois plos da semente). Quando se consideram tambm outras caractersticas da plntula, como por exemplo, o tamanho igual ou desigual dos cotildones, a posio do eixo caulinar em relao aos cotildones, a presena de catfilos ou folhas rudimentares antes da formao da primeira folha, pode-se aumentar consideravelmente a lista dos tipos de plntulas tropicais [20; 35; 79]. Entretanto, nove tipos de plntulas, listados na Figura 5.2, podem servir como orientao bsica na determinao do tipo de germinao em dicotiledneas florestais neotropicais. Representantes amaznicos dos diversos tipos de plntulas podem ser encontrados na Tabela 5.1. As espcies de monocotiledneas possuem somente um cotildone e, alm das estruturas encontradas nas dicotiledneas, apresentam algumas estruturas adicionais. Alm disso, a organizao destas estruturas diferente, o que torna a classificao dos tipos de germinao em monocotiledneas ainda mais complicada. Em um levantamento para os neotrpicos, Garwood [35] reconheceu os seguintes tipos de plntulas monocotiledneas: (a) hipgea-Sssil (H-S), anlogo de tipo H-C-R das dicotildoneas; (b) epgea-peciolata (E-P), anlogo do tipo E-C-R; e (c) epgea-folicea (E-F), anlogo do tipo E-F-F. Alguns exemplos destes tipos de germinao so citados na Tabela 5.4.
82
Teste de germinao
O manual de avaliao de plntulas da Associao de Tecnologia de Sementes Internacional [38] fornece detalhamento de quatro tipos de plntulas de monocotiledneas: tipo A: germinao epgea, sem alongamento do epictilo e com cotildones verdes, a raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Allium sp., alho); tipo B: germinao hipgea, sem alongamento do epictilo e primeira folha verde, sendo a raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Freesia sp., frsia); tipo C: germinao hipgea e com alongamento do epictilo verde, sendo raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Asparagus sp., aspargo); tipo D: germinao hipgea e primeira folha verde e geralmente envolta pelo coleptilo transparente. Pode ser subdividido em sub-tipo D-1, com raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Lolium sp., azevm); sub-tipo D-2, em que a raiz primria pode ser substituda por razes secundrias (exemplo, Zea sp., milho e Oryza sp., arroz); sub-tipo D-3, com diversas razes seminais(exemplo, Triticum sp.,trigo). O manual da ISTA classifica trs tipos de germinao para as dicotiledneas: tipo E: germinao epgea, sem alongamento do epictilo e cotildones verdes. Pode ser subdividido em sub-tipo E-1, com raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Beta sp., beterraba, Daucus sp., cenoura, Lactuca sp., alface; exemplo florestal, Robinia sp., accia-falsa); sub-tipo E-2, com raiz primria podendo ser substituda por razes secundrias (exemplo, Cucumis sp., abbora e Gossypium sp., algodo); sub-tipo E-3, com diversas razes seminais e hipoctilo tuberoso (exemplo, Cyclamen sp., ciclamen); tipo F: germinao epgea, com alongamento do epictilo, podendo a raiz primria ser substituda por razes secundrias (exemplo, Phaseolus sp., feijo). Observao: todos os exemplos citados do tipo F apresentam cotildones com reservas e na avaliao deve ser includo o desenvolvimento da primeira folha. Tipo G: germinao hipgea, com alongamento do epictilo, podendo a raiz primria ser substituda por razes secundrias (exemplo, Pisum sp., ervilha;
83
Captulo 5
exemplo florestal, Quercus sp., carvalho). H tambm um oitavo tipo de germinao no manual da ISTA referente s conferas: tipo H: germinao epgea, sem alongamento do epictilo, com hipoctilo e cotildones verdes, com raiz primria essencial na avaliao (exemplo, Pinus sp., pinus e Abies sp., abeto). As RAS fornecem somente algumas ilustraes sobre plntuals normais e anormais com germinao hipgea (Araucaria sp., Triticum sp., Zea mays, Pisum sp.) e epgea (Allium sp., Helianthus sp., Phaseolus sp.).
5.6. DORMNCIA DAS SEMENTES

Considera-se uma semente dormente, quando ela no germina, apesar das condies adequadas de gua, oxignio e temperatura para a germinao. Ao passo, o termo quiescente aplicado a uma semente que no germina, quando uma destas condies no esteja adequada. Portanto, a dormncia uma caracterstica da semente e no do ambiente. A entrada no estado de dormncia, no final da maturao, evita a germinao das sementes ainda na planta-me. A superao da dormncia na poca adequada pode sincronizar a germinao com ambientes favorveis ao desenvolvimento da plntula. A sincronizao com a sazonalidade especialmente importante em habitats onde alguma poca do ano desfavorvel ao desenvolvimento; por exemplo, em zonas temperadas, evita a germinao no outono, quando as sementes so dispersas, e a permite na primavera. A dormncia pode tambm manter as sementes no banco do solo at que o local seja adequado, como a abertura de uma clareira. Em outras palavras, a dormncia e o mecanismo de sua superao fornecem s sementes a capacidade de "reconhecer" se o ambiente favorvel sua germinao e sobrevivncia. A dormncia pode tambm distribuir a germinao ao longo do tempo, para aumentar as chances de perpe-
84
Teste de germinao
tuao da espcie. Neste caso, a dormncia pode resultar em uma germinao espordica, possvel em ambiente com condies favorveis. Desta forma, a germinao pode ocorrer sem poca pr-determinada, sendo importante em espcies florestais que apresentam uma frutificao irregular e/ou no necessitam alta luminosidade para o crescimento inicial. Desta forma, o tipo de dormncia intimamente vinculado com o habitat da espcie e s condies ambientais da poca de disperso e germinao. Em linhas gerais, o tipo de dormncia pode ser definido por trs aspectos: pela sua causa (fisiolgica, morfolgica, fsica, qumica ou mecnica), pela definio do local (endgeno no embrio ou exgeno em estruturas fora do embrio, como endosperma, perisperma, tegumento ou pericarpo), e pela definio do momento em que a dormncia se manifesta na disperso (primria) ou aps a disperso (secundria). Existem vrios tipos de dormncia nas sementes florestais de climas tropical e subtropical, apesar da sazonalidade ser menos pronunciada nestes ambientes. A dormncia fisiolgica, que pode ser superada por luz (sementes fotoblasticas) geralmente encontrada em espcies pioneiras na sucesso florestal [24]. A dormncia fsica, causada pela impermeabiliade do tegumento, comum em espcies da famlia Fabaceae e Malvaceae (Schizolobium amazonicum, paric, [74]); Ochroma pyramidale pau-de-balsa; Leo et al., (2008). H dormncia morfolgica, por exemplo, em Minquartia guianensis (acariquara-roxa; [19]) e Helicostylis tomentosa (inharda-folha-peluda; [11]). A dormncia mecnica muitas vezes causada por estruturas dos frutos que protegem as sementes dos predadores, como um endocarpo duro nas espcies que possuem frutos tipo drupa. Mesmo sementes sensveis ao dessecamento (recalcitrantes) podem apresentar estruturas que retardam a germinao (Eugenia stipitata, ara-boi; [8]; Maquira sclerophylla - pau-tanino; [56], Bertholletia excelsa - castanha-da-amaznia). As es-
85
Captulo 5
pcies que apresentam um longo perodo de germinao devem ter um tipo de dormncia, porm para muitas a causa no foi ainda determinada (Tabela 5.1). A seguir, ser apresentada uma pequena explanao sobre cada tipo de dormncia e alguns tratamentos indicados para sua superao. Contudo, a dormncia em sementes um fenmeno complexo e com diversas interaes, havendo ainda muitos aspectos a serem estudados e esclarecidos. 5.6.1. Tratamentos para superar a dormncia e promover a germinao A utilizao de um tratamento pr-germinativo, ou a combinao de vrios, pode aumentar a taxa de germinao e reduzir o tempo do teste de germinao. O tratamento necessrio quando um nmero considervel de sementes permanece sem germinar no final do teste. Neste caso, pode ser realizado um novo teste de germinao aplicando tratamento pr-germinativo. Quando a dormncia conhecida ou existe a suspeita de dormncia, o tratamento pode ser aplicado no teste inicial. As RAS fornecem uma lista de pr-tratamentos, agrupando-os para a superao da dormncia fisiolgica; dormncia fsica e para remoo de substncias inibidoras. Os tratamentos especficos para todas as espcies listadas nas RAS so tambm indicados. importante observar que a durao do teste de germinao no inclui o perodo do pr-tratamento (que pode demorar de poucos minutos at meses). No Boletim de Anlise de Sementes deve ser informada a descrio e durao do prtratamento. Para as espcies no listadas nas RAS, a escolha entre os pr-tratamentos deve ser baseada no tipo de dormncia, levando em considerao a disponibilidade de materiais e a experincia do analista e da equipe do laboratrio. Resultados de pesquisas cientficas com sementes da mesma espcies ou do mesmo gnero, tambm podem auxiliar na tomada de deciso.
86
Teste de germinao
5.6.1.1. Mtodos para superar a dormncia fisiolgica Em linhas gerais, esse tipo de dormncia est relacionado aos processos fisiolgicos que bloqueiam o crescimento do embrio. O embrio, apesar de fisicamente estruturado e completo, no germina por razes diversas localizadas no prprio embrio. Alguns autores distinguem, alm das diferentes causas da dormncia fisiolgica, ainda trs nveis (no profunda, intermediria e profunda [59]). Seguem os principais mtodos para a superao da dormncia fisiolgica listados nas RAS, cada um visando superar uma causa distinta da dormncia fisiolgica: Armazenamento em locais secos: para algumas espcies o armazenamento das sementes em locais secos j suficiente para que a dormncia seja superada. Pr-esfriamento: as sementes so colocadas em substrato mido, como em um teste de germinao. Porm, so mantidas em ambiente frio (geralmente entre 5 e 10 C), por um perodo determinado, antes da transferncia para a temperatura recomendada para o teste de germinao. Pr-aquecimento: as sementes so pr-aquecidas antes do teste de germinao (conforme as exigncias da espcie), por um perodo determinado, antes da transferncia para a temperatura recomendada para o teste de germinao. Nitrato de Potssio KNO3: o substrato do teste de germinao saturado com soluo de 0,2 % de Nitrato de Potssio antes da semeadura. Caso necessrio, o reumedecimento do substrato deve ser feito com gua. cido Giberlico GA3: umedecimento do substrato de germinao com uma soluo de, geralmente, 0,05 % de GA3. Dependendo da intensidade da dormncia a concentrao de GA3 poder ser de 0,02 ou 0,08 %. Germinao a baixa temperatura: a germinao de sementes em temperatura constante inferior recomendada para o teste de germinao ou em temperatura al-
87
Captulo 5
ternada, diminuindo-se ainda mais a temperatura mnima especificada. Com a reduo da temperatura, a germinao tende a ser mais lenta e, neste caso, o teste pode ser estendido. Luz: os testes devem ser iluminados por, pelo menos, oito horas a cada ciclo de 24 horas; caso o teste seja realizado em alternncia de temperatura, o perodo de luz deve coincidir com o perodo de temperatura mais alta. Envelopes de polietileno lacrado: o substrato e as sementes so envolvidos, durante o teste de germinao, com embalagens de polietileno bem ajustados e lacrados. 5.6.1.2. Mtodos para superar a dormncia fsica A dormncia fsica causada pela impermeabilidade do tegumento gua. Estas sementes no embebem em contato com gua e continuam duras. Pode ser confundida com a dormncia mecnica, porm sementes com dormncia mecnica aumentam o teor de gua em contato com gua. A dormncia fsica relativamente comum em espcies florestais, principalmente em representantes da famlia Fabaceae e Malvaceae. Enquadram-se nessa categoria Enterolobium spp. (orelha-de-macaco) Hymenaea sp. (jatob) Ormosia sp. (tento) Parkia sp. (fava), Schizolobium sp. (paric), Ochroma pyramidale (pau-debalsa), entre outras. A superao desta dormncia torna o tegumento permevel gua, ou seja, possibilita que as sementes possam embeber. Conforme o tamanho das sementes e a dureza do tegumento um dos seguintes tratamentos recomendado: Embebio: a embebio em gua por 24 a 48 horas acelera a germinao. Escarificao mecnica: perfurao, remoo de um pedao ou lixamento do tegumento, com uso de alicate, cortador de unha, lixa de papel ou lima. O local da escarificao deve ser na regio oposta protruso da radcula. Escarificao qumica: imerso das sementes em
88
Teste de germinao
cido sulfrico concentrado (H2SO4). O perodo de imerso varia em funo da dureza do tegumento e deve ser determinado para cada espcie. Decorrido o tempo necessrio, as sementes e o cido devem ser despejados em um recipiente de vidro contendo pelo menos um litro de gua. Aps agitao por alguns minutos, derramar o contedo em uma peneira plstica e lavar as sementes em gua corrente at eliminar completamente os resduos do cido. A utilizao desse mtodo exige precaues especiais, devido ao poder corrosivo do cido sulfrico, como por exemplo, o uso de equipamentos de proteo individual. 5.6.1.3. Mtodos para superar a dormncia mecnica A dormncia mecnica causada por estruturas externas do embrio que impedem mecanicamente a sua expanso e, consequentemente, a protruso da radcula. O impedimento muitas vezes causado por estruturas do fruto que protegem as sementes dos predadores, como um endocarpo duro nas espcies que possuem frutos tipo drupa. Existem tambm tegumentos duros ou fibrosos que oferecem resistncia a expanso do embrio. As unidades de disperso se mantm tambm duras aps entrar em contato com gua, porm, diferente das sementes com dormncia fsica, os envoltrios so permeveis a gua e troca gasosa. Desta forma, as duas dormncias podem ser distinguidas pela determinao do teor de gua das sementes aps imerso. Devido a permeabilidade dos envoltrios gua e gases, este tipo de dormncia tambm pode ocorrer em sementes sensveis ao dessecamento (recalcitrantes). Para a superao da dormncia mecnica, os envoltrios devem ser enfraquecidos, removidos completamente ou parcialmente de modo a permitir a expanso do embrio. s vezes somente necessrio retirar o impedimento pontualmente no local da protruso da raiz primria (Eugenia stipitata, ara-boi). Neste caso, a retirada do impedimento no lado oposto da protruso no apresentaria o mesmo efeito. Exemplos com sementes
89
Captulo 5
sensveis ao dessecamento nas quais a remoo manual do tegumento com faca acelera a germinao so Carapa spp. (andiroba) e Bertholletia excelsa (castanha-daamaznia). A retirada do endocarpo, por exemplo, em Astrocaryum aculeatum (tucum), pode ser feita, segurando a unidade de disperso com uma tira de borracha e quebrando o endocarpo com um golpe de martelo. A rachadura do endocarpo facilita a retirada manual da semente [24]. 5.6.1.4. Mtodos para superar a dormncia morfolgica Em algumas espcies, as sementes so dispersas com o embrio morfologicamente imaturo. Esse tipo de dormncia tambm conhecido como imaturidade do embrio ou embrio rudimentar. Para que a semente germine, necessrio um determinado perodo de tempo at que o embrio alcance maturidade. Portanto, somente necessrio esperar para que o embrio possa completar seu desenvolvimento. O ambiente de armazenamento deve ser adequado, sem que temperaturas mais elevadas podem acelerar o processo de maturao. Sementes recalcitrantes de espcies tropicais perdem, geralmente, a viabilidade se armazenadas em temperaturas menores que 15C. 5.6.1.5. Mtodos para remover substncias inibidoras A dormncia causada por compostos, geralmente solveis em gua. Esse tipo de dormncia tambm conhecido como dormncia qumica. Desta forma, a lavagem das sementes em gua corrente, pode ser um mtodo eficiente para a superao da dormncia.
90
Teste de germinao
5.7. CONDUO DO TESTE DE GERMINAO

5.7.1. Durao do teste As avaliaes dos testes de germinao (contagens) devem ser reduzidas ao mximo, para evitar danos s plntulas em desenvolvimento e poupar trabalho. As RAS sugerem apenas duas contagens: primeira contagem e contagem final. Porm, avaliaes intermedirias podem ser realizadas, caso haja elevada contaminao das sementes ou quando o perodo de germinao muito longo. Nas avaliaes intermedirias devero ser removidas as plntulas formadas, com a devida anotao na ficha de avaliao. A durao do teste de germinao depende de cada espcie e deve permitir que o lote expresse o seu mximo potencial germinativo. As espcies listadas nas RAS tm informados a durao dos testes e o perodo para a realizao da primeira contagem. Espcies florestais nativas apresentam grande variao no tempo de germinao; como exemplos discrepantes, podem ser: Parkia pendula - visgueiro (entre 7 a 9 dias) e Naucleopsis caloneura - muiratinga (entre 600 a 1320 dias; Tabela 5.1), pois tratamentos pr-germinativos para a ltima espcie no so conhecidos. Assim, para estas espcies, como as demais no listadas nas RAS, existe a dificuldade de estimar a durao do teste e cumprir o perodo necessrio. Um longo tempo de germinao torna-se invivel para avaliao num laboratrio credenciado e para a comercializao. Segundo as RAS, para as espcies...onde o teste de germinao no pode ser completado dentro de dois meses, so recomendados testes rpidos de viabilidade, como o Teste de Tetrazlio ... ou Teste de Embrio Excisado.... Esta recomendao pode resolver o problema relacionado durao do teste de germinao. Porm, continua o problema com a quantidade de sementes necessrias para o teste de germinao ou de tetrazlio, pois para ambos so exigidas 400 sementes, tor-
91
Captulo 5
nando a certificao invivel para muitas espcies nativas. 5.7.2. Interpretao do teste Nas avaliaes do teste de germinao sero observadas o nmero de sementes germinadas e no germinadas. As sementes que foram capazes de germinar sero classificadas em plntulas normais ou plntulas anormais, de acordo com as definies das RAS. O estdio de desenvolvimento das plntulas deve ser ...suficiente para permitir uma avaliao correta das mesmas e a diferenciao entre plntulas normais e anormais. Para as plntulas de espcies florestais que possuem grande variao dos tipos de germinao (item 5.5), a correta classificao depende, quase que exclusivamente, do conhecimento e da prtica do analista. Na primeira e em qualquer outra contagem intermediria, devem ser removidas do teste as plntulas que alcanaram o estdio em que todas as estruturas essenciais podem ser precisamente verificadas e as seriamente deterioradas. Porm, devem ser deixadas at a contagem final as plntulas anormais com outros defeitos. Em caso de dvidas, quanto a anormalidades de plntulas, um novo teste deve ser feito em areia. Outra amostra da mesma espcie, que tenha germinado de modo satisfatrio, pode ser simultaneamente semeada para servir de testemunha ao novo teste. Por vezes, necessrio adiar a primeira contagem para que as plntulas atinjam o desenvolvimento adequado. Para espcies em que o teste de germinao realizado com unidade-semente mltipla, somente uma plntula normal por unidade contada para determinar a porcentagem de germinao. Quando solicitado, o nmero de plntulas normais produzidas por 100 unidades ou o nmero de unidades que tenha produzido uma, duas ou mais plntulas normais pode ser informado. As sementes no germinadas, ao final do teste de germinao, sero contadas e classificadas conforme descrito nas RAS em sementes duras, dormentes e mortas.
92
Teste de germinao
As suas respectivas porcentagens devem ser informadas no Boletim de Anlise de Sementes. Quando uma quantidade expressiva de sementes duras ou dormentes forem encontradas, deve-se refazer o teste, utilizando um ou um conjunto de mtodos para promover a germinao. Se sementes dormentes forem encontradas a uma taxa de 5% ou mais, deve ser verificado se estas sementes possuem potencial para produzir plntulas normais, utilizando-se o Teste de Tetrazlio ou outro teste de viabilidade. Se, aps essa verificao, ainda existir dvida se a semente est dormente ou morta, deve-se consider-la como morta. Deve-se atentar que, caso seja possvel observar que uma semente, mesmo que classificada como morta no momento da avaliao, produziu qualquer parte de uma plntula (por exemplo, a ponta da raiz primria), deve ser contada como plntula anormal e no como semente morta. Apenas quando houver a solicitao do requerente, podem ser feitas outras determinaes informando as sementes vazias, sem embrio ou danificadas por insetos. 5.7.3. Repetio do teste de germinao Existem certos casos descritos nas RAS em que os teste de germinao devem ser refeitos. De maneira geral estes casos ocorrem quando: 1. houver evidncias de erros nas condies do teste, sejam eles nas avaliaes das plntulas ou nas anotaes na ficha. Neste caso, o teste de germinao deve ser repetido usando-se o mesmo mtodo. O resultado deste novo teste o que deve ser relatado no Boletim de Anlise; 2. o resultado do teste de germinao no confivel devido fitotoxidade ou disseminao de fungos ou bactrias. Neste caso deve-se refazer o teste usando um ou mais mtodos alternativos, em areia ou solo. O melhor resultado e o mtodo utilizado devem ser relatados no Bo-
93
Captulo 5
letim de Anlise; 3. houver certo nmero de plntulas que so difceis de serem avaliadas. Para o reteste deve-se usar um ou mais mtodos alternativos, em areia. O melhor resultado e o mtodo utilizado devem ser relatados no Boletim de Anlise; 4. houver suspeita de dormncia. Neste caso, quaisquer dos mtodos indicados nas RAS devem ser utilizados em um ou mais testes adicionais. O melhor resultado e o mtodo utilizado devem ser informados no Boletim de Anlise de Sementes; 5. a variao entre as repeties de 100 sementes excederem a tolerncia mxima permitida pelas RAS. Neste caso, o teste de germinao deve ser refeito, usando o mesmo mtodo. Se a diferena do segundo resultado no exceder tolerncia, a mdia dos dois testes deve ser relatada no Boletim de Anlise. Se o segundo resultado tambm exceder tolerncia indicada pelas RAS, deve ser feito um terceiro teste usando o mesmo mtodo. A mdia dos resultados compatveis deve ser relatada no Boletim de Anlise; 6. houver evidncia, antes ou durante o teste normal de germinao, da ocorrncia de qualquer um dos casos acima, testes de germinao simultneos podem ser realizados utilizando-se os mtodos alternativos indicados pelas RAS; 5.7.4. Clculo e informao dos resultados O resultado do teste de germinao representa o potencial mximo do lote de sementes, quando em condies ideais. Deve ser calculado pela mdias de quatro repeties de 100 sementes. Caso se utilize subrepeties, as mesmas devem ser combinadas a formar repeties de 100 sementes. O resultado do teste expresso em porcentagem, em nmeros inteiros, e a soma das porcentagens de plntulas normais, plntulas anormais, sementes duras, dormentes e mortas deve totalizar 100%. Para os casos em que essa soma no corresponda
94
Teste de germinao
a 100%, as RAS estabelecem como deve ser realizada a aproximao. De maneira geral, deve-se: (1) manter a aproximao do nmero inteiro para a porcentagem de plntulas normais; (2) Selecionar, dentre os outros valores apenas aquele com a maior parte fracionria e fazer a aproximao do mesmo; (3) Pegar apenas o nmero inteiro dos outros trs valores e refazer a soma. Se o valor fechar em 100%, informar esses resultados. Se no, aproximar tambm o valor com a segunda maior parte fracionria e repetir o clculo. Lembra-se que, quando houver partes fracionrias iguais, a prioridade dada para os valores de plntulas anormais, sementes duras, dormentes e mortas. Um exemplo de como proceder as aproximaes dos valores mostrado nas RAS. Outras informaes como a viabilidade de sementes no germinadas e o mtodo utilizado para determin-la, a porcentagem de outras categorias de sementes no germinadas e o mtodo utilizado para determin-las, podem ser mencionadas no Boletim de Anlise. Quando se trabalha com sementes que produzem mais de uma plntula normal por unidade de semeadura (unidades-sementes mltiplas) somente uma plntula normal por unidade de semeadura contada no clculo da porcentagem. Porm, pode-se informar tambm, por exemplo, o nmero de plntulas normais produzidas por 100 unidades ou a porcentagem de unidades que produziu uma, duas ou mais que duas plntulas normais. Para as sementes cujos testes de germinao so feitos com base no peso das quatro repeties, o resultado deve ser expresso pelo nmero de plntulas germinadas no total do peso de sementes testadas. Neste caso, a tabela de tolerncia diferenciada das demais. Como j mencionado anteriormente, quando for solicitado pelo interessado, as porcentagens de sementes vazias, sem embrio ou danificadas por insetos podem ser informadas em Outras Determinaes. Assim como para a execuo de todo o teste de germinao, o preenchimento do Boletim de Anlise de Se-
95
Captulo 5
mentes regido pelas RAS. De maneira geral, no boletim que devem ser detalhadas todas as informaes do teste, como por exemplo, sua durao, data da concluso, porcentagem de plntulas normais, anormais, sementes duras, dormentes e mortas, substrato e temperatura usadas. Quaisquer tratamentos especiais ou mtodos utilizados para promover a germinao tambm devero constar no Boletim de Anlise de Sementes. Nota-se que, caso haja um valor de porcentagem igual a zero, a recomendao das RAS para o preenchimento do Boletim de Anlise que esse valor seja expresso como 0. 5.7.5. Tabelas de tolerncia Para que o resultado de um teste de germinao possa ser considerado satisfatrio e vlido para emisso do certificado, necessria que a variao entre as porcentagens de germinao das repeties de 100 sementes esteja dentro das tolerncias mximas permitidas. As tabelas de tolerncia devem ser aplicadas, no mnimo, para a categoria de plntulas normais. Maiores detalhes sobre a aplicao destas tabelas foram mencionados neste texto, no item 5.4.1.
5.8. CONSIDERAES FINAIS

A aplicabilidade da atual verso das RAS para a certificao das sementes de todas as espcies florestais no possvel. A quantidade de sementes para a conduo do teste de germinao precisa ser revista para muitas espcies. Consequentemente as tabelas de tolerncias devem ser adequadas, visando tambm maior variabilidade gentica. H necessidade tambm de entrar em consenso sobre os diferentes tipos de germinao e em seguida definir as respectivas estruturas essenciais. Os autores deste captulo sugerem agrupar as sementes florestais em trs grupos para fins de avaliao da qualidade de suas sementes em laboratrios credenciados:
96
Teste de germinao
1) o primeiro grupo refere-se as sementes ortodoxas, com tamanho pequeno a mdio, que frutificam regularmente todos os anos e produzem sementes em grande quantidade. Para estas, quando possvel finalizar o teste de germinao em, no mximo, oito semanas, a germinabilidade (teste direto) pode ser avaliada conforme prevista nas RAS. 2) no segundo grupo enquadra-se as sementes ortodoxas de tamanho grande e as de que necessitam mais de oito semanas para completar a germinao, alm das sementes recalcitrantes. Para tais sementes devem ser aplicados somente testes indiretos para avaliar a viabilidade (sobre a escolha do teste indireto, ver detalhamento abaixo). Em caso de baixa disponibilidade de sementes, tamanho e peso muito grande, o nmero de sementes, necessrio para a certificao, deve ser reduzido. 3) o terceiro grupo engloba as espcies raras e/ou em perigo de extino. As espcies deste grupo necessitam ser plantadas para assegurar a sua conservao, assim, nenhuma semente deveria ser submetida a um teste destrutivo. Para tais espcies, outros critrios devem ser aplicados, tanto para o tamanho da amostra, como para a avaliao. Deve ser dada preferncia para procedimentos no destrutivos. Os autores deste captulo sugerem a seguinte ordem de preferncia para os testes indiretos: a) A protruso da raiz primria pode ser utilizada como teste indireto de germinao para sementes ortodoxas de tamanho pequeno a mdio que necessitam mais do que oito semanas para formao de plntulas normais, entretanto, finalizam a protruso da raiz primria neste perodo. As sementes recalcitrantes necessitam testes mais rpidos, devido a dificuldade de armazenamento, por isso no foram indicadas para este procedimento. b) O teste de tetrazlio pode ser utilizado para sementes recalcitrantes e para ortodoxas, que no finalizam a protruso da raiz em um perodo de oito semanas. Somente sementes de tamanho pequeno a
97
Captulo 5
mdio so recomendadas para este teste, devido ao alto custo do material. c) O teste de corte pode ser aplicado para as sementes muito grandes tanto ortodoxas como recalcitrantes. No caso das recalcitrantes a avaliao pode englobar sementes que iniciaram a germinao, conforme sugesto da ISTA [37]. Apesar da quantidade razovel de publicaes cientficas sobre a germinao das espcies nativas, verificou-se na reviso da literatura que, geralmente, os resultados no podem ser diretamente aplicados na avaliao da qualidade das sementes. Por exemplo, trabalhos cientficos caracterizam a germinao pelo tempo inicial, mdio e final, a velocidade e/ou o ndice de velocidade (IVG) [46]. Porm, para um laboratrio de certificao, h a necessidade de conhecer o tempo para a primeira contagem e a contagem final e ambos devem ocorrer em um prazo mximo de oito semanas. O cumprimento deste prazo, tambm raramente um objetivo da pesquisa. Imediatamente h necessidade de protocolos confiveis e devidamente descritos sobre o teste de tetrazlio, apoiado pela descrio morfolgica das sementes. Esses resultados apoiaro, de imediato, a incluso de novas espcies nas RAS, possibilitando a comercializao de suas sementes com a devida certificao exigida pela Lei de Sementes (Lei n. 10.711, de 05 de agosto de 2003). H necessidade de aprimorar testes indiretos. Por exemplo, o teste de corte um teste sub-utilizado que poderia oferecer informaes teis sobre a qualidade das sementes, alm da simples classificao em sementes vazias, atacadas por insetos ou sem embrio. O teste de Raio-X, possuiu a grande vantagem de fornecer resultados imediatamente, alm de ser no destrutivo, que poderia ser aplicado em sementes de espcies raras. Desenvolver novos mtodos indiretos, por exemplo para sementes grandes um grande desafio. To importante quanto o desenvolvimento das pesquisas relacionadas acima, o estabelecimento de pro-
98
Teste de germinao
cedimentos padres nos laboratrios credenciados, para a avaliao das sementes recalcitrantes. Devido a curta longevidade e dificuldade de armazenamento, as recalcitrantes deveriam receber um tratamento especial e rpido, desde o recebimento da amostra at o preenchimento do Boletim de Anlise de Sementes (furando a fila das sementes ortodoxas). As RAS foram desenvolvidas para atestar a qualidade de sementes comercializadas para fins de reproduo de material vegetal. No setor florestal temos a produo de madeira de lei, celulose e papel em plantios comerciais, em grande escala com alto retorno econmico. Temos tambm vores exploradas pelos seus produtos no-madeireiros (frutos, sementes, resinas, fibras, leos essenciais, etc.), algumas em plantios comerciais e outras oriundas do extrativismo, sem sempre sustentvel. H tambm a restaurao florestal e recuperao de reas degradadas, e a necessidade do replantio de espcies raras ou ameaadas da extino. Visando estes ltimos objetivos, ao contrrio dos exemplos citados anteriormente, necessita-se grande variabilidade gentica. Desta forma, o objetivo final das sementes deveria ser levado em considerao na avaliao da qualidade e dos procedimentos. Com essa sugesto, os autores questionam a real necessidade de submeter todas as sementes mesma rigorosa avaliao da qualidade.
5.9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1 ALBRECHT, J.M.F.; COLLI, AM.T. 1995. Avaliao do efeito da temperatura e do substrato na germinao de sementes de Vochysia divergens Mart. (cambar). Informativo ABRATES, 5(2):175. 2 ALBUQUERQUE, M.C.F.; RODIGUES, T.J.D.; MINOHARA, L.; TEBALDI, N.D.; SILVA, L.M.M. 1997. Temperatura e substrato na germinao de sementes de
99
Captulo 5
saguaragi (Columbrina grandulosa Berk.) - Rhamanaceae. Informativo ABRATES, 7(1/2):206. 3 AMARAL, D.M.I. 1986. Padronizao de Testes em Laboratrio com Sementes Florestais. In: Simpsio Brasileiro sobre Tecnologia de Sementes Florestais. Anais. Belo Horizonte. p. 267-283. 4 AMARAL,I.D.; GALLARDO, V.R.R; SALTZ, N.A; JAMARDO, A 1978. Metodizao e tratamento pr-germinativo de sementes florestais. Roessleria, 2(1):40-56. 5 ANDRADE, A.C.S. 1995. Efeito da luz e da temperatura na germinao de Leandra breviflora Cogn., Tibouchina benlhamiana Cogn., Tibouchina grandifolia Cogn. e Tibouchina moricandiana (D.C.) Baill. (Melastomataceae). Rev. Bras. de Sementes, 17(1):29-35. 6 ANDRADE, A.C.S.; PEREIRA, T.S. 1994. Efeito do substrato e da temperatura na germinao e no vigor de sementes de cedro - Cedrela odorata L. (Meliaceae). Rev. Bras. de Sementes, 16(1):34-40. 7 ANDRADE, A.C.S.; CUNHA, R; REIS, R.B.; ALMEIDA, K.J.; SOUZA, A.F. 1997. Germinao de sementes de cagaita (Eugenia dysenterica D.C.) - Myrtaceae: morfologia do desenvolvimento ps-seminal, influncia do tegumento e temperatura na germinao. Informativo ABRATES, 7(1/2):205. 8 ANJOS, A.M.G. 1998. Morfologia e fisiologia da germinao de arac-boi (Eugenia stipitata spp. sororia McVaugh - Myrtaceae) - uma frutfera nativa da Amaznia Ocidental. p. 67. Dissertao de mestrado PPG BTRN, INPA/UFAM Manaus-AM. 9 gia, ANJOS, A.M. G.; FERRAZ, I.D.K. 1999. Morfologerminao e teor de gua das sementes
100
Teste de germinao
pseudomonocotiledonares de araa-boi (Eugenia stipitata ssp. sororia). Acta Amazonica, 29(3),337-348. 10 ARRIGONI, M. de F.; LUCAS, N.M.C. 1989. Propagao de espcies de restinga: germinao de sementes de Canavalia rosea (SW) De Candole (Leguminosae). In: XL Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Cuiab. p. 619. 11 ARRUDA, Y.M.B.C; FERRAZ, I.D.K. 2008. Inharda-folha-peluda, Helicostylis tomentosa (Poepp. & Endl.) Rusby. In.: FERRAZ, I.D.K. e CAMARGO, J.L.C. (Eds). Manual de Sementes da Amaznia. Fascculo 6, 12p. INPA, Manaus-AM, Brasil. 12 AUD, F.F. 2008. Efeito de luz, temperatura e fumaa na germinao de sementes de espcies pioneiras na Amaznia Central. 58p. Dissertao de mestrado do Programa de Ecologia do PPG-BTRN. INPA, Manaus-AM. 13 BARBOSA, J.M.; BARBOSA, L.M.; SADER, R. 1988. Germinao de sementes de Cariniana excelsa Casar. considerando os efeitos causados pelo substrato, temperatura e armazenamento. Ecossistema, 12:5-12. 14 BASKIN, C.C.; BASKIN, J.M. 1998. Seeds: ecology, biogeography and evolution of dormancy and germination. Academic Press, New York, USA. 666p. 15 BEWLEY, J.D. e BLACK, M. 1978. Physiology and Biochemistry of Seeds in Relation to Germination. New York, Springer-Verlag, v. 1. 306p. 16 BILIA, D.A.C.; BARBEDO, C.J.; COICEV, L.; GUIMARES, F.L.C.; MALUF, A.M. 1995. Germinao de sementes de Cedrella fissilis VeU. e Cariniana estrellensis (Raddi) Kuntze - Efeito da luz e temperatura. In: XLVI Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Ribeiro Preto. p.255.
101
Captulo 5
17 BORGES, E.E.L.; REGAZZI, A.J.; BORGES, R.C.E.; CANDIDO, J.F. 1980. Efeitos da temperatura e da umidade na germinao de sementes de blsamo. Rev. Bras. de Sementes, 2(2):33-37. 18 BRASIL. 2009. Regras para anlise de sementes. Ministrio da Agricultura e Reforma Agrria, Braslia. 399p. 19 CAMARGO, J.L.C.; FERRAZ, I.D.K. 2004. Acariquara-roxa, Minquartia guianensis Aubl. Olacaceae In.: FERRAZ, I.D.K.; CAMARGO, J.L.C. (Eds) Manual de Sementes da Amaznia. Fascculo 4, 8p. INPA, Manaus AM, Brasil. 20 CAMARGO, J.L.C.; FERRAZ, I.D.K.; MESQUITA, M.R.; SANTOS, B.A.; BRUM. H.D., 2008. Guia de Propgulos e Plntulas da Amaznia. Vol 1. Manaus; editora INPA. 168p. 21 CASTELLANI, E.D.; AGUIAR, I.R; BANZATTO, D.A. 1997. Efeito da escarificao e da temperatura na germinao de sementes de candiuba (Trema micrantha (L.) Blume - Ulmaceae), de diferentes estdios de maturao. Informativo ABRATES, 7(1/2):197 22 CAVALLARl, D.A.N.; WETZEL, M.M.V.S.; BATISTA, L.A 1992. Substrato e temperatura na germinao de sementes de Gmelina arborea Roxb. Rev. Bras. de Sementes, 14(1):89-92. 23 DIONELLO, S.B.; BASTA, F. 1981. Estudo sobre a germinao de sementes de Kielmeyera coriacea. BrasilFlorestal, 48:33-42. 24 FERRAZ, I.D.K.;LEAL FILHO, N.; IMAKAWA, A.M.; VARELA, V.P.; PIA-RODRIGUES, F.C.M. 2004. Caractersticas bsicas para um agrupamento ecolgico preliminar
102
Teste de germinao
de espcies madeireiras da floresta de terra firme. Acta Amazonica. 34 (4) 621-633 25 FERRAZ, I.D.K.; VARELA. V.P., 2003. Temperatura tima para a germinao das sementes de trinta espcies florestais da amaznia. In: HIGUCHI, N.; SANTOS, J.;SAMPAIO, P.T.B.; MARENCO, R.A; FERRAZ, J.; SALES, P.C.; SAITO, M.; MATSUMOTO, S. (eds.) Projeto Jacaranda - fase 2: pesquisas florestais na Amaznia central. ISBN 85-903549-1-1. 252p. INPA, Manaus-AM. Captulo 9. p. 117-127. 26 FERRAZ, I.D.K., VARELA. V.P., 2003b.Temperaturas cardeais de germinao e sensibilidade ao resfriamento das sementes de guariba (Clarisia racemosa Ruiz et Pavon. - Moraceae). Revista de Cincias Agrrias 39:183-191. 27 FERREIRA, S.A.N.; GENTIL, D.F. O. 2006. Extrao, embebio e germinao de sementes de tucum (Astrocaryum aculeatum). Acta Amaz., vol.36, n.2, pp.141-145. 28 FIGLIOLIA, M.B. 1984. Influncia da temperatura e substrato na germinao de sementes de algumas espcies de essncias florestais nativas. In: Simpsio Internacional sobre Mtodos de Produo e Controle de Qualidade de Sementes e Mudas Florestais. Anais. pp.193-204. 29 FIGLIOLIA, M.B. 1997. Ecofisiologia da germinao de sementes de cabreva-vermelha (Myroxilum peruifereum L. Fabaceae - Papilionideae) em diferentes regimes de temperatura, umidade e luz. Informativo ABRATES, 7(112):210. 30 FIGLIOLIA, M.B.; FAULIM, E.W. 1997. Potencial de germinao de sementes de mirindiba-rosa (Lafoensia glyptocarpa Koene. - Lytraceae), em diferentes regimes de
103
Captulo 5
temperatura, umidade e luz. Informativo ABRATES, 7(112):209. 31 FIGUEIREDO, F.J.C. e POPINIGIS, F. 1980. Temperatura de germinao para sementes de malva. Rev. Bras. de Sementes, 2(2):9-22. 32 FONTINELLI, I.V.C.; MATOS, V.P.; LIMA, A.A de; FONSECA, M. da G. 1994. Influncia de diferentes temperaturas e substratos na germinao de sementes de cunh (Clitoria ternatea). In: XVIII Reunio Nordestina de Botnica. Resumos. Areia. 149 p. 33 FRASSETTO, E.G.; MENEZES, N.L. 1997. Influncia da temperatura de germinao, da abertura dos flutos e da embalagem na viabilidade de sementes de cangerana (Cabralea canjerana (Vell.) Mart.) - Meliaceae. Informativo ABRATES, 7(1/2):213. 34 GARCIA, Q. de S.; LUCAS, N.M.C. 1989. Germinao de sementes de Jacquinia brasiliensis Mez (Theophrastaceae). In: XL Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Cuiab. p.627. 35 GARWOOD, N.C. 2009. Seedlings of Barro Colorado Island and the Neotropics. Cornell University Press. 645p. 36 GOLDMAN, G.H.; GOLDMAN, M.H.S.; AGUIAR, J.P.L. 1986/87. Estudos sobre a germinao de sementes de marup (Simaruba amara Aubl.) I. Composio qumica e curva de embebio das sementes; germinao em diferentes substratos. Acta Amazonica, 16/17(nico):383-392. 37 I.S.T.A. 1998. ISTA Tropical and sub-tropical tree and shrub seed handbook. International Seed Testing Association. Zrich, Switzerland. 204p.
104
Teste de germinao
38 I.S.T.A. 2007. International Rules for Seed Testing. International Seed Testing Association. Zrich, Switzerland. Edition 2007/1. I 39 IMAKAWA, A.M.; FERRAZ, I.D.K. 1995. Germinao e caractersticas biomtricas de Cariniana micrantha Ducke (Lecythidaceae) na Amaznia Central. In: I Reunio dos Botnicos da Amaznia. Resumos. Belm. pp. 127-128. 40 KLEBS, G. 1885. Beitrge zur Morphologie und Biologie der Keimung. Unters. Bot. Inst. Tbingen. 1:536635. 41 LEAL FILHO, N.; BORGES, E.E.L. 1992. Influncia da temperatura e da luz na germinao de sementes de canudo de pito (Mabea fistulifera Mart.). Rev. Bras. de Sementes, 14(1):57-60. 42 LEAO, N.V.M; FREITAS, A.D.D.; CARRERA, R.H.A. 2008. Pau-de-balsa Ochroma pyramidale (Cav. ex Lamb.) Urban. Informativo Tcnivo Rede de Sementes da Amaznia. N. 13. disponvel em: <http://rsa.ufam.edu.br:8080/sementes/especies/especies.jsp>. 43 LEITE, I.T. de A; TAKAKI, M. 1995. Efeito da luz e da temperatura sobre a germinao de sementes de Mutinga calabura L. In: XLVI Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Ribeiro Preto. p. 255. 44 LIMA, C.M.R; BORGHETTI, F.; SOUSA, M.V. 1997. Temperature and germination of the leguminosae Enterolobium contortisiliquum. Rev. Bras. Fisiol. Veg. 9(2):97-102. 45 LUDEWIGS, T.; FERRAZ, I.D.K.; FERNANDES, E.C.M.. 1997. Germinacin y depredacin de semillas de Vismia sp. en Brasil. Boletin Mejoramiento Genetico y
105
Captulo 5
Semillas Forestales. CATIE, Turrialba, Costa Rica. 17 (agosto) 7-13. 46 MAGUIRE, J.D. 1962. Speed of germination aid in selection and evaluation for seedling emergence and vigor. Crop. Science., v. 9, n. 2, p.176-177. 47 MALUF, A.M. 1992. Variao populacional na germinao e dormncia de sementes de Senna multijuga. In: Anais do II Congresso Nacional sobre Essncias Nativas, So Paulo. Rev. Inst. Flor., 4(nico):728-732. 48 MARCOS FILHO, J. 2005. Fisiologia de Sementes de Plantas Cultivadas. Piracicaba: Fealq. 495p. 49 MARQUES, F.C.M. et al. 1978. Efeito da temperatura na germinao de sementes de pau-rei. Anais do 3 Congresso Florestal Brasileiro. Vol.2;376-381. 50 MARTINS NETO, D.A. 1994. Germinao de sementes de pau-de-balsa (Ochroma pyramidale (Cav.) Urb.) - Bombacaceae. Rev. Bras. de Sementes, 16(2):159162. 51 MELHEM, T. 1975. Desenvolvimento da plntula de Dipteryx alata Vogo (Leguminosae-Lotoideae). Hoehnea, 5:91-121. 52 MESQUITA, M.R.; FERRAZ, I.D.K.; CAMARGO, J.L. C. 2009. Angelim-vermelho, Dinizia excelsa Ducke. In.: FERRAZ, I. D. K. e CAMARGO, J. L. C. (Eds) Manual de Sementes da Amaznia.Fascculo 8, 12p. INPA, Manaus AM, Brasil. 53 MILBERG, P.; ANDERSSON, L.; THOMPSON, K. 2000. Large seeded species are less dependent on light for germination than small seeded ones. Seed Science Research, 10:99-104.
106
Teste de germinao
54 MILES, S.R. 1963. Handbook of tolerances and of measures of precision for seed testing. Proceedings of the International Seed Testing Association, Bassersdorf, v.28;525-686. 55 MIRANDA, P.R.M. 1998. Morfologia de frutos, sementes, germinao e plntulas e o efeito da temperatura na germinao e viabilidade de sementes de sete espcies florestais da Amaznia Central. 147 p. Dissertao de mestrado. Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia/ Universidade do Amazonas. Manaus-AM. 56 MIRANDA, P.R.M.; FERRAZ, I.D.K. 1999. Efeito da temperatura na germinao de sementes e morfologia de plntulas de Maquira sclerophylla (Ducke) C. C. Berg. Revista Brasileira de Botnica 22;303-307. 57 NEGREIROS, G. de F.; TEIXEIRA, E.M.; DEMATT, M.E.S.P. 1995. Efeito da temperatura e da luz na germinao de sementes de Gypsophila elegans Bieb. Informativo ABRATES, 5(2):156. 58 NEVES, A.S.; LUCAS, N.M.C. 1989. Germinao de sementes de Kielmeyera albopunctata Saddi (Guttiferae). In: XL Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Cuiab. 59 NIKOLAEVA, N.G. 1977. Factors controlling the seed dormancy pattern. In.: KHAN, A.A. (Ed). The Physiological and Biochemistry of Seed Dormancy and Germination, pp.51-74. North-Holland, Amsterdam. 60 NOGUEIRA, A.C.; KUNIYOSHI, Y.S.; TIEPOLO, G. 1995. Substrato e temperatura na germinao de sementes de Tabebuia cassinoides (Lamb.) De Candolle - caxeta. Informativo ABRATES, 5(2):205. 61 PEARSON, T.H.R.; BURSLEM, D.F.R.P.; MULLINS, C.E.; DALLING, J.W. 2002. Germination Ecology of
107
Captulo 5
neotropical pioneers: interacting effects of environmental conditions and seed size. Ecology, 83:2798-2807. 62 PEREIRA, T.S.; ANDRANDE, A.C.S. 1993. Myrcia lineata L. Influncia da colorao dos frutos: tipos de substrato e temperatura sobre a germinao das sementes. Informativo ABRATES, 3(3):79. 63 RAMOS, A; BIANCHETTI, A 1984. Influncia da temperatura e do substrato na germinao de sementes florestais. In: Simpsio Internacional sobre Mtodos de Produo e Controle de Qualidade de Sementes e Mudas Florestais. Anais. pp.252-275. 64 RANKIN-DE-MERONA, J.M.; PRANCE, G.T.; HUTCHINGS, R.W.; SILVA, F.M.; RODRIGUES, W.A.; UEHLING, M.E. 1992. Preliminary results of large- scale tree inventory of upland rain forest in the Central Amazon. Acta Amazonica, 22:493-534. 65 RIBEIRO, J.E.L.S.; HOPKINS, M.J.G.; VICENTINI, A.; SOTHERS, C.; COSTA, A.A.S.; BRITO, J.M.; SOUZA, M.A.D.; MARTINS, L.H.P.; LOHMANN, L.G; ASSUNO, P.A.C.L; PEREIRA, E.C.; SILVA, C.F.;MESQUITA, M.R.; PROCPIO, L.C. 1999. Flora da Reserva Ducke. Guia de identificao das plantas vasculares de uma floresta de terra-firme na Amaznia Central. Manaus, INPA. 816p. 66 RODRIGUES, W.A. 1989. Pesquisador do INPACPBO, Manaus-AM. comunicao pessoal. 67 ROEDER, M. 2010. Liana Regeneration in Secondary and Primary Forests of Central Amazonia. 88p. Tese de doutorado. Universidade de Georg-August, Gttingen, Alemanha (disponvel em: <http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/2010/roeder/>. 68 SALOMO, A.N.; EIRA, M.T.S.; CUNHA, R. 1991. Temperatura para teste de germinao de Dalbergia nigra
108
Teste de germinao
Allem. Informativo ABRATES, 1(4):79. 69 SILVA, A; AGUIAR, I.B. 1997. Germinao de sementes de canela-preta (Ocotea catharinensis - Mez. Lauraceae) em diferentes condies de luz e temperatura. Informativo ABRATES, 7(1/2):203. 70 SILVA, A; CASTELLANI, E.D.; SADER, R; AGUIAR, I.B.; RODRIGUES, T.J.D. 1995. Influncia da luz e da temperatura na germinao de sementes de guarant (Esenbeckia leiocarpa Engl.). Informativo ABRATES, 5(2):165. 71 SILVA, F.C.; AFONSO, A.A 1985. Determinao da temperatura ideal de germinao de sementes de copaba (Copaifera longsdorfii Desf). In.: Congresso Brasileiro de Sementes. Resumos. Braslia. p.145. 72 SILVA, L.M.M.; MATOS, V.P. 1995. Efeito da qualidade da luz e da temperatura na germinao de sementes de Triplaris surinamensis Chamo (Coau). Informativo ABRATES, 5(2):189. 73 SOUZA, A.D.O.; ANDRADE, A.C.S.; LOUREIRO, M.B. 1995. Efeito do substrato e da temperatura na germinao de sementes de palmiteiro (Euterpe edulis Mart). Informativo ABRATES, 5(2):190. 74 SOUZA, D.B; CARVALHO, G.S; RAMOS, E.J.A., 2005. Paric, Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke. Informativo Tcnivo Rede de Sementes da Amaznia. N. 13. disponvel em: <http://rsa.ufam.edu.br:8080/sementes/especies/especies.jsp>. 75 SOUZA, R.P.; VALIO, I.F.M. 2001. Seed size, seed germination and seedling survival of brazilian tropical tree species differing in successional status. Biotropica, 33:447457.
109
Captulo 5
76 TAKAHASHI, L.; MELGES, E.; CARNEIRO, J.W.P. 1995. Desempenho germinativo de sementes de Stevia sob diferentes temperaturas. In: XLVI Congresso Nacional de Botnica. Resumos. Ribeiro Preto. p.245. 77 VZQUEZ-YANES, C. 1979. Notas sobre la ecofisiologia de la germinacion de Cecropia obtusifolia Bertol. Turrialba, 29:147-149. 78 VLEESHOUWERS, L.M.; BOUWMEESTER, H.J.; KARSSEN, C.M. 1995. Redefining seed dormancy: an attempt to integrate physiology and ecology. Journal of Ecology 83,1031-11037. 79 VOGEL, E.F. de 1980. Seedlings of dicotyledons; Structure, development, types. Descriptions of 150 Woody Malesian taxa. Wageningen: Centre for Agricultural Publishing and Documentation ([PUDOC]). 465p. 80 ZPEVAK, F.A; PEREZ, S.C.J.G.A 1993. Efeito da temperatura na germinao de sementes de Adenanthera pavonia. Informativo ABRATES, 3(3):75.
110
Tabela 5.1. Caractersticas das sementes (ou da unidade de semeadura) e da germinao em condies de viveiro na regio de Manaus, de 50 espcies florestais da Amaznia. Dados extrados de Camargo et al., 2008.
Anexos
Teste tema de germinao
Espcie
Nome popular
Famlia
Massa de uma Tempo para semente ou formao de unidade de plntula(dia) semeadura(g) mdia mdia (min max) (min max) Dormncia** 0,09 (0,04 - 0,11) 210 (NI NI) 0,2 (0,2 - 0,3) 0,04 (0,04 - 0,05) 0,4 (0,3 - 0,5) 0,6 (0,2 - 1,0) 3,0 (2,0 - 4,1) 0,4 (0,3 - 0,5) 48 (23 - 94) 3,3 (2,3 - 4,2) 1,9 (0,9 - 2,7) 0,6 (0,2 - 0,7) 240 (150 - 480) 26 (25 - 27) 21 (NI NI) 35 (21 - 70) 56 (49 - 84) 70 (63 - 77) 30 (15 - 53) 34 (29 - 43) 39 (32 - 55) 70 (63 - 126) C-E-F P-E-F P-E-F C-E-R C-H-R C-H-R C-H-R P-E-R C-H-R P-E-F P-E-F NI NI NI sem NI NI NI NI sem sem sem
Bocageopsis multiflora Annonacea Apocynaceae Burseraceae Burseraceae Burseraceae Burseraceae Chrysobalanaceae Clusiaceae Combretaceae Euphorbiaceae
enira-surucucu-da-folhamida Annonaceae
Guatteria olivaceae
envira-bob
Ambelania acida
pepino-doce
Protium apiculatum
breu-preto
Protium decandrum
breu-ambulante
Protium hebetatum
breu-do-n-inchado
Protium spruceanum
breu-do-p-branco
Couepia longipendula
castanha-de-galinha
Calophyllum brasiliense jacareba
Buchenavia grandis
tanimbuca-da-terra-firme
111
Conceveiba hostmanii
urucuarana-mabi
112
Euphorbiaceae Euphorbiaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae Fabaceae 0,7 (0,4 - 1,0) 0,1 (0,05 - 0,2) 0,6 (0,4 - 0,9) 78 (20 - 112) 5,8 (3,6 - 7,7) 7,4 (3,0 - 9,2) 4,3 (2,6 - 6,4) 35 (28 - 44) 15 (09 - 25) 12 (11 - 23) 08 (07 - 09) 21 (07 - 35) 42 (35 - 56) 35 (28 - 42) 60,1 (22,5 - 96,8) 57 (38 - 87) 2,9 (1,3 - 4,8) 26 (23 - 30) 0,2 (0,1 - 0,3) 12 (10 - 27) P-E-F P-E-R P-E-R C-H-R P-E-R P-H-R P-E-R P-H-R C-H-R P-H-R 1,8 (1,3 - 2,5) 28 (16 - 58) P-E-R sem Fsica Fsica Fsica Fsica Fsica Fsica sem sem sem NI 1,5 (0,8 - 2,5) 22 (15 - 27) C-H-F sem 4,9 (2,0 - 6,2) 27 (11 - 45) C-H-F sem
Captulo 5
Hevea brasiliensis
seringueira
Hevea guianensis
seringueira-vermelha
Copaifera mulijuga
copaba-roxa
Dinizia excelsa
angelim-vermelho
Hymenaea reticulata
juat-mirim
Hymenaea parviflora
juat-do-fruto-grande
Parkia multijuga
paric-grande-da-terrafrime
Parkia nitida
faveira-bengue
Parkia pendula
visgueiro
Peltogyne paniculata
escorrega-macaco
Swartzia polyphylla
paracutaca
Swartzia recurva
muirajibia-amarela
Swartzia reticulata
arab-preto
Swartzia tessmanii Lauraceae 3,5 (1,8 - 5,5) 0,14 (0,08 - 0,17) 28 (21 - 56) 7,8 (2,5 - 14,9) 2,0 (1,6 - 2,6) 3,9 (3,0 - 4,9) 2,0 (1,1 - 3,1) 1,7 (0,5 - 3,5) 20 (13 - 36) 27 (25 - 30) 24 (12 - 45) 20 (12 - 35) BIPOLAR P-E-F sem sem NI BIPOLAR BIPOLAR BIPOLAR sem sem sem NI 259 (161 420) 75 (24 - 141) 0,4 (0,3 - 0,6) 70 (23 - 111) 89 (31 - 220) 307 (127 457) 70 (35 - 287) 70 (42 - 140) BIPOLAR P-E-F P-H-R P-H-R NI NI NI NI Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Malvaceae Malvaceae Malvaceae 77 (35 - 210) C-H-R NI
muirajibia 1,9 (1,3 - 2,5)
Fabaceae
98 (84 - 140) C - H - R
NI
Aniba rosaeodora
pau-rosa
Teste de germinao
Cariniana micrantha
castanha-de-macaco
Eschweilera coriacea
matamat-verdadeiro
Eschweilera cyathiformis matamat
49 (28 - 112) BIPOLAR
Eschweilera romeo-cardosoi
matamat-romeu
Eschweilera truncata
matamat-preto
Eschweilera wachenheimii
matamat-mirim
Lecythis barneby
jarana-da-folha-grande
15,5 (7,1 - 21,2) 154 (98 - 224) BIPOLAR
Lecythis prancei
castanha-jarana
Byrsonima chrysophylla murici
Catostemma albuquerque
mamorana
Scleronema micranthum cardeiro
113
114
Melastomataceae 161 (77 - 210) C - H - R 98 (70 - 140) 91 (63 - 161) 40 (34 - 52) C-H-R C-H-R C-H-F C-H-F 28 (15 - 65) 33 (22 - 43) 1,3 (0,7 - 1,6) 29 (14 - 47) 0,8 (0,6 - 0,9) 55 (39 - 97) 360 (270 390) 49 (42 - 91) C-E-F P-H-R P-E-R P-E-F C-H-R P-H-R C-H-R NI sem Mecnica e morfolgica NI NI sem Mecnica e morfolgica sem NI
Captulo 5
Mouriri collocarpa Meliaceae C-H-R NI Meliaceae Moraceae Moraceae Moraceae Myristicaceae Myristicaceae Olacacea Sapotaceae Sapotaceae Solanaceae Urticacea 1,5 (1,2 - 2,0) 3,3 (1,7 - 4,6) 2,5 (1,8 - 3,0) 3,9 (3,1 - 5,0) 3,3 (2,6 - 4,2) 960 (600 1320) 63 (35 - 112) 35 (28 - 49) 0,25 (0,12 - 0,36) 39 (26 - 88) 1,1 (0,3 - 1,7) 3,6 (0,7 - 5,2) 0,8 (0,2 - 0,9)
mamozinho NI
1,9 (1,0 - 3,0)
Guarea carinata
jatuaba-vermelha
Guarea silvatica
jit
Clarisia racemosa
guariba
Helicostylis tomentosa
inhar-da-folha-peluda
Naucleopsis caloneura
muiratinga
Iryanthera juruensis
ucuubarana-pun
Iryanthera laevis
ucuubarana-vermelha
Minquartia guianensis
acariquara-roxa
Pouteria guianensis
abiurana-gigante
Pouteria jariensis
abiu-do-jari
Duckeodendron cestroides
pincel-de-macaco
NI NI
Pourouma melionii
imbaubarana
Teste de germinao
* Classificao dos tipos de germinao: a primeira letra indica a exposio dos cotildones, podendo ser criptocotiledonar (C) ou fanerocotiledonar (P). A segunda letra indica o alongamento do hipoctilo, podendo ser epgea (E) ou hipgea (H) e a terceira letra indica a classificao dos cotildones em foliceos (F) ou com reservas (R). O termo Bipolar indica que a protruso da raiz e da parte area ocorre em plos opostos da semente. ** Foi considerado sem dormncia, quando a germinao finalizou em um perodo menor que 60 dias. Caso o tipo de dormncia seja mencionado, o tempo para formao de plntulas normais foi obtido aps o tratamento de quebra de dormncia. NI- No Informado
115
Captulo 5
Tabela 5.2. Temperaturas recomendadas para o teste de germinao de sementes florestais tropicais e subtropicais do Brasil.
Espcie Acacia decurrens Adenanthera pavonina Anadenanthera macrocarpa Aniba rosaeodora Apuleia leiocarpa Aspidosperma polyneuron Astronium urundeuva Bauhinia variegata Bertholletia excelsa Brosimum rubescens Buchenavia grandis Buchenavia macrophylla Buchenavia viridiflora Cabralea canjerana Calophyllum angulare Canavalia rosea Carapa guianensis Carapa procera Cariniana estrellensis Cariniana excelsa Cariniana micrantha Cassia leptophylla Cedrela odorata Famlia Fabaceae Mim. Fabaceae Caes. Fabaceae Mim. Lauraceae Fabaceae Caes. Apocynaceae Anacardiaceae Fabaceae Caes.. Lecythidaceae Moraceae Combretaceae Combretaceae Combretaceae Meliaceae Clusiaceae Fabaceae Pap. Meliaceae Meliaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Lecythidaceae Fabaceae Caes. Meliaceae Temperatura (C) 20:30 20, 25, 30, 35 20, 25, 3020:30 25, 30 30 20, 2525 25:30 20, 25, 30 20:30 30, 35 25, 30, 35 25, 30, 35 25, 30, 35 25, 30, 35 20 30 35 35 20, 25, 30, 35 30 25 20, 25, 30 20:30 20:30 25, 30 25 20, 25, 30 30 30 20:30 25, 30, 35 20, 25, 30 20:30 30 20:30 20, 25 25 20:30 Fonte Amaral,1986 Zpevak e Peres, 1993 Figliolia, 1984 Ferraz e Varela, 2003 Amaral, 1986 * * * *
Ramos e Bianchetti, 1984 * Figliolia, 1984 Albrecht e Colli,1995 Figliolia, 1984 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Frassetto e Menezes, 1997 * Ferraz e Varela, 2003 Arrigoni e Lucas, 1989 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Bilia et al.,1995 Barbosa et al.,1988 * * * * *
Imakawa e Ferraz, 1995 * Amaral,1986 *
Andrade e Pereira, 1994 * Amaral et al., 1978 Figliolia, 1984 Amaral, 1986 Bilia et al.,1995 Figliolia,1984 Ferraz e Varela, 2003 Figliolia, 1984 Ferraz e Varela, 2003 b Fontinelli et al.,1994 Ferraz e Varela, 2003 Albuquerque et al.,1997 * * *
Cedrela fissilis
Meliaceae
Cedrelinga cataeniformis Chorisia speciosa Clarisia racemosa Clitoria ternatea
Fabaceae Mim. Malvaceae Moraceae Fabaceae Pap.
Cochlospermum orinoccense Cochlospermaceae Columbrina glandulosa Rhamanaceae
116
Teste de germinao
Copaifera langsdorfti Copaifera multijuga Cordia trichotoma Couma guianensis Couma utilis Dalbergia nigra Dalbergia variabilis Dinizia excelsa Diplotropis sp. Dipteryx alata Dipteryx magnifica Dipteryx odorata Enterolobium contortisiliquum Enterolobium schomburkii Esenbeckia leiocarpa Eugenia dysenterica Euterpe edulis Euterpe precatoria Geissospermum sp. Gmelina arborea Gypsophila elegans Helicostylis tomentosa Hovenia dulcis Jacaranda copaia Jacaranda micrantha Jacquinia brasiliensis Kielmeyera albopunctata Kielmeyra coriaceae Lafoensia glyptocarpa Leandra breviflora Luehea divaricata Mabea fistulifera Maquira scleropylla Miconia cinnamomifolia Mimosa scrabella Minquartia guianensis
Fabaceae Caes. Fabaceae Caes. Boraginaceae Apocynaceae Apocynaceae Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Fabaceae Mim. Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Fabaceae Mim. Fabaceae Mim. Rutaceae Myrtaceae Arecaceae Arecaceae Apocynaceae Lamiaceae Vitico. Caryophyllaceae Moraceae Rhamanaceae Bignoniaceae Bignoniaceae Primulaceae Clusiaceae Bonnetioideae Clusiaceae Bonnetioideae Lythraceae Melastomataceae Malvaceae Euphorbiaceae Moraceae Melastomataceae Fabaceae Mim. Olacaceae
25 30, 35 25 20:30 20, 25, 30, 35 25 20:30 25 25 25, 30, 35 30, 35 25, 30, 35 20, 25, 30, 35 de 18 a 38 20:30 25, 30, 35 25, 30 25:30 20 25 20:30 25, 30 30, 35 25 20:25 25, 30 20 25 25, 30 20, 25 30 25 25 22, 27 20:30 30 25 25, 30 30 30 20:30, 25:35 22, 24, 26 20:30 30
Silva e Afonso, 1985 Ferraz e Varela, 2003 Amaral, 1986 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Salomo et al.,1991 Amaral, 1986 Mesquita et al., 2009 Ferraz e Varela, 2003 Melhem,1975 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Lima et al., 1997 Amaral,1986 Ferraz e Varela, 2003 Silva et al., 1995 Andrade et al., 1997 Amaral, 1986 Souza et al.,1995 Ferraz e Varela, 2003 Ferraz e Varela, 2003 Cavallari et al.,1992 Negreiros et al.,1995 Ferraz e Varela, 2003
* *
* * *
* *
Ramos e Bianchetti, 1984 * Amaral, 1986 Ferraz e Varela, 2003 Ramos e Bianchetti, 1984 * Amaral, 1986 Garcia e Lucas, 1989 * Neves e Lucas,1989 Dionelo e Basta,1981 Figliolia e Faulim,1997 Andrade, 1995 Amaral, 1986 Miranda, 1998 Pereira e Andrade, 1995 * Ramos e Bianchetti, 1984 * Amaral,1986 Camargo e Ferraz, 2004 * * * * *
Leal Filho e Borges,1992 *
117
Tes te d e ge rminao
Captulo 5
Minquartia guianensis Muntingia calabura Myrcia lineata Myrocarpus frondosus Myroxilon balsamum Myroxylon peruiferum Ochroma pyramidale Ocotea catharinensis Ocotea puberula Parapiptadenia rigida Parkia discolor Patagonula americana Peltogyne paniculata Peltophorum dubium Prunus brasiliensis Schizolobium parayba Senna multijuga Simarouba amara Sterculia stricta Stevia rebaudiana Styrax leprosum Tabebuia avellanedae Tabebuia cassinoides Tabebuia chrysotricha Tabebuia pulcherrima Tibouchina benthamiana Tibouchina grandiflora Tibouchina moricandiana Trema micrantha Triplaris surinamensis Urena lobata Vouacapoua palidor
Olacaceae Muntingiaceae Myrtaceae Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Fabaceae Pap. Malvaceae Lauraceae Lauraceae Fabaceae Mim. Fabaceae Mim. Boraginaceae Fabaceae Caes. Fabaceae Caes. Rosaceae Fabaceae Caes. Fabaceae Caes. Simaroubaceae Malvaceae Asteraceae Styracaceae Bignoniaceae Bignoniaceae Bignoniaceae Bignoniaceae Melastomataceae Melastomataceae Melastomataceae Cannabaceae Polygonaceae Malvaceae Fabaceae Caes.
30 35 20:30 25 20 20:30 30 30, 35 20 25 25 20, 25 25, 30, 35 25 20, 25, 30 25 20, 26 20, 26 25, 30 30, 35 30 30, 35 30 25 20:30 25 30 25, 30 25 25 30 30 30 20:30 20,30 30 25, 30, 35
Camargo e Ferraz, 2004 Leite e Takaki, 1995 *
Pereira e Andrade, 1993 * Amaral, 1986 Borges et al., 1980 Figliolia,1997 Martins Netto, 1994 Ferraz e Varela, 2003 Silva e Aguiar,1997 * * * * *
Amaral, 1986 * Amaral et al.,1978 * Ramos e Bianchetti, 1984 Ferraz e Varela, 2003 Amaral, 1986 Ferraz e Varela, 2003 Amaral et al., 1978 * Ramos e Bianchetti, 1984 Ramos e Bianchetti, 1984 * Ramos e Bianchetti, 1984 * Maluf,1992 Goldman et al.,1986/87 Ferraz e Varela, 2003 Marques et al.,1978 Takahashi et al.,1995 Amaral, 1986 Amaral, 1986 * * * * * *
Ramos e Bianchetti, 1984 * Nogueira et al., 1995 Amaral, 1986 Amaral et al.,1978 Andrade, 1995 Andrade, 1995 Andrade, 1995 Castellani et al.,1997 Silva e Matos, 1995 Figueiredo e Popinigis, 1980 Ferraz e Varela, 2003 * * * * * * * *
* baseado no levantamento de Miranda, 1998
118
Teste de germinao
Tabela 5.3. Caractersticas das sementes (ou da unidade de semeadura) e da germinao de 20 espcies tropicais com sementes que exigem luz para a germinao (sementes fotoblsticas positivas).
Massa de uma semente ouunidade de semeadura Tipo de (g) germinao * mdia ( desv pad) 0,00012 0,00035 0,00010 0,00017 0,00068 NI 0,00059 0,00058 0,00011 0,00031 0,00014 0,00030 0,00065 0,00016 0,00008 0,00010 0,00004 0,00040 0,00002 0,00006 NI 0,0004 0,0000 0,0004 NI NI NI NI 0,0001 0,0002 0,0004 0,0000 0,0003 0,0002 NI NI NI 0,0000 NI NI NI P-E-F P-E-F P-E-F NI NI NI NI P-E-F P-E-F P-E-F P-E-F P-E-F P-E-F NI NI NI P-E-F NI NI
Espcie
Nome popular
Famlia
Fonte
Alseis blackiana Aristolochia silvatica Bellucia grossularioides Byrsonima chrysophylla Cecropia insignis Cecropia obtusifolia Cecropia obtusifolia Cecropia peltata Cecropia sciadophylla Cissus sicyoides Croton lanjouwensis Jacaranda copaia Matelea badilloi Miconia argentea Piper dilatatum Piper peltatum Vismia cayennensis Vismia guianensis Vismia japurensis
NI urubu-ca
Rubiaceae Aristolochiaceae
Pearson et al., 2002 Roeder, 2010 Aud, 2008 Aud, 2008 Pearson et al., 2002 Vzquez-Yanes, 1979 Pearson et al., 2002 Pearson et al., 2002 Aud, 2008 Roeder, 2010 Aud, 2008 Aud, 2008 Aud, 2008 Roeder, 2010 Pearson et al., 2002 Pearson et al., 2002 Pearson et al., 2002 Aud, 2008 Ludewigs, 1997 Ludewigs, 1997
goiaba-deMelastomataceae anta murici imbaba imbaba imbaba imbaba imbaba NI dima Malpighiaceae Urticaceae Urticaceae Urticaceae Urticaceae Urticaceae Vitaceae Euphorbiaceae Rubiaceae Bignoniaceae Apocynaceae Melastomataceae Piperaceae Piperaceae Hypericaceae Hypericaceae Hypericaceae
Isertia hypoleuca foguetinho caroba NI buxixu NI NI lacre lacre-branco lacre
* Classificao dos tipos de germinao: a primeira letra indica a exposio dos cotildones, podendo ser criptocotiledonar (C) ou fanerocotiledonar (P). A segunda letra indica o alongamento do hipoctilo, podendo ser epgea (E) ou hipgea (H) e a terceira letra indica a classificao dos cotildones em foliceos (F) ou com reservas (R). NI No Informado
119
Captulo 5
Tabela 5.4. Tipo de germinao de 23 gneros de monocotiledneas, baseado na classificao de Garwood (2009).
Gnero Ananas Astrocaryum Attalea Bactris Bromelia Cocus Dyckia Elaeis Euterpe Geonoma Leopoldina Lindmania Manicaria Mauritia Oenocarpus Phytelephas Renealmia Ruppia Smilax Socratea Strelitzia Syagrus Vellozia
Famlia Bromeliaceae Areacaceae Areacaceae Areacaceae Bromeliaceae Areacaceae Bromeliaceae Areacaceae Areacaceae Areacaceae Areacaceae Bromeliaceae Areacaceae Areacaceae Areacaceae Areacaceae Zingiberaceae Ruppiaceae Smilacaceae Areacaceae Strelitziaceae Areacaceae Velloziaceae
Tipo de germinao * H-S H-S E-P H-S H-S H-S E-F H-S H-S H-S H-S E-F H-S H-S H-S E-P H-S E-F H-S H-S H-S H-S H-S
* H-S: Hipgea-Sssil; E-P: Epgea-Peciolata, E-F: Epgea-Folicea.
120
Teste de germinao
Figura 5.1. Indicao da temperatura mais adequada para o teste de germinao de 86 espcies florestais sub-tropicais e tropicais, baseada na Tabela 5.2, excluindo as espcies com recomendao somente de temperaturas alternadas. Quando, mais que uma temperatura foi recomendada, optou-se pela mdia, ou a primeira abaixo da mdia. Exemplo 1: Temperaturas recomendadas: 25, 30 e 35C => Temperatura selecionada: 30C. Exemplo 2: Temperaturas recomendadas: 20 e 25C => Temperatura selecionada: 20C.
50 Nmero de espcies 40 30 20 10 0 20oC 25oC 30oC 35oC
121
Captulo 5
Figura 5.2. Classificao dos nove tipos de germinao encontrados em dicotiledneas tropicais. Nas abreviaes, a primeira letra indica a exposio dos cotildones, podendo ser criptocotiledonar (C) ou fanerocotiledonar (P). A segunda letra indica o alongamento do hipoctilo, podendo ser epgea (E) ou hipgea (H) e a terceira letra indica a classificao dos cotildones em foliceos (F) ou com reservas (R). O termo Bipolar indica que a protruso da raiz e da parte area ocorre em plos opostos da semente.Exemplos podem ser encontrados nas Tabelas 5.1 e 5.3.
Protruso da raiz primria e da parte area
Unipolar
Bipolar
Criptocotiledonar
Fanerocotiledonar
Hipgea
Epgea
Hipgea
Epgea
Com Reserva
Sem Reserva
Com Reserva
Sem Reserva
Com Reserva
Sem Reserva
Com Reserva
Sem Reserva
C-H-R 1
C-H-F 2
C-E-R 3
C-E-F 4
P-H-R 5
P-H-F 6
P-E-R 7
P-E-F 8
Bipolar 8
122
Captulo 6
Determinaes adicionais
6.1 Introduo
A qualidade da semente avaliada por um conjunto de ndices determinados por anlises. Como determinaes adicionais so designadas as anlises que contribuem para fornecer outras informaes sobre a qualidade do lote. De todas estas determinaes, a mais importante para espcies florestais o peso de mil sementes.
6.2 Peso de mil sementes [1]

O peso de mil sementes em geral utilizado para calcular a densidade de semeadura e o peso da amostra de trabalho, para a anlise de pureza. um dado que est diretamente relacionado com a qualidade das sementes, assim como de seu estado de maturidade e sanidade. O peso de mil sementes tambm influenciado pelo grau de umidade. A amostra de trabalho para essa determinao toda a
Captulo 6
semente pura, proveniente da anlise de pureza ou consiste de, no mnimo, oito subamostras de 100 sementes provenientes da poro semente pura. A amostra de trabalho pesada em gramas, com o mesmo nmero de casas decimais indicadas para anlise de pureza. Contam-se ao acaso, manualmente ou com auxlio de contadores mecnicos, oito subamostras de 100 sementes cada. Em seguida, pesam-se essas subamostras com o mesmo nmero de casas decimais utilizadas na anlise de pureza.
6.3 Clculos e informao do resultado

Quando o peso foi obtido com oito repeties ou subamostras de 100 sementes, calcula-se a varincia, o desvio padro e o coeficiente de variao dos valores obtidos na pesagem da seguinte maneira: Varincia = n(x2) - (x ) , onde n(n - 1) x = peso de cada subamostra de 100 sementes; n = nmero de amostras (oito) Desvio padro (s) = varincia Coeficiente de variao = s x 100, onde x x = peso de 100 sementes.
2
Se o coeficiente de variao no exceder a 6% para palhetas ou 4% para as outras sementes, o resultado da determinao poder ser calculado multiplicando-se por 10 o peso mdio obtido das subamostras de 100 sementes. Se o coeficiente de variao exceder os limites j mencionados, outras oito subamostras de 100 sementes devero ser contadas e pesadas; logo aps, calcula-se o desvio padro das 16 repeties. Desprezam-se todas as que apresentam uma divergncia da mdia maior do que o dobro do desvio padro obtido. Multiplica-se por 10 o
124
Determinaes adi cion ais
peso obtido entre as demais subamostras de 100 sementes, sendo este o resultado do teste. O resultado ser expresso em gramas com o nmero de casas decimais correspondente s utilizadas nas pesagens fazendo-se a devida aproximao no final.
6.4 Referncias bibliogrficas

1 BRASIL. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Regras para anlise de sementes. Braslia: MAPA/ACS, 2009. 395p.
125
Captulo 7
Limpeza de materiais, equipamentos e instalaes do laboratrio de anlise de sementes

Gentil, D.F.O.
7.1 Introduo
A disseminao de microrganismos no Laboratrio de Anlise feita atravs do ar, gua, solo, materiais, pessoas e sementes. Caso existam condies favorveis, ocorre a colonizao e o estabelecimento desses seres no ambiente, ficando suspensos no ar, depositados sobre as superfcies e contaminando/infectando sementes. Alguns microrganismos, como os dos gneros Aspergillus, Penicillium, Rhizopus e Trichoderma, podem interferir na execuo das anlises e na obteno de resultados confiveis [21]. Os testes baseados na avaliao de plntulas podem ser prejudicados, pois as condies necessrias germinao de sementes tambm favorecem o desenvolvimento de microrganismos, promovendo o desencadeamento de doenas [25]. Com isso, os testes
Captulo 7
que apresentarem resultados duvidosos devero ser repetidos [5]. Para evitar que esses microrganismos indesejveis afetem o andamento das anlises no laboratrio, imprescindvel eliminar ou reduzir as fontes de inculo no local, o que pode ser conseguido com a adoo de procedimentos de limpeza. Na limpeza, devem ser considerados os custos, a eficincia de operacionalizao e o padro de qualidade dos procedimentos a serem adotados, alm de visar o aumento no tempo de vida til dos materiais, equipamentos e instalaes [6]. Os procedimentos de limpeza mais empregados so descritos abaixo. As etapas esto ordenadas didaticamente, para facilitar o entendimento. Na prtica, entretanto, a escolha e ordenao das etapas devem ser baseadas no grau de sujidade da superfcie e no objeto da ao de limpeza.
7.2 Pr-Lavagem
A presena de detritos num material protege os microrganismos do contato indispensvel com o agente desinfetante ou esterilizante [3]. Por isso, necessrio elimin-los atravs da pr-lavagem, que consiste na frico com esponja, pano ou escova, sob gua limpa e corrente.
7.3 Lavagem
a retirada da sujidade de qualquer superfcie. Consta na frico com esponja, pano ou escova, utilizando gua limpa e um detergente tensoativo, que pode ser o sabo [6]. O efeito desinfetante dos sabes aumenta com a elevao da temperatura [1]. Dessa forma, recomendvel utilizar gua ligeiramente aquecida, em torno de 38 a 46C, nas lavagens [17].
128
Artigos metlicos, plsticos e de vidro devem ser cuidadosamente lavados [5]. Equipamentos, como germinadores, alm de bancadas e pias, devem receber o mesmo tratamento.
7.4 Descontaminao
a eliminao total ou parcial da carga microbiana presente em materiais, tornando-os aptos para o manuseio seguro. Corresponde imerso completa de materiais em soluo desinfetante, acompanhada ou no de frico com escova ou esponja. A descontaminao realizada com frequncia em artigos plsticos ou de vidro, atravs de soluo de hipoclorito de sdio com 1% de cloro ativo, por 30 minutos [6], ou de detergente em p, por uma hora.
7.5 Enxgue
realizado com gua limpa e corrente, para eliminar os resduos do desinfetante usado na lavagem e/ou na descontaminao [6]. Em algumas situaes, costumase fazer um novo enxgue com gua destilada, uma vez que a mesma no apresenta condies para sobrevivncia e desenvolvimento de certos microrganismos [19].
7.6 Secagem
Objetiva eliminar a interferncia da umidade nos produtos e mtodos da limpeza em curso. Em materiais pode ser feita com pano limpo e seco [6] ou em estufa a 40C. Conforme o destino, os materiais podem ser estocados ou submetidos desinfeco ou esterilizao. Os equipamentos e instalaes devem ser secados com pano
129
Captulo 7
limpo e seco, sendo posteriormente desinfetados.
7.7 Desinfeco
um processo encaminhado a destruir microrganismos patognicos. Portanto, no implica na eliminao de todos os microrganismos vivos presentes numa superfcie. A destruio de microrganismos patognicos pode ser alcanada com o uso de produtos qumicos, denominados desinfetantes, os quais podem ser eficazes contra alguns tipos de microrganismos. Para designar esta especificidade dos produtos empregam-se os termos bactericida, fungicida, dentre outros [29]. Quando se utilizam desinfetantes no controle de microrganismos, alguns fatores importantes devem ser considerados: concentrao - quanto mais concentrado o produto, mais efetiva ser sua ao. H, contudo, um limite mnimo de concentrao, abaixo do qual a ao do desinfetante nula, podendo at estimular o desenvolvimento dos microrganismos. Por isso, nas instrues de prticas de desinfeco preciso definir a concentrao do produto qumico que ser usado; tempo de ao - desenvolve-se em duas fases: a primeira a de fixao, que atua impedindo a multiplicao microbiana e pode ser anulada por lavagem ou neutralizao qumica; a segunda a de destruio do protoplasma microbiano, por coagulao dos colides celulares, que irreversvel. Logo, fica evidenciado que nenhum desinfetante atua de maneira instantnea; por isso, o tempo de ao somente deve ser considerado a partir do momento em que a superfcie a desinfetar esteja completamente recoberta pelo produto qumico; temperatura - a eficcia dos desinfetantes aumenta com a elevao da temperatura, podendo-se us-los mais diludos para uma mesma condio, desde que a temperatura seja elevada. Isso se deve acelerao das reaes qumicas pelo calor; matria orgnica - a presena de matria orgnica pode modificar profundamente
130
a ao de um desinfetante, sendo provvel que este se desgaste atacando a matria orgnica ao invs das clulas microbianas. Por isso, essencial reduzir a matria orgnica presente nas superfcies antes do emprego de produtos qumicos [9; 20; 29]. Os desinfetantes afetam as clulas microbianas de diferentes modos: coagulando e desnaturando as protenas - muitas protenas celulares so enzimticas e encontram-se na forma de disperso coloidal fina. Se ocorrer a coagulao ou a desnaturao, elas perdem sua capacidade funcional e a clula morre; desorganizando a membrana celular - as substncias qumicas podem alterar as propriedades fsicas e qumicas da membrana celular, impedindo o seu funcionamento normal. Com isso, pode ocorrer a perda de protoplasma para o meio externo e a entrada de substncias nocivas para o meio interno, resultando na inibio da clula ou em sua morte; como antagonista qumico - as enzimas tm funo cataltica em virtude de sua afinidade com seus substratos naturais. Se estruturalmente um dado composto se assemelha a um substrato nos aspectos principais, a enzima ter afinidade por este composto. Se a afinidade for suficientemente intensa, o composto tomar o lugar do substrato natural e impedir os processos normais de produo de energia ou dificultar os processos biossintticos essenciais, inibindo como consequncia a reproduo da clula [1; 8; 20]. Apesar de no existir um desinfetante ideal, a seguir so citadas as caractersticas que os produtos deveriam apresentar: amplo espectro de ao, destruindo todos os microrganismos num perodo relativamente curto; alta estabilidade, conservando sua ao plena, inclusive, durante sua exposio ao ar e a temperaturas elevadas; alto poder de penetrao; alta solubilidade em gua, em qualquer concentrao, para constituir solues ou emulses permanentes; poder especfico suficientemente elevado, que permita seu uso em grandes diluies; poder de dissolver graxas; no ser corrosivo e no ter ao descolorante; ter ao desodorante; carecer de pro-
131
Captulo 7
priedades txicas quando ingerido ou inalado pelo homem; ser de baixo custo, abundante e de fcil aplicao [7; 9; 29]. Os desinfetantes mais usados no laboratrio so: a) Detergentes tensoativos: possuem a propriedade de desorganizar a membrana da clula microbiana ou de atuar como antagonista qumico [1; 20]. Tm a finalidade de limpar superfcies, pela umectao, disperso, suspenso e emulso das substncias orgnicas [15]. So usados com frequncia na desinfeco de materiais, equipamentos e instalaes. Esses compostos so classificados em: No inicos: o poder bactericida baixo ou nulo e, ainda, podem inibir o efeito de outros compostos [ 29]. Ademais, no so biodegradveis [17]. Aninicos, cuja ao detergente reside no on de carga negativa: fazem parte desse grupo os sabes, os detergentes sulfonados e os sulfonatos, os quais apresentam acentuada propriedade desengordurante [19; 29]. So empregados nas lavagens e/ou descontaminaes. Os sabes so sais de sdio e potssio de cidos graxos [29]. Sua importncia devida, sobretudo, reduo do nmero de microrganismos, por sua ao em si e eliminao mecnica que acompanha a lavagem. Consegue-se, assim, diminuir a populao de microrganismos e auxiliar outros meios para elimin-la totalmente [20]. Os compostos sulfonados e sulfonatos possuem boas caractersticas detergentes, sendo estes ltimos os principais tensoativos utilizados [11]. No Brasil, o sulfonato de sdio do alquilbenzeno linear (LASNa) praticamente o nico tensoativo empregado nas formulaes de detergentes. Seu teor nos detergentes em p varia de 12 a 24% e nos lquidos de 4 a 10% [27]. Catinicos, cuja ao detergente reside no on de carga positiva: so compostos eficientes como germicidas, mas fracos como detergentes [17]. Possuem alto poder bactericida e fungicida, porm apresentam as desvantagens de no agirem sobre esporos e serem pouco ativos
132
contra vrus. So de baixa toxicidade e muito bem tolerados pela pele [18; 19]. Os mais importantes so os compostos quaternrios de amnio, caracterizados pela ligao de um tomo de nitrognio a quatro radicais, geralmente orgnicos, um dos quais de cadeia longa [23]. Como exemplos de princpios ativos de quaternrios de amnio seguem: cloreto de alquil dimetil benzil amnio, cloreto de alquil dimetil etilbenzil amnio, cloreto de alquil dimetil etiltoluil amnio, cloreto de lauril piridnio, cloreto e brometo de cetil trimetil amnio e cloreto de alquil trimetil amnio [4]. So aplicados em pano embebido, com frico sobre as superfcies. Porm, no devem ser usados aps lavagens realizadas com detergentes aninicos, uma vez que so incompatveis [15]. b) Compostos inorgnicos liberadores de cloro ativo: so eficazes somente quando emitem cloro livre. Quanto mais instvel um composto de cloro, mais rapidamente se manifesta sua eficcia e mais intensa ser sua ao [29]. Um composto de cloro muito utilizado em limpeza o hipoclorito de sdio (NaClO), que pode ser encontrado na forma comercial de gua sanitria. Atua desnaturando as protenas das clulas microbianas [8], especialmente de bactrias, fungos, vrus e esporos [18]. O hipoclorito de sdio, com 1% de cloro ativo, pode ser aplicado por dez minutos visando desinfeco de equipamentos e instalaes [6], com o auxlio de um pano. O uso dos compostos de cloro limitado por sua decomposio rpida, pela capacidade corrosiva e descolorante e por irritar a pele e a mucosa. No so indicados, inclusive, em aplicaes sobre metais [2; 6; 29]. c) lcool etlico (CH3CH2OH): tem elevada atividade desinfetante, baixo custo e baixa toxicidade, sendo o mais empregado no controle de microrganismos [6; 29]. Atua coagulando e desnaturando as protenas, tendo tambm a propriedade de dissolver lipdios [1; 23; 29]. Apresenta boa ao sobre fungos, vrus e bactrias; entretanto, no age sobre esporos [19; 23]. A gua facilita a ao do lcool. Por isso, o lcool
133
Captulo 7
absoluto, que no contm gua, menos eficaz que as solues aquosas de lcool a 70, 80 ou 95%. Se a superfcie a desinfetar est ressecada, ser mais eficaz o lcool a 70% que a 95%; se est mida, o lcool a 95% destruir os microrganismos com mais rapidez [29]. Entretanto, as solues com concentraes inferiores a 10%, praticamente, no tm ao desinfetante [20]. O lcool utilizado na desinfeco peridica de artigos metlicos, plsticos e de vidro, bancadas e equipamentos [5; 6]. A aplicao feita com pano ou papel toalha embebido, podendo ser usado um borrifador para atingir os cantos mais difceis. O lcool voltil e de ao rpida; alm do mais, inflamvel e seu uso constante provoca o ressecamento da pele [29]. d) Formalina (formol): uma soluo de 40% de formaldedo (HCHO) gasoso em gua, que atua inativando um grande nmero de enzimas e tambm coagulando e desnaturando as protenas das clulas microbianas [20; 29]. Em solues concentradas, apresentam um amplo espectro germicida, atingindo formas vegetativas de bactrias, fungos e vrus e muitos esporos [18]. O poder desinfetante aumenta com a elevao da temperatura [29], porm diminui quando usado em dissoluo com lcool [1]. Artigos metlicos podem ser desinfetados com formol [6]. A desinfeco de germinadores pode ser feita na concentrao de 0,5% [5]. A operao consiste em friccionar, com pano embebido em soluo, a superfcie do equipamento, que em seguida mantido fechado por quatro a seis horas, para aumentar a eficincia do tratamento. Este tempo poder ser reduzido, se o germinador for aquecido sem gua. Outro modo de desinfetar germinadores consiste em colocar uma placa de Petri com algumas gotas de formol a 0,5% dentro do equipamento e deix-lo fechado por uma noite [10]. Antes de ser reutilizado, o germinador deve permanecer aberto at que os vapores txicos sejam eliminados totalmente. O formol no reage com metais, voltil e consti-
134
tui-se num autntico inibidor de odores [2; 29]. Apresenta alta toxicidade, que produz efeito necrtico nos tecidos, exceto em concentraes muito baixas. Seus vapores penetrantes so irritantes mucosa nasal e farngea, com comprovado potencial carcinognico, o que impossibilita o seu uso frequente [6; 12; 29].
7.8 Esterilizao
Consiste na destruio completa de todos os microrganismos presentes na superfcie de qualquer material. Logo, um material considerado estril aquele plenamente isento de microrganismos vivos [29]. Pode ser alcanada por meio de diferentes agentes fsicos. Os que utilizam calor so os mais frequentemente utilizados, devido ao seu baixo custo, ao fcil controle e por no deixar resduos txicos [18; 29]. Alguns fatores importantes devem ser considerados quando se objetiva a eliminao dos microrganismos pelo calor: intensidade do agente fsico usado - entre as instrues para o emprego de mtodos de esterilizao preciso incluir o grau de calor que dever ser mantido. Pois, muito provvel que sobrevivam alguns dos microrganismos que se pretendia destruir, quando se adotam temperaturas mais baixas. Por outro lado, as temperaturas mais elevadas so naturalmente prejudiciais a muitos materiais, o que inviabiliza a sua adoo; tempo de ao nenhum agente esterilizante atua de maneira instantnea: sempre requerido um perodo para se conseguir a destruio dos microrganismos. Assim, quando se emprega calor, o perodo de exposio se inicia a partir do momento em que atingido o grau de temperatura desejado [29]. O calor pode ser aplicado de diferentes maneiras no laboratrio: a) Fogo direto: o ato de aquecer diretamente os materiais contaminados numa chama um mtodo fcil
135
Captulo 7
e eficaz de destruio de microrganismos indesejveis. Porm, evidente que s poder ser adotado se o material a esterilizar for resistente ao fogo, que atua oxidando os componentes das clulas microbianas [29]. obtido atravs de um bico aquecedor conectado a uma fonte de gs, denominado bico de Bunsen, ou por meio de uma lamparina a lcool. Correntemente, empregado na flambagem de artigos metlicos, antes e depois de serem utilizados, que so submetidos at adquirirem uma colorao vermelho intenso, tendo a precauo de deixlos esfriar para poder us-los [13]. Pode ser utilizado em extremidades de alguns artigos de vidro, no momento do uso, sem deixar que atinjam a colorao vermelha [13]. No se recomenda a prtica de submergir os artigos em lcool para pass-los posteriormente pela chama, j que a superfcie do instrumento no aquecer o suficiente, por estar coberta por uma capa de lcool vaporizado. Objetos cortantes no devem ser submetidos ao fogo direto, pois ocorre a deteriorao do seu fio [29]. A instalao e avaliao de testes de germinao devem ser realizadas prximas a uma chama de bico de Bunsen ou lamparina, a fim de evitar a contaminao do substrato e/ou a disseminao de esporos no ambiente [21]. b) Calor seco (ar quente): o princpio que rege a ao do calor seco como agente fsico de esterilizao a conduo. A conduo a transmisso do calor por contato ntimo de uma parte a outra de um mesmo corpo, ou de um corpo a outro, sem deslocamento aprecivel de partculas [15]. O calor seco no um mtodo eficaz de esterilizao, pois o ar um mal condutor de calor e apresenta um menor poder de penetrao. Logo, o grau de temperatura e o tempo de exposio necessrios esterilizao, por este procedimento, so maiores que os requeridos para se chegar ao mesmo resultado com o calor mido [1; 29]. As bactrias, por exemplo, sobretudo as que se encontram sob a forma de esporos so muito resistentes ao calor seco [12]. Para aproveitar o poder esterilizante do calor seco,
136
que elimina os microrganismos por desidratao e oxidao dos componentes celulares, necessrio valer-se de certos equipamentos conhecidos como estufas [23]. A estufa de ar quente um recipiente retangular de paredes duplas, isoladas termicamente e aquecida eletricidade. No seu interior h prateleiras mveis; na parte superior, orifcios para ventilao e um orifcio onde se coloca um termmetro graduado, caso no venha acoplado no equipamento [3]. A esterilizao pelo calor seco recomendada para objetos slidos feitos de material termoestvel, isto , todos os artigos que o calor no destrua, como os metlicos e alguns de vidro [24]. So adotados diferentes graus de temperatura e perodos de exposio, como: 150C por trs horas, que parece ser a temperatura mnima praticada [12]; 160C por uma hora a uma hora e 30 minutos [1]; e 170C por uma a duas horas, que a temperatura mais digna de confiana [12; 29]. Entretanto, deve-se evitar que a temperatura ultrapasse os 180C, pois pode ocasionar o chamuscamento dos tampes de algodo e/ou a alterao dos materiais que a ela esto submetidos [20; 22]. Os substratos para o teste de germinao tambm podem ser esterilizados em estufas de ar quente. Assim, temos as seguintes recomendaes: papel - 105C por duas horas [5]; carvo - 105C por quatro horas; areia 105C por quatro horas [14] ou 200C por duas horas [5]; vermiculita - 105C por duas a quatro horas [21]. Na sequncia, so apresentados os procedimentos bsicos de esterilizao em estufa de ar quente que, apesar de no serem complexos, requerem muita ateno: i) a esterilizao, geralmente, um processo preparatrio que visa disponibilidade de materiais para uso imediato e, por isso, deve incluir meios para mantlos estreis at o momento de sua utilizao. Portanto, indispensvel o acondicionamento dos artigos, antes de serem colocados na estufa [29]. O papel manilha, de alumnio e o algodo so recomendados vedao dos materiais [28];
137
Captulo 7
ii) os materiais devem ser introduzidos na estufa, evitando o contato com as paredes internas do equipamento e distribudos de modo a permitir a circulao do ar, assegurando assim um recebimento regular de calor [1; 13]; iii) a estufa fechada e conectada tomada eltrica de mesma voltagem; iv) a energia ligada e o termostato regulado temperatura desejada; v) pelo termmetro observado o momento em que a temperatura atinge o grau adequado esterilizao, considerando a partir dele o tempo de ao necessrio; vi) ao final do perodo de esterilizao, o termostato regulado ao ponto inicial, a energia desligada e a estufa desconectada da tomada eltrica; vii) antes de abrir a estufa deve-se esperar que esfrie por um perodo de uma ou duas horas ou at que a temperatura tenha descido a 100C ou menos, j que um esfriamento rpido dos artigos de vidro poder causarlhes roturas [1; 8; 28]. Caso os vidros estejam quentes, recomenda-se no coloc-los sobre superfcies frias, o que lhes provocaria alteraes, ou em local onde algum possa peg-los inadvertidamente, uma vez que o vidro quente tem o mesmo aspecto do frio [20]. c) Calor mido sob presso (vapor a presso): se os materiais a esterilizar forem termo-resistentes, podero ser submetidos ao vapor a presso em autoclave, que apresenta como vantagens a facilidade operacional e a reduo nos custos, alm de ser o mtodo mais eficaz de esterilizao [6]. O mecanismo de esterilizao pelo vapor a presso est relacionado com o calor latente. Pois, o vapor ao entrar em contato com a superfcie fria do material se condensa, liberando o calor latente. Aps a condensao do vapor, devido elevada temperatura, a gua voltar ao estado gasoso e o calor latente ser novamente absorvido a fim de possibilitar a mudana de estado. Essa troca entre o meio e o material a base da esterilizao [15]. O vapor a presso destri os microrganismos por
138
quebrar as ligaes qumicas envolvidas na manuteno da conformao espacial das protenas, causando coagulao [23]. especialmente dirigido eliminao de esporos [20]. A autoclave (modelo vertical) uma caldeira cilndrica de cobre ou outro metal resistente, cuja espessura da parede depende da presso mxima que o equipamento pode suportar; correntemente esta espessura de 1,5 a 2,0 cm. A tampa de bronze batido veda perfeitamente, devido interposio de uma guarnio de borracha e a oito ou dez parafusos que se apertam facilmente. No interior da caldeira existe um suporte sobre o qual se coloca uma cesta metlica contendo o material a esterilizar. Entre o fundo da cesta metlica e o fundo ligeiramente cncavo da caldeira fica um espao que se enche de gua. A tampa possui um orifcio de escapamento, uma vlvula de segurana e um manmetro com duas escalas, correspondentes a presso e a temperatura, alm de uma indicao em vermelho da presso mxima que est calculada a resistncia do equipamento. Algumas autoclaves tm em sua lateral um tubo indicador do nvel da gua que se encontra no interior da caldeira. A gua no interior do equipamento aquecida por meio de gs, eletricidade ou mediante a passagem de uma corrente de vapor atravs de serpentina submergida na gua [1; 2; 13; 20]. O funcionamento da autoclave baseado no seguinte princpio: a gua, ao ser aquecida em recipiente fechado, pode atingir temperaturas muito elevadas sem ferver; o vapor retido sob presso [2], que pode alcanar at 6 atmosferas ou mais sobre a normal, segundo a resistncia do modelo empregado [13]. De maneira geral, a esterilizao em autoclave realizada a 120C de temperatura e 1 atm de presso. O perodo de exposio ao vapor a presso para artigos metlicos e de vidro, gua destilada, solues e meios de cultura de 15-20 minutos [22; 26]; para a areia, solo e vermiculita varia entre 30 minutos a duas horas [21; 26]. Os operadores da autoclave devem familiarizar-se
139
Captulo 7
com seu funcionamento e manejo, inclusive com as instrues fornecidas pelo fabricante. Quando se tem no cargo um novo operador, este deve primeiramente observar como executa a tarefa uma pessoa experiente, para depois atuar ele mesmo, pelo menos uma vez, sob superviso [29]. A seguir, so relacionados os procedimentos bsicos que devem ser observados em uma unidade controlada manualmente: i) colocar gua no interior da caldeira, verificando o nvel pelo tubo indicador externo; ii) acondicionar adequadamente o material a ser esterilizado, com papel manilha e/ou tampes de algodo. O papel manilha dever ser de cor natural, para no manchar os materiais e nem deixar resduos txicos. Os tampes de algodo devem ficar suficientemente apertados e no podem se desfazer ao serem retirados. O papel de alumnio inadequado para acondicionar os materiais que sero submetidos esterilizao em autoclave, pois no permevel ao vapor; iii) depositar o material na cesta metlica, distribuindo-os de modo a permitir a circulao do vapor sem obstculos; iv) averiguar se o orifcio de escapamento est aberto; v) verificar a vlvula de segurana; vi) adaptar a tampa e apertar os parafusos, assegurando o completo fechamento da autoclave; vii) ligar a fonte de energia; viii) permitir que o vapor saia de forma livre e contnua durante vrios minutos, a fim de expulsar todo o ar do interior da autoclave. Pois, o ar remanescente pode interferir com a condensao do vapor formando um filme protetor ao redor do material, que torna deficiente a penetrao do calor, ou misturando-se com a corrente de vapor, que proporciona um calor real indubitavelmente menor; ix) fechar o orifcio de escapamento;
140
x) quando atingir a presso desejada, diminuir o fornecimento de calor, para manter constante a temperatura durante o tempo necessrio. O operador deve ficar atento ao manmetro, por todo o perodo em que o equipamento estiver em funcionamento; xi) aps o tempo requerido esterilizao, desligar a fonte de energia; xii) esperar esfriar o equipamento at que a presso indicada no manmetro seja 0 atm. Esta precauo fundamental, porque abrir a autoclave com alta presso faria projetar a tampa ou o vapor superaquecido, com riscos ao operador; xiii) abrir o orifcio de escapamento lentamente e posteriormente a tampa; xiv) retirar o material [1; 2; 3; 15; 16; 28; 29].
7.9 Consideraes finais

O emprego de desinfetantes e mtodos de esterilizao requer o uso do equipamento de proteo individual (EPI) especfico, conforme a natureza do risco que o pessoal de laboratrio se expe (Tabela 1). Um outro cuidado que deve ser tomado na utilizao de desinfetantes a verificao do prazo de validade, para evitar o uso de produtos incuos.
Tabela 1. Desinfetantes e mtodos de esterilizao e respectivos equipamentos de proteo individual (EPIs) necessrios. Desinfetante/mtodo de esterilizao EPI especfico Quaternrios de amnio Hipoclorito de sdio Formaldedo Calor seco Calor mido sob presso
Fonte: Brasil (1993).
luvas de borracha luvas de borracha mscara com filtro qumico, culos, luvas de borracha e avental impermevel luvas isolantes, com cano longo luvas isolantes, com cano longo
141
Captulo 7
Aps submeter os materiais ao processamento mais adequado, deve-se estoc-los em local separado, limpo, seco e protegido de poeira [6]. No manuseio de materiais estreis ou desinfetados, bem como na instalao e avaliao de testes, deve-se realizar a higienizao das mos e braos atravs de lavagem com detergente e desinfeco com lcool. A limpeza do piso e bancadas do laboratrio deve ser feita diariamente, enquanto dos materiais e equipamentos deve ser aps o uso. Antes da instalao e avaliao de testes, recomenda-se a desinfeco das bancadas ou mesas de trabalho e dos materiais que sero usados.
7.10 Referncias
1 BAKER, F.J. Manual de tcnica bacteriolgica. 2.ed. Zaragoza: Acribia, 1970. 510p. 2 BIER, O. Bacteriologia e imunologia: em suas aplicaes medicina e higiene. 13.ed. So Paulo: Melhoramentos, 1966. 971p. 3 BRASIL. Ministrio da Sade. Manual de controle de infeco hospitalar. Braslia: CCIH/MS, 1985. 123p. 4 BRASIL. Ministrio da Sade. Servio Nacional de Vigilncia Sanitria. Portaria n.15, de 23 de agosto de 1988. 5 BRASIL. Ministrio da Sade. Processamento de artigos e superfcies em estabelecimentos de sade. Braslia: CCIH/MS, 1993. 32p. 6 BRASIL. Ministrio da Agricultura e Reforma Agrria. Regras para anlise de sementes. Braslia: SNDA/DNDV/CLAV, 1992. 365p.
142
7 BRYAN, A.H.; BRYAN, C.A. & BRYAN, C.G. Bacteriologia: principios y practicas. Mexico: CECSA, 1978. 595p. (Serie Compendios Cientificos). 8 BURDON, K. & WILLIAMS, R.P. Microbiologa. Mexico: Cultural, 1971. 822p. 9 FERR, E. Bacteriologa. 3.ed. Buenos Aires: Librera El Ateneo, 1959. 445p. 10 FIGLIOLIA, M.B.; OLIVEIRA, E.C. & PIN-RODRIGUES, F.C.M. Anlise de sementes. In: AGUIAR, I.B.; PIN-RODRIGUES, F.C.M. & FIGLIOLIA, M.B. (coord.). Sementes florestais tropicais. Braslia: ABRATES, 1993. p.131-174. 11 GAVA, A.J. Princpios de tecnologia de alimentos. 7.ed. So Paulo: Nobel, 1984. 284p. 12 GEBHARDT, L.P. Microbiologa. 4.ed. Mexico: Interamericana, 1972. 380p. 13 IRIARTE Y SANCHIZ, E.G. Microbiologia: tecnicas, controles e analisis clinicos. Barcelona: Augusta, 1975. 687p. 14 JESUS, R.M. & PIN-RODRIGUES, F.C.M. Programa de produo e tecnologia de sementes de espcies florestais nativas desenvolvido pela Florestal Rio Doce S/A. In: SIMPSIO BRASILEIRO SOBRE TECNOLOGIA DE SEMENTES FLORESTAIS, 1, Belo Horizonte, 1984. Anais. Braslia: ABRATES, 1985. p.59-83. 15 LACERDA, R.A. (coord.) Buscando compreender a infeco hospitalar no paciente cirrgico. So Paulo: Atheneu, 1992. 177p. 16 LARPENT, J.P. & LARPENT-GOURGAUD, M. Mi-
143
Captulo 7
crobiologia prtica. So Paulo: Edgard Blcher/Universidade de So Paulo, 1975. 162p. 17 LEITO, M.F.F. Limpeza e desinfeco na indstria de alimentos. Boletim do Instituto de tecnologia de Alimentos, Campinas, n.43, p.1-35, 1975. 18 LIMA, L.P.C. Microbiologia. In: FERNANDES, J.F.; CARNEIRO, J. (ed.). Cincias patolgicas. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1983. p.17-23. 19 LUCAS, R.B. & KRAMER, I.R.H. Bacteriologia: para estudantes de odontologia. Rio de Janeiro: Cientfica, 1957. 267p. 20 PARAJE, R. & PARAJE, A.R. Microbiologia clinica. Buenos Aires: Panamericana, 1976. 511p. 21 PIA-RODRIGUES, F.C.M. & VIEIRA. J.D. Teste de germinao. In: PIA-RODRIGUES, F.C.M. (coord.). Manual de anlise de sementes florestais. Campinas: Fundao Cargill, 1988. p.70-90. 22 SALLE, A.J. Bacteriologa. 2.ed. Barcelona: Gustavo Gili, 1960. 875p. 23 SILVA, N.P. Esterilizao e desinfeco. In: TRABULSI, L.R. Microbiologia. 2.ed. So Paulo: Atheneu, 1991. p.99-102. (Srie Biomdica). 24 STANIER, R.Y.; DOUDOROFF, M.; ADELBERG, E.A. Mundo dos micrbios. So Paulo: Edgard Blcher, 1976. p.741. 25 TANAKA, M.A.S. Importncia da utilizao de sementes sadias. In: Sementes: tecnologia de produo. Informe Agropecurio, Belo Horiuzonte, v.8, n.91, p.31-34, 1982.
144
26 TANAKA, M.A.S. Tcnicas auxiliares em laboratrio de patologia de sementes. In: SOAVE, J. & WETZEL, M.M.V. (ed.). Patologia de sementes. Campinas: Fundao Cargill, 1987. p.313-328. 27 VALENTE, F.A. Detergentes: produtos de limpeza explodem no mercado. Qumica e derivados, So Paulo, v.32, n.346, p.14-19, 1997. 28 VINCENT, J.M. Manual practico de rizobiologia. Buenos Aires: Hemisferio Sur, 1975. p.1-3. 29 YOUNG, G.G. Wittons microbiologia. 3.ed. Mexico: Continental, 1964. p.123-169.
145

Manual de Análise de Sementes Florestais

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Manual de Análise de Sementes Florestais

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Manual de Análise de Sementes Florestais

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

2010

MANUAL DE PROCEDIMENTOS PARA ANLISE DE SEMENTES FLORESTAIS

Manuel de Jesus da Lima Jr.

MANUAL DE PROCEDIMENTOS PARA ANLISE DE SEMENTES FLORESTAIS

Manuel de Jesus da Lima Jr.

Limpeza de materiais, equipamentos e instalaes do laboratrio de anlise de sementes >> 127

1.1 A finalidade da anlise de sementes

1.3 Atividades do laboratrio de sementes

1.4 Infraestrutura do laboratrio de sementes

Balana analtica de preciso

1.5 Perfil dos profissionais do laboratrio de sementes

ZORATO, F. Evoluo do laboratrio de anlise de

Amostr agem Amostragem

Amostragem Amostr agem

2.3 Procedimentos e cuidados na amostragem

Amostragem Amostr agem

2.4 Intensidade de amostragem

2.5 Recepo, embalagem e armazenamento das amostras

Amostragem Amostr agem

2.6 Equipamentos e materiais necessrios para a amostragem

2.7 Amostragem para sementes de espcies florestais

Amostragem Amostr agem

3.2. Componentes da amostra

3.3 Equipamentos e materiais para a anlise de pureza

3.4 Procedimentos e clculos

3.5 Apresentao dos resultados

b) Clculo da porcentagem de pureza % pureza = 100 4,2 = 95,8% % pureza = 95,8%.

Determinao do tema grau de umidade

Determinao do grau de umidade

4.2 Princpio bsico

grau de umidade [1].

4.3 Sementes ortodoxas e recalcitrantes de espcies florestais

Determinao do grau de umidade

4.4 Mtodos de estufa

Determinao do grau de umidade

Determinao do grau de umidade

Determinao do grau de umidade

4.7 Clculo para Determinao do Grau de Umidade

Determinao do grau de umidade

0,6 0,8 0,7 1,1 2,8 >25 0,6 2,,8

Mdia do grau de umidade (%) <12 12 a 25 0,3 0,4 0,5 0,8

Determinao do grau de umidade

5.3. EQUIPAMENTOS PARA GERMINAO

5.4. INSTALAO DO TESTE DE GERMINAO

5.5. TIPOS DE GERMINAO

5.6. DORMNCIA DAS SEMENTES

5.7. CONDUO DO TESTE DE GERMINAO

5.8. CONSIDERAES FINAIS

5.9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Teste tema de germinao

Calophyllum brasiliense jacareba

muirajibia 1,9 (1,3 - 2,5)

Eschweilera cyathiformis matamat

49 (28 - 112) BIPOLAR

15,5 (7,1 - 21,2) 154 (98 - 224) BIPOLAR

Byrsonima chrysophylla murici

Scleronema micranthum cardeiro

1,9 (1,0 - 3,0)

Imakawa e Ferraz, 1995 * Amaral,1986 *

Cedrelinga cataeniformis Chorisia speciosa Clarisia racemosa Clitoria ternatea