ARTIGO ORIGINAL

Irã J Alergia Asma Immun

Fevereiro de 2015; 14(1):55-59.

Associação entre Antagonista do Receptor da Interleucina-1 (IL1RN) .

Polimorfismo de número variável de repetições em tandem (VNTR)
e tuberculose pulmonar

Mohammad Hashemi1,2, Mohammed Naderi3, Mahboubeh Ibrahimi2, Shadi Amininia2,

Gholamreza Bahari2, Mohsen Taheri4,5, Ibrahim Alexandria-Nasab2e Saeed Ghavami6

1Centro de Pesquisa Celular e Molecular, Universidade de Ciências Médicas de Zahedan, Zahedan, Irã
2Departamento de Bioquímica Clínica, Faculdade de Medicina, Universidade de Ciências Médicas de Zahedan, Zahedan, Irã
3Centro de Pesquisa em Doenças Infecciosas e Medicina Tropical, Universidade de Zahedan
Ciências Médicas, Zahedan, Irã
4Centro de Pesquisa em Genética de Doenças Não Transmissíveis, Universidade de Ciências Médicas de Zahedan, Zahedan, Irã
5Departamento de Genética, Faculdade de Medicina, Universidade de Ciências Médicas de Zahedan, Zahedan, Irã.
6Departamento de Anatomia Humana e Ciência Celular, Universidade de Manitoba, Manitoba, Canadá

Recebido: 5 de dezembro de 2013; Recebido na forma revisada: 21 de janeiro de 2014; Aceito: 16 de fevereiro de 2014

ABSTRATO

Macrófagos e linfócitos T estão envolvidos na resposta imune ao Mycobacterium tuberculosis. O

macrófago produz interleucina (IL)-1 como mediador inflamatório. O antagonista do receptor de
IL-1 (IL1-Ra) é um antagonista natural dos receptores de IL-1. Neste estudo, nosso objetivo foi
examinar a possível associação entre o número variável de repetições em tandem (VNTR) do gene
antagonista do receptor de IL-1 (IL1RN) e a tuberculose pulmonar (TB) em uma amostra da
população iraniana.
Nosso estudo é um estudo caso-controle e examinamos o VNTR do gene IL1RN em 265 PTB e
250 indivíduos saudáveis por PCR.
Nem a comparação geral do qui-quadrado entre o PTB e os indivíduos controle, nem a análise
de regressão logística indicaram qualquer associação entre o polimorfismo VNTR IL1RN e o PTB.

Nossos dados sugerem que o polimorfismo VNTR IL1RN pode não estar associado ao risco de TBP em
uma amostra da população iraniana. São necessários estudos maiores com diferentes etnias para
determinar o impacto do polimorfismo VNTR do IL1RN no risco de desenvolver TB.

Palavras-chave:IL1RN; Polimorfismo; Tuberculose; VNTR

INTRODUÇÃO problemas de saúde pública e continua a ser uma das principais causas
de morte em todo o mundo, especialmente na Ásia e em África. Esperava-
A tuberculose (TB) é uma das doenças globais mais importantes se que um terço da população mundial crescesse

Autor correspondente:Mohammad Hashemi, Ph.D; Universidade de Ciências Médicas, Zahedan, Irã. Tel: (+98541)3425728,
Professor de Bioquímica Clínica, Faculdade de Medicina, Zahedan, Fax: (+98541)3425728, E-mail: mhd.hashemi@gmail.com

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 M. Hashemi, et al.

está infectado com Mycobacterium tuberculosis (MTB), mas participantes. Todos os indivíduos controle eram indivíduos
aproximadamente 5 a 10% das pessoas infectadas desenvolvem a saudáveis da mesma origem geográfica e viviam na
doença ativa durante a vida.1A TB é uma doença extremamente
mesma região que os pacientes com TBP (Zahedan, sudeste
complexa e não é bem compreendida a razão pela qual algumas
do Irã). Eles não apresentavam sinais, sintomas ou história
pessoas infectadas desenvolvem a doença activa e outras não.
Embora se suponha que os agentes patogénicos e os factores
recente de TBP.
ambientais contribuam para a TB, cada vez mais evidências O diagnóstico de TBP foi baseado em sintomas clínicos,
propõem que os factores genéticos do hospedeiro desempenham evidências radiológicas e investigações bacteriológicas,
um papel significativo na vulnerabilidade à tuberculose.2-4Estudos como baciloscopia de Bacilo Ácido-Resistente (BAAR)
genéticos sobre a TB revelaram que as variantes genéticas positiva, cultura e resposta à quimioterapia antituberculose.
potencialmente envolvidas na resposta imunitária à TB,
Amostras de sangue total foram coletadas em tubos Na-
poderia ser responsável pela suscetibilidade ou proteção à
EDTA de todos os indivíduos e o DNA genômico foi extraído
TB.4-7
usando o método salting out.
As interleucinas (ILs) são citocinas pró-inflamatórias
Os polimorfismos VNTR de IL-1RN foram
produzidas por monócitos, macrófagos e células epiteliais.
genotipados por reação em cadeia da polimerase (PCR)
A família IL-1 consiste nas citocinas IL-1a, IL-1b e no
com 5-̀ CTCAGCAACACTCCTAT-3 avançar primeiro e 5 -̀
antagonista do receptor de IL-1 (IL-1Ra).8e os genes que
TCCTGGTCTGCAGGTAA-3 reverter primeiro ás
codificam esta família estão mapeados no cromossomo
descrito anteriormente.20
2q14.9O papel deIL1RNA repetição em tandem de número
A PCR foi realizada utilizando uma pré-mistura de PCR
variável (VNTR) tem sido estudada no desenvolvimento de
(AccuPower PCR PreMix, BIONEER, Daejeon, Coreia). Em um
distúrbios inflamatórios há vários anos.10-12A citocina pró-
tubo de PCR de 0,2 ml contendo o AccuPower PCR Pre-Mix, 1 μL
inflamatória IL-1b e seu antagonista, IL1Ra, são fortemente
de DNA modelo (~100 ng/μL), 1 μL de cada primer (10 μM) e 17
induzidos pelo M. tuberculosis e são codificados por genes
μL de água livre de DNase foram adicionados. A PCR foi
polimórficos.13Um componente chave na resposta
realizada nas seguintes condições: 95°C por 5 min; 95°C
inflamatória é a pronta produção de citocinas pró-
durante 30 s, 61°C durante 25 s, 72°C durante 30 s, 30 ciclos;
inflamatórias, como IL-1b e fator de necrose tumoral - TNF
72°C durante 10 min. Os produtos de PCR foram submetidos a
-, que são necessárias para controlar a infecção por M.
electroforese em géis de agarose a 2% e fotografados (Figura
tuberculosis.14,A resposta pró-inflamatória é regulada
1).
negativamente pelo fator de crescimento transformador -
(TGF--, IL-10 e, especificamente no caso de IL-1, IL1Ra)
Análise Estatística
citocinas para encerrar a resposta imune e limitar o
A análise estatística dos dados foi realizada por meio
potencial de imunopatologia.16
do software SPSS 18.0. Os parâmetros demográficos e
O IL1Ra é um importante regulador imunológico que
bioquímicos entre os grupos foram analisados por
compete com outros membros da família IL-1 (IL-1a e
teste t de amostras independentes para dados
IL-1b) pelo receptor de IL-1 nas células-alvo e atua como
contínuos e teste χ2 para dados categóricos. As
seu regulador negativo com efeitos antiinflamatórios.16-1
associações entre genótipos e TBP foram estimadas
O IL1RN contém um polimorfismo VNTR de 86 pares de
calculando-se o odds ratio (OR) e intervalos de confiança
bases no íntron 2. Há poucos e controversos dados
de 95% (IC 95%) a partir de análises de regressão
sobre o possível papel do polimorfismo VNTR do IL1RN
logística.P.S.- valor inferior a 0,05 foi considerado
na tuberculose7,13,1Assim, o presente estudo foi
estatisticamente significativo.
desenhado para descobrir a possível associação entre o
polimorfismo VNTR do IL1RN e a TB pulmonar em uma
RESULTADOS
amostra da população iraniana.

Duzentos e sessenta e cinco pacientes com TBP (38%

MATERIAIS E MÉTODOS
homens e 62% mulheres; idade 52,4 ± 20,3 anos) e 250
indivíduos saudáveis (43,7% homens e 56,3% mulheres;
Este estudo caso-controle foi realizado em 265
idade 49,2 ± 16,7 anos) foram incluídos no estudo.
pacientes com TB pulmonar (TBP) e 250 indivíduos
Não houve diferença significativa entre casos e
saudáveis. O comitê de ética local da Universidade de
controles em relação à idade e ao sexo (p=0,060 e p
Ciências Médicas de Zahedan aprovou o projeto, e o
=0,268, respectivamente).
consentimento informado por escrito foi obtido de todos

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 Polimorfismo IL1RN na Tuberculose Pulmonar

Figura 1. Padrão de eletroforese do produto de PCR para detecção deIL1RNPolimorfismo VNTR

M: Marcador de DNA; Pista 1: ILRN*3/3; Pistas 2 e 7: ILRN*1/1; Pista 3: ILRN*2/2; Pista 4: ILRN*2/3; Pista 5: ILRN*1/2; Pista
6: ILRN*2/4; Pista 8: ILRN*1/3.

Tabela 1. Frequências genotípicas e alélicas dosIL1RN VNTRpolimorfismo em TBP e indivíduos saudáveis (controle).

PTB Controles OU (IC 95%) P.S.

Genótipos IL1RN
por (%) por (%)

IL1RN* 1/1 181 (68,3) 169 (67,6) 1,0 -

IL1RN* 1/2 52 (19,6) 49 (19,6) 0,99 (0,64-1,54) 0,991
IL1RN* 1/3 17 (6,4) 15 (6,0) 1,06 (0,51-2,19) 0,879
IL1RN* 2/2 12 (4,5) 13 (5.2) 1,06 (0,51-2,19) 0,836
IL1RN* 2/3 2 (0,8) 0 (0,0) - -
IL1RN* 2/4 0 (0,0) 1 (0,4) - -
IL1RN* 3/3 1 (0,4) 3 (1,2) 0,31 (0,03-3,02) 0,314
Alelos
IL1RN* 431 (81,3) 402 (80,4) 1,0 -
IL1RN* 78 (14,8) 76 (15,2) 0,96 (0,67-1,35) 0,873
IL1RN* 21 (3,9) 21 (4.2) 0,93 (0,50-1,73)
IL1RN* 0 (0,0) 1 (0,2) - -
IL1RN, antagonista do receptor de IL-1; VNTR, número variável de repetições em tandem

De acordo com as diferenças no número de repetições em qualquer associação entre polimorfismos VNTR de
tandem de 86 pb, cinco tipos de alelos podem ser reconhecidos. IL1RNe PTB (Tabela 1).
IL1RN*1 (4 repetições, 420 pb),IL1RN*2 (2 repetições, 240 pb),
IL1RN*3 (5 repetições, 498 pb),IL1RN*4 (3 repetições, 326 pb) e DISCUSSÃO
IL1RN*5 (6 repetições, 595 pb).20
No presente estudo, quatro alelos (IL1RN*1, *2, *3 e Até onde sabemos, não há relatos sobre o impacto
IL1RN*4) foram reconhecidos. daILRNPolimorfismo VNTR e tuberculose na população
As frequências genotípicas e alélicas dos iraniana. No presente estudo, investigamos o impacto
polimorfismos IL1RN VNTR em pacientes com do polimorfismo VNTR do IL1RN e do TBP em nossa
TBP e controles são mostradas na Tabela 1. p população. Nossos resultados revelaram que não houve
=0,645) nem indicado pela análise de associação significativa entreIL1RNPolimorfismo VNTR e
regressão logística PTB. Em

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de acordo com nosso achado, Awomoyi et al7e Wilkinson e cols. proteínas efetoras, tais como citocinas/quimiocinas,
13não encontrou nenhuma associação entreILRN Variantes óxido nítrico sintetase e metaloproteinases de matriz.26
VNTR e TB. De acordo com Bellamy e cols.19investigaram o Eles exercem seus efeitos por interação com o receptor
impactoIL1RNPolimorfismo VNTR na população gambiana. Suas de IL-1 e são antagonizados por IL1Ra.27Foi
descobertas mostraram significativamente menosIL1RNalelo 2 demonstrado que o polimorfismo do alelo 2 do VNTR
heterozigotos entre os casos de TB em comparação com os IL1RNestá associada a uma ampla gama de condições
controles (comparando os dois genótipos mais comuns 1/1 e inflamatórias crônicas e autoimunes.20
1/2, χ2= 4,71, 4,71; p=0,030). Eles concluíram queIL1RN No presente estudo mostramos que o polimorfismo
Polimorfismos VNTR correlacionaram-se marginalmente com VNTR de 86 pb no íntron 2 deIL1RNnão foi associado ao
TB. risco de TBP na população do nosso estudo.
Há evidências substanciais de um papel do íntron 2 Concluindo, não encontramos associação significativa entre
VNTR na regulação deIL1RNexpressão, embora haja IL1RNPolimorfismos VNTR e PTB em uma amostra da
debate sobre a função de cada alelo individual. Segundo população iraniana. Estudos maiores são necessários para
Danis et al.21relatou uma associação do IL1RNAlelo *2 validar nossas descobertas.
com liberação aumentada in vitro de IL-1Ra de
monócitos humanos. No entanto, Clay et al.22 AGRADECIMENTOS
não encontraram diferença no acúmulo de mRNA de IL1RN
específico do alelo em linhagens celulares de queratinócitos, Este trabalho foi financiado por uma bolsa de pesquisa da
enquanto Dewberry et al.23mostrou queIL1RN*2 transporte Universidade de Ciências Médicas de Zahedan. Os autores
correlacionado com níveis diminuídos de mRNA da isoforma agradecem aos pacientes e indivíduos saudáveis que participaram
IL-1Ra na veia umbilical humana e células endoteliais da aorta. voluntariamente do estudo.
Embora os resultados acima possam parecer contraditórios, há
pelo menos duas explicações plausíveis para tais resultados REFERÊNCIAS
discrepantes: nomeadamente, que o efeito alélico pode ser
específico do tipo de célula e/ou que o efeito de alelos VNTR [PubMed] 1. Barry CE, 3º, Boshoff HI, Dartois V, Dick T, Ehrt S,
individuais na expressão de IL1RN está relacionado com o IL Flynn J, et al. O espectro da tuberculose latente:
-1.Isoforma 1R- sendo produzida. Hurme e Santtila18relataram repensando a biologia e as estratégias de intervenção. Nat
níveis plasmáticos mais elevados de IL-1R- em portadores Rev Microbiol 2009; 7(12):845-55.
saudáveis doIL1RNAlelo *2, em comparação com não [PubMed] 2.Stein CM. Epidemiologia genética da suscetibilidade à
portadores. tuberculose: impacto do desenho do estudo. Patologia PLoS 2011;
As citocinas têm uma variedade de funções como 7(1):e1001189.
substâncias de sinalização intercelular através da 3. de Wit E, van der Merwe L, van Helden PD, Hoal EG.
transdução de sinal intracelular e da via do segundo Interação gene-gene entre genes candidatos à
mensageiro. IL-1 é uma citocina pró-inflamatória e pró- tuberculose em uma população sul-africana. Genoma
fibrótica que existe em duas formas: IL-1a e IL-1b. IL1Ra é Mamm 2011; 22(1-2):100-1
um inibidor da IL-1 por ligação competitiva ao receptor de 4. Hashemi M, Sharifi-Mood B, Nezamdoost M, Moazeni-
IL-1. Como consequência, a atividade biológica desta Roodi A, Naderi M, Kouhpayeh H, et al. Polimorfismo
citocina é neutralizada nas respostas imunológicas e funcional do gene do interferon-gama (IFN-gama)
inflamatórias fisiológicas e fisiopatológicas. OIL1RNA O polimorfismo + 874T/A está associado à tuberculose
codificação da proteína IL-1Ra tem sido relacionada à pulmonar em Zahedan, sudeste do Irã. Rep. Med de Praga
suscetibilidade à fibrose pulmonar idiopática.24Variações no 2011; 112(1):38-4
IL1RN podem modular a eficácia da sinalização da IL-1 e, [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] 5. Hashemi M, Eskandari-Nasab
assim, predispor à condição de doença. A resistência ao M. E, Moazeni-Roodi A, Naderi M, Sharifi-Mood B, Taheri M.
tuberculosis está associada à ativação de macrófagos e à Associação de polimorfismos do gene CTSZ rs34069356 e MC3R
resposta Th1.25As citocinas que exercem efeitos sobre estas rs6127698 com tuberculose pulmonar. Int J Tuberc Pulmão Dis
células são, portanto, boas candidatas à suscetibilidade à 2013; 17(9):1224-8
TB. IL1α e IL1b estão envolvidas na regulação de reações 6. Naderi M, Hashemi M, Taheri M, Pesarakli H, Eskandari-
imunológicas e inflamatórias, induzindo a expressão de Nasab E, Bahari G. O polimorfismo do promotor CD209
muitos -336 A/G (rs4804803) está associado ao polimorfismo

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 Polimorfismo IL1RN na Tuberculose Pulmonar

Suscetibilidade à tuberculose pulmonar em Rev Imunol. 1998;16(27-55).

Zahedan, sudeste do Irã. J Microbiol Immun Infect [PubMed] 17. Granowitz EV, Clark BD, Mancilla J, Dinarello CA. Um
2014; 47(3):171-5 antagonista do receptor de interleucina-1 inibe
[PubMed] 7. Awomoyi AA, Charurat M, Marchant A, Miller competitivamente a ligação da interleucina-1 ao receptor de
EN, Blackwell JM, McAdam KP, et al. Associação do interleucina-1 tipo II. J Biol Química. 1991;266(22):14147-50.
polimorfismo IL1B-511 com tuberculose e diminuição [Artigo gratuito PMC] [PubMed] 18. Hurme M, Santtila S. Os níveis plasmáticos do

da IL-1beta induzida por lipopolissacarídeo em ensaio antagonista do receptor de IL-1 (IL-1Ra) são coordenadamente regulados pelos

de sangue total ex-vivo iniciado com IFNgama. J genes IL-1Ra e IL-1beta. Eur J Immunol. 1998;28(8):2598-602.

Endotoxina Res 2005; 11(5):281-6 [PubMed] 19. Bellamy R, Ruwende C, Corrah T, McAdam KP, Whittle
8. Smith DE, Renshaw BR, Ketchem RR, Kubin M, Garka KE, Sims HC, Hill AV. Avaliação do agrupamento de genes da interleucina
JE. Quatro novos membros expandem a superfamília da 1 e outros polimorfismos de genes candidatos na
interleucina-1. J Biol Chem 2000; 275(2):1169–75. suscetibilidade do hospedeiro à tuberculose. Tuber Pulmão Dis.
[PubMed] 9. Patterson D, Jones C, Hart I, Bleskan J, Berger R, Geyer 1998;79(2):83-9.
D, e outros. O gene do antagonista do receptor da [PubMed] 20. Tarlow JK, Blakemore AI, Lennard A, Solari R, Hughes HN,

interleucina-1 humana (IL1RN) está localizado na região do Steinkasserer A, et al. O polimorfismo no íntron 2 do gene

cromossomo 2q14. Genômica 1993; 15(1):173-6 antagonista do receptor de IL-1 humano é causado por números

[PubMed] 10. Fischer E, Van Zee KJ, Marano MA, Rock CS, Kenney JS, variáveis de uma repetição em tandem de 86 pb. Hum, Geneta.

Poutsiaka DD, et al. Antagonista do receptor circulante da 1993;91(4):403-4.

interleucina-1 na inflamação experimental e em doenças [Artigo gratuito PMC] [PubMed] 21. Danis VA, Millington M, Hyland
humanas. Sangue 1992; 79(9):2196–200. VJ, Grennan D. Produção de citocinas por monócitos humanos
[PubMed] 11. McIntyre KW, Stepan GJ, Kolinsky KD, Benjamin normais: variação intersujeitos e relação com um polimorfismo
WR, Plocinski JM, Kaffka KL, et al. Inibição da ligação e do gene antagonista do receptor de IL-1 (IL-1Ra). Clin Exp
bioatividade da interleucina 1 (IL-1) in vitro e modulação da Immunol. 1995;99(2):303-10.
inflamação aguda in vivo pelo antagonista do receptor de [PubMed] 22. Clay FE, Tarlow JK, Cork MJ, Cox A, Nicklin MJ, Duff GW.
IL-1 e anticorpo monoclonal anti-receptor de IL-1. J Exp Med Novos polimorfismos de exon antagonistas do receptor de
1991; 173(4):931-9. interleucina-1 e seu uso na avaliação de mRNA específico de
[Artigo gratuito do PMC] [PubMed] 12. Xue J, Mou L, Lu X, Wu H. alelo. Hum, Geneta. 1996;97(6):723-6.
Nenhuma associação de polimorfismo VNTR antagonista do receptor [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] 23. Dewberry R, Holden H,
de interleucina-1 e suscetibilidade à artrite reumatóide: uma meta- Crossman D, Francis S. Expressão do antagonista do receptor da
análise. Clin Exp Reumatol 2010; 28(5):654-60. interleucina-1 em células endoteliais humanas e aterosclerose.

[PubMed] 13. Wilkinson RJ, Patel P, Llewelyn M, Hirsch CS, Pasvol G, Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2000;20(11):2394-400.

Snounou G, et al. Influência do polimorfismo nos genes do [PubMed] 24. Whyte M, Hubbard R, Meliconi R, Whidborne M, Eaton

antagonista do receptor de interleucina (IL) -1 e IL-1beta na V, Bingle C, et al. Aumento do risco de alveolite fibrosante
tuberculose. J Exp Med 1999; 189(12):1863-74. associada ao antagonista do receptor de interleucina-1 e
[PubMed] 14. Sugisaki K, Dannenberg AM, Jr, Abe Y, Tsuruta J, polimorfismos do gene do fator de necrose tumoral alfa.
Su WJ, Said W, et al. Regulação positiva inespecífica e Sou J Respir Crit Care Med. 2000;162(2Pt1):755-8.
imunoespecífica de citocinas em lesões de tuberculose [PubMed] 25. Fenton MJ, Vermeulen MW. Imunopatologia da
dérmica em coelhos (BCG). J Leukoc Biol 1998; 63(4):440-50. tuberculose: papéis dos macrófagos e monócitos. Infectar
[Artigo gratuito do PMC] [PubMed] 15. Kindler V, Sappino AP, Grau GE, imunidade. 1996;64(3):683-90.
Piguet PF, Vassalli P. O papel indutor do fator de necrose tumoral no [PubMed] 26. Dinarello CA. Interleucina-1 e antagonismo da
desenvolvimento de granulomas bactericidas durante a infecção por interleucina-1. Sangue. 1991;77(8):1627-52.
BCG. Célula. 1989;56(5):731-40. [PubMed] 27. Dinarello CA. Modalidades para reduzir a atividade da
[Artigo gratuito do PMC] [PubMed] 16. Arend WP, Malyak M, Guthridge CJ, Gabay C. interleucina 1 na doença. Imunol hoje. 1993;14(6):260-4.
Antagonistas do receptor da interleucina-1: papel na biologia. Ano

Vol. 14, não. 1º de fevereiro Iran J Allergy Asthma Immunol, Inverno 2015/59
Publicado pela Universidade de Ciências Médicas de Teerã (http://ijaai.tums.ac.ir)